CN105998153B - 猴耳环提取物在制备抗产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌药物中的应用 - Google Patents

猴耳环提取物在制备抗产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌药物中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN105998153B
CN105998153B CN201610308718.6A CN201610308718A CN105998153B CN 105998153 B CN105998153 B CN 105998153B CN 201610308718 A CN201610308718 A CN 201610308718A CN 105998153 B CN105998153 B CN 105998153B
Authority
CN
China
Prior art keywords
extract
escherichia coli
ramulus
antibiotic
acetic acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201610308718.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105998153A (zh
Inventor
苏薇薇
刘翀
周倩
李沛波
彭维
王永刚
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangzhou Baiyunshan Huacheng Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Sun Yat Sen University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to CN201610308718.6A priority Critical patent/CN105998153B/zh
Application filed by Sun Yat Sen University filed Critical Sun Yat Sen University
Publication of CN105998153A publication Critical patent/CN105998153A/zh
Priority to PCT/CN2017/071671 priority patent/WO2017193635A1/zh
Priority to EP17795261.1A priority patent/EP3456335B1/en
Priority to US15/920,480 priority patent/US11154582B2/en
Application granted granted Critical
Publication of CN105998153B publication Critical patent/CN105998153B/zh
Priority to US17/129,853 priority patent/US11491198B2/en
Priority to US17/129,885 priority patent/US20210106640A1/en
Priority to US17/129,901 priority patent/US20210106641A1/en
Priority to US17/494,850 priority patent/US11654174B2/en
Priority to US17/494,858 priority patent/US11793849B2/en
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/48Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/63Compounds containing para-N-benzenesulfonyl-N-groups, e.g. sulfanilamide, p-nitrobenzenesulfonyl hydrazide
    • A61K31/635Compounds containing para-N-benzenesulfonyl-N-groups, e.g. sulfanilamide, p-nitrobenzenesulfonyl hydrazide having a heterocyclic ring, e.g. sulfadiazine
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/7036Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin having at least one amino group directly attached to the carbocyclic ring, e.g. streptomycin, gentamycin, amikacin, validamycin, fortimicins
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02ATECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

本发明公开了猴耳环提取物在制备抗产超广谱β‑内酰胺酶大肠杆菌药物中的应用。并进一步公开猴耳环提取物在制备抗生素抗产超广谱β‑内酰胺酶大肠杆菌增敏药物中的应用。尤其是作为阿米卡星和复方新诺明抗产超广谱β‑内酰胺酶大肠杆菌增敏药物中的应用。经试验证明,猴耳环提取物与阿米卡星或复方新诺明联用均呈协同作用。在本发明猴耳环提取物小于等于1/2MIC时联用,比阿米卡星单用用量降低75%;比复方新诺明单用用量降低99.3%。可作为天然的抗菌药物或抗生素增敏剂,应用于由产ESBL大肠杆菌引起的疾病治疗。为解决该类抗生素的耐药性问题提供了新的途径和替代药物。

