CN106018605A - 一种分析分离顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体的hplc方法 - Google Patents

一种分析分离顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体的hplc方法 Download PDF

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孙中研
彭悦
赵春影
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Abstract

本发明公开了一种顺式2‑氧杂双环[3,3,0]辛‑6‑烯‑3‑酮对映异构体分析分离方法。采用手性色谱柱以正向混合溶剂为流动相的HPLC方法。该方法能够简单、准确、高效分析分离顺式2‑氧杂双环[3,3,0]辛‑6‑烯‑3‑酮对映异构体，从而实现对顺式2‑氧杂双环[3,3,0]辛‑6‑烯‑3‑酮对映异构体的质量控制。本发明也可以用来制备高纯度单一旋光性的顺式2‑氧杂双环[3,3,0]辛‑6‑烯‑3‑酮。

Description

一种分析分离顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体的HPLC方法
技术领域
本发明涉及一种色谱分析分离方法，尤其是一种分析分离顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体的高效液相色谱法。
技术背景
***素是存在于动物和人体中的一类不饱和脂肪酸组成的具有多种生理作用的活性物质，含量极低，因此，***素类药物全合成的研究十分重要。顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮是一种合成***素药物的常用中间体和起始原料，分子式为C7H8O2，英文名：cis-2-Oxabicyclo[3.3.0]Oct-6-En-3-One，结构式为：
该分子中有2个手性中心，理论上存在4个光学异构体，但根据其反应机理及合成方法推断，只存在一对对映异构体，即(1S,5R)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和(1R,5S)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮。其互为对映异构体杂质在后续步骤中继续参与反应，进而形成多种对应杂质，影响***素类药物的质量，这也是该类药物引发不良反应的重要因素之一。因此，如何分析分离该对对映异构体，进而控制***素类药物质量，是目前需要解决的技术问题。
目前，含有手性碳原子的对映异构体的分析与分离一直是手性药物合成和质量控制的关键问题，经文献检索，未见有顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体检测方法的相关报道。
因此，有必要建立一种分析分离顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体的方法，能够有效分析分离该对对映异构体，控制杂质含量，提高该目标产物纯度，进而提高***素类药物质量。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种采用手性色谱柱以正向混合溶剂为流动相的HPLC方法，该方法能够简单、准确、高效分析分离顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体，从而实现对顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体的质量控制，同时也可以用来制备高纯度单一旋光性的顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮。
本发明的目的是通过以下方案实现的：
一种分析分离顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体的HPLC方法，采用手性色谱柱并使用正相色谱法分离测定。
本发明所述的手性色谱柱为多糖衍生物正相涂敷型手性色谱柱，硅胶表面涂覆有纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)。
本发明正相色谱法所使用的流动相是正己烷/异丙醇混合溶剂或正己烷/无水乙醇混合溶剂。
进一步地，本发明所使用的正己烷/异丙醇的体积比例为85:15～98:2，最优为87:13～97:3
进一步地，本发明所使用的正己烷/无水乙醇的体积比例为85:15～98:2，最优为90:10～97:3
本发明所述的分析分离方法，可按照以下方法实现：
(1)顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体供试品用流动相溶解，配制成1mL含顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体1～10μL的供试品溶液；进样量为2～20μL，较优选的是5～10μL；
(2)设置流动相流速为0.3～1.0mL/min，正己烷/异丙醇流动相流速优选为0.4～0.8mL/min，正己烷/无水乙醇流动相流速优选为0.5-0.8mL/min；检测波长为205～210nm，较优选为205nm；柱温15～50℃，较优选为20～40℃；
(3)取步骤(1)所制供试品溶液5～10μL注入手性色谱柱(250×4.6mm,5.0μm)，完成顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体的分析与分离。
实验结果表明，本发明采用纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)手性色谱柱；采用较优选的流动相；选择流动相溶解样品，选用较优的进样量，选用较优的柱温；选用较优的波长；从而确保了样品的稳定性，提高了色谱峰的对称性，并且有较好的分离效果。其中(1S,5R)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和(1R,5S)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮两个对映异构体先后出峰，分离度≥1.5，有效的分析分离顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体。
本发明分析分离方法简单、快速、准确和高效，能够确保顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体的质量可控性；本发明分析分离方法，也可以用来制备高纯度单一旋光性的顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮。
本发明克服了现有技术的不足，解决了顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体的分析分离问题，能够有效控制目标产物及其对映异构体杂质含量，免除对映异构体杂质对后续合成反应的干扰，提高***素类药物质量，确保用药安全。
由此可见，本发明开发一种分析分离顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体的HPLC方法是十分必要的
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明一种分析分离顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体的HPLC方法做进一步说明，但本发明的保护范围并不限于实施例。
实施例1
仪器与条件
色谱柱：BC chiral OD(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：正己烷-异丙醇(85:15)
柱温：50℃
流速：0.3mL/min
进样体积：2μL
检测波长：200nm
实验步骤
精密量取顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体100μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-异丙醇(85:15)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液2μL进入液相色谱，记录色谱图。
实验结果：(1S,5R)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和(1R,5S)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮两个对映异构体的分离度为1.7，顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体能够完全分离。
实施例2
仪器与条件
色谱柱：BC chiral OD(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：正己烷-异丙醇(85:15)
柱温：15℃
流速：0.5mL/min
进样体积：10μL
检测波长：205nm
实验步骤
精密量取顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体10μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-异丙醇(85:15)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液10μL进入液相色谱，记录色谱图。
实验结果：(1S,5R)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和(1R,5S)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮两个对映异构体的分离度为1.8，顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体能够完全分离。
实施例3
仪器与条件
色谱柱：BC chiral OD(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：正己烷-异丙醇(98:2)
柱温：22℃
流速：1.0mL/min
进样体积：20μL
检测波长：205nm
实验步骤
精密量取顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体50μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-异丙醇(98:2)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液20μL进入液相色谱，记录色谱图。
