CN106117033A - 一种同时分离制备高纯度辅酶q10和还原型辅酶q10的工艺 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种同时分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺，以菌渣为原料进行渗漉提取得含辅酶Q10和还原型辅酶Q10的渗漉提取液，通过结晶分离出大部分辅酶Q10，并将结晶母液还原得还原液，还原液经萃取得到含还原型辅酶Q10的萃取液，将萃取液进行结晶处理分离出还原型辅酶Q10，最终得到了纯度达98％以上的高纯度辅酶Q10和纯度达98％以上的高纯度还原型辅酶Q10，总收率为94％以上，整个工艺简单可靠、易操作，易于实现，参数便于控制。

Description

一种同时分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺

技术领域

本发明属化学工程技术领域，特别涉及一种同时分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺流程。具体而言，是利用渗漉提取、结晶纯化、还原反应、萃取分离等组合分离工序，分离制备得到高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10精品。

背景技术

辅酶Q类化合物是一种广泛存在自然界的脂溶性醌类化合物，人体内存在的是辅酶Q10，其标准命名为2,3-二甲氧基-5-甲基-6-癸异戊烯基-苯醌。其结构式如下：

辅酶Q10具有清除自由基和抗氧化、增强人体免疫力和抗肿瘤、加强心脏动力和增强脑力以及调节血脂等生理功能。因此辅酶Q10在医学上有较好的应用，主要被用于治疗心血管疾病、慢性肝炎、乳腺癌、乙型脑炎、神经***疾病以及皮肤性疾病等。另一方面，辅酶Q10也被广泛地应用于食品、保健品以及化妆品中。随着对辅酶Q10功能的深入研究，其在医药品、化妆品、食品以及保健品领域都将有更加广阔的应用前景。

还原型辅酶Q10是辅酶Q10的还原产物，辅酶Q10的对苯醌结构还原为对苯二酚结构。其结构式如下：

辅酶Q10有保护心血管和延缓衰老等作用，但其并不能被人体直接吸收和利用，而是需要先转化为还原型辅酶Q10。还原型辅酶Q10比辅酶Q10具有更强的清除自由基和抗氧化、增强人体免疫力和抗肿瘤、加强心脏动力和增强脑力以及调节血脂等生理功能，可应用于医药品、化妆品、食品以及保健品领域。更重要的是，随着年龄的增长，人体将辅酶Q10转化成还原型辅酶Q10的能力会降低，因此人体直接补充还原型辅酶Q10更有利于其有效地吸收、利用。因此分离制备高纯度的辅酶Q10和还原型辅酶Q10十分关键。

辅酶Q10和还原型辅酶Q10广泛存在于动植物体中，如大豆、鱼类、猪肉、羊肉、牛肉以及奶类等。目前，辅酶Q10和还原型辅酶Q10的来源除天然来源外，还包括化学合成以及微生物发酵法等。天然来源中辅酶Q10和还原型辅酶Q10的含量相对较低，而微生物发酵法通过培育高效菌种，能大大提高辅酶Q10和还原型辅酶Q10的产量，更适合作为生产辅酶Q10和还原型辅酶Q10的来源。微生物发酵产物中，往往同时存在辅酶Q10和还原型辅酶Q10，因此利用微生物发酵产物分离制备高纯度的辅酶Q10和还原型辅酶Q10从而充分地将两者加以利用具有十分重要的现实意义和经济价值。

现有技术中，主要为微生物发酵产物中提取分离辅酶Q10，或微生物发酵产物中提取分离还原型辅酶Q10，而未将发酵产物中的辅酶Q10和还原型辅酶Q10同时提取分离，造成其中的辅酶Q10或还原型辅酶Q10以杂质的形式被浪费。公开号为CN103819326A的中国专利文献公开了一种超声破碎提取、层析纯化制备辅酶Q10的方法。此工艺能制备得到辅酶Q10，但未提及对发酵产物中所含的还原型辅酶Q10的处理，造成对其的浪费。公开号为CN103740777A的中国专利文献公开了一种选育、培养一种还原型辅酶Q10菌株，并从其发酵产物中提取分离还原型辅酶Q10的方法，但未提及对发酵产物中可能所含的辅酶Q10的处理，造成对其的浪费。

