CN106103423A - 化学化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了具有化学式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐；用于制备此类化合物的方法；并且提供了此类化合物在治疗ENaC介导的疾病状态(如哮喘、CF或COPD)中的用途。

Description

化学化合物
本发明涉及具有药学活性的吡嗪衍生物，涉及用于制备此类衍生物的方法，涉及包含此类衍生物的药物组合物并且涉及此类衍生物作为活性治疗剂的用途。
肺部气道上皮的水化确保了高效的纤毛功能，并且粘膜纤毛清除(MCC)是一个关键的第一线的气道先天防御机制。适当的粘液清除故障产生粘液淤滞和气道阻塞的风险，并且使易感于慢性细菌感染。黏液分泌过多、黏液增厚、降低的粘膜纤毛清除率已很好地建立了囊性纤维化(CF)和慢性阻塞性肺病(COPD)两者的病理生理学的特征，并且显著地造成了疾病的发病率和死亡率。差的MCC通过静粘液导致气道阻塞，这损害肺功能并作为感染促进细菌定植的病灶并导致疾病发作的增加的速率和严重性。
CF的病理生理学是充分表征的，并且由在导致气道脱水的囊性纤维化跨膜传导调节蛋白(CFTR)基因中的突变引起，并仍是世界上最常见的致命的遗传性疾病之一。虽然CF是一个复杂的多器官疾病，但是发病率和死亡率主要由慢性阻塞性肺疾病来决定，该疾病由小气道中的早发性粘液阻塞、慢性中性粒细胞呼吸道炎症以及细菌感染演变而来。
COPD的病理生理学是复杂的并且理解甚少。目前的临床准则将COPD描述为由气流受限表征的疾病状态，其是不完全可逆的。所述气流受限通常既是进行性的，并且与肺对有害颗粒和气体的异常炎症应答有关。这种颗粒和气体的最重要的贡献源是烟草烟雾。COPD患者具有多种症状，包括咳嗽、气短和过度产生痰；此类症状由多个细胞区室，包括中性粒细胞、巨噬细胞以及上皮细胞的功能障碍引起的。
适当的的气道水化对于保持MCC和适当的粘液含水量是至关重要的。气道水化的调控与上皮细胞层上的电解质和水运动密切相关。气道上皮面上的环绕纤毛的周围纤毛液体(PCL)从上皮面隔离了粘性粘液层并促进纤毛跳动。PCL的体积/深度已显示是MCC速率的强决定子。
ENaC的(上皮钠通道)是在呼吸道、泌尿、消化道、生殖***和皮肤的上皮广泛表达的阿米洛利敏感的、非电压门控离子通道。***地，ENaC通过在肾上皮上调节Na+的传输，在电解质稳态和体液体积平衡中起着关键作用。通过对钠传输的控制，ENaC控制在气道上皮的渗透压梯度，并由此调节PCL体积。阻塞的ENaC介导的钠传输降低了上皮上的渗透压梯度，导致气道表面上的水滞留(PCL体积增加)、以及粘液水化和MCC率的增强。
ENaC作为气道表面液体(ASL)体积及体内粘膜纤毛清除(MCC)的关键调节子的作用被建立在文献中。在α-β-和γ-ENaC(-/-)小鼠上的研究，分别显示了ENaC功能在围产期肺部液体清除中的关键作用(巴克(Barker)等人，临床研究杂志(J.Clin.Invest.)，1998.102(8)：1634；邦妮(Bonny)和哈姆勒(Hummler)，国际肾脏(Kidney Int.)，2000.57(4)：1313；(普瑞德瓦德)Pradervand等人，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.U SA.)，1999.96(4)：1732)。ENaCβ-亚基过表达的转基因小鼠显示增加的气道Na+吸收、ASL体积消耗、粘液脱水以及延缓的MCC。小鼠发展具有类似于CF和COPD临床特征的严重肺病，包括粘液阻塞、杯状细胞化生、中性粒细胞炎症、有缺陷的细菌清除和肺气肿(玛尔(Mall)等人，自然医学(Nature Med.)，2004.10：487；玛尔等人，美国呼吸和重症监护医学杂志，2007.177：730)。在其生命的前20天期间，由于气道的广泛粘液堵塞导致窒息，这些转基因小鼠中的死亡率在50％左右，但通过给药阿米洛利至出生后14天的小鼠的肺部，死亡率被显著降低(玛尔等人，ATS会议摘要(ATS Poster abstract)#G55，2008)。
此外，患有假性醛固酮增多症1(PHA1)(一种由编码α-β-和γ-ENaC的基因中的功能缺失突变引起的疾病)的人，显示增加的ASL体积和MCC的上调(凯雷姆(Kerem)等人，新英格兰医学(N.Engl.Med.)，1999.341：156)。用ENaC通道阻断化合物阿米洛利治疗正常受试者，增加了ASL体积和MCC速率(苏德(Sood)等人，美国危重护理医学杂志(Am.J.Crit.CareMed.)，2003.167：158)。
阿米洛利和benzamil是已知的阻断上皮钠通道的药理学上有活性的吡嗪衍生物。
简要地，本说明书部分描述了具有化学式(I)化合物：
其中：
R1选自氢或C1-4烷基；
m是1或2；
A选自苯基或杂环基；
X选自-C(＝O)-、-C(＝O)-NR4-或-O-C(＝O)-NR5-；
n是2或3；
R2选自氢或C1-8烷基；
R3是C5-6烷基-OH，其中所述C5-6烷基基团进一步被另外的3或4个-OH基团取代；并且
R4和R5选自氢或C1-4烷基；
或其药学上可接受的盐。
本说明书还部分描述了包括具有化学式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的辅助剂、稀释剂或载体的药物组合物。
本说明书还部分描述了具有化学式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐，用于治疗。
本说明书还部分描述了具有化学式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐，用于治疗或预防ENaC介导的疾病状态。
本说明书还部分描述了具有化学式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐，用于生产用于治疗或预防ENaC介导的疾病状态的药物。
本说明书还部分描述了，在正患有ENaC介导的疾病状态或处于所述疾病的风险的哺乳动物中治疗或预防所述疾病的方法，该方法包括向需要此类治疗的哺乳动物给药治疗有效量的具有化学式(I)的化合物、或其药学上可接受的盐。
通过阅读本说明书，本发明的另外的方面对于本领域技术人员而言将是明显的。
本发明的这些化合物可以按盐形式或按非盐形式(即作为游离碱)存在，并且本发明覆盖了盐形式和非盐形式这两者。
在本说明书中所述的化合物可以形成酸加成盐。一般地，可以使用不同的无机酸或有机酸制备酸加成盐。典型地可以通过例如使用本领域已知的不同方法，将该化合物与酸(例如化学计算量的酸)混合，形成此类盐。这一混合可以发生在水中，有机溶剂(例如醚、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、异丙醇、或乙腈)中，或水性的/有机的混合物中。
在本发明的另一方面，酸加成盐例如是三氟乙酸盐、甲酸盐、乙酸盐或盐酸。
技术人员将清楚制备药用盐的一般原理和方法，如那些例如，(贝尔热)Berge等人，药物科学杂志(J.Pharm.Sci.)，66，1-19(1977)中所述的。
本说明书中所述的化合物和盐可以包括一个或多个手性(即不对称的)中心。本说明书中的结构或化学名称并不表明手性的程度，该结构或名称旨在涵盖对应于该结构或名称的任何单一手性立体异构体(即任何单一手性异构体)，连同立体异构体的任何混合物(例如外消旋体)。在一些实施例中，通过使用例如手性色谱分离，从异构体的混合物中分离单一立体异构体而获得它。在其他实施例中，通过从例如手性起始材料进行直接合成，获得单个立体异构体。
当在固体结晶形式下，具有化学式(I)的化合物可以与另一种化学实体处于共结晶形式，并且本发明涵盖所有这样的共结晶。
本发明的这些化合物可以连同非溶剂化形式作为溶剂化物(如水合物)存在，并且本发明覆盖了所有这样的溶剂化物。
本说明书中所述的化合物和盐可以按多种互变异构形式存在，并且本发明涵盖了所有这样的互变异构形式。“互变异构体”是结构异构体，其存在于由氢原子的迁移产生的平衡中。
本说明书中所述的化合物和盐可以是同位素-标记的(或“放射性-标记的”)。在这种情况下，一个或多个原子被另一个原子替换，该另一个原子具有不同于典型地在自然界中发现的原子质量或质量数的原子质量或质量数。可以掺入的放射性核素的实例包括2H(对于氘，也写作“D”)、3H(对于氚，也写作“T”)、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O以及36Cl。使用的放射性核素将取决于放射性-标记的衍生物的具体应用。例如，对于体外受体标记和竞争测定，3H或14C通常是有用的。对于放射-成像应用，11C经常是有用的。在一些实施例中，该放射性核素是3H。在一些实施例中，该放射性核素是14C。在一些实施例中，该放射性核素是11C。
烷基基团和部分是直链的或支链的，例如C1-8烷基、C1-6烷基、C1-4烷基或C5-6烷基。烷基基团的实例是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、正戊基、正己基、正庚基以及正辛基，如甲基或正己基。
杂环基是非芳香族5元或6元环，该环包含一个或两个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；或其N-氧化物，或其S-氧化物或S-二氧化物。杂环基的实例是包含一个或两个氮原子的非芳香族5元或6元环；或其N-氧化物，或其S-氧化物或S-二氧化物，例如，吡咯烷基或哌啶基，如哌啶-4-基。为避免疑义，杂环基环上的这些取代基可以经碳原子或杂原子连接。
术语“药学上可接受的”用于表征如适合在预期患者中使用的部分(例如盐、剂型或赋形剂)。
在一个具体的方面中，R1在相对于具有化学式(I)的剩余的附接点的2位置处被苯基基团取代。
在另一方面中，R1是C1-4烷基。
在另一方面中，R1是甲基。
在另一方面中，m是1。
在又一另一方面中，A选自苯基或哌啶基。
在另一方面中，A是苯基。
在另一方面中，A是哌啶基。
在另一方面中，X是-C(＝O)-NR4-。
在另一方面中，X是-C(＝O)-NH-。
在一方面中，其中该基团X是-C(＝O)-NR4-，然后X的羰基与A连接并且X的氨基基团与(CH2)n连接。在另一方面中，其中该基团X是-C(＝O)-NR4-，然后X的氨基基团与A连接并且X的羰基基团与(CH2)n连接。
在一方面中，其中该基团X是-O-C(＝O)-NR5-，然后X的醚氧与A连接并且X的氨基基团与(CH2)n连接。在另一方面中，其中该基团X是-O-C(＝O)-NR5-，然后X的氨基基团与A连接并且X的醚氧与(CH2)n连接。
在另一方面中，该基团X在相对于具有化学式(I)的剩余的附接点的4位置处被基团A取代。
在另一方面中，n是2。
在另一方面中，R2是C1-8烷基。
在又一另一方面中，R2是正己基。
在另一方面中，R3是C5烷基-OH，其中所述的C5烷基基团进一步被另外的3个-OH基团取代。
在另一方面中，R3是C6烷基-OH，其中所述的C6烷基基团进一步被另外的4个-OH基团取代。
在另一方面中，R3选自以下：
在另一方面中，R3选自以下：
在另一方面中，R3选自以下：
在另一方面中，R3选自(2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基、(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基、(2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基或(2R,3S,4S)-2,3,4,5-四羟基戊基。
在另一方面中，R3选自(2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基、(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基或(2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基。
在另一方面中，R5是氢。
在另一方面中，R1是C1-4烷基；m是1或2；A是苯基或哌啶基；X选自-C(＝O)-、-C(＝O)-NR4-或-O-C(＝O)-NR5-；n是2或3；R2是氢或C1-8烷基；R3是C5-6烷基-OH，其中所述的C5-6烷基基团进一步被另外的3或4个-OH基团取代；并且R4和R5都是氢。
在另一方面中，R1是C1-4烷基；m是1；A是苯基或哌啶基；X是-C(＝O)-NH-；n是2；R2是C1-8烷基；R3选自以下：
在另一方面中，R1是C1-4烷基；m是1；A是苯基；X是-C(＝O)-NH-；n是2；R2是C1-8烷基；并且R3选自以下：
在本发明的另一方面中，本发明的这些化合物在以下化学式(Ia)中用星号(*)标记的碳中心处表现出R立体化学：
本发明的化合物的一个实例是：
3,5-二氨基-6-氯-N-(2-(2-甲基苄基)-3-(((1-(3-((2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-(3-((4-((2-(己基(2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-(3-((1-(2-(己基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基氨基甲酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-(3-((1-(3-(己基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-(3-((1-(3-(己基(2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-(3-((1-(4-(己基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-(2-(2-甲基苄基)-3-((1-(3-(2,3,4,5,6-五羟基己基氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-(3-((1-(3-(己基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-(3-((4-((2-(己基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-(3-((4-((2-(己基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
4-((3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基氨基)甲基)苯基2-(己基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基氨基甲酸酯；
3,5-二氨基-6-氯-N-(3-((4-((2-(己基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-(3-((4-((2-(己基(2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-(3-((4-((2-(己基(2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-(3-(3-(2-(己基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基氨基甲酰基)苯乙基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
或其药学上可接受的盐。
本发明的化合物的另一实例是：
3,5-二氨基-6-氯-N-(2-(2-甲基苄基)-3-(((1-(3-(((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-(3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-(3-((1-(2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基氨基甲酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-(3-((1-(3-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-(3-((1-(3-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-(3-((1-(4-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-(2-(2-甲基苄基)-3-((1-(3-((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-(3-((1-(3-(己基((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-(3-((4-((2-(己基((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-(3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
4-((3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基氨基)甲基)苯基2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基氨基甲酸酯；
3,5-二氨基-6-氯-N-(3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-(3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-(3-((4-((2-(己基((2R,3S,4S)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-(3-(3-(2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基氨基甲酰基)苯乙基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
或其药学上可接受的盐。
本发明的化合物的另一实例是：
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-2-(2-甲基苄基)-3-(((1-(3-(((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((1-(2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基氨基甲酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((1-(3-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((1-(3-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((1-(4-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-2-(2-甲基苄基)-3-((1-(3-((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((1-(3-(己基((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
4-(((R)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基氨基)甲基)苯基2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基氨基甲酸酯；
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-((S)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-((S)-3-((4-((2-(己基((2R,3S,4S)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-(3-(2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基氨基甲酰基)苯乙基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
或其药学上可接受的盐。
本发明的另一个特征是，任何以上所述的实施例的条件是任何具体的实例单独地被否认。例如，另一个特征是，任何以上所述的实施例的条件是选自本发明的化合物的以上列出的实例的任何化合物单独地被否认。
在一些实施例中，该化合物是具有化学式(I)的化合物，排除在以下实例中列举的至少一种化合物。为了说明，在一些此类实施例中，该化合物是具有化学式(I)的化合物，排除实例X中所披露的化合物，其中X可以是1、2、3等。在其他实施例中，该化合物是具有化学式(I)的化合物，排除实例Y中所披露的化合物，其中Y可以是1、2、3等的任意组合。
具有化学式(I)的化合物可以根据方案1从具有化学式(II)的化合物制备，其中R1、R2、R3、A、X、m以及n是如化学式(I)中所定义的，并且其中p＝m-1。
方案1：
a)NaH(OAc)3、AcOH、THF或NaBH4、MeOH
可替代地，具有化学式(I)的化合物可以按方案2中所述的方式制备，其中R1、R2、R3、A、X、m以及n是如化学式(I)中所定义的，并且其中Y是卤素(例如，氯、溴或碘)并且p＝m-1。
方案2：
a)NaH或K2CO3或Cs2CO3或DIEA，DMF。
可替代地，具有化学式(I)的化合物可以通过适合的多羟基化的烷基醛(如己糖或戊糖(R3-醛))的还原烷基化，在最后步骤引入R3来制备，如方案3中所述的，并且其中R1、R2、R3、A、X、m以及n是如化学式(I)中所定义的。存在于R3中的多羟基烷基链可以由任何适合的纯保护基团进行保护，例如，如通过P.G.M.伍兹(Wuts)，Th.W.格林(Greene)，有机合成中的格林氏保护基团(Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis)，威利国际科学出版社(Wiley-Interscience)，纽约，2006所述的。此外，如技术人员将清楚的是，并且如本文的实例中所述，存在于具有化学式(II)的化合物中的另外的氨基基团可被适合的氨基保护基团保护，例如，如在伍兹(Wuts)和格林(Greene)(以上)中所述的，如被二叔丁基碳酸氢钠(Boc)或芴基甲基氧基羰基(FMoc)保护基团保护。
方案3：
a)NaBH(OAc)3或NaBH3CN、AcOH、THF或NaBH4、MeOH
具有化学式(II)的化合物可以通过如方案5(J.C.D.穆勒-哈特维希(Müller-Hartwieg)，L.拉韦基亚(La Vecchia)，H.迈尔(Meyer)，A.K.贝克(Beck)，D.塞巴赫(Seebach)，有机合成(Org.Synth.)85(2008)，295)中所述的方法或通过方案4和方案6中显示的方法对映有选择地进行制备，其中R1是如化学式(I)中所定义的。
方案4：
a)i)L-proline、DMF，ii)NaBH4、MeOH；b)Phtalimide、PPh3、DEAD、THF；c)CH3NH2、EtOH，d)Boc2O、DCM、TEA；e)Pd(OH)2、H2、MeOH、70psi；f)(3-氯-5-(1H-咪唑-1-基羰基)吡嗪-2,6-二胺、DIPEA、NMP；g)TFA、DCM；h)NaOH、THF。
方案5：
a)BuLi、THF；b)TiCl4、TEA、DCM；c)LiOH、H2O2、THF、H2O；d)(COCl)2、NH4OH、DCM；e)BH3*THF；f)NMP；g)TFA、DCM；h)NaOH、THF。
方案6：
a)二烯丙基碳酸盐、脂肪酶PS-C Amano II、MTBE；b)酸(例如D-酒石酸)，重结晶；c)10M NaOH、MTBE；d)(BOC)2O、MTBE；e)LiBH4、Pd(PPh3)4、THF；f)CDI；iPrOAc；g)TFA、DCM；h)NaOH、THF。
方案4、5以及6描述了具有化学式(II)的化合物(R)-对映体的获得。可以等同地应用在这些方案中描述的反应，以通过使用逆转的绝对构型的起始材料或具有不同立体特异性的酶获得相关的(S)-对映体。
可替代地，具有(S)-构型的具有化学式(II)的化合物可以如方案7中所示的进行制备。
方案7：
a)CDI；iPrOAc；b)LiBH4、Pd(PPh3)4、THF。
方案6的步骤(a)中所描述的方法包括使用二烯丙基碳酸盐进行二胺(III)的酶介导的去对称化。
针对此反应的适合的酶包括脂肪酶，具体是起源于南极假丝酵母或洋葱假单胞菌的脂肪酶。适合的酶包括IMM CALB(南极假丝酵母脂肪酶B)、IMM CALBY(南极假丝酵母脂肪酶B)、Novozym 435(南极假丝酵母脂肪酶B)、Amano脂肪酶PS-C1(洋葱假单胞菌脂肪酶)、Amano脂肪酶PS-IM(洋葱假单胞菌脂肪酶)以及Amano脂肪酶PS-D(洋葱假单胞菌脂肪酶)，如Amano脂肪酶PS-C1、Amano脂肪酶PS-D以及Amano脂肪酶PS-IM。该反应可以在一系列极性和非极性溶剂以及其混合物内进行，这些溶剂包括叔丁基二甲基醚(TBME)、四氢呋喃(THF)、甲基-THF(MeTHF，例如2-甲基-THF)、庚烷、以及甲苯(如MeTHF)。该反应可以在以下温度范围内进行，例如0℃至50℃，例如15℃至35℃，例如约30℃。可以任选地通过本领域技术人员已知的拆分方法，例如通过从酒石酸盐结晶，来提高所得的粗产物的对映体过量。
在本发明的另一方面中，提供了用于制备具有化学式(IV)的化合物的方法，其中R1是如以上(如化合物(R)-烯丙基-(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯)所定义的：
包括在二烯丙基碳酸盐存在下进行二胺(III)的酶介导的去对称化，并且此后任选地进行对映体的拆分。在另一方面中，该酶选自起源于南极假丝酵母抑或洋葱假单胞菌中的一种，如IMM CALB(南极假丝酵母脂肪酶B)、IMM CALBY(南极假丝酵母脂肪酶B)、Novozym 435(南极假丝酵母脂肪酶B)、Amano脂肪酶PS-C1(洋葱假单胞菌脂肪酶)、Amano脂肪酶PS-IM(洋葱假单胞菌脂肪酶)以及Amano脂肪酶PS-D(洋葱假单胞菌脂肪酶)。在另一方面中，该酶选自Amano脂肪酶PS-C1，Amano脂肪酶PS-D以及Amano脂肪酶PS-IM，如Amano脂肪酶PS-IM。
在本发明的另一方面中，提供了化合物(R)-烯丙基-(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯。
在另一方面中，提供了化合物(R)-烯丙基-(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯作为药用中间体的用途。在另一方面中，提供了化合物(R)-烯丙基-(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯作为中间体在生产具有化学式(I)的化合物中的用途。
本发明的这些化合物的详细的方法进一步描述于以下实例中。
本说明书中所述的化合物和盐可以用于多种方法，以便治疗动物，尤其是哺乳动物中的各种失调。哺乳动物包括，例如人类。
本发明的这些化合物及其药学上可接受的盐，具有作为药物制剂(具体是作为ENaC的调节剂)的活性，并且可以用于治疗呼吸道疾病、骨和关节疾病、以及其他自身免疫失调和过敏性失调。
可以用本发明的化合物或其药学上可接受的盐治疗的疾病状态包括但不限于呼吸道疾病，如：气道阻塞疾病，包括哮喘，包括支气管的、过敏性的、内源性的、外源性的、运动诱发的、药物诱发的(包括阿司匹林和NSAID诱发的)以及粉尘诱发的哮喘，间歇性和持续性两者以及所有严重性的，以及气道高反应性的其他起因；肺慢性阻塞性疾病(COPD)；支气管炎，包括传染性和嗜曙红细胞性支气管炎；肺气肿；支气管扩张；囊性纤维化；结节病；农民肺和相关疾病；超敏感性肺炎；肺纤维化，包括隐原性纤维化肺泡炎、特发性间质肺炎、特发性肺纤维化、纤维变性并发抗肿瘤治疗和慢性感染，包括结核病和曲霉病及其他真菌感染；肺移植的并发症；肺血管的脉管炎和血栓疾病及肺动脉高压；止咳活性，包括治疗气道的炎性和分泌条件相关的久咳和医源性咳嗽；急性和慢性鼻炎，包括药物性鼻炎和血管舒缩性鼻炎；全年性鼻炎和季节性变应性鼻炎，包括神经性鼻炎(枯草热)；鼻息肉病；急性病毒感染，包括普通感冒和呼吸道合胞体病毒、流感病毒、冠状病毒(包括SARS)和腺病毒导致的感染；急性肺损伤；或成人呼吸窘迫综合征(ARDS)。
在本发明的另一方面中，可以用本发明的化合物或其药用盐治疗的呼吸道疾病包括：慢性阻塞性肺病(COPD)；支气管炎，包括传染性和嗜曙红细胞性支气管炎；支气管扩张；囊性纤维化；止咳活性，包括治疗气道的炎性和分泌条件相关的久咳和医源性咳嗽；哮喘，包括支气管的、过敏性的、内源性的、外源性的、运动诱发的、药物诱发的(包括阿司匹林和NSAID诱发的)以及粉尘诱发的哮喘，间歇性和持续性两者以及所有严重性的，以及气道高反应性的其他起因。
在本发明的又一另一方面中，可以用本发明的化合物或其药用盐治疗的疾病状态包括慢性阻塞性肺病(COPD)、囊性纤维化、哮喘、慢性支气管炎以及支气管扩张。
在本发明的又一另一方面中，可以用本发明的化合物或其药用盐治疗的疾病状态是慢性阻塞性肺病(COPD)。
在本发明的一方面中，提供了具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗COPD。
在本发明的另一方面中，提供了具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于生产用于治疗COPD的药物。
在本发明的另一方面中，提供了在正患有COPD或处于所述疾病的风险中的哺乳动物中治疗或预防所述疾病的方法，该方法包括向需要此类治疗的哺乳动物给药治疗有效量的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在本发明的又一另一方面中，可以用本发明的化合物或其药用盐治疗的疾病状态是囊性纤维化(CF)。
在本发明的一方面中，提供了具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗CF。
在本发明的另一方面中，提供了具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于生产治疗CF的药物。
在本发明的另一方面中，提供了在正患有CF或处于所述疾病的风险中的哺乳动物中治疗或预防所述疾病的方法，该方法包括向需要此类治疗的哺乳动物给药治疗有效量的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
当本说明书中所描述的化合物或盐被给药以治疗失调时，“治疗有效量”是满足以下条件的一个量：足以减少或完全减轻失调的症状或其他有害作用；治愈该失调；反转、完全停止、或减慢该失调的进展；或降低该失调变得更坏的风险。
在其中使用了联合治疗的一些实施例中，在动物患者中，对于治疗靶向的失调，当联合时，本说明书中所描述的化合物或盐的量和其他一种或多种药学上有活性的药剂的量是治疗有效的。在本上下文中，如果当联合时，这些量足以满足以下条件，则它们就是“治疗有效量”：减少或完全减轻该失调的症状或其他有害作用；治愈该失调；反转、完全停止、或减慢该失调的进展；或降低该失调变得更坏的风险。典型地，本领域普通技术人员可以通过例如从针对化合物或盐的本说明书中所描述的剂量范围开始，以及从其他一种或多种药学上有活性的化合物的一个或多个批准的或另外公开的剂量范围开始，来确定此类量。
为了将本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于对哺乳动物(如人类)进行治疗性处理，通常按照标准药物实践将所述成分配制成药物组合物。因此，在另一个方面，本发明提供了包含具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐(活性成分)以及药学上可接受的辅助剂、稀释剂或栽体的药物组合物。
在另一个方面，本发明提供了制备所述组合物的方法，该方法包括将活性成分与药学上可用的辅助剂、稀释剂或栽体混合。基于给予模式，该药物组合物将包括例如从0.05％w至99％w(重量百分数)(如从0.05％w至80％w)，例如从0.10％w至70％w(如从0.10％w至50％w)的活性成分，所有重量百分数都基于全部组合物。
对于需要治疗的疾病状态，本发明的药物组合物可按标准方式给药，例如通过局部给药(如给药至肺和/或气道或给药至皮肤)、吸入给药、口服给、、直肠给药或肠胃外给药。出于这些目的，本发明的这些化合物可以通过本领域已知的方法进行配制。本发明的适合药物组合物为适于以单位剂量形式口服给药的药物组合物，例如包含0.1mg至1g活性成分的片剂或胶囊剂。
每位患者可以接受，例如，给药的活性成分的0.0001mg kg-1至10mg kg-1的剂量，例如在0.005mg kg-1至5mg kg-1的范围内，例如1至4次每天。