Description

猴耳环提取物在制备抗产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌药物中 的应用
技术领域
本发明属中药制药领域,涉及猴耳环(Pithecellobium clypearia)提取物的新用途。
背景技术
21世纪是多重耐药菌的时代,抗生素临床应用60年后,越来越多的院内感染和多重耐药菌感染成为目前临床抗菌治疗的一大难题,1961年Jerons报告第1例临床耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染患者,目前MRSA感染已逐渐遍及全球;2011年中国细菌耐药性监测临床中主要耐药菌的分布,大肠杆菌、肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)株分别平均为50.7%、38.5%,其耐药性的变迁和现状备受关注。另外,据我国***耐药监测协作组2010年度报告,鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌在医院ICU分离的病原菌中居首位,鲍曼不动杆菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别高达60.4%和61.4%。综上所述,在MRSA、产ESBL的各类细菌、多重耐药的鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌的临床占有率逐年攀升,耐药率不断攀高的压力下,抗生素治疗面临着巨大的挑战。为避免细菌耐药现象的进一步恶化,专家学者力图发现新的抑制细菌生长以及治疗细菌引起疾病的新方法。已有研究报道证明中国传统中药如黄连、黄芩和连翘等对不同耐药细菌有一定的抑制效果,进一步研究中药抑制耐药菌生长的重点在于发现新的抑菌能力更强、耐药抑菌谱更广的中药。
猴耳环(Pithecellobium clypearia Benth),学名围涎树,是含羞草科猴耳环属植物猴耳环的干燥幼枝和叶,其性味苦涩寒,功效清热解毒、收湿敛疮,是治疗多种热毒症候独特的南方药材。
目前有文献公开猴耳环以及其提取物具有抗病毒作用。中国专利CN103385912A公开了猴耳环的提取物具有抗MRSA作用及抗生素增敏作用,但该专利未提及该猴耳环提取物对产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌(简称“产ESBL大肠杆菌”)的抗菌作用及与抗生素联用的增敏作用。
发明内容
本发明目的在于开发猴耳环在制备抗耐药菌药物中的应用。
本发明公开了猴耳环提取物在制备抗产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌药物中的应用。
并进一步公开猴耳环提取物在制备抗生素抗产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌增敏药物中的应用。尤其是作为阿米卡星和复方新诺明抗产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌增敏药物中的应用。本发明可应用于人用药物或动物用药物。
本发明所述的猴耳环提取物是指猴耳环水提取物或猴耳环乙醇提取物。该提取物可通过以下方法制备:猴耳环粗粉用水或乙醇水溶液提取,所得的提取液再用乙酸乙酯萃取所得的萃取物即为目标产品。
本发明的有益效果在于:本发明首次公开了猴耳环提取物对产ESBL大肠杆菌的抗菌作用及对该类抗生素的增敏作用。经试验证明,猴耳环提取物与阿米卡星或复方新诺明联用均呈协同作用。在本发明猴耳环提取物小于等于1/2MIC时联用,比阿米卡星单用用量降低75%;比复方新诺明单用用量降低99.3%。可作为天然的抗菌药物或抗生素增敏剂,应用于由产ESBL大肠杆菌引起的疾病治疗。为解决该类抗生素的耐药性问题提供了新的途径和替代药物。
具体实施方式
本发明通过下述实施方案对猴耳环水或乙醇提取物的抗产ESBL大肠杆菌的药理作用进行筛选。
以微量肉汤稀释法测定猴耳环提取物对产ESBL大肠杆菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。
菌株:产ESBL大肠杆菌(ECO,编号E1-E20)20株;大肠杆菌质控菌株(ECO,ATCC25922)均由中山大学附属第一医院检验医学部临床微生物检验室提供,经中山大学附属第一医院临床微生物检验室检测确认其耐药性。
MH肉汤培养基:MH肉汤干粉(英国OXOID LTD.)2.1g,定容至100ml,NAOH调节pH至7.0,高压灭菌,置4℃冰箱备用。
方法:参照美国国立临床试验标准化委员会(NCCLS)推荐的微量肉汤稀释法操作。
本发明通过下述方法对猴耳环提取物对阿米卡星、复方新诺明抗产ESBL大肠杆菌的增敏作用进行考察。
菌株:产ESBLs大肠杆菌(ECO,编号E1-E20)20株;大肠杆菌质控菌株(ECO,ATCC25922)均由中山大学附属第一医院检验医学部临床微生物检验室提供,经中山大学附属第一医院临床微生物检验室检测确认其耐药性。
