CN106397631A - 一种低聚壳聚糖的生产方法 - Google Patents

一种低聚壳聚糖的生产方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106397631A
CN106397631A CN201610886433.0A CN201610886433A CN106397631A CN 106397631 A CN106397631 A CN 106397631A CN 201610886433 A CN201610886433 A CN 201610886433A CN 106397631 A CN106397631 A CN 106397631A
Authority
CN
China
Prior art keywords
chitosan
oligo
hydrogen peroxide
production method
reactant liquor
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610886433.0A
Other languages
English (en)
Inventor
黄仕研
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dalian Research Institute Of Marine Biology Picometers
Original Assignee
Dalian Research Institute Of Marine Biology Picometers
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dalian Research Institute Of Marine Biology Picometers filed Critical Dalian Research Institute Of Marine Biology Picometers
Priority to CN201610886433.0A priority Critical patent/CN106397631A/zh
Publication of CN106397631A publication Critical patent/CN106397631A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • C08B37/0024—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid beta-D-Glucans; (beta-1,3)-D-Glucans, e.g. paramylon, coriolan, sclerotan, pachyman, callose, scleroglucan, schizophyllan, laminaran, lentinan or curdlan; (beta-1,6)-D-Glucans, e.g. pustulan; (beta-1,4)-D-Glucans; (beta-1,3)(beta-1,4)-D-Glucans, e.g. lichenan; Derivatives thereof
    • C08B37/0027—2-Acetamido-2-deoxy-beta-glucans; Derivatives thereof
    • C08B37/003—Chitin, i.e. 2-acetamido-2-deoxy-(beta-1,4)-D-glucan or N-acetyl-beta-1,4-D-glucosamine; Chitosan, i.e. deacetylated product of chitin or (beta-1,4)-D-glucosamine; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Abstract

本发明属于精细化工技术领域,具体涉及一种低聚壳聚糖的生产方法。针对现有技术降解壳聚糖收率低、产品溶解性不够好的问题，本发明提供一种用过氧化氢氧化壳聚糖生产低聚壳聚糖的方法。本发明方法的具体操作为：将壳聚糖与过氧化氢在50℃～90℃下反应，过滤、烘干，制得白色的低聚壳聚糖。本发明方法生产得到的低聚壳聚糖分子量低，溶解度高达80g/100g水；降解在中性介质中进行，产品不含无机盐类；反应液中添加还原物质，可完全消除残存的过氧化物；生产无三废，产品收率高，生物活性高，色泽改善，经毒理学试验属无毒物。

Description

一种低聚壳聚糖的生产方法
技术领域
本发明属于精细化工技术领域，具体涉及一种低聚壳聚糖的生产方法。
背景技术
低聚壳聚糖的制备方法主要有降解法、合成法和发酵法。目前合成法与发酵法由于存在诸多技术难题，未能实现工业化。降解又分酸解法、氧化降解和酶降解。酸解法反应往往较剧烈，不易控制，选择性差，且所得产品聚合度较低，甚至被降解为单糖；同时，酸解产物分离纯化困难，低聚壳聚糖含量不高，得率一般低于20%，故酸解法一般不能在工业上使用。酶法成本过高，也很难实现工业化。
现有技术有用氧化性物质协同降解壳聚糖的研究，所得的低聚壳聚糖水溶性较好，本发明拟提供一种低聚壳聚糖的生产方法，该方法得率高，产品溶解性更好，溶解度更高。
发明内容
本发明要解决的技术问题是现有技术中降解壳聚糖收率低、产品溶解性不够好的问题。
本发明解决技术问题的技术方案为：提供一种低聚壳聚糖的生产方法。该方法包括以下步骤：
a、向带有搅拌、夹套及测温装置的搪瓷反应釜中，加入不超过总容积一半的去离子水，边搅拌边加入总量三分之二的壳聚糖，加完继续搅拌10min；然后向反应釜中一次性加入四分之一量的过氧化氢，搅拌10min；夹套送汽升温，反应釜内升温至50℃开始计时，让反应液在50℃～90℃范围内反应2h；然后向其中流加四分之一量的过氧化氢，使反应液在50℃～90℃之间反应；然后交替加入剩下的两份六分之一量的壳聚糖和四分之一量的过氧化氢；过氧化氢为流加，过氧化氢加入速度控制在0.1kg～0.5kg/min，反应温度在50℃～90℃之间且不能有冒锅现象；加完过氧化氢继续保温，反应以壳聚糖全溶且反应液澄清为终点；达到终点后反应液温度降至60℃,加入还原性物质,并保持2h；夹套通冷却水，使反应釜内温度降到40℃以下,边过滤边将反应液放入储罐中；
b、将95vol%乙醇置于另一冷冻槽中降温；取冷冻好反应液，按比例边搅拌边缓慢的加入冷冻好的乙醇中；当加完反应液后轻轻搅拌1～10min；放置15～60min，过滤，滤饼用低温99vol%的乙醇洗涤，抽干，再用循环热风烘箱烘干，粉碎过筛得白色低聚壳聚糖。
其中，上述低聚壳聚糖的生产方法中，步骤a中所述加入的壳聚糖为质量分数为5～35%的壳聚糖。
其中，上述低聚壳聚糖的生产方法中，步骤a中所述的达到反应终点时，过氧化氢与壳聚糖加入的摩尔比为1.3～5.5:1。
其中，上述低聚壳聚糖的生产方法中，步骤a中所述的还原物质为抗坏血酸。
其中，上述低聚壳聚糖的生产方法中，步骤b中所述的冷冻好的反应液温度为0～10℃。
其中，上述低聚壳聚糖的生产方法中，步骤b中所述的95vol%乙醇至降温－30～0℃ 。
其中，上述低聚壳聚糖的生产方法中，步骤b中所述的95vol%乙醇与反应液的重量比为1～4：1。
其中，上述低聚壳聚糖的生产方法中，步骤b中所述的洗涤滤饼的乙醇温度为－30℃～10℃。
其中，上述低聚壳聚糖的生产方法中，步骤b中所述的滤饼用99vol%的乙醇洗涤1～5次。
其中，上述低聚壳聚糖的生产方法中，步骤b中所述的烘干温度为40～60℃。
其中，上述低聚壳聚糖的生产方法中，步骤b中所述的烘干时间为2～8h。
本发明的有益效果为：本发明方法生产的低聚壳聚糖分子量低，完全水溶，溶解度高达80g/100g水；本发明的氧化降解在中性介质中进行，产品不含无机盐类，并且反应液中添加了还原物质，可完全消除残存的过氧化物，保证产品中无过氧化物残存，产品易分离，无污染物排放；本发明方法生产过程无危害环境的废气、废液及废固体物产生，产品经毒理学试验属无毒物。另外，本发明采用首创的低温下醇析来生产低聚壳聚糖，生产得到白色的壳聚糖产品，较以往的淡黄色或黄色壳聚糖外观大大改善，且具有更高的生物活性，用其制备了低聚壳聚糖种衣剂，用于种子处理，显示该低聚壳聚糖的生物活性更高，并具有良好的抑菌、杀菌、促进种子发芽的功能。
具体实施方式
本发明提供一种低聚壳聚糖的生产方法，具体操作过程如下：
a、向带有搅拌、夹套及测温装置的搪瓷反应釜中，加入不超过总容积一半的去离子水，边搅拌边加入总量三分之二的壳聚糖，加完继续搅拌10min；然后向反应釜中一次性加入四分之一量的过氧化氢，搅拌10min；夹套送汽升温，反应釜内升温至50℃开始计时，让反应液在60℃～80℃范围内反应2h；然后向其中流加四分之一量的过氧化氢，使反应液在60℃～80℃之间反应；然后交替加入剩下的两份六分之一量的壳聚糖和四分之一量的过氧化氢；过氧化氢为流加，过氧化氢加入速度控制在0.1kg～0.5kg/min,，确保反应温度在60℃～80℃之间且不能有冒锅现象；加完过氧化氢继续保温，其壳聚糖质量分数为5%～35%，达到反应终点时， n(过氧化氢): n(壳聚糖)= 1.3～5.5，反应以壳聚糖全溶且反应液澄清为终点；达到终点后反应液温度降至60℃,加入还原性物质,以消除残存的过氧化物,并保持2h；然后夹套通冷却水，使反应釜内温度降到40℃以下,然后边过滤边将反应液放入冷冻槽中降温，反应液降温至0℃～10℃。
b、将体积分数为95%乙醇置于另一冷冻槽中降温至－30℃～0℃，取冷冻好的一定量的反应液，按m(乙醇)：m(反应液)=1～4比例边搅拌边缓慢的加入冷冻好的乙醇中；当加完反应液后轻轻搅拌1～10min；放置15～60min，大部分析出的物料将沉到底部，过滤，滤饼用低温体积分数为99%的乙醇洗涤1～5次，抽干，滤饼用循环热风烘箱40℃～60℃烘干2h～8h。粉碎过筛得白色低聚壳聚糖。
下面通过实施例对本发明的具体实施方式做进一步的解释说明，但不将其保护范围限制在实施例所述范围内。
实施例1
向500L带搅拌、夹套及测温装置的搪瓷反应釜中，加入200kg去离子水，开动搅拌，边搅拌边加入20kg 100目壳聚糖，加完继续搅拌10min。然后向其中一次性加入质量分数为27.5%的过氧化氢20kg ，搅拌10min。本反应所加过氧化氢的质量分数均为27.5%。夹套送汽升温，反应釜内升温至60℃开始计时，让反应液在60℃～70℃范围内保温2h。 然后向其中流加20kg 过氧化氢，使反应液在60℃～70℃之间反应。过氧化氢加完后加入5kg壳聚糖。继续流加20kg过氧化氢，加完后再加入5kg壳聚糖。流加余下的20kg过氧化氢，过氧化氢加入速度控制在0.1kg～0.5kg/min，确保反应温度在60℃～70℃之间且不能有冒锅现象。加完过氧化氢1h后使反应液温度降至60℃并加入1kg抗坏血酸，并保持3h。然后夹套通冷却水，使反应釜内温度降到40℃,然后边过滤边将反应液放入冷冻槽降温5℃。将体积分数为95%乙醇置于另一冷冻槽中降温-5℃。将冷冻好的体积分数为95%乙醇120kg移入沉析槽中， 取冷冻好的反应液60kg，边搅拌边缓慢的加入冷冻好的乙醇中。当加完反应液后轻轻搅拌1min。放置15min，大部分析出的物料将沉到底部，过滤，滤饼用－10℃的体积分数为99%的乙醇洗涤两次，抽干，滤饼用循环热风烘箱在60℃烘干6h，粉碎过筛得80目白色低聚壳聚糖（壳寡糖）17.472kg。
实施例2
向500L带搅拌、夹套及测温装置的搪瓷反应釜中，加入250kg去离子水，开动搅拌，边搅拌边加入25kg 100目壳聚糖，加完继续搅拌10min。然后向其中一次性加入25kg 过氧化氢，搅拌10min。本反应所加过氧化氢的质量分数均为27.5%。夹套送汽升温，反应釜内升温至60℃开始计时，让反应液在70℃～80℃范围内保温2h。 然后向其中流加25kg 过氧化氢，使反应液在70℃～80℃之间反应。过氧化氢加完后加入6.25kg壳聚糖。继续流加25kg过氧化氢，加完后再加入6.25kg壳聚糖。流加余下的20kg过氧化氢，过氧化氢加入速度控制在0.1kg～0.5kg/min，确保反应温度在70℃～80℃之间且不能有冒锅现象。加完过氧化氢1h后使反应液温度降至60℃ 并加1.5kg抗坏血酸，并保持3h。然后夹套通冷却水，使反应釜内温度降到40℃, 然后边过滤边将反应液放入冷冻槽降温5℃。将体积分数为95%乙醇置于另一冷冻槽中降温-5℃。将冷冻好的体积分数为95%乙醇180kg移入沉析槽中， 取冷冻好的反应液60kg，边搅拌边缓慢的加入冷冻好的乙醇中。当加完反应液后轻轻搅拌1min。放置15min，大部分析出的物料将沉到底部，过滤，滤饼用－10℃的体积分数为99%的乙醇洗涤两次，抽干，滤饼用循环热风烘箱在60℃烘干6h，粉碎过筛得80目白色低聚壳聚糖（壳寡糖）。其余反应液按上述比率析出，按上述过程操作，共得白色低聚壳聚糖20.647kg。
实施例3
向1000L带搅拌、夹套及测温装置的搪瓷反应釜中，加入500kg去离子水，开动搅拌，边搅拌边加入40kg 100目壳聚糖，加完继续搅拌10min。然后向其中一次性加入40kg 过氧化氢，搅拌10min。夹套送汽升温，反应釜内升温至60℃开始计时，让反应液在60℃～70℃范围内保温2h。 然后向其中流加40kg 过氧化氢，使反应液在60℃～70℃之间反应。过氧化氢加完后加入10kg壳聚糖。继续流加40kg过氧化氢，加完后再加入10kg壳聚糖。流加余下的40kg过氧化氢，过氧化氢加入速度控制在0.1kg～0.5kg/min，确保反应温度在60℃～70℃之间且不能有冒锅现象。加完过氧化氢1h后使反应液温度降至60℃并加入2Kg抗坏血酸，并保持3h。然后夹套通冷却水，使反应釜内温度降到40℃, 然后边过滤边将反应液放入冷冻槽降温5℃。将体积分数为95%乙醇置于另一冷冻槽中降温-5℃。将冷冻好的体积分数为95%乙醇120kg移入沉析槽中，取冷冻好的反应液60kg，边搅拌边缓慢的加入冷冻好的乙醇中。当加完反应液后轻轻搅拌1min。放置15min，大部分析出的物料将沉到底部，过滤，滤饼用－10℃的体积分数为99%的乙醇洗涤两次，抽干，滤饼用循环热风烘箱在50℃烘干7h，粉碎过筛得80目白色低聚壳聚糖（壳寡糖）,其余反应液按上述操作处理，共得36.571kg白色低聚壳聚糖（壳寡糖）。
效果验证
溶解度的测定
向装有回流冷凝管的200mL三口烧瓶中加入100mL蒸馏水，分别加入90g实施例1～3所得的低聚壳聚糖。将烧瓶置于电磁搅拌器上，搅拌并加热至50℃，保持5min,然后冷却到20℃的条件下，放置2h,此时烧杯底部应有少许沉淀，否则应调整低聚壳聚糖的加入量。用移液管吸取约10mL上部澄清的饱和溶液，置于已知质量的称量瓶中，称量称量瓶和饱和溶液重量,然后通过加热将溶剂挥发干净并烘干至恒重。
通过下式计算低聚壳聚糖的溶解度：
式中：
S—溶解度，单位为克(g)；
m0—称量瓶质量的数值，单位为克(g)；
m1—饱和溶液和称量瓶质量的数值，单位为克(g)；
m2—溶质和称量瓶质量的数值，单位为克(g)。
本发明的上述实施例所生产的低聚壳聚糖通过上述方法测定，溶解度分别为82.33g、80.26g、81.74g，溶解度均在80g/100g水以上，溶解度高。
生物活性测定
应用本发明的实施例1～3所生产的低聚壳聚糖制备了低聚壳聚糖种衣剂，将该种衣剂浸泡玉米农大108号种子，放置10 d后观察，种子表面挂膜完好，未见明显脱落。15 d后用10倍放大镜观察其物理性状（特别是成膜性能）无明显变化。用本种衣剂处理的玉米种子，4 d发芽势为97%；7 d发芽率为98%，而空白对照样4 d发芽势为74%，7 d发芽率仅为77%。
此外，用该种衣剂对棉花种植过程进行了实验，实验结果见下表。
表1 不同方法对棉种应用效果对照表
由上表可知，本发明方法所生产的低聚壳聚糖具有极高的生物活性。利用本发明方法所生产的低聚壳聚糖制备的种衣剂具有良好的抑菌、杀菌、促进种子发芽作用，与空白对照组相比，提高玉米种子发芽率21%；另外，该种衣剂可有效防病治虫、保苗壮苗，从而促进种苗健康生长，提高作物产量。使用本发明方法所生产的低聚壳聚糖制备的种衣剂处理棉花种子，与常规拌种相比，每100 m2产量可增加4.8 kg。

