CN106198985B - 用于检测去势抵抗性***癌的elisa试剂盒及使用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于检测去势抵抗性***癌的ELISA试剂盒及使用方法，涉及免疫测定法。本发明所述试剂盒包括FGγ抗体，并通过双抗体夹心ELISA法检测血清中的FGγ含量，进一步判断患者是否已进展为去势抵抗性***癌。本发明有效的解决了现有技术中检测去势抵抗性***癌的产品或方法特异性差、准确性不高的问题。本发明试剂盒根据血清中FGγ的含量来诊断去势抵抗性***癌，具有较高的灵敏度和特异度。本发明试剂盒操作简单快速、合理可行，可提高去势抵抗性***癌的诊断效率，具有广阔的应用前景。

Description

用于检测去势抵抗性***癌的ELISA试剂盒及使用方法
技术领域
本发明涉及免疫测定法，具体是一种用于检测去势抵抗性***癌的ELISA试剂盒及使用方法。
背景技术
***癌是男性泌尿***最常见的恶性肿瘤，在欧美国家较为常见，是男性最常见的恶性肿瘤，占所有恶性肿瘤的第二位。我国是传统的***癌发病率较低的国家，但是近年来随着人民生活水平的提高，环境的改变，以及疾病筛查普及率的提高，我国的***癌发病率正在逐年上升。***癌已成为威胁我国男性健康的一种重要疾病，正在受到越来越多的关注和重视。
***癌最重要的治疗方式之一就是去势疗法，包括药物抗雄激素治疗以及手术去势治疗，以阻止雄激素结合到雄激素受体上的方式来抑制肿瘤的生长。在***癌早期，去势治疗有较好的效果，但是经过一段时间的治疗之后，***癌逐渐转变为雄激素非依赖性的，对去势治疗不再敏感，病情再度恶化，即去势抵抗性***癌（CRPC）阶段。去势抵抗性***癌的发病机制目前尚不清楚，也没有较好的治疗方法，是***癌基础与临床领域的难题。
目前对于去势抵抗性***癌的诊断并没有很好的方法，主要是依靠监测***特异性抗原和睾酮的变化，以及根据临床表现来综合判断，缺乏较好的特异性，不能准确地判断出去势抵抗性***癌。及早地发现去势抵抗性***癌，对后期治疗策略的制定和对***癌更加深入地从分子水平认识，有着非常重要的意义。
发明内容
本发明就是为了解决现有技术中检测去势抵抗性***癌的产品或方法特异性差、准确性不高的问题，所提出的一种用于检测去势抵抗性***癌的ELISA试剂盒及使用方法。
本发明是按照以下技术方案实现的。
一种用于检测去势抵抗性***癌的ELISA试剂盒，所述试剂盒包括FGγ抗体，以及双抗体夹心ELISA法所需的检测试剂。
一种用于检测去势抵抗性***癌的ELISA试剂盒，所述试剂盒包括包被FGγ抗体的ELISA 酶标板、标准品、标准品&样品稀释液、生物素标记的FGγ抗体、亲和素标记的辣根过氧化物酶、洗涤液、底物溶液、反应终止液、覆膜中的一种或几种。
检测样本为***癌患者的血清。
一种上述用于检测去势抵抗性***癌的ELISA试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
Ⅰ.采集***癌患者全血样品，离心取上清；
Ⅱ.分别设空白孔、标准孔、待测样品孔，空白孔加标准品&样品稀释液，余孔分别加标准品或待测样品，混匀；酶标板加覆膜，孵育；
Ⅲ.弃去孔内液体，甩干；每孔加入生物素标记的FGγ抗体，酶标板加覆膜，温育；
Ⅳ.弃去孔内液体，甩干，洗涤酶标板，再甩干；
Ⅴ.每孔加入亲和素标记的辣根过氧化物酶，酶标板加覆膜，温育；
Ⅵ. 弃去孔内液体，甩干，洗涤酶标板，再甩干；
Ⅶ.每孔加入底物溶液，酶标板加覆膜，避光孵育；
Ⅷ.每孔加入反应终止液；
Ⅸ. 450nm波长下测量各孔的OD值；
Ⅹ.根据标准品的OD值计算血清样本FGγ的检测值，并判断其与判定阈值的大小关系。
所述步骤Ⅰ中全血样品于室温放置0~4小时或0~8℃过夜后于500~1500×g离心10~30分钟。
所述步骤Ⅳ中洗涤酶标板1~5次，每次浸泡1-2分钟；步骤Ⅵ中洗涤酶标板3~7次，每次浸泡1-2分钟。
所述步骤Ⅳ中洗涤酶标板3次，每次浸泡1.5分钟；步骤Ⅵ中洗涤酶标板5次，每次浸泡1.5分钟。
所述判定阈值为19748.73mg/ml~ 24137.33mg/ml。
所述判定阈值为21943.03mg/ml。
本发明获得了以下有益效果。
本发明有效的解决了现有技术中检测去势抵抗性***癌的产品或方法特异性差、准确性不高的问题。本发明试剂盒根据血清中FGγ的含量来诊断去势抵抗性***癌，具有较高的灵敏度和特异度。本发明试剂盒操作简单快速、合理可行，可提高去势抵抗性***癌的诊断效率，具有广阔的应用前景。
