CN106417000B - 一种无花粉百合品种的培育方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种无花粉百合品种的培育方法，属于植物的新品种选育技术领域。百合是世界主要的商品花卉，在中国各地广泛种植，占据有巨大的市场份额。但由于百合花粉较容易污染衣物，且沾染后清洗不便，市场上销售百合一般都进行人工去雄处理，过程繁琐，浪费大量的人力物力，所以培育无花粉百合一直是百合育种的重点方向，同时具有优良观赏性状的无花粉百合也具有巨大的市场前景。本发明创新性的利用特殊的百合杂交育种组合，结合瓶内播种、百合组培繁殖、百合小籽球冷藏春化、百合种球栽培、无花粉百合筛选及扩繁技术，创造性的缩短无花粉百合的育种周期，并选育出观赏性状优良的无花粉百合新品种。

Description

一种无花粉百合品种的培育方法
技术领域
本发明属于植物的新品种选育技术领域，具体涉及一种无花粉百合品种的培育方法。
背景技术
百合是百合科百合属多年生草本鳞茎植物，是世界著名的观赏花卉，近年来，随着我国经济的发展和人民生活水平的提高，百合已成为我国花卉市场中重要的高档切花。广泛运用于庭院绿化、家庭装饰、节日用花，药用食用等领域。随着百合需求市场的不断扩大，我国西南、西北、东北等地区广泛种植鲜切花百合、盆栽百合、庭院绿化百合种球。但由于百合花粉较容易污染衣物，且沾染后清洗不便，市场上销售切花及盆栽百合一般都进行人工去雄处理，过程繁琐，浪费大量的人力物力，所以培育无花粉百合一直是百合育种的重点方向，同时具有优良观赏性状的无花粉百合也具有巨大的市场前景。目前国外对雄性不育的无花粉百合有一些初步的基础性研究，也有极少数的无花粉百合品种的报道，但如何获得该类型百合新品种，国外资料只字未提。在国内，无论是无花粉百合的基础性研究、新品种选育、组培繁育技术，还是相关栽培技术都属于空白。中国作为百合资源分布中心及消费大国，掌握具有巨大市场前景的无花粉百合的育种核心技术，并开发相关的百合新品种，对我国花卉产业种业创新的发展具有巨大的推动作用。
发明内容
为解决现有技术的不足，开发具有自主知识产权的无花粉百合新品种，缩短相关的繁育周期，本发明在掌握无花粉百合的遗传特性的基础上，创新性的利用特殊的百合杂交育种组合，结合瓶内播种技术，百合组培繁殖技术，百合小籽球冷藏春化技术，百合种球栽培技术，无花粉百合筛选及扩繁技术，缩短无花粉百合的育种周期，并选育出观赏性状优良的无花粉百合新品种。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种无花粉百合品种的培育方法，包括如下步骤：
步骤A，7月在百合盛花期，选取父本东方百合花药粒，在不高于25℃的温室大棚中，对母本东方百合进行人工授粉，授粉后用锡箔纸包裹母本东方百合的柱头；
步骤B，授粉85-95天，选取蒴果膨大的百合果实，每天观察，待蒴果成熟，但背缝线没有开裂时取下蒴果，然后用质量浓度为75%的酒精擦拭蒴果两遍后，将蒴果先放入质量浓度为0.1%的氯化汞溶液中消毒15min，再放入第一混合液中消毒15min，之后用无菌水冲洗3次，每次1min，获得百合种子外植体；
所述的第一混合液的制备方法是每100ml质量浓度为2%的次氯酸钠溶液中滴加有5滴吐温-20，混合均匀，即得；
步骤C，在超净工作台上剥开步骤（2）得到的百合种子外植体，取出饱满具有胚乳和可见胚的百合片状种子，播种于第一繁殖培养基中进行无菌播种，在光照强度为2000～2500 lx，温度为25±2℃，光照时间为12～14h/d的条件下，进行种子发芽诱导；
所述的1L的第一繁殖培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g；
蔗糖 30g/L；
琼脂糖 6g/L；
去离子水 余量；
pH 5.8～6.0；
步骤D，待种子发芽后，将每个种子剥离种皮，将剥离种皮后的每粒种子单独转接至第二繁殖培养基，在光照强度为2000～2500 lx，温度为25±2℃，光照时间为12～14h/d的条件下，培养30～40天；
所述的1L的第二繁殖培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g；