因此，现有的从微生物发酵产物中提取、纯化辅酶Q10或还原型辅酶Q10的工艺，都只关注其中一种，而另一产物则被当做杂质废弃，造成了有效物质的极大浪费。因而需要在现有技术的基础上，组合、简化、优化工艺，寻找到一种工艺简单、低成本、高收率的从微生物发酵产物中分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的方法。

发明内容

本发明提供了一种同时分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺，最终得到了纯度98％以上的高纯度辅酶Q10和纯度98％以上的高纯度还原型辅酶Q10，总收率为94％以上，整个工艺简单可靠、易操作，易于实现，参数便于控制。

一种分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺，包括如下步骤：

(1)渗漉提取：将菌渣进行渗漉提取，收集含辅酶Q10和还原型辅酶Q10的渗漉液。

步骤(1)所述渗漉提取过程如下：

将菌渣装入渗漉柱，向渗漉柱中加入正己烷，5～30℃下浸泡90～120min，保温状态下，在渗漉柱中进行渗漉操作，收集出口处含辅酶Q10和还原型辅酶Q10的渗漉液，并同时以0.5～3BV/h的流速向渗漉柱中连续补加提取剂，直至收集到的渗漉液的体积为4～6BV。

优选地，浸泡时加入的提取溶剂的体积为0.6～1BV。

步骤(1)中在5～30℃下用正己烷提取，辅酶Q10以及还原型辅酶Q10在该温度下的正己烷中溶解度较大，而菌渣中其他成分在其中的溶解度相对较小，因此该温度下，辅酶Q10和还原型辅酶Q10的提取率高，而杂质的含量低，从而在提高辅酶Q10和还原型辅酶Q10提取率的同时提高其在提取物中的含量。辅酶Q10的提取率能达到95％以上，还原型辅酶Q10的提取率能达到85％以上，渗漉提取液中辅酶Q10的质量百分比为65％～75％(以干基为基准)，还原型辅酶Q10的质量百分比为4％～10％(以干基为基准)，提取液中同时含有辅酶Q10异构体、其余辅酶Q类物质等杂质。最优选在10℃操作温度下，用正己烷提取。

将原料菌渣浸泡90～120min，使菌渣充分溶胀，渗漉时需保证菌渣能够完全浸泡在提取溶剂中。保温状态下在收集渗漉液的同时向渗漉柱中连续补加提取溶剂，从而在保证辅酶Q10和还原型辅酶Q10高提取率的同时减少溶剂消耗，并降低回收溶剂的能耗。连续补加的提取溶剂流速优选为0.5～3BV/h。在该流速范围内，既可以保证提取溶剂和菌渣有充分的接触时间，提高溶剂的利用率，又能兼顾生产能力。

该步骤中为了提高溶剂的利用效率，可对溶剂按以下方式进行回收处理：收集得到的渗漉液浓缩成固态粗提物的过程中，回收分离出的溶剂，其在下次渗漉过程中可作为新鲜溶剂重复利用。

(2)结晶：将步骤(1)所得渗漉液经浓缩除溶剂处理得到固态粗产物，将所述固态粗产物溶解，降温结晶，过滤得到辅酶Q10精品和结晶母液。

步骤(2)所述结晶过程如下：

在20～70℃下，将浓缩得到的固态粗产物溶解在有机溶剂中，得到澄清溶液，逐步降温至-5～5℃，冷却结晶6～24小时后过滤，所得滤液即结晶母液，所得滤饼用适量冷乙醇洗涤，20～40℃下真空干燥6～12小时得纯度98％以上的辅酶Q10精品。

优选的，该步骤中所述有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、正己烷、正庚烷或任意两种的混合物，其加入量和固态粗产物的比例为(40～80)mL﹕1g。若有机溶剂加入量过低，辅酶Q10结晶纯度过低；若有机溶剂加入量过高，辅酶Q10产率过低，因此需要合理控制有机溶剂的加入量，以兼顾辅酶Q10的纯度和产率。

所用有机溶剂进一步优选为丙酮，加入量和固态粗产物比例优选为60mL:1g。

优选的，该步骤结晶温度为-5～0℃，结晶时间为6～12小时。若结晶温度过低或结晶时间过长，得到的辅酶Q10纯度过低，因此要合理控制结晶温度和时间。该步骤结晶温度进一步优选为0℃，结晶时间进一步优选为6h。

由于提取得到的固态粗提物中辅酶Q10的含量相对较高，因此该步骤通过结晶分离出提取物中大部分辅酶Q10，适当降低辅酶Q10的收率而保证了结晶得到的辅酶Q10的纯度。其余部分辅酶Q10留在母液中，通过后续步骤对其做进一步处理。

