CN105939722A - Tau肽，抗Tau抗体，及其使用方法 - Google Patents

Tau肽，抗Tau抗体，及其使用方法 Download PDF

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Abstract

提供了分离的Tau肽和包含该肽的组合物。还提供了对分离的Tau肽特异性的抗体。还提供了在诊断和治疗中使用分离的Tau肽，包括使用包含分离的Tau肽的药物组合物在个体中刺激针对Tau肽的免疫应答的方法，及在包括Tau病在内的病症的检测，诊断，和治疗中使用抗体的方法。

Description

Tau肽，抗Tau抗体，及其使用方法
作为文本文件提供的序列表的援引加入
随此作为文本文件提供序列表，“IPRN-759WO SeqList_ST25.txt”，创建于2014年2月14日且具有50KB的大小。该文本文件的内容通过援引完整收入本文。
导言
微管相关蛋白Tau在中枢神经***中是丰富的，而且主要由神经元生成。Tau的主要功能是稳定微管。成年人脑中存在六种Tau同等型；Tau同等型是单一基因的可变剪接的产物。
Tau病是源自脑中所谓的神经纤维缠结(NFT)中Tau蛋白的病理性聚集的一类神经变性性疾病。Tau病的一些例子包括额颞痴呆(FTD)，阿尔茨海默氏病，进行性核上性麻痹，皮质基底变性，和额颞叶变性。
本领域需要检测和治疗Tau病的方法及适合在此类方法中使用的试剂。
概述
本公开文本提供分离的Tau肽，和包含该肽的组合物。本公开文本提供对分离的Tau肽特异性的抗体。该抗体可用于诊断和治疗方法，也提供诊断和治疗方法。
特征
本公开文本提供一种药物组合物，其包含：a)分离的Tau肽，其中该Tau肽包含与SEQ ID NO:1-3任一中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约175个氨基酸的长度；和b)药学可接受赋形剂。
本公开文本提供一种药物组合物，其包含：a)分离的Tau肽，其中该Tau肽包含与SEQ ID NO:4中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约150个氨基酸的长度；和b)药学可接受赋形剂。
本公开文本提供一种药物组合物，其包含：a)分离的Tau肽，其中该Tau肽包含与SEQ ID NO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约121个氨基酸的长度；和b)药学可接受赋形剂。
本公开文本提供一种药物组合物，其包含：a)分离的Tau肽，其中该Tau肽包含与SEQ ID NO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约67个氨基酸的长度；和b)药学可接受赋形剂。
在上文或本文中别处描述的任何药物组合物中，该Tau肽可包含至少一个乙酰化氨基酸；例如，在一些情况中，该至少一个乙酰化氨基酸是乙酰化N端氨基酸。在任何这些药物组合物中，该Tau肽可包含磷酸化丝氨酸残基和/或磷酸化苏氨酸残基。在任何这些药物组合物中，该Tau肽可包含非肽等排连接和/或非天然氨基酸；例如，该非天然氨基酸可以是D-氨基酸。在任何这些药物组合物中，该Tau肽与相同氨基酸序列的细胞内Tau肽相比可以是低磷酸化的。在任何这些药物组合物中，该Tau肽可以是在固体支持物上固定化的；例如，该固体支持物可以是珠，测试条，或多孔板的孔。在任何这些药物组合物中，该Tau肽可包含可检测标记物；例如，该可检测标记物可以是化学发光剂，颗粒标记物，比色剂，能量转移剂，酶，荧光剂，对比剂，或放射性同位素。在任何这些药物组合物中，该组合物可进一步包括佐剂。该佐剂可以是对于在人中使用是合适的佐剂。在任何这些药物组合物中，该组合物可以是无菌的。在任何这些药物组合物中，该组合物可以是无内毒素的。
本公开文本提供可检测标记的分离的Tau肽，其中该Tau肽包含：a)与SEQ ID NO:1-3任一中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约175个氨基酸的长度；b)与SEQ ID NO:4中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约150个氨基酸的长度；c)与SEQ IDNO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约121个氨基酸的长度；或d)与SEQ ID NO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约67个氨基酸的长度。
本公开文本提供生成对Tau肽特异性的抗体的方法，该方法包括：a)对非人哺乳动物施用该肽，其中该肽包含：i)与SEQ ID NO:1-3任一中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约175个氨基酸的长度；ii)与SEQ ID NO:4中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约150个氨基酸的长度；iii)与SEQ ID NO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约121个氨基酸的长度；或iv)与SEQ ID NO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约67个氨基酸的长度，其中所述施用诱导针对该肽的抗体产生；并b)自该哺乳动物分离该抗体和/或生成该抗体的细胞。
本公开文本提供在个体中刺激针对Tau肽的免疫应答的方法，该方法包括对该个体施用包含eTau多肽的主题药物组合物(例如上文或本文中别处描述的药物组合物)，其中所述施用在该个体中刺激针对该肽的免疫应答。在一些情况中，该免疫应答包含对Tau特异性的抗体产生。在一些情况中，该免疫应答导致下述一项或多项中的变化：a)脑组织中游离细胞外Tau的量；b)间质液(ISF)中游离细胞外Tau的量；c)脑脊液(CSF)中游离细胞外Tau的量；d)Tau的神经元至神经元传播；e)神经元内Tau聚集体的量；f)小胶质和/或星形细胞活化的程度；g)磷酸化或高磷酸化Tau的量；h)ISF或CSF中总Tau或游离Tau的量；i)细胞内N端Tau片段的量；j)神经元活动过度；k)CSF中Aβ40和/或Aβ42的量；l)Aβ斑负荷；m)来自神经元的Aβ40和/或Aβ42分泌；n)淀粉样前体蛋白(APP)启动子活性；o)APP mRNA和/或蛋白质水平；p)β-分泌酶和/或γ-分泌酶的活性；q)Aβ诱导的信号传导途径的活化状态；r)细胞内总Tau或游离Tau的量；s)ISF或CSF中抗Tau抗体结合的Tau的量；和t)细胞内抗Tau抗体结合的Tau的量。
本公开文本提供包含编码Tau肽的核苷酸序列的重组表达载体，其中该Tau肽包含：a)与SEQ ID NO:1-3任一中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约175个氨基酸的长度；b)与SEQ ID NO:4中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约150个氨基酸的长度；c)与SEQ ID NO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约121个氨基酸的长度；或d)与SEQ ID NO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约67个氨基酸的长度。在一些情况中，该核苷酸序列是可操作连接至转录控制元件的。本公开文本提供遗传修饰的宿主细胞，其包含任何上文所列重组载体。
本公开文本提供分离的单克隆抗体，其特异性结合细胞外Tau(eTau)多肽内的表位。在一些情况中，该eTau多肽包含：a)与SEQ ID NO:1-3任一中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约175个氨基酸的长度；b)与SEQ ID NO:4中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约150个氨基酸的长度；c)与SEQ ID NO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约121个氨基酸的长度；或d)与SEQ ID NO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约67个氨基酸的长度。在一些情况中，该表位是线性表位。在一些情况中，该表位是在该肽的C端处的新表位。在一些情况中，该表位在该肽的C端区域中。在一些情况中，该抗体以不依赖于该表位内氨基酸磷酸化的方式特异性结合该表位。在一些情况中，该表位不包含磷酸化氨基酸。在一些情况中，该表位包含磷酸化氨基酸，硝酸化氨基酸，或磷酸化氨基酸和硝酸化氨基酸二者。在一些情况中，该抗体是人源化的。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架和人源化重链框架。
在上文或本文中别处描述的任何抗体中，该抗体可包含：a)VL区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:10，和SEQ ID NO:11的互补决定区(CDR)；和/或b)VH区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:12，SEQ IDNO:13，和SEQ ID NO:14的互补决定区(CDR)。在上文或本文中别处描述的任何抗体中，该抗体可包含：a)VL区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:17，SEQ ID NO:18，和SEQ ID NO:19的互补决定区(CDR)；和/或b)VH区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:21，和SEQ ID NO:22的互补决定区(CDR)。在上文或本文中别处描述的任何抗体中，该抗体可包含：a)VL区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:65，SEQ ID NO:66，和SEQ ID NO:67的互补决定区(CDR)；和/或b)VH区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:68，SEQ ID NO:69，和SEQ ID NO:70的互补决定区(CDR)。在上文或本文中别处描述的任何抗体中，该抗体可包含：a)VL区，其包含一个或多个选自SEQ IDNO:25，SEQ ID NO:26，和SEQ ID NO:27的互补决定区(CDR)；和/或b)VH区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:28，SEQ ID NO:29，和SEQ ID NO:30的互补决定区(CDR)。在上文或本文中别处描述的任何抗体中，该抗体可包含：a)VL区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:33，SEQ ID NO:34，和SEQID NO:35的互补决定区(CDR)；和/或b)VH区，其包含一个或多个选自SEQ IDNO:36，SEQ ID NO:37，和SEQ ID NO:38的互补决定区(CDR)。在上文或本文中别处描述的任何抗体中，该抗体可包含：a)VL区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:41，SEQ ID NO:42，和SEQ ID NO:43的互补决定区(CDR)；和/或b)VH区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:44，SEQ ID NO:45，和SEQID NO:46的互补决定区(CDR)。在上文或本文中别处描述的任何抗体中，该抗体可包含：a)VL区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:49，SEQ ID NO:50，和SEQ ID NO:51的互补决定区(CDR)；和/或b)VH区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:53，和SEQ ID NO:54的互补决定区(CDR)。在上文或本文中别处描述的任何抗体中，该抗体可包含：a)VL区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:57，SEQ ID NO:58，和SEQ ID NO:59的互补决定区(CDR)；和/或b)VH区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:60，SEQ IDNO:61，和SEQ ID NO:62的互补决定区(CDR)。
在主题抗Tau抗体的任何实施方案中，轻链区和重链区可以存在于分开的多肽中。在主题抗Tau抗体的任何实施方案中，轻链区和重链区可以存在于单一多肽中。在主题抗Tau抗体的任何实施方案中，该抗体可包含重链恒定区，且其中重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在主题抗Tau抗体的任何实施方案中，该抗体可以是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在主题抗Tau抗体的任何实施方案中，该抗体可包含共价连接的非肽合成聚合物；例如，该合成聚合物是聚(乙二醇)聚合物。在主题抗Tau抗体的任何实施方案中，该抗体可以以至少10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)的结合eTau多肽。在主题抗Tau抗体的任何实施方案中，该抗体可以是在不溶性支持物上固定化的。在主题抗Tau抗体的任何实施方案中，该抗体可包含可检测标记物；例如，该可检测标记物可以是化学发光剂，颗粒标记物，比色剂，能量转移剂，酶，荧光剂，对比剂，或放射性同位素。在主题抗Tau抗体的任何实施方案中，在一些情况中，该表位不在该Tau多肽的氨基酸15-24内，或氨基酸5-20内，或氨基酸2-18内，或氨基酸19-46内。
本公开文本提供药物配制剂，其包含：a)依照上文或本文中别处描述的任一实施方案的抗体；和b)药学可接受赋形剂。
本公开文本提供包含编码依照上文或本文中别处描述的任一实施方案的抗体的核苷酸序列的重组表达载体，其中该核苷酸序列是可操作连接至在真核细胞中有活性的转录控制元件的。本公开文本提供经该重组表达载体遗传修饰的体外宿主细胞。
本公开文本提供在个体中治疗特征在于组织或流体中异常水平Tau的Tau病的方法，该方法包括对该个体施用依照上文或本文中别处描述的任一实施方案的抗体，或依照上文或本文中别处描述的任一实施方案的药物组合物，其中所述施用治疗该Tau病。在一些情况中，该施用导致下述一项或多项中的变化：a)脑组织中游离细胞外Tau的量；b)间质液(ISF)中游离细胞外Tau的量；c)脑脊液(CSF)中游离细胞外Tau的量；d)Tau的神经元至神经元传播；e)神经元内Tau聚集体的量；f)小胶质和/或星形细胞活化的程度；g)磷酸化或高磷酸化Tau的量；h)ISF或CSF中总Tau或游离Tau的量；i)细胞内N端Tau片段的量；j)神经元活动过度；k)CSF中Aβ40和/或Aβ42的量；l)Aβ斑负荷；m)来自神经元的Aβ40和/或Aβ42分泌；n)淀粉样前体蛋白(APP)启动子活性；o)APP mRNA和/或蛋白质水平；p)β-分泌酶和/或γ-分泌酶的活性；q)Aβ诱导的信号传导途径的活化状态；r)细胞内总Tau或游离Tau的量；s)ISF或CSF中抗Tau抗体结合的Tau的量；和t)细胞内抗Tau抗体结合的Tau的量。在一些实施方案中，该施用导致下述一项或多项：a)该个体中认知功能的改善；b)该个体中认知功能衰退速率的降低；c)该个体中运动功能的改善；和d)该个体中运动功能衰退速率的降低。在一些情况中，该方法进一步包括施用至少一种别的治疗该Tau病的药剂。在一些情况中，施用抗Tau抗体是经由静脉内，鞘内，肌肉内，或皮下施用路径。在一些情况中，该抗Tau抗体是与推动穿越血脑屏障的药剂一起配制的。在一些情况中，该Tau病是阿尔茨海默氏病。
本公开文本提供在自个体获得的生物学样品中检测细胞外Tau(eTau)多肽的方法，该方法包括：a)使该样品与对该Tau肽特异性的抗体接触；并b)检测该抗体对该样品中存在的Tau肽的结合。在一些情况中，该eTau多肽包含：a)与SEQ ID NO:1-3任一中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约175个氨基酸的长度；b)与SEQ ID NO:4中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约150个氨基酸的长度；c)与SEQ ID NO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约121个氨基酸的长度；或d)与SEQID NO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约67个氨基酸的长度。在一些情况中，该个体怀疑具有Tau病，已经诊断为具有Tau病，或具有发生Tau病的遗传素因(predisposition)。在一些情况中，该Tau病是阿尔茨海默氏病。在一些情况中，该生物学样品是血液，血清，血浆，尿液，唾液，或脑脊液。
本公开文本提供在活的个体中体内检测细胞外Tau(eTau)多肽的方法，该方法包括对该个体施用依照上文描述的任一实施方案或本文中别处的抗体；并使用成像方法检测该抗体对该个体中脑组织中Tau肽的结合。
本公开文本提供试剂盒，其包含依照上文或本文中别处描述的任一实施方案的分离的抗体。在一些情况中，该试剂盒进一步包含用作阳性对照的试剂；例如，该阳性对照可以是纯化后的eTau多肽。在一些情况中，该抗体包含可检测标记物。在一些情况中，该抗体是在固体支持物上固定化的；例如，该固体支持物可以是测试条。
本公开文本提供用于在自个体获得的液体生物学样品中检测细胞外Tau(eTau)多肽的测定装置，该装置包含定义轴向流路程的模具，该模具包含在该流路程上游端接收液体样品的样品接收区。在一些情况中，该eTau多肽包含：a)与SEQ ID NO:1-3任一中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约175个氨基酸的长度；b)与SEQ ID NO:4中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约150个氨基酸的长度；c)与SEQ ID NO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约121个氨基酸的长度；或d)与SEQID NO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约67个氨基酸的长度。在一些情况中，该测定装置进一步包含：一个或多个位于该流路程内且在该样品接收区下游的测试区，每个所述一个或多个测试区包含对Tau病诊断性Tau肽特异性的抗体，其中该抗体是在每个所述测试区中固定化的，其中每种所述固定化抗体能够结合所述液体样品中存在的不同Tau肽，以形成固定化抗体/Tau肽复合物。在一些情况中，该测定装置进一步包含一个或多个位于该流路程内且在该样品接收区下游的对照区。在一些情况中，该测定装置是测试条。在一些情况中，该装置是蘸棍(dipstick)测定装置。在一些情况中，该液体样品是血液，血清，血浆，尿液，唾液，或脑脊液。
附图简述
图1A和1B描绘eTau片段的氨基酸序列，处于与胎Tau氨基酸序列的比对。
图2描绘全长Tau的氨基酸序列。
图3是Western印迹，显示来自多种细胞系的条件化培养基中的细胞外Tau(eTau)水平。
图4是Western印迹，显示来自皮质神经元的条件化培养基中的IPN002反应性eTau，该皮质神经元是自具有AD的患者衍生的。
图5A-C描绘：在来自诱导的多能干细胞衍生的皮质神经元(iPSC-CN)和人皮质细胞(HCC)的条件化培养基中，在来自P301L Tau小鼠的间质液(ISF)中，和在来自进行性核上性麻痹(PSP)和阿尔茨海默氏病(AD)患者的脑脊液(CSF)中检测Tau片段(图5A)；eTau分泌的时间过程(图5B)；和布雷菲尔德菌素A对eTau分泌的影响(图5C)。
图6描绘蛋白质印迹中的检测，显示来自可能有慢性创伤性脑病(CTE)的国家足球联盟(NFL)运动员的脑脊液(CSF)中存在的Tau片段的检测。
图7描绘蛋白质印迹，显示来自健康个体(H)，具有AD的个体，和具有额颞痴呆(FTD)的个体的iPSC-CN的条件化培养基(CM)中Tau片段的检测。
图8A-C描绘细胞外Tau(eTau)片段对皮质神经元活动过度的诱导。
图9A-E描绘皮质神经元对eTau的摄取。
图10描绘小鼠皮质神经元对重组eTau多肽的摄取。
图11描绘定向注射eTau入海马的影响。
图12描绘eTau Prep19的Western印迹分析。
图13描绘考马斯染色的下述各项的凝胶：i)重组生成的eTau 2-172(“eTau1批号1”)；ii)自iPSC分化的皮质神经元的条件化培养基中存在的eTau，该iPSC是自具有AD的患者衍生(“内源eTau Prep19”和“内源eTauPrep20”)；和iii)重组生成的eTau 2-166(“eTau1a批号11”；和“eTau1a批号15”)。
图14A-C描绘自iPSC分化的皮质神经元的条件化培养基中存在的eTau种类，该iPSC是自具有AD的患者衍生的。图14A描绘eTau 2-166的氨基酸序列(SEQ ID NO:3)，与Tau 0N3R(SEQ ID NO:73)相比。eTau 2-172和eTau 2-176的C端氨基酸以箭描绘。图14B描绘自iPSC分化的皮质神经元的条件化培养基中存在的eTau的质量层析图，该iPSC是自具有AD的患者衍生的(“内源eTauPrep19”)。图14C提供一张表，显示内源eTau Prep19中存在的eTau种类的预期和观察分子量。
图15描绘7299-M2或IPN002对重组全长Tau(rTau383)或eTau4的结合。
图16描绘用抗eTau抗体量化eTau片段的酶联免疫吸附测定法(ELISA)。
图17提供表6，其提供抗Tau单克隆抗体(单抗)7295-M6和7295-M8的VH和VL区的氨基酸序列，和互补决定区(CDR)的氨基酸序列。
图18提供表7，其提供抗Tau单抗7298-M1和7298-M2的VH和VL区的氨基酸序列，和CDR的氨基酸序列。
图19提供表8，其提供抗Tau单抗7299-M2，7299-M5，和7299-M9的VH和VL区的氨基酸序列，和CDR的氨基酸序列。
图20提供表8，其提供抗Tau单抗7297-2M1的VH和VL区的氨基酸序列，和CDR的氨基酸序列。
定义
在本文中可互换使用的术语“多肽”，“肽”，和“蛋白质”指任何长度的聚合物形式的氨基酸，可包括遗传编码的和非遗传编码的氨基酸，化学或生物化学修饰的或衍生的氨基酸，和具有经修饰的肽骨架的多肽。该术语包括融合蛋白，包括但不限于具有异源氨基酸序列的融合蛋白，具有异源和同源前导序列的融合物，有或无N端甲硫氨酸残基；带免疫学标签的蛋白质；诸如此类。
“分离的”指如下感兴趣肽，如果天然发生的话，在与它可在其中天然发生的环境不同的环境中。“分离的”意图包括在如下样品内的肽，该样品实质性富集该感兴趣肽和/或其中该感兴趣肽是部分或实质性纯化的。在肽不是天然发生的情况中，“分离的”指示该肽已经与它在其中通过合成或重组手段生成的环境分开。在一些情况中，分离的肽是纯化后的(“实质性纯的”)。
“实质性纯的”指示实体(例如Tau肽)占据组合物的总含量(例如组合物的总蛋白质)的超过约50％，或总蛋白质含量的超过约80％。例如，“实质性纯的”肽指如下组合物，其中至少80％，至少85％，至少90％或更多的总组合物是肽(例如95％，98％，99％，超过99％的总蛋白质)。该肽可占据组合物中总蛋白质的超过约90％，或超过约95％。
术语“核酸”和“多核苷酸”可互换使用，而且指任何长度的聚合物形式的核苷酸，或是脱氧核糖核苷酸或是核糖核苷酸，或其类似物。多核苷酸的非限制性例子包括线性和环状核酸，信使RNA(mRNA)，cDNA，重组多核苷酸，载体，探针，和引物。
“抗Tau抗体”指结合Tau肽，以小于约10-7，小于约10-8，小于约10-9，小于约10-10，小于约10-11，或小于约10-12或更小的KD特异性结合Tau多肽的抗体。
术语“抗体”和“免疫球蛋白”包括任何同种型的抗体或免疫球蛋白，抗体保留对抗原的特异性结合的片段，包括但不限于Fab，Fv，scFv，和Fd片段，嵌合抗体，人源化抗体，单链抗体，双特异性的抗体，和包含抗体的抗原结合部分和非抗体蛋白的融合蛋白。抗体可以是可检测标记的，例如用放射性同位素，生成可检测产物的酶，荧光蛋白，诸如此类。抗体可以进一步缀合至其它模块，诸如特异性结合对的成员，例如生物素(生物素-亲合素特异性结合对的成员)，诸如此类。抗体还可以结合至固体支持物，包括但不限于聚苯乙烯板或珠，诸如此类。该术语还涵盖Fab’，Fv，F(ab')2，和/或保留对抗原的特异性结合的其它抗体片段，和单克隆抗体。抗体可以是单价的或二价的。
如本文中使用的，术语“人源化免疫球蛋白”和“人源化抗体”指包含不同起源的免疫球蛋白的部分的免疫球蛋白，其中至少一部分包含人起源的含氨基酸序列。例如，人源化抗体可包含自具有必需特异性的非人起源(诸如小鼠)的免疫球蛋白衍生的部分，和自人起源的免疫球蛋白序列衍生的部分(例如嵌合免疫球蛋白)，通过常规技术(例如合成)化学连接到一起或使用遗传工程技术(例如，可以表达编码嵌合抗体的各蛋白部分的DNA以生成连续多肽链)作为连续多肽制备。人源化免疫球蛋白的另一个例子是含有一个或多个如下免疫球蛋白链的免疫球蛋白，该免疫球蛋白链包含自非人起源的抗体衍生的CDR和自人起源的轻和/或重链衍生的框架区(例如有或无框架变化的CDR嫁接抗体)。术语人源化免疫球蛋白还涵盖嵌合或CDR嫁接单链抗体。参见例如Cabilly et al.，美国专利No.4,816,567；Cabilly et al.，欧洲专利No.0,125,023B1；Boss et al.，美国专利No.4,816,397；Boss et al.，欧洲专利No.0,120,694B1；Neuberger，M.S.et al.，WO 86/01533；Neuberger，M.S.et al.，欧洲专利No.0,194,276B1；Winter，美国专利No.5,225,539；Winter，欧洲专利No.0,239,400B1；Padlan，E.A.et al.，欧洲专利申请No.0,519,596A1。关于单链抗体还参见Ladner et al.，美国专利No.4,946,778；Huston，美国专利No.5,476,786；和Bird，R.E.et al.，Science，242：423-426(1988))。
例如，可以使用合成和/或重组核酸制备编码期望人源化链的基因(例如cDNA)来生成人源化抗体。例如，可以使用PCR诱变方法改变编码人或人源化链的DNA序列诸如来自先前人源化可变区的DNA模板来构建编码人源化可变区的核酸(例如DNA)序列(参见例如Kamman，M.，et al.，Nucl.Acids Res.，17：5404(1989))；Sato，K.et al.，Cancer Research，53：851-856(1993)；Daugherty，B.L.et al.，Nucleic Acids Res.，19(9)：2471-2476(1991)；和Lewis，A.P.and J.S.Crowe，Gene，101：297-302(1991))。使用这些或其它合适方法，还可容易地生成变异体。例如，可以诱变克隆的可变区，并可以选择编码具有期望特异性的变异体的序列(例如来自噬菌体文库；参见例如Krebberet al.，美国专利No.5,514,548；Hoogenboom et al.，WO 93/06213，1993年4月1日公布))。
“抗体片段”包含完整抗体的部分，例如完整抗体的抗原结合区或可变区。抗体片段的例子包括Fab，Fab'，F(ab')2，和Fv片段；双抗体；线性抗体(Zapata et al.，Protein Eng.8(10)：1057-1062(1995))；单链抗体分子；和自抗体片段形成的多特异性抗体。木瓜蛋白酶消化抗体产生两个相同的抗原结合片段，称作“Fab”片段，每个具有一个抗原结合位点，和一个剩余“Fc”片段，名称反映易于结晶的能力。胃蛋白酶处理产生具有两个抗原结合位点且仍能够交联抗原的F(ab')2片段。
“Fv”是含有完整抗原识别和结合位点的最小抗体片段。这个区域由紧密，非共价联合的一个重链可变域和一个轻链可变域的二聚体组成。这是在这种构造中，每个可变域的三个CDR相互作用，在VH-VL二聚体的表面上定义抗原结合位点。总之，六个CDR赋予抗体以抗原结合特异性。然而，甚至一个可变域(或仅包含三个对抗原特异性的CDR的半个Fv)也具有识别和结合抗原的能力，尽管亲和力比完整结合位点要低。
“Fab”片段还含有轻链的恒定域和重链的第一恒定域(CH1)。Fab片段与Fab'片段的不同在于在重链CH1域的羧基端添加少数残基，包括一个或多个来自抗体铰链区的半胱氨酸。Fab'-SH是本文中对其中恒定域的半胱氨酸残基携带游离硫醇基团的Fab'的名称。F(ab')2抗体片段最初是作为成对Fab'片段生成的，其具有它们之间的铰链半胱氨酸。还知道抗体片段的其它化学偶联。
基于它们恒定域的氨基酸序列，可以将来自任何脊椎动物物种的抗体(免疫球蛋白)的“轻链”指派至两种明显不同的型之一，称作卡帕和拉姆达。根据它们重链恒定域的氨基酸序列，可以将免疫球蛋白指派至不同的类。有五大类免疫球蛋白：IgA，IgD，IgE，IgG，和IgM，而且这些中的数种可以进一步分成亚类(同种型)，例如IgG1，IgG2，IgG3，IgG4，IgA1，和IgA2。
“单链Fv”或“sFv”抗体片段包含抗体的VH和VL域，其中这些域存在于单一多肽链中。在一些实施方案中，Fv多肽进一步包含VH和VL域之间的多肽接头，其使得sFv能够形成抗原结合期望的结构。关于sFv的综述，参见Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，vol.113，Rosenburgand Moore eds.，Springer-Verlag，New York，pp.269-315(1994)。
术语“双抗体”指具有两个抗原结合位点的小抗体片段，该片段包含在相同多肽链中连接的一个重链可变域(VH)和一个轻链可变域(VL)(VH-VL)。通过使用太短以至于不容许相同链上的两个域之间配对的接头，迫使域与另一条链的互补域配对并创建两个抗原结合位点。双抗体更加全面地记载于例如EP404,097；WO 93/11161；和Hollinger et al.(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448。
如本文中使用的，术语“亲和力”指两个药剂(例如抗体和抗原)的可逆结合的平衡常数，而且表述为解离常数(Kd)。亲和力可以比抗体对无关氨基酸序列的亲和力大至少1倍，大至少2倍，大至少3倍，大至少4倍，大至少5倍，大至少6倍，大至少7倍，大至少8倍，大至少9倍，大至少10倍，大至少20倍，大至少30倍，大至少40倍，大至少50倍，大至少60倍，大至少70倍，大至少80倍，大至少90倍，大至少100倍，或大至少1000倍，或更多。抗体对靶蛋白的亲和力可以是例如约100纳摩尔(nM)至约0.1nM，约100nM至约1皮摩尔(pM)，或约100nM至约1飞摩尔(fM)或更多。如本文中使用的，术语“亲合力”指两个或更多个药剂的复合物在稀释后对解离的抗性。就抗体和/或抗原结合片段而言，术语“免疫反应性的”和“优先结合”在本文中可互换使用。
术语“结合”指由于例如共价，静电，疏水，和离子和/或氢键相互作用，包括诸如盐桥和水桥等相互作用，两个分子之间的直接联合。主题抗Tau抗体特异性结合Tau多肽内的表位。非特异性结合会指具有小于约10-7M的亲和力的结合，例如具有10-6M，10-5M，10-4M，等的亲和力的结合。
如本文中使用的，术语“CDR”或“互补决定区”旨在表示在重和轻链多肽二者的可变区内找到的非连续抗原结合位点。CDR已经记载于Kabat et al.，J.Biol.Chem.252:6609-6616(1977)；Kabat et al.，U.S.Dept.of Health andHuman Services，“Sequences of proteins of immunological interest”(1991)；Chothia et al.，J.Mol.Biol.196:901-917(1987)；和MacCallum et al.，J.Mol.Biol.262:732-745(1996)，其中当彼此比较时，该定义包括氨基酸残基的交叠或子集。无论如何，应用任一定义来指抗体或其嫁接抗体或变异体的CDR旨在该术语在本文中定义和使用的范围内。下文表1中作为比较列出了涵盖每一篇上文引用的参考文献定义的CDR的氨基酸残基。
表1：CDR定义
Kabat1 Chothia2 MacCallum3
VH CDR1 31-35 26-32 30-35
VH CDR2 50-65 53-55 47-58
VH CDR3 95-102 96-101 93-101
VL CDR1 24-34 26-32 30-36
VL CDR2 50-56 50-52 46-55
VL CDR3 89-97 91-96 89-96
1残基编号遵循Kabat et al.，见上文的命名法
2残基编号遵循Chothia et al.，见上文的命名法
3残基编号遵循MacCallum et al.，见上文的命名法
如本文中使用的，术语“框架”在提到抗体可变区使用时旨在表示抗体可变区内CDR区以外的所有氨基酸残基。可变区框架一般是长度为约100-120个氨基酸的不连续氨基酸序列，但是旨在只指CDR以外的那些氨基酸。如本文中使用的，术语“框架区”旨在表示框架中由CDR分开的每个域。
“分离的”抗体是已经鉴定且自它的天然环境的成分分出和/或回收的抗体。它天然环境的污染性成分是会干扰抗体的诊断或治疗用途的材料，而且可以包括酶，激素，和其它蛋白质或非蛋白质溶质。在一些实施方案中，抗体会纯化(1)至超过90％，超过95％，或超过98％，以抗体的重量计，如通过Lowry法测定的，例如超过99％，以重量计，(2)至足以通过使用转杯式测序仪获得至少15个残基的N端或内部氨基酸序列的程度，或(3)至同质，根据还原或非还原条件下的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，使用考马斯蓝或银染料。分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体，因为抗体的天然环境的至少一种成分不会存在。在一些情况中，分离的抗体会通过至少一个纯化步骤来制备。
“治疗”表示至少实现与折磨宿主的状况有关的症状的改善，其中改善指至少降低与所治疗的状况有关的参数(例如症状)的程度。因此，治疗包括状况或至少与之有关的症状减轻或消除的情况。如此，治疗包括：(i)阻止(即降低风险)临床症状发生，包括引起临床症状不发生，例如阻止疾病进展至有害的或其它方面不想要的状态；(ii)抑制(即阻滞)临床症状发展或进一步发展，例如减轻或完全抑制活动性疾病。
术语“有效量”或“治疗有效量”表示足以对所治疗的疾病状态提供治疗或在其它方面提供期望效果(例如诱导有效免疫应答，减轻Tau病的一种或多种病理特征，等)的剂量。精确剂量可根据多种因素而变化，诸如受试者依赖性变量(例如重量，年龄，等)，疾病，和所实施的治疗。
术语“个体”，“宿主”，“受试者”，和“患者”在本文中可互换使用，指哺乳动物，包括但不限于鼠类(例如大鼠，小鼠)，兔类，非人灵长类，人类，等。在一些实施方案中，个体是人。在一些实施方案中，个体是啮齿类(例如小鼠，大鼠，等)或兔类(例如家兔)。
如本文中使用的，术语“生物学样品”指含有直接自受试者(例如人患者，或人对照受试者)获得的物质的组合物。术语“生物学样品”涵盖生物学起源的液体样品，固体组织样品诸如活检标本或自其衍生的组织培养物或细胞及其后代。生物学样品的例子包括但不限于下述的样品：脑脊液(CSF)，间质液(ISF)，全血，血清，血浆，痰液，尿液，胸水，泪液，支气管肺泡灌洗液，唾液，粪便，毛发，和组织。该定义还包括在它们的获取后已经以任何方式操作的样品，诸如通过用试剂处理，溶解，或富集某些成分。术语“生物学样品”涵盖临床样品，而且还包括培养细胞，细胞上清液，细胞裂解物，血清，血浆，生物学流体，和组织样品。在一些情况中，生物学样品是液体样品。
如本文中使用的，术语“诱导的多能干细胞”(iPSC)指单独或与一种或多种重编程剂组合，通过重编程因子的被迫表达的任何组合自出生后体细胞衍生的多能干细胞。
如本文中使用的，术语“细胞重编程”指用于将一种细胞类型(例如成纤维细胞)的细胞转变成另一种细胞类型(例如神经元)的细胞的多种已知方法任一。此类方法包括“直接转变”方法，其中没有中间细胞类型步骤，将起始细胞类型是转变成期望细胞类型。细胞重编程还包括将起始细胞类型(例如成纤维细胞或白血球)转变成多能干细胞(称作“诱导的多能干细胞”；iPSC)，接着在体外定向分化变成感兴趣细胞类型，例如皮质神经元，运动神经元，或星形细胞。
在进一步描述本发明前，要理解，本发明不限于所描述的具体实施方案，因此，当然可以有变化。还要理解，本文中使用的术语仅为了描述具体实施方案的目的而并非意图是限制性的，因为本发明的范围仅会由所附权利要求书限制。
在提供数值范围的情况中，要理解，该范围的上限和下限之间的每个居间数值(至下限单位的十分之一，除非上下文另有明确叙述)和该叙述范围中的任何其它叙述或居间数值涵盖在本发明内。这些较小范围的上限和下限可以独立包括在较小的范围中，而且也涵盖在本发明内，服从该叙述范围中任何明确排除的限度。在该叙述范围包含一个或两个限度的情况中，排除那些包括的限度之任一或两者的范围也包括在本发明中。
除非另有定义，本文中使用的所有科技术语与本发明所属领域的普通技术人员的通常理解具有相同的意义。虽然与本文中描述的方法和材料相似或等同的任何方法和材料也可以在本发明的实施或测试中使用，但是现在描述了优选的方法和材料。通过援引将本文中提及的所有出版物收入本文以公开和描述与引用出版物相关的方法和/或材料。
必须注意，如本文中和所附权利要求书中使用的，单数形式“一个/种”和“所述/该”包括复数指示物，除非上下文另有明确规定。因此，例如，提及“一种Tau肽”包括多种此类肽，而提及“该组合物”包括提及一种或多种组合物及本领域技术人员已知的其等同方案，等等。进一步注意，权利要求书可以以排除任何任选要素的方式撰写。因此，对于结合权利要求要素叙述使用诸如“单独”，“仅”等排除式术语，或使用“否定”限制，此叙述意图充当在先基础。
领会的是，为了清楚起见而在分开的实施方案的背景中描述的本发明的某些特征也可以在单一的实施方案中组合提供。相反，为了简短起见而在单一的实施方案的背景中描述的本发明的多个特征也可以分开提供或在任何合适的亚组合中提供。本发明明确涵盖了属于本发明的实施方案的所有组合，并且其在本文中公开，就像每一个组合单独且明确公开一样。另外，本发明还明确涵盖各个实施方案及其要素的所有亚组合，并且其在本文中公开，就像每一个此类亚组合单独且明确在本文中公开一样。
提供本文中讨论的出版物，仅仅是因为它们在本申请的提交日之前公开。本文中的任何内容不应解释为承认本发明没有资格凭借发明在先而早于此类出版物。而且，所提供的出版日期可能不同于实际的出版日期，这可能需要独立确认。
详述
本公开文本提供分离的Tau肽，和包含该肽的组合物。本公开文本提供对分离的Tau肽特异性的抗体，以及包含该抗体的试剂盒和测定装置。该抗体可用于诊断和治疗方法，也提供诊断和治疗方法。
Tau肽
本公开文本提供分离的Tau肽，和包含该肽的组合物。在一些情况中，主题Tau肽是细胞外Tau(“eTau”)多肽。如本文中使用的，“细胞外Tau”(“eTau”)涵盖可以在脑脊液(CSF)或间质液(ISF)中检测到的任何Tau多肽。
(eTau1)
本公开文本的Tau肽(例如eTau多肽；例如eTau1多肽)可包含与图1A中所绘和SEQ ID NO:1中所列Tau肽氨基酸序列的约5个氨基酸至175个氨基酸的连续串(例如约5个氨基酸(aa)至约10个aa，约10个aa至约15个aa，约15个aa至约20个aa，约20个aa至约25个aa，约25个aa至约30个aa，约30个aa至约35个aa，约35个aa至约40个aa，约40个aa至约45个aa，约45个aa至约50个aa，约50个aa至约75个aa，约75个aa至约100个aa，约100个aa至约125个aa，约125个aa至约150个aa，或约150个aa至约175个aa的连续串)具有至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约98％，至少约99％，或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况中，N端丙氨酸是乙酰化的。