萘乙酸 0.1mg/L；
6-苄基腺嘌呤 0.3～0.5mg/L；
蔗糖 30g/L；
琼脂糖 6g/L；
去离子水 余量；
pH 5.8～6.0；
步骤E，待步骤D培养30～40天后转接至第三繁殖培养基，继续在光照强度为2000～2500 lx，温度为25±2℃，光照时间为12～14h/d的条件下，培养30～40天；
所述的1L的第三繁殖培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g
萘乙酸 0.1mg/L
6-苄基腺嘌呤 0.8～1.0mg/L
蔗糖 30g/L
琼脂糖 6g/L
去离子水 余量；
pH 5.8～6.0；
步骤F，待步骤E培养30～40天后，更换成新的繁殖培养基，按照步骤E的条件再培养30～40天，之后挑选生长健壮的周径3～4cm的百合膨大籽球，转接至生根培养基，暗培养30～40天；
所述的1L的生根培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g；
萘乙酸 0.8～1.0 mg/L；
蔗糖 60g/L；
琼脂糖 6g/L；
去离子水 余量；
pH 5.8～6.0；
步骤G，待步骤F培养30～40天后，更换成新的生根培养基，按照步骤F的条件再培养30～40天，得到百合籽球；按照质量比为7:3将草炭土和水混合，得到的混合物对百合籽球进行包装；每粒百合籽球使用10g～16.7g混合物；
步骤H，将包装好的百合籽球贮存于-1℃冷库环境中，贮存90天后出库，之后常温贮藏3天后下地栽种；
步骤I，下地栽种两年后，可见种球开花，筛选无花粉且观赏性状良好百合；
步骤J，筛选出无花粉且观赏性状良好的百合后，待百合植株地上部分枯萎后，取出该种球，剥去外层鳞片，然后用质量浓度为75%的酒精擦拭两遍，接着先放入质量浓度为0.1%的氯化汞溶液中消毒15min，再放入第一混合液中消毒15min，之后用无菌水冲洗3次，每次1min，获得百合鳞片外植体；
所述的第一混合液的制备方法是每100ml质量浓度为2%的次氯酸钠溶液中滴加有5滴吐温-20，混合均匀，即得；
步骤K，将步骤J百合鳞片外植体转接至第四繁殖培养基，在光照强度为2000～2500 lx，温度为25±2℃，光照时间为12～14h/d的条件下，培养30～40天；
所述的1L的第四繁殖培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g
萘乙酸 0.1mg/L
6-苄基腺嘌呤 0.2～0.3mg/L
蔗糖 30g/L
琼脂糖 6g/L
去离子水 余量；
pH 5.8～6.0；
步骤L，待步骤K培养30～40天后，转接至第五繁殖培养基中，继续在光照强度为2000～2500 lx，温度为25±2℃，光照时间为12～14h/d的条件下，培养30～40天；
所述的1L的第五繁殖培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g
萘乙酸 0.1mg/L
6-苄基腺嘌呤 0.5～0.8mg/L
蔗糖 30g/L
琼脂糖 6g/L
去离子水 余量；
pH 5.8～6.0；
步骤M，待步骤L培养30～40天后，转接至第三繁殖培养基中，继续在光照强度为2000～2500 lx，温度为25±2℃，光照时间为12～14h/d的条件下，培养30～40天，转接至生根培养基，每30～40天更换一次培养基，暗培养，得到无花粉百合籽球；按照质量比为7:3将草炭土和水混合，得到的混合物对无花粉百合籽球进行包装；每粒无花粉百合籽球使用10g～16.7g混合物；
步骤N，将包装好的无花粉年百合籽球贮存于-1℃冷库环境中，贮存90天后出库，之后常温贮藏3天后下地栽种；下地栽种两年后得到无花粉百合原源种。
进一步，优选的是步骤I和步骤N下地栽种后的施肥管理方法如下：
（1）栽种后，待茎生根长出5-10mm时，浇施2次生根肥，第一次施肥是在栽种后的8-12天，第2次施肥是在栽种后的18-22天，每次所施生根肥的组分如表1所示，即表1为1次施肥用量；
表1
（2）在百合生长的拔节期、现蕾期和花期，每隔7天施一次夏季肥料，共施10次，每次所施夏季肥料的组分如表2所示，即表2为1次施肥用量；
