CN106046066B - 一种纯化制备高纯度木二糖的方法 - Google Patents

一种纯化制备高纯度木二糖的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了纯化制备高纯度木二糖的方法。该方法包括如下步骤：(1)将木聚糖酶解液进行超滤，收集滤液；(2)将所述滤液流过离子交换树脂柱，得到木聚糖酶解液的净化液；(3)对所述净化液进行凝胶过滤层析，即可得到所述木二糖。利用本发明分离纯化碱处理甘蔗渣制备的木聚糖酶解液，即能制备高纯度的木二糖，联产木三糖和木糖，纯度分别为95.74±1.43％、85.11±2.27％和86.61±3.57％，且木二糖损失最少，为6.38％。本发明方法简便、灵活实用，快速、成本低，利于推广开发和应用。

Description

一种纯化制备高纯度木二糖的方法
技术领域
本发明涉及寡糖的分离纯化领域，尤其一种纯化制备高纯度木二糖的方法。
背景技术
低聚木糖是由2～7个木糖以β-1,4糖苷键连接而成的低聚糖，具有低热、稳定、无毒等特性以及独特的生理功能。低聚木糖能促进人和动物肠道内双歧杆菌的增殖，抑制有害菌的生长，促进钙的吸收，其主要有效成分是木二糖和木三糖(Carvalho AFA,de OlivaNeto P,da Silva DF,et al.Xylo-oligosaccharides from lignocellulosicmaterials:Chemical structure,health benefits and production by chemical andenzymatic hydrolysis[J].Food Research International,2013,51:75-85)。木二糖的甜度约为蔗糖的40％，含量达到50％的低聚木糖产品的甜度约为蔗糖的30％，甜味纯正，类似蔗糖。目前，低聚木糖已作为新型的功能添加剂，应用越来越广泛。例如，功能性食品添加剂：主要用于低糖、无糖型食品以及医用保健食品；饲料添加剂：主要改善动物肠道内微生物的生态平衡，增强动物对饲料营养物质的吸收和利用；以及农业添加剂：作为农作物的营养物，提高农作物的生长速度和抗病能力(张玲,丁长河,阮文斌.低聚木糖的应用研究和产品开发进展.粮食与油脂,2015,28(2):9-12)。
目前，低聚木糖主要来源于木质纤维素，其单组分的制备和纯化方法主要通过酶法水解木聚糖，并经层析纯化后获得单一组分，如凝胶层析法(张军华,徐勇,勇强,等.木二糖和木三糖的分离及其用于双歧杆菌的体外培养[J].林产化学与工业,2005,25(1):15-18.)。专利CN1847254A采用聚丙烯酰胺凝胶色谱柱分离低聚木糖各组分，由于聚丙烯酰胺凝胶价格昂贵，再生困难。目前，仅在实验室研究，很难用于低聚木糖的规模化生产。吸附层析法(Tan SS,Li DY,Jiang ZQ,et al.Production of xylobiose from theautohydrolysis explosion liquor of corncob using Thermotoga maritima xylanaseB(XynB)immobilized on nickel-chelated Eupergit C.[J].Bioresource Technology,2008,99(1):200-204)。专利CN101632877A利用活性炭层析法进行低聚木糖中各组分的分离。此方法利用乙醇为洗脱剂，成本高；活性炭使用周期短，装炭、卸炭工作量大，浪费时间，大量废炭丢弃为生产垃圾；另外，活性炭分离效果差，得到的产品纯度低，不利于绿色生产。离子交换层析法(范丽,徐勇,连之娜,等.高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法定量测定低聚木糖样品中的低聚木糖[J].色谱,2011,29(1):75-78)，其中凝胶层析法应用最广。专利CN10830936B采用模拟移动床提纯低聚木糖中的木二糖和杂糖组分，虽然木二糖组分的含量较高，为94％以上，但提纯收率较低，仅为30-46％， 成本高，且不能实现其他单组份的分离。
