CN106255887B - 用于定量尿液分析的尿液分析装置和干试剂 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了一种定量测定样品中至少一种分析物的浓度的方法，所述方法包括以下任一步骤：(i)将一部分样品加入到第一分析物检测制剂和分析物检测参比制剂中，生成第一分析物样品和分析物参比样品，测定所述样品中至少一种分析物的浓度，和/或(ii)将一部分样品加入到第二分析物检测制剂中，测定所述样品中至少一种分析物的浓度。本发明还公开了与所述方法相关的制剂、试剂盒、***和计算机实施方法。

Description

用于定量尿液分析的尿液分析装置和干试剂
背景技术
尿液分析是一种获取有关肾脏和尿道的解剖学信息和功能信息的信息源。它提供了对糖尿病等***性疾病的状态的深入了解。利用试纸或试纸条进行尿液分析已被广泛接受用于健康检查中，因为试纸或试纸条的应用提供了一种简单的方案，并且在经济上十分划算。
利用试纸条进行尿液分析非常方便，但是，当由护士等的人眼进行判断时，由于对颜色变化的识别力不同，可能会出现假阳性或假阴性结果。
通过尿微量白蛋白测量可以在早期阶段诊断慢性肾脏疾病(CKD)。尿微量白蛋白的定量测量的“金标准”来自于24小时尿液收集，但这对患者而言是非常费时和麻烦的。相反，随机尿检测是筛查尿微量白蛋白最常用的方法，需要测量尿白蛋白/肌酐比(ACR)，用肌酐来补偿尿液样品中尿浓度的变化。
作为肾衰竭风险的预后因素，ACR也是一个要测量的有用参数。在治疗中监测ACR值也是有用的，并且需要即时检测(point-of-care)装置提高患者的生活质量(Quality ofLife，QOL)。
目前，市场上大部分用于尿液分析的即时检测装置都是半定量的，并且使用试纸和试纸读取仪。家用或临床使用中需要定量即时检测装置。
例如，在医院和临床实验室中使用自动尿液分析仪，可得到定量尿液分析结果。尿液分析仪通常是台式机或更大设备的一部分，例如全自动血清/尿液分析仪的一部分。因此，这些定量尿液分析装置的可及性是集中的，生活在乡村地区的人们接受合适的诊断检测受到限制的。
尿液样品的pH变化大，测量结果也受到环境(即检测场所)温度的影响。现有的定量检测方法需要稀释样品以消除尿液所带来的干扰。此外，用于尿液分析的湿比色试剂需要保存在冰箱中，不适用于家用或临床使用。
如上所述，为尽量减小现有的定量***中pH或干扰的影响，除强酸或强碱外，尿液样品还用一定体积的的缓冲液稀释。为了尽量减小实验室中温度的影响，将冷却***引入到用于分析的装置中，但这种冷却***使所述装置的体积变大。所得到装置的尺寸使得运输困难，而且在除临床实验室环境以外的任何地方不能使用。
此外，用于尿液分析的试剂可能在反应中或当样品加入到其中时，产生气泡。而这因为光散射的原因，可能会导致精度降低。
对于现有的定量装置，内部参照表通常在一定的pH范围和/或温度条件下制得，从而使数据标准化，但制作参照表是麻烦的，而且进行标准化的程度是受限的，这取决于干扰的类型。鉴于此，其结果不是对所有的患者都是准确的。
可以理解的是，因为在目前可实现的检测中使用上述试剂，所以至少在某种程度上会出现上述这些问题。
综上所述，仍然需要开发更精确的、便携式、成本效益好的尿液分析设备。此外，仍然需要开发能够适用于与简化装置一起使用的、有助于提高结果精确度的分析试剂。
发明内容
权利要求1-63给出了本发明的方面和实施例，并在下文对其做更详细的说明。
在本发明的第一方面中，提供了一种定量测定样品中至少一种分析物的浓度的方法，所述方法包括以下步骤:
i)(a)将一部分样品加入到含有第一分析物络合剂的第一分析物检测制剂中，生成第一分析物样品；
(b)将一部分样品加入到分析物检测参比制剂中，生成分析物参比样品，所述分析物检测参比制剂除了与第一分析物检测制剂相同外，还包含使分析物变性或阻止分析物和第一分析物络合剂生成络合物的试剂；
(c)通过测量第一分析物样品和分析物参比样品的吸收光谱，计算第一分析物样品和分析物参比样品的吸收光谱之间的差异，并比较所得的差异光谱和分析物浓度的第一预定校准曲线，测定样品中至少一种分析物的浓度；
和/或
ii)(a)将一部分样品加入到含有第二分析物络合剂的第二分析物检测制剂中，生成第二分析物样品；和
(b)通过测量一段时间内第二分析物样品中的分析物的吸收光谱，计算在所述时间内第二分析物样品的吸光度的变化率，并比较所得的变化率和分析物浓度的第二预定校准曲线，测定样品中至少一种分析物的浓度。
在本发明的一个实施例中，所述至少一种分析物是白蛋白，所述方法包括以下步骤：
将一部分样品加入到以下每个中：
(A)包含白蛋白络合剂的白蛋白检测样品制剂，生成白蛋白样品；和
(B)白蛋白检测参比制剂，生成白蛋白参比样品，所述白蛋白检测参比制剂除了与所述白蛋白检测制剂相同外，还包含阴离子表面活性剂，和
通过测量白蛋白样品和白蛋白参比样品的吸收光谱，计算白蛋白样品和白蛋白参比样品的吸收光谱之间的差异，并比较所得的差异光谱和白蛋白浓度的预定校准曲线，测定样品中的白蛋白浓度。
在本发明的另一个实施例中，所述至少一种分析物是肌酐，所述方法包括以下步骤：将一部分样品加入到包含肌酐络合剂的肌酐检测样品制剂中，生成肌酐样品，通过测量一段时间内的所述肌酐样品的吸收光谱变化，计算所述时间内的所述肌酐样品的吸光度的变化率，并比较所得的变化率与肌酐浓度的预定校准曲线，测定样品中的肌酐浓度。
在本发明的另一个实施例中，所述至少一种分析物是白蛋白和肌酐，所述方法包括以下步骤：
a)根据上述方法，测定样品中的肌酐浓度；和
b)根据上述方法，测定样品中的白蛋白浓度；和
还进一步包括，测定样品中的白蛋白/肌酐比的步骤。
在本发明的某些实施例中，所述制剂中的一种或多种可以是冻干的。例如，所有所述制剂是冻干的。
在本发明的某些实施例中，所述样品是尿液样品。
在本发明的另一些实施例中，所述测定白蛋白浓度的步骤需要测量吸收光谱：
所述白蛋白样品和所述白蛋白参比样品在625nm处的吸收光谱；和/或
将所述样品加入到期望的分析物制剂中后，约5分钟时测量。
在另一些实施例中，所述测定肌酐浓度的步骤需要测量所述肌酐样品在525nm处的吸光度的变化率。
在另一些实施例中，所述测定肌酐浓度的步骤需要测量所述肌酐样品在525nm处的吸光度的变化率，包括测量从约10s至约10分钟的时间内的吸光度。例如，从将所述样品加入到所述第二检测制剂或所述肌酐检测制剂中开始，从30s时开始动力学测量，并于10分钟时结束(即，从将所述样品加入到所述第二检测制剂或所述肌酐检测制剂开始，所述动力学测量于1分钟时开始，于5分钟-10分钟之间的某一时刻结束)。
在本发明的另一些实施例中，所述方法可以同时测定肌酐浓度和白蛋白浓度。
在本发明的另一些实施例中，所述肌酐样品检测制剂与在本发明的第二方面所定义的一样。
在本发明的另一些实施例中，所述白蛋白检测制剂与在本发明的第三方面所定义的一样。
在本发明的另一些实施例中，所述白蛋白浓度的预定校准曲线通过生成用于定量测定尿液样品中白蛋白浓度的校准曲线的计算机实施方法而得到，所述方法在本发明的第六方面进行定义。
在本发明的第二方面，提供一种用于分析样品中的肌酐浓度的制剂，所述制剂包含：
一种浓度约40g/L-约80g/L的强碱；
一种浓度约50g/L-约250g/L的缓冲液；
至少一种浓度约0.1g/L-约20g/L的表面活性剂；
和水。