表2
本发明在掌握无花粉百合的遗传特性的基础上，创新性的利用特殊的百合杂交育种组合，结合瓶内播种技术、百合组培繁殖技术、百合小籽球冷藏春化技术、百合种球栽培技术、无花粉百合筛选及扩繁技术，创造性缩短无花粉百合的育种周期，并选育出观赏性状优良的无花粉百合新品种。
本发明与现有技术相比，其有益效果为：
1.发现了能够产生无花粉百合后代的杂交亲本，该两亲本都是有花粉的正常百合，且观赏性状较好，但在杂交后能够出现雄性不育的无花粉百合，且该组合出现无花粉比率较大（后代有花粉植株：后代无花粉植株≈4:1），大大的提高了无花粉百合新品种的选育效率。
2.通过无菌播种技术，提高了杂交后代种子的成活率，从常规播种成活率的75%提高到95%以上，能够保证无花粉百合杂交后代种子不流失。
3.能够解决常规繁育体系生产的种苗亲本来源复杂的问题，通过本发明的实施，无花粉百合籽球来源单一，易于标准化、工厂化操作，有效地提高了籽球质量，可为市场提供统一标准的优良无花粉百合原源种。
4.通过组培使无花粉百合籽球繁殖到30个克隆体后，再膨大并生根田间栽培，有效的提高了单个后代的成活率，大大缩短了无花粉百合的育种周期，从原来平均9年的育种周期缩短至6年左右。
附图说明
图1是本发明方法所选育无花粉百合原源种的百合花；
图2是本发明方法所选育无花粉百合原源种又一百合花。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述。
本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。
实施例1
一种无花粉百合品种的培育方法，包括如下步骤：
步骤A，7月在百合盛花期，选取父本东方百合花药粒，在不高于25℃的温室大棚中，对母本东方百合进行人工授粉，授粉后用锡箔纸包裹母本东方百合的柱头；
步骤B，授粉85天，选取蒴果膨大的百合果实，每天观察，待蒴果成熟，但背缝线没有开裂时取下蒴果，然后用质量浓度为75%的酒精擦拭蒴果两遍后，将蒴果先放入质量浓度为0.1%的氯化汞溶液中消毒15min，再放入第一混合液中消毒15min，之后用无菌水冲洗3次，每次1min，获得百合种子外植体；
所述的第一混合液的制备方法是每100ml质量浓度为2%的次氯酸钠溶液中滴加有5滴吐温-20，混合均匀，即得；
步骤C，在超净工作台上剥开步骤（2）得到的百合种子外植体，取出饱满具有胚乳和可见胚的百合片状种子，播种于第一繁殖培养基中进行无菌播种，在光照强度为2000lx，温度为25±2℃，光照时间为12h/d的条件下，进行种子发芽诱导；
所述的1L的第一繁殖培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g；
蔗糖 30g/L；
琼脂糖 6g/L；
去离子水 余量；
pH 5.8；
步骤D，待种子发芽后，将每个种子剥离种皮，将剥离种皮后的每粒种子单独转接至第二繁殖培养基，在光照强度为2000 lx，温度为25±2℃，光照时间为12h/d的条件下，培养30天；
所述的1L的第二繁殖培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g；
萘乙酸 0.1mg/L；
6-苄基腺嘌呤 0.3mg/L；
蔗糖 30g/L；
琼脂糖 6g/L；
去离子水 余量；
pH 5.8；
步骤E，待步骤D培养30天后转接至第三繁殖培养基，继续在光照强度为2000lx，温度为25±2℃，光照时间为12h/d的条件下，培养30天；
所述的1L的第三繁殖培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g
萘乙酸 0.1mg/L
6-苄基腺嘌呤 0.8mg/L
蔗糖 30g/L
琼脂糖 6g/L
去离子水 余量；
pH 5.8；
步骤F，待步骤E培养30天后，更换成新的繁殖培养基，按照步骤E的条件再培养30天，之后挑选生长健壮的周径3cm的百合膨大籽球，转接至生根培养基，暗培养30天；
所述的1L的生根培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g；
