CN106117033A - 一种同时分离制备高纯度辅酶q10和还原型辅酶q10的工艺 - Google Patents
一种同时分离制备高纯度辅酶q10和还原型辅酶q10的工艺 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种同时分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺,以菌渣为原料进行渗漉提取得含辅酶Q10和还原型辅酶Q10的渗漉提取液,通过结晶分离出大部分辅酶Q10,并将结晶母液还原得还原液,还原液经萃取得到含还原型辅酶Q10的萃取液,将萃取液进行结晶处理分离出还原型辅酶Q10,最终得到了纯度达98%以上的高纯度辅酶Q10和纯度达98%以上的高纯度还原型辅酶Q10,总收率为94%以上,整个工艺简单可靠、易操作,易于实现,参数便于控制。
Description
技术领域
本发明属化学工程技术领域,特别涉及一种同时分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺流程。具体而言,是利用渗漉提取、结晶纯化、还原反应、萃取分离等组合分离工序,分离制备得到高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10精品。
背景技术
辅酶Q类化合物是一种广泛存在自然界的脂溶性醌类化合物,人体内存在的是辅酶Q10,其标准命名为2,3-二甲氧基-5-甲基-6-癸异戊烯基-苯醌。其结构式如下:
辅酶Q10具有清除自由基和抗氧化、增强人体免疫力和抗肿瘤、加强心脏动力和增强脑力以及调节血脂等生理功能。因此辅酶Q10在医学上有较好的应用,主要被用于治疗心血管疾病、慢性肝炎、乳腺癌、乙型脑炎、神经***疾病以及皮肤性疾病等。另一方面,辅酶Q10也被广泛地应用于食品、保健品以及化妆品中。随着对辅酶Q10功能的深入研究,其在医药品、化妆品、食品以及保健品领域都将有更加广阔的应用前景。
还原型辅酶Q10是辅酶Q10的还原产物,辅酶Q10的对苯醌结构还原为对苯二酚结构。其结构式如下:
辅酶Q10有保护心血管和延缓衰老等作用,但其并不能被人体直接吸收和利用,而是需要先转化为还原型辅酶Q10。还原型辅酶Q10比辅酶Q10具有更强的清除自由基和抗氧化、增强人体免疫力和抗肿瘤、加强心脏动力和增强脑力以及调节血脂等生理功能,可应用于医药品、化妆品、食品以及保健品领域。更重要的是,随着年龄的增长,人体将辅酶Q10转化成还原型辅酶Q10的能力会降低,因此人体直接补充还原型辅酶Q10更有利于其有效地吸收、利用。因此分离制备高纯度的辅酶Q10和还原型辅酶Q10十分关键。
辅酶Q10和还原型辅酶Q10广泛存在于动植物体中,如大豆、鱼类、猪肉、羊肉、牛肉以及奶类等。目前,辅酶Q10和还原型辅酶Q10的来源除天然来源外,还包括化学合成以及微生物发酵法等。天然来源中辅酶Q10和还原型辅酶Q10的含量相对较低,而微生物发酵法通过培育高效菌种,能大大提高辅酶Q10和还原型辅酶Q10的产量,更适合作为生产辅酶Q10和还原型辅酶Q10的来源。微生物发酵产物中,往往同时存在辅酶Q10和还原型辅酶Q10,因此利用微生物发酵产物分离制备高纯度的辅酶Q10和还原型辅酶Q10从而充分地将两者加以利用具有十分重要的现实意义和经济价值。
现有技术中,主要为微生物发酵产物中提取分离辅酶Q10,或微生物发酵产物中提取分离还原型辅酶Q10,而未将发酵产物中的辅酶Q10和还原型辅酶Q10同时提取分离,造成其中的辅酶Q10或还原型辅酶Q10以杂质的形式被浪费。公开号为CN103819326A的中国专利文献公开了一种超声破碎提取、层析纯化制备辅酶Q10的方法。此工艺能制备得到辅酶Q10,但未提及对发酵产物中所含的还原型辅酶Q10的处理,造成对其的浪费。公开号为CN103740777A的中国专利文献公开了一种选育、培养一种还原型辅酶Q10菌株,并从其发酵产物中提取分离还原型辅酶Q10的方法,但未提及对发酵产物中可能所含的辅酶Q10的处理,造成对其的浪费。