在本发明的一个实施例中，所述制剂还包含与肌酐反应生成肌酐络合物的化合物。例如，与肌酐反应生成肌酐络合物的所述化合物是苦味酸，或更特别的是二硝基苯甲酸。
在某些实施例中，与肌酐反应生成肌酐络合物的所述化合物的浓度是约1g/L-约5g/L。
在本发明的另一些实施例中，所述至少一种表面活性剂包含浓度约0.1g/L-约10g/L的阴离子表面活性剂和浓度约0.1g/L-约10g/L的阳离子表面活性剂。
在某些实施例中，阳离子表面活性剂与阴离子表面活性剂的比是1:2-1:10(例如，1:3-1:7，例如1:5)。
在本发明的某些实施例中，涉及用于分析样品中的肌酐浓度的制剂：
(a)当所述至少一种表面活性剂包含阳离子表面活性剂时，所述阳离子表面活性剂选自由十六烷基氯化吡啶、苯扎氯铵、苄索氯铵、二甲基双十八烷基氯化铵、西曲溴铵、双十八烷基二甲基溴化铵和十六烷基三甲基溴化铵组成的组中的一种或多种；和/或
(b)当所述至少一种表面活性剂包含阴离子表面活性剂时，所述阴离子表面活性剂选自由十二烷基硫酸钠、聚苯乙烯磺酸盐、直链烷基苯磺酸盐、仲醇磺酸盐、醇烯基磺酸盐、醇硫酸盐组成的组中的一种或多种；和/或
(c)所述缓冲液选自由磷酸氢二钾、磷酸氢二钠和硼酸盐组成的组中的一种或多种；
(d)所述强碱是氢氧化钠和/或氢氧化钾。
在本发明的某些实施例中，用于分析样品中的肌酐浓度的所述制剂是冻干的。
在本发明的另一些实施例中，用于分析样品中的肌酐浓度的所述制剂还包含增容剂，所述增容剂在所述制剂中的含量是约1重量％-约40重量％，可选地，其中所述增容剂选自由糖-甘露醇、乳糖和海藻糖组成的组中的一种或多种。
在本发明的另一些实施例中，在用于分析样品中的肌酐浓度的所述制剂中，所述缓冲液与强碱的浓度比是0.5:1-2.5:1，例如1:1-1.5:5，例如，1.25:1。
在本发明的第三方面，提供了一种用于分析样品中的白蛋白浓度的制剂，所述制剂包含：
一种浓度约0.1g/L-约1.5g/L的化合物，所述化合物与白蛋白发生反应，生成白蛋白络合物；
一种浓度约10g/L-约50g/L的强碱；
一种浓度约50g/L-约250/L的缓冲液；
一种浓度约1g/L-约20g/L的第一非离子表面活性剂；
一种浓度约0.1g/L-约3g/L的防腐剂；和
水。
在本发明的实施例中，所述制剂还包含阴离子表面活性剂。在某些实施例中，所述阴离子表面活性剂在所述制剂中的含量为约0.1重量％-5重量％。例如，所述阴离子表面活性剂选自由十二烷基硫酸钠、聚苯乙烯磺酸盐、直链烷基苯磺酸盐、仲醇磺酸盐、醇烯基磺酸盐、醇硫酸盐组成的组中的一种或多种。
在本发明的某些实施例中，与白蛋白反应生成白蛋白络合物的所述化合物是溴甲酚绿。
在本发明的某些实施例中，涉及用于分析样品中的白蛋白浓度的所述制剂：
(a)所述缓冲液选自由N-(1-乙酰胺基)-2-氨基乙磺酸、醋酸钠、N-(2-乙酰胺基)亚氨基二乙酸、2-氨基-2-甲基-1-丙醇、2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇、N-(1,1-二甲基-2-羟乙基)-3-氨基-2-羟基丙磺酸、N,N-二(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸、碳酸氢钠、N,N-二(2-羟乙基)-甘氨酸、二(2-羟乙基)亚氨基三(羟甲基)甲烷、1,3-二[三(羟甲基)甲氨基]丙烷、3-(环己胺)-1-丙磺酸、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸、2-(N-环己胺)乙磺酸、柠檬酸三钠、N,N-二(2-羟乙基)-3-氨基-2-羟基丙磺酸、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙磺酸、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-丙磺酸、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-(2-羟基)丙磺酸、2-吗啉乙磺酸、3-吗啉丙磺酸、3-吗啉-2-羟基丙磺酸、哌嗪-1,4-二(2-乙磺酸)、哌嗪-1,4-二(2-羟基丙磺酸)、N-[三(羟甲基)甲基]-3-氨基丙磺酸、N-[三(羟甲基)甲基]-3-氨基-2-羟基丙磺酸、N-[三(羟甲基)甲基]-2-氨基乙磺酸、N-[三(羟甲基)甲基]甘氨酸、三羟甲基氨基甲烷和琥珀酸组成的组中的一种或多种；和/或
(b)所述第一非离子表面活性剂选自由聚氧乙烯脂肪醇醚(Brij)、聚丙二醇、聚乙二醇十六烷基醚、曲通X-100(Triton X-100)、吐温(Tween)、ZonylTM FSN含氟表面活性剂、ALKANOLTM 6112表面活性剂、聚乙二醇组成的组中的一种或多种，可选地，其中所述第一非离子表面活性剂是聚氧乙烯脂肪醇醚；和/或
(c)所述防腐剂选自由糖、山梨酸、苯甲酸、丙酸钙、亚硝酸钠、叠氮化钠、亚硫酸盐、乙二胺四乙酸二钠和抗氧化剂组成的组中的一种或多种，和/或
(d)所述强碱是氢氧化钠和/或氢氧化钾。
在本发明的另一些实施例中，用于分析白蛋白浓度(和参比样品)的所述制剂可以是冻干的。
在本发明的某些实施例中，所述制剂可以进一步包含第二非离子表面活性剂，所述第二非离子表面活性剂在所述制剂中的含量为约10g/L-约200g/L。例如，所述第二非离子表面活性剂可以选自由聚氧乙烯脂肪醇醚、聚丙二醇、聚乙二醇十六烷基醚、曲通X-100、吐温、ZonylTM FSN含氟表面活性剂、ALKANOLTM 6112表面活性剂、聚乙二醇组成的组中的一种或多种，但所述第一非离子表面活性剂和所述第二非离子表面活性剂互不相同，可选地，其中所述第二非离子表面活性剂是聚乙二醇。
在本发明的第四方面，提供了一种制备如本发明第二方面所述的用于分析样品中的肌酐浓度的冻干制剂或如本发明第三方面所述的用于分析样品中的白蛋白浓度的冻干制剂的方法，包括以下步骤：
(a)将所述指定的化学成分混合在一起，过滤所得的混合物，将所述混合物分配到容器中，将所述容器***到冻干装置中；
(b)将所述样品在约-20℃至约-80℃的温度下冷冻约0.5h至5h；
(c)将所述样品在约-10℃至约-30℃的温度下退火约1h至5h；
(d)将所述样品在约-20℃至约-80℃的温度下再次冷冻约0.5h至5h；
(e)在约-10℃至约-30℃的温度下进行第一干燥循环约5h至50h；
(f)在约0℃至约60℃的温度下进行第二干燥循环约1h至20h。
在本发明的某些实施例中，所述容器选自由埃彭道夫管(Eppendorf tube)、96孔板、商用比色皿或适于与含有接触式图像传感器模块的装置一起使用的比色皿组成的组。
在本发明的另一些实施例中，所述方法可以进一步包括将保存有所述冻干制剂的容器远离光、氧气和水分储存。
在本发明的第五方面，提供了一种试剂盒，所述试剂盒包含：
(a)根据本发明第二方面所述的制剂得到的肌酐检测制剂；和/或
(b)根据本发明第三方面所述的制剂得到的白蛋白检测制剂和白蛋白参比制剂。
在本发明的某些实施例中，在所述试剂盒中，每份冻干制剂可以分别装在埃彭道夫管、比色皿、适于与含有接触式图像传感器模块的装置一起使用的比色皿、或96孔板的单独孔中。
在某些实施例中，所述制剂远离光、氧气和水分储存。
在本发明的第六方面，提供了一种计算机实施方法，生成用于定量测定尿液样品中的白蛋白浓度的校准曲线，所述方法包括以下步骤：
