CN106137966A - 葫芦素b纳米脂质体及其制备 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及葫芦素B脂质体药物及其制备。本发明提供一种葫芦素B纳米脂质体药物,并提供上述葫芦素B纳米脂质体药物的制备方法。我们采用被动载药方式,并在其磷脂磷酸基团上链接含有多羟基基团的物质聚乙二醇进行修饰,将其制成长循环纳米脂质体。结构修饰的作用是保护脂质体不被血液中的调理素识别、摄取,从而使脂质体清除率降低,在血液中驻留时间延长,进而使药物作用时间延长,脂质体可有效到达病变部位,提高靶向组织的选择。本制备方法制得的制剂具有较好的物理稳定性和化学稳定性,在体内有较长的滞留时间、小的分布容积和较高的血药浓度。本发明提供的药物可用于治疗各型期肝癌。本发明组方简单科学,使用方便,稳定性好,毒性低,适用于大规模生产。
Description
技术领域:
本发明涉及葫芦素B纳米脂质体及其制备。
技术背景:
(1)葫芦素B(cucurbitacin B)(简称CuB)是从葫芦科及其它科属多种植物中提取的苦味苷元成分,是高度氧化的四环三萜类化合物,是葫芦素家族中含量最丰富的成员,具有广泛的药理活性。现代研究表明,葫芦素B具有保护肝、消炎和抗肿瘤等多种生物学活性。葫芦素B在体内、外均对人肝癌细胞系有抑制作用。其抑制作用是通过细胞周期阻滞和诱导凋亡引起的。近年来,国内外学者对葫芦素B的抗肿瘤作用进行了较为***的研究,是潜在的抗肿瘤药物。
(2)全身化疗是***的重要手段之一。但化疗药物大多存在着毒性大,缺乏药理活性的专一性,对正常组织,特别对生长旺盛的消化道粘膜上皮组织,骨髓造血组织以及毛囊等同样有损害作用。全身化疗药物对肿瘤细胞的靶向不高,在杀伤肿瘤细胞的同时,也对体内其他正常组织和细胞造成损害。理想的化疗方法是,药物在肿瘤局部呈特异性分布,作用时间长,有效杀灭肿瘤细胞,且对正常组织毒副作用小。采用靶部位或靶向治疗可以明显提高治疗效果,减低副作用。为了提高抗癌药物的疗效,降低毒副作用,除了化学结构上进行改进外,设计抗癌药物的新剂型和适宜的给药途径,这是药剂研究与生产必须引起重视的问题。
(3)葫芦素B已上市剂型主要为片剂。葫芦素B脂溶性强,难溶于水,口服吸收差,剂型与药理活性的关联性较为模糊,很难保证治疗效果的稳定,且在毒副作用的控制方面不甚理想。
发明内容:
为了解决现有葫芦素B制剂存在的问题,本发明提供一种葫芦素B纳米脂质体药物,用于治疗各型期肝癌。
为实现上述目的,本发明采取的技术方案是:一种葫芦素B纳米脂质体药物及其制备方法,其特征在于它是由以下重量份的原料制成:
葫芦素B 0.5-30份
注射用氢化大豆卵磷脂 40-90份
维生素E 0.1-10份
胆固醇 5-50份
聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺 0.5-30份
2,6-二叔丁基对甲苯酚 0.5-30份
泊洛沙姆F-68 0.5-50份
优选为:
葫芦素B 0.5-10份
注射用氢化大豆卵磷脂 40-70份
维生素E 0.1-5份
胆固醇 20-50份
聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺 0.5-10份
2,6-二叔丁基对甲苯酚 0.5-10份
泊洛沙姆F-68 1-20份
本发明所述的药物制剂的制备方法,包括下列步骤:
a依次将葫芦素B、注射用氢化大豆卵磷脂、维生素E、胆固醇、聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺溶于体积比为2-10:1的***和乙醇混合溶液中,旋转蒸发n仪中减压去除***和乙醇,在瓶壁形成脂质体薄膜;
b依次将2,6-二叔丁基对甲苯酚、泊洛沙姆F-68溶于磷酸盐缓冲液中,蒸汽灭菌,冷却到室温后调节PH值为6.0-7.0;