实验结果：(1S,5R)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和(1R,5S)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮两个对映异构体的分离度为1.9，顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体能够完全分离。
实施例4
仪器与条件
色谱柱：BC chiral OD(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：正己烷-异丙醇(97:3)
柱温：40℃
流速：0.8mL/min
进样体积：10μL
检测波长：210nm
实验步骤
精密量取顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体100μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-异丙醇(97:3)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液10μL进入液相色谱，记录色谱图。
实验结果：(1S,5R)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和(1R,5S)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮两个对映异构体的分离度为2.7，顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体能够完全分离。
实施例5
仪器与条件
色谱柱：BC chiral OD(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：正己烷-异丙醇(87:13)
柱温：24℃
流速：0.4mL/min
进样体积：5μL
检测波长：200nm
实验步骤
精密量取顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体10μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-异丙醇(87:13)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液5μL进入液相色谱，记录色谱图。
实验结果：(1S,5R)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和(1R,5S)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮两个对映异构体的分离度为1.9，顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体能够完全分离。
实施例6
仪器与条件
色谱柱：BC chiral OD(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：正己烷-异丙醇(90:10)
柱温：40℃
流速：1.0mL/min
进样体积：5μL
检测波长：210nm
实验步骤
精密量取顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体50μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-异丙醇(90:10)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液5μL进入液相色谱，记录色谱图。
实验结果：(1S,5R)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和(1R,5S)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮两个对映异构体的分离度为2.4，顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体能够完全分离。
实施例7
仪器与条件
色谱柱：BC chiral OD(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：正己烷-异丙醇(92:8)
柱温：40℃
流速：0.8mL/min
进样体积：10μL
检测波长：210nm
实验步骤
精密量取顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体100μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-异丙醇(92:8)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液10μL进入液相色谱，记录色谱图。
实验结果：(1S,5R)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和(1R,5S)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮两个对映异构体的分离度为2.4，顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体能够完全分离。
实施例8
仪器与条件
色谱柱：BC chiral OD(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：正己烷-异丙醇(95:5)
柱温：40℃
流速：0.8mL/min
进样体积：10μL
检测波长：205nm
实验步骤
精密量取顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体50μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-异丙醇(95:5)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液10μL进入液相色谱，记录色谱图。
实验结果：(1S,5R)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和(1R,5S)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮两个对映异构体的分离度为2.5，顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体能够完全分离。
实施例9
仪器与条件
色谱柱：BC chiral OD(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：正己烷-异丙醇(91:9)
柱温：20℃
流速：0.5mL/min
进样体积：5μL
检测波长：205nm
实验步骤
精密量取顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体10μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-异丙醇(91:9)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液5μL进入液相色谱，记录色谱图。
实验结果：(1S,5R)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和(1R,5S)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮两个对映异构体的分离度为2.0，顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体能够完全分离。
实施例10
仪器与条件
色谱柱：BC chiral OD(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：正己烷-异丙醇(93:7)
柱温：23℃
流速：0.5mL/min
进样体积：5μL
检测波长：205nm
实验步骤
精密量取顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体100μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-异丙醇(93:7)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液5μL进入液相色谱，记录色谱图。
实验结果：(1S,5R)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和(1R,5S)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮两个对映异构体的分离度为1.9，顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体能够完全分离。
实施例11
仪器与条件
色谱柱：BC chiral OD(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：正己烷-无水乙醇(85:15)
柱温：50℃
流速：0.3mL/min
进样体积：2μL
检测波长：200nm
实验步骤
精密量取顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体100μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-无水乙醇87:13)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液2μL进入液相色谱，记录色谱图。
实验结果：(1S,5R)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和(1R,5S)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮两个对映异构体的分离度为1.5，顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体能够完全分离。
实施例12
仪器与条件
色谱柱：BC chiral OD(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：正己烷-无水乙醇(97:3)
柱温：15℃
流速：0.8mL/min
进样体积：10μL
检测波长：210nm
实验步骤
精密量取顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体50μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-无水乙醇(97:3)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液10μL进入液相色谱，记录色谱图。
实验结果：(1S,5R)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和(1R,5S)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮两个对映异构体的分离度为2.2，顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体能够完全分离。
实施例13
仪器与条件
色谱柱：BC chiral OD(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：正己烷-无水乙醇(96:4)
柱温：37℃
流速：0.6mL/min
进样体积：20μL
检测波长：205nm
实验步骤
精密量取顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体10μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-无水乙醇(87:13)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液20μL进入液相色谱，记录色谱图。
实验结果：(1S,5R)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和(1R,5S)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮两个对映异构体的分离度为1.6，顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体能够完全分离。
实施例14
仪器与条件
色谱柱：BC chiral OD(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：正己烷-无水乙醇(90:10)
柱温：20℃
流速：0.3mL/min
进样体积：5μL
检测波长：205nm
实验步骤
精密量取顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体50μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-无水乙醇(90:10)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液5μL进入液相色谱，记录色谱图。
实验结果：(1S,5R)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和(1R,5S)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮两个对映异构体的分离度为1.5，顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体能够完全分离。
实施例15
仪器与条件
色谱柱：BC chiral OD(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：正己烷-无水乙醇(98:2)
柱温：23℃
流速：1.0mL/min
进样体积：10μL
检测波长：205nm
实验步骤
精密量取顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体50μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-无水乙醇(98:2)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液10μL进入液相色谱，记录色谱图。
实验结果：(1S,5R)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和(1R,5S)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮两个对映异构体的分离度为1.5，顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体能够完全分离。
实施例16
仪器与条件
色谱柱：BC chiral OD(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：正己烷-无水乙醇(95:5)
柱温：40℃
流速：0.8mL/min
进样体积：5μL
检测波长：210nm
实验步骤
精密量取顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体50μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-无水乙醇(95:5)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液5μL进入液相色谱，记录色谱图。
实验结果：(1S,5R)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和(1R,5S)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮两个对映异构体的分离度为2.0，顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体能够完全分离。
实施例17
仪器与条件
色谱柱：BC chiral OD(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：正己烷-无水乙醇(92:8)
柱温：20℃
流速：0.8mL/min
进样体积：5μL
检测波长：205nm
实验步骤
精密量取顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体50μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-无水乙醇(87:13)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液5μL进入液相色谱，记录色谱图。
实验结果：(1S,5R)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和(1R,5S)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮两个对映异构体的分离度为1.6，顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体能够完全分离。
实施例18
仪器与条件
色谱柱：BC chiral OD(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：正己烷-无水乙醇(87:13)
柱温：24℃
流速：0.5mL/min
进样体积：10μL
检测波长：205nm
实验步骤
精密量取顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体10μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-无水乙醇(87:13)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液10μL进入液相色谱，记录色谱图。
实验结果：(1S,5R)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和(1R,5S)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮两个对映异构体的分离度为1.5，顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体能够完全分离。
实施例19
仪器与条件
色谱柱：BC chiral OD(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：正己烷-无水乙醇(93:7)
柱温：20℃
流速：0.5mL/min
进样体积：5μL
检测波长：205nm
实验步骤
精密量取顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体100μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-无水乙醇(93:7)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液5μL进入液相色谱，记录色谱图。
实验结果：(1S,5R)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和(1R,5S)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮两个对映异构体的分离度为1.5，顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体能够完全分离。
实施例20
仪器与条件
色谱柱：BC chiral OD(250×4.6mm,5.0μm)
流动相：正己烷-无水乙醇(95:5)
柱温：35℃
流速：0.6mL/min
进样体积：5μL
检测波长：200nm
实验步骤
精密量取顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体100μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-无水乙醇(95:5)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液5μL进入液相色谱，记录色谱图。
实验结果：(1S,5R)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和(1R,5S)-2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮两个对映异构体的分离度为1.5，顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体能够完全分离。

Claims (9)

1.一种分析分离顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体的HPLC方法，其特征在于采用手性色谱柱并使用正向色谱法进行分析分离。
2.根据权利要求1所述的一种分析分离顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体的HPLC方法，其特征在于，所述的手性色谱柱为多糖衍生物正相涂覆型手性色谱柱，硅胶表面涂覆有纤维素-三(3,5-二甲基苯基甲酸酯)。
3.根据权利要求2所述的一种分析分离顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体的HPLC方法，其特征在于，所述正相色谱法所用的流动相为正己烷/异丙醇或正己烷/无水乙醇混合溶剂。
4.根据权利要求3所述一种分析分离顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体的HPLC方法，其特征在于，所述的所述正相色谱法所用的流动相为正己烷/异丙醇混合溶剂，正己烷/异丙醇混合溶剂的体积比例为85:15～98:2。
5.根据权利要求4所述的一种分析分离顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体的HPLC方法，其特征在于，所述的正己烷/异丙醇混合溶剂的体积比例为87:13～97:3。
6.根据权利要求3所述一种分析分离顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体的HPLC方法，其特征在于，所述的所述正相色谱法所用的流动相为正己烷/无水乙醇混合溶剂，正己烷/无水乙醇混合溶剂的体积比例为85:15～98:2。
7.根据权利要求6所述的一种分析分离顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体的HPLC方法，其特征在于，所述的正己烷/无水乙醇混合溶剂的体积比例为90:10～97:3。
8.如权利要求1所述的一种分析分离顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体的HPLC方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体供试品用流动相溶解，配制成1mL含顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体1～10μL的供试品溶液；进样量为2～20μL；
(2)设置流动相流速为0.3～1.0mL/min，检测波长为205～210nm，柱温15～50℃；
(3)取步骤(1)所制供试品溶液5～10μL注入手性色谱柱(250×4.6mm,5.0μm)，完成顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体的分析与分离。
9.如权利要求8所述的一种分析分离顺式2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体的HPLC方法，其特征在于，所述正己烷/异丙醇流动相流速为0.4～0.8mL/min，正己烷/无水乙醇流动相流速为0.5～0.8mL/min；检测波长为205nm；柱温为20～40℃。
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