CN105999217B - 一种防治高尿酸的组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种防治高尿酸的组合物,其包含中药提取物和功能因子,按照重量份数计,所述中药提取物的原料包括:黄芪3‑30份、薏苡仁3‑30份、车前草3‑30份、苍术1‑9份、牛膝1‑12份和木瓜2‑9份,所述功能因子包含鲣鱼胜肽0.1‑5份。本发明还提供了该组合物的制备方法。本发明防治高尿酸的组合物,以黄芪、薏苡仁、车前草、苍术、牛膝、木瓜等中药与鲣鱼胜肽为组合,诸药协同作用,从中医调理和功能因子抑制尿酸生成和促进***多途径组合,大大增强降尿酸功效。
Description
技术领域
本发明属于中药领域,具体涉及一种防治高尿酸的组合物及其制备方法和应用。
背景技术
随着富脂肪、高嘌呤饮食以及果糖化饮料在内的现代生活方式的改变,体检中血尿酸水平增高的人群比例越来越大。流行病学研究显示,近100年来尿酸水平和高尿酸血症患病率的变化与高血压、肥胖、糖尿病和肾脏疾病有着相似的流行趋势。我国近10年HUA患病率平均增加了约10倍。高尿酸血症作为一种多***累及的疾病,可直接导致痛风、高尿酸肾病,加重动脉粥样硬化、胰岛抵抗等,危害不容忽视。
目前西医治疗高尿酸血症的药物主要包括制尿酸生成和促进尿酸***两大类,常用的有丙磺舒、苯磺唑酮、苯溴马隆等,这些药物应用常伴有严重的肝肾功能损伤。高尿酸血症属于中医药治疗的优势病种,早期干预可明显降低高尿酸所致的痛风、高尿酸肾病、心脑血管的发病率。
中医认为高尿酸血症为本虚标实之证,其发生主因先天禀赋不足,外因风寒湿热之邪浸渍人体经络所至,或劳倦,或寒热失调,或饮食失节(酗酒、食伤等)导致肝-脾-肾和三焦气化功能失调,水精代谢紊乱,引起水精内逆,因逆致变。肝肾亏虚,脾失健运为病之本,风寒湿热、痰浊、瘀血闭阻经络为标。高尿酸血症用药以祛湿为主,兼以清热,化瘀,补气。本发明全方以黄芪补脾肺气、利水消肿,薏苡仁健脾利湿、舒筋除弊,车前草清热利尿,苍术燥湿健脾,牛膝活血逐瘀通络,木瓜化湿和胃,共奏清热利湿,逐瘀通经之效;功能因子鲣鱼胜肽可有效抑制XOD酶活性,降低尿酸的生成,改善肾上皮细胞尿酸转运蛋白,加强尿酸的***。中草药与功能因子复配,共同影响尿酸的生成和***途径,使尿酸恢复至正常水平,安全而作用缓和,避免“野蛮排酸”、“粗暴镇痛”。
发明内容
本发明的目的在于提供一种防治高尿酸的组合物及其应用,通过中草药与功能因子复配,尤其是中草药与鲣鱼胜肽复配,达到降低尿酸、甚至恢复正常的目的。
本发明的第一个方面是提供一种防治高尿酸的组合物,其包含中药提取物和功能因子,按照重量份数计,所述功能因子包含鲣鱼胜肽0.1-5份,所述中药提取物的原料包括:黄芪3-30份,例如5份、8份、12份、15份、20份、22份、25份、28份等;薏苡仁3-30份,例如5份、8份、12份、15份、20份、22份、25份、28份等;车前草3-30份 ,例如5份、8份、12份、15份、20份、22份、25份、28份等;苍术1-9份,例如2份、3份、4份、5份、6份、7份、8份等;牛膝1-12份,例如3份、5份、8份、10份、11份等;和木瓜2-9份,例如3份、4份、5份、6份、7份、8份等。
其中,所述中药提取物为水提物、醇提物或者二者的混合物。
优选地,所述组合物还包含1-9份的苍术的挥发油。
优选地,按照重量份数计,所述中药提取物的原料包括:黄芪6-20份、薏苡仁6-20份、车前草6-20份、苍术2-6份、牛膝3-8份和木瓜4-6份,所述功能因子包含鲣鱼胜肽0.3-2份。