萘乙酸 0.8mg/L；
蔗糖 60g/L；
琼脂糖 6g/L；
去离子水 余量；
pH 5.8；
步骤G，待步骤F培养30天后，更换成新的生根培养基，按照步骤F的条件再培养30天，得到百合籽球；按照质量比为7:3将草炭土和水混合，得到的混合物对百合籽球进行包装；每粒百合籽球使用10g混合物；
步骤H，将包装好的百合籽球贮存于-1℃冷库环境中，贮存90天后出库，之后常温贮藏3天后下地栽种；
步骤I，下地栽种两年后，可见种球开花，筛选无花粉且观赏性状良好百合；
步骤J，筛选出无花粉且观赏性状良好的百合后，待百合植株地上部分枯萎后，取出该种球，剥去外层鳞片，然后用质量浓度为75%的酒精擦拭两遍，接着先放入质量浓度为0.1%的氯化汞溶液中消毒15min，再放入第一混合液中消毒15min，之后用无菌水冲洗3次，每次1min，获得百合鳞片外植体；
所述的第一混合液的制备方法是每100ml质量浓度为2%的次氯酸钠溶液中滴加有5滴吐温-20，混合均匀，即得；
步骤K，将步骤J百合鳞片外植体转接至第四繁殖培养基，在光照强度为2000lx，温度为25±2℃，光照时间为12h/d的条件下，培养30天；
所述的1L的第四繁殖培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g
萘乙酸 0.1mg/L
6-苄基腺嘌呤 0.2mg/L
蔗糖 30g/L
琼脂糖 6g/L
去离子水 余量；
pH 5.8；
步骤L，待步骤K培养30天后，转接至第五繁殖培养基中，继续在光照强度为2000lx，温度为25±2℃，光照时间为12h/d的条件下，培养30天；
所述的1L的第五繁殖培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g
萘乙酸 0.1mg/L
6-苄基腺嘌呤 0.5mg/L
蔗糖 30g/L
琼脂糖 6g/L
去离子水 余量；
pH 5.8；
步骤M，待步骤L培养30天后，转接至第三繁殖培养基中，继续在光照强度为2000lx，温度为25±2℃，光照时间为12h/d的条件下，培养30天，转接至生根培养基，每30天更换一次培养基，暗培养，得到无花粉百合籽球；按照质量比为7:3将草炭土和水混合，得到的混合物对无花粉百合籽球进行包装；每粒无花粉百合籽球使用10g混合物；
步骤N，将包装好的无花粉年百合籽球贮存于-1℃冷库环境中，贮存90天后出库，之后常温贮藏3天后下地栽种；下地栽种两年后得到无花粉百合原源种。
其中，步骤I和步骤N下地栽种后的施肥管理方法如下：
（1）栽种后，待茎生根长出5-10mm时，浇施2次生根肥，第一次施肥是在栽种后的8天，第2次施肥是在栽种后的18天，每次所施生根肥的组分如下表所示，即表中所用的量为1次施肥用量；
表1
（2）在百合生长的拔节期、现蕾期和花期，每隔7天施一次夏季肥料，共施10次，每次所施夏季肥料的组分如下表所示，即表中所用的量为1次施肥用量；
表2
实施例2
一种无花粉百合品种的培育方法，包括如下步骤：
步骤A，7月在百合盛花期，选取父本东方百合花药粒，在不高于25℃的温室大棚中，对母本东方百合进行人工授粉，授粉后用锡箔纸包裹母本东方百合的柱头；
步骤B，授粉95天，选取蒴果膨大的百合果实，每天观察，待蒴果成熟，但背缝线没有开裂时取下蒴果，然后用质量浓度为75%的酒精擦拭蒴果两遍后，将蒴果先放入质量浓度为0.1%的氯化汞溶液中消毒15min，再放入第一混合液中消毒15min，之后用无菌水冲洗3次，每次1min，获得百合种子外植体；
所述的第一混合液的制备方法是每100ml质量浓度为2%的次氯酸钠溶液中滴加有5滴吐温-20，混合均匀，即得；
步骤C，在超净工作台上剥开步骤（2）得到的百合种子外植体，取出饱满具有胚乳和可见胚的百合片状种子，播种于第一繁殖培养基中进行无菌播种，在光照强度为2500lx，温度为25±2℃，光照时间为14h/d的条件下，进行种子发芽诱导；
所述的1L的第一繁殖培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g；
蔗糖 30g/L；
琼脂糖 6g/L；
去离子水 余量；
pH 6.0；