有文献采用聚乙二醇6000/柠檬酸钠的双水相木聚糖酶水解体系制备木二糖，再采用葡聚糖凝胶LH-20分离纯化木二糖(李鑫,顾夕梅,绳敖楠,等.双水相木聚糖酶水解体系制备木二糖及其纯化[J].林产化学与工业,2015,35(5):93-97.)，虽分离出高纯度(98.5％)的木二糖，但操作繁琐，成本高，实验规模小。纳滤分离低聚木糖(赵鹤飞,杨瑞金,赵伟,等.秸秆低聚木糖溶液纳滤分离特性和渗滤工艺[J].农业工程学报,2009,25(4):253-259.)，虽可以高效纯化低聚木糖，但是不能实现单组分的分离，且木二糖的损失较大，为12.45％。
鉴于以上可知，国内外关于木二糖分离纯化方面的报道不多。国内外市场上仅有其标准品销售，价格昂贵。因此，发展简易方便，产品纯度高，且能同时分离木二糖和木三糖的分离纯化方法是必要的。
发明内容
本发明的目的是提供一种纯化制备高纯度木二糖的方法,该方法能够实现低聚木糖中单一组分的分离纯化，所得木二糖的纯度和回收率高，可联产分离出木三糖和木糖，操作简单、快速和成本低。
本发明提供的纯化制备高纯度木二糖的方法，包括如下步骤：(1)将木聚糖酶解液进行超滤，收集滤液；(2)将所述滤液流过离子交换树脂柱，得到木聚糖酶解液的净化液；(3)对所述净化液进行凝胶过滤层析，即可得到所述木二糖。
上述的方法，步骤(1)中，所述木聚糖酶解液是指采用木聚糖酶对木聚糖原料进行酶解后的产物，所述木聚糖原料可为甘蔗渣、玉米芯、麦秆或木薯渣；所述木聚糖酶解液可为通过如下步骤得到的产物：将浓度为20～60g/L木聚糖原料和水的混合体系的pH值调节至5.0～6.0，按原料固形物含量每克800单位的量在加入木聚糖酶酶液后，在35～45℃下酶解24小时，得到所述木聚糖酶解液。
所述酶解之前还包括采用碱对原料进行预处理得到粗木聚糖的步骤，所述碱以碱的水溶液的形式存在，质量浓度可为8.0％～10.0％；所述碱中还可包括质量浓度为0～3.0％的H202，但不为0；处理时间可为12～24h；所述处理具体可为按料液比如1g:10mL的比例将甘蔗渣与如质量浓度为8.0％的NaOH，质量浓度为2.48％的H202碱液混合在40℃，浸泡处理如24h，纱布过滤，滤液再经超滤(截留分子量为3000Da)超滤浓缩，再用4倍体积95％的乙醇沉淀离心，沉淀烘干即得粗木聚糖。
上述的方法，步骤(1)中，所述超滤中采用的超滤膜的孔径可为0.001～0.01μm，具体可为0.001μm，操作压力可为0.1～0.2MPa，具体可为0.15MPa。
上述的方法，步骤(2)中，所述离子交换树脂柱的填充物可为阴离子交换树脂D201(强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂)和阳离子交换树脂001-7(强酸性苯乙烯系 阳离子交换树脂)；串联顺序优选为阳离子交换树脂001-7-阴离子交换树脂D201，所述阳离子交换树脂001-7和所述阴离子交换树脂D201的体积比可为(0.5～2.5)：1，优选为(1.0～2.0)：1，更优选为1.5：1；进样流速可为(0.5～3.0)mL/min，优选为(1.5～2.5)，更优选为2.0mL/min；最佳条件为：所述阳离子交换树脂001-7和所述阴离子交换树脂D201的体积比为1.67：1和进样流速为1.76mL/min，所得脱色率为96.85±1.43％、脱盐率为77.59±3.79％和糖保留率为96.64±2.59％。
上述的方法中，步骤(3)中，所述凝胶过滤层析具体可采用葡聚糖凝胶G-10层析柱，凝胶层析柱的高径比可为(15～35)：1，优选为30：1；进样体积可为1～9％的柱床体积，如5％；所述凝胶过滤层析采用水进行洗脱，所述水可为脱气去离子水，洗脱速度可为0.3～1.2mL/min，优选为0.6mL/min，洗脱体积可为1.0～3.0倍柱床体积，如1.5倍；最佳条件为：洗脱速度为0.73mL/min、凝胶柱高径比为34.03：1，所得木二糖的纯度为95.74±1.43％、回收率为93.61±3.50％。