附图说明
图1是本发明非去势抵抗性***癌和去势抵抗性***癌患者血清中FGγ检测值的统计学结果图；
图2是本发明以血清FGγ水平来诊断去势抵抗性***癌的ROC曲线图。
具体实施方式
下面结合附图及实施例对本发明做进一步的说明。
一种用于检测去势抵抗性***癌的ELISA试剂盒，所述试剂盒包括FGγ抗体，以及双抗体夹心ELISA法所需的检测试剂。
一种用于检测去势抵抗性***癌的ELISA试剂盒，所述试剂盒包括包被FGγ抗体的ELISA 酶标板、标准品、标准品&样品稀释液、生物素标记的FGγ抗体、亲和素标记的辣根过氧化物酶、洗涤液、底物溶液、反应终止液、覆膜中的一种或几种。
检测样本为***癌患者的血清。
一种上述用于检测去势抵抗性***癌的ELISA试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
Ⅰ.采集***癌患者血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。
实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。
包被FGγ抗体的ELISA 酶标板：包被抗体的浓度为1～100μg/ml，优选10μg/ml。
标准品：FGγ 1000ng，配制成以下浓度： 1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、0ng/mL。
标准品&样品稀释液：100ml PBS，加入BSA 2g，至终浓度2%
生物素标记的FGγ抗体：0～100μg/ml，优选10μg/ml。
亲和素标记的辣根过氧化物酶：0.0001～0.0005 mg/ml
洗涤液: 0.05%Tween-20 0.5ml加入PBS缓冲液1000ml中。
底物溶液：TMB(四甲基联苯胺)。
反应终止液：2M H2SO4。
Ⅱ.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。
Ⅲ. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素标记的FGγ抗体 100μL，酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。
Ⅳ. 弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。
Ⅴ. 每孔加亲和素标记的辣根过氧化物酶100μL，加上覆膜， 37℃温育 30 分钟。
Ⅵ. 弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤Ⅳ。
Ⅶ. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。
Ⅷ. 每孔加反应终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。
Ⅸ. 立即用酶标仪（SPECTRA max plus384）在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD值）。
Ⅹ. 根据标准品的OD值代入方程算出血清样本FGγ的检测值，并判断其与判定阈值的大小关系。
若FGγ检测值大于等于判定阈值时，则判断患者已进展为去势抵抗性***癌，若FGγ检测值小于判定阈值则判断患者未进展为去势抵抗性***癌。以血清中FGγ检测值为19748.73mg/ml~ 24137.33mg/ml、优选21943.03mg/ml为判定阈值。
实施例1
本实施例以FGγ检测值21943.03mg/ml为判断阈值，若FGγ检测值大于等于21943.03mg/ml时，则判断患者已进展为去势抵抗性***癌，若FGγ检测值小于21943.03mg/ml则判断患者未进展为去势抵抗性***癌。在本实施例的86例样本中，使用本发明试剂盒诊断去势抵抗性***癌的敏感性为69%，特异性为86.4%。
本实施例的血清样本的检查值绘制在图1中，两组比较P<0.05，差别具有统计学意义。
图2为FGγ作为去势抵抗性***癌诊断的ROC曲线，横坐标为1-特异度，纵坐标为灵敏度，AUC=0.808，其中ROC表示曲线下面积。从图中可以看出，灵敏度达到69%，特异度达到86.4%。
可见，采用本发明检测***癌患者血清中FGγ的含量，可快速准确地诊断去势抵抗性***癌，具有较高的灵敏度和特异度。

Claims (7)