获得第一吸光度数据，所述第一吸光度数据表示多个无白蛋白尿液样品的无白蛋白样品吸光度和无白蛋白参比吸光度；其中所述无白蛋白样品吸光度包括当白蛋白络合剂存在时，所述无白蛋白尿液样品的各个第一组分的吸光度；所述无白蛋白参比吸光度包括当白蛋白络合剂存在时以及当白蛋白变性剂或阻止白蛋白和所述白蛋白络合剂生成络合物的试剂存在时，所述无白蛋白尿液样品的各个第二组分的吸光度；
计算机拟合所述无白蛋白样品吸光度和无白蛋白参比吸光度间的函数关系，得到调整参数；
获得第二吸光度数据，所述第二吸光度数据表示多个具有已知白蛋白浓度的尿液样品的样品吸光度和参比吸光度；其中所述样品吸光度包括当白蛋白络合剂存在时，所述尿液样品的各个第一组分的吸光度；所述参比吸光度包括当白蛋白络合剂存在时以及当白蛋白变性剂或阻止白蛋白和所述白蛋白络合剂生成络合物的试剂存在时，所述尿液样品的各个第二组分的吸光度；
使用所述调整参数调整所述参比吸光度，从而获得调整后的参比吸光度；和
计算机拟合所述样品吸光度、所述调整后的参比吸光度和所述已知浓度之间的函数关系，获得校准曲线的参数。
在本发明的一个实施例中，所述无白蛋白样品吸光度和所述无白蛋白参比吸光度间的函数关系式为其中是所述无白蛋白样品吸光度，是所述无白蛋白参比吸光度，a和b是所述调整参数。
在本发明的另一个实施例中，根据计算调整后的参比吸光度，其中是所述参比吸光度。
在本发明的另一个实施例中，所述样品吸光度、所述调整后的参比吸光度和所述已知浓度之间的函数关系式为其中是所述样品吸光度，是已知浓度，A是所述校准曲线的一个参数。
附图说明
图1：白蛋白的检测原理
图2：肌酐的检测原理
图3：干试剂的制备
图4：比色皿盒和比色皿支架
图5：进样装置
图6：进样结构
图7：比色皿支架和光学模块
图8：检测方法
图9：BCG干试剂：补偿pH影响
图10：BCG干试剂：补偿温度影响
图11：BCG干试剂的校准曲线
图12：数据处理前BCG干试剂与真实尿液样品的校准曲线
图13：AS-AR关系图
图14：数据处理后BCG干试剂与真实尿液样品的校准曲线
图15：DNBA干试剂的校准曲线
图16：用于生成在定量测定尿液样品中的白蛋白浓度时使用的校准曲线的***
具体实施方式
本发明期望提供一种简单的结构紧凑的即时检测尿液分析***，所述***使用湿试剂，或更特别的，使用干试剂。特别的是，所述试剂可以适于与即时检测分析***一起使用，所述***能同时测量多个分析样品。
例如，这样的***可以包含：接触式图像传感器(CIS)模块，所述CIS模块具有发射光的发光二极管(LED)，所发射的光的波长预配置为与尿液分析试剂和目标分析物的反应产物的吸收波长相匹配；光学比色皿，所述光学比色皿在远离所述CIS模块的一侧具有反射表面；保持于所述光学比色皿内的冻干尿液分析试剂；尿液分配结构，所述尿液分配结构具有用于将样品分配到每个光学比色皿中的贮液器以及用于单独控制被分配溶液的体积的溶液阻挡结构。
通过测量尿微量白蛋白，可以在早期阶段诊断慢性肾脏疾病(CKD)。这种检测可以通过测定尿液的尿微量白蛋白和肌酐的浓度以及相应的白蛋白/肌酐比(ACR)进行。
而在此使用的检测可以用来分析尿液样品，所述检测还可以适用于分析其他来源的样品(例如，唾液、血液等)。因此，在整个说明书中，术语“尿微量白蛋白”可以用术语“白蛋白”替换。
为了测定ACR，分别使用两种不同的试剂测量尿白蛋白和肌酐。溴甲酚绿(BCG)用于测定尿液的尿微量白蛋白，而3,5-二硝基苯甲酸(DNBA)用于测定尿液的肌酐。
尿液样品中的尿微量白蛋白与BCG反应生成有色络合物(图1)。在625nm波长下测得的颜色强度与尿液样品中的尿微量白蛋白浓度成正比。
对于尿微量白蛋白检测，制备两种湿试剂，或更特别的是干试剂，用于取样和参比。用比色检测法同时测量所述干试剂(取样和参比)和尿液样品的混合物。所述取样试剂用于测量BCG-白蛋白络合物的颜色强度。通过使所述尿液样品进行蛋白质变性的方法，利用所述参比试剂减少或消除pH和温度的影响以及干扰。也就是说，尿微量白蛋白检测法应用蛋白质变性方法，其中用于参比的干试剂包含用于使白蛋白变性的表面活性剂，从而使变性的白蛋白不与参比试剂中的BCG反应。
尿液样品中的肌酐与DNBA在碱性介质中反应，生成***络合物(图2)。在波长525nm处的络合物生成速率与尿液样品中的肌酐浓度直接成正比。可替换地，DNBA可以用苦味酸替换。
肌酐检测仅使用用于测量肌酐的取样试剂。所述肌酐取样试剂采用缓冲液加入法，以尽量减少尿液pH的干扰，而温度的影响则是由校准曲线的温度因子进行补偿，通过测量络合物生成速率消除尿液的背景影响。目前，量身定制装置，以使其在常规制剂的反应参数内运行。这可能导致更复杂的自动化装置，因为可能需要不同的传感器用于分析用来检测尿液中的分析物的不同试剂的反应产物(例如，比色分析)。
如下文更详细的描述，控制DNBA和肌酐之间相互作用的动力学因素是重要的。如果DNBA和肌酐间的反应对于所使用的装置太快或太慢，那么所述装置将不能提供准确的分析。此外，由于DNBA干试剂和尿液样品的混合物有生成气泡的倾向，所以所述分析可能会因为光散射而不准确。在此公开的制剂已被配制，以克服与所述试剂和样品分析有关的问题。
用于肌酐检测的干试剂
对DNBA干试剂采用缓冲液加入法，以消除尿液pH的影响。DNBA与肌酸在碱性条件下反应，生成***络合物。取样试剂包含DNBA、强碱、缓冲液、增容剂、阴离子表面活性剂和阳离子表面活性剂。所使用的具体化学物质可以从下述列表(表A)中选择，且每个化学物质的浓度可以在指定范围内。
表A
用于肌酐检测的化学物质列表
1)强碱；NaOH、KOH。
2)缓冲液；磷酸氢二钾、磷酸氢二钠、硼酸盐。
3)增容剂；糖(如甘露醇、乳糖、海藻糖)。
4)阴离子表面活性剂；尤其是阴离子硫酸化/磺化表面活性剂；十二烷基硫酸钠(SDS)、聚苯乙烯磺酸盐(PSS)，直链烷基苯磺酸盐(LAS)，仲醇磺酸盐、醇烯基磺酸盐、醇硫酸盐。
5)阳离子表面活性剂；十六烷基氯化吡啶(CPC)、苯扎氯铵(BAC)、苄索氯铵(BZT)、双十八烷基二甲基氯化铵、西曲溴铵、双十八烷基二甲基溴化铵(DODAB)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)。
不希望被理论所限制，推测将缓冲液加入到强碱中，会导致DNBA或苦味酸和肌酐之间的化学反应的动态调节。可以理解的是，可以选择缓冲液与氢氧化钠的比例，以适应分析装置。这使得该装置产生一个更精确的读数。例如，缓冲液:强碱的浓度比(摩尔)可以是0.5:1-3.2:1，例如，0.8:1-2.5:1(例如，1.5:1-2.5:1)，例如1:1-1.5:1(例如，1.25:1)。例如，当和本申请的图4-图7所示的装置一起使用时，缓冲液：强碱的比例低于0.5：1可能会导致络合物生成过快，以至于不能准确测量它的生成速率。
此外，不希望被理论所限制，认为表面活性剂的添加有助于减少反应混合物中的气泡在光学比色皿壁上形成，从而减少散射并增加准确度。特别是，已经发现，当含有季铵基团的阳离子表面活性剂，与作为溶剂化助剂的阴离子表面活性剂一起使用时，有助于控制气泡生成。这是因为没有溶剂化助剂(例如，阴离子表面活性剂)时，季铵盐表面活性剂不能在缓冲溶液中溶解足够的量，而阴离子表面活性剂在单独使用时不会影响气泡生成。因此，在所述肌酐检测试剂中使用具有特定比例的阴离子表面活性剂和阳离子表面活性剂，有助于控制气泡生成。所述阳离子表面活性剂:阴离子表面活性剂的比例可以是1:2-1:10，例如1:3-1:7，或更特别的是1:5。