c将步骤(a)制得的脂质体膜用乙醇溶解,在搅拌下匀速注入到步骤(b)制得的磷酸盐缓冲液的辅料液中,并保持恒温(55℃),在高速剪切乳化分散机中,真空下,1200rpm乳化分散5分钟以上,减压除尽乙醇,并通入氮气使其除尽。在高压锤击机中分别依次过1.0μm、0.08μm、0.05μm的核孔膜滤过4-6次,制得葫芦素B纳米脂质体。
本发明的葫芦素B指其纯度在90%及以上。所用的辅料包括注射用氢化大豆卵磷脂、维生素E、胆固醇、二硬脂酰磷脂乙醇胺、2,6-二叔丁基对甲苯酚、泊洛沙姆F-68、丁基羟基甲苯、丁基羟基茴香醚、神经鞘髓磷脂、十二烷基磺酸钠等常用制备脂质体辅料。
本发明的葫芦素B纳米脂质体药物,可用于制备葫芦素B的注射剂、冻干粉针剂、合剂、软胶囊、软膏、凝胶剂、栓剂、喷雾剂、滴鼻剂、滴丸等剂型药物。
本发明实现的技术效果:
a)本发明药物属于天然药物单体纳米脂质体靶向制剂;
b)利用纳米技术可将生物降解性和生物相容性的聚合物作为药物的载体,提高药物在靶部位或吸收部位的浓度,改变其体内分布和药动学过程,达到增加吸收、提高疗效和降低毒性的作用。
c)本发明的药物采用被动载药方式,并在其磷脂磷酸基团上链接含有多羟基基团的物质聚乙二醇进行修饰,将其制成长循环纳米脂质体。保护脂质体不被血液中的调理素识别、摄取,从而使脂质体清除率降低,在血液中驻留时间延长,进而使药物作用时间延长,脂质体可有效到达病变部位,提高靶向组织的选择。
d)本发明采用微孔滤膜过滤灭菌法,条件温和,适合于脂质体的灭菌处理。
e)本发明中加入了抗氧剂维生素E和2,6-二叔丁基对甲苯酚,避免了脂质体在制备、储存和使用过程中,其不饱和磷脂发生氧化或过氧化降解反应。
f)本发明的药物在包封率、稳定性等方面,比现有制剂均有明显改善。
本发明产品经测试和试验,其包封率高、质量稳定,具体情况如下:
1)葫芦素B纳米脂质体的粒径及形态分布:
由透射电镜照片观察其外观及由纳米电位粒度测定仪测定其粒径。
2)葫芦素B纳米脂质体的含量测定:
色谱柱:Ultimate XB-C18(4.6×250mm,5μm);流动相:甲醇:水(64:36);流速:1.0ml/min;检测波长:228nm;柱温:室温;进样量:10μg/ml
3)葫芦素B纳米脂质体的包封率的测定:
采用超速离心-超滤膜过滤法测定葫芦素B纳米脂质体的包封率。
0月 | 3个月 | 6个月 | |
包封率(%) | 98.32 | 98.11 | 98.02 |
具体实施方式:
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细描述,给出的实施例为了阐明本发明,而不是为了限制本发明的范围。
实施例1:
本发明配方由以下组分组成:
葫芦素B 0.5份
注射用氢化大豆卵磷脂 40份
维生素E 0.1份
胆固醇 5份
聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺 0.5份
2,6-二叔丁基对甲苯酚 0.5份
泊洛沙姆F-68 0.5份
1)依次将葫芦素B、注射用氢化大豆卵磷脂、维生素E、胆固醇、聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺溶于体积比为2-10:1的***和乙醇混合溶液中,旋转蒸发仪中减压去除***和乙醇,在瓶壁形成脂质体薄膜。
2)依次将2,6-二叔丁基对甲苯酚、泊洛沙姆F-68溶于磷酸盐缓冲液中,蒸汽灭菌,冷却到室温后调节PH值为6.0-7.0。
3)将步骤1制得的脂质体膜用乙醇溶解,在搅拌下匀速注入到步骤2制得的磷酸盐缓冲液的辅料液中,并保持恒温(55℃),在高速剪切乳化分散机中,真空下,1200rpm乳化分散5分钟以上,减压除尽乙醇,并通入氮气使其除尽。在高压锤击机中分别依次过1.0μm、0.08μm、0.05μm的核孔膜滤过4次,制得葫芦素B纳米脂质体。
实施例2
本发明配方由以下组分组成:
葫芦素B 30份
注射用氢化大豆卵磷脂 90份
维生素E 10份
胆固醇 50份
聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺 30份
2,6-二叔丁基对甲苯酚 30份