步骤D，待种子发芽后，将每个种子剥离种皮，将剥离种皮后的每粒种子单独转接至第二繁殖培养基，在光照强度为2500 lx，温度为25±2℃，光照时间为14h/d的条件下，培养40天；
所述的1L的第二繁殖培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g；
萘乙酸 0.1mg/L；
6-苄基腺嘌呤 0.5mg/L；
蔗糖 30g/L；
琼脂糖 6g/L；
去离子水 余量；
pH 6.0；
步骤E，待步骤D培养40天后转接至第三繁殖培养基，继续在光照强度为2500 lx，温度为25±2℃，光照时间为14h/d的条件下，培养40天；
所述的1L的第三繁殖培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g
萘乙酸 0.1mg/L
6-苄基腺嘌呤 1.0mg/L
蔗糖 30g/L
琼脂糖 6g/L
去离子水 余量；
pH 6.0；
步骤F，待步骤E培养40天后，更换成新的繁殖培养基，按照步骤E的条件再培养40天，之后挑选生长健壮的周径4cm的百合膨大籽球，转接至生根培养基，暗培养40天；
所述的1L的生根培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g；
萘乙酸 1.0 mg/L；
蔗糖 60g/L；
琼脂糖 6g/L；
去离子水 余量；
pH 56.0；
步骤G，待步骤F培养40天后，更换成新的生根培养基，按照步骤F的条件再培养40天，得到百合籽球；按照质量比为7:3将草炭土和水混合，得到的混合物对百合籽球进行包装；每粒百合籽球使用16.7g混合物；
步骤H，将包装好的百合籽球贮存于-1℃冷库环境中，贮存90天后出库，之后常温贮藏3天后下地栽种；
步骤I，下地栽种两年后，可见种球开花，筛选无花粉且观赏性状良好百合；
步骤J，筛选出无花粉且观赏性状良好的百合后，待百合植株地上部分枯萎后，取出该种球，剥去外层鳞片，然后用质量浓度为75%的酒精擦拭两遍，接着先放入质量浓度为0.1%的氯化汞溶液中消毒15min，再放入第一混合液中消毒15min，之后用无菌水冲洗3次，每次1min，获得百合鳞片外植体；
所述的第一混合液的制备方法是每100ml质量浓度为2%的次氯酸钠溶液中滴加有5滴吐温-20，混合均匀，即得；
步骤K，将步骤J百合鳞片外植体转接至第四繁殖培养基，在光照强度为2500 lx，温度为25±2℃，光照时间为14h/d的条件下，培养40天；
所述的1L的第四繁殖培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g
萘乙酸 0.1mg/L
6-苄基腺嘌呤 0.3mg/L
蔗糖 30g/L
琼脂糖 6g/L
去离子水 余量；
pH 6.0；
步骤L，待步骤K培养40天后，转接至第五繁殖培养基中，继续在光照强度为2500lx，温度为25±2℃，光照时间为14h/d的条件下，培养40天；
所述的1L的第五繁殖培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g
萘乙酸 0.1mg/L
6-苄基腺嘌呤 0.8mg/L
蔗糖 30g/L
琼脂糖 6g/L
去离子水 余量；
pH 6.0；
步骤M，待步骤L培养40天后，转接至第三繁殖培养基中，继续在光照强度为2500lx，温度为25±2℃，光照时间为14h/d的条件下，培养40天，转接至生根培养基，每40天更换一次培养基，暗培养，得到无花粉百合籽球；按照质量比为7:3将草炭土和水混合，得到的混合物对无花粉百合籽球进行包装；每粒无花粉百合籽球使用16.7g混合物；
步骤N，将包装好的无花粉年百合籽球贮存于-1℃冷库环境中，贮存90天后出库，之后常温贮藏3天后下地栽种；下地栽种两年后得到无花粉百合原源种。
其中，步骤I和步骤N下地栽种后的施肥管理方法如下：
（1）栽种后，待茎生根长出5-10mm时，浇施2次生根肥，第一次施肥是在栽种后的12天，第2次施肥是在栽种后的22天，每次所施生根肥的组分如下表所示，即表中所用的量为1次施肥用量；
表1
（2）在百合生长的拔节期、现蕾期和花期，每隔7天施一次夏季肥料，共施10次，每次所施夏季肥料的组分如下表所示，即表中所用的量为1次施肥用量；