(3)还原：将步骤(2)所得母液进行溶剂置换，然后与还原剂混合，还原得还原液；

步骤(3)所述还原过程如下：

将所得母液置换成有机溶剂A的5～20mg/mL溶液，还原剂配制成溶剂B的3～8mg/mL溶液，将两种溶液等体积混合，15～30℃且惰性气体氛围下搅拌反应1～5小时，得还原液。

优选的，该步骤中所述有机溶剂A为乙醇、正己烷、正庚烷和石油醚中任一种；母液的有机溶剂A溶液的浓度进一步优选为5～20mg/mL，最优选为10mg/mL。

优选的，该步骤所述溶剂B为水、乙醇和水/乙醇混合物中任一种。

进一步优选水，还原反应后可与有机溶剂分相，从而直接分离部分水溶性杂质。

优选的，该步骤中所述还原剂为硼氢化钠、铁、抗坏血酸和连二亚硫酸钠中任一种。

进一步优选连二亚硫酸钠，还原剂能较好的溶解在水中，还原剂氧化产物能溶剂在水中直接除去，不产生新的杂质。

优选的，该步骤所述还原反应在15～30℃下进行，惰性气体为氮气。惰性气体氛围下反应，能保证还原得到的还原型辅酶Q10不会再次被氧化，从而保证了还原反应的效率。

优选的，该步骤所述还原剂的B溶液中还原剂的加入量是所需理论氢当量的1～6倍。若还原剂加入量过低，导致辅酶Q10不能完全被还原成还原型辅酶Q10，若还原剂加入量过高，导致还原剂的浪费。因此合理控制还原剂的加入量，兼顾还原反应的效率和经济效益。

进一步优选还原剂的B溶液中还原剂的加入量是所需理论氢当量的2～5倍。

由于结晶母液中同时存在一定量的辅酶Q10和还原型辅酶Q10，但两者含量都不高，因此该步骤通过加入还原剂将绝大部分辅酶Q10还原成还原型辅酶Q10，还原型辅酶Q10成为目标产物。通过对还原液的进一步处理分离出还原型辅酶Q10。

(4)萃取：将步骤(3)所得还原液浓缩，经有机溶剂萃取，得萃取液。

优选的，该步骤中还原液浓缩至50～700mg/mL；进一步优选为200～400mg/mL。

优选的，该步骤中所述有机溶剂为甲醇、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺和二甲亚砜中的任一种，用量为浓缩后还原液体积的0.5～1.5倍。

该步骤中所述有机溶剂进一步优选N,N-二甲基甲酰胺。

该步骤中萃取结束后静置10～60min分层后分离得到两相。能将绝大部分还原型辅酶Q10萃取到萃取相中，同时将少量的未还原的辅酶Q10留在萃余相中，较好地将辅酶Q10和还原型辅酶Q10分离。萃取后得到的含少量辅酶Q10和还原型辅酶Q10的萃余液并入结晶母液进行还原，避免辅酶Q10和还原型辅酶Q10损失。

(5)结晶：将步骤(4)所得萃取液浓缩，有机溶剂溶解后冷却结晶，过滤、干燥处理后得还原型辅酶Q10精品。

步骤(5)所述结晶过程如下：

将萃取液浓缩后在20～50℃下溶解于有机溶剂中，得到澄清溶液，逐步降温至-10～0℃，冷却结晶6～24小时后过滤，所得晶体用适量冷乙醇洗涤后在20～40℃下真空干燥得还原型辅酶Q10精品。

结晶母液可并入萃取液中，进行萃取、结晶处理，以提高还原型辅酶Q10的回收率。

优选的，该步骤所述有机溶剂为甲醇、丙酮、乙醇、乙腈或任意两种的混合物，加入量和浓缩后固体的比例为(20～50)L：1kg。所述有机溶剂最优选为乙醇，加入量最优选为30L：1kg。

优选的，该步骤有机溶剂中添加一定量的酸，以利于还原型辅酶Q10在空气中保持稳定。所述酸优选为盐酸，加入量为100mmol氯化氢/kg乙醇。得到结晶产品后，挥发性酸更易于除去，避免酸残留。

优选的，该步骤中降温幅度为0.5～3℃/min，结晶温度为-10～0℃，进一步优选为-5～0℃；最优选为0℃。

本发明中所涉及到的术语意义具体解释如下：

BV：床层体积，将菌渣湿法装填入渗漉柱，菌渣处于自由堆积状态下的体积。

固形物浓度100mg/mL的溶液，是指每毫升溶液浓缩至质量不变时含有100mg固形物，由于溶液成分复杂，会有一定的不溶物质，计算总质量时指的是整个体系的总质量，包括悬浮或沉淀的质量。

干基是指溶液干燥后得到的固体的质量，即溶液中的全部溶质的质量总和。

理论氢当量是指还原反应中，完全还原辅酶Q10时所需还原剂活泼氢的量。

本发明的工艺采用低温渗漉法代替溶剂浸取法从菌渣中提取辅酶Q10和还原型辅酶Q10，大大降低了提取过程的溶剂消耗和废液产出，采用结晶先分离出了大部分辅酶Q10，通过还原和萃取分离辅酶Q10和还原型辅酶Q10避免了还原型辅酶Q10的浪费，在简单工艺和低成本的条件下实现同时分离制备高纯度的辅酶Q10和还原型辅酶Q10，获得了高的总收率。

本发明中采用渗漉法从菌渣中提取辅酶Q10和还原型辅酶Q10，与常规的溶剂浸取法相比，渗漉过程中始终保持着原料内外最大的浓度梯度，可以加速溶出传质，显著提高提取速率、降低溶剂消耗，使辅酶Q10提取率达到95％以上，还原型辅酶Q10的提取率能达到85％以上，渗漉提取液中辅酶Q10的质量百分比(以干基为准)在65％～75％之间，还原型辅酶Q10的质量百分比(以干基为准)在4％～10％之间。

本发明采用结晶，先将固态粗提物中的大部分辅酶Q10结晶分离，适当降低辅酶Q10的收率而保证了结晶得到的辅酶Q10的高纯度。其余部分辅酶Q10留在母液中，通过后续步骤对其做进一步处理。

本发明通过还原反应还原结晶母液中剩余的辅酶Q10，将其转化为还原型辅酶Q10，还原型辅酶Q10成为目标产物。合理转化了剩余辅酶Q10的同时也能将原本较少的还原型辅酶Q10高纯度地分离出来。

本发明采用萃取分离还原后的还原型辅酶Q10和少量辅酶Q10，并将萃取后得到的含辅酶Q10和还原型辅酶Q10的萃余液并入结晶母液进行还原，避免辅酶Q10和还原型辅酶Q10损失。

并采用一次结晶得到纯度达98％以上的还原型辅酶Q10精品，并将结晶后母液并入萃取液中，进行萃取、结晶处理，提高了还原型辅酶Q10的收率。

总的来说，本发明将以上五道工序结合起来从菌渣中提取、提纯、分离辅酶Q10和还原型辅酶Q10的技术，相对现有技术所具有的有益效果如下：

本发明的工艺路线短，对生产设备要求低，操作简单；本工艺路线中的各溶剂均可回收，因此本工艺中大多数的原料均可重复利用；还原步骤有效的利用了原本含量较低的还原型辅酶Q10，同时制备得到了高纯度的辅酶Q10和还原型辅酶Q10；萃余液和结晶母液的循环套用大大提高的工艺过程的总收率。本工艺路线中工艺流程简单、生产成本低、生产效率高，易于工业化大规模生产。

附图说明

图1为根据本发明建立的测定纯品辅酶Q10浓度方法而得到的HPLC色谱图。

图2为根据本发明建立的测定纯品还原型辅酶Q10浓度方法而得到的HPLC色谱图。

具体实施方式

下面结合一种分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的制备方法和测试结果对本发明进一步说明。

实施例1

(1)称取菌渣(其中，辅酶Q10质量百分比为2.6％，还原型辅酶Q10质量百分比为0.2％)70g，湿法装填入渗漉柱(Φ2.0×35cm)内，装填均匀后其堆积体积约为100mL，10℃恒温浸泡2h，使其充分溶胀，开启渗漉柱出口阀，并同时从柱顶连续加入正己烷，控制流速2.5～3.0mL/min，直至收集的渗漉液体积为540mL。

收集的渗漉液作为后续操作的原料液，经分析，固形物浓度为4.8mg/mL，辅酶Q10含量为69.5％，提取率为98.9％，还原型辅酶Q10含量为4.6％，提取率为85.4％。