因此,现有的从微生物发酵产物中提取、纯化辅酶Q10或还原型辅酶Q10的工艺,都只关注其中一种,而另一产物则被当做杂质废弃,造成了有效物质的极大浪费。因而需要在现有技术的基础上,组合、简化、优化工艺,寻找到一种工艺简单、低成本、高收率的从微生物发酵产物中分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的方法。
发明内容
本发明提供了一种同时分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺,最终得到了纯度98%以上的高纯度辅酶Q10和纯度98%以上的高纯度还原型辅酶Q10,总收率为94%以上,整个工艺简单可靠、易操作,易于实现,参数便于控制。
一种分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺,包括如下步骤:
(1)渗漉提取:将菌渣进行渗漉提取,收集含辅酶Q10和还原型辅酶Q10的渗漉液。
步骤(1)所述渗漉提取过程如下:
将菌渣装入渗漉柱,向渗漉柱中加入正己烷,5~30℃下浸泡90~120min,保温状态下,在渗漉柱中进行渗漉操作,收集出口处含辅酶Q10和还原型辅酶Q10的渗漉液,并同时以0.5~3BV/h的流速向渗漉柱中连续补加提取剂,直至收集到的渗漉液的体积为4~6BV。
优选地,浸泡时加入的提取溶剂的体积为0.6~1BV。
步骤(1)中在5~30℃下用正己烷提取,辅酶Q10以及还原型辅酶Q10在该温度下的正己烷中溶解度较大,而菌渣中其他成分在其中的溶解度相对较小,因此该温度下,辅酶Q10和还原型辅酶Q10的提取率高,而杂质的含量低,从而在提高辅酶Q10和还原型辅酶Q10提取率的同时提高其在提取物中的含量。辅酶Q10的提取率能达到95%以上,还原型辅酶Q10的提取率能达到85%以上,渗漉提取液中辅酶Q10的质量百分比为65%~75%(以干基为基准),还原型辅酶Q10的质量百分比为4%~10%(以干基为基准),提取液中同时含有辅酶Q10异构体、其余辅酶Q类物质等杂质。最优选在10℃操作温度下,用正己烷提取。
将原料菌渣浸泡90~120min,使菌渣充分溶胀,渗漉时需保证菌渣能够完全浸泡在提取溶剂中。保温状态下在收集渗漉液的同时向渗漉柱中连续补加提取溶剂,从而在保证辅酶Q10和还原型辅酶Q10高提取率的同时减少溶剂消耗,并降低回收溶剂的能耗。连续补加的提取溶剂流速优选为0.5~3BV/h。在该流速范围内,既可以保证提取溶剂和菌渣有充分的接触时间,提高溶剂的利用率,又能兼顾生产能力。
该步骤中为了提高溶剂的利用效率,可对溶剂按以下方式进行回收处理:收集得到的渗漉液浓缩成固态粗提物的过程中,回收分离出的溶剂,其在下次渗漉过程中可作为新鲜溶剂重复利用。
(2)结晶:将步骤(1)所得渗漉液经浓缩除溶剂处理得到固态粗产物,将所述固态粗产物溶解,降温结晶,过滤得到辅酶Q10精品和结晶母液。
步骤(2)所述结晶过程如下:
在20~70℃下,将浓缩得到的固态粗产物溶解在有机溶剂中,得到澄清溶液,逐步降温至-5~5℃,冷却结晶6~24小时后过滤,所得滤液即结晶母液,所得滤饼用适量冷乙醇洗涤,20~40℃下真空干燥6~12小时得纯度98%以上的辅酶Q10精品。
优选的,该步骤中所述有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、正己烷、正庚烷或任意两种的混合物,其加入量和固态粗产物的比例为(40~80)mL﹕1g。若有机溶剂加入量过低,辅酶Q10结晶纯度过低;若有机溶剂加入量过高,辅酶Q10产率过低,因此需要合理控制有机溶剂的加入量,以兼顾辅酶Q10的纯度和产率。
所用有机溶剂进一步优选为丙酮,加入量和固态粗产物比例优选为60mL:1g。
优选的,该步骤结晶温度为-5~0℃,结晶时间为6~12小时。若结晶温度过低或结晶时间过长,得到的辅酶Q10纯度过低,因此要合理控制结晶温度和时间。该步骤结晶温度进一步优选为0℃,结晶时间进一步优选为6h。
由于提取得到的固态粗提物中辅酶Q10的含量相对较高,因此该步骤通过结晶分离出提取物中大部分辅酶Q10,适当降低辅酶Q10的收率而保证了结晶得到的辅酶Q10的纯度。其余部分辅酶Q10留在母液中,通过后续步骤对其做进一步处理。