在一些情况中，例如主题Tau肽具有175个氨基酸的长度的情况，该Tau肽的C端氨基酸是赖氨酸，其可以称作“K176”，“176”指基于人胎Tau(图1A和1B中所绘SEQ ID NO:7)的编号。
主题Tau肽可具有约5个氨基酸至约175个氨基酸，例如约5个氨基酸(aa)至约10个aa，约10个aa至约15个aa，约15个aa至约20个aa，约20个aa至约25个aa，约25个aa至约30个aa，约30个aa至约35个aa，约35个aa至约40个aa，约40个aa至约45个aa，约45个aa至约50个aa，约50个aa至约75个aa，约75个aa至约100个aa，约100个aa至约125个aa，约125个aa至约150个aa，或约150个aa至约175个aa的长度。
本公开文本的Tau肽可包含与图1A中所绘和SEQ ID NO:2中所列Tau肽氨基酸序列的约5个氨基酸至171个氨基酸的连续串(例如约5个氨基酸(aa)至约10个aa，约10个aa至约15个aa，约15个aa至约20个aa，约20个aa至约25个aa，约25个aa至约30个aa，约30个aa至约35个aa，约35个aa至约40个aa，约40个aa至约45个aa，约45个aa至约50个aa，约50个aa至约75个aa，约75个aa至约100个aa，约100个aa至约125个aa，约125个aa至约150个aa，或约150个aa至约171个aa的连续串)具有至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约98％，至少约99％，或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况中，N端丙氨酸是乙酰化的。
在一些情况中，例如主题Tau肽具有171个氨基酸的长度的情况，该Tau肽的C端氨基酸是精氨酸，其可以称作“R172”，“172”指基于人胎Tau(图1A和1B中所绘SEQ ID NO:7)的编号。
主题Tau肽可具有约5个氨基酸至约171个氨基酸，例如约5个氨基酸(aa)至约10个aa，约10个aa至约15个aa，约15个aa至约20个aa，约20个aa至约25个aa，约25个aa至约30个aa，约30个aa至约35个aa，约35个aa至约40个aa，约40个aa至约45个aa，约45个aa至约50个aa，约50个aa至约75个aa，约75个aa至约100个aa，约100个aa至约125个aa，约125个aa至约150个aa，或约150个aa至约171个aa的长度。
(eTau2)
本公开文本的Tau肽(例如eTau多肽；例如eTau2多肽)可包含与图1A中所绘和SEQ ID NO:4中所列Tau肽氨基酸序列的约5个氨基酸至150个氨基酸的连续串(例如约5个氨基酸(aa)至约10个aa，约10个aa至约15个aa，约15个aa至约20个aa，约20个aa至约25个aa，约25个aa至约30个aa，约30个aa至约35个aa，约35个aa至约40个aa，约40个aa至约45个aa，约45个aa至约50个aa，约50个aa至约75个aa，约75个aa至约100个aa，约100个aa至约125个aa，或约125个aa至约150个aa的连续串)具有至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约98％，至少约99％，或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
在一些情况中，例如主题Tau肽具有150个氨基酸的长度的情况，该Tau肽的C端氨基酸是精氨酸，其可以称作“R151”，“151”指基于人胎Tau(图1A和1B中所绘SEQ ID NO:7)的编号。
主题Tau肽可具有约5个氨基酸至约150个氨基酸，例如约5个氨基酸(aa)至约10个aa，约10个aa至约15个aa，约15个aa至约20个aa，约20个aa至约25个aa，约25个aa至约30个aa，约30个aa至约35个aa，约35个aa至约40个aa，约40个aa至约45个aa，约45个aa至约50个aa，约50个aa至约75个aa，约75个aa至约100个aa，约100个aa至约125个aa，或约125个aa至约150个aa的长度。
(eTau3)
本公开文本的Tau肽(例如eTau多肽；例如eTau3多肽)可包含与图1A中所绘和SEQ ID NO:5中所列Tau肽氨基酸序列的约10个氨基酸至121个氨基酸的连续串(例如约10个氨基酸(aa)至约15个aa，约15个aa至约20个aa，约20个aa至约25个aa，约25个aa至约30个aa，约30个aa至约35个aa，约35个aa至约40个aa，约40个aa至约45个aa，约45个aa至约50个aa，约50个aa至约75个aa，约75个aa至约100个aa，或约100个aa至约121个aa的连续串)具有至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约98％，至少约99％，或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
在一些情况中，例如主题Tau肽具有121个氨基酸的长度的情况，该Tau肽的C端氨基酸是赖氨酸，其可以称作“K122”，“122”指基于人胎Tau(图1A和1B中所绘SEQ ID NO:7)的编号。
主题Tau肽可具有约5个氨基酸至约121个氨基酸，例如约5个氨基酸(aa)至约10个aa，约10个aa至约15个aa，约15个aa至约20个aa，约20个aa至约25个aa，约25个aa至约30个aa，约30个aa至约35个aa，约35个aa至约40个aa，约40个aa至约45个aa，约45个aa至约50个aa，约50个aa至约75个aa，约75个aa至约100个aa，或约100个aa至约121个aa的长度。
(eTau4)
本公开文本的Tau肽(例如eTau多肽；例如eTau4多肽)可包含与图1A中所绘和SEQ ID NO:6中所列Tau肽氨基酸序列的约10个氨基酸至67个氨基酸的连续串(例如约10个氨基酸(aa)至约15个aa，约15个aa至约20个aa，约20个aa至约25个aa，约25个aa至约30个aa，约30个aa至约35个aa，约35个aa至约40个aa，约40个aa至约45个aa，约45个aa至约50个aa，或约50个aa至约67个aa的连续串)具有至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约98％，至少约99％，或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
在一些情况中，例如主题Tau肽具有67个氨基酸的长度的情况，该Tau肽的C端氨基酸是精氨酸，其可以称作“R68”，“68”指基于人胎Tau(图1A和1B中所绘SEQ ID NO:7)的编号。
主题Tau肽可具有约5个氨基酸至约67个氨基酸，例如约5个氨基酸(aa)至约10个aa，约10个aa至约15个aa，约15个aa至约20个aa，约20个aa至约25个aa，约25个aa至约30个aa，约30个aa至约35个aa，约35个aa至约40个aa，约40个aa至约45个aa，约45个aa至约50个aa，或约50个aa至约67个aa的长度。
在一些情况中，本公开文本的Tau肽(例如细胞外Tau肽)包含一个或多个乙酰化氨基酸。在一些情况中，仅主题乙酰化Tau肽的N端氨基酸残基是乙酰化的。在一些情况中，仅主题乙酰化Tau肽的N端氨基酸残基是乙酰化的；且该Tau肽不包括任何其它氨基酸修饰(例如该肽不是磷酸化的)。在其它情况中，主题乙酰化Tau肽的N端氨基酸残基是乙酰化的；且该Tau肽包含一个或多个别的乙酰化氨基酸残基。在仍有其它情况中，仅主题乙酰化Tau肽的N端氨基酸残基是乙酰化的；且一个或多个氨基酸残基(N端氨基酸残基以外的)是磷酸化的。
例如，在一些情况中，主题乙酰化Tau肽的N端氨基酸残基是乙酰化的；且Thr-122(对应于胎Tau的Thr-123)是磷酸化的。在一些情况中，主题乙酰化Tau肽的N端氨基酸残基是乙酰化的；且Ser-143(对应于胎Tau的Ser-144)是磷酸化的。在仍有其它情况中，主题乙酰化Tau肽的N端氨基酸残基是乙酰化的；Thr-122(对应于胎Tau的Thr-123)是磷酸化的；且Ser-143(对应于胎Tau的Ser-144)是磷酸化的。
本公开文本的Tau肽相对于细胞内Tau可以是低磷酸化的；例如，该Tau肽可具有比具有相同氨基酸序列的细胞内Tau肽要少的磷酸化氨基酸。例如，在细胞内Tau肽可具有3或更多个磷酸化氨基酸残基的情况中，主题Tau肽可具有少于3个磷酸化氨基酸残基，例如2个磷酸化氨基酸残基，1个磷酸化氨基酸残基，或无磷酸化氨基酸残基。
在一些情况中，就氨基酸残基(例如没有翻译后修饰的残基)的序列而言同质的本公开文本的Tau肽的群体中，该群体中约2％至约100％可包括具有磷酸化侧链的氨基酸残基。例如，就氨基酸序列而言同质的本公开文本的Tau肽的群体中，约2％至约5％，约5％至约10％，约10％至约15％，约15％至约20％，约20％至约25％，约25％至约30％，约30％至约40％，约40％至约50％，约50％至约60％，约60％至约70％，约70％至约80％，约80％至约90％，或约90％至100％的Tau肽可包括一个，两个，三个，或超过三个磷酸化氨基酸残基(例如磷酸化丝氨酸；磷酸化苏氨酸)。
作为一个非限制性例子，在一些情况中，主题Tau肽包含乙酰化N端氨基酸(例如AlaAc)且可以包括或不包括一处或多处别的氨基酸修饰，例如对N端Ala以外的氨基酸的修饰。
主题Tau肽可相对于图1A中所绘SEQ ID NO:1-6任一中所列氨基酸序列包含1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，或超过10处氨基酸替代(例如保守氨基酸替代)。
“保守氨基酸替代”一般指下述小组内的氨基酸残基的替代：
1)L，I，M，V，F；
2)R，K；
3)F，Y，H，W，R；
4)G，A，T，S；
5)Q，N；和
6)D，E。
在主题Tau肽的背景中选择保守氨基酸替代从而保持该肽的生物学活性。此类表现可以通过用如下氨基酸替代来保持，该氨基酸的侧链具有与所替换的氨基酸的侧链相似的酸性，碱性，电荷，极性，或大小。关于替代，***，或删除的指导可基于不同变异蛋白或来自不同物种的蛋白的氨基酸序列的比对。例如，在完全保守的某些残基位置处可能不容许替代，删除或***，而在一种或多种残基不保守的其它位置处可容忍氨基酸变化。半保守的残基可容忍保持电荷，极性，和/或大小的变化。
可检测标记物
本公开文本的Tau肽可包括可检测标记物。合适的可检测标记物包括任何通过光谱学，光化学，生物化学，免疫化学，电学，光学或化学手段可检测的模块。合适的可检测标记物包括但不限于磁珠(例如DynabeadsTM)；荧光蛋白(例如绿色荧光蛋白，红色荧光蛋白，黄色荧光蛋白，诸如此类)；荧光染料(例如异硫氰酸荧光素，德克萨斯红，罗丹明或罗丹明衍生物(例如罗丹明B；TAMRA)，7-氨基-4-甲基-香豆素(AMC)，5-((2-氨基乙基)氨基)萘-1-磺酸(EDANS)，7-硝基苯-2-氧杂-1,3-二唑(NBD)，等)，荧光淬灭剂(例如Dabcyl，丹酰，2,4-二硝基苯酚，等)；对硝基苯胺；放射性标记物(例如3H，125I，35S，14C，14N，13C，15N，或32P)；酶(例如辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶，萤光素酶，和酶联免疫吸附测定法(ELISA)中常用的其它酶)；比色标记物，诸如胶态金或有色玻璃或塑料(例如聚苯乙烯，聚丙烯，胶乳，等)珠；诸如此类。
固体支持物
本公开文本的Tau肽可直接或经接头附着至固体支持物。合适的支持物是本领域公知的，而且特别包括商品化的柱材料，聚苯乙烯珠，胶乳珠，磁珠，胶体金属颗粒，玻璃和/或硅芯片和表面，硝酸纤维素条，尼龙膜，片，反应盘(例如多孔板)的孔，塑料管，等。固体支持物可包含多种物质任一，包括例如玻璃，聚苯乙烯，聚氯乙烯，聚丙烯，聚乙烯，聚碳酸酯，右旋糖苷，尼龙，直链淀粉，天然和修饰的纤维素，聚丙烯酰胺，琼脂糖，和磁石。用于将主题Tau肽固定化到固体支持物上的合适方法是公知的，而且包括但不限于离子，疏水，共价相互作用诸如此类。固体支持物可以是可溶性的或不溶性的，例如在水溶液中。在一些实施方案中，合适的固体支持物在水溶液中一般是不溶性的。
修饰
在一些情况中，本公开文本的Tau肽包含一处或多处修饰。例如，主题Tau肽可以是环化的。又例如，主题Tau肽可具有一处或多处氨基酸修饰。主题Tau肽可包括一个或多个D-氨基酸。
不改变一级序列的感兴趣修饰包括多肽的化学衍生化，例如乙酰化，或羧化。还包括糖基化的修饰，例如那些在它的合成和加工期间或在进一步加工步骤中通过修饰多肽的糖基化样式进行的；例如通过将多肽暴露于影响糖基化的酶，诸如哺乳动物糖基化或去糖基化酶。还涵盖具有磷酸化氨基酸残基(例如磷酸酪氨酸，磷酸丝氨酸，或磷酸苏氨酸)的肽。在一些情况中，主题肽包含一个或多个磷酸化氨基酸。在一些情况中，本公开文本的Tau肽包含磷酸苏氨酸残基和/或磷酸丝氨酸残基。
本公开文本还提供已经使用常规分子生物学技术和合成化学修饰以改善它们对蛋白水解降解的抗性或优化溶解特性或使得它们作为治疗剂更加合适的Tau肽。此类肽的类似物包括那些含有天然发生L-氨基酸以外的残基(例如D-氨基酸或非天然发生合成氨基酸)的。
下面是可以对主题Tau肽进行的氨基酸修饰的非限制性例子：
a)烷基取代的疏水性氨基酸的替代：包括丙氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，缬氨酸，正亮氨酸，(S)-2-氨基丁酸，(S)-环己基丙氨酸或C1-C10碳的脂肪族侧链取代(包括分支，环状和直链烷基，烯基或炔基取代)的其它简单α-氨基酸；
b)芳香族取代的疏水氨基酸的替代：包括苯丙氨酸，色氨酸，酪氨酸，磺基酪氨酸，联苯基丙氨酸，1-萘基丙氨酸，2-萘基丙氨酸，2-苯并噻吩基丙氨酸，3-苯并噻吩基丙氨酸，组氨酸，包括氨基，烷基氨基，二烷基氨基，氮杂，卤代(氟，氯，溴，或碘)或烷氧基(C1-C4)取代形式的上文所列芳香族氨基酸，其例示性例子有：2-，3-或4-氨基苯丙氨酸，2-，3-或4-氯苯丙氨酸，2-，3-或4-甲基苯丙氨酸，2-，3-或4-甲氧基苯丙氨酸，5-氨基-，5-氯-，5-甲基-或5-甲氧基色氨酸，2'-，3'-，或4'-氨基-，2'-，3'-，或4'-氯-，2，3，或4-bi苯丙氨酸，2'-，3'-，或4'-甲基-，2-，3-或4-联苯基丙氨酸，和2-或3-吡啶基丙氨酸；
c)含有碱性侧链的氨基酸的替代：包括精氨酸，赖氨酸，组氨酸，鸟氨酸，2,3-二氨基丙酸，高精氨酸，包括前述氨基酸的烷基，烯基，或芳基取代的(C1-C10分支，线性，或环状)衍生物，无论取代基是在杂原子(诸如α氮，或一个或多个末端氮)上或是在α碳上，例如在pro-R位置中。充当例示性例子的化合物包括：N-ε-异丙基-赖氨酸，3-(4-四氢吡啶基)-甘氨酸，3-(4-四氢吡啶基)-丙氨酸，N,N-γ,γ'-di乙基-高精氨酸。还包括诸如α-甲基-精氨酸，α-甲基-2,3-二氨基丙酸，α-甲基-组氨酸，α-甲基-鸟氨酸等化合物，其中烷基基团占据α-碳的pro-R位置。还包括自烷基，芳香族，杂芳香族(其中杂芳香族基团具有单独或组合的一个或多个氮，氧或硫原子)羧酸或许多公知的活化后衍生物任一(诸如酰基氯，活性酯，活性azolide和相关衍生物)和赖氨酸，鸟氨酸，或2,3-二氨基丙酸形成的酰胺；
d)酸性氨基酸的替代：包括天冬氨酸，谷氨酸，高谷氨酸，酪氨酸，2,4-二氨基丙酸，鸟氨酸或赖氨酸和四唑取代的烷基氨基酸的烷基，芳基，芳基烷基，和杂芳基磺酰胺；
e)侧链酰胺残基的替代：包括天冬酰胺，谷氨酰胺，和天冬酰胺或谷氨酰胺的烷基或芳香族取代衍生物；和
f)含有羟基的氨基酸的替代：包括丝氨酸，苏氨酸，高丝氨酸，2,3-二氨基丙酸，和丝氨酸或苏氨酸的烷基或芳香族取代衍生物。
在一些情况中，主题Tau肽包含一个或多个天然发生非遗传编码的L-氨基酸，合成L-氨基酸或氨基酸的D-对映体。例如，本公开文本的Tau肽可只包含D-氨基酸。例如，本公开文本的Tau肽可包含一个或多个下述残基：羟脯氨酸，β-丙氨酸，邻氨基苯甲酸，间氨基苯甲酸，对氨基苯甲酸，间氨基甲基苯甲酸，2,3-二氨基丙酸，α-氨基异丁酸，N-甲基甘氨酸(肌氨酸)，鸟氨酸，瓜氨酸，叔丁基丙氨酸，叔丁基甘氨酸，N-甲基异亮氨酸，苯甘氨酸，环己基丙氨酸，正亮氨酸，萘基丙氨酸，吡啶基丙氨酸3-苯并噻吩基丙氨酸，4-氯苯丙氨酸，2-氟苯丙氨酸，3-氟苯丙氨酸，4-氟苯丙氨酸，青霉胺，1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸，β-2-噻吩基丙氨酸，甲硫氨酸亚砜，高精氨酸，N-乙酰基赖氨酸，2,4-二氨基丁酸，ρ-氨基苯丙氨酸，N-甲基缬氨酸，高半胱氨酸，高丝氨酸，ε-氨基己酸，ω-氨基己酸，ω-氨基庚酸，ω-氨基辛酸，ω-氨基癸酸，ω-氨基十四酸，环己基丙氨酸，α,γ-二氨基丁酸，α,β-二氨基丙酸，δ-氨基戊酸，和2,3-二氨基丁酸。
在一些情况中，主题Tau肽包括一个或多个肽键以外的连接，例如，至少两个相邻氨基酸经酰胺键以外的连接而连接。例如，为了降低或消除不想要的蛋白水解或其它降解途径和/或为了提高血清稳定性和/或约束或提高构象灵活性，可以替代本公开文本的Tau肽的主链内的一个或多个酰胺键。
例如，可以用另一种连接替换主题Tau肽中的一个或多个酰胺连接(-CO-NH-)，该另一种连接是等排体，诸如：-CH2NH-，CH2S-，-CH2CH2-，-CH＝CH-(顺式和反式)，-COCH2-，-CH(OH)CH2-和-CH2SO-。可以通过本领域已知方法来进行这种替换。
又例如，可以用还原的等排假肽键替换本公开文本的Tau肽中的一个或多个酰胺连接。Couder et al.(1993)Int.J.Peptide Protein Res.41:181-184。
可以为了多种目的将Tau肽连接至极其多种其它肽或蛋白质。通过提供主题肽的表达，可以实现多种翻译后修饰。例如，通过采用适宜的编码序列，可提供法呢基化或异戊烯化。在这种情况中，肽会在末端处结合至脂质基团，从而能够结合至脂膜，诸如脂质体。
可以在主题Tau肽中引入半胱氨酸残基或半胱氨酸类似物以提供经二硫化物连接对其它肽的连接或提供主题Tau肽的环化。引入半胱氨酸或半胱氨酸类似物的方法是本领域已知的；参见例如美国专利No.8,067,532。
本公开文本的Tau肽可以是环化的。可以在主题Tau肽中引入一个或多个半胱氨酸或半胱氨酸类似物，其中引入的半胱氨酸或半胱氨酸类似物可以与第二引入的半胱氨酸或半胱氨酸类似物形成二硫键。其它环化手段包括引入肟接头或羊毛硫氨酸接头；参见例如美国专利No.8,044,175。可以使用和/或引入可形成环化键的氨基酸(或非氨基酸模块)的任何组合。可以用具有容许引入桥的官能团的氨基酸的任何组合(或氨基酸和-(CH2)n-CO-或-(CH2)n-C6H4-CO-)生成环化键。一些例子是二硫化物，二硫化物模拟物诸如-(CH2)n-卡巴桥，硫缩醛，硫醚桥(胱硫醚或羊毛硫氨酸)和含有酯和醚的桥。
其它修饰包括例如N-烷基(或芳基)取代(ψ[CONR])，或主链交联以构建内酰胺和其它环状结构。本发明的调控剂化合物的其它衍生物包括C端羟基甲基衍生物，O-修饰的衍生物(例如C端羟基甲基苄基醚)，N端修饰的衍生物包括取代的酰胺诸如烷基酰胺和酰肼。
在一些情况中，用D-氨基酸替换本公开文本的Tau肽中的一个或多个L-氨基酸。
在一些情况中，主题Tau肽是逆反(retroinverso)类似物。Sela and Zisman(1997)FASEB J.11:449。逆反肽类似物是线性肽的如下异构体，其中氨基酸序列的方向是反转的(反向)且其中的一个或多个氨基酸的手性(D-或L-)是倒转的(逆向)，例如，使用D-氨基酸而非L-氨基酸。参见例如Jameson et al.(1994)Nature 368:744；和Brady et al.(1994)Nature 368:692。
在主题Tau肽的C端处的氨基酸的羧基基团COR3可以以游离形式(R3＝OH)或以生理学容忍的碱或碱土盐诸如例如钠，钾或钙盐的形式存在。羧基基团还可以用伯，仲或叔醇诸如例如甲醇，分支的或不分支的C1-C6烷基醇，例如乙醇或叔丁醇酯化。羧基基团还可以用伯或仲胺诸如氨，分支的或不分支的C1-C6-烷基胺或C1-C6二烷基胺，例如甲基胺或二甲胺酰胺化。
在本公开文本的Tau肽的N端处的氨基酸NR1R2的氨基基团可以以游离形式(R1＝H和R2＝H)或以生理学容忍的盐诸如例如氯化物或乙酸盐的形式存在。氨基基团还可以用酸乙酰化，使得R1＝H和R2＝乙酰基，三氟乙酰基，或金刚烷基。氨基基团可以以受到肽化学的常规氨基保护基团诸如例如Fmoc，Z，Boc，或Alloc保护的形式存在。氨基基团可以是N-烷基化的，其中R1和/或R2＝C1-C6烷基或C2-C8烯基或C7-C9芳烷基。
烷基残基可以是直链的，分支的或任选环状的烷基残基，例如甲基，乙基，异丙基和环己基。
修饰主题Tau肽的一种方式是在该肽的N和/或C端处缀合(例如连接)一个或多个别的元件，诸如另一种蛋白质(例如具有与主题肽异源的氨基酸序列)和/或载体分子。如此，例示性蛋白质是包含自本公开文本的Tau肽衍生的肽的融合蛋白。
对可延长主题Tau肽的血清半衰期的修饰感兴趣。主题Tau肽可以是“PEG化”的，即含有一个或多个聚(乙二醇)(PEG)模块。对于蛋白质的PEG化合适的方法和试剂是本领域公知的，而且可见于美国专利No.5,849,860，通过援引将其公开内容收入本文。对于蛋白质的缀合合适的PEG一般是于室温在水中可溶的，而且具有通式R(O-CH2-CH2)nO-R，其中R是氢或保护性基团诸如烷基或烷醇基团，且其中n是1至1000的整数。在R是保护性基团的情况中，它一般具有1至8个碳。
与主题Tau肽缀合的PEG可以是线性的。与主题Tau肽缀合的PEG也可以是分支的。分支的PEG衍生物，诸如美国专利No.5,643,575中描述的那些，“星形PEG”和多臂PEG，诸如Shearwater Polymers,Inc.产品目录“多乙二醇衍生物1997-1998”中描述的那些。星形PEG在本领域中有描述，包括例如美国专利No.6,046,305。
在本公开文本的Tau肽要掺入脂质体中的情况中，还可以使用碳水化合物，脂质模块，包括N-脂肪酰基基团诸如N-月桂酰，N-油酰，脂肪胺诸如十二烷胺，油酰胺，诸如此类(例如参见US 6,638,513)来修饰主题Tau肽。
别的修饰
可以修饰主题Tau肽以包含一个或多个共价连接模块。合适的修饰包括例如生物素；脂质(例如法呢基，甲酰基，肉豆蔻酰基，棕榈酰基和硬脂酰基基团)；聚(乙二醇)；((His)n，例如6His；表位标签，例如谷胱甘肽-S-转移酶(GST)，血凝素(HA；例如YPYDVPDYA；SEQ ID NO:74)，FLAG(例如DYKDDDDK；SEQ ID NO:75)，c-myc(例如EQKLISEEDL；SEQ ID NO:76))；载体(例如用于免疫接种)；诸如此类。
载体
本公开文本的Tau肽可连接至载体。如本文中与术语“偶联”可互换使用的，术语“连接”指密切相联，例如Tau肽和载体在空间上密切接近。在一些情况中，该连接是共价连接。在其它情况中，该连接是非共价连接。Tau肽可以直接连接至载体。或者，Tau肽可以间接连接至载体，例如经接头分子。
合适的载体的例子包括大的，缓慢代谢的高分子，诸如：蛋白质；多糖，诸如sepharose，琼脂糖，纤维素，纤维素珠，诸如此类；聚合氨基酸诸如聚谷氨酸，聚赖氨酸，诸如此类；氨基酸共聚物；灭活的病毒颗粒；灭活的细菌毒素，诸如来自白喉，破伤风，霍乱，白细胞毒素分子的类毒素；脂质体；灭活的细菌；树突细胞；诸如此类。载体在下文中有更为详细的描述。
合适的载体是本领域公知的，而且包括例如甲状腺球蛋白，清蛋白诸如人血清清蛋白，破伤风类毒素；白喉类毒素；聚氨基酸，诸如聚(D-赖氨酸:D-谷氨酸)；轮状病毒的VP6多肽；流感病毒血凝素，流感病毒核蛋白；乙型肝炎病毒核心蛋白，乙型肝炎病毒表面抗原；来自结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)的结核菌素的纯化后的蛋白质衍生物(PPD)；灭活的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)外毒素A(毒素A)；匙孔虫戚血蓝蛋白(KLH)；百日咳博得特氏菌(Bordetella pertussis)的丝状血凝素(FHA)；破伤风类毒素(TT)和卡介苗(BCG)细胞壁的T辅助细胞(Th)表位；来自麻风分枝杆菌(M.leprae)或来自结核分枝杆菌(M.tuberculosis)的重组10kDa，19kDa和30-32kDa蛋白质，或这些蛋白质的任何组合；诸如此类。关于载体和关于将肽缀合至载体的方法的讨论参见例如美国专利No.6,447,778。
铜绿假单胞菌外毒素A(毒素A)已经有效用作缀合物疫苗中的载体。可以自铜绿假单胞菌PA103的发酵罐生长培养物的上清液纯化铜绿假单胞菌外毒素A。毒素A已经基于在动物中的结果归类为超抗原。毒素A可以通过共价偶联至己二酸二酰肼(ADH)(一种4碳间隔物分子)而完全且不可逆解毒。这个步骤破坏该毒素分子的ADPR转移酶活性，从而使得它无毒性。可以使用未反应的酰肼基团将多肽共价偶联至毒素A。还可以使用碳二亚胺试剂将毒素A偶联多肽。
用戊二醛作为偶联剂方便地制备Tau-肽缀合物。参见例如Rubinstein et al.(1995)AIDS 9:243-51。
将主题多肽与载体缀合的方法包括经由C端肽半胱氨酸连接的二硫化物连接，用戊二醛溶液偶联2小时，用酪氨酸偶联，或用水溶性碳二亚胺偶联。
在一些实施方案中，主题Tau肽是脂化的。将脂质残基(诸如棕榈酸等等)附着至肽的氨基末端。脂质可以直接附着至肽，或经连接(诸如Ser-Ser，Gly，Gly-Gly，Ser连接等等)间接附着至肽。又例如，在共价附着至肽时，可以使用大肠杆菌脂蛋白(诸如三棕榈酰基-S-甘油基半胱氨酰-丝氨酰-丝氨酸(P3CSS))来引发特异性CTL。参见Deres et al.，Nature 342:561-564(1989)。可以经适宜的羧酸酐将主题Tau肽与不同链长度和不饱和程度的不带电荷的脂肪酸残基(范围自乙酸至硬脂酸)以及带负电荷的琥珀酰残基缀合。参见例如美国专利No.6,419,931。
主题Tau肽可以直接或间接(例如经接头分子)缀合至载体。极其多种接头分子是本领域已知的，而且可以在缀合物中使用。自肽至载体的连接可以经由肽反应性侧链，或肽的N或C端。接头可以是有机，无机，或半有机分子，而且可以是有机分子，无机分子的聚合物，或包含无机和有机分子二者的共聚物。
如果存在的化，接头分子一般具有足够长度以允许Tau肽和连接的载体容许Tau肽和载体之间的一些柔性移动。接头分子一般长约6-50个原子。接头分子还可以是例如芳基乙炔，含有2-10个单体单元的乙二醇寡聚物，二胺，二酸，氨基酸，或其组合。根据此公开内容可使用可结合至多肽的其它接头分子。
生成Tau肽的方法
可以依照重组合成的常规方法分离和纯化主题Tau肽。可以自生成主题Tau肽的表达宿主细胞制备裂解物，或者可以收获来自生成主题Tau肽的表达宿主细胞的培养液，并且可以使用高效液相层析(HPLC)，排阻层析，凝胶电泳，亲和层析，或其它纯化技术自裂解物或培养液纯化Tau肽。在一些情况中，涉及与制备和纯化Tau肽产物的方法有关的污染物，包含主题Tau肽的组合物会包含以重量计至少80％的期望产物，以重量计至少约85％，以重量计至少约95％，或以重量计至少约99.5％。该百分比可以是基于总蛋白质的。
在一些情况中，会自生成Tau肽的细胞的培养液纯化本公开文本的Tau肽。例如，可以用包含编码主题Tau肽的核苷酸序列的核酸遗传修饰宿主细胞，使得经遗传修饰的宿主细胞生成Tau肽并将它分泌入培养液中。
还可以使用本领域已知的常规方法通过体外化学合成来制备主题Tau肽。有多种商品化合成设备可得，例如Applied Biosystems，Inc.，Foster City，Calif.，Beckman，等的自动化合成仪。通过使用合成仪，可以用非天然氨基酸替代天然发生氨基酸。制备的具体序列和方式会由便利，经济，要求的纯度，诸如此类决定。例如，固相肽合成(SPPS)容许掺入非天然氨基酸和/或肽/蛋白质主链修饰。有多种形式的SPPS(诸如Fmoc和Boc)可用于合成主题肽。化学合成的细节是本领域已知的(例如Ganesan A.2006Mini Rev.Med Chem.6:3-10和Camarero JA et al.2005Protein Pept Lett.12:723-8)。
如果想要的化，可以在合成期间或在表达期间将多种基团引入肽中。例如，可以在合成期间乙酰化和/或磷酸化Tau肽。如上所述，SPPS容许掺入非天然氨基酸和/或肽/蛋白质主链修饰。用于乙酰化氨基酸的方法，用于磷酸化氨基酸(例如掺入磷酸化氨基酸)的方法是本领域已知的。参见例如“AminoAcid and Peptide Synthesis”(2002)John Jones，Oxford University Press，2ndEd；“Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis:A Practical Approach”(2000)W.C.Chan and Peter D.White，eds.，Oxford University Press，1st Ed。
或者，可以将可提供连接至其它分子或表面的基团引入Tau肽。如此，例如，可以使用半胱氨酸来生成硫醚，可以使用组氨酸来连接至金属离子复合物，可以使用羧基基团来形成酰胺或酯，可以使用氨基基团来形成酰胺，诸如此类。
可以通过各种层析方法来纯化通过化学合成生成的肽，包括乙酸酯形式的弱碱性树脂上的离子交换；非衍生化聚苯乙烯/二乙酰基苯共聚物(例如XAD)上的疏水吸附层析；硅胶上的吸附层析；离子交换层析，例如在羧甲基纤维素上；分配层析，例如在G-25上；逆流分配层析；或高压液相层析(HPLC)，例如在辛基或十八烷基甲硅烷基硅石(ODS)相上的反相HPLC。
又例如，可以自神经元细胞(例如皮质神经元；运动神经元)的培养液纯化Tau肽，该神经元细胞是自诱导的多能干(iPS)细胞衍生的。例如，可以使用自个体获得的成纤维细胞或其它体细胞来生成iPS细胞；而且可以使用本领域已知方法在体外细胞培养中诱导如此生成的iPS细胞以分化成皮质神经元或运动神经元。参见例如Dimos et al.(2008)Science 321:1218-1221；Chambers et al.(2009)Nat.Biotechnol.27:275；Cooper et al.(2010)Mol.Cell.Neurosci.45:258；和Hu et al.(2010)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 107:4335。可以自培养液纯化由体外分化的神经元分泌入培养液的Tau肽。
在一些情况中，通过体外分化自体细胞(例如成纤维细胞)生成的iPS细胞来生成神经元，该体细胞是自具有Tau病的个体获得的。自体细胞(诸如成纤维细胞)生成iPS细胞的方法是本领域已知的。参见例如Takahashi andYamanaka(2006)Cell 126:663-676；Yamanaka et al.(2007)Nature 448:313-7；Wernig et al.(2007)Nature 448:318-24；Maherali(2007)Cell Stem Cell1:55-70；Maherali and Hochedlinger(2008)Cell Stem Cell 3:595-605；Park et al.(2008)Cell 134:1-10；Dimos et al.(2008)Science 321:1218-1221；Blelloch et al.(2007)Cell Stem Cell 1:245-247；Stadtfeld et al.(2008)Science 322:945-949；Stadtfeld et al.(2008)2:230-240；Okita et al.(2008)Science 322:949-953；Yu etal.(2009)Science 324:797；Soldner et al.(2009)Cell 136:964；和Kaji et al.(2009)Nature 458:771。
可以自多种细胞生成iPS细胞，包括但不限于：成纤维细胞，皮肤成纤维细胞，表皮成纤维细胞，骨髓衍生多个核细胞，骨骼肌细胞，脂肪细胞，外周血多个核细胞，巨噬细胞，肝细胞，角质形成细胞，口腔角质形成细胞，毛囊表皮细胞，上皮细胞，胃上皮细胞，肺上皮细胞，滑膜细胞，肾细胞，皮肤上皮细胞，胰腺β细胞，和成骨细胞。用于生成iPS细胞的细胞可源自多种组织类型，包括但不限于：骨髓，皮肤(例如表皮，上皮)，肌肉，脂肪组织，外周血，***，骨骼肌，和平滑肌。
可以自具有Tau病的人(例如成人)获得用于生成iPS细胞的细胞。例如，可以自具有阿尔茨海默氏病的人(例如成人)获得用于生成iPS细胞的细胞。
iPS细胞在它们的细胞表面上生成和表达一种或多种下述细胞表面抗原：SSEA-3，SSEA-4，TRA-1-60，TRA-1-81，TRA-2-49/6E(碱性磷酸酶)，和Nanog。例如，iPS细胞可以在它们的细胞表面上表达SSEA-3，SSEA-4，TRA1-60，TRA1-81，和Nanog。
自体细胞生成iPS细胞可牵涉迫使在体细胞中表达一组因子以促进细胞效力升高或细胞去分化。迫使表达可包括将编码外源多肽的表达载体导入细胞，其中外源多肽包括例如下述一项，两项，三项，四项，或更多项：Oct3/4，Klf4，c-Myc，Sox2，Nanog，Lin28，Esrrb，SV40大T抗原，和hTERT。例如，可以通过将导入体细胞包含编码Oct3/4，Klf4，c-Myc，Sox2，Nanog，和Lin28的核苷酸序列的一种或多种表达载体自成年体细胞生成iPS细胞。又例如，可以通过将包含编码Oct3/4，Klf4，c-Myc，和Sox2的核苷酸序列的一种或多种表达载体导入体细胞自成年体细胞生成iPS细胞。
可以在不使用载体或转基因序列的情况下自体细胞生成iPS细胞。参见例如Yu et al.(2009)Science 324:797；Soldner et al.(2009)Cell 136:964；和Kajiet al.(2009)Nature 458:771。
可以在体外诱导iPS以分化成神经元。在体外诱导iPS细胞以分化成神经元的方法是本领域已知的。参见例如Dimos et al.(2008)Science321:1218-1221；Chambers et al.(2009)Nat.Biotechnol.27:275；Cooper et al.(2010)Mol.Cell.Neurosci.45:258；和Hu et al.(2010)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 107:4335。可以在体外在培养基中维持iPS细胞，使得胚状体(EB)自发形成。可以在体外在包含sonic hedgehog(SHH)信号传导途径激动剂和视黄酸(RA)的培养基中维持EB，然后在层粘连蛋白包被的表面上涂布；在这些条件下，EB分化成神经元；参见例如Dimos(2008)见上文。
可以通过一种或多种神经元标志物的表达来鉴定神经元，诸如：Tuj1(β-III-微管蛋白)；MAP-2(微管相关蛋白2，也可以使用其它MAP基因诸如MAP-1或-5)；抗轴突生长克隆；ChAT(胆碱乙酰基转移酶)；CgA(抗嗜铬粒蛋白A)；DARRP(多巴胺和cAMP调节的磷酸蛋白)；DAT(多巴胺转运蛋白)；GAD(谷氨酸脱羧酶)；GAP(生长相关蛋白)；抗HuC蛋白；抗HuD蛋白；α-丝联蛋白；NeuN(神经元特异性核内蛋白)；NF(神经丝)；NGF(神经生长因子)；γ-SE(神经元特异性烯醇酶)；外周蛋白；PH8；PGP(蛋白质基因产物)；SERT(血清素转运蛋白)；突触蛋白；Tau(神经纤维缠结蛋白)；抗Thy-1；TRK(酪氨酸激酶受体)；TRH(色氨酸羟化酶)；抗TUC蛋白；TH(酪氨酸羟化酶)；VRL(香草素受体样蛋白)；VGAT(小泡GABA转运蛋白)；和VGLUT(小泡谷氨酸转运蛋白)。
核酸和宿主细胞
本公开文本提供分离的核酸，其中本公开文本的核酸包含编码主题Tau肽的核苷酸序列。编码本公开文本的Tau肽的核苷酸序列可以可操作连接至一种或多种调节元件，诸如启动子和/或增强子，容许核苷酸序列在预定靶细胞(例如经遗传修饰以合成所编码Tau肽的细胞)中表达。在一些实施方案中，主题核酸是重组表达载体。
合适的启动子和增强子元件是本领域已知的。为了在细菌细胞中表达，合适的启动子包括但不限于lacI，lacZ，T3，T7，gpt，λP和trc。为了在真核细胞中表达，合适的启动子包括但不限于轻和/或重链免疫球蛋白基因启动子和增强子元件；巨细胞病毒立即早期启动子；单纯疱疹病毒胸苷激酶启动子；早期和晚期SV40启动子；来自逆转录病毒的长末端重复中存在的启动子；小鼠金属硫蛋白-I启动子；诸如此类。
在一些实施方案中，例如，为了在酵母细胞中表达，合适的启动子是组成性启动子，诸如ADH1启动子，PGK1启动子，ENO启动子，PYK1启动子，诸如此类；或可调节启动子，诸如GAL1启动子，GAL10启动子，ADH2启动子，PHO5启动子，CUP1启动子，GAL7启动子，MET25启动子，MET3启动子，CYC1启动子，HIS3启动子，ADH1启动子，PGK启动子，GAPDH启动子，ADC1启动子，TRP1启动子，URA3启动子，LEU2启动子，ENO启动子，TP1启动子，和AOX1(例如供在毕赤酵母中使用)。选择适宜的载体和启动子完全在本领域普通技术水平内。
适合在原核宿主细胞中使用的启动子包括但不限于噬菌体T7RNA聚合酶启动子；trp启动子；lac操纵子启动子；杂合启动子，例如lac/tac杂合启动子，tac/trc杂合启动子，trp/lac启动子，T7/lac启动子；trc启动子；tac启动子，诸如此类；araBAD启动子；体内调节的启动子，诸如ssaG启动子或相关启动子(参见例如美国专利公开文本No.20040131637)，pagC启动子(Pulkkinen and Miller，J.Bacteriol.，1991：173(1)：86-93；Alpuche-Aranda etal.，PNAS，1992；89(21)：10079-83)，nirB启动子(Harborne et al.(1992)Mol.Micro.6:2805-2813)，诸如此类(参见例如Dunstan et al.(1999)Infect.Immun.67:5133-5141；McKelvie et al.(2004)Vaccine 22:3243-3255；和Chatfield et al.(1992)Biotechnol.10:888-892)；sigma70启动子，例如共有sigma70启动子(参见例如GenBank登录号AX798980，AX798961，和AX798183)；静止期启动子，例如dps启动子，spv启动子，诸如此类；自病原性岛SPI-2衍生的启动子(参见例如WO96/17951)；actA启动子(参见例如Shetron-Rama et al.(2002)Infect.Immun.70:1087-1096)；rpsM启动子(参见例如Valdivia and Falkow(1996)Mol.Microbiol.22:367)；tet启动子(参见例如Hillen,W.and Wissmann,A.(1989)In Saenger,W.and Heinemann,U.(eds)，Topics in Molecular andStructural Biology,Protein-Nucleic Acid Interaction.Macmillan，London，UK，Vol.10，pp.143-162)；SP6启动子(参见例如Melton et al.(1984)Nucl.Acids Res.12:7035)；诸如此类。适合在原核生物诸如大肠杆菌中使用的强启动子包括但不限于Trc，Tac，T5，T7，和Pλ。供细菌宿主细胞中使用的操纵基因的非限制性例子包括乳糖启动子操纵基因(LacI阻遏蛋白在与乳糖接触时改变构象，由此阻止LacI阻遏蛋白结合该操纵基因)，色氨酸启动子操纵基因(在与色氨酸复合时，TrpR阻遏蛋白具有结合该操纵基因的构象；在色氨酸缺失时，TrpR阻遏蛋白具有不结合该操纵基因的构象)，和tac启动子操纵基因(参见例如deBoer et al.(1983)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.80:21-25)。
编码本公开文本的Tau肽的核苷酸序列可以存在于表达载体和/或克隆载体中。表达载体可包括选择标记，复制起点，和提供载体复制和/或维持的其它特征。
本领域技术人员知道多种合适的载体和启动子；许多对于生成主题重组构建物是商品化的。本领域技术人员知道多种合适的载体和启动子；许多对于生成主题重组构建物是商品化的。提供下述载体作为例子。细菌：pBs，phagescript，PsiX174，pBluescript SK，pBs KS，pNH8a，pNH16a，pNH18a，pNH46a(Stratagene，La Jolla，Calif.，USA)；pTrc99A，pKK223-3，pKK233-3，pDR540，和pRIT5(Pharmacia，Uppsala，Sweden)。真核：pWLneo，pSV2cat，pOG44，PXR1，pSG(Stratagene)pSVK3，pBPV，pMSG和pSVL(Pharmacia)。
本公开文本提供分离的经遗传修饰的宿主细胞(例如体外细胞)，它们经主题核酸遗传修饰。在一些实施方案中，主题分离的遗传修饰的宿主细胞可生成本公开文本的Tau肽。
合适的宿主细胞包括真核宿主细胞，诸如哺乳动物细胞，昆虫宿主细胞，酵母细胞；和原核细胞，诸如细菌细胞。将主题核酸导入宿主细胞可以例如通过磷酸钙沉淀，DEAE右旋糖苷介导的转染，脂质体介导的转染，电穿孔，或其它已知方法来实现。
合适的原核细胞包括但不限于大肠埃希氏菌/大肠杆菌(Escherichiacoli)，乳杆菌(Lactobacillus sp.)，沙门氏菌(Salmonella sp.)，志贺氏菌(Shigellasp.)，诸如此类的多种实验室株任一。参见例如Carrier et al.(1992)J.Immunol.148:1176-1181；美国专利No.6,447,784；和Sizemore et al.(1995)Science270:299-302。
在一些情况中，主题经遗传修饰的宿主细胞是哺乳动物细胞。合适的哺乳动物细胞包括原代细胞和永生化细胞系。合适的哺乳动物细胞系包括人细胞系，非人灵长动物细胞系，啮齿动物(例如小鼠，大鼠)细胞系，诸如此类。合适的哺乳动物细胞系包括但不限于HeLa细胞(例如美国典型培养物保藏中心(ATCC)No.CCL-2)，CHO细胞(例如ATCC No.CRL9618，CCL61，CRL9096)，293细胞(例如ATCC No.CRL-1573)，Vero细胞，NIH 3T3细胞(例如ATCC No.CRL-1658)，Huh-7细胞，BHK细胞(例如ATCC No.CCL10)，PC12细胞(ATCC No.CRL1721)，COS细胞，COS-7细胞(ATCC No.CRL1651)，RAT1细胞，小鼠L细胞(ATCC No.CCLI.3)，人胚肾(HEK)细胞(ATCC No.CRL1573)，HLHepG2细胞，诸如此类。
在一些情况中，主题经遗传修饰的宿主细胞是神经元细胞或神经元样细胞。该细胞可以是人，非人灵长动物，小鼠，或大鼠起源的，或自人，非人灵长动物，大鼠，或小鼠以外的哺乳动物衍生的。合适的细胞系包括但不限于人胶质瘤细胞系，例如SVGp12(ATCC CRL-8621)，CCF-STTG1(ATCCCRL-1718)，SW 1088(ATCC HTB-12)，SW 1783(ATCC HTB-13)，LLN-18(ATCC CRL-2610)，LNZTA3WT4(ATCC CRL-11543)，LNZTA3WT11(ATCCCRL-11544)，U-138MG(ATCC HTB-16)，U-87MG(ATCC HTB-14)，H4(ATCC HTB-148)，和LN-229(ATCC CRL-2611)；人髓母细胞瘤衍生的细胞系，例如D342Med(ATCC HTB-187)，Daoy(ATCC HTB-186)，D283Med(ATCC HTB-185)；人肿瘤衍生的神经元样细胞，例如PFSK-1(ATCCCRL-2060)，SK-N-DZ(ATCCCRL-2149)，SK-N-AS(ATCC CRL-2137)，SK-N-FI(ATCC CRL-2142)，IMR-32(ATCC CCL-127)，等；小鼠神经元细胞系，例如BC3H1(ATCC CRL-1443)，EOC1(ATCC CRL-2467)，C8-D30(ATCCCRL-2534)，C8-S(ATCC CRL-2535)，Neuro-2a(ATCC CCL-131)，NB41A3(ATCC CCL-147)，SW10(ATCC CRL-2766)，NG108-15(ATCC HB-12317)；大鼠神经元细胞系，例如PC-12(ATCC CRL-1721)，CTX TNA2(ATCCCRL-2006)，C6(ATCC CCL-107)，F98(ATCC CRL-2397)，RG2(ATCCCRL-2433)，B35(ATCC CRL-2754)，R3(ATCC CRL-2764)，SCP(ATCCCRL-1700)，OA1(ATCC CRL-6538)。
在主题经遗传修饰的宿主细胞是神经元的情况中，可以将编码主题Tau肽的核苷酸序列可操作连接至神经元特异性控制序列(例如神经元特异性启动子)。
合适的神经元特异性控制序列包括但不限于神经元特异性烯醇酶(NSE)启动子(参见例如EMBL HSENO2，X51956)；芳香族氨基酸脱羧酶(AADC)启动子；神经丝启动子(参见例如GenBank HUMNFL，L04147)；突触蛋白启动子(参见例如GenBank HUMSYNIB，M55301)；thy-1启动子(参见例如Chenet al.(1987)Cell 51:7-19；和Llewellyn，et al.(2010)Nat.Med.16(10):1161-1166)；血清素受体启动子(参见例如GenBank S62283)；酪氨酸羟化酶启动子(TH)(参见例如Oh et al.(2009)Gene Ther 16:437；Sasaoka et al.(1992)Mol.Brain Res.16:274；Boundy et al.(1998)J.Neurosci.18:9989；和Kaneda et al.(1991)Neuron 6:583-594)；GnRH启动子(参见例如Radovick et al.(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88:3402-3406)；L7启动子(参见例如Oberdicket al.(1990)Science 248:223-226)；DNMT启动子(参见例如Bartge et al.(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:3648-3652)；脑啡肽启动子(参见例如Comb et al.(1988)EMBO J.17:3793-3805)；髓磷脂碱性蛋白(MBP)启动子；Ca2+-钙调蛋白依赖性蛋白激酶II-α(CamKIIα)启动子(参见例如Mayford et al.(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93:13250；和Casanova et al.(2001)Genesis 31:37)；和CMV增强子/血小板衍生生长因子-β启动子(参见例如Liu et al.(2004)GeneTherapy 11:52-60)。
在一些情况中，在体外自诱导的多能(iPS)细胞分化生成主题Tau肽的神经元细胞，该诱导的多能(iPS)细胞是自个体(例如具有Tau病的个体)的体细胞生成的。生成此类神经元的方法是本领域已知的，而且在下文中有描述。
Tau肽组合物
本公开文本提供包含主题Tau肽的组合物(“Tau肽组合物”)，包括药物组合物。在一些情况中，主题Tau肽组合物是免疫原性组合物。
在主题Tau肽以外，主题Tau肽组合物可包含下述一项或多项：盐，例如NaCl，MgCl2，KCl，MgSO4，等；缓冲剂，例如Tris缓冲液，N-(2-羟基乙基)哌嗪-N'-(2-乙磺酸)(HEPES)，2-(N-吗啉并)乙磺酸(MES)，2-(N-吗啉并)乙磺酸钠盐(MES)，3-(N-吗啉并)丙磺酸(MOPS)，N-tris[羟基甲基]甲基-3-氨基丙磺酸(TAPS)，等；增溶剂；去污剂，例如非离子型去污剂，诸如Tween-20，等；蛋白酶抑制剂；甘油；诸如此类。
在一些情况中，本公开文本的Tau肽的组合物中的Tau肽就氨基酸序列(例如无翻译后修饰的氨基酸残基的序列)而言是同质的；且就磷酸化而言是同质的。在其它情况中，本公开文本的Tau肽的组合物中的Tau肽就氨基酸序列而言是同质；且就磷酸化而言是异质的。例如，群体中的约2％至约100％可包括至少一个磷酸化氨基酸残基。例如，就氨基酸序列而言是同质的本公开文本的Tau肽的群体中约2％至约5％，约5％至约10％，约10％至约15％，约15％至约20％，约20％至约25％，约25％至约30％，约30％至约40％，约40％至约50％，约50％至约60％，约60％至约70％，约70％至约80％，约80％至约90％，或约90％至100％的Tau肽可包括一个，两个，三个，或超过三个磷酸化氨基酸残基(例如磷酸化丝氨酸；磷酸化苏氨酸)。
在一些情况中，本公开文本的Tau组合物是一种药物组合物，其包含：a)本公开文本的Tau肽；和b)药学可接受赋形剂。包含：a)本公开文本的Tau肽；和b)药学可接受赋形剂的本公开文本的药物组合物可以是无菌组合物。包含：a)本公开文本的Tau肽；和b)药学可接受赋形剂的本公开文本的药物组合物可以是适合在人中使用的组合物。包含：a)本公开文本的Tau肽；和b)药学可接受赋形剂的本公开文本的药物组合物可以是无内毒素的。
在一些情况中，包含本公开文本的Tau肽的Tau肽组合物可包含药学可接受赋形剂，其多种是本领域已知的且不需要在本文中详细讨论。药学可接受赋形剂已经在多份出版物中有详尽描述，包括例如，A.Gennaro(2000)"Remington:The Science and Practice of Pharmacy"，20th edition，Lippincott，Williams，&Wilkins；Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems(1999)H.C.Ansel et al.，eds 7th ed.，Lippincott，Williams，&Wilkins；和Handbook of Pharmaceutical Excipients(2000)A.H.Kibbe et al.，eds.，3rd ed.Amer.Pharmaceutical Assoc.。
药学可接受赋形剂(诸如媒介，佐剂，载剂或稀释剂)是公知容易获得的。而且，药学可接受辅助物质(诸如pH调节和缓冲剂，张力调节剂，稳定剂，润湿剂，诸如此类)是公知容易获得的。
适合与主题Tau肽一起使用的药学可接受载体可包括无菌的水性或非水性溶液，悬浮液，和乳状液。非水性溶剂的例子有丙二醇，聚乙二醇，植物油诸如橄榄油，和可注射有机酯诸如油酸乙酯。水性载剂包括水，醇/水溶液，乳状液或悬浮液，和微粒，包括盐水和缓冲介质。胃肠外媒介包括氯化钠溶液，林格(Ringer)氏右旋糖，右旋糖和氯化钠，乳酸盐林格氏液或不挥发性油。静脉内媒介包括流体和营养物补充剂，电解质补充剂(诸如那些基于林格氏右旋糖的)，诸如此类。还可以使用本领域公知的手段冻干包含主题Tau肽的组合物，供后续依照本公开文本的重建和使用。
主题Tau肽可以通过与适宜的药学可接受载剂或稀释剂组合而配制成药物组合物，而且可以配制成固体，半固体，液体或气体形式的制剂，诸如片剂，胶囊剂，粉剂，颗粒剂，软膏剂，溶液剂，吸入剂，和气雾剂。
对于口服制剂，主题Tau肽可以单独或与下述物质组合使用：生成片剂，粉剂，颗粒剂或胶囊剂的适宜的添加剂，例如常规添加剂，诸如乳糖，甘露醇，玉米淀粉或马铃薯淀粉；粘合剂，诸如晶状纤维素，纤维素衍生物，***树胶，玉米淀粉或明胶；崩解剂，诸如玉米淀粉，马铃薯淀粉或羧甲基纤维素钠；润滑剂，诸如滑石或硬脂酸镁；而且在需要时，稀释剂，缓冲剂，润湿剂，防腐剂和芳香剂。
主题Tau肽可以通过在水性或非水性溶剂(诸如植物或其它相似油，合成脂肪酸甘油酯，高级脂肪酸或丙二醇的酯)中溶解，悬浮或乳化它们而配制成用于注射的制剂；而且在需要时，有常规添加剂诸如增溶剂，等张剂，悬浮剂，乳化剂，稳定剂和防腐剂。
包含主题Tau肽的药物组合物通过混合具有期望纯度的Tau肽与任选的生理学可接受载体，赋形剂，稳定剂，表面活性剂，缓冲剂和/或张度剂来制备。可接受载体，赋形剂和/或稳定剂在所采用的剂量和浓度对接受者是无毒的，而且包括缓冲剂，诸如磷酸盐，柠檬酸盐，和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸，谷胱甘肽，半胱氨酸，甲硫氨酸和柠檬酸；防腐剂(诸如乙醇，苄醇，酚，间甲酚，对氯间甲酚，对羟基苯甲酸甲酯或丙酯，苯扎氯铵，或其组合)；氨基酸诸如精氨酸，甘氨酸，鸟氨酸，赖氨酸，组氨酸，谷氨酸，天冬氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，丙氨酸，苯丙氨酸，酪氨酸，色氨酸，甲硫氨酸，丝氨酸，脯氨酸及其组合；单糖，二糖和其它碳水化合物；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如明胶或血清清蛋白；螯合剂，诸如EDTA；糖，诸如海藻糖，蔗糖，乳糖，葡萄糖，甘露糖，麦芽糖，半乳糖，果糖，山梨糖，棉子糖，葡糖胺，N-甲基葡糖胺，半乳糖胺，和神经氨酸；和/或非离子表面活性剂，诸如Tween，Brij Pluronics，Triton-X或聚乙二醇(PEG)。
主题Tau肽药物组合物可以是液体形式，冻干形式或自冻干形式重建的液体形式，其中冻干制剂要在施用前用无菌溶液重建。用于重建冻干组合物的标准规程是加回一定体积的纯水(通常等同于冻干期间去除的体积)；然而，可使用包含抗细菌剂的溶液来生成用于胃肠外施用的药物组合物；还参见Chen(1992)Drug Dev Ind Pharm 18，1311-54。
药物组合物中主题Tau肽的浓度的范围可以是约0.5mg/mL至约1mg/mL，约1mg/mL至约200mg/ml，约50mg/mL至约200mg/mL，或约150mg/mL至约200mg/mL。
主题Tau肽的水性配制剂可以在pH缓冲溶液中制备，例如处于pH范围约4.0至约7.0，或约5.0至约6.0，或约5.5。对于此范围内的pH合适的缓冲剂的例子包括磷酸盐，组氨酸，柠檬酸盐，琥珀酸盐，乙酸盐缓冲剂和其它有机酸缓冲剂。缓冲剂浓度可以是约1mM至约100mM，或约5mM至约50mM，取决于例如缓冲剂和配制剂的期望张度。
Tau肽配制剂中可包括张度剂以调控配制剂的张度。例示性的张度剂包括氯化钠，氯化钾，甘油和来自氨基酸，糖及其组合的群组的任何成分。在一些实施方案中，水性配制剂是等张的，尽管高张度或低张度溶液可能是合适的。术语“等张”表示溶液具有与同它比较的一些其它溶液(诸如生理盐溶液或血清)相同的张度。可以以约5mM至约350mM的量，例如以100mM至350nM的量使用张度剂。
也可以将表面活性剂添加至Tau肽配制剂以降低所配制的肽的聚集和/或最小化配制剂中颗粒的形成和/或降低吸附。例示性的表面活性剂包括聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯(Tween)，聚氧乙烯烷基醚(Brij)，烷基苯基聚氧乙烯醚(Triton-X)，聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物(Poloxamer，Pluronic)，和十二烷基硫酸钠(SDS)。合适的聚氧乙烯山梨聚糖-脂肪酸酯的例子有聚山梨酯20(以商品名Tween 20TM出售)和聚山梨酯80(以商品名Tween 80TM出售)。合适的聚乙烯-聚丙烯共聚物的例子是那些以商品名F68或Poloxamer 188TM出售的。合适的聚氧乙烯烷基醚的例子是那些以商品名BrijTM出售的。表面活性剂的例示性浓度的范围可以是约0.001％至约1％w/v。
也可以添加冷冻保护剂以针对冻干过程期间的失稳条件保护异变活性组分(例如蛋白质)。例如，已知的冷冻保护剂包括糖(包括葡萄糖和蔗糖)；多元醇(包括甘露醇，山梨醇和甘油)；和氨基酸(包括丙氨酸，甘氨酸和谷氨酸)。可以以约10mM至500nM的量包括冷冻保护剂。
在一些实施方案中，主题配制剂包括主题Tau肽和一种或多种上文鉴定的试剂(例如表面活性剂，缓冲剂，稳定剂，张度剂)，而且基本上没有一种或多种防腐剂，诸如乙醇，苄醇，酚，间甲酚，对氯间甲酚，对羟基苯甲酸甲酯或丙酯，苯扎氯铵，及其组合。在其它实施方案中，配制剂中包括防腐剂，例如浓度范围为约0.001至约2％(w/v)。
可以在要经吸入施用的气雾剂配制剂中利用主题Tau肽。可以将主题Tau肽配制入加压的可接受推进剂中，诸如二氯二氟甲烷，丙烷，氮，诸如此类。
可以提供用于口服或直肠施用的单位剂量形式(诸如糖浆剂，酏剂，和混悬剂)，其中每个剂量单位(例如茶匙，汤匙，片剂或栓剂)含有预定量的含有一种或多种抑制剂的组合物。类似地，用于注射或静脉内施用的单位剂量形式可以在组合物(如无菌水，生理盐水或另一种药学可接受载剂中的溶液)中包含主题Tau肽。
如本文中使用的，术语“单位剂量形式”指作为用于人受试者和非人动物受试者的单一剂量合适的物理离散单元，每个单位含有与药学可接受稀释剂，载体或媒介联合的预定数量的主题Tau肽，它是以足以产生期望效果的量计算的。
鼻内配制剂通常会包括既不会对鼻粘膜引起刺激又不会显著干扰纤毛功能的媒介。可以采用稀释剂，诸如水，水性盐水或其它已知物质。鼻配制剂也可以含有防腐剂，诸如但不限于，氯丁醇和苯扎氯铵。可以存在表面活性剂以增强鼻粘膜对主题Tau肽的吸收。
可以作为可注射配制剂来施用主题Tau肽。典型地，可注射组合物制备成液体溶液或悬浮液；也可以制备对于在注射前在液体媒介中溶解或悬浮合适的固体形式。制剂也可以是乳化的，或者可以在脂质体媒介中封装肽。
在一些情况中，主题Tau肽是在受控释放配制剂中配制的。持续释放制剂可以使用本领域公知方法来制备。持续释放制剂的合适例子包括含有Tau肽的固体疏水聚合物的半透性基质，其中该基质是定型产品的形式，例如膜或微胶囊。持续释放基质的例子包括聚酯，L-谷氨酸和乙基-L-谷氨酸酯的共聚物，不可降解乙烯-乙酸乙烯酯，水凝胶，聚交酯，可降解乳酸-乙醇酸共聚物和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。
脂质体可以用作投递媒介。脂质可以是已知的脂质体形成脂质(包括阳离子或两性离子脂质，诸如磷脂酰胆碱)的任何有用组合。其余脂质通常会包括中性或酸性脂质，诸如胆固醇，磷脂酰丝氨酸，磷脂酰甘油，诸如此类。
对于制备脂质体，可以使用Kato et al(1991)J.Biol.Chem.266:3361描述的规程。简言之，在适宜的水性介质(方便的是，盐水介质)中组合脂质和含有主题肽的组合物，其中总固体会在约1-10重量百分比的范围中。强烈搅动短时间段(约5-60秒)后，将管置于约25-40℃温水浴中，并将这个循环重复约5-10次。然后将组合物超声处理方便的时间段，通常是约1-10秒，而且可以通过漩涡震荡来进一步搅动。然后通过添加水性介质来扩大体积，通常将体积提高约1-2倍，接着摇动并冷却。这种方法容许掺入高分子量分子的内腔中。
免疫原性组合物
如上所述，在一些情况中，主题Tau肽组合物是免疫原性组合物。主题免疫原性组合物包含：a)免疫学有效量的主题Tau肽；和b)药学可接受赋形剂。可以在药学可接受赋形剂(它可以是溶液，诸如无菌水性溶液，例如盐水溶液)中提供免疫原性组合物。在需要时，此类赋形剂可以是实质性惰性的。合适的赋形剂包括上文所列那些。
“免疫学有效量”表示作为单剂，作为一系列相同或不同免疫原性组合物的一部分对个体施用该量在个体中有效引发针对主题Tau肽的免疫应答(例如特异性抗体应答)。
在一些情况中，如上文描述的，主题免疫原性组合物中的Tau肽可以是共价或非共价结合至载体的。
包含主题Tau肽的免疫原性组合物可以包括佐剂。合适的佐剂包括对于在人中使用合适的那些。可以在人中使用的已知的合适的佐剂的例子包括但不必然限于明矾，磷酸铝，氢氧化铝，MF59(4.3％w/v鲨烯，0.5％w/v聚山梨酯80(Tween 80)，0.5％w/v山梨聚糖三油酸酯(Span 85))，含CpG的核酸(其中该胞嘧啶是未甲基化的)，QS21(皂苷佐剂)，MPL(单磷酰基脂质A)，3DMPL(3-O-脱乙酰基MPL)，来自Aquilla的提取物，ISCOMS(参见例如et al.(1998)J.Leukocyte Biol.64:713)，LT/CT突变体，聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)(PLG)微粒，Quil A，白介素，诸如此类。
对于兽医应用，包括但不限于动物实验，可使用弗氏，N-乙酰基-胞壁酰基-L-苏氨酰-D-异谷氨酰胺(thr-MDP)，N-乙酰基-正-胞壁酰基-L-丙氨酰-D-异谷氨酰胺(CGP 11637，称作nor-MDP)，N-乙酰基胞壁酰基-L-丙氨酰-D-异谷氨酰-L-丙氨酸-2-(1'-2'-二棕榈酰基-sn-甘油-3-羟基磷酰基氧)-乙基胺(CGP 19835A，称作MTP-PE)，和RIBI，它在2％鲨烯/Tween 80乳液中含有自细菌提取的三种成分，单磷酰基脂质A，海藻糖二霉菌酸和细胞壁骨架(MPL+TDM+CWS)。
用于增强组合物的有效性的别的例示性佐剂包括但不限于：(1)水包油乳液配制剂(有或无其它特异性免疫刺激剂，诸如胞壁酰基肽(见下文)或细菌细胞壁成分)，诸如例如(a)MF59TM(WO90/14837；Chapter 10in Vaccinedesign:the subunit and adjuvant approach，eds.Powell&Newman，Plenum Press1995)，含有5％鲨烯，0.5％Tween 80(聚氧乙烯山梨聚糖单油酸)，和0.5％Span85(山梨聚糖三油酸)(任选含有共价连接至二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺的胞壁酰基三肽(MTP-PE))，使用微流化床配制成亚微米颗粒，(b)SAF，含有10％鲨烯，0.4％Tween 80，5％pluronic嵌段聚合物L121，和thr-MDP，或是微流化成亚微米乳状液或是漩涡震荡以生成较大粒度乳状液，和(c)RIBITM佐剂***(RAS)(Ribi Immunochem，Hamilton，MT)，含有2％鲨烯，0.2％Tween 80，和一种或多种细菌细胞壁成分，诸如单磷酰基脂质A(MPL)，海藻糖二霉菌酸(TDM)，和细胞壁骨架(CWS)，例如MPL+CWS(DETOXTM)；(2)皂苷佐剂，诸如，可使用QS21或STIMULONTM(Cambridge Bioscience，Worcester，MA)，或自其生成的颗粒，诸如ISCOM(免疫刺激复合物)，该ISCOM可以缺乏别的去污剂，例如WO 00/07621；(3)完全弗氏佐剂(CFA)和不完全弗氏佐剂(IFA)；(4)细胞因子，诸如白介素(例如IL-1，IL-2，IL-4，IL-5，IL-6，IL-7，IL-12(WO99/44636)，等)，干扰素(例如γ-干扰素)，巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)，肿瘤坏死因子(TNF)，其它TNF超家族分子(例如CH40L，OX40L，诸如此类)，等；(5)单磷酰基脂质A(MPL)或3-O-脱酰化MPL(3dMPL)，例如GB-2220221，EP-A-0689454，任选在与肺炎球菌糖一起使用时实质性缺失明矾，例如WO00/56358；(6)3dMPL与例如QS21和/或水包油乳液的组合，例如EP-A-0835318，EP-A-0735898，EP-A-0761231；(7)包含CpG基序的寡核苷酸(Krieg Vaccine 2000，19，618-622)，例如含有至少一个CG二核苷酸，其中胞嘧啶是未甲基化的；(8)聚氧乙烯醚或聚氧乙烯酯，例如WO99/52549；(9)聚氧乙烯山梨聚糖酯表面活性剂与辛苯聚醇(octoxynol)组合(WO01/21207)或聚氧乙烯烷基醚或酯表面活性剂与至少一种别的非离子表面活性剂诸如辛苯聚醇组合(WO01/21152)；(10)皂苷和免疫刺激性寡核苷酸(例如CpG寡核苷酸)(WO00/62800)；(11)免疫刺激剂和金属盐颗粒，例如WO00/23105；(12)皂苷和水包油乳液，例如WO99/11241；(13)皂苷(例如QS21)+3dMPL+IM2(任选+固醇)，例如WO98/57659；(14)起免疫刺激剂作用以增强组合物的功效的其它物质。胞壁酰基肽包括N-乙酰基-胞壁酰基-L-苏氨酰-D-异谷氨酰胺(thr-MDP)，N-25乙酰基-正胞壁酰基-L-丙氨酰-D-异谷氨酰胺(nor-MDP)，N-乙酰基胞壁酰基-L-丙氨酰-D-异谷氨酰-L-丙氨酸-2-(1'-2'-二棕榈酰基-sn-甘油-3-羟基磷酰基氧)-乙基胺MTP-PE)，等。在一些情况中，佐剂是对于在人中使用合适的佐剂。
包含本公开文本的Tau肽的免疫原性组合物可含有其它成分，诸如药物级的甘露醇，乳糖，淀粉，硬脂酸镁，糖精钠，滑石，纤维素，葡萄糖，蔗糖，镁，碳酸酯，诸如此类。组合物可含有接近生理条件所需要的药学可接受辅助物质，诸如pH调节和缓冲剂，张力调节剂，诸如此类，例如，乙酸钠，氯化钠，氯化钾，氯化钙，乳酸钠，诸如此类。
产生免疫应答的方法
本公开文本提供在个体中产生针对主题Tau肽的免疫应答的方法。该方法一般牵涉对个体施用一定量的主题Tau肽，该量的主题Tau肽在该个体中有效刺激针对该肽的免疫应答。在个体中产生针对主题Tau肽的免疫应答可导致下述一项或多项：脑组织中游离细胞外Tau肽的量降低；Tau肽的细胞至细胞传播(例如神经元至神经元传播)降低；Tau聚集体(例如细胞内(例如神经元内)Tau聚集体)的量降低；和脑组织中神经纤维缠结的量降低。在个体中产生针对主题Tau肽的免疫应答可以在一些情况中改善该个体中的认知功能，或至少降低该个体中认知功能的衰退速率。
在一些情况中，在个体中产生针对主题Tau肽的免疫应答的方法将游离细胞外Tau肽的量(例如脑组织中游离细胞外Tau肽的量)与施用主题Tau肽之前该个体中游离细胞外Tau肽的量相比降低至少约10％，至少约20％，至少约25％，至少约50％，或超过50％。
在一些情况中，在个体中产生针对主题Tau肽的免疫应答的方法将Tau肽(例如病理性Tau肽)的细胞至细胞(例如神经元至神经元)传播与施用主题Tau肽之前的细胞至细胞传播相比降低至少约10％，至少约20％，至少约25％，至少约50％，或超过50％。
在一些情况中，在个体中产生针对主题Tau肽的免疫应答的方法将Tau聚集体(例如细胞内(例如神经元内)Tau聚集体)的量与施用主题Tau肽之前Tau聚集体的量相比降低至少约10％，至少约20％，至少约25％，至少约50％，或超过50％。
在一些情况中，在个体中产生针对主题Tau肽的免疫应答的方法降低个体中的神经毒性；和/或降低个体中的神经炎症；和/或降低小胶质和星形细胞的活化；和/或降低病理性电生理效应的诱导；和/或降低外来体中Tau的量。
本公开文本的Tau肽可以以包含该肽和药学可接受赋形剂的配制剂施用于个体。包含主题Tau肽的药物配制剂在上文中有描述，而且对于在主题产生免疫应答的方法中使用是合适的。例如，在一些情况中，将包含上文所述主题Tau肽的免疫原性组合物施用于个体。
含有Tau肽的免疫原性组合物一般以在宿主中有效引发免疫应答(例如体液免疫应答，例如特异性抗体应答)的量施用。免疫接种的量会有变化，而且范围可以是约1μg至100μg每位70kg患者，例如5μg/70kg至50μg/70kg。实质性更高的剂量(例如10mg至100mg或更多)在口服，鼻，或表面施用路径中可能是合适的。初始施用可继以相同或不同的含有Tau的免疫原性组合物的一次或多次加强免疫接种。疫苗接种可牵涉至少一次加强，或两次或更多次加强。
一般而言，免疫接种可以通过任何合适路径的施用实现，包括口服，鼻，鼻咽，胃肠外，肠，胃，表面，经皮，皮下，肌肉内，局部或***施用组合物，其中免疫原性组合物是片剂，固体，粉化，液体，气雾剂形式，有或无添加赋形剂，和有或无佐剂。用于制备可肠和胃肠外施用的组合物的实际方法是本领域已知的，而且在诸如Remington's Pharmaceutical Science，15th ed.，Mack Publishing Company，Easton，Pa.(1980)等出版物中有更为详细的描述。
可以通过已知方法来评估抗Tau免疫应答(例如对主题Tau肽特异性的抗体应答)(例如通过在初始免疫接种之前和之后自个体获得血清，并展现个体的免疫状态的变化，例如免疫沉淀测定法，酶联免疫吸附测定法(ELISA)，Western印迹法，流式细胞术测定法，诸如此类)。
可能想要针对主题Tau肽的免疫应答的个体包括已经诊断为具有Tau病的个体；处于比一般群体更大风险发生Tau病的个体(例如具有发生Tau病的遗传素因的个体)；诸如此类。在一些情况中，该个体是成人。在一些情况中，该成人是40岁年龄或更老，50岁年龄或更老，60岁年龄或更老，70岁年龄或更老，或80岁年龄或更老。例如，该成人可以是40岁老至50岁老，50岁老至60岁老，60岁老至70岁老，或比70岁更老。
抗体
本公开文本提供对eTau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)特异性的抗体，例如分离的抗体。本公开文本的抗体也称作“抗Tau抗体”或“抗eTau抗体”。主题抗Tau抗体可用于各种应用，包括检测方法，诊断方法，和治疗方法。本公开文本的抗Tau抗体结合细胞外Tau。如本文中使用的，“细胞外Tau”(“eTau”)涵盖可以在脑脊液(CSF)或间质液(ISF)中检测到的任何Tau多肽。
在一些情况中，本公开文本的抗Tau抗体结合可溶性Tau多肽(例如本公开文本的可溶性eTau多肽)。在一些情况中，本公开文本的抗Tau抗体结合可溶性Tau多肽(例如本公开文本的可溶性eTau多肽)；且不实质性结合聚集的Tau多肽。在一些情况中，本公开文本的抗Tau抗体结合可溶性Tau多肽(例如本公开文本的可溶性eTau多肽)上的线性表位。在一些情况中，本公开文本的抗Tau抗体结合新表位；例如，在一些情况中，受到主题抗Tau抗体识别和结合的表位并非存在于全长Tau中，而是在切割Tau多肽以生成细胞外Tau多肽后生成的。该新表位可以在Tau多肽的C端区域中或在Tau多肽的N端区域中。
本公开文本提供一种分离的抗体，其特异性结合本公开文本的eTau多肽内的表位。本公开文本提供一种分离的单克隆抗体，其特异性结合本公开文本的eTau多肽内的表位。本公开文本提供一种分离的人源化单克隆抗体，其特异性结合本公开文本的eTau多肽内的表位。
本公开文本提供一种分离的抗体，其特异性结合本公开文本的eTau-1多肽内的表位。“eTau-1多肽”包括例如图1A中所绘eTau 2-166多肽；图1A中所绘eTau 2-172多肽；和图1A中所绘eTau 2-176多肽。本公开文本提供一种分离的单克隆抗体，其特异性结合本公开文本的eTau-1多肽内的表位。本公开文本提供一种分离的人源化单克隆抗体，其特异性结合本公开文本的eTau-1多肽内的表位。在一些情况中，本公开文本的分离的抗体结合eTau-1多肽；且不结合eTau-2多肽，eTau-3多肽，或eTau-4多肽。在一些情况中，本公开文本的分离的抗体结合eTau-1多肽，eTau-2多肽，eTau-3多肽，和eTau-4多肽。
本公开文本提供一种分离的抗体，其特异性结合本公开文本的eTau-2多肽内的表位。本公开文本提供一种分离的单克隆抗体，其特异性结合本公开文本的eTau-2多肽内的表位。本公开文本提供一种分离的人源化单克隆抗体，其特异性结合本公开文本的eTau-2多肽内的表位。在一些情况中，本公开文本的分离的抗体结合eTau-2多肽；且不结合eTau-1多肽，eTau-3多肽，或eTau-4多肽。在一些情况中，本公开文本的分离的抗体结合eTau-1多肽，eTau-2多肽，eTau-3多肽，和eTau-4多肽。
本公开文本提供一种分离的抗体，且特异性结合本公开文本的eTau-3多肽内的表位。本公开文本提供一种分离的单克隆抗体，其特异性结合本公开文本的eTau-3多肽内的表位。本公开文本提供一种分离的人源化单克隆抗体，其特异性结合本公开文本的eTau-3多肽内的表位。在一些情况中，本公开文本的分离的抗体结合eTau-3多肽；且不结合eTau-1多肽，eTau-2多肽，或eTau-4多肽。在一些情况中，本公开文本的分离的抗体结合eTau-1多肽，eTau-2多肽，eTau-3多肽，和eTau-4多肽。
本公开文本提供一种分离的抗体，其特异性结合本公开文本的eTau-4多肽内的表位。本公开文本提供一种分离的单克隆抗体，其特异性结合本公开文本的eTau-4多肽内的表位。本公开文本提供一种分离的人源化单克隆抗体，其特异性结合本公开文本的eTau-4多肽内的表位。在一些情况中，本公开文本的分离的抗体结合eTau-4多肽；且不结合eTau-1多肽，eTau-2多肽，或eTau-3多肽。在一些情况中，本公开文本的分离的抗体结合eTau-1多肽，eTau-2多肽，eTau-3多肽，和eTau-4多肽。
在一些情况中，对主题Tau肽特异性的抗体特异性结合乙酰化形式的Tau肽且不实质性结合未乙酰化形式的该肽。在其它情况中，对主题Tau肽特异性的抗体特异性结合未乙酰化形式的该肽。
主题抗Tau抗体可识别本公开文本的Tau肽中的线性表位，或者可识别构象表位。在一些情况中，受到主题抗Tau抗体识别的表位是线性表位。
在一些情况中，主题抗Tau抗体是单克隆抗体。在一些情况中，主题抗Tau抗体是抗体片段，例如Fab，Fab'，F(ab')2，Fv片段，双抗体，线性抗体，单链抗体，或能够结合主题Tau肽的其它片段。
在一些情况中，专门排除结合氨基酸2-18内的表位的抗体。在一些实施方案中，专门排除结合氨基酸15-24内的表位的抗体。在一些实施方案中，专门排除结合氨基酸5-20内的表位的抗体。在一些实施方案中，专门排除结合氨基酸19-46内的表位的抗体。氨基酸编号方式基于图1A和1B中所绘胚胎Tau和eTau片段的编号方式。
在一些情况中，专门排除Tau12抗体(Ghoshal et al.(2002)Exp.Neurobiol.177:475)。在一些情况中，专门排除Tau13抗体(Garcia-Sierra et al.(2003)J.Alz.Dis.5:65)。在一些情况中，专门排除TNT1抗体(Kanaan et al.(2011)J.Neurosci.31:9859)。在一些情况中，专门排除5A6抗体(Johnson et al.(1997)J.Neurochemistry 68(1):430-433)。在一些情况中，专门排除HJ9.4抗体(Yanamandra et al.(2013)Neuron 80:402)。在一些实施方案中，专门排除HT7抗体。在一些实施方案中，专门排除6C10抗体(US 2012/0183599)。
术语“竞争结合”指第一抗体抑制第二抗体结合抗原表位的能力。在第一抗体不与第二抗体竞争结合表位的情况中，可以认为第一抗体不与第二抗体结合相同表位。在第一抗体与第二抗体竞争结合表位的情况中，可以认为第一抗体与第二抗体结合相同或交叠表位。在一些情况中，在第一抗体与第二抗体竞争结合表位的情况中，在第一抗体存在下第二抗体不以可检测水平结合表位。
用于竞争性结合的测定法是本领域已知的。例如，可以使用竞争性抑制ELISA。例如，在多孔板的孔上固定化包括受到第一抗体识别的表位的抗原；容许包含第一可检测标记物的第一抗体结合固定化的抗原，形成固定化的抗原-第一抗体复合物；并使包含第二可检测标记物(第二可检测标记物与第一可检测标记物可区分)的第二抗体与固定化的抗原-第一抗体复合物接触。可以通过检测第二抗体对固定化的抗原的结合(通过第二可检测标记物来检测)和第一抗体的结合的降低(通过第一可检测标记物的减少来检测)来测定第二抗体是否竞争性抑制第一抗体结合受到第一抗体识别的表位。
[7295-M6]
本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体与包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:15的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ ID NO:16的抗体重链可变区的重链CDR的抗体竞争结合表位。在一些情况中，该抗体是人源化。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，且不结合eTau2，eTau3，或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SLPTPPTREPK(SEQ ID NO:77)内的表位。
本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含轻链，该轻链包含包含氨基酸序列SEQID NO:15的抗体轻链可变区的轻链CDR。本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含重链，该重链包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:16的抗体重链可变区的重链CDR。本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:15的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ ID NO:16的抗体重链可变区的重链CDR。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，且不结合eTau2，eTau3，或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SLPTPPTREPK(SEQ ID NO:77)内的表位。
本公开文本提供一种分离的抗体，其与包含下述各项的抗体竞争结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:10的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:12的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:13的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:14的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，且不结合eTau2，eTau3，或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SLPTPPTREPK(SEQ ID NO:77)内的表位。
本公开文本提供一种分离的单克隆抗体，其特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，其中该分离的抗体包含1，2，3，4，5，或6种下述CDR：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQID NO:10的VL CDR2；(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR3；(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:12的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ IDNO:13的VH CDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:14的VH CDR3。在一些情况中，该抗体包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:10的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ IDNO:11的VL CDR3。在一些情况中，该抗体包含：(iv)包含氨基酸序列SEQ IDNO:12的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:13的VH CDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:14的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，且不结合eTau2，eTau3，或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SLPTPPTREPK(SEQ ID NO:77)内的表位。
