CN105963343B - 一种复方党参总皂苷免疫多糖纳米乳组合物及其制备方法 - Google Patents
一种复方党参总皂苷免疫多糖纳米乳组合物及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种复方党参总皂苷免疫多糖纳米乳组合物及其制备方法。本发明纳米乳组合物是一种水包油型纳米乳,粒径介于1~100nm,其成分包含三种中药活性成分(党参总皂苷、茯苓多糖、甘草多糖)、表面活性剂、助表面活性剂、油相和蒸馏水。本发明纳米乳制备方法简单易行,设备易控制,产品质量易于控制;液滴粒径小,能提高药物的溶解性和稳定性,能提高免疫低下小鼠脾淋巴细胞增殖活性。本发明纳米乳组合物能显著提高三种中药活性成分的免疫调节活性,具有开发免疫增强剂的潜力,从而促进中药资源及其活性成分的开发利用。
Description
技术领域
本发明属于医药领域,涉及一种复方党参总皂苷免疫多糖纳米乳组合物,特别涉及含有中药活性成分党参总皂苷、甘草多糖、茯苓多糖的纳米乳免疫增强剂。
背景技术
中药具有资源丰富、副作用小、无药物残留等优点,成为免疫增强剂研究的热点。党参为传统补益药,可以增强体质,提高人体免疫力,具有抗衰老、抗氧化、抗缺氧、抗疲劳、抗肿瘤等功能。党参总皂苷作为其主要活性成分之一,有很好的免疫调节活性:能作用于自然杀伤细胞和巨噬细胞,增强机体的非特异性免疫;能增强T、B淋巴细胞活性,促进细胞免疫和体液免疫的特异性免疫。
甘草为常用的传统中药,近年来,对其有效成分的研究成为开发新药研究的热点,甘草多糖就是从中提取的一类吡喃多糖,有多种药理活性:提高免疫力、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、抗炎、抑菌作用等。
茯苓是传统中药中“药食同源”的,茯苓多糖作为其主要活性成分,能够控制细胞生长分化,具有很强的提高免疫力、降糖降脂、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化衰老等生物活性,在国际上被称为“生物反应调节剂”,现已被开发成多种药物和功能性食品的添加剂。
纳米乳作为药物载体有一些优势:将药物包埋于液滴中,减少药物和外界作用,提高药物稳定性;纳米小液滴的结构和成分可以同时增溶脂溶性和(或者)水溶性的药物,改善不同药物溶解性;液滴小于100nm,分散性好,有利于促进药物的吸收,提高生物利用度。
虽然党参总皂苷和茯苓多糖有很好的免疫增强作用,但它们的不足之处在于:党参总皂苷和茯苓多糖中含有多种单体,单体的溶解性可能有一定的差异,如何改善它们的溶解性是需要解决的问题。另外,市售的党参、甘草和茯苓制剂主要是传统的饮片、口服液、中药汤剂。在中药免疫调节研究方面,以单味药或其所含有的单体成分研究居多,而中药复方的免疫调节作用方面的研究较少。但复方是中医用药的主要形式,与单味药和其单体成分相比,中药复方具有药效协同互补的优势。
因此,可以用纳米乳作药物载体,研制一种含有党参总皂苷、甘草多糖和茯苓多糖的纳米乳组合物,促进三种中药资源的利用及其活性成分的研究开发。
发明内容
针对上述现有技术中存在的问题与不足,本发明的目的在于提供一种复方党参总皂苷免疫多糖纳米乳组合物,用作免疫增强剂。本发明的另一目的在于提供上述纳米乳组合物的制备方法。
实现上述发明目的技术方案是一种复方党参总皂苷免疫多糖纳米乳组合物,该制剂是一种水包油纳米乳,粒径介于1~100nm,由下述重量百分比的原料组成:党参总皂苷0.10%~5.50%、茯苓多糖0.10%~5.50%、甘草多糖0.10%~5.50%、表面活性剂20.00%~38.00%、助表面活性剂1.00%~14.00%、油相0.50%~12.00%,余量为蒸馏水,上述原料的总质量比为100%。
本发明复方党参总皂苷免疫多糖纳米乳组合物的优选配比为:党参总皂苷1.00%~4.50%、茯苓多糖1.00%~4.50%、甘草多糖1.00%~4.50%、表面活性剂25.00%~32.00%、助表面活性剂2.00%~10.00%、油相4.00%~8.00%,余量为蒸馏水,上述原料的总质量比为100%。
本发明所述的党参总皂苷是通过超声法提取、大孔吸附树脂分离纯化所得,其含量为85.70%。