优选地,按照重量份数计,所述中药提取物的原料包括:黄芪9份,薏苡仁6份、车前草9份、苍术3份、牛膝4份和木瓜5份,所述功能因子包含鲣鱼胜肽1份。
本发明的第二个方面是提供一种如本发明第一个方面所述的任意组合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤1,取中药提取物的原料,进行提取,得到中药提取物;
步骤2,将中药提取物与功能因子混合即得。
其中,步骤1中的提取可以采用:水提法;醇提法;水提后醇提,合并提取物;醇提后水提,合并提取物;或者原料分两部分,分别水提和醇提,然后合并提取物等诸多提取方法进行提取。
优选地,在所述组合物包含苍术的挥发油的情况下,提取挥发油所用的苍术可以采用中药提取物的原料中的苍术,则步骤1为:取中药提取物的原料,进行提取,得到中药提取物和苍术挥发油;或者提取挥发油所用的苍术不采用中药提取物的原料中的苍术,则步骤1为:取苍术提取其挥发油;取中药提取物的原料,进行提取,得到中药提取物。
其中,提取苍术的挥发油可以采用常用的挥发油提取方法,优选采用水蒸气蒸馏法和/或超临界CO2萃取法等。
本发明第一个方面所述的组合物、或本发明第二个方面所述的制备方法制备得到的组合物可以单独作为活性成分用于防治高尿酸,也可以与现有的其他防治高尿酸的活性成分配伍使用。所以本发明的第三个方面是提供一种防治高尿酸的制剂,其活性成分包含本发明第一个方面所述的任意组合物、或本发明第二个方面所述的任意制备方法制备得到的组合物。
其中,所述制剂也可以包含其他防治高尿酸的活性成分。
其中,所述制剂可以为口服液、煎膏剂、糖浆剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂、散剂或透皮制剂等。
根据制剂的剂型需要,所述制剂还可以包含药学上可接受的辅料。
本发明的第四个方面是提供本发明第一方面所述的任意组合物、或本发明第二个方面所述的任意制备方法制备得到的组合物、或本发明第三方面所述的任意制剂在制备防治高尿酸的制品(例如保健品、药品、食品等)中的应用。
本发明防治高尿酸的组合物,以黄芪、薏苡仁、车前草、苍术、牛膝、木瓜等中药与鲣鱼胜肽为组合,诸药协同作用,从中医调理和功能因子抑制尿酸生成和促进***多途径组合,大大增强降尿酸功效。
说明书附图
图1为药效学研究实验中喂食28d后大鼠肾组织URAT1、GLUT9、OAT1蛋白相对表达水平的影响。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明作进一步的说明,以更好地理解本发明。
实施例1
本实施例主要由下述重量份配比的组分制备而成:
黄芪9份、薏苡仁6份、车前草9份、苍术3份、牛膝4份、木瓜5份和鲣鱼胜肽1份。
上述原料,苍术粗粉,采用SFE-CO2法,萃取压力30MPa,萃取温度50℃,CO2流量25kg·h-1,萃取2h,得苍术挥发油。苍术药渣与黄芪、薏苡仁、车前草、牛膝、木瓜混合,加水提取2次,第一次加12倍量(重量)水,浸泡0.5h,煮沸提取1.5小时,第二次加8倍量(重量)水,煮沸提取1小时,合并两次提取液;将提取液过滤,减压浓缩,温度65℃-85℃,真空度-0.03~-0.08Mpa,浓缩至1.2g/mL;喷雾干燥,进样口温度160-175℃,出风温度95℃,得喷干粉;加入鲣鱼胜肽及相关辅料,制粒,喷散苍术挥发油,即得到颗粒剂成品。
实施例2
本实施例主要由下述重量份配比的组分制备而成:
黄芪10份、薏苡仁15份、车前草9份、苍术6份、牛膝8份、木瓜2份和鲣鱼胜肽1.6份。
上述原料,苍术粗粉,采用水蒸气蒸馏法,提取6h,制得苍术挥发油。黄芪、薏苡仁、车前草、牛膝、木瓜混合,60%乙醇提取2次,第一次加10倍量(重量)60%乙醇,浸泡0.5h,回流提取1.5小时,第二次加6倍量(重量)60%乙醇,回流提取1小时,合并两次提取液;将提取液过滤,减压浓缩,温度55℃-80℃,真空度-0.03~-0.08Mpa,浓缩至无醇味;浓缩液与苍术母液混合,喷雾干燥,进样口温度160-175℃,出风温度85℃,得喷干粉;加入鲣鱼胜肽及相关辅料,制粒,喷散苍术挥发油,压片,即得到片剂成品。
实施例3
本实施例主要由下述重量份配比的组分制备而成:
黄芪20份、薏苡仁20份、车前草15份、苍术2份、牛膝5份、木瓜2份和鲣鱼胜肽1.0份。
上述原料,将苍术、黄芪、薏苡仁、车前草、牛膝、木瓜混合,80%乙醇低温提取2次,第一次加10倍量(重量)80%乙醇,浸泡0.5h,60℃提取2.0小时,第二次加8倍量(重量)80%乙醇,60℃提取1.5小时,合并两次提取液。低温减压浓缩,温度55℃-70℃,真空度-0.03~-0.08Mpa,浓缩至无醇味;加入鲣鱼胜肽及相关辅料加适量蒸馏水溶解,与中药提取浓缩液混合,加水定容,即得到口服液成品。
实施例4
本实施例主要由下述重量份配比的组分制备而成:
黄芪5份、薏苡仁20份、车前草15份、苍术3份、牛膝4份、木瓜4份和鲣鱼胜肽0.5份。
上述原料,苍术85%乙醇低温提取2次,第一次加12倍量85%乙醇,浸泡0.5h,55℃提取1.5小时,第二次加10倍量85%乙醇,60℃提取1.0小时,合并两次提取液,低温减压浓缩,温度55℃-65℃,真空度-0.02~-0.08Mpa,浓缩至无醇味。黄芪、薏苡仁、车前草、牛膝、木瓜混合,加水提取2次,第一次加20倍量水,浸泡0.5h,煮沸提取1.5小时,第二次加15倍量水,煮沸提取1.5小时,合并两次提取液,减压浓缩,温度65℃-85℃,真空度-0.03~-0.08Mpa,浓缩至1.2g/mL。合并苍术浓缩液和其他中药材浓缩液,加入鲣鱼胜肽及相关辅料,溶解,定容,即得到口服液成品。
实施例5
本实施例主要由下述重量份配比的组分制备而成:
黄芪30份、薏苡仁10份、车前草25份、苍术8份、牛膝10份、木瓜5份和鲣鱼胜肽0.8份。
本发明实施例各组成为市售商品提取物,加入常规辅料,通过制剂工艺,制得胶囊剂,其降尿酸效果显著。
实施例6
本发明主要由下述重量份配比的组分制备而成:
黄芪6份,薏苡仁18份、车前草20份、苍术9份、牛膝2份、木瓜8份 、鲣鱼胜肽4份。
以上实施例中,各组分均为市售商品,通过常规制剂工艺(如水蒸气蒸馏、超临界二氧化碳萃取、水提取或不同质量分数乙醇醇提取等),可以制成药剂学上所说的多种剂型,如口服液、胶囊剂、片剂、粉剂或颗粒剂等,此处不做限定。
防治高尿酸组合物的药效学研究
1 实验材料
氧嗪酸钾(山东济南诚汇双达化工有限公司),配制方法:每次准确称取15g以蒸馏水配成15%的混悬乳液;
腺嘌呤(广州市齐云生物技术有限公司);
尿酸试剂盒(上海丰汇医学科技有限公司);
尿素氮(上海科华生物工程股份有限公司);
肌酐(CR)检测试剂盒(日本积水医疗株式会社);
胆固醇(国药集团化学试剂有限公司);
胆盐(国药集团化学试剂有限公司);
黄嘌呤氧化酶检测试盒、黄嘌呤脱氢酶试剂盒(南京建成生物工程研究所);
超氧化物歧化酶试剂盒(南京建成生物工程研究所);
丙二醛试剂盒(上海酶联生物科技有限公司);
别嘌呤醇(广州彼迪药业有限公司),以0.1% CMC-Na配制成浓度为2.7 mg/ml混悬液,每次配制3d用量,4℃保存备用。
中草药提取物的制备,参考实施例1:黄芪540g,薏苡仁360g、车前草540g、苍术180g、牛膝240g、木瓜300g ,上述原料,苍术粉碎,采用SFE-CO2法,萃取压力 30MPa,萃取温度50℃、CO2流量25kg·h-1,萃取2h,得苍术挥发油。苍术药渣与黄芪、薏苡仁、车前草、牛膝、木瓜混合,加水提取2次,第一次加12倍量水,浸泡0.5h,煮沸提取1.5小时,第二次加8倍量水,煮沸提取1小时,合并两次提取液;将提取液过滤,减压浓缩,温度65℃-85℃,真空度-0.03~-0.08Mpa,浓缩至1.2g/mL;喷雾干燥,进样口温度160-175℃,出风温度95℃,得喷干粉;喷干粉制粒,喷散苍术挥发油,即得到中草药提取物。
2 实验动物
SPF级雄性SD大鼠(中山大学实验动物中心,实验动物生产许可证号为:SCXK(粤)2011-0029。实验动物质量合格证号:44008500002424)。
3 实验方法
3.1 模型制备、分组及剂量设置:
以腺嘌呤(100 mg·kg-1·d-1,ig)+氧氰酸钾(1.5g·kg-1·d-1,ig)制备高尿酸大鼠模型。SD雄性大鼠,适应性饲养5d,按体重将动物随机分为正常对照组、模型对照组、别嘌呤醇组、实施例 1(L)组,实施例1(M)组、实施例1(H)组,中草药提取物组和鲣鱼胜肽组,每组10只。按分组情况给予相应药物。
各样品剂量设置见表1。各剂量组样品经溶解稀释并定容至适宜灌胃体积。
表1 按体重换算给药剂量
按体重剂量换算计,别嘌呤醇组中剂量为27mg·kg-1·d-1,实施例1(L)组剂量为0.82g·kg-1·d-1,实施例1(M)组剂量为1.64g·kg-1·d-1,实施例1(H)组剂量为3.28g·kg-1·d-1,中草药提取物组剂量为1.44g·kg-1·d-1,鲣鱼胜肽组剂量为0.2g·kg-1·d-1,连续28d。
3.2 检测指标
3.2.1 血清代谢指标及黄嘌呤氧化酶的测定
于造模前,给药14d,末次给药1h后,眼眶静脉丛采血;给药28d,末次给药1h后,腹腔注射戊巴比妥钠(45mg·kg-1)麻醉,大鼠腹主动脉取血,分离血清测定尿酸(UA)、肌酐(CR)、尿素氮(BUN)、总胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、和黄嘌呤氧化酶(XOD)的水平。
3.2.2 肝组织黄嘌呤氧化酶(XOD)、黄嘌呤脱氢酶(XDH)活性的变化
给药28d,末次给药后1h后,腹腔注射戊巴比妥钠(45mg·kg-1)麻醉,大鼠腹主动脉取血后,取大鼠肝组织块,用预冷的生理盐水制备成100g·L-1的肝匀浆,36小时内进行检测。按试剂盒说明测定肝匀浆XOD、XDH活性。
3.2.3 肾皮质GLUT9、OAT1、URAT1蛋白表达的测定
取肾脏组织剪碎,液氮研磨至单细胞状态,按每10mg组织加入200ul RIPA裂解液(含PMSF1mM),冰上裂解30min,4℃12000rpm离心15min,取上清, -80℃冰箱保存,待用。考马斯亮蓝G250测定蛋白质溶液的OD值,调整样品蛋白浓度使在同一水平(4~8μg·μl-1)。上述提取的蛋白采用10% SDS-PAGE胶电泳分离,每孔上样40~60μg总蛋白。在70v条件下转移70min,将蛋白转移至PVDF膜上,将蛋白膜放置到TBST中漂洗1~2分钟;加入5%脱脂奶粉封闭液封闭1h。根据蛋白Marker指示,参考一抗说明书,按1:1000(GLUT9)、1:500(OAT1,GAPDH,URAT1)比例稀释一抗;将PVDF膜放入一抗溶液中,4℃孵育过夜。TBST洗涤3次。参考二抗说明书,按照1:2500比例稀释辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗。将PVDF膜与二抗室温孵育1h;放入TBST洗涤3次。使用BeyoECLPlus化学发光试剂,黑暗处显色,用X光片压片,显影液及定影液洗片。
3.2.4 数据处理与统计
所有实验数据均用表示。采用SPSS进行单因素方差分析,两组均数间差异采用t检验。
3.3 结果
3.3.1 造模前及给药14、28d大鼠血清UA、CR、BUN、TG、CHO、XOD水平的变化分别见表2~4。
由表2可知,造模前各组大鼠血清UA、CR、BUN、TG、CHO、XOD水平基本相接近,未见明显组间差异(p>0.05)。
由表3可知,给药14d,与正常对照组比较,造模组大鼠血清UA、BUN、CR和XOD水平均显著升高(p<0.01),TG、CHO水平略有上升,但无统计学差异(p>0.05)。与模型对照组比较,中草药组BUN水平,别嘌呤醇组血清UA、XOD水平,实施例1(M)组BUN、XOD水平以及实施例1(H)组UA、BUN、XOD水平均显著降低(p <0.05),其余各指标水平改变不具统计学差异(p >0.05)。结果表明,氧嗪酸钾+腺嘌呤造模14d,高尿酸血症大鼠模型成功,同时,尿酸水平升高导致肾损伤引起肾小球滤过功能下降,肌酐、尿酸氮水平升高。给药14d,别嘌呤醇及实施例1(H)组表现良好的降低血清UA水平、抑制XOD活性的作用。实施例1(L)、(M)两个剂量组给药14d降尿酸效果并不明显,但实施例1(M)组表现良好的抑制XOD活性。实施例1(M)、(H)组及中草药组BUN水平降低,提示具有保护肾脏功能的作用。
由表4可知,给药28d,与正常对照组比较,模型对照组大鼠血清UA、BUN、CR和XOD水平均显著升高(p <0.01)。与模型对照组比较,别嘌呤醇组血清UA、XOD水平,实施例1(L)、(M)、(H)组及中草药组UA、BUN、CR、XOD水平以及鲣鱼胜肽UA、XOD水平显著降低(p<0.05)。表明给药28d,别嘌呤醇表现良好的降低血清尿酸水平、抑制XOD活性的作用,但对高尿酸引起的肾脏功能损伤无逆转作用。实施例1(L)、(M)、(H)组、中草药组及鲣鱼胜肽组均表现良好的降低血清尿酸水平、抑制XOD活性以及保护肾脏功能的作用。
交互作用性质分析,对实施例1中剂量组、中草药组和鲣鱼胜肽组进行分析,中草药与鲣鱼胜肽配伍使用,降低UA、XOD水平,逆转肾损伤降低CR、BUN水平,效果优于两者单独使用,且两者存在协同增效的作用( E实施例1中剂量组>E中草药+E鲣鱼胜肽)。
表2 造模前大鼠血清UA、CR 、BUN、TG、CHO 、XOD水平(,n=10)
表3 给药14d大鼠血清UA、CR 、BUN、TG、CHO、XOD水平(,n=10)
注:与正常对照组比较:#p<0.01;与模型对照组比较:*p<0.05。
表4 给药28d大鼠血清UA、CR 、BUN、TG、CHO 、XOD水平(,n=10)
注:与正常对照组比较:#p<0.01;与模型对照组比较:*p<0.05。
3.3.2 给药28d大鼠肝组织XOD、XDH活性的变化
黄嘌呤氧化酶(XOD)和黄嘌呤脱氢酶(XDH)是黄嘌呤氧化脱氢酶的两种互变形式,是黄素蛋白家族中一员。两种形式的酶均参与嘌呤代谢,是嘌呤代谢及尿酸合成过程中的关键酶。抑制嘌呤代谢关键酶的活性,可有效降低血清尿酸水平。如表5所示,与正常对照组比较,模型对照组的XOD、XDH活性显著升高(p<0.05);与模型组相比,别嘌呤醇组、实施例1(L)(M)、(H)组XOD、XDH活性显著降低(p<0.05),且实施例1(H)组与别嘌呤醇组XOD活性无显著区别(p>0.05)。提示实施例1通过抑制XOD、XDH活性发挥降尿酸的作用,且其抑制XOD活性的强度与别嘌呤醇相当。
表5 给药28d大鼠肝组织XOD、XDH活性的变化(,n=10)
注:与正常对照组比较:#p<0.05;与模型对照组比较:* p<0.05。
3.3.3 喂食28d后大鼠肾组织URAT1、GLUT9、OAT1蛋白相对表达水平的影响
结果见图1,URAT1、GLUT9和OAT1是肾脏负责尿酸重吸收、分泌的重要尿酸转运蛋白。由图1可见,和正常对照组比较,模型对照组负责尿酸重吸收的尿酸转运蛋白URAT1、GLUT9蛋白表达水平升高,负责尿酸分泌的尿酸转运蛋白OAT1蛋白表达水平降低;和模型对照组相比,别嘌呤醇、实施例1(L)、(M)、(H)具有降低URAT1、GLUT9蛋白表达水平,升高OAT1蛋白表达水平的作用。
采用实施例2~6制得的组合物进行上述药效学研究,结果同实施例1,中药提取物与鲣鱼胜肽配伍使用,能显著降低UA、XOD、XDH水平,降低URAT1、GLUT9蛋白表达水平,逆转肾损伤降低CR、BUN水平,升高OAT1蛋白表达,且效果优于两者单独使用,产生协同增效作用。
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述,但其只是作为范例,本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言,任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此,在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改,都应涵盖在本发明的范围内。
Claims (7)
1.一种防治高尿酸的组合物,其特征在于,其由中药提取物和功能因子组成,按照重量份数计,所述中药提取物的原料由以下组分组成:黄芪3-30份、薏苡仁3-30份、车前草3-30份、苍术1-9份、 牛膝1-12份和木瓜2-9份,所述功能因子为鲣鱼胜肽0.1-5份。
2.根据权利要求1所述的组合物,其特征在于,所述中药提取物包括:黄芪的水提物和/或醇提物、薏苡仁的水提物和/或醇提物、车前草的水提物和/或醇提物、苍术的水提物和/或醇提物、牛膝的水提物和/或醇提物、以及木瓜的水提物和/或醇提物。
3.根据权利要求1-2中任意一项所述的组合物,其特征在于,按照重量份数计,所述中药提取物的原料由以下组分组成:黄芪6-20份、薏苡仁6-20份、车前草6-20份、苍术2-6份、牛膝3-8份和 木瓜4-6份,所述功能因子为鲣鱼胜肽0.3-2份。
4.根据权利要求3所述的组合物,其特征在于,按照重量份数计,所述中药提取物的原料由以下组分组成:黄芪9份,薏苡仁6份、车前草9份、苍术3份、牛膝4份和木瓜5份,所述功能因子为鲣鱼胜肽1份。
5.一种如权利要求1-4中任意一项所述的组合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤1,取中药提取物的原料,进行提取,得到中药提取物;
步骤2,将中药提取物与功能因子混合即得。
6.一种防治高尿酸的制剂,其特征在于,其活性成分包含权利要求1-4中任意一项所述的组合物。
7.权利要求1-4中任意一项所述的组合物、或权利要求6所述的制剂在制备防治高尿酸的制品中的应用。
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