泊洛沙姆F-68 50份
1)依次将葫芦素B、注射用氢化大豆卵磷脂、维生素E、胆固醇、聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺溶于体积比为2-10:1的***和乙醇混合溶液中,旋转蒸发仪中减压去除***和乙醇,在瓶壁形成脂质体薄膜。
2)依次将2,6-二叔丁基对甲苯酚、泊洛沙姆F-68溶于磷酸盐缓冲液中,蒸汽灭菌,冷却到室温后调节PH值为6.0-7.0。
3)将步骤1制得的脂质体膜用乙醇溶解,在搅拌下匀速注入到步骤2制得的磷酸盐缓冲液的辅料液中,并保持恒温(55℃),在高速剪切乳化分散机中,真空下,1200rpm乳化分散5分钟以上,减压除尽乙醇,并通入氮气使其除尽。在高压锤击机中分别依次过1.0μm、0.08μm、0.05μm的核孔膜滤过6次,制得葫芦素B纳米脂质体。
实施例3
本发明配方由以下组分组成:
葫芦素B 15份
注射用氢化大豆卵磷脂 65份
维生素E 5份
胆固醇 10份
聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺 15份
2,6-二叔丁基对甲苯酚 15份
泊洛沙姆F-68 15份
1)依次将葫芦素B、注射用氢化大豆卵磷脂、维生素E、胆固醇、聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺溶于体积比为2-10:1的***和乙醇混合溶液中,旋转蒸发仪中减压去除***和乙醇,在瓶壁形成脂质体薄膜。
2)依次将2,6-二叔丁基对甲苯酚、泊洛沙姆F-68溶于磷酸盐缓冲液中,蒸汽灭菌,冷却到室温后调节PH值为6.0-7.0。
3)将步骤1制得的脂质体膜用乙醇溶解,在搅拌下匀速注入到步骤2制得的磷酸盐缓冲液的辅料液中,并保持恒温(55℃),在高速剪切乳化分散机中,真空下,1200rpm乳化分散5分钟以上,减压除尽乙醇,并通入氮气使其除尽。在高压锤击机中分别依次过1.0μm、0.08μm、0.05μm的核孔膜滤过6次,制得葫芦素B纳米脂质体。
实施例4
本发明配方由以下组分组成:
葫芦素B 5份
注射用氢化大豆卵磷脂 65份
丁基羟基甲苯 5份
胆固醇 20份
聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺 5份
丁基羟基茴香醚 1份
泊洛沙姆F-68 5份
1)依次将葫芦素B、注射用氢化大豆卵磷脂、丁基羟基甲苯、胆固醇、聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺溶于体积比为2-10:1的***和乙醇混合溶液中,旋转蒸发仪中减压去除***和乙醇,在瓶壁形成脂质体薄膜。
2)依次将丁基羟基茴香醚、泊洛沙姆F-68溶于磷酸盐缓冲液中,蒸汽灭菌,冷却到室温后调节PH值为6.0-7.0。
3)将步骤1制得的脂质体膜用乙醇溶解,在搅拌下匀速注入到步骤2制得的磷酸盐缓冲液的辅料液中,并保持恒温(55℃),在高速剪切乳化分散机中,真空下,1200rpm乳化分散5分钟以上,减压除尽乙醇,并通入氮气使其除尽。在高压锤击机中分别依次过1.0μm、0.08μm、0.05μm的核孔膜滤过4次,制得葫芦素B纳米脂质体。
实施例5
本发明配方由以下组分组成:
葫芦素B 5份
注射用氢化大豆卵磷脂 65份
维生素E 2份
聚乙二醇2000-胆固醇 20份
2,6-二叔丁基对甲苯酚 5份
泊洛沙姆F-68 5份
1)依次将葫芦素B、卵磷脂、维生素E、聚乙二醇2000-胆固醇溶于体积比为2-10:1的***和乙醇混合溶液中,旋转蒸发仪中减压去除***和乙醇,在瓶壁形成脂质体薄膜。
2)依次将2,6-二叔丁基对甲苯酚、泊洛沙姆F-68溶于磷酸盐缓冲液中,蒸汽灭菌,冷却到室温后调节PH值为6.0-7.0。
3)将步骤1制得的脂质体膜用乙醇溶解,在搅拌下匀速注入到步骤2制得的磷酸盐缓冲液的辅料液中,并保持恒温(55℃),在高速剪切乳化分散机中,真空下,1200rpm乳化分散5分钟以上,减压除尽乙醇,并通入氮气使其除尽。在高压锤击机中分别依次过1.0μm、0.08μm、0.05μm的核孔膜滤过5次,制得葫芦素B纳米脂质体。