本发明所述的茯苓多糖是通过超声法提取、大孔吸附树脂纯化所得,其含量为90.84%。
本发明所述的甘草多糖是通过超声法提取、柱层析纯化所得,其含量为90.78%。
本发明所述的表面活性剂是吐温-80、吐温-60、聚氧乙烯醚(40)氢化蓖麻油、蓖麻油聚氧乙烯醚40、蓖麻油聚氧乙烯醚35中的一种。
本发明所述的助表面活性剂是聚乙二醇200、聚乙二醇400、甘油、乙醇中的一种。
本发明所述的油相是肉豆蔻酸异丙酯、橄榄油、大豆油、菜籽油、棕榈油中的一种。
本发明的另一目的是提供上述复方党参总皂苷免疫多糖纳米乳组合物的制备方法,包括以下步骤:
1)称取党参总皂苷、茯苓多糖、甘草多糖、表面活性剂、助表面活性剂、油和蒸馏水,备用;
2)25℃条件下,将助表面活性剂加入到表面活性剂中,得到混合表面活性剂;将党参总皂苷和茯苓多糖加入到混合表面活性剂中,然后加入油相,搅拌混匀,所得即为混合油相;
3)25℃条件下,将甘草多糖溶于蒸馏水中,搅拌使其溶解,所得即为水相;
4)25℃条件下,将水相缓慢滴加到混合油相中,滴加的同时不断搅拌,然后通过纳米乳化机,即得复方党参总皂苷免疫多糖纳米乳组合物。
本发明复方党参总皂苷免疫多糖纳米乳组合物的组成原理:
1)党参总皂苷、茯苓多糖和甘草多糖都有免疫调节作用,能作用于巨噬细胞、淋巴细胞,调剂特异性免疫和非特异性免疫功能。
2)皂苷由皂苷元与糖构成,多糖是单糖通过糖苷键形成的。
3)传统的“四君子汤”由党参(或人参)、茯苓、甘草和白术四种中药组成,对机体免疫***具有多方面的作用。茯苓被称为“四时神药”,将它与各种药物配伍,不分四季,不管寒、温、风、湿诸疾,都能发挥其独特功效。甘草素有“十方九草”之称,作为单味药或复方组分在临床上广泛应用。
4)党参总皂苷溶解性不好,可以利用纳米乳增溶作用,使其存在于纳米乳液滴中;甘草多糖溶于水,可以存在于纳米乳液滴外,这样的组合可以使纳米乳液滴内外都有药物。
与现有技术相比,本发明复方党参总皂苷免疫多糖纳米乳组合物具有以下优点:
1)目前,有关三种中药主要活性成分党参总皂苷、甘草多糖和茯苓多糖相关制剂的开发研究较少。本发明利用纳米乳的结构特点,将三种活性成分巧妙地融入到纳米乳中,制备了一种复方制剂,尽可能发挥药效协同互补的优势。
2)本发明纳米乳组合物粒径小于100nm,透明好、稳定性高、粘度小、流动性好,可以将药物富集于纳米液滴中,改善药物溶解性,促进药物吸收,提高药物生物利用度。
3)本发明制备方法简单易行,设备易于控制,产品可以通过过滤、紫外或高温等进行灭菌,质量易于控制。,可以用于口服或注射给药。
附图说明
图1复方党参总皂苷免疫多糖纳米乳组合物透射电镜照片。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明做进一步说明。
实施例1:
1)称取:党参总皂苷5.50g、茯苓多糖5.50g、甘草多糖5.50g、聚氧乙烯醚(40)氢化蓖麻油32.00g、聚乙二醇400 3.50g、肉豆蔻酸异丙酯8.00g、蒸馏水40.00g,备用;
2)25℃下,将助表面活性剂聚乙二醇400加入到表面活性剂聚氧乙烯醚(40)氢化蓖麻油中,得到混合表面活性剂;将党参总皂苷和茯苓多糖加入到混合表面活性剂中,然后加入油相肉豆蔻酸异丙酯,搅拌混匀,所得即为混合油相;
3)25℃下,将甘草多糖溶于蒸馏水中,搅拌使其溶解,所得即为水相;
4)25℃下,将水相缓慢滴加到混合油相中,滴加的同时不断搅拌,然后通过纳米乳化机,即得复方党参总皂苷免疫多糖纳米乳组合物。
实施例2
上述原料的总质量比为100%,其具体制备方法同实施例1。
实施例3
上述原料的总质量比为100%,其具体制备方法同实施例1。
实施例4
上述原料的总质量比为100%,其具体制备方法同实施例1。
实施例5
上述原料的总质量比为100%,其具体制备方法同实施例1。
实施例6
上述原料的总质量比为100%,其具体制备方法同实施例1。
实施例7
上述原料的总质量比为100%,其具体制备方法同实施例1。
实施例8
试验例1:形态观察
复方党参总皂苷免疫多糖纳米乳组合物用蒸馏水稀释后,滴在覆有支持膜的铜网上,静置10min,再滴加3%的磷钨酸溶液于铜网上负染5min,自然挥干,透射电子显微镜观察纳米乳形态,见附图1。图中近似圆形的黑点即为复方党参总皂苷免疫多糖纳米乳组合物液滴,粒径小于100nm,符合纳米乳要求。