(2)将渗漉液浓缩除去溶剂，在30℃下添加丙酮至刚好完全溶解，固液比1:60，再将温度逐步降至0℃，冷却结晶6h后过滤，并用适量冷乙醇洗涤。充分抽干后，放入真空干燥箱中30℃干燥6h，得0.93g黄色辅酶Q10精品，纯度为98.0％，此工艺辅酶Q10的收率为51.6％。结晶后的母液进行下一步处理。

(3)将所得母液浓缩后，用正庚烷配制成10mg/mL溶液，还原剂连二亚硫酸钠配制成6.7mg/mL水溶液，25℃下，氮气氛围下，母液和还原剂溶液等体积混合搅拌反应2h，得还原液。经分析，还原反应辅酶Q10转化率99.9％，还原型辅酶Q10产率92.0％。由于辅酶Q10和还原型辅酶Q10在水中基本不溶，因此该工艺还原收率92.0％。

(4)分出上相，将还原液浓缩至300mg/mL，加入等量N,N-二甲基甲酰胺萃取。萃取平衡后，分析萃取液，还原型辅酶Q10含量为82.5％，此工艺还原型辅酶回收率87.7％。萃取后萃余液可再进一步循环套用至还原步骤，萃取阶段回收率可以100％计算，该工艺可认为基本无还原型辅酶Q10损失。

(5)得到的萃取液浓缩至干，在30℃下添加乙醇至刚好完全溶解，添加适量盐酸(100mmol氯化氢/kg乙醇)，固液比1:30，再将温度逐步降至0℃，冷却结晶12h后过滤，并用适量冷乙醇洗涤。充分抽干后，放入真空干燥箱中30℃干燥6h，得0.78g还原型辅酶Q10精品，纯度为98.0％。以菌渣中辅酶Q10和还原型辅酶Q10为基准，整个工艺总收率为87.2％。结晶后的母液可再进一步循环套用至萃取分离步骤，结晶阶段回收率可以100％计算，且萃取后萃余液可再进一步循环套用至还原步骤，萃取阶段回收率可以100％计算，从而使工艺总收率提高至94.4％。

实施例2

(1)、(2)操作方法同实施例1。

(3)将所得母液浓缩后，用正庚烷配制成10mg/mL溶液，还原剂连二亚硫酸钠配制成5.0mg/mL水溶液，25℃下，氮气氛围下，母液和还原剂溶液等体积混合搅拌反应2h，得还原液。经分析，还原反应辅酶Q10转化率92.6％，还原型辅酶Q10产率86.2％。由于辅酶Q10和还原型辅酶Q10在水中基本不溶，因此该工艺还原收率86.2％。

(4)分出上相，将还原液浓缩至300mg/mL，加入等量N,N-二甲基甲酰胺萃取。萃取平衡后，分析萃取液，还原型辅酶Q10含量为78.0％，此工艺还原型辅酶回收率84.3％。萃取后萃余液可再进一步循环套用至还原步骤，萃取阶段回收率可以100％计算，该工艺可认为基本无还原型辅酶Q10损失。

(5)得到的萃取液浓缩至干，在30℃下添加乙醇至刚好完全溶解，添加适量盐酸(100mmol氯化氢/kg乙醇)，固液比1:30，再将温度逐步降至0℃，冷却结晶12h后过滤，并用适量冷乙醇洗涤。充分抽干后，放入真空干燥箱中30℃干燥6h，得0.74g还原型辅酶Q10精品，纯度为98.0％。以菌渣中辅酶Q10和还原型辅酶Q10为基准，整个工艺总收率为85.2％。结晶后的母液可再进一步循环套用至萃取分离步骤，结晶阶段回收率可以100％计算，且萃取后萃余液可再进一步循环套用至还原步骤，萃取阶段回收率可以100％计算，从而使工艺总收率提高至91.8％。

实施例3

(1)、(2)、(3)、(4)操作方法同实施例1。

(5)得到的萃取液浓缩，在30℃下添加丙酮至刚好完全溶解，添加适量盐酸(100mmol氯化氢/kg丙酮)，固液比1:20，再将温度逐步降至5℃，冷却结晶12h后过滤，并用适量冷乙醇洗涤。充分抽干后，放入真空干燥箱中30℃干燥6h，得0.69g还原型辅酶Q10精品，纯度为98.4％。以菌渣中辅酶Q10和还原型辅酶Q10为基准，整个工艺总收率为82.7％。结晶后的母液可再进一步循环套用至萃取分离步骤，结晶阶段回收率可以100％计算，且萃取后萃余液可再进一步循环套用至还原步骤，萃取阶段回收率可以100％计算，从而使工艺总收率提高至94.4％。