表2
实施例3
一种无花粉百合品种的培育方法，包括如下步骤：
步骤A，7月在百合盛花期，选取父本东方百合花药粒，在不高于25℃的温室大棚中，对母本东方百合进行人工授粉，授粉后用锡箔纸包裹母本东方百合的柱头；
步骤B，授粉90天，选取蒴果膨大的百合果实，每天观察，待蒴果成熟，但背缝线没有开裂时取下蒴果，然后用质量浓度为75%的酒精擦拭蒴果两遍后，将蒴果先放入质量浓度为0.1%的氯化汞溶液中消毒15min，再放入第一混合液中消毒15min，之后用无菌水冲洗3次，每次1min，获得百合种子外植体；
所述的第一混合液的制备方法是每100ml质量浓度为2%的次氯酸钠溶液中滴加有5滴吐温-20，混合均匀，即得；
步骤C，在超净工作台上剥开步骤（2）得到的百合种子外植体，取出饱满具有胚乳和可见胚的百合片状种子，播种于第一繁殖培养基中进行无菌播种，在光照强度为2200lx，温度为25±2℃，光照时间为13h/d的条件下，进行种子发芽诱导；
所述的1L的第一繁殖培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g；
蔗糖 30g/L；
琼脂糖 6g/L；
去离子水 余量；
pH 5.9；
步骤D，待种子发芽后，将每个种子剥离种皮，将剥离种皮后的每粒种子单独转接至第二繁殖培养基，在光照强度为2200 lx，温度为25±2℃，光照时间为13h/d的条件下，培养35天；
所述的1L的第二繁殖培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g；
萘乙酸 0.1mg/L；
6-苄基腺嘌呤 0.4mg/L；
蔗糖 30g/L；
琼脂糖 6g/L；
去离子水 余量；
pH 5.9；
步骤E，待步骤D培养35天后转接至第三繁殖培养基，继续在光照强度为2200 lx，温度为25±2℃，光照时间为13h/d的条件下，培养35天；
所述的1L的第三繁殖培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g
萘乙酸 0.1mg/L
6-苄基腺嘌呤 0.93mg/L
蔗糖 30g/L
琼脂糖 6g/L
去离子水 余量；
pH 5.9；
步骤F，待步骤E培养35天后，更换成新的繁殖培养基，按照步骤E的条件再培养35天，之后挑选生长健壮的周径3.5cm的百合膨大籽球，转接至生根培养基，暗培养35天；
所述的1L的生根培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g；
萘乙酸 0.9 mg/L；
蔗糖 60g/L；
琼脂糖 6g/L；
去离子水 余量；
pH 5.9；
步骤G，待步骤F培养35天后，更换成新的生根培养基，按照步骤F的条件再培养35天，得到百合籽球；按照质量比为7:3将草炭土和水混合，得到的混合物对百合籽球进行包装；每粒百合籽球使用13g混合物；
步骤H，将包装好的百合籽球贮存于-1℃冷库环境中，贮存90天后出库，之后常温贮藏3天后下地栽种；
步骤I，下地栽种两年后，可见种球开花，筛选无花粉且观赏性状良好百合；
步骤J，筛选出无花粉且观赏性状良好的百合后，待百合植株地上部分枯萎后，取出该种球，剥去外层鳞片，然后用质量浓度为75%的酒精擦拭两遍，接着先放入质量浓度为0.1%的氯化汞溶液中消毒15min，再放入第一混合液中消毒15min，之后用无菌水冲洗3次，每次1min，获得百合鳞片外植体；
所述的第一混合液的制备方法是每100ml质量浓度为2%的次氯酸钠溶液中滴加有5滴吐温-20，混合均匀，即得；
步骤K，将步骤J百合鳞片外植体转接至第四繁殖培养基，在光照强度为2200 lx，温度为25±2℃，光照时间为13h/d的条件下，培养35天；
所述的1L的第四繁殖培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g
萘乙酸 0.1mg/L
6-苄基腺嘌呤 0.25mg/L
蔗糖 30g/L
琼脂糖 6g/L
去离子水 余量；
pH 5.9；