用于尿微量白蛋白检测的干试剂
对BCG干试剂采用蛋白质变性的方法，以消除尿液成分的干扰，例如尿液pH、样品温度和尿液背景。白蛋白与BCG反应，颜色发生变化，但变性的白蛋白不与BCG反应，颜色保持不变。第一种试剂用于取样，第二种试剂用于参比。两种试剂都含有相同浓度的BCG、强碱、缓冲液、非离子表面活性剂和防腐剂。然而，只有第二种试剂包含阴离子表面活性剂，用于使参比样品中的白蛋白变性。化学物质可以从下述列表(表B)中选择，且浓度可以在指定的范围内。
表B
用于白蛋白检测的化学物质列表
1)强碱；NaOH、KOH。
2)缓冲液；N-(1-乙酰胺基)-2-氨基乙磺酸(ACES)、醋酸盐(醋酸钠)、N-(2-乙酰胺基)亚氨基二乙酸(ADA)、2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)、2-氨基-2-甲基-1，3-丙二醇(AMPD)、N-(1,1-二甲基-2-羟乙基)-3-氨基-2-羟基丙磺酸(AMPSO)、N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸(BES)、碳酸氢盐(碳酸氢钠)、N,N-双(2-羟乙基)甘氨酸(Bicine)、二(2-羟乙基)亚氨基三(羟甲基)甲烷(Bis-Tris)、1,3-二[三(羟甲基)甲氨基]丙烷(Bis-Tris-丙烷)、3-环己胺-1-丙磺酸(CAPS)、3-环己胺-2-羟基-1-丙磺酸(CAPSO)、2-(N-环己胺)乙磺酸(CHES)、柠檬酸盐(柠檬酸三钠)、N,N-二(2-羟乙基)-3-氨基-2-羟基丙磺酸(DIPSO)、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙磺酸(HEPES)、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-丙磺酸(HEPPS)、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-2-羟基丙磺酸(HEPPSO)、2-吗啉乙磺酸(MES)、3-吗啉丙磺酸(MOPS)、3-吗啉-2-羟基丙磺酸(MOPSO)、哌嗪-1,4-二(2-乙磺酸)(PIPES)、哌嗪-1,4-二(2-羟基-丙磺酸)(POPSO)、N-[三(羟甲基)甲基]-3-氨基丙磺酸(TAPS)、N-[三(羟甲基)甲基]-3-氨基-2-羟基丙磺酸(TAPSO)、N-[三(羟甲基)甲基]-2-氨基乙磺酸(TES)、N-[三(羟甲基)甲基]甘氨酸(Tricine)、三羟甲基氨基甲烷(Tris)和琥珀酸。
3)非离子表面活性剂；聚丙二醇(PPG)、聚乙二醇十六烷基醚(Brij)、曲通X-100、吐温、FSN含氟表面活性剂、6112表面活性剂、聚乙二醇(PEG)。
4)防腐剂；糖、山梨酸、苯甲酸、丙酸钙、亚硝酸钠、叠氮化钠、亚硫酸盐、乙二胺四乙酸二钠和抗氧化剂。
5)阴离子表面活性剂：十二烷基硫酸钠(SDS)、聚苯乙烯磺酸盐(PSS)、直链烷基苯磺酸盐(LAS)、仲醇磺酸盐、醇烯基磺酸盐、醇硫酸盐。
制备干试剂的方法(图3)
混合指定的化学成分，通过0.45μm醋酸纤维素滤片过滤。利用移液管或分液器将滤得的混合物分配到适当的样品槽中。所述样品槽可以是埃彭道夫管、96孔板、商用比色皿、或任何其他相当的试剂容器。例如，所述样品槽也可以是如图4所示的比色皿盒(102)。将所述样品槽***冻干机，在特定程序下被冻干，所述特定程序包括冷冻、退火、冷冻、初步干燥和二次干燥。所述冻干步骤可以在低含水量条件下进行，以避免与水分的接触。
使用其他试剂容器可能需要优化初步干燥时间(例如，延长持续时间)。
在下表中，给出了冻干程序和参数范围的例子。特别是，这些条件可以适用于如图4所示的比色皿盒。
冻干步骤 温度[℃] 时长[小时] 真空[毫托]
冷冻 -20至-80 0.5-5 N/A
退火 -10至-30 1-5 N/A
冷冻 -20至-80 0.5-5 N/A
初步干燥 -10至-30 5-50 50-300
二次干燥 0至60 1-20 50-300
包装
干燥后的试剂应当储存在阴暗、干燥的条件下，以避免暴露于光、水分和氧气下。干燥后的试剂可以包装在防潮袋中，并且在手套箱中(即在惰性气氛下)被真空密封。如果有必要，可将干燥剂或抗氧化剂置于所述包装中。
比色皿盒、进样装置和检测方法
比色皿盒***和进样装置可以与干试剂一起使用(如图4-图7所示)。所述盒的宽度可以根据每种分析物的路径长度计算。当检测多种分析物时，每个比色皿盒(102)中的体积可以是相同的。例如，所述体积可以是0.5mL-5mL，优选1mL。例如，如果所述体积是1mL，那么所述比色皿的宽度可以是5mm(对于白蛋白检测)，和2mm(对于肌酐检测)。所述比色皿盒(102)可以由透明材料制成，例如聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、聚碳酸酯(PC)、环烯烃共聚物(COC)。为了阻挡杂散光，其颜色可以是黑色。
利用分液器(如Musashi分液器)将液体试剂分配到比色皿盒(102)中，再利用冻干机(VirTis AdVantage Plus冻干机)冻干。例如，利用上述制备和储存干试剂的方法。可以理解的是，所述试剂可以以“湿”的状态使用，也就是说，没有冻干。将所述比色皿盒(102)转移至比色皿支架(100；图4)。
如图4所示，所述比色皿支架(100)可容纳4个比色皿盒(102)。例如，将4个比色皿设置成2行，所述2行被光阻隔结构(101)分隔开。2个比色皿盒(102)可以用于一种分析物，而另外2个比色皿盒可用于另一种分析物。如图7所示，可以将两个光学模块(700)设置到所述比色皿支架(100)的每一侧。可以理解的是，所述比色皿支架(100)还用于保持所述比色皿(102)和所述光模块(700)之间的间距，从而在样品测量中保持一定的路径长度。
将从对象采集的尿液收集到收集杯中，吸入到注射器，通过样品槽盖(502)的进样口(500)送样至样品槽中(501；图5)。通过进样孔(600；图6)将尿液分配到每个比色皿(102)中。尿液和干试剂在所述比色皿盒中通过振荡、磁力搅拌、振动、超声或任何其他等效的方法进行混合。使用一个或多个光学模块(700；图7)进行光学测量。如图8所示，测量每个比色皿的吸光度值，并且，如果有必要，计算样品和参比样品之间的差别。通过使用预先制作的校准曲线，计算分析物浓度，然后计算出白蛋白与肌酐的比。
图9-图11示出了基于合成标准物(例如，合成尿液基质)的尿微量白蛋白检测的校准曲线。这些白蛋白标准物是利用人工或混合的尿液和一定浓度的白蛋白制备的。图9A和图10A使用的是取样试剂，图9B和图10B使用的是参比试剂。图9C、图10C和图11示出了校准曲线，所述校准曲线来自于，当与所述标准物接触时，所述取样试剂和所述参比试剂之间的差异。表1示出了pH变化时图9中的标准化前的结果，而表2示出了使用下列公式(1)进行标准化后得到的结果。表3示出了图10中标准化前的结果，而图4提供了用于补偿温度影响的标准化后的数据。
表1
表2
表3
[白蛋白] 25℃ 28℃ 31℃ 34℃
0 -2.20 6.83 17.56 36.10
20 18.78 27.32 37.32 55.61
50 48.78 58.29 67.80 85.85
100 103.90 110.98 120.00 137.07
200 198.29 204.63 213.17 229.51
表4
[白蛋白] 25℃ 28℃ 31℃ 34℃
0 -1.05 -1.05 1.77 5.36
20 19.46 17.41 19.72 19.46
50 46.64 47.41 49.72 53.31
100 106.38 102.54 104.33 106.64
200 198.18 195.36 196.13 197.15
As-AR＝A*CAlb+B (1)
其中As指的是取样试剂，AR指的是参比试剂，CAlb指的是白蛋白的浓度，A和B是常数。虽然已经发现所得的校准曲线对于含有中至高水平(即30mg/L-300mg/L)白蛋白的对象是准确的，但是还发现对于低水平(例如，0mg/L-30mg/L)白蛋白所得到的结果可能显著不同。这些结果在图12和表5中示出(即，无添加的尿液样品应当具有约0mg/L的平均浓度)。并且认为这种不准确性是由尿液基质的副作用所引起，从而导致在较低浓度时有很大的变化。
表5
为了提高对真实人体样品在低白蛋白浓度时检测的准确性，有必要进行进一步处理，如下所述：
原始校准曲线：As-AR＝A*CAlb+B
对于空白样品(正常尿液；0mg/L白蛋白)：
对于有添加的样品：
如果用空白样品对有添加的样品的结果进行标准化(即公式(3)减去公式(2))，得到公式(4)。
假设即，对于空白样品和有添加的样品，所述参比试剂的吸光度相同，那么公式(4)可以改写为公式(5)：
虽然可以测得和而是未知的。然而，发现和紧密相关，这抵消了在不同的真实尿液样品中的尿液基质的影响，如图13和公式(6)所示。
将公式(6)代入公式(5)，利用公式(7)可以得到用于白蛋白检测的新校准曲线(其中，C°Alb取0mg/L)。
图14中的标准化后的校准曲线在所述浓度范围内更准确，尤其当白蛋白浓度低时。如表6所示。
表6
如图16所示，上述的校准过程可以作为由标准的计算机***，如基于Intel IA-32的个人电脑***，执行的一种或多种软件模块实现。然而，对本领域的技术人员显而易见的是，可替换地，至少部分所述校准过程可以部分或全部以一种或多种专用硬件组件的形式实现，例如应用型专用集成电路(ASICs)和/或现场可编程门阵列(FPGAs)。
如图16所示，校准过程通过***1600执行，所述***1600用于生成在定量测定尿液样品中的白蛋白浓度时使用的校准曲线，如上所述，所述校准过程作为存储在与标准的计算机***有关的非挥发性存储器1602(例如，硬盘、固态驱动器或闪存)上的一种或多种软件组件1630实现。所述***1600包括标准的计算机组件，所述标准的计算机组件包括随机存取存储器(RAM)1604，至少一个处理器1606，外部接口1608、1610、1612，所有组件由总线1614互连。
所述外部接口包括：通用串行总线(USB)接口1608，其中至少一个USB接口与键盘1616和定点装置，例如鼠标1618连接；网络接口连接器(NIC)1610，可以将***1600连接到通信网络，如互联网；和显示适配器1612，与显示装置，如LCD面板显示器1620连接。所述***100还包括多个标准软件组件，所述标准软件组件包括Linux或微软视窗软件等操作***1628，和Matlab或R等统计软件包1629。
所述***1600在非挥发性储存器1602上储存吸光度数据1640，所述吸光度数据包括表示无白蛋白样品和参比样品吸光度和的第一吸光度数据，和表示有添加的样品和参比样品吸光度和的第二吸光度数据。举例说明，所述吸光度数据1640可以从之前的实验中得到，或者可以从对无白蛋白样品和有添加的样品进行的吸光度测量中实时获得，所述吸光度测量利用光学模块700进行并且通过NIC1610与***1600通信。
所述软件组件1630可以包含第一拟合组件，所述第一拟合组件，利用统计软件包1629等，计算机拟合无白蛋白样品吸光度和无蛋白参比吸光度间的以公式(6)表示的函数关系，得到调整参数a和b。组件1630的吸光度调整组件可以利用所述调整参数调整所述参比吸光度，进而获得调整后的参比吸光度组件1630的第二拟合组件，可以再次使用统计软件包1629，计算机似合所述样品吸光度、调整后的参比吸光度和已知(有添加)的浓度之间以公式(7)表示的函数关系，获得校准曲线的参数a、b和A。因此，当需要计算检测样品的白蛋白浓度CAlb时，测得的样品的吸光度AS和AR已给出，可根据AS-(a*AR+b)＝A*CAlb利用由***1600的校准软件组件1630获得的校准参数a、b和A计算出CAlb。
图15示出了用于肌酐检测的校准曲线。测量DNBA/肌酐反应的动力学，通过绘制反应变化率-肌酐浓度的曲线得到肌酐校准曲线。用人工或混合尿液和一定浓度的肌酐制得肌酐标准物。
肌酐检测需要5分钟至10分钟，尿微量白蛋白检测需要约5分钟。
对于肌酐检测，可以理解的是，动力学测量可以从将样品加入到肌酐检测制剂时开始，或者可以在所述动力学测量开始前延迟所述测量(例如，5秒、10秒、30秒、1分钟、2分钟或5分钟)。因此，实际进行测量的检测时间窗口可以从1分钟至10分钟。在所述肌酐检测中的动力学测量期间获取数据的时间间隔可以从0.1秒至15秒(例如，5秒)。
为了获得ACR值，从取样开始的总检测时间可以少于10分钟，这是种快速测量方法。
干试剂检测***的优点
通过添加尿液样品，所述干试剂非常容易再造(reconstituted)。
所述试剂便于进行一步法检测方案，可以显著改善用户友好性。
如前所述，所述制剂防止在加入尿液样品再造(reconstitution)所述干试剂时，生成粘附于比色皿壁表面上的气泡，从而使直接光学测量成为可能。也就是说，在此公开的制剂便于快速光学测量，并且无需除去溶液中的气泡(即使这是可能的)；除去尿液中再造的制剂产生的气泡，还可以使吸光度测量的精确度更大，因为这可以减少光散射。
与湿试剂相比，如果提供的是干试剂形式，在此所述的制剂更易于储存和运输。
可实施的变形及替换例
如上所述的采用缓冲液加入方法和/或蛋白变性方法的尿液分析***，也可以应用到除肌酐或白蛋白以外的尿液成分。这样的分析物的例子包括但不限于水、离子(例如钠、钾、氯化物、磷酸、磷、硫、溴化物、氟化物、碘化物、钙、镁、铁、铅、汞等)、蛋白质(例如结合珠蛋白、转铁蛋白、免疫球蛋白、乳酸脱氢酶、γ-谷氨酰转移酶、α-淀粉酶、尿胃蛋白酶原、溶菌酶、尿激酶等)、糖类(例如葡萄糖、苯丙酮酸盐、***糖、木糖、核糖、岩藻糖、鼠李糖、戊酮糖、半乳糖、甘露糖、果糖、乳糖、蔗糖、岩藻糖基葡萄糖、棉子糖等)、氨基酸类(例如丙氨酸、肌肽、甘氨酸、组氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸、酪氨酸、缬氨酸、羟脯氨酸、半乳糖基羟赖氨酸、木糖基丝氨酸等)、激素类(例如肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺、5-羟色胺、人绒毛膜***、早孕因子、***、***、促肾上腺皮质激素、泌乳素、催产素、加压素、甲状腺素、儿茶酚胺(肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺)、胰岛素、***、糖皮质激素(醛固酮、肾上腺酮、皮质酮)、睾酮、孕酮、***等)、维生素(例如维生素B1、维生素B2、维生素B6、4-吡哆酸、烟酸、维生素B2、生物喋呤、维生素C等)、药物或其他生物活性物质(例如咖啡因、***等)、代谢废物(例如尿素、尿酸、肌酸、胆碱、哌啶、胆红素、尿囊素等)、酮类、叶酸等。