(3)还原:将步骤(2)所得母液进行溶剂置换,然后与还原剂混合,还原得还原液;
步骤(3)所述还原过程如下:
将所得母液置换成有机溶剂A的5~20mg/mL溶液,还原剂配制成溶剂B的3~8mg/mL溶液,将两种溶液等体积混合,15~30℃且惰性气体氛围下搅拌反应1~5小时,得还原液。
优选的,该步骤中所述有机溶剂A为乙醇、正己烷、正庚烷和石油醚中任一种;母液的有机溶剂A溶液的浓度进一步优选为5~20mg/mL,最优选为10mg/mL。
优选的,该步骤所述溶剂B为水、乙醇和水/乙醇混合物中任一种。
进一步优选水,还原反应后可与有机溶剂分相,从而直接分离部分水溶性杂质。
优选的,该步骤中所述还原剂为硼氢化钠、铁、抗坏血酸和连二亚硫酸钠中任一种。
进一步优选连二亚硫酸钠,还原剂能较好的溶解在水中,还原剂氧化产物能溶剂在水中直接除去,不产生新的杂质。
优选的,该步骤所述还原反应在15~30℃下进行,惰性气体为氮气。惰性气体氛围下反应,能保证还原得到的还原型辅酶Q10不会再次被氧化,从而保证了还原反应的效率。
优选的,该步骤所述还原剂的B溶液中还原剂的加入量是所需理论氢当量的1~6倍。若还原剂加入量过低,导致辅酶Q10不能完全被还原成还原型辅酶Q10,若还原剂加入量过高,导致还原剂的浪费。因此合理控制还原剂的加入量,兼顾还原反应的效率和经济效益。
进一步优选还原剂的B溶液中还原剂的加入量是所需理论氢当量的2~5倍。
由于结晶母液中同时存在一定量的辅酶Q10和还原型辅酶Q10,但两者含量都不高,因此该步骤通过加入还原剂将绝大部分辅酶Q10还原成还原型辅酶Q10,还原型辅酶Q10成为目标产物。通过对还原液的进一步处理分离出还原型辅酶Q10。
(4)萃取:将步骤(3)所得还原液浓缩,经有机溶剂萃取,得萃取液。
优选的,该步骤中还原液浓缩至50~700mg/mL;进一步优选为200~400mg/mL。
优选的,该步骤中所述有机溶剂为甲醇、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺和二甲亚砜中的任一种,用量为浓缩后还原液体积的0.5~1.5倍。
该步骤中所述有机溶剂进一步优选N,N-二甲基甲酰胺。
该步骤中萃取结束后静置10~60min分层后分离得到两相。能将绝大部分还原型辅酶Q10萃取到萃取相中,同时将少量的未还原的辅酶Q10留在萃余相中,较好地将辅酶Q10和还原型辅酶Q10分离。萃取后得到的含少量辅酶Q10和还原型辅酶Q10的萃余液并入结晶母液进行还原,避免辅酶Q10和还原型辅酶Q10损失。
(5)结晶:将步骤(4)所得萃取液浓缩,有机溶剂溶解后冷却结晶,过滤、干燥处理后得还原型辅酶Q10精品。
步骤(5)所述结晶过程如下:
将萃取液浓缩后在20~50℃下溶解于有机溶剂中,得到澄清溶液,逐步降温至-10~0℃,冷却结晶6~24小时后过滤,所得晶体用适量冷乙醇洗涤后在20~40℃下真空干燥得还原型辅酶Q10精品。
结晶母液可并入萃取液中,进行萃取、结晶处理,以提高还原型辅酶Q10的回收率。
优选的,该步骤所述有机溶剂为甲醇、丙酮、乙醇、乙腈或任意两种的混合物,加入量和浓缩后固体的比例为(20~50)L:1kg。所述有机溶剂最优选为乙醇,加入量最优选为30L:1kg。
优选的,该步骤有机溶剂中添加一定量的酸,以利于还原型辅酶Q10在空气中保持稳定。所述酸优选为盐酸,加入量为100mmol氯化氢/kg乙醇。得到结晶产品后,挥发性酸更易于除去,避免酸残留。
优选的,该步骤中降温幅度为0.5~3℃/min,结晶温度为-10~0℃,进一步优选为-5~0℃;最优选为0℃。
本发明中所涉及到的术语意义具体解释如下:
BV:床层体积,将菌渣湿法装填入渗漉柱,菌渣处于自由堆积状态下的体积。
固形物浓度100mg/mL的溶液,是指每毫升溶液浓缩至质量不变时含有100mg固形物,由于溶液成分复杂,会有一定的不溶物质,计算总质量时指的是整个体系的总质量,包括悬浮或沉淀的质量。
干基是指溶液干燥后得到的固体的质量,即溶液中的全部溶质的质量总和。