试验例2:加速稳定性试验
参照《中国药典》方法进行。三批次复方党参总皂苷免疫多糖纳米乳组合物分别密封于棕色玻璃瓶内,在(30±2)℃、相对湿度(60±5)%条件下放置6个月,分别于0、1、2、3和6个月末取样,指标检测结果见表1。三批次样品放置6个月,其外观均保持透明,没有发生分层、浑浊、絮凝和药物析出现象,稳定性好。
表1 加速试验结果
试验例3复方党参总皂苷免疫多糖纳米乳组合物对免疫抑制小鼠免疫增强作用的研究
小鼠分为正常对照组、模型对照组、空白纳米乳组(空白纳米乳)、党参总皂苷纳米乳组(党参总皂苷纳米乳150mg/kg)、茯苓多糖纳米乳组(茯苓多糖纳米乳150mg/kg)、甘草多糖纳米乳组(甘草多糖纳米乳150mg/kg)、复方党参总皂苷免疫多糖溶液组(以党参总皂苷剂量计,剂量为150mg/kg。溶液中党参总皂苷、茯苓多糖和甘草多糖质量比为1︰1︰1)、复方党参总皂苷免疫多糖纳米乳组合物高中低剂量组(以党参总皂苷剂量计,50、100、150mg/kg)。
给药前,除了正常对照组(注射等量生理盐水)外,其余各组腹腔注射环磷酰胺50mg/kg,连续3天,造成小鼠免疫功能低下。第4天开始灌胃给药,灌胃量为20mL/kg,连续15天,正常对照组和模型对照组均灌胃蒸馏水。
末次给药12h后,取小鼠脾脏,制成5×106个/mL脾细胞悬液。于96孔培养板中每孔加入100μL脾细胞悬液,然后每孔再分别加入含ConA(终浓度5μg/mL)或者LPS(终浓度为10μg/mL)的培养液,每孔总体积为200μL,不足者用RPMI-1640培养液补至200μL。同时设阴性对照组(细胞和RPMI-1640培养液)和空白对照组(RPMI-1640培养液)。将细胞于37℃ 5%CO2培养箱中培养44h后,掺入MTT,然后继续培养4h后,酶标仪于490nm测其OD值,计算增殖刺激指数SI。结果见表2。
表2 复方党参总皂苷免疫多糖纳米乳组合物对免疫抑制小鼠脾淋巴细胞增殖活性的影响(n=10,)
注:同列相同字母表示差异显著(P<0.05)。
与模型对照组比较,空白纳米乳组ConA和LPS诱导的SI值均变化不显著,表明空白纳米乳对脾淋巴细胞的增殖活性无明显影响。复方党参总皂苷免疫多糖纳米乳组合物高剂量组ConA和LPS诱导SI值均显著高于复方党参总皂苷免疫多糖溶液组、党参总皂苷纳米乳组、茯苓多糖纳米乳组和甘草多糖纳米乳组,表明党参总皂苷、茯苓多糖和甘草多糖具有协同作用,且纳米乳能提高这三种活性成分的免疫调节功效。
Claims (3)
1.一种复方党参总皂苷免疫多糖纳米乳组合物,其特征在于,该纳米乳的粒径在1~100nm之间,由下述重量百分比的原料制成:
余量为蒸馏水,上述原料的总质量比为100%;
所述的党参总皂苷是通过超声法提取、大孔吸附树脂分离纯化所得,其含量为85.70%;
所述的茯苓多糖是通过超声法提取、大孔吸附树脂纯化所得,其含量为90.84%;
所述的甘草多糖是通过超声法提取、柱层析纯化所得,其含量为90.78%;
所述的表面活性剂是吐温-80、吐温-60、氢化蓖麻油聚氧乙烯醚40、蓖麻油聚氧乙烯醚40、蓖麻油聚氧乙烯醚35中的一种;
所述的助表面活性剂是聚乙二醇200、聚乙二醇400、甘油、乙醇中的一种;
所述的油相是肉豆蔻酸异丙酯、橄榄油、大豆油、菜籽油、棕榈油中的一种。
2.根据权利要求1所述的复方党参总皂苷免疫多糖纳米乳组合物,其特征在于,由下述重量百分比的原料制成:
余量为蒸馏水,上述原料的总质量比为100%。
3.权利要求1所述的复方党参总皂苷免疫多糖纳米乳组合物的制备方法,其特征在于,包括下列步骤:
1)称取党参总皂苷、茯苓多糖、甘草多糖、表面活性剂、助表面活性剂、油和蒸馏水,备用;
2)25℃条件下,将助表面活性剂加入到表面活性剂中,得到混合表面活性剂;将党参总皂苷和茯苓多糖加入到混合表面活性剂中,然后加入油相,搅拌混匀,所得即为混合油相;
3)25℃条件下,将甘草多糖溶于蒸馏水中,搅拌使其溶解,所得即为水相;
4)25℃条件下,将水相缓慢滴加到混合油相中,滴加的同时不断搅拌,然后通过纳米乳化机,即得复方党参总皂苷免疫多糖纳米乳组合物。
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |