CN106262931A - 植物乳杆菌在制备抗过敏产品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了植物乳杆菌在制备抗过敏产品中的应用。本发明提供了植物乳杆菌在制备用于预防和/或治疗过敏的产品中的应用；所述植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SC9，其保藏编号为CCTCC NO.M 208150。本发明还保护一种用于预防和/或治疗过敏的产品，其活性成分为植物乳杆菌；所述植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SC9，其保藏编号为CCTCC NO.M 208150。本发明可应用于食品、保健品和药品领域，具有非常好的产业前景。
Description
技术领域
本发明涉及植物乳杆菌在制备抗过敏产品中的应用。
背景技术
食物过敏是机体对食物中的主要过敏原产生不正常免疫应答而导致的一种***反应，可造成过敏性鼻炎、哮喘、湿疹、特异性皮炎、腹泻、胃肠出血等疾病。
在我国食物过敏一般人群发病率为1％-2％，在儿童则为8％，其种类和范围有增加的趋势。食物过敏是伴随一生的疾病，随时都有发生致命性过敏反应得危险。而且对过敏反应的恐惧心理和对食物的高选择性对患者心理、营养发育和生活方式产生巨大的负面影响。所以食物过敏已经不仅仅是一个单纯的医学问题，而是成为一种严重的公共健康问题。
过敏性疾病的传统治疗方法主要是药物控制，并在饮食中尽量避免接触过敏原。此外，医学上也在思考以积极的方法让过敏症状得到缓解。
益生菌是人体肠道中的有益菌群，可以调节肠道菌群平衡，治疗消化不良、腹泻等疾病。
发明内容
本发明的目的是提供植物乳杆菌在制备抗过敏产品中的应用。
本发明提供了植物乳杆菌在制备用于预防和/或治疗过敏的产品中的应用；所述植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SC9，其保藏编号为CCTCC NO.M208150。
所述产品为食品、保健品或药品。
所述过敏为食物过敏。
所述食物过敏具体可为牛乳β-乳球蛋白过敏。
本阿明还保护植物乳杆菌在制备产品中的应用；所述植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SC9，其保藏编号为CCTCC NO.M 208150；
所述产品的功能为如下(a1)至(a24)中的至少一项：
(a1)治疗过敏；
(a2)预防过敏；
(a3)治疗食物过敏；
(a4)预防食物过敏；
(a5)治疗牛乳β-乳球蛋白过敏；
(a6)预防牛乳β-乳球蛋白过敏；
(a7)治疗过敏性哮喘；
(a8)预防过敏性哮喘；
(a9)治疗过敏性结肠病变；
(a10)预防过敏性结肠病变；
(a11)治疗过敏性结肠组织损伤；
(a12)预防过敏性结肠组织损伤；
(a13)治疗过敏性肺部病变；
(a14)预防过敏性肺部病变；
(a15)治疗过敏性肺部损伤；
(a16)预防过敏性肺部损伤；
(a17)降低血清总IgE水平；
(a18)降低过敏者血清总IgE水平；
(a19)降低脾细胞分泌IL-4的水平；
(a20)降低过敏者脾细胞分泌IL-4的水平；
(a21)提高脾细胞分泌IFN-γ的水平；
(a22)提高过敏者脾细胞分泌IFN-γ的水平；
(a23)提高脾细胞分泌IL-10的水平；
(a24)提高过敏者脾细胞分泌IL-10的水平。
所述过敏性哮喘可为牛乳β-乳球蛋白引起的过敏性哮喘。
所述过敏性结肠病变可为牛乳β-乳球蛋白引起的过敏性结肠病变。
所述过敏性结肠组织损伤可为牛乳β-乳球蛋白引起的过敏性结肠组织损伤。
所述过敏性肺部病变可为牛乳β-乳球蛋白引起的过敏性肺部病变。
所述过敏性肺部病变可为牛乳β-乳球蛋白引起的过敏性肺部病变。
所述产品为食品、保健品或药品。
所述过敏为食物过敏。
所述食物过敏具体可为牛乳β-乳球蛋白过敏。
本发明还保护一种用于预防和/或治疗过敏的产品，其活性成分为植物乳杆菌；所述植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SC9，其保藏编号为CCTCC NO.M208150。
所述产品为食品、保健品或药品。
所述过敏为食物过敏。
所述食物过敏具体可为牛乳β-乳球蛋白过敏。
本发明还保护一种产品，其活性成分为植物乳杆菌；所述植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SC9，其保藏编号为CCTCC NO.M 208150；
所述产品的功能为如下(a1)至(a24)中的至少一项：
(a1)治疗过敏；
(a2)预防过敏；
(a3)治疗食物过敏；
(a4)预防食物过敏；
(a5)治疗牛乳β-乳球蛋白过敏；
(a6)预防牛乳β-乳球蛋白过敏；
(a7)治疗过敏性哮喘；
(a8)预防过敏性哮喘；
(a9)治疗过敏性结肠病变；
(a10)预防过敏性结肠病变；
(a11)治疗过敏性结肠组织损伤；
(a12)预防过敏性结肠组织损伤；
(a13)治疗过敏性肺部病变；
(a14)预防过敏性肺部病变；
(a15)治疗过敏性肺部损伤；
(a16)预防过敏性肺部损伤；
(a17)降低血清总IgE水平；
(a18)降低过敏者血清总IgE水平；
(a19)降低脾细胞分泌IL-4的水平；
(a20)降低过敏者脾细胞分泌IL-4的水平；
(a21)提高脾细胞分泌IFN-γ的水平；
(a22)提高过敏者脾细胞分泌IFN-γ的水平；
(a23)提高脾细胞分泌IL-10的水平；
(a24)提高过敏者脾细胞分泌IL-10的水平。
所述过敏性哮喘可为牛乳β-乳球蛋白引起的过敏性哮喘。
所述过敏性结肠病变可为牛乳β-乳球蛋白引起的过敏性结肠病变。
所述过敏性结肠组织损伤可为牛乳β-乳球蛋白引起的过敏性结肠组织损伤。
所述过敏性肺部病变可为牛乳β-乳球蛋白引起的过敏性肺部病变。
所述过敏性肺部病变可为牛乳β-乳球蛋白引起的过敏性肺部病变。
所述产品为食品、保健品或药品。
所述过敏为食物过敏。
所述食物过敏具体可为牛乳β-乳球蛋白过敏。
以上任一所述食品具体可为发酵乳、奶酪、乳饮料、固体饮料等。
以上任一所述食品具体可为功能性食品，例如功能性酸奶、功能性菌剂等。
以上任一所述药品可为胶囊、粉剂、片剂等剂型。
以上任一所述药品中还可包括其他药学上可以接受的赋形剂或稀释剂。
所述植物乳杆菌的建议剂量如下：每周3次，单次剂量为108～1011CFU。
本发明中，以国际通用过敏模型动物Balb/c小鼠为实验动物，腹腔注射β-乳球蛋白(β-lg)建立致敏模型。治疗组和预防组小鼠分别灌胃植物乳杆菌SC9，拟从体内、体外两方面研究植物乳杆菌SC9是否可以缓解过敏反应及具体机制。研究结果显示，灌胃植物乳杆菌SC9后，致敏小鼠体内IgE水平显著降低，并且植物乳杆菌SC9可以下调致敏小鼠体内IL-4的分泌水平，上调IFN-γ、IL-10的分泌水平。组织病理切片结果显示：致敏组小鼠结肠组织出现明显损伤，肠绒毛显著破损，结构不清，肠上皮细胞坏死脱落，灌胃植物乳杆菌SC9后，肠绒毛上皮未见明显坏死脱落细胞，肠绒毛排列基本整齐；致敏组肺脏组织表现出毛细血管和静脉淤血、充血、肺泡塌陷等现象，而灌胃植物乳杆菌SC9后，上述现象得到明显改善。
本发明利用益生菌抗过敏，可以解决使用药物治疗过敏反应时副作用大的问题。此外，来源于人体或发酵食品的益生菌安全有效，价格便宜，在发挥抗过敏功能的同时还可以调节肠道菌群平衡，预防其他免疫***疾病。本发明为治疗过敏性疾病提供了新方向。本发明可应用于食品、保健品和药品领域，具有非常好的产业前景。
附图说明
图1为小鼠血清中IgE水平的变化。
图2为结肠组织的病理学切片。
图3为肺脏组织的病理学切片。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
6-8周龄雌性清洁级Balb/c小鼠：长春生物制品研究所；饲养环境：23±2℃，湿度50％-75％，自由摄取高压灭菌的基础饲料和纯净水。基础饲料(不含牛奶及乳制品)：长春生物制品研究所；配方(％代表质量比)：肉粉和骨粉5.5％，鱼粉6％，高粱粉12.5％，麦麸12％，小麦粉16％，玉米粉30％，豆饼18％；能量组成(％代表质量比)：总蛋白18％，总脂肪7％，复合维生素0.15％，复合矿物质元素0.35％。
完全细胞培养液：含有10％(体积比)胎牛血清、100IU/mL青霉素和100μg/m L链霉素的RPMI-1640细胞培养液。
用于检测IL-4的试剂盒为biolegend公司的货号为BL-431104的试剂盒。用于检测IFN-γ的试剂盒为biolegend公司的货号为BL-430804的试剂盒。用于检测IL-10的试剂盒为biolegend公司的货号为BL-431414的试剂盒。用于检测小鼠血清中IgE水平的试剂盒为ebioscience公司的IgE ELISA试剂盒(货号EB-88-50460-22)。
如无特殊说明，实施例中所用的PBS缓冲液均为pH7.4、0.1M的PBS缓冲液。
牛乳β-乳球蛋白(β-lg)：固体粉末，购自Sigma-Aldrich Corporation，货号L3908-1G。使用时，用PBS缓冲液制备成不同浓度的β-lg溶液。
弗氏佐剂：液体，购自Sigma-Aldrich Corporation，货号F5881-6X10ML。
实施例1、植物乳杆菌SC9的获得
菌株SC9，分离自东北地区传统发酵酸菜。生理生化鉴定为革兰氏阳性菌，经API50CH(法国梅里埃公司)和16srDNA序列扩增比对鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)，命名为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SC9，简称植物乳杆菌SC9。
植物乳杆菌SC9，已于2008年10月10日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址为：武汉大学)，保藏号为CCTCC NO.M 208150。
植物乳杆菌SC9已于2008年12月11日申请专利并获得授权。专利号为ZL 2008 10239475.0。授权公告日为2012年01月04日。授权公告号为CN 101748083 B。
实施例2、植物乳杆菌SC9的抗过敏效果
一、菌悬液和过敏原的制备
用PBS缓冲液悬浮植物乳杆菌SC9，得到菌浓度为109CFU/mL的菌悬液。
将1mL弗氏佐剂和1mL 1mg/mLβ-lg溶液混匀，得到过敏原。
二、分组处理
试验动物为6-8周龄雌性清洁级Balb/c小鼠。
取试验动物，进行连续3天的适应性饲养(第-3天、第-2天、第-1天)，然后随机分为4组，每组10只，处理如下：
空白组(K)：第1天、第3天、第5天、第8天、第10天、第12天，分别灌胃给予一次PBS缓冲液(单次给予剂量为0.1mL)，第14天处死试验动物；
致敏组(M)：第0天、第7天和第14天，分别腹腔注射一次过敏原(单次给予剂量为0.2mL)；第三次注射过敏原6小时后，处死试验动物；
预防组(Y)：第1天、第3天、第5天、第8天、第10天、第12天、第15天、第17天和第19天，分别灌胃给予一次步骤一制备的菌悬液(单次给予剂量为0.1mL)；第7天、第14天和第21天，分别腹腔注射一次过敏原(单次给予剂量为0.2mL)；第三次注射过敏原6小时后，处死试验动物；
治疗组(Z)：第0天、第7天和第14天，分别腹腔注射一次过敏原(单次给予剂量为0.2mL)；第15天、第17天、第19天、第22天、第24天、第26天、第29天、第31天和第33天，分别灌胃给予一次步骤一制备的菌悬液(单次给予剂量为0.1mL)；第35天，处死试验动物。
三、植物乳杆菌SC9对脾细胞分泌IL-4、IFN-γ和IL-10的影响
细胞因子是由单核-巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞等多种免疫细胞分泌的，与细胞表面的特异性受体结合引起细胞内一系列的信号呈递，使机体产生免疫应答，起到免疫调节作用并引起炎症反应。Th1细胞主要分泌IFN-γ、TNF-α、Il-12和TNF-β等细胞因子，抑制机体产生IgE。Th2细胞主要分泌IL-4、IL-5等细胞因子，促进机体产生IgE。Treg细胞分泌的IL-10与Th17细胞主要分泌IL-17相互制约。细胞因子间相互刺激，在动态平衡中调节机体的细胞免疫。
1、处死试验动物后，取脾脏，分离脾细胞。
2、取6孔细胞培养板：第一个孔加入用完全细胞培养液悬浮的空白组小鼠脾细胞(总体积为5mL，脾细胞的浓度为2×106个细胞/mL)，第二个孔加入用完全细胞培养液悬浮的致敏组小鼠脾细胞和β-lg溶液(总体积为5mL，脾细胞的浓度为2×106个细胞/mL，β-lg浓度的为1mg/mL)，第三个孔加入用完全细胞培养液悬浮的预防组小鼠脾细胞、植物乳杆菌SC9和β-lg溶液(总体积为5mL，脾细胞的浓度为2×106个细胞/mL，植物乳杆菌SC9的浓度为106CFU/mL，β-lg的浓度为1mg/mL)，第四个孔加入用完全细胞培养液悬浮的治疗组小鼠脾细胞、植物乳杆菌SC9和β-lg溶液(总体积为5mL，脾细胞的浓度为2×106个细胞/mL，植物乳杆菌SC9的浓度为106CFU/mL，β-lg的浓度为1mg/mL)。
3、完成步骤2后，取所述6孔细胞培养板，加盖后置于37℃、5％CO2温箱中静置培养48小时。
4、完成步骤3后，3000r/min离心10min，取上清液(脾细胞培养上清)。
5、取步骤4得到的脾细胞培养上清，分别检测IL-4、IFN-γ和IL-10的浓度，结果见表1。
表1植物乳杆菌SC9对脾细胞分泌IL-4、IFN-γ和IL-10的影响(pg/mL，X±SD)
| 分组 | IL-4 | IFN-γ | IL-10 |
| 空白组 | 42.30±1.81 | 629.00±13.23 | 379.19±4.12 |
| 致敏组 | 672.94±10.10* | 327.33±12.58* | 283.95±22.96* |
| 预防组 | 62.29±5.13# | 415.67±20.45 | 350.61±39.33 |
| 治疗组 | 59.06±8.87# | 1529.00±26.05*# | 326.81±39.33 |
注：*，与空白组相比(P<0.05)；#，与致敏组相比(P<0.05)。
与空白组相比，致敏组小鼠脾细胞培养上清中IL-4分泌水平显著升高，IFN-γ分泌水平显著降低，IL-10分泌水平也显著下降。与致敏组相比，治疗组小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ分泌水平显著增加，IL-4分泌水平显著降低，IL-10分泌水平升高。与致敏组相比，预防组小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ分泌水平增加，IL-4分泌水平显著降低，IL-10分泌水平升高。
四、植物乳杆菌SC9对小鼠血清总IgE水平的影响
IgE在过敏反应中起重要作用，这种由IgE介导产生的过敏反应可发生于局部，也可发生于全身。当机体初次接触过敏原后刺激机体产生IgE，IgE在肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面结合使机体呈致敏状态。
处死试验动物前先摘眼球取血，检测小鼠血清中IgE水平的变化。结果见图1(*表示与致敏组相比P<0.05)。致敏组小鼠血清中IgE含量显著高于空白组(P<0.05)，预防组和治疗组小鼠血清中的IgE水平均显著低于致敏组(P<0.05)。结果表明，植物乳杆菌SC9可通过降低机体总IgE水平(P<0.05)缓解过敏反应。
五、植物乳杆菌SC9对小鼠结肠组织形态学变化的影响
牛乳蛋白过敏的表现最常见的症状是胃肠道疾病。大约50％蛋白质的吸收需十二指肠和整个小肠共同参与。这些蛋白抗原可跨越肠上皮屏障，通过细胞运转或通过微皱褶细胞摄取。食物蛋白质可以通过上皮扩散渗透，几种促炎细胞因子可增强上皮渗透性，在这些情况下，食物蛋白质可大量到达粘膜淋巴细胞诱导抗体和免疫复合物产生。有研究证明在幼稚T细胞易感个体致敏后会导致Th2型细胞分泌细胞因子的反应。细胞介导的反应决定了特定细胞因子的释放和Th2型淋巴细胞的活化，如分泌IL-4、IL-10和IL-5、IL-13，促进IgE生产放大炎症反应如趋化嗜酸性粒细胞、肥大细胞、中性粒细胞和自然杀伤细胞，造成肠形态及粘膜功能的改变。
处死试验动物后，取结肠，经10％中性***固定、制作石蜡切片、进行苏木素-伊红染色后，病理学切片见图2。空白组小鼠结肠组织结构清晰；与空白组相比，致敏组小鼠结肠组织表现出明显损伤的现象，肠绒毛显著破损，结构不清，肠腺上皮细胞多数坏死脱落；与致敏组相比，预防组和治疗组小鼠肠绒毛上皮细胞未见明显坏死脱落，且肠绒毛排列基本整齐。
六、植物乳杆菌SC9对小鼠肺脏组织形态学变化的影响
牛乳蛋白过敏会引起过敏性哮喘。在对腹腔致敏小鼠的肺部和气管病理变化的研究中，通过对小鼠肺组织学观察发现肺部明显出现红肿现象，并伴有血管或支气管附近出现大量的淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、支气管杯状细胞，且支气管腔充满黏液。
处死试验动物后，取肺脏，经10％中性***固定、制作石蜡切片、进行苏木素-伊红染色后，病理学切片见图3。空白组小鼠肺脏组织结构清晰；与空白组相比，致敏组肺脏组织表现出毛细血管和静脉淤血、充血、肺泡塌陷等现象；与致敏组相比，预防组和治疗组小鼠的肺脏的淤血、充血现象明显改善。