在本发明的实施例中，提供了包含具有化学式(I)的化合物联合药学上可接受的辅助剂、稀释剂或栽体的药物组合物，将其配制用于吸入给药(包括口腔和鼻腔给药)。
可以使用适合的递送装置给药具有化学式(I)的化合物，例如从干粉吸入器、计量吸入器、喷雾器或鼻腔递送装置。此类装置是众所周知的。
干粉吸入器可用于单独地或与药学上可接受的载体组合来给药具有化学式(I)的化合物，在后一种情况下作为细碎粉末或有序的混合物。该干粉吸入器可以是单剂量的或多剂量的，并且可以利用干粉末或包含粉末的胶囊。
因此在一个实施例中，该具有化学式(I)的化合物，或包含具有化学式(I)的化合物的药物组合物，通过干粉吸入器(DPI)的方式被给药。
该DPI可以是“被动的”或呼吸启动的、或“主动的”，其中该粉末被不是患者吸入的一些机制(例如压缩空气的内部供给)分散。目前，三种类型的被动干粉吸入器是可用的：单剂量，多单位剂量或多剂量(储器)吸入器。在单剂量装置中，个别剂量通常以明胶胶囊被提供，并且在使用前已经装载进吸入器中，这些装置中的实例包括斯宾哈勒(安内特公司(Aventis))、罗特哈勒(葛兰素史克公司(GlaxoSmithKline))、AeroliserTM(诺华(Novartis))、(勃林格公司(Boehringer))以及伊柯丽斯(Eclipse)(安内特公司(Aventis))装置。多单位剂量吸入器包含许多独立包装的剂量，作为多个明胶胶囊或起疱剂，这些吸入器中的实例包括迪斯科哈勒(葛兰素史克公司)、迪斯科思(葛兰素史克公司)、奈克斯哈勒(凯西公司(Chiesi))以及(勃林格公司)装置。在多剂量装置中，药物储存在整装粉末储器(其中个别剂量被计量)中，这些装置的实例包括(阿斯利康公司(AstraZeneca))、(阿斯利康公司(AstraZeneca))、(奥立安(Orion))、(ASTA制药公司)、(Innovata生物医学公司)、(梯瓦公司(Teva))以及(凯西公司)装置。
在DPI中使用的可吸入的药物组合物可以通过将细碎的活性成分(具有一般等于或小于10μm的空气动力学直径，如等于或小于5μm，例如从1至5μm)与载体物质(例如单糖、二糖或多糖，糖醇或另一种多元醇)混合来制备。适合的载体为糖，例如，乳糖、葡萄糖、棉子糖、松三糖、乳糖醇、麦芽糖醇、海藻糖、蔗糖、甘露醇；以及淀粉。适当的活性成分的颗粒附着于载体颗粒上以形成有序的(交互的)粉末混合物。这些载体颗粒可以具有从20至1000μm，更通常地从50至500μm的质量中位直径。
可替代地，可吸入的药物组合物可以通过将细碎粉末(例如由细碎的活性成分与细碎的载体颗粒组成)加工成在吸入过程期间破裂的球来制备。
该粉末混合物可接着，根据需要，被分配到硬明胶胶囊中，每个胶囊包含所希望剂量的活性成分。可替代地，给粉末混合物可被装载进多剂量吸入器(例如，或)的储器中。
在另一个实施例中，该具有化学式(I)的化合物通过计量吸入器，特别是加压的计量吸入器(pMDI)的方式被给药。该pMDI包含如在加压容器中的适合的溶液或悬浮液的活性。通过致动pMDI装置上的阀门来递送该活性成分。致动可以是手动或呼吸致动。在手动致动pMDI中，该装置是由使用者按他们吸入的，例如通过按下pMDI装置上的适合的释放机构来致动。当患者通过pMDI的嘴件吸入时，呼吸致动pMDI被致动。当该装置的致动被患者的吸入计时，并可以导致该活性成分的更一致的剂量给药时，这可以是有利的。pMDI装置的实例包括例如(阿斯利康公司)。
一种用于在pMDI中使用的可吸入的药物组合物可以通过将具有化学式(I)的化合物溶解或分散于适合的推进剂，和添加或不添加附加的赋形剂如溶剂(例如乙醇)、表面活性剂、润滑剂或稳定剂来制备。适合的推进剂包括烃、含氯氟烃和氢氟烷(例如七氟烷)推进剂，或任何这样的推进剂的混合物。优选的推进剂是P134a和P227，它们各自可单独使用或与其他推进剂和/或表面活性剂和/或其他赋形剂组合使用。
在另一个实施例中，通过计量吸入器与垫片组合的方式给药具有化学式(I)的化合物。适合的垫片是熟知的并且包括(阿斯利康公司)或(葛兰素史克公司)。
在另一个实施例中，通过喷雾器的方式给药具有化学式(I)的化合物。适合的喷雾器是熟知的并且包括(PARI GmbH)。
用于在喷雾器中使用的可吸入的药物组合物可以通过将具有化学式(I)的化合物分散或优选地是溶解在适合的水介质中。该组合物还可以包括例如适合的pH和/或张力调节、表面活性剂以及防腐剂。例如，适合于从喷雾器吸入的组合物包含分散于包含氯化钠(9mg/g)的水介质(mg/g在Mill-Q水中)中的具有化学式(I)的化合物；干燥的柠檬酸(0.0735mg/g)；柠檬酸钠(0.19mg/g)；苯扎氯铵(0.1mg/g)，EDTA(乙二胺四乙酸，0.1mg/g)以及聚山梨醇酯80(0.3mg/g)。
在另一个实施例中，将具有化学式(I)的化合物作为喷雾从适合的鼻部递送装置(例如喷雾泵或MDI)进行鼻腔给药。可替代地，将化合物作为粉末，使用适合的DPI递送装置(例如(阿斯利康公司))进行鼻腔给药。
用于在喷雾泵或MDI鼻部递送装置中使用的可吸入的药物组合物可以通过将具有化学式(I)的化合物分散或优选地是溶解在适合的水介质中。该组合物还可以包括例如适合的pH和/或张力调节、表面活性剂、防腐剂、滑润剂、调味剂或黏度调节剂。如果需要的话，以提高从鼻腔的吸收的添加剂可以包括如适合的生物粘附聚合物。涉及DPI递送的用于鼻部递送的适合的干粉组合物如前所述。然而，在希望的是限制该化合物渗透进入肺部并将该化合物保持在鼻腔中的情况下，使用为更大颗粒尺寸的化合物可能是必要的，例如平均粒径大于约10μm的，例如从10μm至50μm。
因此，本发明还提供包含本发明的可吸入的药物组合物的吸入器装置(例如干粉吸入器，特别是一种多单位剂量干粉吸入器，或pMDI吸入器)。
本发明进一步涉及一种组合疗法，其中本发明的化合物或其药学上可接受的盐和第二活性成分同时、依序或混合给予，以用于治疗以上列举的一种或多种病症。这种组合可以与一种或多种另外的活性成分组合使用。
在本发明的另一个方面中，提供了一种药物组合物(例如，用作用于治疗在此列举的疾病或病症之一的药物，这些疾病或病症如CF或COPD)，该药物组合物包括本发明的化合物或其药学上可接受的盐以及选自以下的至少一种另外的活性成分：
a)β-肾上腺素受体激动剂；
b)毒蕈碱型受体拮抗剂；
c)毒蕈碱型受体拮抗剂和β-肾上腺素受体激动剂的结合；
d)toll样受体激动剂(如TLR7或TLR9激动剂)
e)腺苷拮抗剂；
f)糖皮质激素受体激动剂(甾体的或非甾体的)；
g)p38拮抗剂；
h)IKK2拮抗剂；
i)PDE4拮抗剂；
j)趋化因子受体功能的调节剂(如CCR1、CCR2B、CCR5、CXCR2或CXCR3受体拮抗剂)；
k)CRTh2拮抗剂；或
l)渗压剂，例如离子渗压剂，如高渗盐水
如下所定义。
本发明还进一步涉及本发明的化合物，或其药学上可接受的盐，与β-肾上腺素受体激动剂(包括β受体亚型1-4)一起的组合，该β-肾上腺素受体激动剂诸如：特布他林(例如作为硫酸盐)、沙美特罗(例如作为羟萘甲酸盐)、沙丁胺醇(salbutamol)(沙丁胺醇(albuterol))(例如作为硫酸盐)、丙卡特罗(例如作为盐酸盐)、吡布特罗(例如作为醋酸盐)、奥西那林(间羟异丙肾上腺素)(例如作为硫酸盐)、milveterol(例如为盐酸盐)、左沙丁胺醇(levosalbutamol)(左沙丁胺醇(levalbuterol))(例如为盐酸盐)、abediterol、异丙肾上腺素(isoprenaline)(异丙肾上腺素(isoproterenol))(例如为盐酸盐)、茚达特罗(例如作为马来酸盐)、维兰特罗(例如作为三苯乙酸(trifenatate)(三苯基乙酸)盐)、福莫特罗(例如为富马酸盐、例如富马酸二水合物盐)、卡莫特罗、比托特罗(例如为甲磺酸盐)、奥达特罗、贝多拉君(bedoradrine)(例如作为硫酸盐)、班布特罗(例如为盐酸盐)、阿福特罗(例如作为酒石酸盐)、PF-610355(2-[3-[2-[[(2R)-2-羟基-2-[4-羟基-3-(甲磺酰胺)苯基]乙基]氨基]-2-甲基-丙基]苯基]-N-[[3-(4-羟基苯基)苯基]甲基]乙酰胺)、N-(2-二乙基氨基乙基)-N-[2-[2-(4-羟基-2-氧代-3H-1,3-苯并噻唑-7-基)乙基氨基]乙基]-3-[2-(1-萘基)乙氧基]丙酰胺、N-环己基-3-[2-(3-氟苯基)乙基氨基]-N-[2-[2-(4-羟基-2-氧代-3H-1,3-苯并噻唑-7-基)乙基氨基]乙基]丙酰胺、或N-环己基-N-[2-[2-(5-羟基-3-氧代-4H-1,4-苯并噁嗪-8-基)乙基氨基]乙基]-3-[2-[3-(1-甲基吡唑-4-基)苯基]乙氧基]丙酰胺。
本发明还进一步涉及本发明的化合物，或其药学上可接受的盐，与毒蕈碱受体拮抗剂(例如M1、M2或M3拮抗剂，如选择性的M3拮抗剂)一起的组合，该毒蕈碱受体拮抗剂诸如：噻托溴铵(例如作为溴化物盐)、氧托溴铵(例如作为溴化物盐)、异丙托铵(例如作为溴化物盐)、格隆溴铵(例如作为立体异构体的外消旋混合物，或作为R,R-、R,S-、S,R-或S,S-立体异构体，或包含R,R-、R,S-、S,R-或S,S-立体异构体中的两个或更多的混合物)、阿地溴铵(例如作为溴化物盐)、GSK573719(3-[2-[3-(5-环己基氧基羰基-噻吩-2-基)-脲基]-3-(4-羟基-苯基)-丙酰基氨基]-1-(3-羟基-苄基)-1-甲基-哌啶鎓)、BEA2180BR(羟基-二-噻吩-2-基-乙酸8-甲基-8-氮杂-二环[3.2.1]辛-6-烯-3-基酯)(例如作为氢溴酸盐)、[(3R)-1-[2-氧代-2-(2-吡啶基氨基)乙基]奎宁环-1-鎓-3-基]1-苯基环庚烷甲酸酯(例如作为溴化物)、或2-[(4-氯苯基)甲氧基]乙基-[[2-[(R)-环己基-羟基-苯基-甲基]噁唑-5-基]甲基]-二甲基-铵(例如作为萘二磺酸盐)。
本发明还进一步涉及本发明的化合物，或其药学上可接受的盐，与一种试剂的组合，该试剂是毒蕈碱型受体拮抗剂(例如M1、M2或M3拮抗剂，如选择性的M3拮抗剂)和β-肾上腺素受体激动剂的结合，这种试剂诸如：PF4348235([1-[9-[[(2R)-2-羟基-2-[4-羟基-3-(甲磺酰胺)苯基]乙基]氨基]壬基]-4-哌啶基]N-[2-(3-氯-4-羟基-苯基)苯基]氨基甲酸酯)、3-[2-[2-氯-3-[[8-(2-乙基噻唑-4-羰基)-11-氧杂-3,8-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基]甲基]苯基]乙氧基]-N-环戊基-N-[2-[2-(5-羟基-3-氧代-4H-1,4-苯并噁嗪-8-基)乙基氨基]乙基]丙酰胺、N-丁基-N-[2-[2-(5-羟基-3-氧代-4H-1,4-苯并噁嗪-8-基)乙基氨基]乙基]-3-[2-[3-[2-[8-(2-异丙基噻唑-4-羰基)-11-氧杂-3,8-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基]乙基]苯基]乙氧基]丙酰胺、或7-[(1R)-2-[2-[2-氟-5-[[8-(2-异丙基噻唑-4-羰基)-11-氧杂-3,8-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基]甲基]苯基]乙基氨基]-1-羟基-乙基]-4-羟基-3H-1,3-苯并噻唑-2-酮。
本发明还进一步涉及本发明的化合物，或其药学上可接受的盐，与toll样受体激动剂(包括TLR7或TLR9的激动剂)一起的组合，该toll样受体激动剂诸如：洛索立宾(7-烯丙基-2-氨基-9-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基]-1H-嘌呤-6,8-二酮)、甲基2-[3-[[3-(6-氨基-2-丁氧基-8-氧代-7H-嘌呤-9-基)丙基-(3-吗啉基丙基)氨基]甲基]苯基]乙酸盐(例如作为氢溴酸盐、盐酸盐或马来酸氢盐)、4-(二甲基氨基)丁基2-[4-[[2-氨基-4-甲基-6-(戊基氨基)嘧啶-5-基]甲基]苯基]乙酸盐(例如作为二糖盐、富马酸氢盐、二-1-羟基-2-萘甲酸盐或单苯甲酸盐)、或5’-TCG AAC GTT CGA AGA TGA TGA T(如在WO 2004/0158179中的SEQ ID 171中披露的)。
本发明还进一步涉及本发明的化合物，或其药学上可接受的盐，与腺苷拮抗剂一起的组合，该腺苷拮抗剂诸如：瑞加诺生、ATL-313(甲基4-[3-[6-氨基-9-[(2R,3R,4S,5S)-5-(环丙基氨基甲酰基)-3,4-二羟基-四氢呋喃-2-基]嘌呤-2-基]丙-2-炔基]哌啶-1-甲酸酯)、或阿帕诺生(甲基4-[3-[6-氨基-9-[(2R,3R,4S,5S)-5-(乙基氨基甲酰基)-3,4-二羟基-四氢呋喃-2-基]嘌呤-2-基]丙-2-炔基]环己烷甲酸酯)。
本发明还进一步涉及本发明的化合物，或其药学上可接受的盐，与糖皮质激素受体激动剂(甾体的或非甾体的)一起的组合，该糖皮质激素受体激动剂诸如：曲安西龙、曲安奈德、强的松、糠酸莫米松、氯替泼诺、丙酸氟替卡松、氟替卡松糠酸酯、氟轻松、***培酯、去异丁基环索奈德、丙酸氯倍他索、环索奈德、丙酸布替可特、布***、丙酸倍氯米松、二丙酸阿氯米松、(1R,3aS,3bS,10aR,10bS,11S,12aS)-1-{[(氰基甲基)硫代]羰基}-7-(4-氟苯基)-11-羟基-10a,12a-二甲基-1,2,3,3a,3b,4,5,7,10,10a,10b,11,12,12a-十四氢环戊[5,6]萘并[1,2-f]吲唑-1-基2-糠酸酯、(1R,2R,3aS,3bS,10aS,10bR,11S,12aS)-10b-氟-1-{[(氟甲基)磺酰基]羰基}-7-(6-氟吡啶-3-基)-11-羟基-2,10a,12a-三甲基-1,2,3,3a,3b,4,5,7,10,10a,10b,11,12,12a-十四氢环戊[5,6]萘并[1,2-f]吲唑-1-基甲氧基乙酸酯、2,2,2-三氟-N-[(1S,2R)-2-[1-(4-氟苯基)吲唑-5-基]氧基-2-(3-甲氧基苯基)-1-甲基-乙基]乙酰胺、3-[5-[(1R,2S)-1-(4H-1,3-苯并二氧杂苯-7-基)-2-(2,2-二氟丙酰基氨基)丙氧基]吲唑-1-基]-N-(3-吡啶基甲基)苯甲酰胺、3-[5-[(1R,2S)-2-(2,2-二氟丙酰基氨基)-1-(2,3-二氢-1,4-苯并二氧杂苯-6-基)丙氧基]吲唑-1-基]-N-[(3R)-1,1-二氧代硫杂环戊烷-3-基]苯甲酰胺、或3-[5-[(1R,2S)-2-(2,2-二氟丙酰基氨基)-1-(2,3-二氢-1,4-苯并二氧杂苯-6-基)丙氧基]吲唑-1-基]-N-[(3R)-四氢呋喃-3-基]苯甲酰胺。
本发明还进一步涉及本发明的化合物，或其药学上可接受的盐，与p38拮抗剂一起的组合，该p38拮抗剂诸如：PH797804(3-[3-溴-4-(2,4-二氟-苄基氧基)-6-甲基-2-氧代-2H-吡啶-1-基]-4,N-二甲基-苯甲酰胺)、罗斯莫德(losmapimod)、PF03715455(1-[5-叔丁基-2-(3-氯-4-羟基-苯基)吡唑-3-基]-3-[[2-[[3-[2-(2-羟基乙基磺酰基)苯基]-[1,2,4]噻唑并[4,3-a]吡啶-6-基]磺酰基]苯基]甲基]脲)、N-环丙基-4-甲基-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代-喹唑啉-3-基]苯甲酰胺、或N-环丙基-3-氟-4-甲基-5-[3-[[1-[2-[2-(甲基氨基)乙氧基]苯基]环丙基]氨基]-2-氧代-吡嗪-1-基]苯甲酰胺。
本发明还进一步涉及本发明的化合物，或其药学上可接受的盐，与磷酸二酯酶(PDE)抑制剂(如包括茶碱和氨茶碱的甲基黄嘌呤)或选择性PDE同工酶抑制剂(包括PDE4抑制剂或亚型PDE4D的抑制剂)一起的组合，这些抑制剂诸如：替托司特、罗氟司特、奥格司特(oglemilast)、异丁司特、GPD-1116(3-苄基-5-苯基-1H-吡唑并[4,3-c][1,8]萘啶-4-酮)、若诺米拉斯特(ronomilast)、NVP ABE 171(4-[8-(2,1,3-苯并噁二唑-5-基)-1,7-萘啶-6-基]苯甲酸)、RPL554(2-[(2E)-9,10-二甲氧基-4-氧代-2-(2,4,6-三甲苯基)亚氨基-6,7-二氢嘧啶并[6,1-a]异喹啉-3-基]乙基脲)、CHF5480([(Z)-2-(3,5-二氯-4-吡啶)-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙烯基](2S)-2-(4-异丁基苯基)丙酸)、或GSK256066(6-[3-(二甲基氨甲酰基)苯基]磺酰基-4-(3-甲氧基苯胺)-8-甲基-喹啉-3-甲酰胺)。
本发明还进一步涉及本发明的化合物，或其药学上可接受的盐，与IKK2拮抗剂一起的组合，该IKK2拮抗剂诸如：5-(2-异丙基异吲哚啉-5-基)-3-[1-(2-甲氧基乙基磺酰基)-4-哌啶基]-1H-吲哚-7-甲酸。
本发明还进一步涉及本发明的化合物，或其药学上可接受的盐，与趋化因子受体功能调节剂一起的组合，该趋化因子受体功能调节剂诸如CCR1、CCR2、CCR2A、CCR2B、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10或CCR11(针对C-C家族)的拮抗剂，例如CCR1、CCR2B或CCR5受体拮抗剂；CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4或CXCR5(针对C-X-C家族)拮抗剂，例如CXCR2或CXCR3受体拮抗剂；或针对C-X3-C家族的CX3CR1。例如，本发明涉及本发明的化合物与以下各项的组合：PS-031291(吡咯烷-1,2-二羧酸2-[(4-氯-苄基)-甲基-酰胺]1-[(4-三氟甲基-苯基)-酰胺])、CCX-354(1-[4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基]乙酮)、威克瑞洛克(vicriviroc)、马拉维若(maraviroc)、塞尼克瑞威若(cenicriviroc)、纳瓦瑞鑫(navarixin)(2-羟基-N,N-二甲基-3-[[2-[[(1R)-1-(5-甲基-2-呋喃基)丙基]氨基]-3,4-二氧代-丁烯-1-基]氨基]苯甲酰胺)、SB656933(1-(2-氯-3-氟-苯基)-3-(4-氯-2-羟基-3-哌嗪-1-基磺酰基-苯基)脲)、N-[1-[(3R)-3-(3,5-二氟苯基)-3-(1-甲基磺酰基-4-哌啶基)丙基]-4-哌啶基]-N-乙基-2-(4-甲基磺酰基苯基)乙酰胺、N-[2-[(2S)-3-[[1-[(4-氯苯基)甲基]-4-哌啶基]氨基]-2-羟基-2-甲基-丙氧基]-4-羟基-苯基]乙酰胺、2-[2-氯-5-[(2S)-3-(5-氯螺[3H-苯并呋喃-2,4'-哌啶]-1'-基)-2-羟基-丙氧基]-4-(甲基氨基甲酰基)苯氧基]-2-甲基-丙酸、N-[2-[(2,3-二氟苯基)甲基磺酰基]-6-[(1R,2S)-2,3-二羟基-1-甲基-丙氧基]嘧啶-4-基]氮杂环丁烷-1-磺酰胺、或N-[2-[(2,3-二氟苯基)甲基磺酰基]-6-[[(1R,2R)-2,3-二羟基-1-甲基-丙基]氨基]嘧啶-4-基]氮杂环丁烷-1-磺酰胺。
本发明还进一步涉及本发明的化合物，或其药学上可接受的盐，与白三烯生物合成抑制剂、5-脂氧合酶(5-LO)抑制剂或5-脂氧合酶激活蛋白(FLAP)拮抗剂一起的组合，这些抑制剂诸如：TA270(4-羟基-1-甲基-3-辛氧基-7-西那频基氨基-2(1H)-喹啉酮)、PF-4191834(2H-吡喃-4-甲酰胺、四氢-4-[3-[[4-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)苯基]硫]苯基]-)、瑟提乐彤(setileuton)、CMI977(1-[4-[(2S,5S)-5-[(4-氟苯氧基)甲基]四氢呋喃-2-基]丁-3-炔基]-1-羟基-脲)、非勃发朋(fiboflapon)(3-[3-叔-丁基硫烷基-1-[[4-(6-乙氧基-3-吡啶基)苯基]甲基]-5-[(5-甲基-2-吡啶基)甲氧基]吲哚-2-基]-2,2-二甲基-丙酸)、GSK2190915(1H-吲哚-2-丙酸、3-[(1,1-二甲基乙基)硫]-1-[[4-(6-甲氧基-3-吡啶基)苯基]甲基]-α,α-二甲基-5-[(2-吡啶基)甲氧基]-)、利克飞龙、喹夫拉朋(3-[3-叔-丁基硫烷基-1-[(4-氯苯基)甲基]-5-(2-喹啉基甲氧基)吲哚-2-基]-2,2-二甲基-丙酸)、维夫拉朋(veliflapon)((2R)-2-环戊基-2-[4-(2-喹啉基甲氧基)苯基]乙酸)、ABT080(4,4-双[4-(2-喹啉基甲氧基)苯基]戊酸)、齐留通、扎鲁司特、或孟鲁司特。
本发明还进一步涉及本发明的化合物，或其药学上可接受的盐，与CRTh2拮抗剂或DP2拮抗剂一起的组合，该CRTh2拮抗剂或DP2拮抗剂诸如：ACT129968(2-[2-[(5-乙酰-2-甲氧基-苯基)甲基硫烷基]-5-氟-苯并咪唑-1-基]乙酸)、AMG853(2-[4-[4-(叔-丁基氨甲酰基)-2-[(2-氯-4-环丙基-苯基)磺酰基氨基]苯氧基]-5-氯-2-氟-苯基]乙酸)、AM211(2-[3-[2-[[苄基氨甲酰基(乙基)氨基]甲基]-4-(三氟甲基)苯基]-4-甲氧基-苯基]乙酸)、2-[4-乙酰氨基-3-(4-氯苯基)硫烷基-2-甲基-吲哚-1-基]乙酸、(2S)-2-[4-氯-2-(2-氯-4-乙基磺酰基-苯氧基)苯氧基]丙酸、2-[4-氯-2-[2-氟-4-(4-氟苯基)磺酰基-苯基]苯氧基]乙酸、或(2S)-2-[2-[3-氯-4-(2,2-二甲基吡咯烷-1-羰基)苯基]-4-氟-苯氧基]丙酸。
本发明还进一步涉及本发明的化合物，或其药学上可接受的盐，与MK2(MAPKAP激酶2)拮抗剂一起的组合，该拮抗剂诸如：varesplabid、PF-3644022((10R)-10-甲基-3-(6-甲基吡啶-3-基)-9,10,11,12-四氢-8H-[1,4]二氮杂卓并[5',6':4,5]噻吩并[3,2-f]喹啉-8-酮)、或4-苯甲酰基-D-苯基丙氨酰基-D-丝氨酰基-D-色氨酰基-D-丝氨酰基-2,3,4,5,6-五氟-D-苯基丙氨酰基-3-环己基-D-丙氨酰基-D-精氨酰-D-精氨酰-D-精氨酰-D-谷酰胺基-D-精氨酰-D-精氨酸。
本发明还进一步涉及本发明的化合物，或其药学上可接受的盐，与髓过氧化物酶拮抗剂一起的组合，该髓过氧化物酶拮抗剂诸如：白藜芦醇、白皮杉醇、3-[[(2R)-四氢呋喃-2-基]甲基]-2-硫代-7H-嘌呤-6-酮、或1-(2-异丙氧基乙基)-2-硫代-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮。
本发明还进一步涉及本发明的化合物，或其药学上可接受的盐，与渗压剂一起的组合。如本文中所使用的，“渗压剂”是一种渗透性活性的小分子，并且旨在覆盖离子和非离子型渗压剂两者。在本发明的另一方面中，提供了本发明的化合物，或其药学上可接受的盐，与离子型渗压剂(如高渗盐水)一起的组合。
在本发明的又一另一方面中，提供了一种药物组合物(例如，用作用于治疗在此列举的疾病或病症之一的药物，这些疾病或病症如CF或COPD)，该药物组合物包括本发明的化合物或其药学上可接受的盐以及选自以下的至少一种另外的活性成分：
a)β-肾上腺素受体激动剂；
b)毒蕈碱型受体拮抗剂；
c)毒蕈碱型受体拮抗剂和β-肾上腺素受体激动剂的结合；或
d)糖皮质激素受体激动剂(甾体的或非甾体的)；或
e)渗压剂，例如离子型渗压剂，如高渗盐水。
如上所定义。
在本发明的又一另一方面中，该至少一种添加的活性成分是β-肾上腺素受体激动剂。在又一另一方面中，该至少一种添加的活性成分是毒蕈碱型受体拮抗剂。在又一另一方面中，该至少一种添加的活性成分是是糖皮质激素受体激动剂(甾体的或非甾体的)。在又一另一方面中，该至少一种添加的活性成分是是毒蕈碱型受体拮抗剂和β-肾上腺素受体激动剂的结合。在又一另一方面中，该至少一种添加的活性成分是是渗压剂。
本说明书中所描述的这些化合物进一步在以下实例中阐明。这些实例仅是通过说明的方式给出并且是非限制性的。
缩写：
aq 水性
(BOC)2O/Boc 二叔丁基二碳酸酯
CV 柱体积
DEA 二乙胺
DEAD 二乙基氮杂二羧酸酯
DIPA 二异丙胺
DIEA/DIPEA 二异丙基乙胺
ESI 电喷雾电离
FA 甲酸
FMOC/Fmoc 芴基甲基氧基羰基
HATU 1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-***并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸酯
HBSS 汉克氏(Hanks’)平衡盐溶液
HBTU 2-(1H-苯并***-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐
HEPES 2-[4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基]乙磺酸
HPLC 高效液相色谱法
IPA 异丙胺
LC/MS 液相色谱-质谱法
MeTHF 甲基-四氢呋喃
MTBE 叔丁基甲醚
NMP N-甲基吡咯烷酮
Rt 滞留时间
sat. 饱和的
SFC 超临界流体色谱
TBME 叔丁基甲醚
TEA 三乙胺
THF 四氢呋喃
wt-％ 质量-％
通用方法
在Bruker Avance、Avance II或Avance III光谱仪上，在400、500或600MHz的质子频率记录NMR谱。如果报告270MHz的频率的质子的话，使用JEOL EX-270光谱仪。将氯仿-δ(H7.26ppm)、丙酮(H 2.04ppm)、二氯甲烷-d2(H 5.32ppm)、CH3OD(H 3.30ppm)或DMSO-d6(H2.49ppm)的中心峰用作内标准。如本领域中熟知的，可能发生微小变化的化学位移，作为在样品制备中的变化，如被分析物浓度的变化和包括的或省略的添加剂(例如NMR测定标准或三氟乙酸)的结果。
可替代地，在ESI模式中，使用与沃特斯Xevo Q-ToF质谱仪组合的沃特斯AcquityUPLC***，来进行LC/MS实验。LC以两个设定进行：1)BEH C18柱(1.7μm 2.1x 50mm)结合水性46mM碳酸铵/pH 10的氨缓冲液(A)和MeCN(B)的梯度(2％-95％B，5min)，以1.0mL/min的流动速率。2)HSS C18柱(1.8μm 2.1x 50mm)与水性10mM FA/1mM的pH 3甲酸铵缓冲液(A)并且Me CN(B)的梯度(2％-95的％B，5min)，以1.0mL/min的流动速率。
表示为对映异构体过量(％ee)的光学纯度是通过手性HPLC使用Agilent 1100系列色谱仪确定的。方法A：***配备有ChiralpakIC5 250x 4.6mm；5μm。作为流动相，使用庚烷/iPrOH/乙醇胺(60:40:0.1)，流速为1mL/min。注射体积为10μL，并且通过在268nm的UV来进行化合物检测。方法B：配备有Chiralpak IC5 150x 4.6mm，3μm的***。作为流动相，CO2，120巴(A)和MeOH(0.5％DEA)(B)以80/20的A/B比率以及4mL/min的流动速率使用。注射体积是5μL。
用具有整合的MS检测并且装备有来自X-Bridge或Sunfire的制备型C18OBD 5μm19x 150mm柱的沃特斯FractionLynx***来进行制备型HPLC。可替代，使用具有整合的UV检测的Gilson GX-281，装备有Kromasil C8 10μm，20x 250ID抑或50x 250ID mm。作为洗脱液，使用水/MeCN/AcOH(95/5/0.1)或水/0.05％TFA或水/0.1％NH4HCO3(A)以及MeCN(B)梯度。
用具有整合的MS检测，装备有沃特斯Viridis 2-EP或Phenomenex Luna Hilic，30x 250mm，5μm的沃特斯Prep100SCF***来进行制备型SCF。作为洗脱液，应用以下梯度：CO2(100g/min，120巴，40℃)(A)、以及MeOH/NH3(20mM)或MeOH(5％FA)或MeOH(B)。
除非另外说明，否则起始材料是可商购的或先前描述于文献中。所有溶剂和商业试剂都是实验室级别的，并且按原样使用，除非另外陈述。
使用化学作图(ChemDraw)(Ultra 11)命名软件包生成下面实例中所描述的化学名称。本领域技术人员将清楚的是，不同的命名软件包可以对于相同的化合物产生不同的化学名称。仅通过说明的方式，使用ACD/名称2012命名软件包针对以下实例1至16所产生的化学名称，分别是：
3,5-二氨基-6-氯-N-[(2R)-2-(2-甲基苄基)-3-({[1-(3-{[(2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基]氨基}丙酰基)哌啶-4-基]甲基}氨基)丙基]吡嗪-2-甲酰胺；
1-脱氧-1-[(2-{[4-({[(2R)-3-{[(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-基)羰基]氨基}-2-(2-甲基苄基)丙基]氨基}甲基)苯甲酰基]氨基}乙基)(己基)氨基]-D-木糖醇；
1-脱氧-1-{[2-({[4-({[(2R)-3-{[(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-基)羰基]氨基}-2-(2-甲基苄基)丙基]氨基}甲基)哌啶-1-基]羰基}氨基)乙基](己基)氨基}-D-葡萄糖醇；
3,5-二氨基-6-氯-N-[(2R)-3-({[1-(3-{己基[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}丙酰基)哌啶-4-基]甲基}氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基]吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-[(2R)-3-({[1-(3-{己基[(2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基]氨基}丙酰基)哌啶-4-基]甲基}氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基]吡嗪-2-甲酰胺；
1-脱氧-1-[{4-[4-({[(2R)-3-{[(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-基)羰基]氨基}-2-(2-甲基苄基)丙基]氨基}甲基)哌啶-1-基]-4-氧代丁基}(己基)氨基]-D-葡萄糖醇；
3,5-二氨基-6-氯-N-[(2R)-2-(2-甲基苄基)-3-({[1-(3-{[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}丙酰基)哌啶-4-基]甲基}氨基)丙基]吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-[(2R)-3-({[1-(3-{己基[(2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基}丙酰基)哌啶-4-基]甲基}氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基]吡嗪-2-甲酰胺；
1-脱氧-1-[(2-{[4-({[(2R)-3-{[(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-基)羰基]氨基}-2-(2-甲基苄基)丙基]氨基}甲基)苯甲酰基]氨基}乙基)(己基)氨基]-D-甘露醇；
1-脱氧-1-[(2-{[4-({[(2R)-3-{[(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-基)羰基]氨基}-2-(2-甲基苄基)丙基]氨基}甲基)苯甲酰基]氨基}乙基)(己基)氨基]-D-葡萄糖醇；
1-脱氧-1-{[2-({[4-({[(2R)-3-{[(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-基)羰基]氨基}-2-(2-甲基苄基)丙基]氨基}甲基)苯氧基]羰基}氨基)乙基](己基)氨基}-D-葡萄糖醇；
1-脱氧-1-[(2-{[4-(2-{[(2R)-3-{[(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-基)羰基]氨基}-2-(2-甲基苄基)丙基]氨基}乙基)苯甲酰基]氨基}乙基)(己基)氨基]-D-葡萄糖醇；
1-脱氧-1-[(2-{[4-(2-{[(2R)-3-{[(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-基)羰基]氨基}-2-(2-甲基苄基)丙基]氨基}乙基)苯甲酰基]氨基}乙基)(己基)氨基]-D-木糖醇；
1-脱氧-1-[(2-{[4-({[(2S)-3-{[(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-基)羰基]氨基}-2-(2-甲基苄基)丙基]氨基}甲基)苯甲酰基]氨基}乙基)(己基)氨基]-D-木糖醇；
5-脱氧-5-[(2-{[4-({[(2S)-3-{[(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-基)羰基]氨基}-2-(2-甲基苄基)丙基]氨基}甲基)苯甲酰基]氨基}乙基)(己基)氨基]-D-木糖醇；