通过所述凝胶过滤层析即可对所述木聚糖酶解液的净化液中的各组分进行分离；所述方法在所述凝胶过滤层析后还包括得到木糖和木三糖的步骤，即在得到所述木二糖的同时还包括得到木糖和木三糖，因此，本发明纯化制备木二糖的方法可联产木三糖和木糖。
所述方法在所述凝胶过滤层析之后，通过如下步骤确定各组分：采用HPLC检测收集液中的成分，通过对比样品和标准品的出峰时间确定各组分，如通过对比收集液和木二糖标准品的出峰时间确定该组分为木二糖。
具体地，按照洗脱液的流出顺序，收集得到的第0.8～1.2倍柱床体积的洗脱液为木二糖，第1.2～1.4倍柱床体积的洗脱液为木糖，第0.5～0.7倍柱床体积的洗脱液为木三糖。
本发明具有如下有益效果：
(1)利用本发明分离纯化碱处理甘蔗渣制备的木聚糖酶解液，即能制备高纯度的木二糖，联产木三糖和木糖，纯度分别为95.74±1.43％、85.11±2.27％和86.61±3.57％，且木二糖损失最少，为6.38％。
(2)本发明方法简便、灵活实用，快速、成本低，利于推广开发和应用。
附图说明
图1为本发明的工艺流程图。
图2为不同填充物对碱预处理甘蔗渣制备的木聚糖酶解液脱色脱盐效果的影响，其中，图2中A为脱色率；图2中B为脱盐率；图2中C为糖保留率。
图3为不同阴阳离子串联顺序对碱预处理甘蔗渣制备的木聚糖酶解液脱色脱盐效果的影响。
图4为不同阴阳离子填充体积比例对碱预处理甘蔗渣制备的木聚糖酶解液脱色脱盐效果的影响，其中，左纵坐标对应脱色率、糖保留率，右纵坐标对应脱盐率。
图5为不同进样流速对碱预处理甘蔗渣制备的木聚糖酶解液脱色脱盐效果的影响，其中，左纵坐标对应脱色率、糖保留率，右纵坐标对应脱盐率。
图6为洗脱液洗脱流速、阴阳离子树脂串联柱阴阳离子填充体积比例对碱预处理甘蔗渣制备的木聚糖酶解液脱色脱盐效果的3D图，其中图6中A为脱色率，图6中B为脱盐率，图6中C为糖保留率。
图7为不同洗脱速度对碱预处理甘蔗渣制备的木聚糖酶解液分离纯化效果的影响。
图8为不同葡聚糖凝胶G-10柱高径比对碱预处理甘蔗渣制备的木聚糖酶解液分离纯化效果的影响。
图9洗脱速度、凝胶柱高径比对碱预处理甘蔗渣制备的木聚糖酶解液分离纯化效果的3D图，其中，图9中A为木二糖纯度，图9中B为木二糖回收率。
图10HPLC检测葡聚糖凝胶G-10分离纯化各组分成分图，其中，图10A为标准样品，其中X1代表木糖，X2代表木二糖，X3代表木三糖；图10B碱预处理甘蔗渣制备的木聚糖酶解液；图10中C木糖组分；图10中D为木二糖组分；图10中E为木三糖组分。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中利用DNS法确定开始和终止收集滤液的时间的操作步骤如下：取0.5mL流出液加入2倍体积的DNS，沸水浴5min，用酶标仪检测吸光值，从而确定流出液是否含糖，当糖含量大于0时，开始收集至到流出液中检测不到糖，停止收集。
下述实施例中纯化制备高纯度木二糖的方法，包括如下步骤：(1)将木聚糖酶解液进行超滤，收集滤液；所用超滤膜的孔径可为0.001～0.01μm，操作压力可为0.1～0.2MPa；(2)将滤液流过离子交换树脂柱，得到木聚糖酶解液的净化液；(3)对净化液进行凝胶过滤层析，即可得到木二糖。
实施例1、纯化制备高纯度木二糖的条件的优化
一、脱色脱盐柱填充物的选择
按照如下步骤纯化制备高纯度木二糖：