Claims (10)
1.植物乳杆菌在制备用于预防和/或治疗过敏的产品中的应用；所述植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SC9，其保藏编号为CCTCC NO.M 208150。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述产品为食品、保健品或药品。
3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述过敏为食物过敏。
4.植物乳杆菌在制备产品中的应用；所述植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)SC9，其保藏编号为CCTCC NO.M 208150；
所述产品的功能为如下(a1)至(a24)中的至少一项：
(a1)治疗过敏；
(a2)预防过敏；
(a3)治疗食物过敏；
(a4)预防食物过敏；
(a5)治疗牛乳β-乳球蛋白过敏；
(a6)预防牛乳β-乳球蛋白过敏；
(a7)治疗过敏性哮喘；
(a8)预防过敏性哮喘；
(a9)治疗过敏性结肠病变；
(a10)预防过敏性结肠病变；
(a11)治疗过敏性结肠组织损伤；
(a12)预防过敏性结肠组织损伤；
(a13)治疗过敏性肺部病变；
(a14)预防过敏性肺部病变；
(a15)治疗过敏性肺部损伤；
(a16)预防过敏性肺部损伤；
(a17)降低血清总IgE水平；
(a18)降低过敏者血清总IgE水平；
(a19)降低脾细胞分泌IL-4的水平；
(a20)降低过敏者脾细胞分泌IL-4的水平；
(a21)提高脾细胞分泌IFN-γ的水平；
(a22)提高过敏者脾细胞分泌IFN-γ的水平；
(a23)提高脾细胞分泌IL-10的水平；
(a24)提高过敏者脾细胞分泌IL-10的水平。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述产品为食品、保健品或药品。
6.如权利要求4或5所述的应用，其特征在于：所述过敏为食物过敏。
7.一种用于预防和/或治疗过敏的产品，其活性成分为植物乳杆菌；所述植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SC9，其保藏编号为CCTCC NO.M 208150。
8.一种产品，其活性成分为植物乳杆菌；所述植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SC9，其保藏编号为CCTCC NO.M 208150；
所述产品的功能为如下(a1)至(a24)中的至少一项：
(a1)治疗过敏；
(a2)预防过敏；
(a3)治疗食物过敏；
(a4)预防食物过敏；
(a5)治疗牛乳β-乳球蛋白过敏；
(a6)预防牛乳β-乳球蛋白过敏；
(a7)治疗过敏性哮喘；
(a8)预防过敏性哮喘；
(a9)治疗过敏性结肠病变；
(a10)预防过敏性结肠病变；
(a11)治疗过敏性结肠组织损伤；
(a12)预防过敏性结肠组织损伤；
(a13)治疗过敏性肺部病变；
(a14)预防过敏性肺部病变；
(a15)治疗过敏性肺部损伤；
(a16)预防过敏性肺部损伤；
(a17)降低血清总IgE水平；
(a18)降低过敏者血清总IgE水平；
(a19)降低脾细胞分泌IL-4的水平；
(a20)降低过敏者脾细胞分泌IL-4的水平；
(a21)提高脾细胞分泌IFN-γ的水平；
(a22)提高过敏者脾细胞分泌IFN-γ的水平；
(a23)提高脾细胞分泌IL-10的水平；
(a24)提高过敏者脾细胞分泌IL-10的水平。
9.如权利要求7或8所述的产品，其特征在于：所述产品为食品、保健品或药品。
10.如权利要求7或8或9所述的产品，其特征在于：所述过敏为食物过敏。
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2016
- 2016-08-04 CN CN201610633406.2A patent/CN106262931A/zh active Pending
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