1-脱氧-1-[(2-{[3-(2-{[(2R)-3-{[(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-基)羰基]氨基}-2-(2-甲基苄基)丙基]氨基}乙基)苯甲酰基]氨基}乙基)(己基)氨基]-D-葡萄糖醇。
实例1
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-2-(2-甲基苄基)-3-(((1-(3-(((2S,3R,4R)-2,3,4,5- 四羟基戊基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺
步骤1
(R)-(9H-芴-9-基)甲基(3-(4-(((3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2- 甲基苄基)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-基)-3-氧代丙基)氨基甲酸酯
将(R)-3,5-二氨基-N-(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)-6-氯吡嗪-2-甲酰胺(318mg，0.91mmol)(中间体A)、(9H-芴-9-基)甲基3-(4-甲酰基哌啶-1-基)-3-氧代丙基氨基甲酸酯(440mg，1.08mmol)(中间体F)和乙酸(80μL，1.40mmol)在干THF(6mL)中的混合物在环境温度下搅拌30min。添加三乙酰氧基硼氢化钠(340mg，1.60mmol)并且将该反应混合物在40℃下再搅拌1.5h。添加水并且将该混合物搅拌5min并且将溶剂蒸发掉。将残余的材料在EtOAc和水之间分配。向该水相中添加10％NaHCO3(水性)直至达到pH 8-9。将各相分离并且将该水相用EtOAc反萃取。将合并的黄色有机相经MgSO4干燥，过滤并且将溶剂蒸发掉。将该粗产物通过制备型HPLC(Kromasil C8；H2O/MeCN/AcOH 95/5/0.2)进行纯化。将有关的级分合并，并在真空中浓缩。添加10％NaHCO3(水性)并且将水相用EtOAc萃取。将该有机相经MgSO4干燥、过滤并蒸发。将残余的粘性油溶解于DCM/庚烷中，以在蒸发后给出呈固体的标题化合物，196mg(29％，纯度87％)。
LC/MS:m/z 739[M+H]+
步骤2
(R)-3,5-二氨基-N-(3-(((1-(3-氨基丙酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基)-2-(2-甲基 苄基)丙基)-6-氯吡嗪-2-甲酰胺
将(R)-(9H-芴-9-基)甲基3-(4-((3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基氨基)甲基)哌啶-1-基)-3-氧代丙基氨基甲酸酯(196mg，0.27mmol)(来自步骤1)溶解于DCM(5mL)中并且用哌啶(0.5mL)处理。将该溶液在环境温度下搅拌3h，然后蒸发以留下黄色固体。
将该粗材料溶解于THF(5mL)和DIPEA(280μL，1.60mmol)中，并且用在THF(1mL)中的(BOC)2O(0.141mL，0.61mmol)处理。将该混合物在环境温度下搅拌。3h后，LC/MS显示仅一小部分转化为单-Boc保护的产物，大多数仍是未反应的胺。添加大量过量的DIPEA和BOC2(O)，并且将该混合物在环境温度下搅拌1h。添加MeCN(2-3ml)以提高可溶性并且将该混合物在50℃下加热2h，然后环境温度下加热过周末。
将挥发物在真空中蒸发并且将残余物在EtOAc和水中分配。通过添加0.5M柠檬酸将水相制成酸性的。添加盐水以帮助各相的分离。将有机相用水和盐水洗涤。
将溶剂蒸发，并且将该残余物溶解于DCM中并且通过快速色谱法(EtOAc/庚烷，梯度30％-100％EtOAc)进行纯化。将溶剂蒸发以得到二-BOC保护的标题化合物(96mg)。
将获得的二-BOC-保护的材料(96mg)溶解于DCM(2mL)中并用TFA(0.5mL)处理，将该溶液在环境温度下搅拌2.5小时。将该混合物蒸发，将残余物溶解于水中并且通过制备型HPLC(Kromasil C8；H2O/MeCN/HCO2H95/5/0.2至60/40/0.2经16min)进行纯化。冷冻干燥得到呈固体的标题化合物(64mg，45％)
LC/MS:m/z 517[M+H]+
1H NMR(500MHz,MeOD)δ1.13-1.34(m,2H),1.83-2.06(m,3H),2.29-2.39(m,1H),2.35(s,3H),2.59-2.93(m,9H),3.08-3.23(m,3H),3.32-3.37(m,1H),3.67-3.74(m,1H),3.87-3.96(m,1H),4.52-4.6(m,1H),7.11-7.22(m,4H),8.51(s,0.4H,甲酸残余物)。
步骤3
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-2-(2-甲基苄基)-3-(((1-(3-(((2S,3R,4R)-2,3,4,5- 四羟基戊基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺
将(R)-3,5-二氨基-N-(3-(((1-(3-氨基丙酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)-6-氯吡嗪-2-甲酰胺(900mg，1.74mmol)溶解于甲醇(10mL)中。添加(2R,3S,4R)-2,3,4,5-四羟基戊醛(261mg，1.74mmol)，随后是五滴水。然后添加氰基硼氢化钠(328mg，5.22mmol)并且通过添加乙酸将pH调至大约7.0。将所得的溶液在室温下搅拌18h。将挥发物去除并将所得的粗产物通过制备型HPLC(H2O/MeCN/AcOH 95/5/0.2至60/40/0.2经20min)进行纯化。收集对应的级分并冷冻干燥。将标题化合物溶解于2M Hcl(4ml)中并冷冻干燥，将程序重复三次，得到标题化合物的HCl盐(144mg，11％)。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ1.30(ddd,2H),1.84-2.13(m,3H),2.32-2.45(m,4H),2.62-2.77(m,2H),2.81-2.98(m,7H),3.15(dd,1H),3.26(d,2H),3.32-3.42(m,2H),3.58-3.83(m,6H),3.95(t,1H),4.06(dd,1H),4.55(s,1H),7.05-7.33(m,4H)。
实例2
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基) 氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺
方法A
步骤1
叔丁基((S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4- ((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基甲酸酯
将(S)-叔丁基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4-((2-(己基氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基甲酸酯(中间体E，1.23g，1.73mmol)、(2R,3S,4R)-2,3,4,5-四羟基戊醛(0.521g，3.47mmol)以及DIPEA(0.303mL，1.73mmol)溶解于MeOH(10mL)中并在室温下搅拌1h。添加氰基硼氢化钠(0.327g，5.20mmol)和乙酸(0.099mL，1.73mmol)并在50℃下持续搅拌3天。将反应冷却至室温，通过添加8％NaHCO3(水性)进行淬灭，搅拌15min并且然后在真空中浓缩。将残余物溶解于EtOAc(100mL)和8％NaHCO3(水性)(50mL)中，震荡并将各相分离。将水相用EtOAc(100mL)萃取。将合并的有机相用Na2SO4(s)干燥，过滤并在真空中蒸发。将该化合物通过制备型HPLC在Kromasil C8柱(10μm 250x50ID mm)上使用梯度为于H2O/MeCN/AcOH 95/5/0.2缓冲液中的20％-60％乙腈，经20分钟以100mL/min的流速进行纯化。将这些化合物通过UV在268nm处检测。收集该化合物并冷冻干燥，以产出呈白色固体的叔丁基((S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4-((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基甲酸酯(1.21g，83％)。
LC/MS:m/z 843.5[M+H]+
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ0.74-0.85(m,3H),1.12-1.27(m,6H),1.27-1.45(m,11H),2.20(s,3H),2.25-2.35(m,1H),2.39-2.66(m,6H),2.9-3.06(m,1H),3.06-3.51(m,12H),3.53-3.6(m,1H),3.6-3.72(m,1H),4.2-4.68(m,5H),6.97(bs,2H),7.03-7.19(m,6H),7.72(d,2H),7.78-7.99(m,1H),8.21-8.36(m,1H)。
步骤2
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基) 氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺二盐酸盐
将乙酰氯(5.69mL，80.0mmol)滴加至MeOH(20mL)的冰浴烧瓶中。将该混合物搅拌5min并且添加叔丁基((S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4-((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基甲酸酯(1.21g，1.43mmol)。将反应在室温下搅拌1.5h并且然后在真空中蒸发。将残余物溶解于水中并冷冻干燥，以产出呈灰白色固体的3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺二盐酸盐(1.17g，100％)。
LC/MS:m/z 743.4[M+H]+
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ0.8-0.9(m,3H),1.2-1.33(m,6H),1.62-1.74(m,2H),2.26(s,3H),2.3-2.41(m,1H),2.59-2.74(m,2H),2.74-2.85(m,1H),2.86-2.98(m,1H),3.09-3.51(m,11H),3.56-3.62(m,1H),3.62-3.75(m,2H),3.99-4.09(m,1H),4.14-4.29(m,2H),4.58(s,4H),7-7.21(m,6H),7.62(d,2H),7.92(d,2H),8.27(t,1H),8.91-9(m,1H),9.16(d,2H),9.52(d,1H)。
步骤3
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基) 氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺
将3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺二盐酸盐(1.17g，1.43mmol)溶解于水(15ml)中并且通过添加10％Na2CO3(水性)碱化至pH大约11。将产物用EtOAc(5x 70mL)萃取。将合并的有机相用Na2SO4(s)干燥，过滤并在真空中蒸发以产出半固体/油。将残余物溶解于乙腈/水中并冷冻干燥，以产出呈灰白色固体的3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺(1.02g，96％)。
LC/MS:m/z 743.5[M+H]+
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ0.75-0.85(m,3H),1.12-1.26(m,6H),1.31-1.43(m,2H),1.94-2.05(m,1H),2.24(s,3H),2.35-2.49(m,5H),2.54-2.65(m,4H),3.14-3.23(m,1H),3.25-3.4(m,5H),3.4-3.49(m,2H),3.53-3.59(m,1H),3.62-3.78(m,3H),4.26(d,1H),4.38(d,1H),4.45(t,1H),4.51(d,1H),6.96(bs,2H),7.03-7.14(m,4H),7.40(d,2H),7.74(d,2H),8.24-8.37(m,2H)。
方法B
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基) 氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺
向一个5L法兰烧瓶中，填充4-甲酰基-N-(2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)苯甲酰胺(中间体I，133g，108.5g有活性的，0.26mol)在EtOH(1500mL)中的溶液、(R)-3,5-二氨基-N-(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)-6-氯吡嗪-2-甲酰胺(中间体A，108.8g，0.31mol)、EtOH(230mL)以及DIPEA(64.4mL，0.37mol)。将该混合物加热至40℃持续1h。向该透明溶液中填充AcOH(45.4ml，0.79mol)。将该溶液搅拌在40℃持续20min。经10min向此中分批填充NaCNBH3(23.2g，0.37mol)，记录气体释放。将该混合物在40℃下搅拌过夜。将反应冷却至室温，小心地用饱和水性NaHCO3(3100mL)淬灭并且在室温下搅拌1h。将该混合物用10％MeOH/EtOAc(2x 5000mL)和10％MeOH/DCM(5000mL)萃取。将各有机相合并，并在真空中浓缩，以提供271g粗材料。NMR分析表明约80％纯度，存在NaCNBH3信号。将残余物溶解于DCM(12L)和IPA(770ml)中。将该混合物用饱和水性NaHCO3(2700ml)和水(770ml)的混合物洗涤。将水相用DCM(1200ml)萃取。将有机物合并，并在真空中浓缩，以提供呈黄色固体的298g(191g有活性的，97％)。HPLC-MS表明88.0％纯度。1H NMR表明约60％纯度，约27wt-％IPA以及约8wt-％中间体A。
将此获得的粗物质(290g，235mmol)稀释于热的MeOH(750mL)中，并且持续添加乙腈(15L)同时从混合物中蒸发恒沸物。约10L的溶剂被蒸发后，将包含胶样沉淀的剩余的混合物在室温下再搅拌4d。
将液相从胶样残余物进行滗析。向该残余物中添加2.5L的乙腈并且在搅拌1h后将乙腈滗析。将此获得的粗物质(约175g)通过HPLC色谱法[CelluCoat 250x 100mm，10μm；流动相：MeOH/MeCN/TEA＝95:5:0.1；注入量：1.0g/周期；周期时间：3.5min]经受最终纯化。标题化合物的产量：148g(77％)。
LC/MS:m/z 743.5[M+H]+
1H NMR(600MHz,DMSO；在阻转异构体峰的情况下，仅主要阻转异构体的移位被报道)δ0.80(t,3H),1.34-1.4(m,2H),1.09-1.24(m,6H),1.34-1.4(m,2H),2.00(s,1H),2.00(s,1H),2.24(s,3H),2.36-2.42(m,1H),2.43-2.49(m,4H),2.51-2.54(m,1H),2.56-2.64(m,4H),3.15-3.22(m,1H),3.23-3.3(m,3H),3.35-3.4(m,1H),3.42(s,1H),3.43-3.49(m,1H),3.54-3.59(m,1H),3.62-3.7(m,2H),3.74(d,1H),4.27(s,1H),4.39(s,1H),4.46(t,1H),4.52(s,1H),6.96(s,1H),7.03-7.08(m,2H),7.40(d,2H),7.74(d,2H),8.26-8.31(m,1H),8.31-8.35(m,1H)。
13C NMR(151MHz,DMSO)δ13.91,19.04,22.08,26.48,26.61,31.27,34.23,37.42,38.60,41.55,50.84,53.06,53.44,54.55,57.43,62.65,69.23,71.12,72.61,112.95,117.12,125.54,125.83,126.89,127.72,129.63,130.03,132.85,135.82,138.74,144.02,152.69,154.14,165.55,166.01。
手性HPLC(方法A；庚烷/IPA/TEA 75:25:0.1)：98.9％ee，Rt＝14.75min(R)，18.63min(S))。
实例3
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((1-(2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基 己基)氨基)乙基氨基甲酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺
步骤1：
(9H-芴-9-基)甲基2-(((2S,3R)-2,3-二羟基-3-((4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3- 二噁烷-4-基)丙基)(己基)氨基)乙基氨基甲酸酯
向100-mL圆底烧瓶中放入9H-芴-9-基甲基N-(2-氨基乙基)氨基甲酸酯盐酸盐(1.50g，4.71mmol，1.0当量)、(2R,4aR,7R,8R,8aS)-2-苯基-六氢-2H-吡喃并[3,2-d][1,3]二噁英-6,7,8-三醇(1.51g，5.63mmol，1.20当量)、甲醇(30mL)。搅拌以上混合物30min后，添加NaBH3CN(590mg，9.39mmol，2.00当量)、AcOH(570mg，9.49mmol，2.0当量)。将所得的溶液在室温下搅拌过夜。然后添加己醛(530mg，5.29mmol，1.50当量)，随后是更多的NaBH3CN(450mg，7.16mmol，2.00当量)。将所得溶液在室温下搅拌5小时。然后将其在真空下浓缩。将所得的混合物用水洗涤，用乙酸乙酯萃取并且将各有机层合并，并经Na2SO4干燥。将固体过滤掉。这生成1.6g(73％)呈浅黄色油状的标题化合物。
LC/MS:m/z 619[M+H]+
1H NMR(300MHz,CD3OD):1.80-1.92(m,3H),1.15-1.40(m,6H),1.41-1.72(m,2H),2.88-3.15(m,5H),3.33-3.43(m,2H),3.55-3.61(m,1H),3.67-3.83(m,1H),3.85-4.12(m,3H),4.22-4.40(m,4H),5.57(s,1H),7.33-7.65(9H,m),7.67(d,2H),7.83(d,2H)。
步骤2：
(1R,2S)-3-((2-氨基乙基)(己基)氨基)-1-[(2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二 噁烷-4-基]丙烷-1,2-二醇
向50-mL圆底烧瓶中放入9H-芴-9-基甲基N-(2-[[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4-基]丙基](己基)氨基]乙基)氨基甲酸酯(1.6g，2.59mmol，1.0当量)、甲醇(10mL)、二乙胺(5mL)。将所得的溶液在室温下搅拌过夜。将残余物施加到硅胶柱上并且用氨/MeOH(1:100)洗脱。这生成600mg(59％)呈黄色固体的标题化合物。
LC/MS:m/z 397[M+H]+
步骤3：
(9H-芴-9-基)甲基(S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基) 丙基((1-(2-(((2S,3R)-2,3-二羟基-3-((2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4-基) 丙基)(己基)氨基)乙基氨基甲酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸酯
向50-mL圆底烧瓶中放入(S)-(9H-芴-9-基)甲基-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基(哌啶-4-基甲基)氨基甲酸酯(中间体B，400mg，0.60mmol，1.0当量)、三乙胺(177mg，1.75mmol，3.0当量)、在DCM(5mL)中的三光气(173mg，0.58mmol，1.0当量)。将所得的溶液在室温下搅拌0.5h。将所得的混合物用3x 10mL的水洗涤。将所得的混合物在真空下浓缩，以给出中间体甲酰胺氯，将其滴加(溶解于DCM中)至三乙胺(177mg，1.75mmol，3.0当量)和(1R,2S)-3-[(2-氨基乙基)(己基)氨基]-1-[(2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4-基]丙烷-1,2-二醇(347mg，0.88mmol，1.50当量)在DCM(5mL)中的溶液中，在室温下搅拌2h。将所得混合物在真空中浓缩。将残余物通过制备型TLC用DCM/MeOH(10:1)进行纯化。这生成145mg(22％)呈黄色固体的标题化合物。
LC/MS:m/z 1090[M+H]+
步骤4：
(9H-芴-9-基)甲基(S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基) 丙基((1-(2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基氨基甲酰基)哌啶- 4-基)甲基)氨基甲酸酯
向8-mL小瓶中放入(9H-芴-9-基)甲基(S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基((1-(2-(((2S,3R)-2,3-二羟基-3-((2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4-基)丙基)(己基)氨基)乙基氨基甲酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸酯(144mg，0.13mmol，1.0当量)、乙醇(0.5mL)、4M HCl(3mL)。将所得的溶液在室温下搅拌过夜。将所得的混合物在真空下浓缩。这生成120mg呈黄色油状的(粗)标题化合物。
LC/MS:m/z 1002[M+H]+
步骤5：
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((1-(2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基 己基)氨基)乙基氨基甲酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺
向50-mL圆底烧瓶中放入(9H-芴-9-基)甲基(S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基((1-(2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基氨基甲酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸酯(120mg，0.12mmol，1.0当量)、在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的二乙胺(2mL)。将所得的溶液在室温下搅拌过夜。将所得的混合物在真空下浓缩。将粗产物(100mg)通过具有以下条件的制备型HPLC(2#-AnalyseHPLC-SHIMADZU(HPLC-10))进行纯化：柱，XBridge Prep C18OBD柱，5um，19*150mm，；流动相，水与0.05％TFA和ACN(在15min内23.0％ACN达至33.0％)；检测器，MS，UV 254nm。这生成8mg(7％)呈黄色固体的标题化合物。
LC/MS:m/z 780[M+H]+
1H NMR(300MHz,CD3OD):0.91-0.95(m,3H),1.27-1.38(m,8H),1.81-1.97(m,5H),2.36(s,4H),2.62-2.69(m,1H),2.86-2.96(m,7H),3.31-3.55(m,3H),3.63-3.68(m,6H),3.70-3.83(m,6H),4.05-4.17(m,3H),7.13-7.20(m,4H)
实例4
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((1-(3-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基 己基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺
步骤1：
苄基3-((2S,3R)-2,3-二羟基-3-((2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4- 基)丙基氨基)丙酸酯
向100-mL圆底烧瓶中放入4-甲基苯-1-磺酸苄基3-氨基丙酸酯(2.00g，5.69mmol，1.0当量)、(2R,4aR,7R,8R,8aS)-2-苯基-六氢-2H-吡喃并[3,2-d][1,3]二噁英-6,7,8-三醇(2.29g，8.54mmol，1.5当量)、甲醇(30mL)。30min后，添加NaBH3CN(720mg，11.46mmol，2.00当量)、AcOH(680mg，11.32mmol，2.0当量)。将所得的溶液在室温下搅拌过夜。将所得的混合物浓缩，用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。将各有机层经无水硫酸钠干燥。将固体过滤掉。在真空中去除溶剂，产生1.9g(77％)呈无色油状的标题化合物，将其直接用于下一步。
LC/MS:m/z 967[M+H]+
步骤2：
苄基3-(((2S,3R)-2,3-二羟基-3-((2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4- 基)丙基)(己基)氨基)丙酸酯
向100-mL圆底烧瓶中放入苄基3-[[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4-基]丙基]氨基]丙酸酯(1.90g，粗)、己醛(660mg，6.59mmol，1.5当量)、甲醇(30mL)。30min后，添加NaBH3CN(550mg，8.75mmol，2.0当量)和AcOH(530mg，8.83mmol，2.0当量)。将所得的溶液在室温下搅拌过夜。将所得的混合物浓缩，用乙酸乙酯稀释并用水洗涤，将各有机层经无水硫酸钠干燥。将固体过滤掉。将该残余物施加到硅胶柱上并且用乙酸乙酯/石油醚(1:2)进行洗脱。这生成1.3g(57％)呈浅黄色油状的苄基3-[[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4-基]丙基](己基)氨基]丙酸酯。
LC/MS:m/z 516[M+H]+
步骤3：
3-(((2S,3R)-2,3-二羟基-3-((2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4-基)丙 基)(己基)氨基)丙酸
向100-mL圆底烧瓶中放入苄基3-[[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4-基]丙基](己基)氨基]丙酸酯(1.3g，2.52mmol，1.0当量)、Pd/C(5wt％，700mg)、乙醇(20mL)。向以上混合物中添加H2(g)。将所得的溶液在室温下在H2氛围下搅拌过夜。将固体过滤掉。将滤液在真空下浓缩。这生成0.5g(47％)呈无色油状的3-[[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4-基]丙基](己基)氨基]丙酸。
LC/MS:m/z 426[M+H]+
步骤4：
(9H-芴-9-基)甲基(S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基) 丙基((1-(3-(((2S,3R)-2,3-二羟基-3-((2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4-基) 丙基)(己基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸酯
向50-mL圆底烧瓶中放入3-[[(2S,3R)-2,3-二羟基-3-[(2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4-基]丙基](己基)氨基]丙酸(381.49mg，0.90mmol，3.00当量)、(S)-(9H-芴-9-基)甲基3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基(哌啶-4-基甲基)氨基甲酸酯(中间体B，200.0mg，0.30mmol，1.0当量)、HATU(170.5mg，0.45mmol，1.5当量)、DIEA(57.9mg，0.45mmol，1.5当量)、N,N-二甲基甲酰胺(5mL)。将所得的溶液在室温下搅拌2h。添加水至以上混合物中，并将悬浮液用乙酸乙酯萃取。将各有机层合并，并用盐水洗涤。将该混合物用无水硫酸钠干燥。将固体滤出并且将滤液在真空中蒸发。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化。收集有关的级分并且去除挥发物后，产生200mg(62％)呈黄色固体的标题化合物。
LC/MS:m/z 1076[M+H]+
步骤5：
(9H-芴-9-基)甲基(S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基) 丙基((1-(3-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲 基)氨基甲酸酯
向50-mL圆底烧瓶中放入(9H-芴-9-基)甲基(S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基((1-(3-(((2S,3R)-2,3-二羟基-3-((2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4-基)丙基)(己基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸酯(步骤4，200mg，0.19mmol，1.0当量)和HCl溶液(4M在乙醇中，2mL)。将所得的溶液在室温下搅拌过夜。将挥发物蒸发，产生200mg的呈黄色固体的粗的标题化合物。
LC/MS:m/z 987[M+H]+
步骤6：
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((1-(3-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基 己基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺
向25-mL圆底烧瓶中放入(9H-芴-9-基)甲基(S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基((1-(3-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸酯(步骤5200mg，0.20mmol，1.00当量)、甲醇(6mL)、二乙胺(3mL)。将所得的溶液在室温下搅拌过夜。将所得的混合物在真空下浓缩。将粗产物(100mg)通过具有以下条件的制备型HPLC(Prep-HPLC-019)进行纯化：柱，XSelect CSHPrep C18OBD柱，5um，19*150mm；流动相，水与0.05％TFA和MeCN(在8min内22.0％MeCN达至30.0％，在1min内达至100％，保持100％1min，在2min内降至22％)；检测器，UV 254/220nm。这生成38mg(21％)的3,5-二氨基-6-氯-N-[(2R)-3-([[1-(3-[己基[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基]丙酰基)哌啶-4-基]甲基]氨基)-2-[(2-甲基苯基)甲基]丙基]吡嗪-2-甲酰胺；三氟乙酸呈黄色固体。