(1)超滤：将碱预处理甘蔗渣制备的木聚糖酶解液用超滤膜(截留分子量为10000Da，孔径为0.001μm)进行过滤(操作压力为0.15MPa)，收集滤液，除去大分子物质及部分非糖类物质。其中，碱预处理甘蔗渣制备的木聚糖酶解液的步骤参照文献“Xue, JL,Zhao,S,et al.A biotechnological process efficiently co-produces two highvalue-added products,glucose and xylooligosaccharides,from sugarcanebagasse.Bioresourse Technology,2016,204,130-138”中公开的方法，具体如下：按料液比如1g:10mL的比例将甘蔗渣与含质量浓度为8.0％的NaOH、质量浓度为2.48％的H202溶液混合后，在40℃下浸泡处理24h，纱布过滤，滤液再经超滤(截留分子量为3000Da)浓缩，再用4倍体积95％的乙醇沉淀后离心，烘干沉淀即得粗木聚糖；将浓度为35g/L粗木聚糖和水的混合体系的pH值调节至5.5，按原料固形物含量每克800单位的酶量加入木聚糖酶酶液后，在36℃下酶解24小时，得到木聚糖酶解液。
(2)脱色脱盐柱填充物的选择：各取阴离子交换树脂SA10AP(北京绿百草科技公司)，D900及大孔吸附树脂D101，D201(河北沧州宝恩树脂厂)和阳离子交换树脂SK1B(北京绿百草科技公司)和001-7(河北沧州宝恩树脂厂)20g，优适牌活性炭(浙江宁波优适活性炭厂)，糖用活性炭，博达1#、2#活性炭(河南博达净水材料有限公司)，无磷活性炭(长沙承禹化工有限公司)1g，分别加入步骤(1)所得的滤液100mL，静态吸附2h，分隔一段时间震荡一次，2h后滤纸过滤，收集滤液，分别用紫外可见分光光度计(美国赛默飞世尔)，电导仪(上海雷磁)，HPLC(美国waters)测各滤液及步骤(1)所得超滤液的吸光值，电导率(离子强度)和糖含量(色谱条件如下：大连依利特氨基柱(Hypersil NH2 250*4.6/5um)流动相：76％乙腈、流速1.0mL/min、柱温30℃。
根据吸附前后吸光值(图2中A)和电导率计算脱色率(图2中B)和脱盐率以及糖含量的变化(图2中C)。筛选出阴离子交换树脂D201和阳离子交换树脂001-7具有最高的脱色率，脱盐率和糖保留率。计算公式如下：
脱色率＝(A0-A1)/A0×100；式中，A0为过离子柱前木聚糖酶解液的吸光值、A1为过离子柱后木聚糖酶解液的吸光值(用紫外-可见分光光度计测定)；
脱盐率＝(K0-K1)/K0×100；式中，K0为过离子柱前木聚糖酶解液的电导率、K1为过离子柱后木聚糖酶解液的电导率(用电导仪测定)；
糖保留率＝X1/X0×100；式中，X0为过离子柱前木聚糖酶解液中总糖含量、X1为过离子柱后木聚糖酶解液中总糖含量(用HPLC测定)。
二、阴阳离子交换树脂柱串联顺序的确定
(1)超滤：同上述一中步骤(1)的操作。
(2)阴阳离子交换树脂柱串联顺序的确定：利用湿装柱法分别将D201--001-7交换树脂(V(D201):V(001-7)＝1：1)，001-7--D201交换树脂(V(001-7):V(D201)＝1：1)装入到的空层析柱内，在流速2.0mL/min的条件下，分别泵入200mL的步骤(1)所得滤液，用DNS法确定开始收集和终止收集滤液的时间，再利用一中步 骤(2)的方法测滤液的脱色率，脱盐率，糖保留率(图3)。比较不同阴阳离子串联顺序对脱色脱盐的影响，确定按001-7--D201顺序串联时的脱色率、脱盐率和糖保留率较大。
三、不同阴阳离子交换树脂填充量对脱色脱盐的影响
(1)超滤：同上述一中步骤(1)的操作。
(2)不同阴阳离子交换树脂填充量的确定：将001-7--D201顺序串联的离子交换树脂分别以V(001-7):V(D201)为0.5：1、1：1、1.5：1、2：1和2.5：1的比例湿法装柱，在流速2.0mL/min的条件下，分别泵入200mL的步骤(1)所得液体，用DNS法确定开始收集和终止收集滤液的时间，再利用一中步骤(2)的方法测定滤液的脱色率、脱盐率和糖保留率(图4)。比较不同阴阳离子交换树脂填充比例对脱色脱盐的影响，确定V(001-7):V(D201)＝1.5：1时，脱色率、脱盐率和糖保留率最高。
四、进样流速对脱色脱盐的影响