1.FGγ抗体在制备用于检测去势抵抗性***癌的ELISA试剂盒中的用途，其特征在于：所述试剂盒包括FGγ抗体，采用双抗体夹心ELISA方法检测血清中FGγ的含量来检测去势抵抗性***癌，判定阈值为19748.73mg/ml~ 24137.33mg/ml。
2.根据权利要求1所述的FGγ抗体在制备用于检测去势抵抗性***癌的ELISA试剂盒中的用途，其特征在于：所述试剂盒包括包被FGγ抗体的ELISA 酶标板、标准品、标准品&样品稀释液、生物素标记的FGγ抗体、亲和素标记的辣根过氧化物酶、洗涤液、底物溶液、反应终止液、覆膜中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的FGγ抗体在制备用于检测去势抵抗性***癌的ELISA试剂盒中的用途，其特征在于：所述用于检测去势抵抗性***癌的ELISA试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
Ⅰ.采集***癌患者全血样品，离心取上清；
Ⅱ.分别设空白孔、标准孔、待测样品孔，空白孔加标准品&样品稀释液，余孔分别加标准品或待测样品，混匀；酶标板加覆膜，孵育；
Ⅲ.弃去孔内液体，甩干；每孔加入生物素标记的FGγ抗体，酶标板加覆膜，温育；
Ⅳ.弃去孔内液体，甩干，洗涤酶标板，再甩干；
Ⅴ.每孔加入亲和素标记的辣根过氧化物酶，酶标板加覆膜，温育；
Ⅵ. 弃去孔内液体，甩干，洗涤酶标板，再甩干；
Ⅶ.每孔加入底物溶液，酶标板加覆膜，避光孵育；
Ⅷ.每孔加入反应终止液；
Ⅸ. 450nm波长下测量各孔的OD值；
Ⅹ.根据标准品的OD值计算血清样本FGγ的检测值，并判断其与判定阈值的大小关系，所述判定阈值为19748.73mg/ml~ 24137.33mg/ml。
4.根据权利要求3所述的FGγ抗体在制备用于检测去势抵抗性***癌的ELISA试剂盒中的用途，其特征在于：所述步骤Ⅰ中全血样品于室温放置0~4小时或0~8℃过夜后于500~1500×g离心10~30分钟。
5.根据权利要求3所述的FGγ抗体在制备用于检测去势抵抗性***癌的ELISA试剂盒中的用途，其特征在于：所述步骤Ⅳ中洗涤酶标板1~5次，每次浸泡1-2分钟；步骤Ⅵ中洗涤酶标板3~7次，每次浸泡1-2分钟。
6.根据权利要求5所述的FGγ抗体在制备用于检测去势抵抗性***癌的ELISA试剂盒中的用途，其特征在于：所述步骤Ⅳ中洗涤酶标板3次，每次浸泡1.5分钟；步骤Ⅵ中洗涤酶标板5次，每次浸泡1.5分钟。
7.根据权利要求3所述的FGγ抗体在制备用于检测去势抵抗性***癌的ELISA试剂盒中的用途，其特征在于：所述判定阈值为21943.03mg/ml。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102460174A (zh) * 2009-05-14 2012-05-16 牛津大学之校长及学者 使用一组新型低丰度人类血浆蛋白生物标记对肝纤维化进行临床诊断
CN104062436A (zh) * 2014-06-06 2014-09-24 上海良润生物医药科技有限公司 Fxyd在制备诊断和预示肺癌标志物中的应用及fxyd双抗夹心elisa检测试剂盒

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2011235082B2 (en) * 2010-04-02 2016-02-11 Veridex, Llc Gene-based prediction of PSA recurrence for clinically localized prostate cancer patients
EA035535B1 (ru) * 2012-07-27 2020-07-01 Арагон Фармасьютикалз, Инк. Слитый белок и устройство для лечения заболеваний или состояний, связанных с андрогенными рецепторами
CN105779599B (zh) * 2016-04-05 2020-09-11 上海美吉生物医药科技有限公司 一种用于检测转移性去势抵抗性***癌耐药性的试剂盒

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102460174A (zh) * 2009-05-14 2012-05-16 牛津大学之校长及学者 使用一组新型低丰度人类血浆蛋白生物标记对肝纤维化进行临床诊断
CN104062436A (zh) * 2014-06-06 2014-09-24 上海良润生物医药科技有限公司 Fxyd在制备诊断和预示肺癌标志物中的应用及fxyd双抗夹心elisa检测试剂盒

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CSB-E13319h 人血纤蛋白原γ链（FGG）ELISA Kit;厦门慧嘉生物科技有限公司;《中国化工仪器网》;20140827;1-2 *
The Identification of Novel Potential Injury Mechanisms and Candidate Biomarkers in Renal Allograft Rejection by Quantitative Proteomics;Tara K. Sigdel et al.;《Molecular & Cellular Proteomics》;20131212;第13卷(第2期);摘要，624页左栏倒数第2段 *
纤维蛋白原基因多态性位点与血浆纤维蛋白原γ′水平及缺血性脑卒中的关系研究;虞珊珊等;《国际检验医学杂志》;20151031;第36卷(第20期);2932页、2933页1.2节 *

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