Claims (10)

1.一种低聚壳聚糖的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、向带有搅拌、夹套及测温装置的搪瓷反应釜中，加入不超过总容积一半的去离子水，边搅拌边加入总量三分之二的壳聚糖，加完继续搅拌10min；然后向反应釜中一次性加入四分之一量的过氧化氢，搅拌10min；夹套送汽升温，反应釜内升温至50℃开始计时，让反应液在50℃～90℃范围内反应2h；然后向其中流加四分之一量的过氧化氢，使反应液在50℃～90℃之间反应；然后交替加入剩下的两份六分之一量的壳聚糖和四分之一量的过氧化氢；过氧化氢为流加，过氧化氢加入速度控制在0.1kg～0.5kg/min，反应温度在50℃～90℃之间且不能有冒锅现象；加完过氧化氢继续保温，反应以壳聚糖全溶且反应液澄清为终点；达到终点后反应液温度降至60℃,加入还原性物质,并保持2h；夹套通冷却水，使反应釜内温度降到40℃以下,边过滤边将反应液放入储罐中；
b、将95vol%乙醇置于另一冷冻槽中降温；取冷冻好反应液，按比例边搅拌边缓慢的加入冷冻好的乙醇中；当加完反应液后轻轻搅拌1～10min；放置15～60min，过滤，滤饼用低温99vol%的乙醇洗涤，抽干，再用循环热风烘箱烘干，粉碎过筛得白色低聚壳聚糖。
2.根据权利要求1所述的低聚壳聚糖的生产方法，其特征在于：步骤a中所述加入的壳聚糖为质量分数为5～35%的壳聚糖。
3.根据权利要求1所述的低聚壳聚糖的生产方法，其特征在于：步骤a中所述的达到反应终点时，过氧化氢与壳聚糖加入的摩尔比为1.3～5.5:1。
4.根据权利要求1所述的低聚壳聚糖的生产方法，其特征在于：步骤a中所述的还原物质为抗坏血酸。
5.根据权利要求1所述的低聚壳聚糖的生产方法，其特征在于：步骤b中所述的冷冻好的反应液温度为0～10℃。
6.根据权利要求1所述的低聚壳聚糖的生产方法，其特征在于：步骤b中所述的95vol%乙醇至降温－30～0℃ 。
7.根据权利要求1所述的低聚壳聚糖的生产方法，其特征在于：步骤b中所述的95vol%乙醇与反应液的重量比为1～4：1。
8.根据权利要求1所述的低聚壳聚糖的生产方法，其特征在于：步骤b中所述的洗涤滤饼的乙醇温度为－30℃～10℃。
9.根据权利要求1所述的低聚壳聚糖的生产方法，其特征在于：步骤b中所述的滤饼用99vol%的乙醇洗涤1～5次。
10.根据权利要求1所述的低聚壳聚糖的生产方法，其特征在于：步骤b中所述的烘干温度为40～60℃，烘干时间为2～8h。
CN201610886433.0A 2016-10-11 2016-10-11 一种低聚壳聚糖的生产方法 Pending CN106397631A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610886433.0A CN106397631A (zh) 2016-10-11 2016-10-11 一种低聚壳聚糖的生产方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610886433.0A CN106397631A (zh) 2016-10-11 2016-10-11 一种低聚壳聚糖的生产方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106397631A true CN106397631A (zh) 2017-02-15

Family

ID=59228477

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610886433.0A Pending CN106397631A (zh) 2016-10-11 2016-10-11 一种低聚壳聚糖的生产方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106397631A (zh)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102180993A (zh) * 2011-05-05 2011-09-14 大连鑫蝶泓祥甲壳素有限公司 一种低聚壳聚糖的生产方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102180993A (zh) * 2011-05-05 2011-09-14 大连鑫蝶泓祥甲壳素有限公司 一种低聚壳聚糖的生产方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104478597B (zh) 一种生产脲甲醛缓释肥联产海藻酸液体肥工艺
WO1988004136A1 (en) Method of multiplying tubers
CN105384714A (zh) 一种脱氢醋酸钠的脱色精制工艺
EP2985275A1 (en) Beta-hydroxy-beta-methylbutyric acid purification method
CN105712887B (zh) 一种长链尼龙盐的生产方法
US4339536A (en) Process for the preparation of long-chain dicarboxylic acids by fermentation
CN104262390B (zh) 一种杀虫剂乙酰甲胺磷的连续化生产方法
CN103113440B (zh) 一种硫氰酸红霉素的制备方法
CN107897209A (zh) 一种缓释生根剂
CN106397631A (zh) 一种低聚壳聚糖的生产方法
CN102002000B (zh) 5，5-二甲基海因的生产方法
CN103724265A (zh) 含萘二甲酰胺基团的化合物及其制备方法以及含有所述化合物的植物生长调节剂组合物
CN102153461A (zh) 一种由乙二醇制备羟基乙酸的方法
CN102127095A (zh) 一种制备头孢美唑钠的方法
CN111303041A (zh) 一种制备混合晶型的苯妥英钠的方法
NO131117B (zh)
JPS6287099A (ja) 微生物によるセルロ−ス性物質の製造方法
CN107722056A (zh) 磷酸特地唑胺的制备方法
CN106916068B (zh) 一种简单便捷的苯扎氯铵生产方法
JPH04261176A (ja) 醗酵法で製造されたリボフラビンの精製法
CN102180993A (zh) 一种低聚壳聚糖的生产方法
CN102942574B (zh) 一种生产利福霉素s的新工艺
CN109970834A (zh) 一种氢化可的松琥珀酸钠的制备方法
CN108117493A (zh) 制造依地酸二钠的方法
CN104610165B (zh) 一种嘧霉胺的制备方法及用于制备嘧霉胺的设备

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20170215