步骤L，待步骤K培养35天后，转接至第五繁殖培养基中，继续在光照强度为2200lx，温度为25±2℃，光照时间为13h/d的条件下，培养35天；
所述的1L的第五繁殖培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g
萘乙酸 0.1mg/L
6-苄基腺嘌呤 0.6mg/L
蔗糖 30g/L
琼脂糖 6g/L
去离子水 余量；
pH 5.9；
步骤M，待步骤L培养35天后，转接至第三繁殖培养基中，继续在光照强度为2200lx，温度为25±2℃，光照时间为13h/d的条件下，培养35天，转接至生根培养基，每35天更换一次培养基，暗培养，得到无花粉百合籽球；按照质量比为7:3将草炭土和水混合，得到的混合物对无花粉百合籽球进行包装；每粒无花粉百合籽球使用13g混合物；
步骤N，将包装好的无花粉年百合籽球贮存于-1℃冷库环境中，贮存90天后出库，之后常温贮藏3天后下地栽种；下地栽种两年后得到无花粉百合原源种。
其中，步骤I和步骤N下地栽种后的施肥管理方法如下：
（1）栽种后，待茎生根长出5-10mm时，浇施2次生根肥，第一次施肥是在栽种后的10天，第2次施肥是在栽种后的20天，每次所施生根肥的组分如下表所示，即表中所用的量为1次施肥用量；
表1
（2）在百合生长的拔节期、现蕾期和花期，每隔7天施一次夏季肥料，共施10次，每次所施夏季肥料的组分如下表所示，即表中所用的量为1次施肥用量；
表2
本实施例于2015年得到无花粉百合原源种，如图1~2所示。
本实施例选取母本为东方百合希伯伦，父本为东方百合马可波罗。
本实施例所得的无花粉百合原源种后代品种特性：1.雄性不育无花粉。2.单枝花头数4-5。3.切花生产期100-120天。4.花色：內瓣、外瓣 外缘粉红，内部白色。5.花形：星型，外瓣外缘大波纹。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (2)

1.一种无花粉百合品种的培育方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤A，7月在百合盛花期，选取父本东方百合花药粒，在不高于25℃的温室大棚中，对母本东方百合进行人工授粉，授粉后用锡箔纸包裹母本东方百合的柱头；所述母本为东方百合希伯伦，父本为东方百合马可波罗；
步骤B，授粉85-95天，选取蒴果膨大的百合果实，每天观察，待蒴果成熟，但背缝线没有开裂时取下蒴果，然后用质量浓度为75%的酒精擦拭蒴果两遍后，将蒴果先放入质量浓度为0.1%的氯化汞溶液中消毒15min，再放入第一混合液中消毒15min，之后用无菌水冲洗3次，每次1min，获得百合种子外植体；
所述的第一混合液的制备方法是每100ml质量浓度为2%的次氯酸钠溶液中滴加有5滴吐温-20，混合均匀，即得；
步骤C，在超净工作台上剥开步骤（2）得到的百合种子外植体，取出饱满具有胚乳和可见胚的百合片状种子，播种于第一繁殖培养基中进行无菌播种，在光照强度为2000～2500lx，温度为25±2℃，光照时间为12～14h/d的条件下，进行种子发芽诱导；
所述的1L的第一繁殖培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g；
蔗糖 30g/L；
琼脂糖 6g/L；
去离子水 余量；
pH 5.8～6.0；
步骤D，待种子发芽后，将每个种子剥离种皮，将剥离种皮后的每粒种子单独转接至第二繁殖培养基，在光照强度为2000～2500 lx，温度为25±2℃，光照时间为12～14h/d的条件下，培养30～40天；
所述的1L的第二繁殖培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g；
萘乙酸 0.1mg/L；
6-苄基腺嘌呤 0.3～0.5mg/L；
蔗糖 30g/L；
琼脂糖 6g/L；
去离子水 余量；
pH 5.8～6.0；
步骤E，待步骤D培养30～40天后转接至第三繁殖培养基，继续在光照强度为2000～2500 lx，温度为25±2℃，光照时间为12～14h/d的条件下，培养30～40天；
所述的1L的第三繁殖培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g