1H NMR(300MHz,CD3OD):δ0.95-0.97(m,3H),1.22-1.50(m,8H),1.70-2.10(m,5H),2.30-2.51(m,4H),2.63-2.81(m,2H),2.88-3.16(m,7H),3.16-3.20(m,2H),3.34-3.78(m,5H),3.51-3.87(m,7H),3.95-4.10(m,1H),4.10-4.25(m,1H),4.54(d,1H),7.14-7.22(m,4H)。
LC/MS:m/z 765[M+H]+
实例5
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((1-(3-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基) 氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺
步骤1：
(S)-(9H-芴-9-基)甲基(1-(3-叔-丁氧基羰基氨基丙酰基)哌啶-4-基)甲基(3- (3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯
将一个烧瓶(25mL)用(S)-(9H-芴-9-基)甲基3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基(哌啶-4-基甲基)氨基甲酸酯(中间体B，300mg，0.45mmol)、3-(叔-丁氧基羰基氨基)丙酸(100mg，0.53mmol)、DIPEA(145mg，1.13mmol)、HATU(342mg，0.9mmol)填充，并且添加DMF(10mL)。将反应在室温下搅拌6h。将该混合物用25mL的乙酸乙酯稀释并且用水(3x 25mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥。将沉淀滤出并且将滤液在真空下浓缩。将获得的粗产物通过具有二氯甲烷/甲醇(20:1，v/v)的硅胶柱进行纯化，以得到呈浅黄色固体的标题化合物(280mg，67％)。
LC/MS:m/z 839[M+H]+
步骤2：
(S)-(9H-芴-9-基)甲基(1-(3-氨基丙酰基)哌啶-4-基)甲基(3-(3,5-二氨基-6- 氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯
向50-mL圆底烧瓶中放入(S)-(9H-芴-9-基)甲基(1-(3-叔-丁氧基羰基氨基丙酰基)哌啶-4-基)甲基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯(步骤1，216mg，0.26mmol，1.0当量)和氯化氢(4M在甲醇中，5mL)。将所得的溶液在室温下搅拌1h。将挥发物蒸发，产生190mg的呈黄色固体的粗的标题化合物。
LC/MS:m/z 739[M+H]+
步骤3：
(9H-芴-9-基)甲基(S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基) 丙基((1-(3-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基)氨 基甲酸酯
向50-mL圆底烧瓶中放入(S)-(9H-芴-9-基)甲基(1-(3-氨基丙酰基)哌啶-4-基)甲基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯(步骤2，190mg，0.26mmol，1.0当量)、(3R,4S,5R)-噁烷-2,3,4,5-四醇(39mg，0.26mmol，1.0当量)、甲醇(6mL)。30min后，在0℃下缓慢添加NaBH3CN(66mg，1.05mmol，4.0当量)。将所得的溶液在室温下搅拌过夜。然后添加己醛(39mg，0.39mmol，1.0当量)，随后是更多的NaBH3CN(66mg，1.05mmol，4.0当量)。将所得的溶液在室温下搅拌5h。将溶剂去除，以给出该粗产物，将其不进行进一步纯化直接用于下一步。
LC/MS:m/z 957[M+H]+
步骤4：
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((1-(3-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基) 氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺
向50-mL圆底烧瓶中放入(9H-芴-9-基)甲基(S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基((1-(3-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸酯(步骤3，230mg，0.24mmol，1.00当量)、甲醇(5mL)、二乙胺(0.5mL)。将所得的溶液在室温下搅拌3h。将粗产物通过具有以下条件的制备型HPLC(Prep-HPLC-019)进行纯化：柱，XSelect CSH Prep C18OBD柱，5um，19*150mm；流动相，水与0.05％TFA和MeCN(在8min内18.0％MeCN达至35.0％，在1min内达至100.0％，保持100.0％1min，在2min内降至18.0％)；检测器，UV 254/220nm。这生成36.9mg(16％)呈黄色固体的标题化合物。
LC/MS:m/z 735[M+H]+
1H NMR(300MHz,CD3OD):δ0.96(d,3H),1.26-1.40(m,8H),1.81-2.01(m,5H),2.37(s,4H),2.62-2.94(m,9H),3.17-3.47(m,7H),3.55-3.78(m,6H),3.98(d,1H),4.15(s,1H),4.56(d,1H),7.14-7.21(m,4H)。
实例6
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((1-(4-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基 己基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺
步骤1：
(S)-(9H-芴-9-基)甲基((1-(4-((叔-丁氧基羰基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)甲 基)(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯
向50mL圆底烧瓶中放入(S)-(9H-芴-9-基)甲基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(哌啶-4-基甲基)氨基甲酸酯(中间体B，900mg，1.35mmol)，4-((叔-丁氧基羰基)氨基)丁酸(821mg，4.04mmol)、HATU(2305mg，6.06mmol)、以及在DMF(10mL)中的DIEA(1.06mL，6.06mmol)，以给出黄色溶液。将所得的溶液在25℃下搅拌16h。将该反应混合物用EtOAc(50mL)稀释，并且依序用水(50mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并在真空中蒸发以得到粗产物。将粗产物通过快速色谱法在硅胶上，于石油醚中的20％至70％EtOAc的梯度洗脱进行纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以得到呈黄色固体的标题化合物(834mg，73％)。
LC/MS:m/z 853[M+H]+
步骤2：
(S)-(9H-芴-9-基)甲基(1-(4-氨基丁酰基)哌啶-4-基)甲基(3-(3,5-二氨基-6- 氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯
将(S)-(9H-芴-9-基)甲基((1-(4-((叔-丁氧基羰基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)甲基)(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯(步骤1，834mg，0.98mmol)溶解于HCl(4M)的甲醇的溶液中并且在室温下搅拌1h。将溶剂在真空中蒸发以得到呈黄色固体的标题化合物。
LC/MS:m/z 753[M+H]+
步骤3：
(9H-芴-9-基)甲基(S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基) 丙基((1-(4-((2S,3R)-2,3-二羟基-3-((2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4-基)丙 基氨基)丁酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸酯
向25-mL圆底烧瓶中放入(S)-(9H-芴-9-基)甲基(1-(4-氨基丁酰基)哌啶-4-基)甲基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯(步骤2，250mg，0.33mmol，1.0当量)、缩醛保护的D-葡萄糖(2R,4aR,7R,8R,8aS)-2-苯基-六氢-2H-吡喃并[3,2-d][1,3]二噁英-6,7,8-三醇(133mg，0.50mmol，1.5当量)和甲醇(5mL)。将该混合物搅拌30min，然后添加NaBH3CN(41mg，0.65mmol，2.0当量)和AcOH(40mg，0.67mmol，2.00当量)。将所得的溶液在室温下搅拌过夜。将溶剂在减压下去除，以得到210mg呈黄色固体的(粗)(9H-芴-9-基)甲基(S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基((1-(4-((2S,3R)-2,3-二羟基-3-((2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4-基)丙基氨基)丁酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸酯。
LC/MS:m/z 1005[M+H]+
步骤4：
(9H-芴-9-基)甲基(S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基) 丙基((1-(4-(((2S,3R)-2,3-二羟基-3-((2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4-基) 丙基)(己基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸酯
将(9H-芴-9-基)甲基(S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基((1-(4-((2S,3R)-2,3-二羟基-3-((2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4-基)丙基氨基)丁酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸酯(210mg，粗)溶解于MeOH(5mL)中，添加己醛(42mg，0.42mmol，2.00当量)，随后是NaBH3CN(26mg，0.41mmol，2.00当量)和AcOH(25mg，0.42mmol，2.00当量)。将所得的混合物在室温下搅拌2h，并且然后在真空下浓缩。将残余物用水吸收并且用3x 20mL的乙酸乙酯萃取。将合并的有机层在真空下浓缩，并产生152mg(67％)呈粗黄色油状的标题化合物。
LC/MS:m/z 1089[M+H]+
步骤5：
(9H-芴-9-基)甲基(S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基) 丙基((1-(4-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)甲 基)氨基甲酸酯
向25-mL圆底烧瓶中放入(9H-芴-9-基)甲基(S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基((1-(4-(((2S,3R)-2,3-二羟基-3-((2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4-基)丙基)(己基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸酯(步骤4，152mg，0.14mmol，1.00当量)、HCl(4M在乙醇中，5mL)以及乙醇(1mL)。将所得的溶液在室温下搅拌过夜。将挥发物蒸发，产生138mg呈黄色油状的粗的标题化合物。
LC/MS:m/z 1002[M+H]+
步骤6：
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((1-(4-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基 己基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺
向25-mL圆底烧瓶中放入(9H-芴-9-基)甲基(S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基((1-(4-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸酯(步骤4，138mg，0.14mmol，1.0当量)、二乙胺(2mL)、N,N-二甲基甲酰胺(2mL)。将所得的溶液在室温下搅拌过夜。将所得的混合物在真空下浓缩。将粗产物(110mg)通过具有以下条件的制备型HPLC进行纯化：柱，XSelect CSHPrep C18OBD柱，5um，19*150mm；流动相，水与0.05％TFA和MeCN(在8min内23％MeCN达至30％，在1min内达至100％，保持100％1min，在2min内降至23.0％)；检测器，uv 254/220nm。得到15.7mg(13％)呈黄色固体的作为三氟乙酸盐的标题化合物。
LC/MS:m/z 779.5[M+H]+
1H NMR(300MHz,CD3OD):0.92-0.96(m,3H),1.21-1.39(m,8H),1.78-2.03(m,7H),2.36(s,4H),2.61-2.69(m,4H),2.87-2.93(m,5H),3.13-3.31(m,5H),3.32-3.36(m,1H),3.63-3.77(s,6H),3.78-3.96(m,1H),4.15-4.18(m,1H),4.84-4.86(m,1H),7.13-7.20(m,4H)。
实例7
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-2-(2-甲基苄基)-3-((1-(3-((2S,3R,4R,5R)-2,3,4, 5,6-五羟基己基氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺
步骤1：
(9H-芴-9-基)甲基(S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基) 丙基((1-(3-((2S,3R)-2,3-二羟基-3-((2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4-基)丙 基氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸酯
向25-mL圆底烧瓶中放入3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((1-(3-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺(实例5/步骤2，20mg，0.27mmol，1.0当量)和在甲醇(5mL)中的缩醛保护的D-葡萄糖(2R,4aR,7R,8R,8aS)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁英-6,7,8-三醇(218mg，0.81mmol，3.0当量)。将所得的溶液在室温下搅拌0.5h。添加NaBH3CN(34mg，0.54mmol，2.0当量)、AcOH(30mg，0.50mmol，2.0当量)。将所得的混合物在室温下搅拌过夜。用水淬灭并且进行提取处理，在去除溶剂后产生220mg呈黄色固体的粗的标题化合物。
LC/MS:m/z 992[M+H]+
步骤2：
(9H-芴-9-基)甲基(S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基) 丙基((1-(3-((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基 甲酸酯
向25-mL圆底烧瓶中放入(9H-芴-9-基)甲基(S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基((1-(3-((2S,3R)-2,3-二羟基-3-((2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4-基)丙基氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸酯(步骤1，200mg，0.20mmol，1.0当量)、乙醇(1.5mL)和HCl(4M在乙醇中，5mL)。将所得的溶液搅拌在室温搅拌过夜并且然后在真空下浓缩。得到180mg呈黄色固体的粗的标题化合物。
LC/MS:m/z 904[M+H]+
步骤3：
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-2-(2-甲基苄基)-3-((1-(3-((2S,3R,4R,5R)-2,3,4, 5,6-五羟基己基氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺
向25-mL圆底烧瓶放入9H-芴-9-基甲基N-[(2S)-3-[(3,5-二氨基-6-氯-3,4-二氢吡嗪-2-基)甲酰胺基]-2-[(2-甲基苯基)甲基]丙基]-N-[[1-(3-[[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]氨基]丙酰基)哌啶-4-基]甲基]氨基甲酸酯(步骤2，180mg，0.20mmol，1.0当量)、二乙胺(2mL)和N,N-二甲基甲酰胺(4mL)。将所得的溶液在室温下搅拌4h并且之后在真空下浓缩。将粗产物(150mg)通过使用以下条件的制备型HPLC进行纯化：柱，XBridgePrep C18OBD柱，5um，19*150mm；流动相，水与0.05％TFA和ACN(在15min内16.0％ACN达至26.0％)；检测器，MS，UV 254/220nm。这生成15.5mg(10％)呈黄色固体的标题化合物的三氟乙酸盐。
LC/MS:m/z 681.4[M+H]+
1H NMR(300MHz,CD3OD):1.12-1.43(m,2H),1.87-2.12(m,3H),2.14(s,4H),2.62-2.75(m,2H),2.87-2.93(m,7H),3.01-3.19(m,3H),3.31-3.37(m,1H),3.77-3.80(m,5H),3.87-3.95(m,2H),4.07-4.58(s,1H),4.80-4.96(d,1H),7.13-7.20(m,4H)。
实例8
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((1-(3-(己基((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基 己基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺
步骤1：
(9H-芴-9-基)甲基(S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基) 丙基((1-(3-(((2R,3R)-2,3-二羟基-3-((2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4-基) 丙基)(己基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸酯
将氰基硼氢化钠(57.0mg，0.91mmol)分批添加至己醛(45.5mg，0.45mmol)和(9H-芴-9-基)甲基((S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)((1-(3-(((2R,3R)-2,3-二羟基-3-((2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4-基)丙基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸酯[通过如实例7/步骤1所述的类似的方法进行制备；而不是从缩醛保护的D-甘露醇(2R,4aR,7S,8R,8aS)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二噁英-6,7,8-三醇开始](300mg，0.30mmol)在MeOH(20mL)中的混合物中。将所得的溶液在25℃下搅拌4h。将溶剂在减压下去除。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝25:1)进行纯化，以得到呈黄色胶状的(9H-芴-9-基)甲基((S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)((1-(3-(((2R,3R)-2,3-二羟基-3-((2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4-基)丙基)(己基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸酯(270mg，83％)。
LC/MS:m/z 1076[M+H]+
1H NMR(300MHz,CD3OD):δ0.89-1.19(m,8H),1.23-1.37(m,11H),1.59-1.65(m,4H),2.16-2.21(m,6H),2.62-3.04(m,14H),3.34-3.68(m,2H),3.87-3.96(m,4H),4.11-4.27(m,4H),4.70-4.80(m,2H),5.57(s,1H),7.07-7.29(m,4H),7.31-7.50(m,7H),7.50-7.53(m,4H),7.78(d,2H)。
步骤2：
(9H-芴-9-基)甲基(S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基) 丙基((1-(3-(己基((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲 基)氨基甲酸酯
将(9H-芴-9-基)甲基((S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)((1-(3-(((2R,3R)-2,3-二羟基-3-((2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4-基)丙基)(己基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸酯(270mg，0.25mmol)添加至在乙醇(5mL)中的HCl(4M，水性，15mL)中。在25℃下搅拌2h后，将该混合物在减压下浓缩并给出呈黄色油状的标题化合物(200mg，81％)。
LC/MS:m/z 987[M+H]+
步骤3：
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((1-(3-(己基((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基 己基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺
将二乙胺(3mL)添加至在DMF(6mL)中的(9H-芴-9-基)甲基((S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)((1-(3-(己基((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸酯(步骤2，200mg，0.20mmol)中。将所得的混合物在25℃下搅拌2小时。将溶剂在减压下去除。将该粗产物通过制备型HPLC(柱：XBridge C18，19*150mm，5um；流动相A：水/0.05％TFA，流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：在10min内30％B至70％B；254nm，作为洗脱液)进行纯化。将包含所希望的化合物的级分蒸发至干燥，以得到呈黄色胶状的3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-(((1-(3-(己基((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺(23.5mg)。
LC/MS:m/z 765.4[M+H]+
1H NMR(300MHz,CD3OD):δ0.94(t,3H),1.29-1.40(m,8H),1.80-2.04(m,5H),2.35(s,3H),2.35(m,1H),2.62-2.71(m,2H),2.85-2.97(m,7H),3.15-3.30(m,4H),3.31-3.69(m,4H),3.71-3.83(m,6H),4.03-4.06(m,2H),4.86-4.87(m,1H),7.13-7.20(m,1H)。
实例9
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基 己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺二盐酸盐
步骤1
叔丁基((S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4- ((2-(己基((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基甲 酸酯
将(S)-叔丁基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4-((2-(己基氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基甲酸酯(中间体E，500mg，0.70mmol)、(3S,4S,5S,6R)-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2,3,4,5-四醇(254mg，1.41mmol)以及DIPEA(0.123mL，0.70mmol)溶解于MeOH(10mL)中并在室温下搅拌1h。添加氰基硼氢化钠(133mg，2.11mmol)和乙酸(0.040mL，0.70mmol)并持续搅拌18h，并且然后在50℃下搅拌30h。将反应冷却至室温下，通过添加3M HCl(水性)淬灭，搅拌15min并且然后在真空中浓缩。将残余物溶解于EtOAc(50mL)和8％NaHCO3(水性)(50mL)中，震荡并将各相分离。将水相用EtOAc(3x50mL)萃取。将合并的有机相用Na2SO4(s)干燥，过滤并在真空中蒸发。将该化合物通过制备型HPLC在Kromasil C8柱(10μm 250x 50ID mm)上使用梯度为于H2O/MeCN/AcOH 95/5/0.2缓冲液中的20％-60％乙腈，经20分钟以100mL/min的流速进行纯化。将这些化合物通过UV在268nm处检测。收集化合物并冷冻干燥，以产出呈无色固体的标题化合物(195mg，32％)。
LC/MS:m/z 873.6[M+H]+
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ0.76-0.85(m,3H),1.13-1.27(m,6H),1.3-1.44(m,11H),2.21(s,3H),2.24-2.38(m,1H),2.39-2.53(m,4H),2.57-2.66(m,2H),2.77(d,1H),2.91-3.06(m,1H),3.06-3.41(m,8H),3.43-3.49(m,1H),3.51(d,1H),3.55-3.65(m,3H),4.23-4.55(m,5H),6.97(bs,2H),7.04-7.18(m,6H),7.72(d,2H),7.78-7.99(m,1H),8.27-8.37(m,1H)。
步骤2
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基 己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺二盐酸盐
向MeOH(5mL，124mmol)的冰浴冷却的小瓶中滴加乙酰氯(1.42mL，20mmol)。将该混合物搅拌5min并且然后添加叔丁基((S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4-((2-(己基((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基甲酸酯(190mg，0.22mmol)。将反应在室温下搅拌1.5h并且然后在真空中蒸发。将残余物溶解于水中并冷冻干燥，以产出呈灰白色固体的标题化合物(184mg，100％)。
LC/MS:m/z 773.4[M+H]+
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ0.81-0.89(m,3H),1.2-1.33(m,6H),1.62-1.77(m,2H),2.26(s,3H),2.3-2.41(m,1H),2.6-2.73(m,2H),2.75-2.84(m,1H),2.86-2.97(m,1H),3.11-3.27(m,3H),3.27-3.45(m,5H),3.45-3.52(m,2H),3.52-3.76(m,5H),3.89-3.99(m,1H),4.03-4.48(m,7H),6.88-7.23(m,6H),7.63(d,2H),7.93(d,2H),8.26(t,1H),8.93-9.02(m,1H),9.13-9.34(m,2H),9.55(bs,1H)。
实例10
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基 己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺
步骤1
叔丁基((S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4- ((2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基甲 酸酯
将(S)-叔丁基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4-((2-(己基氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基甲酸酯(中间体E，1.25g，1.76mmol)、(3R,4S,5S,6R)-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2,3,4,5-四醇(0.635g，3.52mmol)以及DIPEA(0.308mL，1.76mmol)溶解于MeOH(10mL)中并在室温下搅拌1h。添加氰基硼氢化钠(0.332g，5.29mmol)和乙酸(0.101mL，1.76mmol)并在50℃下持续搅拌40h。将反应冷却至室温，通过添加8％NaHCO3(水性)淬灭，搅拌30min并在真空中浓缩。将残余物溶解于EtOAc(100mL)和8％NaHCO3(水性)(100mL)中，震荡并将各相分离。将水相用EtOAc(2x 100mL)萃取。将合并的有机相用Na2SO4(s)干燥，过滤并在真空中蒸发。将该化合物通过制备型HPLC在KromasilC8柱(10μm 250x 50ID mm)上使用梯度为于H2O/MeCN/AcOH 95/5/0.2缓冲液中的20％-60％乙腈，经20分钟以100mL/min的流速进行纯化。将这些化合物通过UV在268nm处检测。收集化合物并冷冻干燥，以产出呈白色固体的叔丁基((S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4-((2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基甲酸酯(1.26g，82％)。
LC/MS:m/z 873.6[M+H]+