理论氢当量是指还原反应中,完全还原辅酶Q10时所需还原剂活泼氢的量。
本发明的工艺采用低温渗漉法代替溶剂浸取法从菌渣中提取辅酶Q10和还原型辅酶Q10,大大降低了提取过程的溶剂消耗和废液产出,采用结晶先分离出了大部分辅酶Q10,通过还原和萃取分离辅酶Q10和还原型辅酶Q10避免了还原型辅酶Q10的浪费,在简单工艺和低成本的条件下实现同时分离制备高纯度的辅酶Q10和还原型辅酶Q10,获得了高的总收率。
本发明中采用渗漉法从菌渣中提取辅酶Q10和还原型辅酶Q10,与常规的溶剂浸取法相比,渗漉过程中始终保持着原料内外最大的浓度梯度,可以加速溶出传质,显著提高提取速率、降低溶剂消耗,使辅酶Q10提取率达到95%以上,还原型辅酶Q10的提取率能达到85%以上,渗漉提取液中辅酶Q10的质量百分比(以干基为准)在65%~75%之间,还原型辅酶Q10的质量百分比(以干基为准)在4%~10%之间。
本发明采用结晶,先将固态粗提物中的大部分辅酶Q10结晶分离,适当降低辅酶Q10的收率而保证了结晶得到的辅酶Q10的高纯度。其余部分辅酶Q10留在母液中,通过后续步骤对其做进一步处理。
本发明通过还原反应还原结晶母液中剩余的辅酶Q10,将其转化为还原型辅酶Q10,还原型辅酶Q10成为目标产物。合理转化了剩余辅酶Q10的同时也能将原本较少的还原型辅酶Q10高纯度地分离出来。
本发明采用萃取分离还原后的还原型辅酶Q10和少量辅酶Q10,并将萃取后得到的含辅酶Q10和还原型辅酶Q10的萃余液并入结晶母液进行还原,避免辅酶Q10和还原型辅酶Q10损失。
并采用一次结晶得到纯度达98%以上的还原型辅酶Q10精品,并将结晶后母液并入萃取液中,进行萃取、结晶处理,提高了还原型辅酶Q10的收率。
总的来说,本发明将以上五道工序结合起来从菌渣中提取、提纯、分离辅酶Q10和还原型辅酶Q10的技术,相对现有技术所具有的有益效果如下:
本发明的工艺路线短,对生产设备要求低,操作简单;本工艺路线中的各溶剂均可回收,因此本工艺中大多数的原料均可重复利用;还原步骤有效的利用了原本含量较低的还原型辅酶Q10,同时制备得到了高纯度的辅酶Q10和还原型辅酶Q10;萃余液和结晶母液的循环套用大大提高的工艺过程的总收率。本工艺路线中工艺流程简单、生产成本低、生产效率高,易于工业化大规模生产。
附图说明
图1为根据本发明建立的测定纯品辅酶Q10浓度方法而得到的HPLC色谱图。
图2为根据本发明建立的测定纯品还原型辅酶Q10浓度方法而得到的HPLC色谱图。
具体实施方式
下面结合一种分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的制备方法和测试结果对本发明进一步说明。
实施例1
(1)称取菌渣(其中,辅酶Q10质量百分比为2.6%,还原型辅酶Q10质量百分比为0.2%)70g,湿法装填入渗漉柱(Φ2.0×35cm)内,装填均匀后其堆积体积约为100mL,10℃恒温浸泡2h,使其充分溶胀,开启渗漉柱出口阀,并同时从柱顶连续加入正己烷,控制流速2.5~3.0mL/min,直至收集的渗漉液体积为540mL。
收集的渗漉液作为后续操作的原料液,经分析,固形物浓度为4.8mg/mL,辅酶Q10含量为69.5%,提取率为98.9%,还原型辅酶Q10含量为4.6%,提取率为85.4%。
(2)将渗漉液浓缩除去溶剂,在30℃下添加丙酮至刚好完全溶解,固液比1:60,再将温度逐步降至0℃,冷却结晶6h后过滤,并用适量冷乙醇洗涤。充分抽干后,放入真空干燥箱中30℃干燥6h,得0.93g黄色辅酶Q10精品,纯度为98.0%,此工艺辅酶Q10的收率为51.6%。结晶后的母液进行下一步处理。
(3)将所得母液浓缩后,用正庚烷配制成10mg/mL溶液,还原剂连二亚硫酸钠配制成6.7mg/mL水溶液,25℃下,氮气氛围下,母液和还原剂溶液等体积混合搅拌反应2h,得还原液。经分析,还原反应辅酶Q10转化率99.9%,还原型辅酶Q10产率92.0%。由于辅酶Q10和还原型辅酶Q10在水中基本不溶,因此该工艺还原收率92.0%。