尿液分析可用于分析pH范围为5-8的人体尿液。大多数人的尿液的pH在这个范围内，但有一些可以在所述范围以外。
检测温度可以是15℃-40℃。
干试剂可以包装在防潮袋中，在室温下可以储存至少一年。
干试剂***包括用于参比样品的试剂，用以减弱pH、温度影响和干扰。对于肌酐、白蛋白或其他目标物检测，将具有缓冲作用的化学物质加入到用于参比样品的试剂中是有效的。尤其对于白蛋白检测，利用表面活性剂使参比样品中的白蛋白变性，对于测量参比样品是非常有效的。
也可使用湿试剂替代干试剂。在这种情况下，用于测量肌酐的湿试剂不需要增容剂，并且用于测量尿微量白蛋白的湿试剂不需要如下表7和表8所示的非离子表面活性剂2。
表7
表8
此外，尿微量白蛋白/肌酐检测可以分开进行。也就是说，可以单独进行尿微量白蛋白检测或者也可以单独进行肌酐检测。

Claims (76)

1.一种定量测定样品中至少一种第一分析物的浓度的方法，所述方法包括以下步骤:
(a)将一部分样品加入到含有第一分析物络合剂的第一分析物检测制剂中，生成第一分析物样品；
(b)将一部分样品加入到分析物检测参比制剂中，生成分析物参比样品，所述分析物检测参比制剂除了与所述第一分析物检测制剂相同外，还包含使分析物变性或阻止分析物和所述第一分析物络合剂生成络合物的试剂；
(c)通过测量第一分析物样品和分析物参比样品的吸收光谱，计算第一分析物样品和分析物参比样品的吸收光谱之间的差异，并比较所得的差异光谱和分析物浓度的第一预定校准曲线，测定样品中所述至少一种第一分析物的浓度；
其中，所述至少一种第一分析物是白蛋白。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括测定所述样品中至少一种第二分析物的浓度，所述方法包括以下步骤:
(a)将一部分样品加入到含有第二分析物络合剂的第二分析物检测制剂中，生成第二分析物样品；和
(b)通过测量一段时间内所述第二分析物样品中的分析物的吸收光谱，计算在所述时间内第二分析物样品的吸光度的变化率，并比较所得的变化率和分析物浓度的第二预定校准曲线，测定所述样品中至少一种第二分析物的浓度。
3.根据权利要求1所述的方法，其中至少一种第一分析物是白蛋白，所述方法包括以下步骤：
将一部分样品加入到以下每个中：
(A)包含白蛋白络合剂的白蛋白检测样品制剂，生成白蛋白样品；和
(B)白蛋白检测参比制剂，用于生成白蛋白参比样品，所述白蛋白检测参比制剂除了与所述白蛋白检测制剂相同外，还包含阴离子表面活性剂，和
通过测量白蛋白样品和白蛋白参比样品的吸收光谱，计算白蛋白样品和白蛋白参比样品的吸收光谱之间的差异，并比较所得的差异光谱和白蛋白浓度的预定校准曲线，测定样品中的白蛋白浓度。
4.根据权利要求2所述的方法，其中所述至少一种第二分析物是肌酐，且所述方法包括步骤：将一部分样品加入到含有肌酐络合剂的肌酐检测样品制剂中，生成肌酐样品，通过测量一段时间内的所述肌酐样品的吸收光谱变化，计算所述时间内的所述肌酐样品的吸光度的变化率，并比较所得的变化率与肌酐浓度的预定校准曲线，测定样品中的肌酐浓度。
5.根据权利要求2所述的方法，其中所述至少一种第一分析物是白蛋白，所述至少一种第二分析物是肌酐，所述方法包括以下步骤：
a)根据权利要求2或权利要求4所述的方法，测定样品中的肌酐浓度；和
b)根据权利要求1或权利要求3所述的方法，测定样品中的白蛋白浓度；和
还进一步包括，测定样品中的白蛋白/肌酐比的步骤。
6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述制剂中的一种或多种是冻干的。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所有所述制剂是冻干的和/或所述样品是尿液样品。
8.根据权利要求3所述的方法，其中所述测定白蛋白浓度的步骤需要测量所述白蛋白样品和所述白蛋白参比样品在625nm处的吸收光谱。
9.根据权利要求3所述的方法，其中所述测定白蛋白浓度的步骤需要在5分钟时测量所述吸收光谱。
10.根据权利要求4所述的方法，其中所述测定肌酐浓度的步骤需要测量所述肌酐样品在525nm处的吸光度的变化率。
11.根据权利要求2所述的方法，其中所述检测时间窗口是1分钟至10分钟。
12.根据权利要求11所述的方法，其中从将所述样品加入到所述第二分析物检测制剂开始，于30s时开始动力学测量，于10分钟时结束。
13.根据权利要求11所述的方法，其中从将所述样品加入到所述第二分析物检测制剂开始，于1分钟时开始动力学测量，于5分钟-10分钟之间的某一时刻结束。
14.根据权利要求5所述的方法，其中所述方法包括同时测定肌酐浓度和白蛋白浓度。
15.根据权利要求3所述的方法，其中所述白蛋白检测制剂是一种水溶液，包含：
一种浓度0.1g/L-1.5g/L的化合物，所述化合物与白蛋白发生反应，生成白蛋白络合物；
一种浓度10g/L-50g/L的强碱；
一种浓度50g/L-250g/L的缓冲液；
一种浓度1g/L-20g/L的第一非离子表面活性剂；和
一种浓度0.1g/L-3g/L的防腐剂。
16.根据权利要求3所述的方法，其中所述白蛋白检测参比制剂与权利要求15所述的白蛋白检测样品制剂相同，但还包含阴离子表面活性剂。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述阴离子表面活性剂在所述制剂中的含量为0.1重量％-5重量％。
18.根据权利要求15所述的方法，其中与白蛋白反应生成白蛋白络合物的所述化合物是溴甲酚绿。
19.根据权利要求15所述的方法，其中所述白蛋白检测样品制剂和所述白蛋白检测参比制剂是冻干的。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述白蛋白检测样品制剂和所述白蛋白检测参比制剂还包含浓度10g/L-200g/L的第二非离子表面活性剂。
21.根据权利要求1所述的方法，其中所述白蛋白浓度的预定校准曲线通过计算机实施方法而得到，所述计算机实施方法生成用于定量测定尿液样品中的白蛋白浓度的校准曲线，所述方法包括以下步骤：
获得第一吸光度数据，所述第一吸光度数据表示多个无白蛋白尿液样品的无白蛋白样品吸光度和无白蛋白参比吸光度；其中所述无白蛋白样品吸光度包括当白蛋白络合剂存在时，所述无白蛋白尿液样品的各个第一组分的吸光度；所述无白蛋白参比吸光度包括当白蛋白络合剂存在时以及当白蛋白变性剂或阻止白蛋白和所述白蛋白络合剂生成络合物的试剂存在时，所述无白蛋白尿液样品的各个第二组分的吸光度；
计算机拟合所述无白蛋白样品吸光度和无白蛋白参比吸光度间的函数关系，得到调整参数；
获得第二吸光度数据，所述第二吸光度数据表示多个具有已知白蛋白浓度的尿液样品的样品吸光度和参比吸光度；其中所述样品吸光度包括当白蛋白络合剂存在时，所述尿液样品的各个第一组分的吸光度；所述参比吸光度包括当白蛋白络合剂存在时以及当白蛋白变性剂或阻止白蛋白和所述白蛋白络合剂生成络合物的试剂存在时，所述尿液样品的各个第二组分的吸光度；
使用所述调整参数调整所述参比吸光度，从而获得调整后的参比吸光度；和
计算机拟合所述样品吸光度、所述调整后的参比吸光度和所述已知浓度之间的函数关系，获得校准曲线的参数。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述无白蛋白样品吸光度和所述无白蛋白参比吸光度间的函数关系式为其中是所述无白蛋白样品吸光度，是所述无白蛋白参比吸光度，a和b是所述调整参数。
23.根据权利要求22所述的方法，其中根据计算调整后的参比吸光度，其中是所述参比吸光度。
24.根据权利要求23所述的方法，其中所述样品吸光度、所述调整后的参比吸光度和所述已知浓度之间的函数关系式为其中是所述样品吸光度，是所述已知浓度，a、b和A是所述校准曲线的参数。
25.根据权利要求4所述的方法，其中所述肌酐样品检测制剂是一种水溶液，包含：
一种化合物，所述化合物与肌酐发生反应，生成肌酐络合物；
一种浓度40g/L-80g/L的强碱；
一种浓度50g/L-250g/L的缓冲液；和
至少一种浓度0.1g/L-20g/L的表面活性剂。
26.根据权利要求25所述的方法，其中与肌酐反应生成肌酐络合物的所述化合物是二硝基苯甲酸或苦味酸。
27.根据权利要求26所述的方法，其中与肌酐反应生成肌酐络合物的所述化合物是二硝基苯甲酸。
28.根据权利要求25所述的方法，其中与肌酐反应生成肌酐络合物的所述化合物的浓度是1g/L-5g/L。
29.根据权利要求25所述的方法，其中所述肌酐检测样品制剂的所述至少一种表面活性剂还包含浓度0.1g/L-10g/L的阴离子表面活性剂和浓度0.1g/L-10g/L的阳离子表面活性剂。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述阳离子表面活性剂:所述阴离子表面活性剂的比是1:5。
31.根据权利要求25所述的方法，其中所述肌酐检测样品制剂是冻干的。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述肌酐检测样品制剂还包含增容剂，所述增容剂在所述制剂中的含量是1重量％-40重量％。
33.根据权利要求25所述的方法，其中在所述肌酐检测样品制剂中，所述缓冲液:强碱的摩尔浓度比是0.5:1-2.5:1。
34.根据权利要求33所述的方法，其中所述缓冲液:强碱的摩尔浓度比是1:1-1.5:5。
35.根据权利要求33所述的方法，其中所述缓冲液:强碱的摩尔浓度比是1.25:1。
36.一种用于分析样品中肌酐浓度的制剂，包含：
一种浓度40g/L-80g/L的强碱；
一种浓度50g/L-250g/L的缓冲液；
至少一种浓度0.1g/L-20g/L的表面活性剂；
和水；
其中所述至少一种表面活性剂包含浓度0.1g/L-10g/L的阴离子表面活性剂和浓度0.1g/L-10g/L的阳离子表面活性剂，并且所述阳离子表面活性剂含有季铵基团。
37.根据权利要求36所述的制剂，其中所述阳离子表面活性剂:所述阴离子表面活性剂的比是1:2-1:10。
38.根据权利要求36所述的制剂，其中所述阳离子表面活性剂:所述阴离子表面活性剂的比是1:3-1:7。
39.根据权利要求36所述的制剂，其中所述阳离子表面活性剂:所述阴离子表面活性剂的比是1:5。
40.根据权利要求36所述的制剂，其中所述制剂还包含一种化合物，所述化合物与肌酐反应生成肌酐络合物。
41.根据权利要求40所述的制剂，其中与肌酐反应生成肌酐络合物的所述化合物是二硝基苯甲酸或苦味酸。
42.根据权利要求41所述的制剂，其中与肌酐反应生成肌酐络合物的所述化合物是二硝基苯甲酸。
43.根据权利要求40-42中任一项所述的制剂，其中与肌酐反应生成肌酐络合物的所述化合物的浓度是1g/L-5g/L。
44.根据权利要求36所述的制剂，其中所述至少一种表面活性剂包含浓度0.1g/L-10g/L的阴离子表面活性剂和浓度0.1g/L-10g/L的阳离子表面活性剂，其中所述阳离子表面活性剂:所述阴离子表面活性剂的比是1:5。
45.根据权利要求36所述的制剂，其中：
(a)当所述至少一种表面活性剂包含阳离子表面活性剂时，所述阳离子表面活性剂选自由十六烷基氯化吡啶、苯扎氯铵、苄索氯铵、二甲基双十八烷基氯化铵、西曲溴铵、双十八烷基二甲基溴化铵和十六烷基三甲基溴化铵组成的组中的一种或多种；和/或
(b)当所述至少一种表面活性剂包含阴离子表面活性剂时，所述阴离子表面活性剂选自由十二烷基硫酸钠、聚苯乙烯磺酸盐、直链烷基苯磺酸盐、仲醇磺酸盐、醇烯基磺酸盐、醇硫酸盐组成的组中的一种或多种；和/或
(c)所述缓冲液选自由磷酸氢二钾、磷酸氢二钠和硼酸盐组成的组中的一种或多种；
(d)所述强碱是氢氧化钠和/或氢氧化钾。
46.根据权利要求36所述的制剂，其中所述制剂是冻干的。
47.根据权利要求46所述的制剂，其中所述制剂还包含增容剂，所述增容剂在所述制剂中的含量是1重量％-40重量％。
48.根据权利要求47所述的制剂，其中所述增容剂选自由糖-甘露醇、乳糖和海藻糖组成的组中的一种或多种。
49.根据权利要求36所述的制剂，其中在所述制剂中，所述缓冲液:强碱的浓度比是0.5:1-2.5:1。
50.根据权利要求49所述的制剂，其中在所述制剂中，所述缓冲液:强碱的浓度比是1:1-1.5:5。
51.根据权利要求49所述的制剂，其中在所述制剂中，所述缓冲液:强碱的浓度比是1.25:1。
52.一种用于分析尿液样品中白蛋白浓度的制剂，包含：
一种浓度0.1g/L-1.5g/L的化合物，所述化合物与白蛋白发生反应，生成白蛋白络合物；
一种浓度10g/L-50g/L的强碱；
一种浓度50g/L-250g/L的缓冲液；
一种浓度1g/L-20g/L的第一非离子表面活性剂；
一种浓度0.1g/L-3g/L的防腐剂；和
水。
53.根据权利要求52所述的制剂，其中所述制剂还包含阴离子表面活性剂。
54.根据权利要求53所述的制剂，其中所述阴离子表面活性剂在所述制剂中的含量为0.1重量％-5重量％。
55.根据权利要求53或54所述的制剂，其中所述阴离子表面活性剂选自由十二烷基硫酸钠、聚苯乙烯磺酸盐、直链烷基苯磺酸盐、仲醇磺酸盐、醇烯基磺酸盐和醇硫酸盐组成的组中的一种或多种。
56.根据权利要求52所述的制剂，其中与白蛋白反应生成白蛋白络合物的所述化合物是溴甲酚绿。
57.根据权利要求52所述的制剂，其中：
(a)所述缓冲液选自由N-(1-乙酰胺基)-2-氨基乙磺酸、醋酸钠、N-(2-乙酰胺基)亚氨基二乙酸、2-氨基-2-甲基-1-丙醇、2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇、N-(1,1-二甲基-2-羟乙基)-3-氨基-2-羟基丙磺酸、N,N-二(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸、碳酸氢钠、N,N-二(2-羟乙基)-甘氨酸、二(2-羟乙基)亚氨基三(羟甲基)甲烷、1,3-二[三(羟甲基)甲氨基]丙烷、3-(环己胺)-1-丙磺酸、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸、2-(N-环己胺)乙磺酸、柠檬酸三钠、N,N-二(2-羟乙基)-3-氨基-2-羟基丙磺酸、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙磺酸、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-丙磺酸、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-(2-羟基)丙磺酸、2-吗啉乙磺酸、3-吗啉丙磺酸、3-吗啉-2-羟基丙磺酸、哌嗪-1,4-二(2-乙磺酸)、哌嗪-1,4-二(2-羟基丙磺酸)、N-[三(羟甲基)甲基]-3-氨基丙磺酸、N-[三(羟甲基)甲基]-3-氨基-2-羟基丙磺酸、N-[三(羟甲基)甲基]-2-氨基乙磺酸、N-[三(羟甲基)甲基]甘氨酸、三羟甲基氨基甲烷和琥珀酸组成的组中的一种或多种；和/或
(b)所述第一非离子表面活性剂选自由聚氧乙烯脂肪醇醚、聚丙二醇、聚乙二醇十六烷基醚、曲通X-100、吐温、ZonylTM FSN含氟表面活性剂、ALKANOLTM 6112表面活性剂、聚乙二醇组成的组中的一种或多种；和/或
(c)所述防腐剂选自由糖、山梨酸、苯甲酸、丙酸钙、亚硝酸钠、叠氮化钠、亚硫酸盐、乙二胺四乙酸二钠和抗氧化剂组成的组中的一种或多种，和/或
(d)所述强碱是氢氧化钠和/或氢氧化钾。
58.根据权利要求57所述的制剂，其中所述第一非离子表面活性剂是聚氧乙烯脂肪醇醚。
59.根据权利要求52所述的制剂，其中所述制剂是冻干的。
60.根据权利要求59所述的制剂，其中所述制剂还包含第二非离子表面活性剂，所述第二非离子表面活性剂在所述制剂中的含量为10g/L-200g/L。
61.根据权利要求60所述的制剂，其中所述第二非离子表面活性剂选自由聚氧乙烯脂肪醇醚、聚丙二醇、聚乙二醇十六烷基醚、曲通X-100、吐温、ZonylTM FSN含氟表面活性剂、ALKANOLTM 6112表面活性剂、聚乙二醇组成的组中的一种或多种，但所述第一非离子表面活性剂和所述第二非离子表面活性剂互不相同。
62.根据权利要求61所述的制剂，其中所述第二非离子表面活性剂是聚乙二醇。
63.一种制备如权利要求46-51中任一项所述的用于分析样品中肌酐浓度的冻干制剂的方法，或如权利要求59-62中任一项所述的用于分析样品中白蛋白浓度的冻干制剂的方法，包括以下步骤：
(a)将如权利要求46-51中任一项所述的用于分析样品中肌酐浓度的冻干制剂的化学成分，或如权利要求59-62中任一项所述的用于分析样品中白蛋白浓度的冻干制剂的化学成分混合在一起，过滤所得的混合物，将所述混合物分配到容器中，将所述容器***到冻干装置中；
(b)将所述样品在-20℃至-80℃的温度下冷冻0.5h至5h；
(c)将所述样品在-10℃至-30℃的温度下退火1h至5h；
(d)将所述样品在-20℃至-80℃的温度下再次冷冻0.5h至5h；
(e)在-10℃至-30℃的温度下进行第一干燥循环5h至50h；
(f)在0℃至60℃的温度下进行第二干燥循环1h至20h。
64.根据权利要求63所述的方法，其中所述容器选自由埃彭道夫管、96孔板、商用比色皿或适于与含有接触式图像传感器模块的装置一起使用的比色皿组成的组。
65.根据权利要求63或64所述的方法，其中所述方法进一步包括将保存有所述冻干制剂的容器远离光、氧气和水分储存。
66.一种试剂盒，包括：
(a)根据权利要求36-51中任一项所述的制剂得到的肌酐检测制剂；和/或
(b)根据权利要求52和权利要求56-62中任一项所述的制剂得到的白蛋白检测制剂；和
根据权利要求53-62中任一项所述的制剂得到的白蛋白参比制剂。
67.根据权利要求66所述的试剂盒，其中每份冻干制剂分别装在埃彭道夫管、比色皿、适于与含有接触式图像传感器模块的装置一起使用的比色皿、或96孔板的单独孔中。
68.根据权利要求66或67所述的试剂盒，其中所述制剂远离光、氧气和水分储存。
69.一种生成用于定量测定尿液样品中的白蛋白浓度的校准曲线的方法，所述方法包括以下步骤：
获得第一吸光度数据，所述第一吸光度数据表示多个无白蛋白尿液样品的无白蛋白样品吸光度和无白蛋白参比吸光度；其中所述无白蛋白样品吸光度包括当白蛋白络合剂存在时，所述无白蛋白尿液样品的各个第一组分的吸光度；所述无白蛋白参比吸光度包括当白蛋白络合剂存在时以及当白蛋白变性剂或阻止白蛋白和所述白蛋白络合剂生成络合物的试剂存在时，所述无白蛋白尿液样品的各个第二组分的吸光度；
计算机拟合所述无白蛋白样品吸光度和无白蛋白参比吸光度间的函数关系，得到调整参数；
获得第二吸光度数据，所述第二吸光度数据表示多个具有已知白蛋白浓度的尿液样品的样品吸光度和参比吸光度；其中所述样品吸光度包括当白蛋白络合剂存在时，所述尿液样品的各个第一组分的吸光度；所述参比吸光度包括当白蛋白络合剂存在时以及当白蛋白变性剂或阻止白蛋白和所述白蛋白络合剂生成络合物的试剂存在时，所述尿液样品的各个第二组分的吸光度；
使用所述调整参数调整所述参比吸光度，从而获得调整后的参比吸光度；和
计算机拟合所述样品吸光度、所述调整后的参比吸光度所述已知浓度之间的函数关系，获得校准曲线的参数。
70.根据权利要求69所述的方法，其中所述无白蛋白样品吸光度和所述无白蛋白参比吸光度间的函数关系式为其中是所述无白蛋白样品吸光度，是所述无白蛋白参比吸光度，a和b是所述调整参数。
71.根据权利要求70所述的方法，其中根据计算所述调整后的参比吸光度，其中是所述参比吸光度。
72.根据权利要求71所述的方法，其中所述样品吸光度、所述调整后的参比吸光度和所述已知浓度之间的函数关系式为其中是所述样品吸光度，是已知浓度，a、b和A是所述校准曲线的参数。
73.一种***，生成用于定量测定尿液样品中的白蛋白浓度的校准曲线，所述***包括：
存储器，所述存储器用于储存第一吸光度数据，所述第一吸光度数据表示多个无白蛋白尿液样品的无白蛋白样品吸光度和无白蛋白参比吸光度；其中所述无白蛋白样品吸光度包括当白蛋白络合剂存在时，所述无白蛋白尿液样品的各个第一组分的吸光度；所述无白蛋白参比吸光度包括当白蛋白络合剂存在时以及当白蛋白变性剂或阻止白蛋白和所述白蛋白络合剂生成络合物的试剂存在时，所述无白蛋白尿液样品的各个第二组分的吸光度；
所述存储器还储存第二吸光度数据，所述第二吸光度数据表示多个具有已知白蛋白浓度的尿液样品的样品吸光度和参比吸光度；其中所述样品吸光度包括当白蛋白络合剂存在时，所述尿液样品的各个第一组分的吸光度；所述参比吸光度包括当白蛋白络合剂存在时以及当白蛋白变性剂或阻止白蛋白和所述白蛋白络合剂间生成络合物的试剂存在时，所述尿液样品的各个第二组分的吸光度；
第一拟合组件，用于计算机拟合所述无白蛋白样品吸光度和无白蛋白参比吸光度间的函数关系，得到调整参数；
吸光度调整组件，利用所述调整参数调整所述参比吸光度，从而获得调整后的参比吸光度；和
第二拟合组件，用于计算机拟合所述样品吸光度、所述调整后的参比吸光度和所述已知浓度之间的函数关系，获得所述校准曲线的参数。
74.根据权利要求73所述的***，其中所述无白蛋白样品吸光度和所述无白蛋白参比吸光度间的函数关系式为其中是所述无白蛋白样品吸光度，是所述无白蛋白参比吸光度，a和b是所述调整参数。
75.根据权利要求74所述的***，其中所述的吸光度调整组件，用于根据计算调整后的参比吸光度，其中是所述参比吸光度。
76.根据权利要求75所述的***，其中所述样品吸光度、所述调整后的参比吸光度和所述已知浓度之间的函数关系式为其中是所述样品吸光度，是所述已知浓度，a、b和A是所述校准曲线的参数。
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