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ0.73-0.86(m,3H),1.1-1.27(m,6H),1.27-1.46(m,11H),2.20(s,3H),2.24-2.38(m,1H),2.38-2.49(m,3H),2.53-2.69(m,3H),2.9-3.06(m,1H),3.06-3.47(m,10H),3.47-3.54(m,1H),3.54-3.76(m,3H),4.18-4.65(m,6H),6.97(bs,2H),7.03-7.19(m,6H),7.72(d,2H),7.78-8(m,1H),8.24-8.37(m,1H)。
步骤2
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基 己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺二盐酸盐
将乙酰氯(5.69mL，80.0mmol)滴加至MeOH(20mL)的冰浴烧瓶中。将该混合物搅拌5min并且然后添加叔丁基((S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4-((2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基甲酸酯(1.26g，1.44mmol)。将反应在室温下搅拌1.5h并且然后在真空中蒸发。将残余物溶解于水中并冷冻干燥，以产出呈灰白色固体的3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺二盐酸盐(1.29g，106％)。
LC/MS:m/z 773.4[M+H]+
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ0.78-0.89(m,3H),1.18-1.32(m,6H),1.62-1.76(m,2H),2.26(s,3H),2.33-2.44(m,1H),2.67(d,2H),2.73-2.84(m,1H),2.84-2.96(m,1H),3.1-3.44(m,9H),3.44-3.54(m,2H),3.55-3.62(m,1H),3.62-3.75(m,3H),4.02-4.12(m,1H),4.12-4.3(m,2H),5.58(bs,5H),6.91-7.21(m,6H),7.64(d,2H),7.94(d,2H),8.25(t,1H),8.97-9.06(m,1H),9.28(bs,1H),9.41(bs,1H),9.70(d,1H)。
步骤3
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基 己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺
将3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺二盐酸盐(1.23g，1.45mmol)溶解于水(15ml)中并通过添加10％Na2CO3(水性)碱化至pH大约11。将产物用EtOAc(6x 70mL)萃取。将合并的有机相用Na2SO4(s)干燥，过滤并在真空中蒸发以产出半固体/油。将残余物溶解于乙腈/水中并冷冻干燥，以产出呈灰白色固体的3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺(1.08g，96％)。
LC/MS:m/z 773.4[M+H]+
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ0.75-0.84(m,3H),1.13-1.26(m,6H),1.32-1.42(m,2H),1.94-2.05(m,1H),2.24(s,3H),2.34-2.49(m,6H),2.54-2.66(m,4H),3.14-3.23(m,1H),3.25-3.35(m,4H),3.35-3.42(m,1H),3.42-3.47(m,1H),3.47-3.54(m,1H),3.55-3.61(m,1H),3.61-3.77(m,4H),4.26-4.33(m,2H),4.47(d,1H),4.51(d,2H),6.96(bs,2H),7.04-7.14(m,4H),7.40(d,2H),7.74(d,2H),8.26-8.37(m,2H)。
实例11
4-(((R)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基氨基)甲 基)苯基2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基氨基甲酸酯
步骤1：
(R)-4-((3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基氨基)甲 基)苯基乙酸酯
向50mL梨形烧瓶中，将(R)-3,5-二氨基-N-(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)-6-氯吡嗪-2-甲酰胺(中间体A，1.6g，4.59mmol)和4-甲酰基苯基乙酸酯(0.753g，4.59mmol)添加至DCM(30mL)中，以给出黄色溶液。搅拌1h后，添加三乙酰氧基-硼氢化钠(3.89g，18.4mmol)并持续搅拌过夜。将该混合物用DCM稀释并用水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并在真空中蒸发，以得到呈黄色固体的粗(R)-4-(((3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基)甲基)苯基乙酸酯(1.70g，75％)。将该产物不进行进一步纯化直接用于下一步中。
LC/MS:m/z 467[M+H]+
步骤2：
(S)-4-((叔-丁氧基羰基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄 基)丙基)氨基)甲基)苯基乙酸酯
在0℃下，将(BOC)2O(1.07mL，4.59mmol)添加至(R)-4-(((3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基)甲基)苯基乙酸酯(1.9g，3.82mmol)和Na2CO3(0.81g，7.65mmol)在该混合物溶剂二噁烷(25mL)/水(8mL)的混合物中。允许该混合物达到室温下并搅拌过夜。将该反应混合物用EtOAc稀释，并用饱和盐水洗涤。将该有机层经Na2SO4干燥，过滤并且在真空中蒸发。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用于石油醚中的10％至40％EtOAc的梯度进行纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以得到呈黄色固体的标题化合物(1.30g，57％)。
LC/MS:m/z 597[M+H]+
1H NMR(300MHz,CD3OD):δ1.47(s,9H),2.25-2.2.51(m,7H),2.54-2.65(m,2H),3.05-3.22(m,2H),3.31-3.39(m,2H),4.13-4.45(m,2H),6.93-7.00(m,2H),7.06-7.10(m,6H)。
步骤3：
(S)-叔丁基3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基(4-羟 基苄基)氨基甲酸酯
将在水(8mL)中的NaOH(0.174g，4.35mmol)滴加至(S)-4-(((叔-丁氧基羰基)(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基)甲基)苯基乙酸酯(1.3g，2.18mmol)在MeOH(20mL)中的***液中。将该反应溶液在室温下搅拌3小时。将该反应混合物用2M水性HCl进行酸化。将该反应混合物用EtOAc萃取，并将有机相用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发以得到呈黄色固体的粗的标题化合物(1.20g，99％)。
LC/MS:m/z 555[M+H]+
步骤4：
(S)-4-((叔-丁氧基羰基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄 基)丙基)氨基)甲基)氯甲酸苯酯
在50mL圆底烧瓶中，添加(S)-叔丁基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4-羟基苄基)氨基甲酸酯(250mg，0.45mmol)、DIEA(0.354mL，2.03mmol)至THF(10mL)中，以给出黄色溶液。将该混合物用冰浴冷却并添加三光气(200mg，0.68mmol)。搅拌1h后，将该反应混合物倾倒入水中并用EtOAc(3x 20mL)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并蒸发，以得到呈黄色油状的标题化合物(250mg，90％)。
LC/MS:m/z 617[M+H]+
步骤5：
叔丁基((S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4- (((2-(((2S,3R)-2,3-二羟基-3-((2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4-基)丙基) (己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)氧基)苄基)氨基甲酸酯
在50mL圆底烧瓶中，将(1R,2S)-3-((2-氨基乙基)(己基)氨基)-1-((2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4-基)丙烷-1,2-二醇(实例3/步骤2，96mg，0.24mmol)和DIEA(0.064mL，0.36mmol)溶解于THF(10mL)中，产生无色溶液。在0℃下，添加(S)-4-(((叔-丁氧基羰基)(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基)甲基)氯甲酸苯酯(步骤4，150mg，0.24mmol)。将所得的溶液在室温下搅拌3h。将该反应混合物倾倒入水(20mL)中并用EtOAc(3x 20mL)萃取。将有机相经经Na2SO4干燥，过滤并在真空中蒸发。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化，以得到呈黄色固体的标题化合物(200mg，84％)。
LC/MS:m/z 977[M+H]+
步骤6：
4-(((R)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基氨基)甲 基)苯基2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基氨基甲酸酯
在25mL圆底烧瓶中，添加叔丁基((S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4-(((2-(((2S,3R)-2,3-二羟基-3-((2R,4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二噁烷-4-基)丙基)(己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)氧基)苄基)氨基甲酸酯(步骤5，200mg，0.20mmol)至EtOH(1mL)中，以给出黄色溶液。添加水性HCl(4M，3mL)并且将所得的溶液在室温下搅拌12h。将该粗产物通过制备型HPLC(沃特斯XBridge Prep C18OBD柱，5μ二氧化硅，50mm直径，150mm长度)进行纯化，使用降低极性的水(0.05％TFA)和MeCN作为洗脱液的梯度。将包含所希望的化合物的级分蒸发至干燥，以得到呈黄色固体的标题化合物(28.0mg，13％)。
LC/MS:m/z 789.4[M+H]+
1H NMR(300MHz,CD3OD):δ0.79-0.99(m,3H),1.25-1.55(m,6H),1.69-1.91(m,2H),2.25-2.45(m,4H),2.51-2.84(m,1H),2.81-3.01(m,3H,),3.28-3.31(m,4H),3.34-3.82(m,12H),3.86-3.92(m,1H),4.09-4.37(m,3H),7.03-7.35(m,6H),7.453(d,2H)。
实例12
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基 己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺二盐酸 盐
步骤1
EN06927-61
叔丁基((S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4- ((2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基)氨基 甲酸酯
将(S)-叔丁基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4-((2-(己基氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基)氨基甲酸酯(中间体D，500mg，0.69mmol)、(3R,4S,5S,6R)-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2,3,4,5-四醇(249mg，1.38mmol)以及DIPEA(0.121mL，0.69mmol)溶解于MeOH(5mL)中并在50℃下搅拌40min，之后添加氰基硼氢化钠(130mg，2.07mmol)和乙酸(0.044mL，0.76mmol)。在50℃下持续搅拌21h，并且然后允许该反应混合物冷却至室温。将反应通过添加8％NaHCO3(水性)进行淬灭。将该混合物稀释于EtOAc(50mL)和8％NaHCO3(水性)(50mL)中，震荡并将各相分离。将水相用EtOAc萃取(4x50mL)。将合并的有机相用Na2SO4(s)干燥，过滤并在真空中蒸发。将该化合物通过制备型HPLC在Kromasil C8柱(10μm 250x 50ID mm)上使用梯度为于H2O/MeCN/AcOH 95/5/0.2缓冲液中的20％-60％乙腈，经20分钟以100mL/min的流速进行纯化。将这些化合物通过UV在265nm处检测。收集化合物并冷冻干燥，以产出呈灰白色固体的标题化合物(385mg，63％)。
LC/MS:m/z 887.6[M+H]+
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ0.80(t,3H),1.12-1.26(m,6H),1.29-1.43(m,11H),2.16-2.29(m,4H),2.41-2.48(m,2H),2.56-2.67(m,2H),2.71(t,2H),2.96(dd,1H),3.02-3.42(m,12H),3.44(dd,1H),3.47-3.54(m,1H),3.55-3.74(m,3H),4.18-4.79(m,4H),6.96(bs,2H),7.06-7.19(m,6H),7.72(d,2H),7.8-7.97(m,1H),8.24-8.34(m,1H)。
步骤2
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基 己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺二盐酸 盐
将乙酰氯(1.42mL，20mmol)滴加至MeOH(5mL，124mmol)的冰浴冷却的溶液中。将该溶液搅拌5min并且然后添加至叔丁基((S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4-((2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基)氨基甲酸酯(步骤1，385mg，0.43mmol)中。将该反应在室温下搅拌2.5h并且然后在真空中浓缩。将残余物溶解于水中并冷冻干燥，以产出呈黄色固体的标题化合物(369mg，99％)。
LC/MS:m/z 787.4[M+H]+
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ0.78-0.88(m,3H),1.17-1.31(m,6H),1.6-1.74(m,2H),2.23-2.39(m,4H),2.64-2.75(m,2H),2.75-2.87(m,1H),2.87-2.99(m,1H),3.05(t,2H),3.09-3.44(m,11H),3.44-3.54(m,2H),3.55-3.75(m,4H),4-4.1(m,1H),4.69(bs,7H),6.88-7.2(m,5H),7.23-7.3(m,1H),7.36(d,2H),7.88(d,2H),8.24(t,1H),8.85-9.16(m,3H),9.63(d,1H)。
实例13
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基) 氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺二盐酸盐
步骤1：
叔丁基((S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4- ((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基)氨基甲酸 酯
将(S)-叔丁基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4-((2-(己基氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基)氨基甲酸酯(中间体D，500mg，0.69mmol)、(2R,3S,4R)-2,3,4,5-四羟基戊醛(208mg，1.38mmol)和DIPEA(0.121mL，0.69mmol)溶解于MeOH(5mL)中并在50℃下搅拌40min，之后添加氰基硼氢化钠(130mg，2.07mmol)和乙酸(0.044mL，0.76mmol)。在50℃下持续搅拌21h，并且然后允许冷却至室温。将该反应通过添加8％NaHCO3(水性)进行淬灭。将该混合物稀释于EtOAc(50mL)和8％NaHCO3(水性)(50mL)中，震荡并将各相分离。将水相用EtOAc萃取(4x 50mL)。将合并的有机相用Na2SO4(s)干燥，过滤并在真空中蒸发。将该化合物通过制备型HPLC在Kromasil C8柱(10μm 250x 50ID mm)上使用梯度为于H2O/MeCN/AcOH 95/5/0.2缓冲液中的20％-60％乙腈，经20分钟以100mL/min的流速进行纯化。将这些化合物通过UV在265nm处检测。收集化合物并冷冻干燥，以产出呈灰白色固体的叔丁基((S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4-((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基)氨基甲酸酯(374mg，63％)。
LC/MS:m/z 857.6[M+H]+
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ0.74-0.85(m,3H),1.11-1.28(m,6H),1.28-1.44(m,11H),2.14-2.29(m,4H),2.46(dd,2H),2.55-2.65(m,2H),2.71(t,2H),2.96(dd,1H),3.02-3.51(m,14H),3.52-3.6(m,1H),3.6-3.71(m,1H),4.17-4.77(m,3H),6.96(bs,2H),7.05-7.2(m,6H),7.72(d,2H),7.8-7.97(m,1H),8.23-8.34(m,1H)。
步骤2：
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基) 氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺二盐酸盐
将乙酰氯(1.42mL，20.0mmol)滴加至MeOH(5mL，123.59mmol)的冰浴冷却的溶液中。将该溶液搅拌5min并且然后添加至叔丁基((S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4-((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基)氨基甲酸酯(374mg，0.44mmol)中。将该反应在室温下搅拌2.5h并且然后在真空中浓缩。将残余物溶解于水中并冷冻干燥，以产出呈黄色固体的3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺二盐酸盐(361mg，100％)。
LC/MS:m/z 757.4[M+H]+
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ1-1.09(m,3H),1.39-1.53(m,6H),1.84-1.95(m,2H),2.50(s,3H),2.53-2.62(m,1H),2.86-2.97(m,2H),2.97-3.07(m,1H),3.09-3.2(m,1H),3.22-3.73(m,15H),3.77-3.96(m,3H),4.23-4.32(m,1H),4.84(bs,6H),7.15-7.42(m,5H),7.45-7.52(m,1H),7.58(d,2H),8.11(d,2H),8.46(t,1H),9.13-9.2(m,1H),9.30(d,2H),9.92(d,1H)。
实例14
3,5-二氨基-6-氯-N-((S)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺乙酸
步骤1
叔丁基((R)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4- ((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基甲酸酯
将(R)-叔丁基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4-((2-(己基氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基甲酸酯(中间体H)(163mg，0.23mmol)、(2R,3S,4R)-2,3,4,5-四羟基戊醛(69.0mg，0.46mmol)以及DIPEA(0.040mL，0.23mmol)溶解于MeOH(4mL)中并在室温下搅拌1h。添加氰基硼氢化钠(14.44mg，0.23mmol)和乙酸(0.039mL，0.69mmol)，并且将反应加热至50℃持续20h并且然后允许冷却至室温。将反应通过添加8％NaHCO3(水性)进行淬灭并搅拌30min。将溶剂在真空中浓缩。将残余物溶解于EtOAc(25mL)和8％NaHCO3(水性)(25mL)中，震荡并将各相分离。将水相用EtOAc(2x 25mL)萃取。将合并的有机相用Na2SO4(s)干燥，过滤并在真空中蒸发。将该化合物通过制备型HPLC在Kromasil C8柱(10μm 250x 20ID mm)上使用梯度为于H2O/ACN/MeCN/AcOH 95/5/0.2缓冲液中的30％-70％乙腈，经20分钟以19mL/min的流速进行纯化。将这些化合物通过UV在265nm处检测。收集该产物级分并冷冻干燥，以产出呈固体的叔丁基((R)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4-((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基甲酸酯(127mg，65.5％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ0.75-0.84(m,3H),1.13-1.26(m,6H),1.29-1.42(m,11H),2.20(s,3H),2.25-2.35(m,1H),2.41-2.47(m,2H),2.56-2.62(m,2H),2.89-3.05(m,1H),3.07-3.15(m,1H),3.2-3.49(m,13H),3.52-3.59(m,1H),3.61-3.69(m,1H),4.21-4.35(m,2H),4.35-4.55(m,3H),6.96(bs,1H),7.04-7.19(m,6H),7.71(d,2H),7.77-7.98(m,1H),8.24-8.32(m,1H)。
MS ES+:m/z 843.4[M+H]+
步骤2
3,5-二氨基-6-氯-N-((S)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基) 氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺乙酸
将乙酰氯(0.711mL，10mmol)滴加至MeOH(2.5mL，61.79mmol)的冰浴冷却的小瓶中并搅拌5min，之后添加叔丁基((R)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4-((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基甲酸酯(127mg，0.15mmol)。将该反应在室温下搅拌1h并且然后在真空中浓缩。将残余物溶解于EtOAc(25mL)和5％Na2CO3(水性)(25mL)中，震荡并将各相分离。将水相用EtOAc(5x25mL)萃取。将合并的有机相用Na2SO4(s)干燥，过滤并在真空中蒸发。将该化合物通过制备型HPLC在Kromasil C8柱(10μm 250x 20ID mm)上使用梯度为于H2O/ACN/AcOH 95/5/0.2缓冲液中的5％-45％乙腈，经20分钟以19mL/min的流速进行纯化。将这些化合物通过UV在268nm处检测。将产物冷冻干燥，以产出呈灰白色固体的3,5-二氨基-6-氯-N-((S)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺(100mg，82％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ0.77-0.83(m,3H),1.13-1.25(m,6H),1.32-1.41(m,2H),1.90(s,4H),1.96-2.05(m,1H),2.24(s,3H),2.35-2.55(m,6H),2.55-2.63(m,4H),3.14-3.23(m,2H),3.24-3.4(m,9H),3.4-3.49(m,4H),3.56(q,1H),3.62-3.71(m,2H),3.74(d,1H),6.96(bs,2H),7.04-7.14(m,4H),7.40(d,2H),7.74(d,2H),8.28(t,1H),8.33(t,1H)。
MS ES+:m/z 743.5[M+H]+
实例15
3,5-二氨基-6-氯-N-((S)-3-((4-((2-(己基((2R,3S,4S)-2,3,4,5-四羟基戊基) 氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺乙酸
步骤1
叔丁基((R)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4- ((2-(己基((2R,3S,4S)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基甲酸酯
将(R)-叔丁基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4-((2-(己基氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基甲酸酯(中间体G)(163mg，0.23mmol)、(2S,3R,4S)-2,3,4,5-四羟基戊醛(69.0mg，0.46mmol)和DIPEA(40.1μl，0.23mmol)溶解于MeOH中并在室温下搅拌1h。添加氰基硼氢化钠(14.44mg，0.23mmol)和乙酸(39.5μl，0.69mmol)，并将反应加热50℃持续20h，并且然后允许冷却至室温。将反应通过添加8％NaHCO3(水性)进行淬灭并搅拌30min。将溶剂在真空中浓缩。将残余物溶解于EtOAc(25mL)和8％NaHCO3(水性)(25mL)中，震荡并将各相分离。将水相用EtOAc(5x 25mL)萃取。将合并的有机相用Na2SO4(s)干燥，过滤并在真空中蒸发。将该化合物通过制备型HPLC在KromasilC8柱(10μm 250x 20ID mm)上使用梯度为于H2O/ACN/MeCN/AcOH 95/5/0.2缓冲液中的30％-70％乙腈，经20分钟以19mL/min的流速进行纯化。将这些化合物通过UV在265nm处检测。收集产物级分并冷冻干燥，以产出呈固体的叔丁基((R)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4-((2-(己基((2R,3S,4S)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基甲酸酯(135mg，69.7％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ0.79(d,3H),1.16(d,6H),1.36(s,11H),2.20(s,3H),2.31(s,1H),2.50(dt,5H),2.58(s,3H),2.92-3.05(m,1H),3.06-3.15(m,1H),3.31(s,6H),3.39-3.5(m,2H),3.53-3.59(m,1H),3.61-3.69(m,1H),4.22-4.34(m,2H),4.34-4.55(m,3H),6.97(bs,2H),7.04-7.18(m,6H),7.71(d,2H),7.78-7.97(m,1H),8.25-8.32(m,1H)。
MS ES+:m/z 843.5[M+H]+
步骤2
3,5-二氨基-6-氯-N-((S)-3-((4-((2-(己基((2R,3S,4S)-2,3,4,5-四羟基戊基) 氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺乙酸
将乙酰氯(0.711mL，10mmol)滴加至MeOH(2.5mL，61.79mmol)的冰浴冷却的小瓶中并搅拌5min，之后添加叔丁基((R)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4-((2-(己基((2R,3S,4S)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基甲酸酯(135mg，0.16mmol)。将反应在室温下搅拌1h并且然后在真空中蒸发。将残余物溶解于EtOAc(25mL)和5％Na2CO3(水性)(25mL)中，震荡并将各相分离。将水相用EtOAc(5x25mL)萃取。将合并的有机相用Na2SO4(s)干燥，过滤并在真空中蒸发。将该化合物通过制备型HPLC在Kromasil C8柱(10μm 250x 20ID mm)上使用梯度为于H2O/ACN/AcOH 95/5/0.2缓冲液中的5％-45％乙腈，经20分钟以19mL/min的流速进行纯化。将这些化合物通过UV在268nm处检测。将产物冷冻干燥，以产出呈灰白色固体的3,5-二氨基-6-氯-N-((S)-3-((4-((2-(己基((2R,3S,4S)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺(93mg，70.2％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ0.76-0.83(m,3H),1.14-1.25(m,6H),1.31-1.42(m,2H),1.91(s,3H),1.95-2.06(m,1H),2.24(s,3H),2.35-2.54(m,6H),2.60(dd,4H),3.14-3.5(m,11H),3.56(q,1H),3.66(dd,2H),3.74(d,1H),6.96(s,2H),7.04-7.14(m,4H),7.40(d,2H),7.74(d,2H),8.28(t,1H),8.33(t,1H)。
MS ES+:m/z 743.4[M+H]+
实例16
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-(3-(2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己 基)氨基)乙基氨基甲酰基)苯乙基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺
步骤1
叔丁基(S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基(3-(2- (己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基氨基甲酰基)苯乙基)氨基甲酸 酯