(1)超滤：同上述一中步骤(1)的操作。
(2)进样流速的确定：在上述确定的条件下，分别以0.5mL/min、1.0mL/min、1.5mL/min、2.0mL/min、2.5mL/min和3.0mL/min进样速度将200mL步骤(1)所得滤液泵入V(001-7)：V(D201)＝1.5：1串联的离子柱中，用DNS法确定开始收集和终止收集滤液的时间，再利用步骤(2)的方法测定滤液的脱色率、脱盐率和糖保留率(图5)。比较不同进样流速对脱色脱盐的影响，确定2.0mL/min为脱色脱盐的最佳进样流速。
五、响应面优化低聚木糖脱色脱盐条件
(1)超滤：同上述一中步骤(1)的操作。
(2)响应面优化低聚木糖脱色脱盐条件：根据单因素实验数据，选择进样流速和阴阳离子交换树脂填充比例作为自变量，脱色率、脱盐率和糖保留率为因变量，进行两因素三水平的响应面设计试验，优化出低聚木糖脱色脱盐的最佳条件是进样流速1.76mL/min、V(001-7):V(D201)＝1.67：1，所得脱色率为96.85±1.43％、脱盐率为77.59±3.79％和糖保留率为96.64±2.59％(图6，表1-3)。
表1阴阳离子树脂串联柱对碱预处理甘蔗渣制备的木聚糖的酶解液脱色效果响应面二次方程模型方差分析表
表2阴阳离子树脂串联柱对碱预处理甘蔗渣制备的木聚糖的酶解液脱盐效果响应面二次方程模型方差分析表
表3阴阳离子树脂串联柱对碱预处理甘蔗渣制备的木聚糖的酶解液保留效果响应面二次方程模型方差分析表
六、洗脱速度对葡聚糖凝胶G-10分离纯化木二糖的影响
(1)超滤：同上述一中步骤(1)的操作。
(2)将滤液流过离子交换树脂柱(离子交换树脂柱条件：填充物串联顺序为001-7-D201、填充量V(001-7):V(D201)＝1.67：1、进样流速为1.76mL/min)，DNS法确定开始和终止收集滤液的时间，收集液即木聚糖酶解液的净化液。
(3)洗脱速度的确定：5％柱床体积的步骤(2)所得液体泵入已经平衡好的葡聚糖凝胶G-10层析柱，待液体全部进入柱床后，分别以0.3mL/min、0.6mL/min、0.9mL/min和1.2mL/min的洗脱速度、用1.5倍柱床体积的脱气去离子水洗脱，每2min收集1管。将收集的液体用高效液相色谱法(色谱条件如下：大连依利特氨基柱(Hypersil NH2 250*4.6/5um)流动相：76％乙腈、流速1.0mL/min、柱温30℃)测定其组分含量及各组分的回收率，优化出最佳洗脱速度为0.6mL/min(图7)。
七、凝胶柱高径比对葡聚糖凝胶G-10分离纯化木二糖的影响
(1)超滤：同上述一中步骤(1)的操作。
(2)同上述六中步骤(2)的操作。
(3)凝胶柱高径比的确定：在上述六中确定的最佳洗脱速度下，将5％柱床体积的步骤(6)所得液体泵入凝胶柱高径比为15:1、20:1、25:1、30:1和35:1的葡聚糖G-10的凝胶柱，每2min收集1管，将收集的液体用高效液相色谱法测定其组分含量及各组分的回收率(色谱条件同六)，优化出最佳凝胶柱高径比为30:1(图8)。
八、响应面法优化葡聚糖凝胶G-10分离纯化木二糖的最佳条件
(1)超滤：同上述一中步骤(1)的操作。
(2)同上述六中步骤(2)的操作。
(3)响应面法优化葡聚糖凝胶G-10分离纯化木二糖的最佳条件优化：根据单因素实验结论，以洗脱速度和G-10凝胶柱高径比为自变量，木二糖的纯度及回收率为因变量，进行两因素三水平响应面实验，优化出分离纯化的最佳条件为洗脱速度0.73mL/min、凝胶柱高径比34.03:1，所得木二糖的纯度为95.74±1.43％、回收率为93.61±3.50％(图9，表4-5)。
表4葡聚糖凝胶G-10分离纯化木二糖纯度响应面二次方程模型方差分析表
表5葡聚糖凝胶G-10分离纯化木二糖回收率响应面二次方程模型方差分析表
实施例2、纯化制备高纯度木二糖
在实施例1中优化后的条件下纯化制备高纯度木二糖，具体操作如下：
(1)超滤：同上述一中步骤(1)的操作。
(2)将滤液流过离子交换树脂柱(离子交换树脂柱条件：填充物串联顺序为001-7--D201、填充量V(001-7):V(D201)＝1.67：1、进样流速为1.76mL/min)，用DNS法确定开始收集和终止收集滤液的时间，收集液即木聚糖酶解液的净化液。
(3)取5％柱床体积的步骤(2)所得液体泵入已经平衡好的凝胶层析(高径比为34.03：1的葡聚糖凝胶G-10柱)，待液体全部进入柱床后，采用1.5倍柱床体积的脱气去离子水洗脱，洗脱速度为0.73mL/min，每2min收集1管。将收集的液体用高效液相色谱法测定其组分含量及各组分的回收率(色谱条件同实施例1中的六)。
实验结果如图10所示，其中，标准品购自上海索莱宝生物科技股份有限公司，纯度为99％以上。所得木二糖的纯度为95.74±1.43％、回收率为93.61±3.50％。葡聚糖凝胶G-10分离纯化木二糖的过程中，木三糖和木糖同时被纯化出来，所得木三糖的纯度为85.11±2.27％、回收率为52.93±12.92％；木糖的纯度为86.61±3.57％、回收率为44.16±8.99％。各组分的计算公式为：纯度＝M(木二糖含量)/M(总糖含量)，回收率＝M(过凝胶柱前木二糖含量)/M(过凝胶柱后木二糖含量)。

Claims (9)

1.一种纯化制备高纯度木二糖的方法，包括如下步骤：
(1)将木聚糖酶解液进行超滤，收集滤液；
所述木聚糖酶解液是指采用木聚糖酶对木聚糖原料进行酶解后的产物，所述木聚糖原料为甘蔗渣；
(2)将所述滤液流过离子交换树脂柱，得到木聚糖酶解液的净化液；
所述离子交换树脂柱的填充物为阴离子交换树脂D201和阳离子交换树脂001-7；
(3)对所述净化液进行凝胶过滤层析，即得到所述木二糖；
所述凝胶过滤层析采用葡聚糖凝胶G-10层析柱。
2.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述超滤中采用的超滤膜的孔径为0.001～0.01μm，操作压力为0.1～0.2MPa。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述离子交换树脂柱的填充物的串联顺序为阳离子交换树脂001-7-阴离子交换树脂D201；和/或，所述阳离子交换树脂001-7和所述阴离子交换树脂D201的体积比为(0.5～2.5)：1。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，进样流速为(0.5～3.0)mL/min。
5.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，所述凝胶过滤层析的条件为下述1)-4)中的至少一种：1)凝胶层析柱的高径比为(15～35)：1；2)进样体积为1～9％的柱床体积；3)采用水进行洗脱；4)洗脱速度为0.3～1.2mL/min，洗脱体积为1.0～3.0倍柱床体积。
6.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于：所述方法在所述凝胶过滤层析后还包括得到木糖和木三糖的步骤。
7.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于：所述方法在所述凝胶过滤层析之后，通过如下步骤确定各组分：采用HPLC检测收集液中的成分，通过对比样品和标准品的出峰时间确定各组分。
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：第0.8～1.2倍柱床体积的洗脱液为木二糖。
9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：第1.2～1.4倍柱床体积的洗脱液为木糖；第0.5～0.7倍柱床体积的洗脱液为木三糖。
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