(4)分出上相,将还原液浓缩至300mg/mL,加入等量N,N-二甲基甲酰胺萃取。萃取平衡后,分析萃取液,还原型辅酶Q10含量为82.5%,此工艺还原型辅酶回收率87.7%。萃取后萃余液可再进一步循环套用至还原步骤,萃取阶段回收率可以100%计算,该工艺可认为基本无还原型辅酶Q10损失。
(5)得到的萃取液浓缩至干,在30℃下添加乙醇至刚好完全溶解,添加适量盐酸(100mmol氯化氢/kg乙醇),固液比1:30,再将温度逐步降至0℃,冷却结晶12h后过滤,并用适量冷乙醇洗涤。充分抽干后,放入真空干燥箱中30℃干燥6h,得0.78g还原型辅酶Q10精品,纯度为98.0%。以菌渣中辅酶Q10和还原型辅酶Q10为基准,整个工艺总收率为87.2%。结晶后的母液可再进一步循环套用至萃取分离步骤,结晶阶段回收率可以100%计算,且萃取后萃余液可再进一步循环套用至还原步骤,萃取阶段回收率可以100%计算,从而使工艺总收率提高至94.4%。
实施例2
(1)、(2)操作方法同实施例1。
(3)将所得母液浓缩后,用正庚烷配制成10mg/mL溶液,还原剂连二亚硫酸钠配制成5.0mg/mL水溶液,25℃下,氮气氛围下,母液和还原剂溶液等体积混合搅拌反应2h,得还原液。经分析,还原反应辅酶Q10转化率92.6%,还原型辅酶Q10产率86.2%。由于辅酶Q10和还原型辅酶Q10在水中基本不溶,因此该工艺还原收率86.2%。
(4)分出上相,将还原液浓缩至300mg/mL,加入等量N,N-二甲基甲酰胺萃取。萃取平衡后,分析萃取液,还原型辅酶Q10含量为78.0%,此工艺还原型辅酶回收率84.3%。萃取后萃余液可再进一步循环套用至还原步骤,萃取阶段回收率可以100%计算,该工艺可认为基本无还原型辅酶Q10损失。
(5)得到的萃取液浓缩至干,在30℃下添加乙醇至刚好完全溶解,添加适量盐酸(100mmol氯化氢/kg乙醇),固液比1:30,再将温度逐步降至0℃,冷却结晶12h后过滤,并用适量冷乙醇洗涤。充分抽干后,放入真空干燥箱中30℃干燥6h,得0.74g还原型辅酶Q10精品,纯度为98.0%。以菌渣中辅酶Q10和还原型辅酶Q10为基准,整个工艺总收率为85.2%。结晶后的母液可再进一步循环套用至萃取分离步骤,结晶阶段回收率可以100%计算,且萃取后萃余液可再进一步循环套用至还原步骤,萃取阶段回收率可以100%计算,从而使工艺总收率提高至91.8%。
实施例3
(1)、(2)、(3)、(4)操作方法同实施例1。
(5)得到的萃取液浓缩,在30℃下添加丙酮至刚好完全溶解,添加适量盐酸(100mmol氯化氢/kg丙酮),固液比1:20,再将温度逐步降至5℃,冷却结晶12h后过滤,并用适量冷乙醇洗涤。充分抽干后,放入真空干燥箱中30℃干燥6h,得0.69g还原型辅酶Q10精品,纯度为98.4%。以菌渣中辅酶Q10和还原型辅酶Q10为基准,整个工艺总收率为82.7%。结晶后的母液可再进一步循环套用至萃取分离步骤,结晶阶段回收率可以100%计算,且萃取后萃余液可再进一步循环套用至还原步骤,萃取阶段回收率可以100%计算,从而使工艺总收率提高至94.4%。
辅酶Q10和还原型辅酶Q10浓度测定方法
以上实施例均采用以下方法测试辅酶Q10和还原型辅酶Q10的浓度。
采用美国WATERS高效液相色谱仪建立HPLC分析方法,检测器为紫外检测器;色谱柱为:WATERS Atlantis T3column(250mm×4.6mm,5μm);进液量:10μL;流动相为甲醇-乙醇(1:1,v/v);流速:1mL/min;柱温:30℃。
各线性范围:
辅酶Q10:0~3.2mg/mL;还原型辅酶Q10:0~3.1mg/mL。
各标准曲线:
辅酶Q10:y=8.14322×106x;还原型辅酶Q10:y=1.09537×106x。x——峰面积,y——浓度。
经检测,辅酶Q10的保留时间为22.779min(附图1),还原型辅酶Q10的保留时间为13.924min(附图2)。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明技术原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种同时分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺,其特征在于,包括如下步骤:
(1)将菌渣进行渗漉提取,收集含辅酶Q10和还原型辅酶Q10的渗漉液;
(2)将步骤(1)所得渗漉液经浓缩处理得固态粗产物,将所述固态粗产物溶解后降温结晶,过滤得到辅酶Q10精品和结晶母液;
(3)将步骤(2)所得母液进行溶剂置换,然后与还原剂混合,还原得还原液;
(4)将步骤(3)所得还原液浓缩后经有机溶剂萃取,得萃取液;
(5)将步骤(4)所得萃取液浓缩后加有机溶剂溶解,冷却结晶后过滤、干燥处理得还原型辅酶Q10精品。
2.根据权利要求1所述同时分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺,其特征在于,步骤(2)中所述降温结晶为:20~70℃下,将浓缩得到的固态粗产物溶解在有机溶剂中,逐步降温至-5~5℃,冷却结晶6~24小时后过滤,得滤液即所述结晶母液,滤饼洗涤后在20~40℃下真空干燥得所述辅酶Q10精品。
3.根据权利要求2所述同时分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺,其特征在于,冷却降温过程中所用有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、正己烷、正庚烷或任意两种的混合物,有机溶剂加入量和固态粗产物的比例为(40~80)mL﹕1g。
4.根据权利要求1所述同时分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺,其特征在于,步骤(3)中将所得母液置换成有机溶剂A的5~20mg/mL溶液,还原剂配制成溶剂B的3~8mg/mL溶液,将两种溶液混合,15~30℃且惰性气体氛围下搅拌反应1~5小时,得还原液。
5.根据权利要求4所述同时分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺,其特征在于,用于母液溶剂置换的有机溶剂为A为乙醇、正己烷、正庚烷和石油醚中任一种;用于配置还原剂的溶剂B为水、乙醇和水/乙醇混合物中任一种;还原剂为硼氢化钠、铁、抗坏血酸和连二亚硫酸钠中任一种;惰性气体为氮气、氩气和二氧化碳中任一种。
6.根据权利要求4所述同时分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺,其特征在于,所述还原剂的加入量为理论氢当量的1~6倍。
7.根据权利要求1所述同时分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺,其特征在于,步骤(4)所述萃取过程为:将所得还原液浓缩至50~700mg/mL,用有机溶剂萃取,得萃取液。
8.根据权利要求7所述同时分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺,其特征在于,萃取过程中所用有机溶剂为甲醇、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺和二甲亚砜中的任一种,有机溶剂用量为浓缩后还原液体积的0.5~1.5倍。
9.根据权利要求1所述同时分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺,其特征在于,步骤(5)所述冷却结晶过程为:将萃取液浓缩后在20~50℃下溶解于有机溶剂中,逐步降温至-10~0℃,冷却结晶6~24小时后过滤,滤饼洗涤后在20~40℃下真空干燥得还原型辅酶Q10精品。
10.根据权利要求9所述同时分离制备高纯度辅酶Q10和还原型辅酶Q10的工艺,其特征在于,步骤(5)中冷却结晶所用有机溶剂为甲醇、丙酮、乙醇、乙腈或任意两种的混合物;有机溶剂加入量和浓缩后固体的比例为(20~50)L:1kg,并同时添加适量酸。
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