在50mL圆底烧瓶中，添加(S)-叔丁基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(3-((2-(己基氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基)氨基甲酸酯(中间体D，370mg，0.51mmol)和在MeOH(15mL)中的(3R,4S,5S,6R)-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2,3,4,5-四醇(138mg，0.77mmol)，以给出黄色溶液。搅拌以上混合物30min后，添加NaCNBH3(32.1mg，0.51mmol)。将所得的溶液在50℃下搅拌16小时。将溶剂在减压下去除，以给出呈黄色固体的粗产物叔丁基((S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(3-((2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基)氨基甲酸酯(500mg，110％)。将该产物不进行进一步纯化直接用于下一步中。
LC/MS:m/z 887[M+H]+
步骤2
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-(3-(2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己 基)氨基)乙基氨基甲酰基)苯乙基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺
在50mL圆底烧瓶中，添加在HCl/MeOH(20mL，0,56mmol)中的叔丁基((S)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(3-((2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基)氨基甲酸酯(500mg，0.56mmol)以给出黄色溶液。将所得的溶液在室温下搅拌2h。将溶剂在减压下去除。将粗物质通过制备型HPLC(沃特斯XBridge Prep C18OBD柱，5μ二氧化硅，50mm直径，150mm长度)，使用水(包含0.1％NH4HCO3)和MeCN的极性递减混合物作为洗脱液来进行纯化。将包含所希望的化合物的级分蒸发至干燥，以得到呈黄色固体的3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((3-((2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺(87mg，20％)。
LC/MS:m/z 788[M+H]+
1H NMR(300MHz,CD3OD,25℃):δ0.85-0.91(m,3H),1.15-1.35(m,6H),1.39-1.59(m,2H),2.12-2.25(m,1H),2.31(s,3H),2.57-2.89(m,13H,3.29-3.33(m,2H),3.38-3.64(m,3H),3.66-3.84(m,6H),7.09-7.16(m,4H),7.38(d,2H),7.70-7.73(m,2H)。
中间体的合成
中间体A
(R)-3,5-二氨基-N-(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)-6-氯吡嗪-2-甲酰胺
步骤1：
二甲基2-(2-甲基苄基)丙二酸酯
将反应器用二甲基丙二酸酯(6.00kg，45.4mol)和甲醇(21.3L)填充。经10分钟添加25％NaOMe/MeOH(10.37L，45.2mol)并且然后经1.5h添加2-甲基苄基氯(4.26kg，30.3mol)，维持反应温度低于30℃。将饱和NH4Cl(53.1L)添加至该反应中，得到pH 8.5。将产物用乙酸异丙酯(3x 25L)萃取，并且将合并的有机层用10％盐水(10L)洗涤并在减压下浓缩，以得到呈油状的标题化合物(8.63kg，68wt％，83％)。此处获得的标题化合物包含二烷基化丙二酸酯。通过HPLC的纯度：86％。
LC/MS:m/z 237[M+H]+
1H-NMR(DMSO-d6,270MHz)δ7.17-7.05(4H,m),3.60(6h,s),3.82(1H,t),3.12(2H,s),2.21(3H,s)；13C-NMR(DMSO-d6,270MHz)δ169.5,136.6,136.3,130.8,129.5,127.3,126.4,52.8,52.0,31.8,19.4。
步骤2
2-(2-甲基苄基)丙二酰胺
将反应器用二甲基-2-(2-甲基苄基)丙二酸酯(步骤1，5.9kg，68％wt，17.0mol)和甲醇(14.8L)填充。添加34％氢氧化铵(24L，36当量)并且将反应在25℃下搅拌直至通过HPLC分析认为反应完成。将固体滤出并且然后添加MTBE(15.3L)。30min后，将固体滤出，用MTBE(2x 15.3L)洗涤并在60℃下在减压下干燥，以给出呈白色固体的标题化合物(3.2kg，91％)。
LC/MS:m/z 206.9[M+H]+
1H-NMR(DMSO-d6,270MHz)δ7.32-7.21(2H,br s),7.15-7.00(6H,m),3.33(1H,t),2.96(2H,d),2.28(3H,s)；13C-NMR(DMSO-d6,270MHz)δ171.0,137.5,136.0,129.9,128.9,126.1,125.6,53.2,32.5,19.1。
步骤3
2-(2-甲基苄基)丙烷-1,3-二胺
将反应器用2-(2-甲基苄基)丙二酰胺(1.32kg，6.40mol)和THF(5.4L)填充。将该粘性混合物冷却至0℃并且在2h内添加1M甲硼烷-THF(25.6L，25.6mol)，维持反应温度低于2℃。将反应加热至15℃并且然后在50℃下搅拌过夜。当HPLC分析表明小于8％的起始材料剩余时，将该反应混合物淬灭进入4M KOH(8L)，保持温度低于30℃。将有机层在减压下浓缩并将水层用MTBE(2x 10L)萃取两次。将合并的MTBE提取物添加至浓缩的有机层中，并且然后将合并的有机层填充进6M HCl(10L)的溶液中，保持温度低于30℃。将水相用MTBE(10L)萃取并且然后用6M KOH(12L)酸化。将水相用THF(10L并且然后5L)萃取两次，并且将合并的有机相在减压下浓缩。添加甲苯(5L)并且然后将共沸物蒸出，以去除任何残余的水。将该混合物用甲苯(5L)研磨并将固体滤出并且用甲苯(3L)洗涤。将滤液在减压下浓缩，得到呈游离胺的标题化合物(1.13kg，70％产量)。通过HPLC的纯度：91％。
LC/MS:m/z 179.0[M+H]+
1H-NMR(CDCl3,270MHz)δ7.12-7.00(4H,m),2.72-2.59(4H,m),2.52(2H,d),2.27(3H,s),1.64(1H,m),1.48-1.25(4H,br s)；13C-NMR(CDCl3,270MHz)δ139.0,136.3,130.5,129.9,126.2,125.9,44.7,43.8,34.3,19.6。
步骤4
2-(2-甲基苄基)丙烷-1,3-二胺L-酒石酸
向粗二胺(来自步骤3)(1.62kg，9.1mol)中添加乙醇(4L)。添加L-酒石酸(1.62kg，10.8mol)溶解于乙醇(11L)中的溶液，保持温度低于40℃。将该混合物在25℃搅拌3d，并且然后将固体滤出，用乙醇(2x 2L)洗涤并在在50℃下减压下干燥，以给出呈其单-L-酒石酸盐的标题化合物(3.21kg，定量产量)。通过HPLC的纯度：92.2％。
LC/MS:m/z 179.0[M+H]+
1H-NMR(D2O,270MHz)δ7.30-7.15(4H,m),4.27(2H,s),3.20-3.07(2H,dd),3.04-2.94(2H,dd),2.79(2H,d),2.41(1H,m),2.27(3H,s)；13C-NMR(D2O,270MHz)δ178.4,137.2,135.7,131.0,130.0,127.6,126.7,73.9,40.5,35.9,32.8,18.7。
步骤5
(R)-烯丙基(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯(1-(R))
将反应器用2-(2-甲基苄基)丙烷-1,3-二胺L-酒石酸盐(3.57kg，10.9mol)和水(17L)填充。添加10M NaOH(17L，170mol)，维持反应温度低于25℃。在25℃下将该混合物搅拌30min持续3d，并且然后添加2-MeTHF(14L)。将各层分离并且将水相用2-MeTHF(14L)萃取。将合并的有机相干燥(硫酸钠)，过滤并在减压下浓缩，得到游离二胺。将反应器用该游离二胺、2-MeTHF(37.4L)以及二烯丙基碳酸酯(1.80kg，12.6mol)填充。经30min分批添加固定的脂肪酶Amano PS IM(5.61kg，3wt当量alents)并且将温度设置在30℃。4天后，1H NMR表明小于5％的起始物质剩余，并且将该反应混合物经硅藻土完全过滤并在减压下浓缩，以得到标题化合物(2.68kg，82％ee，100％产量)。通过HPLC的纯度：84.7％。
LC/MS:m/z 263.1[M+H]+
1H-NMR(CDCl3,270MHz)δ7.15-7.05(4H,m),5.99-5.81(1H,m),5.80-5.60(1H,brs),5.35-5.15(2H,m),4.54(2H,d),3.40-3.14(2H,m),2.85-2.52(4H,m),2.29(3H,s),1.90-1.77(1H,m),1.50-1.10(2H,br s)；13C-NMR(CDCl3,270MHz)δ156.6,138.1,136.1,133.0,130.5,129.7,126.3,125.9,117.5,65.4,44.0,43.4,41.6,34.2,19.5。
步骤6
(R)-烯丙基(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯(1-(R))D-酒石酸盐。
将粗(R)-烯丙基(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯(2.68kg，10.2mol)添加至EtOH(7.1L)中。添加D-酒石酸(1.53kg，10.2mol)在EtOH(8L)中的溶液，保持温度低于25℃。约1h后，沉淀开始形成并且允许将该混合物搅拌过夜。在25℃下添加MeCN(5L)并将固体滤出，用MeCN(2x5L)洗涤并在在40℃下在减压下干燥，以得到2.94kg呈碱/二-酸＝2:1的立体异构体比率的标题化合物((R)D-酒石酸盐，100％产量)。通过HPLC的纯度：91.6％。
LC/MS:m/z 263.1[M+H]+
1H-NMR(DMSO-d6,270MHz)δ7.50(1H,t),7.22-7.05(4H,m),5.98-5.85(1H,m),5.35-5.12(2H,m),4.48(2H,d),3.95(2H,s),3.13-2.99(2H,m),2.90-2.79(1H,m),2.75-2.58(2H,m),2.26(3H,s),2.08(1H,m)；13C-NMR(DMSO-d6,270MHz)δ174.6,156.6,137.4,136.1,133.7,130.3,129.7,126.3,125.8,117.0,71.8,64.4,65.5,37.6,32.7,19.1,18.9。
手性HPLC(方法A)：88.3％ee；r.t.＝11.14min(S),14.57min(R)。
步骤7
(R)-烯丙基(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯
在氮下，向50L试管中添加水(14.7L)和MTBE(14.7L)，这随后是添加该(R)-烯丙基(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯(1-(R))D-酒石酸盐(步骤6，2940g)。将10MNaOH(14.7L)添加至将该混合物中并且将温度保持低于30℃。将该混合物搅拌30mins，将有机物分离并且将水层用MTBE(14.7L)重新萃取。将有机物的一部分(1L)在真空中浓缩，以给出推测的产量为1779g，95％。
LC/MS:m/z 263.1[M+H]+
1H NMR(CDCl3,270MHz)δ7.05-7.15(4H,m),5.80-5.99(1H,m),5.32-5.14(m,2H),4.52(d,2H),3.15-3.38(m,2H),2.55-2.81(m,2H),2.54(d,2H),2.29(s,3H),1.76-1.87(m,1H)。
步骤8
(S)-烯丙基叔丁基(2-(2-甲基苄基)丙烷-1,3-二基)二氨基甲酸酯
在氮下向50L试管中添加溶解于MTBE(29.4L)中的(R)-烯丙基(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯(1740g)。这随后添加三乙胺(922mL)。将该混合物冷却至0℃并用溶解于MTBE(3.48L)中的BOC-酸酐(1600mL，1518g)处理。将反应加热至20℃并搅拌2h。由1HNMR判断反应完成。将反应用水(8.7L)填充并搅拌15min。将有机物分离并用5％柠檬酸(8.7L)和盐水(8.7L)洗涤，之后经硫酸镁干燥，过滤并在真空中浓缩，得到标题化合物(2320g，94％)。1H NMR指示纯度>90％。
1H NMR(CDCl3,270MHz)δ7.02-7.10(m,4H),5.82-5.99(m,1H),5.55(t,1H),5.32-5.15(m,2H),5.02(t,1H),4.52(d,2H),3.17-3.30(m,2H),2.95-3.15(m,2H),2.51(d,2H),2.28(s,3H0,1.87-1.95(m,1H),1.43(s,9H)。
步骤9
(S)-叔丁基(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯
在氮下向50L试管中添加溶解于DCM(12.9L)和MeOH(10.3L)中的(S)-烯丙基叔丁基(2-(2-甲基苄基)丙烷-1,3-二基)二氨基甲酸酯(2330g)，这随后添加Pd(PPh3)4(148.4g)。将该反应混合物冷却至5℃并且经一个2h的时间段用NaBH4(729g)分批填充。将反应加热至20℃并搅拌2h，将该反应混合物小心地淬灭进入水(46.6L)中并且然后搅拌20min。将有机物分离并将水层用DCM(23.6L)重新萃取。将合并的有机物经硫酸镁干燥，过滤并在真空中浓缩，以给出标题化合物(1679g，100％产量(通过1H NMR，大约80％纯的))。
1H NMR(CDCl3,270MHz)δ7.02-7.15(m,4H),5.22(br s,1H),3.10-3.28(m,2H),2.62-2.80(m,2H),2.52(d,2H),2.29(s,3H),1.75-1.82(m,1H),1.92(s,9H),1.30(br s,2H)。
步骤10
(S)-叔丁基(3-(3,5-二氨基- 6 -氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基 甲酸酯
在氮下向5L试管中添加3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酸(100g)、HBTU(202.8g)、THF(1200mL)以及DIPEA(111mL)。允许将反应在室温下搅拌24h。向该反应中添加溶解于THF(1.49L)中的(S)-叔丁基(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯(步骤9，148.6g)。应当注意的是，在添加期间该反应放热达10℃。允许将反应在室温下搅拌24h，LCMS指示剩余5％加成物。将该混合物加热至35℃持续4h。LC/MS指示剩余2％加成物。将反应再搅拌1h，之后冷却至室温并在真空中浓缩。将残余物吸收于乙酸乙酯(1.5L)和MTBE(1.5L)中并用饱和的NaHCO3(1L)、5％柠檬酸(700mL)和盐水(700mL)洗涤。将有机物经硫酸镁干燥，过滤并在真空中浓缩。将残余物吸收于MTBE(1L)中并重新浓缩，之后被吸收于MTBE(500mL)和二***(500mL)中，并且过滤以去除DIPEA盐。将滤液浓缩并且分析指示剩余一些DIPEA盐。将残余物用MTBE(750mL)和二***(750mL)重新研磨并且再次过滤。将滤液浓缩，以给出标题化合物(225g，94％(溶剂和TMU占比)。
LC/MS:m/z 349.2[M+H]+
1H NMR(CDCl3,270MHz)δ7.46(t,1H),7.13(m,4H),5.52(t,1H),5.22(br s,2H),3.62-3.75(m,1H),3.00-3.40(m,5H),2.80(s,3H),2.49-2.75(m,2H),1.95-2.02(m,1H),1.42(s,9H)。
步骤11
3,5-二氨基-N-[(2R)-3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基]-6-氯吡嗪-2-甲酰胺
在氮下向20L法兰烧瓶中添加在二噁烷(6L)中的(S)-叔丁基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯(步骤10，2215g)。将该混合物搅拌20min直至完全溶解。然后向该反应中添加在二噁烷(10L)中的4M HCl。该反应释放出可观量的气体并且将温度升至35℃，之后应用降温。在该反应中观察到粘性油性沉淀。将该反应混合物进行LC/MS，1h后指示完全反应。将上清液滗析出并在真空中浓缩。将油性粘性固体溶解于水(6L)中并与溶解于水(2L)中的浓缩的上清液合并。将水层用MTBE(5L)洗涤。然后将水层用10M NaOH(2L)碱化并用2-Me-THF(4x 10L)萃取。将有机物干燥，过滤并在真空中浓缩。然后将残余物从MTBE(2x 4L)中浓缩，以去除残余的2-MeTHF。将固体用MTBE：庚烷(9L:1.8L)研磨并且允许搅拌过周末。将该固体过滤并在烘箱中在40℃下干燥，得到标题化合物(1657g，96％)。
1H NMR(CDCl3,270MHz)δ7.60(t,1H),7.08-7.15(m,4H),5.75(br s,2H),5.12(bs,2H),3.38-3.45(m,2H),2.52-2.82(m,4H),2.30(s,3H),1.80-1.98(m,2H),1.20-1.28(m,2H)。
步骤12
(R)-3,5-二氨基-N-(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)-6-氯吡嗪-2-甲酰胺(2R, 3S)-2-苯甲酰基-3-(苯甲酰基氧基)琥珀酸酯
在氮下向5L试管中添加3,5-二氨基-N-[(2R)-3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基]-6-氯吡嗪-2-甲酰胺(127.4g)和甲醇(892mL)。将该混合物温和地加热至30℃直至全部固体溶解。将反应冷却至室温下并且添加在甲醇(458mL)中的(+)-二苯甲酰基-D-酒石酸(65.5g)。允许将反应搅拌，大约2h后固体开始沉淀。允许将反应搅拌过周末。将乙酸异丙酯(1.5L)添加至该混合物中并且持续搅拌4h。然后将沉淀滤出并用乙酸异丙酯(2x 1L)洗涤。然后将固体在烘箱中在40℃下干燥3d。获得以碱/二-酸＝2:1的立体异构体比率的总的147.5g(74％)。
1H NMR(CDCl3,270MHz):δ7.60(t,1H),7.08-7.15(m,4H),5.75(br s,2H),5.12(bs,2H),3.38-3.45(m,2H),2.52-2.82(m,4H),2.30(s,3H),1.80-1.98(m,2H),1.20-1.28(m,2H)。
手性HPLC(方法A)：98.7％ee，Rt＝11.93min(R)，14.24min(S)。
步骤13
(R)-3,5-二氨基-N-(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)-6-氯吡嗪-2-甲酰胺
将(R)-3,5-二氨基-N-(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)-6-氯吡嗪-2-甲酰胺(2R,3S)-2-苯甲酰基-3-(苯甲酰基氧基)琥珀酸酯(20g，38.46mmol)悬浮于2-甲基-THF(200mL)和水(200mL)中，并且用冰浴冷却。缓慢添加氢氧化钠1M(42.3mL，42.31mmol)，并且然后将该混合物在40℃下搅拌直至全部材料溶解。将该混合物冷却至室温并将各相分离。将水相用2-甲基-THF(2x 200mL)萃取。将合并的有机相用盐水(200mL)洗涤，用相分离器干燥并在真空中蒸发，以产出呈灰白色固体的(R)-3,5-二氨基-N-(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)-6-氯吡嗪-2-甲酰胺(13.3g，99％)。
LC/MS:m/z:349.3[M+H]+。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ1.50(bs,2H),1.76-1.87(m,1H),2.26(s,3H),2.4-2.49(m,2H),2.52-2.62(m,2H),3.18-3.28(m,2H),6.95(bs,2H),7.04-7.17(m,4H),8.14(t,1H)。
手性HPLC(方法B)：99.3％ee，Rt＝11.55min(S)，13.28min(R)。
+11.8(c 1.0,MeCN)。
中间体B
(S)-(9H-芴-9-基)甲基3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基) 丙基(哌啶-4-基甲基)氨基甲酸酯
步骤1：
(R)-叔丁基4-((3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基氨 基)甲基)哌啶-1-甲酸酯
向50-mL圆底烧瓶中放入叔丁基4-甲酰基哌啶-1-甲酸酯(122mg，0.57mmol，1.00当量)和3,5-二氨基-N-[(2R)-3-氨基-2-[(2-甲基苯基)甲基]丙基]-6-氯吡嗪-2-甲酰胺(中间体A，200mg，0.57mmol，1.0当量)在二氯甲烷(5mL)中的混合物，将该混合物搅拌1h。然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(486mg，2.29mmol，4.00当量)。将所得的溶液在室温下搅拌过夜。将所得的混合物用3x 10mL的水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。这生成250mg(80％)呈黄色固体的标题化合物。
LC/MS:m/z:546[M+H]+。
步骤2：
(S)-叔丁基4-(((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲 酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸酯
将在二噁烷(2.0mL)中的FMOC-氯化物(19mg，0.07mmol，1.00当量)滴加至(R)-叔丁基4-((3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基氨基)甲基)哌啶-1-甲酸酯(步骤1，40mg，0.07mmol，1.0当量)和Na2CO3(12mg，0.11mmol，1.5当量)在水/二噁烷(1:2，3mL)中的混合物中。将所得的溶液在室温下搅拌2h，用3x 5mL的乙酸乙酯萃取。将合并的有机相经无水硫酸钠干燥。在真空中去除溶剂后，得到42mg(75％)呈黄色固体的标题化合物。
LC/MS:m/z:768[M+H]+
步骤3：
(S)-(9H-芴-9-基)甲基3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基) 丙基(哌啶-4-基甲基)氨基甲酸酯
向25-mL圆底烧瓶中放入(S)-叔丁基4-(((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸酯(步骤2，20mg，0.03mmol，1.0当量)在HCl/MeOH(4M，3mL)中的溶液。将所得的溶液在室温下搅拌1h。将所得的混合物在真空下浓缩。这生成15mg(86％)呈黄色固体的9H-芴-9-基甲基N-[(2S)-3-[(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-基)甲酰胺基]-2-[(2-甲基苯基)甲基]丙基]-N-(哌啶-4-基甲基)氨基甲酸酯。
LC/MS:m/z:668[M+H]+
中间体C
(9H-芴-9-基)甲基(2-氨基乙基)(己基)氨基甲酸酯盐酸盐
步骤1
叔丁基(2-(苄基(己基)氨基)乙基)氨基甲酸酯
将N-苄基己烷-1-胺(2.69g，14.1mmol)、叔丁基(2-氧代乙基)氨基甲酸酯(4.48g，28.1mmol)以及DIPEA(2.46mL，14.1mmol)溶解于MeOH(20mL)中并在室温下搅拌45min。添加氰基硼氢化钠(1.77g，28.1mmol)和乙酸(0.806mL，14.1mmol)并持续搅拌18h。将反应通过添加8％NaHCO3(水性)进行淬灭并在室温下搅拌1h。将溶剂在真空中浓缩。将残余物用水稀释并用EtOAc(2x 100mL)萃取。将合并的有机相用Na2SO4(s)干燥，过滤并在真空中蒸发。将残余物通过自动快速色谱法在两个KP-SIL 100g柱上进行纯化。使用于庚烷中的梯度从5％-50％的EtOAc经过12CV作为流动相。收集产物并在真空中蒸发，以产出呈无色油状的叔丁基(2-(苄基(己基)氨基)乙基)氨基甲酸酯(3.19g，68％)。
LC/MS:m/z:335.6[M+H]+
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ0.84-0.92(m,3H),1.19-1.35(m,6H),1.38-1.66(m,11H),2.43(t,2H),2.52(t,2H),3.09-3.21(m,2H),3.56(s,2H),4.83-4.93(m,1H),7.22-7.37(m,5H)。
步骤2
叔丁基(2-(己基氨基)乙基)氨基甲酸酯
将叔丁基(2-(苄基(己基)氨基)乙基)氨基甲酸酯(3.19g，9.54mmol)溶解于MeOH(25mL)中，并添加20％Pd(OH)2/C(0.201g，0.29mmol)。将反应在步琪(Buchi)氢化器中在4巴下并在室温下进行氢化18h。将反应停止。再次添加20％Pd(OH)2/C(200mg，0.28mmol)并且持续氢化6h，停止氢化。将催化剂滤出，用MeOH洗涤并将滤液在真空中浓缩。将残余物溶解于MeOH(15mL)中，添加20％Pd(OH)2/C(250mg，0.36mmol)并且在4巴下并在室温下持续氢化16h。将催化剂滤出，用MeOH洗涤并将滤液在真空中蒸发。将反应再次溶解于MeOH中，添加20％Pd(OH)2/C(250mg，0.36)并且持续氢化3天。将催化剂滤出，用MeOH洗涤并将滤液在真空中蒸发，以产出呈无色油状的叔丁基(2-(己基氨基)乙基)氨基甲酸酯(2.38g，102％)。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ0.89(t,3H),1.22-1.36(m,6H),1.41-1.53(m,11H),2.61(t,2H),2.75(t,2H),3.19-3.28(m,2H),4.97(bs,1H)。
步骤3
(9H-芴-9-基)甲基(2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙基)(己基)氨基甲酸酯
向叔丁基(2-(己基氨基)乙基)氨基甲酸酯(2.38g，9.74mmol)在DCM(40mL)中的冰浴冷却的溶液中添加DIPEA(1.79mL，10.2mmol)和(9H-芴-9-基)氯甲酸甲酯(2.65g，10.2mmol)。将反应搅拌伴随冷却10min，并且然后在室温下搅拌1h。添加水(20mL)，震荡并将各相分离。将水相用DCM(2x 20mL)萃取。将合并的有机相用相分离器干燥并在真空中蒸发。将残余物通过自动快速色谱法在一个KP-SIL 100g柱上进行纯化。使用于庚烷中的梯度从5％-30％的EtOAc经过9Cv随后是于庚烷中的30％EtOAc经过3CV作为流动相。使用264nm的波长收集该产物。将收集的级分在真空中蒸发，以产出呈无色油状的(9H-芴-9-基)甲基(2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙基)(己基)氨基甲酸酯(3.70g，81％)。
LC/MS:m/z:467.4[M+H]+
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ0.89(t,3H),1.06-1.36(m,8H),1.43(s,9H),2.78-2.87(m,1H),2.95-3.08(m,2H),3.11-3.36(m,3H),4.18-4.26(m,1H),4.49-4.63(m,2H),4.89(bs,1H),7.3-7.36(m,2H),7.41(t,2H),7.59(d,2H),7.77(d,2H)。
步骤4
(9H-芴-9-基)甲基(2-氨基乙基)(己基)氨基甲酸酯盐酸盐
将乙酰氯(2.84mL，40.0mmol)滴加至MeOH(10mL，247mmol)的冰浴冷却的小瓶中并搅拌5min。然后将该溶液添加至(9H-芴-9-基)甲基(2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙基)(己基)氨基甲酸酯(3.7g，7.93mmol)中并将反应在室温下搅拌2.5h。将溶剂在真空中浓缩，以产出呈白色固体的(9H-芴-9-基)甲基(2-氨基乙基)(己基)氨基甲酸酯盐酸盐(2.92g，91％)。
LC/MS:m/z:367.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.82-0.97(m,4H),0.99-1.51(m,7H),2.68-2.88(m,3H),3.23-3.39(m,3H),4.23-4.4(m,2H),4.52(d,1H),7.29-7.37(m,2H),7.37-7.46(m,2H),7.64(d,2H),7.83-8.09(m,5H)。
中间体D
(S)-叔丁基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4- ((2-(己基氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基)氨基甲酸酯
步骤1
4-(2-羟基乙基)苯甲酯
将4-(2-羟基乙基)苯甲酸(2.41g，14.5mmol)溶解于MeOH(5mL)中并添加H2SO4(0.06mL，1.13mmol)。将反应在微波中在120℃下加热1h，并且然后在真空中蒸发。将残余物溶解于EtOAc(150mL)中，用8％NaHCO3(水性)(150mL)、盐水(50mL)洗涤，用相分离器干燥并在真空中蒸发，以产出呈灰白色油状的4-(2-羟基乙基)苯甲酯(2.41g，92％)。
LC/MS:m/z:181.0[M+H]+
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ2.94(t,2H),3.88-3.94(m,5H),7.32(d,2H),7.97-8.02(m,2H)。
步骤2
4-(2-氧代乙基))苯甲酯
添加4-(2-羟基乙基))苯甲酯(2.41g，13.37mmol)溶解于DCM(50mL)和戴斯-马丁高碘烷(Dess-Martin Periodinane)(6.24g，14.7mmol)。将反应在室温下搅拌2h并且然后通过添加15％Na2S2O3/NaHCO3 3:2(水性)(50mL)进行淬灭，并且剧烈搅拌30min。将各相分离并将水相用DCM(2x 50mL)萃取。将合并的有机相用相分离器干燥并在真空中蒸发。将残余物通过自动快速色谱法在一个KP-SIL 100g柱上进行纯化。使用于庚烷中的梯度从5％-40％的EtOAc经过9Cv随后是于庚烷中的50％EtOAc经过3CV作为流动相。使用245nm的波长收集该产物。收集产物并在真空中蒸发，以产出呈黄色固体的4-(2-氧代乙基)苯甲酯(0.880g，36.9％)。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ3.78(d,2H),3.93(s,3H),7.29-7.34(m,2H),8.03-8.09(m,2H),9.79(t,1H)。
步骤3
(S)-4-(2-((叔-丁氧基羰基)(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲 基苄基)丙基)氨基)乙基)苯甲酯
将(R)-3,5-二氨基-N-(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)-6-氯吡嗪-2-甲酰胺(中间体A，2.00g，5.56mmol)、4-(2-氧代乙基)苯甲酯(1.09g，6.12mmol)以及DIPEA(0.971mL，5.56mmol)溶解于MeOH(4mL)中并在室温下搅拌30min。然后添加氰基硼氢化钠(1.05g，16.7mmol)和乙酸(0.318mL，5.56mmol)并将反应在室温下搅拌3h。将反应通过添加8％NaHCO3(水性)进行淬灭。将反应用EtOAc(100mL)稀释，搅拌30min并且将各相分离。将水相用EtOAc(100mL)萃取。将合并的有机相用盐水(50mL)洗涤，用相分离器干燥并在真空中蒸发。将残余物溶解于DCM(20mL)中并且添加BOC2O(1.290mL，5.56mmol)。将该混合物在室温下搅拌5.5h并且然后在真空中浓缩。将残余物通过自动快速色谱法在一个KP-SIL100g柱上进行纯化。使用于庚烷中的梯度从10％-80％的EtOAc经过10CV作为流动相。使用270nm的波长收集该产物。收集产物峰并在真空中蒸发，以产出呈灰白色固体的(S)-4-(2-((叔-丁氧基羰基)(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基)乙基)苯甲酯(1.84g，54％)。
LC/MS:m/z:611.4[M+H]+
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ1.36(d,9H),2.15-2.26(m,4H),2.45-2.49(m,2H),2.75(t,2H),2.93(dd,1H),3.01-3.4(m,5H),3.84(s,3H),6.97(bs,2H),7.05-7.17(m,4H),7.21(d,2H),7.82(d,2H),7.85-7.94(m,1H)。
步骤4
(S)-4-(2-((叔-丁氧基羰基)(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲 基苄基)丙基)氨基)乙基)苯甲酸
将(S)-4-(2-((叔-丁氧基羰基)(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基)乙基)苯甲酯(1.84g，2.56mmol)溶解于MeOH(20mL)中并添加氢氧化钠(3.37mL，12.8mmol)。将反应在室温下搅拌3天。然后将溶剂(MeOH)在真空中浓缩。添加水(50mL)和MeTHF(50mL)并且将pH用3M Hcl(水性)调节至大约2。将各相分离并且将水相用L-MeTHF(50mL)萃取。将合并的有机相用Na2SO4(s)干燥，过滤并在真空中蒸发，以产出呈灰白色固体的(S)-4-(2-((叔-丁氧基羰基)(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基)乙基)苯甲酸(1.53g，100％)。
LC/MS:m/z:597.4[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.33(s,9H),2.21(d,4H),2.38-2.49(m,2H),2.73(t,2H),2.83-3.43(m,6H),6.84-7.26(m,8H),7.78-7.98(m,3H),12.80(bs,1H)。
步骤5
(S)-叔丁基4-((2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(己基)氨基)乙基)氨基甲酰 基)苯乙基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯
将(S)-4-(2-((叔-丁氧基羰基)(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基)乙基)苯甲酸(1.24g，1.77mmol)、2-(1H-苯并[d][1,2,3]***-1-基)-1,1,3,3-四甲基异脲鎓四氟硼酸酯(0.623g，1.94mmol)以及DIPEA(1.54mL，8.83mmol)溶解于DCM(30mL)中并在室温下搅拌5min，之后添加(9H-芴-9-基)甲基(2-氨基乙基)(己基)氨基甲酸酯盐酸盐(中间体C，0.95g，2.12mmol)。将反应搅拌2.5h。将反应用8％NaHCO3(水性)(150mL)洗涤。将水相用DCM(150mL)萃取。将合并的有机相用相分离器干燥并在真空中蒸发。将残余物通过自动快速色谱法在一个KP-SIL100g柱上进行纯化。使用于庚烷中的梯度从20％-80％的EtOAc经过9Cv随后是于庚烷中的80％EtOAc经过3CV作为流动相。收集产物并在真空中蒸发，以产出呈灰白色固体的(S)-叔丁基4-((2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯(1.56g，93％)。
LC/MS:m/z:945.6[M+H]+
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ0.82(t,3H),0.87-0.97(m,2H),1-1.27(m,5H),1.33(s,9H),1.38-1.47(m,1H),2.15-2.27(m,4H),2.45(dd,1H),2.69(s,2H),2.81-2.89(m,1H),2.9-3(m,1H),3.01-3.41(m,11H),4.15-4.27(m,2H),4.48(d,1H),6.96(bs,2H),7.05-7.18(m,6H),7.30(t,2H),7.39(t,2H),7.55-7.65(m,2H),7.71(dd,2H),7.8-7.97(m,3H),8.37-8.51(m,1H)。
步骤6
(S)-叔丁基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4- ((2-(己基氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基)氨基甲酸酯
将(S)-叔丁基4-((2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯(1.59g，1.68mmol)溶解于THF(15mL)中并添加哌啶(1.67mL，16.8mmol)。将该反应在室温下搅拌3h并且然后在真空中浓缩。将残余物通过自动快速色谱法在一个KP-SIL100g柱上进行纯化。使用于DCM中的梯度从4％-8％的(在MeOH中的2M氨)经过5Cv随后是于DCM中的8％的(在MeOH中的2M氨)经过10CV作为流动相。收集产物并在真空中蒸发，以产出呈灰白色固体的(S)-叔丁基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4-((2-(己基氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基)氨基甲酸酯(1.03g，85％)。
LC/MS:m/z:723.6[M+H]+
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ0.84(t,3H),1.19-1.44(m,17H),2.15-2.29(m,4H),2.45(dd,1H),2.54(t,2H),2.65-2.75(m,4H),2.94(dd,1H),3.02-3.18(m,2H),3.18-3.3(m,3H),3.3-3.4(m,4H),6.97(bs,2H),7.05-7.2(m,7H),7.73(d,2H),7.79-7.97(m,1H),8.32(t,1H)。
中间体E
(S)-叔丁基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4- ((2-(己基氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基甲酸酯
步骤1
(S)-4-(((叔-丁氧基羰基)(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基 苄基)丙基)氨基)甲基)苯甲酯
将(R)-3,5-二氨基-N-(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)-6-氯吡嗪-2-甲酰胺(中间体A，2.17g，6.22mmol)、4-甲酰基苯甲酯(1.12g，6.84mmol)以及DIPEA(1.09mL，6.22mmol)溶解于MeOH(15mL)中并在室温下搅拌1h。然后添加氰基硼氢化钠(0.782g，12.4mmol)和乙酸(0.392mL，6.84mmol)并将反应在室温下搅拌3h。当通过LCMS分析的监测显示未完全转化时，添加4-甲酰基苯甲酯(200mg，1.22mmol)并持续搅拌3h。然后再次添加4-甲酰基苯甲酯(200mg，1.22mmol)和氰基硼氢化钠(200mg，3.18mmol)并持续搅拌18h。将反应通过添加8％NaHCO3(水性)进行淬灭。将溶剂在真空中浓缩。将残余物溶解于EtOAc(250mL)和8％NaHCO3(水性)(250mL)中，震荡并将各相分离。将水相用EtOAc(250mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4(s)干燥，过滤并在真空中蒸发。将残余物溶解于DCM(50mL)中，添加BOC2O(1.63g，7.46mmol)并将反应在室温下搅拌2h。将该混合物在真空中浓缩并且然后通过自动快速色谱法在一个KP-SIL 100g柱上进行纯化。使用于庚烷中的梯度从20％-80％的EtOAc经过12CV作为流动相。使用265nm的波长收集该产物。将产物峰在真空中蒸发，以产出呈固体的(S)-4-(((叔-丁氧基羰基)(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基)甲基)苯甲酯(2.85g，77％)。
LC/MS:m/z:597.5[M+H]+
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ1.36(d,9H),2.21(s,3H),2.24-2.38(m,1H),2.45-2.57(m,2H),2.95-3.3(m,4H),3.83(s,3H),4.33-4.51(m,2H),6.97(bs,2H),7.04-7.17(m,4H),7.22(d,2H),7.76-7.96(m,3H)。
步骤2
(S)-4-(((叔-丁氧基羰基)(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基 苄基)丙基)氨基)甲基)苯甲酸
将(S)-4-(((叔-丁氧基羰基)(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基)甲基)苯甲酯(2.85g，4.77mmol)溶解于MeOH(40mL)和氢氧化钠中，添加3.8M(6.28mL，23.9mmol)。将反应在室温下搅拌24h并且然后将溶剂(MeOH)在真空中浓缩。添加水(75mL)和MeTHF(75mL)并且将pH用3M Hcl(水性)调节至大约2。将各相分离并将水相用MeTHF(75mL)萃取。将合并的有机相用相分离器干燥并在真空中蒸发，以产出呈固体的(S)-4-(((叔-丁氧基羰基)(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基)甲基)苯甲酸(2.75g，99％)。
LC/MS:m/z:583.4[M+H]+
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ1.32-1.42(m,9H),2.20(s,3H),2.24-2.38(m,1H),2.5-2.55(m,2H),2.92-3.36(m,4H),4.27-4.54(m,2H),6.97(bs,2H),7.03-7.17(m,4H),7.19(d,2H),7.78-8(m,3H),12.85(bs,1H)。
步骤3
(S)-叔丁基4-((2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(己基)氨基)乙基)氨基甲酰 基)苄基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯
将(S)-4-(((叔-丁氧基羰基)(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基)甲基)苯甲酸(1.61g，2.76mmol)、2-(1H-苯并[d][1,2,3]***-1-基)-1,1,3,3-四甲基异脲鎓四氟硼酸酯(0.975g，3.04mmol)以及DIPEA(2.41mL，13.8mmol)溶解于DCM(150mL)中并在室温下搅拌5min，之后添加(9H-芴-9-基)甲基(2-氨基乙基)(己基)氨基甲酸酯盐酸盐(中间体C，1.48g，3.31mmol)。将反应搅拌1.5h。将反应用8％NaHCO3(水性)(100mL)洗涤。将水相用DCM(100mL)萃取。将合并的有机相用相分离器干燥并在真空中蒸发。将残余物通过自动快速色谱法在一个KP-SIL100g柱上进行纯化。使用于庚烷中的梯度从20％-80％的EtOAc经过12Cv随后是于庚烷中的80％EtOAc经过3CV作为流动相。收集产物并在真空中蒸发，以产出呈灰白色固体的(S)-叔丁基4-((2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯(2.38g，93％)。
LC/MS:m/z:931.5[M+H]+
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ0.82(t,3H),0.86-0.96(m,1H),0.99-1.27(m,6H),1.27-1.48(m,10H),2.19(s,3H),2.23-2.35(m,1H),2.45-2.54(m,2H),2.8-2.9(m,1H),2.9-3.05(m,1H),3.05-3.38(m,8H),4.16-4.32(m,3H),4.39-4.56(m,2H),6.97(bs,2H),7.02-7.18(m,6H),7.30(t,2H),7.39(t,2H),7.60(t,2H),7.64-7.76(m,2H),7.78-7.99(m,3H),8.37-8.52(m,1H)。
步骤4
(S)-叔丁基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4- ((2-(己基氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基甲酸酯
将(S)-叔丁基4-((2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯(2.38g，2.55mmol)溶解于THF(25mL)中并添加哌啶(2.53mL，25.6mmol)。将反应在室温下搅拌20h。将溶剂在真空中蒸发。将残余物通过自动快速色谱法在一个KP-SIL 100g柱上进行纯化。使用于DCM中的梯度从2.5％-8％的(在MeOH中的2M氨)经过9Cv随后是于DCM中的8％的(在MeOH中的2M氨)经过3CV作为流动相。收集产物并在真空中蒸发，以产出呈灰白色固体的(S)-叔丁基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4-((2-(己基氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基甲酸酯(1.60g，88％)。
LC/MS:m/z:709.5[M+H]+
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ0.84(t,3H),1.17-1.31(m,6H),1.31-1.45(m,11H),2.20(s,3H),2.24-2.37(m,1H),2.51-2.57(m,3H),2.68(t,2H),2.91-3.06(m,1H),3.06-3.4(m,6H),4.23-4.36(m,1H),4.4-4.53(m,1H),6.97(bs,2H),7.04-7.19(m,6H),7.72(d,2H),7.79-7.98(m,1H),8.28-8.35(m,1H)。
中间体F
9H-芴-9-基)甲基(3-(4-甲酰基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)氨基甲酸酯
步骤1：
(9H-芴-9-基)甲基3-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)-3-氧代丙基氨基甲酸酯
向哌啶-4-基甲醇(200mg，1.74mmol)、3-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基氨基)丙酸(541mg，1.74mmol)以及HATU(660mg，1.74mmol)在干DMF(5mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.910mL，5.21mmol)。将该黄色混合物在环境温度下搅拌过夜。将该反应混合物用EtOAc(50mL)稀释，并用15％水性NaCl溶液(50mL)和30％水性NaCl溶液(50mL)洗涤。将溶剂蒸发并且将该残余物通过制备型HPLC进行纯化。冷冻干燥后，将该残余物重新溶解于DCM中并添加庚烷。蒸发，得到呈无色固体的标题化合物(378mg，53％)。
LC/MS:m/z:409[M+H]+
1H NMR(500MHz,DMSO)d 0.88-1.09(m,2H),1.51-1.73(m,3H),2.44(t,2H),2.47-2.52(m,1H+DMSO peak),2.93(t,1H),3.18(dd,2H),3.23(d,2H),3.80(d,1H),4.20(t,1H),4.29(d,2H),4.37(d,1H),7.21(t,1H),7.33(dt,2H),7.41(t,2H),7.68(d,2H),7.89(d,2H)。
步骤2
(9H-芴-9-基)甲基(3-(4-甲酰基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)氨基甲酸酯
向(9H-芴-9-基)甲基3-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)-3-氧代丙基氨基甲酸酯(362mg，0.89mmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(solid Dess-MartinPeriodinane)(413mg，0.97mmol)。将所得的悬浮液在环境温度下搅拌2.5h。向该反应混合物中添加10％Na2S2O3(3mL)、10％NaHCO3(3mL)以及DCM(2mL)，将该混合物剧烈搅拌10min并允许静置。将各层分离并将包含不溶性盐的水相重复用DCM萃取。将合并的有机相经MgSO4干燥，过滤并将溶剂蒸发，以留下粗产物(440mg)，将其不进行进一步纯化而使用。
LC/MS:m/z:407[M+H]+
中间体G
(R)-叔丁基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4- ((2-(己基氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基甲酸酯
步骤1
(R)-烯丙基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基 甲酸酯
将(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-基)(1H-咪唑-1-基)甲酮(858mg，3.59mmol)和(R)-烯丙基(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯(中间体A，步骤5)(990mg，3.77mmol)悬浮于NMP(15mL)中并加热至100℃持续4h。允许将该反应混合物冷却至室温。添加EtOAc(50mL)和水(50mL)，震荡并将各相分离。将水相用EtOAc(2x 50mL)萃取。将合并的有机相用0.1M HCl(水性)(50mL)、水(2x 50mL)、盐水(50mL)洗涤，用相分离器干燥并在真空中蒸发。将残余物通过自动快速色谱法在一个KP-SIL 100g柱上进行纯化。使用于庚烷中的梯度从20％-80％的EtOAc经过9CV作为流动相。使用270nm的波长收集该产物。将收集的级分合并，并在真空中蒸发，以产出呈灰白色固体的(R)-烯丙基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯(714mg，45.9％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ1.9-2.02(m,1H),2.23(s,3H),2.41-2.55(m,2H),2.91-3.09(m,2H),3.12-3.23(m,2H),4.48(d,2H),5.17(d,1H),5.24-5.32(m,1H),5.85-5.96(m,1H),6.97(bs,2H),7.04-7.15(m,3H),7.21-7.25(m,1H),7.28(t,1H),8.00(t,1H)。
LC/MS:m/z 433.3[M+H]+
步骤2
(S)-3,5-二氨基-N-(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)-6-氯吡嗪-2-甲酰胺
将(R)-烯丙基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯(694mg，1.60mmol)、1,3-二甲基吡啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮(688mg，4.41mmol)、乙酸钯(II)(14.4mg，0.06mmol)以及三苯基膦(50.5mg，0.19mmol)溶解于DCM(7mL)中并加热至35℃保持1.5h。形成悬浮液。添加DCM(50mL)和5％Na2CO3(水性)(50ml)并且将该混合物搅拌15min。将各相分离并将水相用DCM(50mL)萃取。将合并的有机相用相分离器干燥并在真空中蒸发。将该化合物通过制备型HPLC在Kromasil C8柱(10μm 250x 50ID mm)上使用梯度为于H2O/MeCN/AcOH 95/5/0.2缓冲液中的5％-45％乙腈，经20分钟以100mL/min的流速进行纯化。将这些化合物通过UV在270nm处检测。收集产物级分并冷冻干燥，以产出586mg的该乙酸盐。将该盐在EtOAc(50mL)和5％Na2CO3(水性)中搅拌15min，并且然后将各相分离。将水相用EtOAc(3x 50mL)萃取。将合并的有机相经Na2SO4(s)干燥，过滤并在真空中蒸发，以产出呈浅黄色固体的(S)-3,5-二氨基-N-(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)-6-氯吡嗪-2-甲酰胺(411mg，73.5％)。手性纯度：60％ee，用手性SFC柱确定：ChiralPak IC(150x 4.6mm)，3μm颗粒大小，流动相：在CO2中的20％MeOH/DEA 100：0.5，120巴，流速4mL/min。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ1.73(bs,2H),2.01-2.12(m,1H),2.50(s,3H),2.64-2.73(m,2H),2.76-2.86(m,2H),3.4-3.53(m,2H),7.19(bs,2H),7.28-7.41(m,4H),8.39(t,1H)。
LC/MS:m/z 349.2[M+H]+
步骤3
(R)-叔丁基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基 甲酸酯
将(S)-3,5-二氨基-N-(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)-6-氯吡嗪-2-甲酰胺(1.19g，3.41mmol)、BOC2O(0.871mL，3.75mmol)以及DIPEA(0.596mL，3.41mmol)溶解于DCM(100mL)中并在室温下搅拌18h。将该反应混合物用0.1M Hcl(水性)洗涤，用相分离器干燥并在真空中蒸发。将残余物通过自动快速色谱法在一个KP-SIL 100g柱上进行纯化。使用于庚烷中的梯度从30％-70％的EtOAc经过9Cv随后是于庚烷中的70％EtOAc经过3CV作为流动相。使用268nm的波长收集该产物。将产物在真空中蒸发，以产出(1.150g，75％)作为灰白色固体。
将对映体使用手性制备型HPLC(柱：ChiralPak AY(250x 20mm)，20μm颗粒大小，流动相：庚烷/EtOH/TEA 20/80：0.1，流速120m/min)进行纯化。收集第一次洗脱的化合物，以产出866mg，手性纯度：98.6％ee。旋光度(乙腈，c＝1)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ1.38(d,9H),1.88-2(m,1H),2.23(s,3H),2.39-2.49(m,2H),2.83-2.93(m,1H),2.93-3.03(m,1H),3.09-3.23(m,2H),6.89(t,1H),6.97(bs,2H),7.04-7.15(m,3H),7.22(d,1H),8.01(t,1H)。
LC/MS:m/z 449.2[M+H]+
步骤4
(S)-3,5-二氨基-N-(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)-6-氯吡嗪-2-甲酰胺
将乙酰氯(1.422mL，20mmol)滴加至aMeOH(5mL，123.59mmol)的冰浴冷却的烧瓶中。将该混合物搅拌5min，并且然后向烧瓶中添加(R)-叔丁基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基甲酸酯(866mg，1.93mmol)。将反应在室温下搅拌45min并且然后在真空中蒸发。将残余物在EtOAc(125mL)和8％NaHCO3(水性)(125mL)中搅拌15min。将各相分离并将水相用EtOAc(3x 125mL)萃取。将合并的有机相用Na2SO4(s)干燥，过滤并在真空中蒸发，以产出呈灰白色固体的(S)-3,5-二氨基-N-(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)-6-氯吡嗪-2-甲酰胺(459mg，68.2％)。手性纯度：99％ee，用手性SFC柱确定：LuxC4(150x 4.6mm)，3μm颗粒大小，流动相：在CO2中的35％EtOH/NH3 100：0.5，120巴，流速4mL/min。旋光度(CHCl3，c＝1)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ1.57(bs,2H),1.78-1.88(m,1H),2.26(s,3H),2.39-2.48(m,2H),2.52-2.62(m,2H),3.18-3.28(m,2H),6.95(bs,2H),7.04-7.17(m,4H),8.14(t,1H)。
LC/MS:m/z 349.2[M+H]+
步骤5
(R)-(9H-芴-9-基)甲基(2-(4-(((叔-丁氧基羰基)(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2- 甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基)甲基)苯酰胺基)乙基)(己基)氨基甲酸酯
将(S)-3,5-二氨基-N-(3-氨基-2-(2-甲基苄基)丙基)-6-氯吡嗪-2-甲酰胺(215mg，0.62mmol)、(9H-芴-9-基)甲基(2-(4-甲酰基苯酰胺基)乙基)(己基)氨基甲酸酯(中间体H)(293mg，0.59mmol)以及DIPEA(0.103mL，0.59mmol)溶解于MeOH(5mL)中并在室温下搅拌1.5h。然后添加氰基硼氢化钠(38.8mg，0.62mmol)和乙酸(0.101mL，1.76mmol)并持续搅拌3h。将反应通过添加8％NaHCO3(水性)进行淬灭。添加DCM(25mL)和8％NaHCO3(水性)(25mL)，震荡并将各相分离。将水相用DCM(25mL)萃取。将合并的有机相用相分离器干燥并在真空中蒸发。
将残余物和BOC2O(0.150mL，0.65mmol)溶解于DCM(5mL)中并在室温下搅拌18h。将该反应混合物在真空中浓缩。将产物通过自动快速色谱法在一个KP-SIL 50g柱上进行纯化。使用于庚烷中的梯度从50％-100％的EtOAc经过9CV作为流动相。使用265nm的波长收集该产物。将产物级分在真空中蒸发，以产出呈无色泡沫状的(R)-(9H-芴-9-基)甲基(2-(4-(((叔-丁氧基羰基)(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基)甲基)苯酰胺基)乙基)(己基)氨基甲酸酯(511mg，93％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ0.82(t,3H),0.87-0.96(m,1H),0.99-1.26(m,6H),1.27-1.5(m,10H),2.19(s,3H),2.23-2.35(m,1H),2.8-2.9(m,1H),2.9-3.04(m,1H),3.05-3.39(m,10H),4.16-4.32(m,3H),4.39-4.57(m,2H),6.88-7.18(m,8H),7.30(t,2H),7.39(t,2H),7.55-7.76(m,4H),7.77-7.99(m,3H),8.37-8.52(m,1H)。
LC/MS:m/z 931.4[M+H]+
步骤6
(R)-叔丁基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4- ((2-(己基氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基甲酸酯
将(R)-(9H-芴-9-基)甲基(2-(4-(((叔-丁氧基羰基)(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)氨基)甲基)苯酰胺基)乙基)(己基)氨基甲酸酯(511mg，0.55mmol)溶解于THF(5mL)中并添加哌啶(0.543mL，5.49mmol)。将反应在室温下搅拌18h。将溶剂在真空中蒸发。将残余物通过自动快速色谱法在一个KP-SIL 50g柱上进行纯化。使用于DCM中的梯度从2.5％-8％的(在MeOH中的2M氨)经过9Cv随后是于DCM中的8％的(在MeOH中的2M氨)经过3CV作为流动相。收集产物并在真空中蒸发，以产出呈灰白色固体的(R)-叔丁基(3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基)(4-((2-(己基氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基甲酸酯(326mg，84％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ0.84(t,3H),1.12-1.45(m,17H),2.20(s,3H),2.24-2.36(m,1H),2.51-2.58(m,2H),2.69(t,2H),2.92-3.05(m,1H),3.05-3.4(m,7H),4.22-4.37(m,1H),4.38-4.54(m,1H),6.97(bs,2H),7.03-7.18(m,6H),7.72(d,2H),7.79-7.98(m,1H),8.28-8.35(m,1H)。
LC/MS:m/z 709.4[M+H]+
中间体H
(9H-芴-9-基)甲基(2-(4-甲酰基苯酰胺基)乙基)(己基)氨基甲酸酯
将4-甲酰基苯甲酸(0.81g，5.40mmol)和4-甲基吗啉(1.424mL，12.95mmol)溶解于THF(10mL)中并用冰浴冷却。滴加氯甲酸异丁酯(0.700mL，5.40mmol)，将该混合物搅拌30min并添加(9H-芴-9-基)甲基(2-氨基乙基)(己基)氨基甲酸酯盐酸盐(中间体C)(1.739g，4.32mmol)。将反应在室温下搅拌2.5h。将所得的悬浮液在EtOAc(50mL)和水(50mL)之间萃取。将该有机相用5％柠檬酸(2x 50mL)、10％Na2CO3(水性)(50mL)、盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4(s)干燥，过滤并在真空中蒸发。将残余物通过自动快速色谱法在一个KP-SIL 100g柱上进行纯化。使用于庚烷中的梯度从20％-80％的EtOAc经过9Cv随后是于庚烷中的80％EtOAc经过3CV作为流动相。使用260nm的波长收集该产物。将产物峰在真空中蒸发，以产出呈白色固体的(9H-芴-9-基)甲基(2-(4-甲酰基苯酰胺基)乙基)(己基)氨基甲酸酯(1.690g，79％)。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ0.82-0.95(m,3H),1.08-1.46(m,8H),3.02-3.21(m,3H),3.48-3.64(m,3H),4.16-4.25(m,1H),4.51-4.74(m,2H),7.2-7.42(m,5H),7.5-7.67(m,3H),7.75(d,2H),7.93(q,3H),10.06(s,1H)。
LC/MS:m/z 499.5[M+H]+
中间体I
4-甲酰基-N-(2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)苯甲酰胺