辅酶Q10和还原型辅酶Q10浓度测定方法

以上实施例均采用以下方法测试辅酶Q10和还原型辅酶Q10的浓度。

采用美国WATERS高效液相色谱仪建立HPLC分析方法，检测器为紫外检测器；色谱柱为：WATERS Atlantis T3column(250mm×4.6mm,5μm)；进液量：10μL；流动相为甲醇-乙醇(1:1,v/v)；流速：1mL/min；柱温：30℃。

各线性范围：

辅酶Q10：0～3.2mg/mL；还原型辅酶Q10：0～3.1mg/mL。

各标准曲线：

辅酶Q10：y＝8.14322×10⁶x；还原型辅酶Q10：y＝1.09537×10⁶x。x——峰面积，y——浓度。

经检测，辅酶Q10的保留时间为22.779min(附图1)，还原型辅酶Q10的保留时间为13.924min(附图2)。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种同时分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将菌渣进行渗漉提取，收集含辅酶Q10和还原型辅酶Q10的渗漉液；

(2)将步骤(1)所得渗漉液经浓缩处理得固态粗产物，将所述固态粗产物溶解后降温结晶，过滤得到辅酶Q10精品和结晶母液；

(3)将步骤(2)所得母液进行溶剂置换，然后与还原剂混合，还原得还原液；

(4)将步骤(3)所得还原液浓缩后经有机溶剂萃取，得萃取液；

(5)将步骤(4)所得萃取液浓缩后加有机溶剂溶解，冷却结晶后过滤、干燥处理得还原型辅酶Q10精品。

2.根据权利要求1所述同时分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺，其特征在于，步骤(2)中所述降温结晶为：20～70℃下，将浓缩得到的固态粗产物溶解在有机溶剂中，逐步降温至-5～5℃，冷却结晶6～24小时后过滤，得滤液即所述结晶母液，滤饼洗涤后在20～40℃下真空干燥得所述辅酶Q10精品。

3.根据权利要求2所述同时分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺，其特征在于，冷却降温过程中所用有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、正己烷、正庚烷或任意两种的混合物，有机溶剂加入量和固态粗产物的比例为(40～80)mL﹕1g。

4.根据权利要求1所述同时分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺，其特征在于，步骤(3)中将所得母液置换成有机溶剂A的5～20mg/mL溶液，还原剂配制成溶剂B的3～8mg/mL溶液，将两种溶液混合，15～30℃且惰性气体氛围下搅拌反应1～5小时，得还原液。

5.根据权利要求4所述同时分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺，其特征在于，用于母液溶剂置换的有机溶剂为A为乙醇、正己烷、正庚烷和石油醚中任一种；用于配置还原剂的溶剂B为水、乙醇和水/乙醇混合物中任一种；还原剂为硼氢化钠、铁、抗坏血酸和连二亚硫酸钠中任一种；惰性气体为氮气、氩气和二氧化碳中任一种。

6.根据权利要求4所述同时分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺，其特征在于，所述还原剂的加入量为理论氢当量的1～6倍。

7.根据权利要求1所述同时分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺，其特征在于，步骤(4)所述萃取过程为：将所得还原液浓缩至50～700mg/mL，用有机溶剂萃取，得萃取液。

8.根据权利要求7所述同时分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺，其特征在于，萃取过程中所用有机溶剂为甲醇、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺和二甲亚砜中的任一种，有机溶剂用量为浓缩后还原液体积的0.5～1.5倍。

9.根据权利要求1所述同时分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺，其特征在于，步骤(5)所述冷却结晶过程为：将萃取液浓缩后在20～50℃下溶解于有机溶剂中，逐步降温至-10～0℃，冷却结晶6～24小时后过滤，滤饼洗涤后在20～40℃下真空干燥得还原型辅酶Q10精品。

10.根据权利要求9所述同时分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺，其特征在于，步骤(5)中冷却结晶所用有机溶剂为甲醇、丙酮、乙醇、乙腈或任意两种的混合物；有机溶剂加入量和浓缩后固体的比例为(20～50)L：1kg，并同时添加适量酸。