萘乙酸 0.1mg/L
6-苄基腺嘌呤 0.8～1.0mg/L
蔗糖 30g/L
琼脂糖 6g/L
去离子水 余量；
pH 5.8～6.0；
步骤F，待步骤E培养30～40天后，更换成新的繁殖培养基，按照步骤E的条件再培养30～40天，之后挑选生长健壮的周径3～4cm的百合膨大籽球，转接至生根培养基，暗培养30～40天；
所述的1L的生根培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g；
萘乙酸 0.8～1.0 mg/L；
蔗糖 60g/L；
琼脂糖 6g/L；
去离子水 余量；
pH 5.8～6.0；
步骤G，待步骤F培养30～40天后，更换成新的生根培养基，按照步骤F的条件再培养30～40天，得到百合籽球；按照质量比为7:3将草炭土和水混合，得到的混合物对百合籽球进行包装；每粒百合籽球使用10g～16.7g混合物；
步骤H，将包装好的百合籽球贮存于-1℃冷库环境中，贮存90天后出库，之后常温贮藏3天后下地栽种；
步骤I，下地栽种两年后，可见种球开花，筛选无花粉且观赏性状良好百合；
步骤J，筛选出无花粉且观赏性状良好的百合后，待百合植株地上部分枯萎后，取出该种球，剥去外层鳞片，然后用质量浓度为75%的酒精擦拭两遍，接着先放入质量浓度为0.1%的氯化汞溶液中消毒15min，再放入第一混合液中消毒15min，之后用无菌水冲洗3次，每次1min，获得百合鳞片外植体；
所述的第一混合液的制备方法是每100ml质量浓度为2%的次氯酸钠溶液中滴加有5滴吐温-20，混合均匀，即得；
步骤K，将步骤J百合鳞片外植体转接至第四繁殖培养基，在光照强度为2000～2500lx，温度为25±2℃，光照时间为12～14h/d的条件下，培养30～40天；
所述的1L的第四繁殖培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g
萘乙酸 0.1mg/L
6-苄基腺嘌呤 0.2～0.3mg/L
蔗糖 30g/L
琼脂糖 6g/L
去离子水 余量；
pH 5.8～6.0；
步骤L，待步骤K培养30～40天后，转接至第五繁殖培养基中，继续在光照强度为2000～2500 lx，温度为25±2℃，光照时间为12～14h/d的条件下，培养30～40天；
所述的1L的第五繁殖培养基含有如下组分：
MS培养基 4.4g
萘乙酸 0.1mg/L
6-苄基腺嘌呤 0.5～0.8mg/L
蔗糖 30g/L
琼脂糖 6g/L
去离子水 余量；
pH 5.8～6.0；
步骤M，待步骤L培养30～40天后，转接至第三繁殖培养基中，继续在光照强度为2000～2500 lx，温度为25±2℃，光照时间为12～14h/d的条件下，培养30～40天，转接至生根培养基，每30～40天更换一次培养基，暗培养，得到无花粉百合籽球；按照质量比为7:3将草炭土和水混合，得到的混合物对无花粉百合籽球进行包装；每粒无花粉百合籽球使用10g～16.7g混合物；
步骤N，将包装好的无花粉年百合籽球贮存于-1℃冷库环境中，贮存90天后出库，之后常温贮藏3天后下地栽种；下地栽种两年后得到无花粉百合原源种。
2.根据权利要求1所述的无花粉百合品种的培育方法，其特征在于，步骤I和步骤N下地栽种后的施肥管理方法如下：
（1）栽种后，待茎生根长出5-10mm时，浇施2次生根肥，第一次施肥是在栽种后的8-12天，第2次施肥是在栽种后的18-22天，每次按kg/亩计所施生根肥的组分为：硝酸钙 4.9、硝酸铵3.0、硝酸钾 3.0、硫酸镁 5.5、氯化钾 0.14、磷酸二氢钾8.5、磷酸 0.8、硼酸0.25；
（2）在百合生长的拔节期、现蕾期和花期，每隔7天施一次夏季肥料，共施10次，每次按kg/亩计所施夏季肥料的组分为：有机肥15、硝酸钙4.7、硝酸铵0.24、硝酸钾3.0、尿素0.5、硫酸镁2.2、氯化钾0.1、硼酸0.04、酒石酸0.16、硫酸亚铁0.17、硫酸锰0.05、硫酸锌0.03、硫酸铜0.005、硫酸镍0.003、钼酸铵0.04、磷酸二氢钾0.3。
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