步骤1
叔丁基2-(己基氨基)乙基氨基甲酸酯
向10L法兰烧瓶中填充己基胺(1020mL，7.76mol)、Na2CO3(206g，1.94mol)以及MeCN(2560mL)。将该混合物经1h加热至70℃。向该混合物中缓慢填充叔丁基2-溴乙基氨基甲酸酯(371.3g，289.6g有活性的，1.29mol)在MeCN(740ml)中的溶液，经11/2h。将反应在70℃下搅拌过夜。将反应冷却至50℃并在真空中浓缩。向搅拌的该残余物中填充水(2100mL)和EtOAc(4200ml)。将各层分离并将有机相用水(3x 2100ml)洗涤。将该有机相在真空中浓缩并依序与水(3x 870ml)和EtOH(3x 870ml)共沸，以提供呈透明油状的1阶段的368.6g(315.8g有活性的，定量产量)。
1H-NMR(270MHz,CDCl3,)δ4.95(1H,br s),3.29-3.19(m,2H),2.71(t,2H),2.58(t,2H),1.50-1.40(br.m,11H),1.35-1.23(m,6H),0.89(t,3H)。
LC/MS:m/z 245[M+H]+
步骤2
叔丁基2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基氨基甲酸酯
向10L法兰烧瓶中填充D-木糖(124.3g，0.83mol)、叔丁基2-(己基氨基)乙基氨基甲酸酯(步骤1，181.8g，155.8g有活性的，0.49mol)、EtOH(5000ml)以及DIPEA(110.8ml，0.64mol)。将该混合物加热至35℃持续1h，直至溶解。向该溶液中填充AcOH(36.5mL，0.64mol)，并将所得的混合物在35℃下搅拌15min。向其中经5min在35℃下分批填充NaCNBH3(56.1g，0.89mol)。没有记录到放热或气体逸出。将反应在35℃下搅拌过夜。向其中填充NaCNBH3(8.0g，0.13mol)并在35℃下搅拌3h。允许将反应冷却至室温过夜。经10min向该混合物充填充饱和水性NaHCO3(1600mL)，观察到轻微的放热反应。将该混合物在室温下搅拌过周末。将EtOH在真空下去除并且与第二批相同规模(181.8g阶段1)进行合并用于分离净化试验。向该混合物中填充NaCl(311g)。将有机相用10％MeOH/DCM(3x 3000ml)萃取并将合并的有机相在真空中浓缩。将所得的残余物经色谱法(SiO2，7kg)进行纯化，密封，加载并用在MeOH(35L)中的5％MeOH/DCM+0.2％7N NH3、在MeOH(75L)中的50％MeOH/DCM+0.2％7N NH3洗脱，然后用在MeOH(20L)中的65％MeOH/DCM+0.2％7N NH3冲洗。将包含级分的产物合并，在真空中蒸发并与MeOH(2x 500mL)共沸，以提供387g(366g有活性的，76％)呈黄色胶状的亚标题化合物。
1H-NMR(270MHz,DMSO-d6)δ6.80(br.s,1H),4.80-4.30(br.m,3H),4.22-4.05(br.m,1H),3.74-3.60(br.m,1H),3.59-3.48(m,1H),3.47-3.20(m,6H),3.08-2.87(br.m,2H),2.70-2.45(br.m,3H),1.51-1.35(m,10H),1.32-1.16(m,7H),0.85(t,3H)。
LC/MS:m/z 401[M+H]+
步骤3
(2R,3R,4S)-5-((2-氨基乙基)(己基)氨基)戊烷-1,2,3,4-四醇
在室温下经30min向叔丁基2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基氨基甲酸酯(步骤2，365g，345g有活性的，0.91mol)在MeOH(520ml)中的溶液中填充在二噁烷(1710ml，6.84mol)中的4M HCl，保持温度<31℃。将反应在室温下搅拌1.5h。将该反应混合物在真空中浓缩，以提供485.1g(306g有活性的，95％)呈紫黑色焦油的亚标题化合物。
1H-NMR(270MHz,DMSO-d6)δ8.41(br.s,3H),4.20-3.00(br.m,16H),1.77-1.62(br.m,2H),1.37-1.17(br.m,6H),0.87(br.t,3H)。
MS ES:m/z 279[M+H]+
步骤4
4-甲酰基-N-(2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)苯甲酰胺
在室温下，向5L法兰烧瓶中填充4-甲酰基苯甲酸(107.6g，0.72mol)和DMF(1400ml)。向其中填充4-甲基吗啉(255.5ml，2.3mol)。将该混合物经5min冷却至-15℃。经15min向其中填充氯甲酸异丁酯(93.4ml，0.71mol)，保持反应温度<-10℃。将反应在-10℃至-15℃搅拌1h。在分离烧瓶中，将(2R,3R,4S)-5-((2-氨基乙基)(己基)氨基)戊烷-1,2,3,4-四醇(步骤3，383.9g，245.7g有活性的，0.71mol)溶解于DMF(1400ml)中，并且在45℃下经1h添加4-甲基吗啉(123ml，1.1mol)。经15min向该混合的酸酐混合物中填充步骤3包含的混合物，保持反应温度<-5℃。允许将所得的混合物加温至室温。向该反应混合物中缓慢填充饱和水性NaHCO3(2500ml)，经30min。将所得的混合物在真空中浓缩。在室温下向该残余物中填充饱和水性NaHCO3(1200ml)并用DCM(4900ml)搅拌10min。将层分离并将水层用13％MeOH/DCM(2870ml)萃取。将合并的有机相用饱和水性NaHCO3(1200ml)洗涤并在真空中浓缩，以提供395.3g。将残余物与从中等规模反应重新获得的10g粗材料进行合并，并且经色谱法[SiO2，3kg；用5％MeOH/DCM加载和密封；用5％MeOH/DCM(30L)、10％MeOH/DCM(20L)、20％MeOH/DCM(10L)、30％MeOH/DCM(30L)、40％MeOH/DCM(20L)以及100％MeOH(80L)洗脱]进行纯化。将产物级分合并(100L)并在真空中浓缩，以提供138.4g(112g有活性的，39％产量)亚标题化合物。1H NMR指示具有约5.5％剩余甲酰基苯甲酰胺杂质的81.4w/w％活性。HPLC-MS分析指示97.4％纯度。将混合的级分(20L)合并，并在真空中浓缩，以提供46g通过HPLC具有纯度74.5％的材料。将其经色谱法(SiO2，600g)用10％-30％MeOH/DCM(18L)洗脱进行再次纯化。将产物级分合并，并在真空中浓缩，以提供另外的21.0g(20.3g有活性的，44％)亚标题化合物。
1H-NMR(270MHz,DMSO-d6):δ10.08(s,1H),8.60(t,1H),8.02(d,2H),7.97(d,2H),4.70-4.20(br.m,4H),3.66-3.52(m,2H),3.46-3.34(m,8H),2.65-2.58(m,2H),2.51-2.44(m,2H),1.40-1.28(br.m,2H),1.19-1.08(m,6H),0.79(t,3H)。
LC/MS:m/z 411[M+H]+
2-(2-甲基苄基)丙烷-1,3-二胺的酶促去对称化
使用二烯丙基碳酸盐一系列固定的脂肪酶来研究2-(2-甲基苄基)丙烷-1,3-二胺的酶促去对称化。
固定的脂肪酶筛选：向2-(2-甲基苄基)丙烷-1,3-二胺(0.60g，3.37mmol)在1,4-二噁烷(30mL)中的溶液中添加二烯丙基碳酸盐(0.507mL，3.53mmol)。将该溶液的1.0mL等分试样添加至包含表1中所述的酶(0.02g)的10mL螺口试管中。将这些试管在500rpm/30℃下震荡3天。对每个试管进行取样并且通过反向HPLC(4.6x 50mm Thermoquest Hypercarb，UV检测在260nm处)和手性HPLC(4.6x 250mm Chiralpak IC3，UV检测在260nm处)进行分析。
筛选的脂肪酶中的六种在3天后显示大于20％转化(表1)。
1单烯丙基氨基甲酸酯的转化以来自HPLC的面积％指示。
2R/S比率以用来自手性HPLC的R对映体的面积％除以S对映体的面积％表示。
表1.
用Amano脂肪酶PS-IM筛选溶剂：用Amano脂肪酶PS-IM筛选溶剂在20相对体积的溶剂与以下项中进行：1.1当量二烯丙基碳酸盐、1质量当量Amano PS-IM和0.1g的2-(2-甲基苄基)丙烷-1,3-二胺。6天后，在30℃下使用与针对脂肪酶筛选(表2)所述的相同的方法将这些实验进行取样。2-(2-甲基苄基)丙烷-1,3-二胺不是很溶解于非极性溶剂(如甲基叔-丁基醚、庚烷以及环己烷)中。然而THF添加至这些溶剂中的每种中，确实允许二胺溶解并且测试以上1:1溶剂混合物。结果表明2-MeTHF给予最好的对映选择性，尽管有一些背景反应。为了在2-MeTHF中最小化背景羧化，在30℃下用过量的Amano脂肪酶PS-IM(3质量当量固定的脂肪酶，1.2当量二烯丙基碳酸盐，20体积2-MeTHF)进行克量级实验。3天内该反应进行至完成并且在起作用后，用85％ee进行分离粗的(R)-单烯丙基氨基甲酸酯1-(R)。粗产物转化为对应的乙醇中的D-酒石酸盐，增加了对映体过量至91.0％(来自二胺的58％总产量)。
1单烯丙基氨基甲酸酯的转化以来自HPLC的面积％指示。
2R/S比率以用来自手性HPLC的R对映体的面积％除以S对映体的面积％表示。
表2
钠通道ENaC尤斯灌流室(Ussing chamber)试验
在湿润的培养箱中在37℃和5％CO2下在ALI培养下维持人初级支气管上皮细胞在气-液界面(ALI)处在snapwell可渗透支持上的分化(马迪克(MatTek)公司，马萨诸塞州，美国，目录号AIR-100-SNP)。基底外侧培养基(马迪克公司，马萨诸塞州，目录号AIR-100-MM-ASY)每隔一天更换。每隔一天温和地抽吸形成在顶面上的粘液或液体，以保持细胞的成活力和性能。
管腔/顶和基底外侧膜之间的跨膜电压在尤斯灌流室中被测量，该尤斯灌流室由以下组成：纵向的内部制造的尤斯灌流室、具有前置放大器的DVC-1000V/C夹板(世界精密仪器(World Precision Instruments))、电极套(EK1，世界精密仪器)、具有Chart5软件的电源实验室、具有外部循环的水浴以及卡波金(carbogen)气体分布和调节***。在设置上使用的电极是根据制造商的建议使用在0.9％无菌氯化钠中的4％琼脂糖手工铸造的。
在37℃下，在95％氧气和5％二氧化碳存在下，用将空snapwell膜(柯仕达(Costar)3407)和电极包于Kreb缓冲液(西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)目录号K3753)中一小时组装尤斯灌流室。此平衡步骤之后将给***针对流体阻力和输入偏移进行补偿。
实验前，用EndOhm装置(世界精密仪器)针对跨上皮电气电阻(TEER)对ALI培养进行了评估，使用展示400-600Ohm之间的电阻的细胞。
该平衡室用包含ALL细胞的snapwell重新组装，并且20分钟后将稳定累积剂量的化合物添加到该膜的顶侧。最终剂量10μM Benzamil添加后，达到最大值。
将所有的测试化合物，包括参考化合物，从10mM原种稀释于100％DMSO中，并添加到不透明的96孔板中(格瑞纳公司(Greiner)，目录号651201)。在DMSO中制备12剂量的稀释系列，起始于3μM随后是10次稀释步骤。
Windows软件的Chart5用于在每个化合物添加后测量短路电流的值。将这些数据转移到Excel中并使用IDBS XL5.2(ID商业解决方案公司)进行分析。产生50％抑制(曲线IC 50)的测试化合物或参考化合物的摩尔浓度，是通过拟合数据至以下形式的四参数逻辑函数而得到：
y＝(A+((B-A)/(1+(((10^C)/x)^D))))
A 曲线的底部平稳期，即最终的最小y值
B 曲线的顶部平稳期，即最终的最大y值
C 在50％的y值处的log10x值
D 希尔(Hill)斜率因子。
x 已知的x值。
表1显示了pIC50值，例如1至14。
表1
实例号 pIC50 实例号 pIC50
1 9.5 8 9.5
2 8.6 9 8.6
3 10.1 10 8.6
4 9.2 11 8.8
5 9.0 12 9.6
6 9.5 13 10.1
7 8.9 14 7.5
用Caco-2细胞单层估计肠黏膜渗透率
Caco-2细胞在杜氏改良的伊格尔氏培养基(Dulbecco’s Modified Eagle’smedium)(DMEM)中在96孔转移孔聚碳酸酯膜插件上生长15天，直至达到融合和分化。通过横跨单层细胞的电阻测量进行完整性评估之后，将单层细胞用HBSS(25mM HEPES，pH 7.4)洗涤两次，并在37℃下孵育30分钟。
将在DMSO中的测试化合物的原液用HBSS(包含100μM荧光黄)稀释，以达到10μM的最终浓度；所有的孵育以一式两份进行。为确定在顶部到基底外侧方向(A至B)的药物转运的速率，将100μL的测试化合物溶液添加到Transwell插件的顶部隔室。基底外侧隔室填充有300μL的HBSS。
为了确定基底外侧至顶部运输(B到A)，基底外侧区室填充有300μL的测试化合物溶液，并且将100μL的HBSS添加到顶部隔室。
在37℃下将板孵育2小时后，从每个隔室去除50μL并转移至96孔板中，用于在适合的酶标仪中在485nm激发和530nm发射处的荧光测量来监测单层完整性。针对该测试化合物渗透性分析，将3倍体积的冷的甲醇添加到每个缓冲样品中并且将这些样品在4℃下离心15分钟。一式两份的5μL的等分试样被用于LC/MS/MS分析。
表观渗透性(Papp，以cm/s为单位)可以使用下面的公式来计算
其中，VA是在受体孔(0.3mL，为顶部至基底外侧)中的体积(以mL计)，面积是膜的表面积(0.143cm2，为HTS转移孔-96孔渗透支持)并且时间是以s计的总传输时间。
针对实例1至16的每一个测量顶部至基底外侧方向中的表观渗透性(A Papp至BPapp的中值，1E-6.cm/s)。在顶部至基底外侧方向中，针对任何实例没有表观渗透性可以被检测到。对于通过吸入给药递送ENaC抑制剂，显示低渗透性的化合物会是更希望的。
说明性实施例的以上描述仅旨在使本领域其他技术人员认识申请人的发明、其原理和其实际应用，使得本领域其他技术人员可以按其许多形式改编和应用本发明，因为它们可最佳适合于特定用途的要求。本说明书及其具体实例尽管指示本发明的实施例仅旨在是说明性的目的。因此，本发明并不限于在本说明书中所描述的说明性实施例，并且可以被多样修饰。此外，应理解出于清楚的原因，在单独的实施例的上下文中描述的本发明的各种特征还可以被组合以形成单个实施例。相反地，出于简洁的原因，在单个实施例的上下文中描述的本发明的各种特征也可以进行组合以形成其子-组合。

Claims (13)

1.一种具有化学式(I)的化合物：
其中：
R1选自氢或C1-4烷基；
m是1或2；
A选自苯基或杂环基；
X选自-C(＝O)-、-C(＝O)-NR4-或-O-C(＝O)-NR5-；
n是2或3；
R2选自氢或C1-8烷基；
R3是C5-6烷基-OH，其中所述C5-6烷基基团进一步被另外的3或4个-OH基团取代；并且
R4和R5独立地选自氢或C1-4烷基；
或其药学上可接受的盐。
2.根据权利要求1所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R1是C1-4烷基并且R4和R5都是氢。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中A是苯基。
4.根据前述权利要求中的任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中X是-C(＝O)-NR4-。
5.根据前述权利要求中的任一项所述的化合物，其中：
R1是C1-4烷基；
m是1；
A是苯基；
X是-C(＝O)-NH-；
n是2；
R2是C1-8烷基；
并且R3选自以下：
或其药学上可接受的盐。
6.根据前述权利要求中的任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R2是正己基。
7.根据权利要求1所述的化合物，该化合物选自：
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-2-(2-甲基苄基)-3-(((1-(3-(((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基)氨基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((1-(2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基氨基甲酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((1-(3-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((1-(3-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((1-(4-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-2-(2-甲基苄基)-3-((1-(3-((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((1-(3-(己基((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)甲基氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苄基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
4-(((R)-3-(3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-甲酰胺基)-2-(2-甲基苄基)丙基氨基)甲基)苯基2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基氨基甲酸酯；
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
3,5-二氨基-6-氯-N-((R)-3-((4-((2-(己基((2S,3R,4R)-2,3,4,5-四羟基戊基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苯乙基)氨基)-2-(2-甲基苄基)丙基)吡嗪-2-甲酰胺；
或其药学上可接受的盐。
8.一种药物组合物，该药物组合物包括如权利要求1至7中任一项所要求的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的辅助剂、稀释剂或载体。
9.如权利要求1至7中任一项所要求的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗中使用。
10.如权利要求1至7中任一项所要求的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗ENaC介导的疾病状态。
11.如权利要求1至7中任一项所要求的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于生产用于在治疗ENaC介导的疾病状态中使用的药物。
12.一种在正患有ENaC介导的疾病或处于所述疾病的风险中的哺乳动物中治疗或预防所述疾病的方法，该方法包括向需要此类治疗的哺乳动物给予治疗有效量的如权利要求1至7中任一项所要求的具有化学式(I)的化合物、或其药学上可接受的盐。
13.一种组合，该组合包含如权利要求1至7中任一项所要求的具有化学式(I)的化合物、或其药学上可接受的盐、以及一种或多种选自以下列表的试剂，该列表包括：
·β-肾上腺素受体激动剂；
·毒蕈碱型受体拮抗剂；
·毒蕈碱型受体拮抗剂和β-肾上腺素受体激动剂的结合；
·toll样受体激动剂(如TLR7或TLR9激动剂)；
·腺苷拮抗剂；
·糖皮质激素受体激动剂(甾体的或非甾体的)；
·p38拮抗剂；
·IKK2拮抗剂；
·PDE4拮抗剂；
·趋化因子受体功能的调节剂(如CCR1、CCR2B、CCR5、CXCR2或CXCR3受体拮抗剂)；
·CRTh2拮抗剂；或
·渗压剂，如高渗盐水。
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Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009150137A2 (en) * 2008-06-10 2009-12-17 Novartis Ag Organic compounds

Family Cites Families (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3577418A (en) 1969-02-12 1971-05-04 Merck & Co Inc Pyrazinamide derivatives and processes for their preparation
US3573306A (en) 1969-03-05 1971-03-30 Merck & Co Inc Process for preparation of n-substituted 3,5-diamino-6-halopyrazinamides
FI820266L (fi) 1981-02-02 1982-08-03 Ici Plc Alkanolaminderivater
US4550111A (en) 1982-01-29 1985-10-29 Imperial Chemical Industries Plc Alkanolamine derivatives
GB8810934D0 (en) 1987-05-26 1988-06-15 Ici America Inc Amides
GB8810933D0 (en) 1987-05-26 1988-06-15 Ici America Inc Heterocyclic compounds
US4803206A (en) 1988-03-07 1989-02-07 Schering Corporation Antihypertensive acylpyrazines
GB8812343D0 (en) 1988-05-25 1988-06-29 Ici America Inc Amino compounds
GB8812342D0 (en) 1988-05-25 1988-06-29 Ici America Inc Bicyclic compounds
US6403587B1 (en) 1997-02-26 2002-06-11 Pfizer Inc. Heteroaryl-hexanoic acid amide derivatives, their preparation and their use as selective inhibitors of MIP-1-α binding to its CCR 1 receptor
GB9930557D0 (en) 1999-12-23 2000-02-16 Rolic Ag Optically active materials
EP1294699B1 (en) 2000-05-12 2016-04-13 Genzyme Corporation Modulators of tnf- alpha signalling
EA200400648A1 (ru) 2001-11-08 2005-04-28 Элан Фармасьютикалз, Инк. N, n'-замещенные производные 1,3-диамино-2-гидроксипропана
US6858615B2 (en) 2002-02-19 2005-02-22 Parion Sciences, Inc. Phenyl guanidine sodium channel blockers
US7154002B1 (en) 2002-10-08 2006-12-26 Takeda San Diego, Inc. Histone deacetylase inhibitors
US20040087571A1 (en) 2002-10-30 2004-05-06 Pfizer Inc Methods of using CCR1 antagonists as immunomodulatory agents
JP2006516028A (ja) 2002-12-20 2006-06-15 ファイザー・プロダクツ・インク ミクロソームトリグリセリド輸送タンパク質阻害剤
US6903105B2 (en) 2003-02-19 2005-06-07 Parion Sciences, Inc. Sodium channel blockers
JP2008515978A (ja) 2004-10-13 2008-05-15 ユニバーシティ オブ コネチカット カンナビネルジック脂質リガンド
GB0511065D0 (en) 2005-05-31 2005-07-06 Novartis Ag Organic compounds
GB0526244D0 (en) 2005-12-22 2006-02-01 Novartis Ag Organic compounds
GB0526240D0 (en) 2005-12-22 2006-02-01 Novartis Ag Organic compounds
CN101679266B (zh) 2007-03-01 2015-05-06 诺华股份有限公司 Pim激酶抑制剂及其应用方法
PL2155721T3 (pl) 2007-05-07 2011-07-29 Novartis Ag Związki organiczne
PT2444120T (pt) 2007-12-10 2018-01-03 Novartis Ag Análogos da amilorida espirocíclicos como bloqueadores de enac
WO2009086303A2 (en) 2007-12-21 2009-07-09 University Of Rochester Method for altering the lifespan of eukaryotic organisms
WO2009138378A1 (en) 2008-05-13 2009-11-19 Novartis Ag 3,5-diamino-6-chloro-pyrazine-2-carboxylic acid derivatives and their use as epithelial sodium channel blockers for the treatment of arway diseases
US9315449B2 (en) 2008-05-15 2016-04-19 Duke University Substituted pyrazoles as heat shock transcription factor activators
WO2011028740A1 (en) * 2009-09-03 2011-03-10 Glaxo Group Limited ENaC BLOCKERS
WO2011079087A1 (en) 2009-12-23 2011-06-30 Glaxo Group Limited Enac blockers
US8372845B2 (en) 2010-09-17 2013-02-12 Novartis Ag Pyrazine derivatives as enac blockers
AR086745A1 (es) 2011-06-27 2014-01-22 Parion Sciences Inc 3,5-diamino-6-cloro-n-(n-(4-(4-(2-(hexil(2,3,4,5,6-pentahidroxihexil)amino)etoxi)fenil)butil)carbamimidoil)pirazina-2-carboxamida
US9505735B2 (en) 2012-06-21 2016-11-29 Whitehead Institute For Biomedical Research Compounds for treating infectious diseases
EP3428153A1 (en) 2012-12-17 2019-01-16 Parion Sciences, Inc. 3,5-diamino-6-chloro-n-(n-(4-phenylbutyl)carbamimidoyl) pyrazine-2- carboxamide compounds
ES2674665T3 (es) 2012-12-17 2018-07-03 Parion Sciences, Inc. Compuestos de 3,5-diamino-6-cloro-N-(N-(4-fenilbutilo)carbamimidoilo)-pirazina-2-carboxamida
WO2014099676A1 (en) 2012-12-17 2014-06-26 Parion Sciences, Inc. Chloro-pyrazine carboxamide derivatives useful for the treatment of diseases favoured by insufficient mucosal hydration

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009150137A2 (en) * 2008-06-10 2009-12-17 Novartis Ag Organic compounds

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
THOMAS HUNT ET AL.: "Discovery of a novel chemotype of potent human ENaC blockers using a bioisostere approach. Part 1: Quaternary amines,", 《BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS》 *
THOMAS HUNT ET AL.: "Discovery of a novel chemotype of potent human ENaC blockers using a bioisostere approach. Part 2: α-Branched quaternary amines", 《BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS》 *

Also Published As

Publication number Publication date
CY1120509T1 (el) 2019-07-10
SG11201607751SA (en) 2016-10-28
PH12016501808A1 (en) 2017-01-09
AU2015233195B2 (en) 2017-04-20
ME03056B (me) 2018-10-20
EA201691641A1 (ru) 2017-02-28
CR20160479A (es) 2017-02-24
PT3119752T (pt) 2018-07-24
JP6502469B2 (ja) 2019-04-17
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LT3119752T (lt) 2018-08-10
IL247610A0 (en) 2016-11-30
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MX2016011681A (es) 2016-10-28
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NI201600134A (es) 2017-03-13
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HUE039425T2 (hu) 2018-12-28
US20170107195A1 (en) 2017-04-20
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TR201810207T4 (tr) 2018-08-27
CA2941807A1 (en) 2015-09-24
RS57487B1 (sr) 2018-10-31
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AR099790A1 (es) 2016-08-17
AU2015233195A1 (en) 2016-09-22
WO2015140527A1 (en) 2015-09-24
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SV2016005278A (es) 2016-11-30
US10954211B2 (en) 2021-03-23
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