本公开文本提供一种分离的人源化单克隆抗体，其包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区，其中该分离的抗体特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，且其中该分离的抗体包含：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:10的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:12的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:13的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:14的VHCDR3。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab′。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，且不结合eTau2，eTau3，或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SLPTPPTREPK(SEQ ID NO:77)内的表位。
[7295-M8]
本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体与包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ ID NO:24的抗体重链可变区的重链CDR的抗体竞争结合表位。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，且不结合eTau2，eTau3，或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SLPTPPTREPK(SEQ ID NO:77)内的表位。
本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含轻链，该轻链包含包含氨基酸序列SEQID NO:23的抗体轻链可变区的轻链CDR。本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含重链，该重链包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:24的抗体重链可变区的重链CDR。本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ ID NO:24的抗体重链可变区的重链CDR。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，且不结合eTau2，eTau3，或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SLPTPPTREPK(SEQ ID NO:77)内的表位。
本公开文本提供一种分离的抗体，其与包含下述各项的抗体竞争结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:18的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:19的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:20的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:21的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:22的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，且不结合eTau2，eTau3，或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SLPTPPTREPK(SEQ ID NO:77)内的表位。
本公开文本提供一种分离的单克隆抗体，其特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，其中该分离的抗体包含1，2，3，4，5，或6种下述CDR：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:18的VL CDR2；(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:19的VL CDR3；(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:20的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ IDNO:21的VH CDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:22的VH CDR3。在一些情况中，该抗体包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:18的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ IDNO:19的VL CDR3。在一些情况中，该抗体包含：(iv)包含氨基酸序列SEQ IDNO:20的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:21的VH CDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:22的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，且不结合eTau2，eTau3，或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SLPTPPTREPK(SEQ ID NO:77)内的表位。
本公开文本提供一种分离的人源化单克隆抗体，其包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区，其中该分离的抗体特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，且其中该分离的抗体包含：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:18的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:19的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:20的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:21的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:22的VHCDR3。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，且不结合eTau2，eTau3，或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SLPTPPTREPK(SEQ ID NO:77)内的表位。
[7298-M1]
本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体与包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:31的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ ID NO:32的抗体重链可变区的重链CDR的抗体竞争结合表位。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽，且不结合eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列RIPAKTPPAPK(SEQ ID NO:78)内的表位。
本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含轻链，该轻链包含包含氨基酸序列SEQID NO:31的抗体轻链可变区的轻链CDR。本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含重链，该重链包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:32的抗体重链可变区的重链CDR。本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:31的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ ID NO:32的抗体重链可变区的重链CDR。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽，且不结合eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列RIPAKTPPAPK(SEQ ID NO:78)内的表位。
本公开文本提供一种分离的抗体，其与包含下述各项的抗体竞争结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:25的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:29的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽，且不结合eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列RIPAKTPPAPK(SEQ ID NO:78)内的表位。
本公开文本提供一种分离的单克隆抗体，其特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，其中该分离的抗体包含1，2，3，4，5，或6种下述CDR：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:25的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的VL CDR2；(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的VL CDR3；(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ IDNO:29的VH CDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的VH CDR3。在一些情况中，该抗体包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:25的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ IDNO:27的VL CDR3。在一些情况中，该抗体包含：(iv)包含氨基酸序列SEQ IDNO:28的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:29的VH CDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽，且不结合eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列RIPAKTPPAPK(SEQ ID NO:78)内的表位。
本公开文本提供一种分离的人源化单克隆抗体，其包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区，其中该分离的抗体特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，且其中该分离的抗体包含：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:25的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:29的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的VHCDR3。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽，且不结合eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列RIPAKTPPAPK(SEQ ID NO:78)内的表位。
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本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体与包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ ID NO:40的抗体重链可变区的重链CDR的抗体竞争结合表位。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽，且不结合eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列RIPAKTPPAPK(SEQ ID NO:78)内的表位。
本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含轻链，该轻链包含包含氨基酸序列SEQID NO:39的抗体轻链可变区的轻链CDR。本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含重链，该重链包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:40的抗体重链可变区的重链CDR。本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ ID NO:40的抗体重链可变区的重链CDR。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽，且不结合eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列RIPAKTPPAPK(SEQ ID NO:78)内的表位。
本公开文本提供一种分离的抗体，其与包含下述各项的抗体竞争结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:33的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:34的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:35的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:36的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:37的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:38的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽，且不结合eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列RIPAKTPPAPK(SEQ ID NO:78)内的表位。
本公开文本提供一种分离的单克隆抗体，其特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，其中该分离的抗体包含1，2，3，4，5，或6种下述CDR：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:33的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:34的VL CDR2；(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:35的VL CDR3；(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:36的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ IDNO:37的VH CDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:38的VH CDR3。在一些情况中，该抗体包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:33的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:34的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ IDNO:35的VL CDR3。在一些情况中，该抗体包含：(iv)包含氨基酸序列SEQ IDNO:36的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:37的VH CDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:38的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽，且不结合eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列RIPAKTPPAPK(SEQ ID NO:78)内的表位。
本公开文本提供一种分离的人源化单克隆抗体，其包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区，其中该分离的抗体特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，且其中该分离的抗体包含：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:33的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:34的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:35的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:36的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:37的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:38的VHCDR3。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽，且不结合eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列RIPAKTPPAPK(SEQ ID NO:78)内的表位。
[7299-M2]
本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体与包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:47的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ ID NO:48的抗体重链可变区的重链CDR的抗体竞争结合表位。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，且不结合eTau1多肽，eTau2多肽，或eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ ID NO:79)内的表位。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽中的新表位。