实施例6
本发明配方由以下组分组成:
葫芦素B 5份
注射用氢化大豆卵磷脂 65份
维生素E 2份
胆固醇 20份
聚乙二醇2000-神经鞘髓磷脂 2份
2,6-二叔丁基对甲苯酚 5份
泊洛沙姆F-68 5份
1)依次将葫芦素B、卵磷脂、维生素E、胆固醇、聚乙二醇2000-神经鞘髓磷脂溶于体积比为2-10:1的***和乙醇混合溶液中,旋转蒸发仪中减压去除***和乙醇,在瓶壁形成脂质体薄膜。
2)依次将2,6-二叔丁基对甲苯酚、泊洛沙姆F-68溶于磷酸盐缓冲液中,蒸汽灭菌,冷却到室温后调节PH值为6.0-7.0。
3)将步骤1制得的脂质体膜用乙醇溶解,在搅拌下匀速注入到步骤2制得的磷酸盐缓冲液的辅料液中,并保持恒温(55℃),在高速剪切乳化分散机中,真空下,1200rpm乳化分散5分钟以上,减压除尽乙醇,并通入氮气使其除尽。在高压锤击机中分别依次过1.0μm、0.08μm、0.05μm的核孔膜滤过4次,制得葫芦素B纳米脂质体。
实施例7
本发明配方由以下组分组成:
葫芦素B 5份
注射用氢化大豆卵磷脂 65份
丁基羟基甲苯 5份
胆固醇 20份
聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺 5份
丁基羟基茴香醚 1份
十二烷基磺酸钠 5份
1)依次将葫芦素B、注射用氢化大豆卵磷脂、丁基羟基甲苯、胆固醇、聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺溶于体积比为2-10:1的***和乙醇混合溶液中,旋转蒸发仪中减压去除***和乙醇,在瓶壁形成脂质体薄膜。
2)依次将丁基羟基茴香醚、十二烷基磺酸钠溶于磷酸盐缓冲液中,蒸汽灭菌,冷却到室温后调节PH值为6.0-7.0。
3)将步骤1制得的脂质体膜用乙醇溶解,在搅拌下匀速注入到步骤2制得的磷酸盐缓冲液的辅料液中,并保持恒温(55℃),在高速剪切乳化分散机中,真空下,1200rpm乳化分散5分钟以上,减压除尽乙醇,并通入氮气使其除尽。在高压锤击机中分别依次过1.0μm、0.08μm、0.05μm的核孔膜滤过6次,制得葫芦素B纳米脂质体。
实施例8
本发明配方由以下组分组成:
葫芦素B 10份
注射用氢化大豆卵磷脂 70份
维生素E 5份
胆固醇 50份
聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺 10份
2,6-二叔丁基对甲苯酚 10份
泊洛沙姆F-68 20份
1)依次将葫芦素B、注射用氢化大豆卵磷脂、维生素E、胆固醇、聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺溶于体积比为2-10:1的***和乙醇混合溶液中,旋转蒸发仪中减压去除***和乙醇,在瓶壁形成脂质体薄膜。
2)依次将2,6-二叔丁基对甲苯酚、泊洛沙姆F-68溶于磷酸盐缓冲液中,蒸汽灭菌,冷却到室温后调节PH值为6.0-7.0。
3)将步骤1制得的脂质体膜用乙醇溶解,在搅拌下匀速注入到步骤2制得的磷酸盐缓冲液的辅料液中,并保持恒温(55℃),在高速剪切乳化分散机中,真空下,1200rpm乳化分散5分钟以上,减压除尽乙醇,并通入氮气使其除尽。在高压锤击机中分别依次过1.0μm、0.08μm、0.05μm的核孔膜滤过5次,制得葫芦素B纳米脂质体。
实施例9
本发明配方由以下组分组成:
葫芦素B 5份
注射用氢化大豆卵磷脂 60份
维生素E 2份
胆固醇 30份
聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺 9份
2,6-二叔丁基对甲苯酚 5份
泊洛沙姆F-68 15份
1)依次将葫芦素B、注射用氢化大豆卵磷脂、维生素E、胆固醇、聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺溶于体积比为2-10:1的***和乙醇混合溶液中,旋转蒸发仪中减压去除***和乙醇,在瓶壁形成脂质体薄膜。