MH肉汤培养基:MH肉汤干粉(英国OXOID LTD.)2.1g,定容至100ml,NAOH调节pH至7.0,高压灭菌,置4℃冰箱备用。
方法:参照美国国立临床试验标准化委员会(NCCLS)推荐的棋盘稀释法操作。
猴耳环提取物的制备方法:猴耳环(Pithecellobium clypearia Benth)由广州市花城制药厂提供。取适量猴耳环药材打成粗粉,用水或乙醇回流2次,每次2小时,过滤;合并滤液,浓缩得浸膏(水或乙醇提取物)。取浸膏用水混悬后,用乙酸乙酯萃取,萃取三次,合并乙酸乙酯萃取液,浓缩得乙酸乙酯萃取物。所述的乙醇提取物可由10-95%乙醇回流制得。
下面通过具体的实施例进一步说明本发明的技术方案。
实施例1
猴耳环水提取物的乙酸乙酯萃取物抗产ESBL大肠杆菌的抑菌杀菌试验及分别与阿米卡星、复方新诺明联合的增敏药效考察。
1.实验方法
1)最低抑菌浓度(MIC)的测定:
猴耳环水提取物的乙酸乙酯萃取物、阿米卡星(AMK)、复方新诺明(SXT)分别在MH肉汤培养基中进行一系列倍比稀释,每孔50μl,调节接种菌为1.0×106CFU/ml,每孔50μl菌液。35℃培养;24小时,无沉淀出现的最低抗菌药物的浓度为其最低抑菌浓度(MIC)。
2)最低杀菌浓度(MBC)的测定:
采用平板涂布计数法,从1)项无菌生长的孔中吸取50ul菌悬液至血平板上,均匀涂布,35℃培养24小时,菌落计数,使最初的实验活菌数减少99.9%或以上所需要的最低抗菌药物的浓度为其最低杀菌浓度(MBC)。
通过测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),并对数据进行统计得出MIC50、MIC90、MBC50、MBC90,来评价药物抗产ESBL大肠杆菌的作用。
3)棋盘稀释法:
棋盘稀释法在96孔无菌培养板中进行,将猴耳环水提取物的乙酸乙酯萃取物及阿米卡星(AMK)、复方新诺明(SXT)分别在MH肉汤培养基中倍比稀释成系列浓度,以两药各自1/4MIC到4MIC分别进行联合,每孔A药B药各加25μL,调整菌悬液的浓度为1.0×106CFU/ml,每孔接种50μL菌液,35℃孵育24h后观察A药B药联合后对产ESBLs大肠杆菌的最低抑菌浓度(MIC)。
FIC指数的计算:通过计算部分抑菌指数(FIC)来评价猴耳环水提取物的乙酸乙酯萃取物与抗生素联合抗菌的相互作用,FIC≤0.5为协同作用,0.5﹤FIC≤1为相加作用,1﹤FIC≤2为无关作用,FIC﹥2为拮抗作用;并根据无菌生长孔找出猴耳环水提取物的乙酸乙酯萃取物和抗生素的最佳浓度配比,最终评价猴耳环水提取物的乙酸乙酯萃取物增强抗生素效力的作用。
2.实验结果
猴耳环水提取物的乙酸乙酯萃取物及两种抗生素(阿米卡星、复方新诺明)对产ESBL大肠杆菌的体外抑菌试验结果见表1。
猴耳环水提取物的乙酸乙酯萃取物对产ESBLs大肠杆菌的体外杀菌试验结果见表2。
经过统计分析,猴耳环水提取物的乙酸乙酯萃取物及两种抗生素对产ESBL大肠杆菌的体外抑菌和杀菌的MIC50、MIC90见表3。
经过统计分析,猴耳环提取物对产ESBL大肠杆菌的杀菌的MBC50、MBC90见表4。
猴耳环水提取物的乙酸乙酯萃取物与两种抗生素的联合药敏试验的FIC值及FIC值的分布统计结果见表5、表6。
猴耳环水提取物的乙酸乙酯萃取物对两种抗生素的增敏作用及联用后其MIC50、MIC90见表7-9。
表1
表2
表3
表4
表5
表6
表7
表8
表9
实验结果表明猴耳环水提取物的乙酸乙酯萃取物单用对产ESBL大肠杆菌的MIC50为1600μg/ml,MIC90为1600μg/ml,MBC50为3200μg/ml,MBC90为3200μg/ml;
对20株产ESBL大肠杆菌,猴耳环水提取物的乙酸乙酯萃取物与阿米卡星联用的FIC均≤2表明两药无拮抗作用,其中有50%FIC值≤0.5呈协同作用;猴耳环水提取物的乙酸乙酯萃取物在小于等于1/2MIC时使阿米卡星MIC50从单用的16μg/ml降至4μg/ml,降低了75%;MIC90从单用64μg/ml降至16μg/ml,降低75%;
猴耳环水提取物的乙酸乙酯萃取物与复方新诺明联用对20株产ESBL大肠杆菌FIC均≤2表明两药两药无拮抗作用,其中25%FIC值≤0.5呈协同作用。猴耳环水提取物的乙酸乙酯萃取物在小于等于单用MIC时使复方新诺明MIC50和MIC90均从单用的2432/128μg/ml降至19/1μg/ml,降低了99.3%。
实施例2
猴耳环10%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物抗产ESBL大肠杆菌的抑菌杀菌试验及分别与阿米卡星、复方新诺明联合的增敏药效考察。
1.实验方法
1)最低抑菌浓度(MIC)的测定:
猴耳环10%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物、阿米卡星(AMK)、复方新诺明(SXT)分别在MH肉汤培养基中进行一系列倍比稀释,每孔50μl,调节接种菌为1.0×106CFU/ml,每孔50μl菌液。35℃培养;24小时,无沉淀出现的最低抗菌药物的浓度为其最低抑菌浓度(MIC)。
2)最低杀菌浓度(MBC)的测定:
采用平板涂布计数法,从1)项无菌生长的孔中吸取50ul菌悬液至血平板上,均匀涂布,35℃培养24小时,菌落计数,使最初的实验活菌数减少99.9%或以上所需要的最低抗菌药物的浓度为其最低杀菌浓度(MBC)。
通过测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),并对数据进行统计得出MIC50、MIC90、MBC50、MBC90,来评价药物抗产ESBL大肠杆菌的作用。
3)棋盘稀释法:
棋盘稀释法在96孔无菌培养板中进行,将猴耳环10%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物及阿米卡星(AMK)、复方新诺明(SXT)分别在MH肉汤培养基中倍比稀释成系列浓度,以两药各自1/4MIC到4MIC分别进行联合,每孔A药B药各加25μL,调整菌悬液的浓度为1.0×106CFU/ml,每孔接种50μL菌液,35℃孵育24h后观察A药B药联合后对产ESBLs大肠杆菌的最低抑菌浓度(MIC)。
FIC指数的计算:通过计算部分抑菌指数(FIC)来评价猴耳环10%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物与抗生素联合抗菌的相互作用,FIC≤0.5为协同作用,0.5﹤FIC≤1为相加作用,1﹤FIC≤2为无关作用,FIC﹥2为拮抗作用;并根据无菌生长孔找出猴耳环10%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物和抗生素的最佳浓度配比,最终评价猴耳环10%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物增强抗生素效力的作用。
2.实验结果
猴耳环10%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物及两种抗生素(阿米卡星、复方新诺明)对产ESBL大肠杆菌的体外抑菌试验结果见表10。
猴耳环10%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物对产ESBLs大肠杆菌的体外杀菌试验结果见表11。
经过统计分析,猴耳环10%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物及两种抗生素对产ESBL大肠杆菌的体外抑菌和杀菌的MIC50、MIC90见表12。
经过统计分析,猴耳环提取物对产ESBL大肠杆菌的杀菌的MBC50、MBC90见表13。
猴耳环10%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物与两种抗生素的联合药敏试验的FIC值及FIC值的分布统计结果见表14、表15。
猴耳环10%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物对两种抗生素的增敏作用及联用后其MIC50、MIC90见表16-18。
表10
表11
表12
表13
表14
表15
表16
表17
表18
实验结果表明猴耳环10%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物单用对产ESBL大肠杆菌的MIC50为1600μg/ml,MIC90为1600μg/ml,MBC50为3200μg/ml,MBC90为3200μg/ml;
对20株产ESBL大肠杆菌,猴耳环10%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物与阿米卡星联用的FIC均≤2表明两药无拮抗作用,其中有50%FIC值≤0.5呈协同作用;猴耳环10%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物在小于等于1/2MIC时使阿米卡星MIC50从单用的16μg/ml降至4μg/ml,降低了75%;MIC90从单用64μg/ml降至16μg/ml,降低75%;
猴耳环10%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物与复方新诺明联用对20株产ESBL大肠杆菌FIC均≤2表明两药两药无拮抗作用,其中20%FIC值≤0.5呈协同作用。猴耳环水提取物的乙酸乙酯萃取物在小于等于单用MIC时使复方新诺明MIC50和MIC90均从单用的2432/128μg/ml降至19/1μg/ml,降低了99.3%。
实施例3
猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物抗产ESBL大肠杆菌的抑菌杀菌试验及分别与阿米卡星、复方新诺明联合的增敏药效考察。
1.实验方法
1)最低抑菌浓度(MIC)的测定:
猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物、阿米卡星(AMK)、复方新诺明(SXT)分别在MH肉汤培养基中进行一系列倍比稀释,每孔50μl,调节接种菌为1.0×106CFU/ml,每孔50μl菌液。35℃培养;24小时,无沉淀出现的最低抗菌药物的浓度为其最低抑菌浓度(MIC)。
2)最低杀菌浓度(MBC)的测定:
采用平板涂布计数法,从1)项无菌生长的孔中吸取50ul菌悬液至血平板上,均匀涂布,35℃培养24小时,菌落计数,使最初的实验活菌数减少99.9%或以上所需要的最低抗菌药物的浓度为其最低杀菌浓度(MBC)。
通过测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),并对数据进行统计得出MIC50、MIC90、MBC50、MBC90,来评价药物抗产ESBL大肠杆菌的作用。
3)棋盘稀释法:
棋盘稀释法在96孔无菌培养板中进行,将猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物及阿米卡星(AMK)、复方新诺明(SXT)分别在MH肉汤培养基中倍比稀释成系列浓度,以两药各自1/4MIC到4MIC分别进行联合,每孔A药B药各加25μL,调整菌悬液的浓度为1.0×106CFU/ml,每孔接种50μL菌液,35℃孵育24h后观察A药B药联合后对产ESBLs大肠杆菌的最低抑菌浓度(MIC)。
FIC指数的计算:通过计算部分抑菌指数(FIC)来评价猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物与抗生素联合抗菌的相互作用,FIC≤0.5为协同作用,0.5﹤FIC≤1为相加作用,1﹤FIC≤2为无关作用,FIC﹥2为拮抗作用;并根据无菌生长孔找出猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物和抗生素的最佳浓度配比,最终评价猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物增强抗生素效力的作用。
2.实验结果
猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物及两种抗生素(阿米卡星、复方新诺明)对产ESBL大肠杆菌的体外抑菌试验结果见表19。
猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物对产ESBLs大肠杆菌的体外杀菌试验结果见表20。
经过统计分析,猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物及两种抗生素对产ESBL大肠杆菌的体外抑菌和杀菌的MIC50、MIC90见表21。
经过统计分析,猴耳环提取物对产ESBL大肠杆菌的杀菌的MBC50、MBC90见表22。
猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物与两种抗生素的联合药敏试验的FIC值及FIC值的分布统计结果见表23、表24。
猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物对两种抗生素的增敏作用及联用后其MIC50、MIC90见表25-27。
表19
表20
表21
表22
表23
表24
表25
表26
表27
实验结果表明猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物单用对产ESBL大肠杆菌的MIC50为800μg/ml,MIC90为800μg/ml,MBC50为1600μg/ml,MBC90为1600μg/ml;
对20株产ESBL大肠杆菌,猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物与阿米卡星联用的FIC均≤2表明两药无拮抗作用,其中有70%FIC值≤0.5呈协同作用;猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物在小于等于1/4MIC时使阿米卡星MIC50从单用的16μg/ml降至4μg/ml,降低了75%;MIC90从单用64μg/ml降至8μg/ml;
猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物与复方新诺明联用对20株产ESBL大肠杆菌FIC均≤2表明两药两药无拮抗作用,其中30%FIC值≤0.5呈协同作用。猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物在小于等于单用MIC时使复方新诺明MIC50和MIC90均从单用的2432/128μg/ml降至19/1μg/ml,降低了99.3%。
实施例4
猴耳环95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物抗产ESBL大肠杆菌的抑菌杀菌试验及分别与阿米卡星、复方新诺明联合的增敏药效考察。
1.实验方法
1)最低抑菌浓度(MIC)的测定:
猴耳环95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物、阿米卡星(AMK)、复方新诺明(SXT)分别在MH肉汤培养基中进行一系列倍比稀释,每孔50μl,调节接种菌为1.0×106CFU/ml,每孔50μl菌液。35℃培养;24小时,无沉淀出现的最低抗菌药物的浓度为其最低抑菌浓度(MIC)。
2)最低杀菌浓度(MBC)的测定:
采用平板涂布计数法,从1)项无菌生长的孔中吸取50ul菌悬液至血平板上,均匀涂布,35℃培养24小时,菌落计数,使最初的实验活菌数减少99.9%或以上所需要的最低抗菌药物的浓度为其最低杀菌浓度(MBC)。
通过测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),并对数据进行统计得出MIC50、MIC90、MBC50、MBC90,来评价药物抗产ESBL大肠杆菌的作用。
3)棋盘稀释法:
棋盘稀释法在96孔无菌培养板中进行,将猴耳环95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物及阿米卡星(AMK)、复方新诺明(SXT)分别在MH肉汤培养基中倍比稀释成系列浓度,以两药各自1/4MIC到4MIC分别进行联合,每孔A药B药各加25μL,调整菌悬液的浓度为1.0×106CFU/ml,每孔接种50μL菌液,35℃孵育24h后观察A药B药联合后对产ESBLs大肠杆菌的最低抑菌浓度(MIC)。
FIC指数的计算:通过计算部分抑菌指数(FIC)来评价猴耳环95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物与抗生素联合抗菌的相互作用,FIC≤0.5为协同作用,0.5﹤FIC≤1为相加作用,1﹤FIC≤2为无关作用,FIC﹥2为拮抗作用;并根据无菌生长孔找出猴耳环95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物和抗生素的最佳浓度配比,最终评价猴耳环95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物增强抗生素效力的作用。
2.实验结果
猴耳环95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物及两种抗生素(阿米卡星、复方新诺明)对产ESBL大肠杆菌的体外抑菌试验结果见表28。
猴耳环95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物对产ESBLs大肠杆菌的体外杀菌试验结果见表29。
经过统计分析,猴耳环95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物及两种抗生素对产ESBL大肠杆菌的体外抑菌和杀菌的MIC50、MIC90见表30。
经过统计分析,猴耳环提取物对产ESBL大肠杆菌的杀菌的MBC50、MBC90见表31。
猴耳环95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物与两种抗生素的联合药敏试验的FIC值及FIC值的分布统计结果见表32、表33。
猴耳环95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物对两种抗生素的增敏作用及联用后其MIC50、MIC90见表34-36。
表28
表29
表30
表31
表32
表33
表34
表35
表36
实验结果表明猴耳环95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物单用对产ESBL大肠杆菌的MIC50为1600μg/ml,MIC90为1600μg/ml,MBC50为3200μg/ml,MBC90为3200μg/ml;
对20株产ESBL大肠杆菌,猴耳环95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物与阿米卡星联用的FIC均≤2表明两药无拮抗作用,其中有50%FIC值≤0.5呈协同作用;猴耳环95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物在小于等于1/2MIC时使阿米卡星MIC50从单用的16μg/ml降至4μg/ml,降低了75%;MIC90从单用64μg/ml降至16μg/ml,降低75%;
猴耳环95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物与复方新诺明联用对20株产ESBL大肠杆菌FIC均≤2表明两药两药无拮抗作用,其中20%FIC值≤0.5呈协同作用。猴耳环95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物在小于等于单用MIC时使复方新诺明MIC50和MIC90均从单用的2432/128μg/ml降至19/1μg/ml,降低了99.3%。

Claims (4)

1.猴耳环提取物在制备抗生素抗产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌增敏药物中的应用,所述的抗生素是阿米卡星或复方新诺明。
2.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述的猴耳环提取物由以下方法制备:猴耳环粗粉用水或乙醇水溶液提取,所得的提取液再用乙酸乙酯萃取,所得的萃取物即为目标产品。
3.如权利要求2所述的应用,其特征在于,所述的乙醇水溶液是按体积比计,浓度为10%-95%的乙醇水溶液。
4.如权利要求3所述的应用,其特征在于,所述的乙醇水溶液是按体积比计,浓度为60%的乙醇水溶液。
CN201610308718.6A 2016-05-10 2016-05-10 猴耳环提取物在制备抗产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌药物中的应用 Active CN105998153B (zh)

Priority Applications (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610308718.6A CN105998153B (zh) 2016-05-10 2016-05-10 猴耳环提取物在制备抗产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌药物中的应用
PCT/CN2017/071671 WO2017193635A1 (zh) 2016-05-10 2017-01-19 猴耳环提取物在制备抗菌药物中的应用
EP17795261.1A EP3456335B1 (en) 2016-05-10 2017-01-19 Pithecellobium clypearia benth extract and application for preparing anti-microbial agent
US15/920,480 US11154582B2 (en) 2016-05-10 2018-03-14 Method of chinese herbal medicine extract used for treating multiple diseases caused by drug resistant bacteria infection
US17/129,853 US11491198B2 (en) 2016-05-10 2020-12-21 Method of chinese herbal medicine extract used for treating multiple diseases caused by drug resistant bacteria infection
US17/129,901 US20210106641A1 (en) 2016-05-10 2020-12-21 Method of chinese herbal medicine extract used for treating multiple diseases caused by drug resistant bacteria infection
US17/129,885 US20210106640A1 (en) 2016-05-10 2020-12-21 Method of chinese herbal medicine extract used for treating multiple diseases caused by drug resistant bacteria infection
US17/494,850 US11654174B2 (en) 2016-05-10 2021-10-06 Method of chinese herbal medicine extract used for treating multiple diseases caused by drug resistant bacteria infection
US17/494,858 US11793849B2 (en) 2016-05-10 2021-10-06 Method of Chinese herbal medicine extract used for treating multiple diseases caused by drug resistant bacteria infection

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610308718.6A CN105998153B (zh) 2016-05-10 2016-05-10 猴耳环提取物在制备抗产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌药物中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105998153A CN105998153A (zh) 2016-10-12
CN105998153B true CN105998153B (zh) 2019-09-17

Family

ID=57099924

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610308718.6A Active CN105998153B (zh) 2016-05-10 2016-05-10 猴耳环提取物在制备抗产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌药物中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105998153B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3456335B1 (en) * 2016-05-10 2020-10-14 Sun Yat-Sen University Pithecellobium clypearia benth extract and application for preparing anti-microbial agent
CN107812033A (zh) * 2017-12-07 2018-03-20 成都乾坤动物药业股份有限公司 一种治疗宠物消化道疾病的中药咀嚼片及其制备方法和用途
CN115887517A (zh) * 2023-02-20 2023-04-04 云南中医药大学 臭灵丹提取物在抗产超广谱β-内酰胺酶耐药菌中的应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1565455A (zh) * 2003-07-04 2005-01-19 成都博瑞医药科技开发有限公司 治疗产超广谱β-内酰胺酶细菌感染用的抗菌素组合物
CN1795888A (zh) * 2004-12-29 2006-07-05 广州莱泰制药有限公司 猴耳环提取物用于制备抗过敏药物、食品及化妆品的应用
CN101032547A (zh) * 2006-03-07 2007-09-12 广东奇方药业有限公司 一种抗炎抗病毒的药物组合物
CN103385912A (zh) * 2013-07-24 2013-11-13 中山大学 猴耳环提取物及其在制备抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌药物中的应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1565455A (zh) * 2003-07-04 2005-01-19 成都博瑞医药科技开发有限公司 治疗产超广谱β-内酰胺酶细菌感染用的抗菌素组合物
CN1795888A (zh) * 2004-12-29 2006-07-05 广州莱泰制药有限公司 猴耳环提取物用于制备抗过敏药物、食品及化妆品的应用
CN101032547A (zh) * 2006-03-07 2007-09-12 广东奇方药业有限公司 一种抗炎抗病毒的药物组合物
CN103385912A (zh) * 2013-07-24 2013-11-13 中山大学 猴耳环提取物及其在制备抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌药物中的应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"滇产中草药体外抗产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的筛选研究";夏金尧;《西南国防医药》;20090731;第19卷(第7期);第664-666页

Also Published As

Publication number Publication date
CN105998153A (zh) 2016-10-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105963339B (zh) 猴耳环提取物在制备抗多重耐药铜绿假单胞菌药物中的应用
CN103385912B (zh) 猴耳环提取物及其在制备抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌药物中的应用
CN105816511B (zh) 猴耳环提取物在制备抗多重耐药鲍曼不动杆菌药物中的应用
CN105998153B (zh) 猴耳环提取物在制备抗产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌药物中的应用
CN101390869B (zh) 高纯度连翘酯苷在制备抑菌、抗病毒药物中的应用
Hindi et al. Antibacterial activity of the aquatic extractof fresh, dry powder ginger, apple vinegar extract of fresh ginger and crud oil of ginger (zingiberofficinale) against different types of bacteria in Hilla City, Iraq
CN111407817A (zh) 一种预防呼吸道感染病原微生物的中药组合物及其制备方法
Kariuki et al. Antibacterial activity of five medicinal plant extracts used by the Maasai people of Kenya
CN104887843B (zh) 用于防治鱼类烂鳃性疾病的中药药物组合物及其制备方法
Arekemase et al. Assessment of Bitter leaf (Vernonia amygdalina) on some selected pathogenic microorganisms from University of Ilorin Teaching Hospital
CN105920082A (zh) 猴耳环提取物在制备抗产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌药物中的应用
CN113350440B (zh) 一种中药组合物在制备抗菌药物中的应用
CN103919929A (zh) 一种用于抑制大菱鲆迟缓爱德华氏菌病的中药组合物
CN110300616A (zh) 用于治疗泌尿生殖器官的病症的组合物
CN104721337B (zh) 一种预防和治疗鸡大肠杆菌病的中药组合物及其制备方法和应用
CN103720773A (zh) 鲤鱼养殖专用除菌剂
Sundaramurthi et al. Effect of Tulsi (Ocimum sanctum) as a disinfectant for water treatment
CN105168375B (zh) 细果角茴香提取物在制备抗菌药物中的应用
Abdulridha et al. Antidiarrheal effect of Capparis spinosa fruits extract
CN103040897B (zh) 清开灵活性组分板蓝根提取物在制备抗多重耐药菌药物中的应用
Singh et al. Screening of potential antimicrobial activity of Indian medicinal plant of different solvent extract: Tinospora cordifolia and Hymenocallis littoralis
Tamilselvi et al. Studies on estimation of berberine and antimicrobial activity of different extracts of Berberis aristata DC
Vaidya et al. Antimicrobial activity of Costus speciosus (J. Koieng) Sm
Awe et al. A comparative study of the antibacterial activity of Piliostigma reticulatum bark extract with some antibiotics
CN110251538A (zh) 瑶药石油菜提取物在制备治疗克雷伯杆菌感染引起的肺炎药物中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20201020

Address after: No.48 fotian North Road, jiufo street, Huangpu District, Guangzhou City, Guangdong Province

Patentee after: Guangzhou Baiyunshan Huacheng Pharmaceutical Co., Ltd

Address before: 510275, No. 135 West Xingang Road, Guangzhou, Guangdong, Guangzhou, Haizhuqu District

Patentee before: SUN YAT-SEN University

TR01 Transfer of patent right