2)依次将2,6-二叔丁基对甲苯酚、泊洛沙姆F-68溶于磷酸盐缓冲液中,蒸汽灭菌,冷却到室温后调节PH值为6.0-7.0。
3)将步骤1制得的脂质体膜用乙醇溶解,在搅拌下匀速注入到步骤2制得的磷酸盐缓冲液的辅料液中,并保持恒温(55℃),在高速剪切乳化分散机中,真空下,1200rpm乳化分散5分钟以上,减压除尽乙醇,并通入氮气使其除尽。在高压锤击机中分别依次过1.0μm、0.08μm、0.05μm的核孔膜滤过5次,制得葫芦素B纳米脂质体。
实施例10
本发明配方由以下组分组成:
葫芦素B 10份
注射用氢化大豆卵磷脂 70份
维生素E 2份
胆固醇 30份
聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺 10份
2,6-二叔丁基对甲苯酚 10份
泊洛沙姆F-68 20份
1)依次将葫芦素B、注射用氢化大豆卵磷脂、维生素E、胆固醇、聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺溶于体积比为2-10:1的***和乙醇混合溶液中,旋转蒸发仪中减压去除***和乙醇,在瓶壁形成脂质体薄膜。
2)依次将2,6-二叔丁基对甲苯酚、泊洛沙姆F-68溶于磷酸盐缓冲液中,蒸汽灭菌,冷却到室温后调节PH值为6.0-7.0。
3)将步骤1制得的脂质体膜用乙醇溶解,在搅拌下匀速注入到步骤2制得的磷酸盐缓冲液的辅料液中,并保持恒温(55℃),在高速剪切乳化分散机中,真空下,1200rpm乳化分散5分钟以上,减压除尽乙醇,并通入氮气使其除尽。在高压锤击机中分别依次过1.0μm、0.08μm、0.05μm的核孔膜滤过5次,制得葫芦素B纳米脂质体。
Claims (5)
1.一种葫芦素B纳米脂质体,其中,所述的脂质体药物主要由下述重量配比的原料药组成:
葫芦素B 0.5-30份
注射用氢化大豆卵磷脂 40-90份
维生素E 0.1-10份
胆固醇 5-50份
聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺 0.5-30份
2,6-二叔丁基对甲苯酚 0.5-30份
泊洛沙姆F-68 0.5-50份。
2.如权利要求1所述的脂质体,其中,各原料药重量配比优选为:
葫芦素B 0.5-10份
注射用氢化大豆卵磷脂 40-70份
维生素E 0.1-5份
胆固醇 20-50份
聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺 0.5-10份
2,6-二叔丁基对甲苯酚 0.5-10份
泊洛沙姆F-68 1-20份。
3.含有权利要求1-2任一项所述脂质体的药物组合物,其中,所述药物组合物是注射剂、冻干粉针剂、合剂、软胶囊、软膏、凝胶剂、栓剂、喷雾剂、滴鼻剂、滴丸剂。
4.权利要求1-3任一项所述葫芦素B纳米脂质体在制备治疗各型期肝癌药物中的应用。
5.权利要求1所述的葫芦素B纳米脂质体的制备方法,其特征在于,所述方法有以下步骤:
a依次将葫芦素B、注射用氢化大豆卵磷脂、聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺、胆固醇、维生素E溶于体积比为2-10:1的***和乙醇混合溶液中,旋转蒸发仪减压去除***和乙醇,在瓶壁形成脂质体薄膜;
b依次将2,6-二叔丁基对甲苯酚、泊洛沙姆F-68溶于磷酸盐缓冲液中,蒸汽灭菌,冷却到室温后调节PH值为6.0-7.0;
c将步骤(a)制得的脂质体膜用乙醇溶解,在搅拌下匀速注入到步骤(b)制得的磷酸盐缓冲液的辅料液中,并保持恒温(55℃),在高速剪切乳化分散机中,真空下,1200rpm乳化分散5分钟以上,减压除尽乙醇,并通入氮气使其除尽。在高压锤击机中分别依次过1.0μm、0.08μm、0.05μm的核孔膜滤过4-6次,制得葫芦素B纳米脂质体。
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