本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含轻链，该轻链包含包含氨基酸序列SEQID NO:47的抗体轻链可变区的轻链CDR。本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含重链，该重链包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:48的抗体重链可变区的重链CDR。本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:47的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ ID NO:48的抗体重链可变区的重链CDR。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，且不结合eTau1多肽，eTau2多肽，或eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ IDNO:79)内的表位。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽中的新表位。
本公开文本提供一种分离的抗体，其与包含下述各项的抗体竞争结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:41的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:42的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:44的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:45的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:46的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，且不结合eTau1多肽，eTau2多肽，或eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ ID NO:79)内的表位。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽中的新表位。
本公开文本提供一种分离的单克隆抗体，其特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，其中该分离的抗体包含1，2，3，4，5，或6种下述CDR：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:41的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:42的VL CDR2；(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的VL CDR3；(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:44的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ IDNO:45的VH CDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:46的VH CDR3。在一些情况中，该抗体包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:41的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:42的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ IDNO:43的VL CDR3。在一些情况中，该抗体包含：(iv)包含氨基酸序列SEQ IDNO:44的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:45的VH CDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:46的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，且不结合eTau1多肽，eTau2多肽，或eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ ID NO:79)内的表位。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽中的新表位。
本公开文本提供一种分离的人源化单克隆抗体，其包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区，其中该分离的抗体特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，且其中该分离的抗体包含：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:41的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:42的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:44的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:45的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:46的VHCDR3。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，且不结合eTau1多肽，eTau2多肽，或eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ ID NO:79)内的表位。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽中的新表位。
[7299-M5]
本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体与包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:55的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ ID NO:56的抗体重链可变区的重链CDR的抗体竞争结合表位。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ ID NO:79)内的表位。
本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含轻链，该轻链包含包含氨基酸序列SEQID NO:55的抗体轻链可变区的轻链CDR。本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含重链，该重链包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:56的抗体重链可变区的重链CDR。本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:55的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ ID NO:56的抗体重链可变区的重链CDR。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ ID NO:79)内的表位。
本公开文本提供一种分离的抗体，其与包含下述各项的抗体竞争结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:49的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:50的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:51的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:52的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:53的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:54的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ ID NO:79)内的表位。
本公开文本提供一种分离的单克隆抗体，其特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，其中该分离的抗体包含1，2，3，4，5，或6种下述CDR：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:49的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:50的VL CDR2；(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:51的VL CDR3；(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:52的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ IDNO:53的VH CDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:54的VH CDR3。在一些情况中，该抗体包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:49的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:50的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ IDNO:51的VL CDR3。在一些情况中，该抗体包含：(iv)包含氨基酸序列SEQ IDNO:52的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:53的VH CDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:54的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ ID NO:79)内的表位。
本公开文本提供一种分离的人源化单克隆抗体，其包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区，其中该分离的抗体特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，且其中该分离的抗体包含：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:49的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:50的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:51的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:52的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:53的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:54的VHCDR3。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ ID NO:79)内的表位。
[7299-M9]
本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体与包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:63的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ ID NO:64的抗体重链可变区的重链CDR的抗体竞争结合表位。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ ID NO:79)内的表位。
本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含轻链，该轻链包含包含氨基酸序列SEQID NO:63的抗体轻链可变区的轻链CDR。本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含重链，该重链包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:64的抗体重链可变区的重链CDR。本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:63的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ ID NO:64的抗体重链可变区的重链CDR。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ ID NO:79)内的表位。
本公开文本提供一种分离的抗体，其与包含下述各项的抗体竞争结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:57的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:58的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:59的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:60的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:61的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:62的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ ID NO:79)内的表位。
本公开文本提供一种分离的单克隆抗体，其特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，其中该分离的抗体包含1，2，3，4，5，或6种下述CDR：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:57的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:58的VL CDR2；(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:59的VL CDR3；(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:60的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ IDNO:61的VH CDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:62的VH CDR3。在一些情况中，该抗体包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:57的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:58的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ IDNO:59的VL CDR3。在一些情况中，该抗体包含：(iv)包含氨基酸序列SEQ IDNO:60的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:61的VH CDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:62的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ ID NO:79)内的表位。
本公开文本提供一种分离的人源化单克隆抗体，其包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区，其中该分离的抗体特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，且其中该分离的抗体包含：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:57的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:58的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:59的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:60的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:61的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:62的VHCDR3。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ ID NO:79)内的表位。
[7297-2M1]
本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体与包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:71的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ ID NO:72的抗体重链可变区的重链CDR的抗体竞争结合表位。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau2多肽，eTau1多肽，eTau3多肽，和eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau2多肽，和eTau1多肽，但不结合eTau3多肽或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SSPGSPGTPGSR(SEQ ID NO:80)内的表位。
本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含轻链，该轻链包含包含氨基酸序列SEQID NO:71的抗体轻链可变区的轻链CDR。本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含重链，该重链包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:72的抗体重链可变区的重链CDR。本公开文本提供一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:71的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ ID NO:72的抗体重链可变区的重链CDR。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau2多肽，eTau1多肽，eTau3多肽，和eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau2多肽，和eTau1多肽，但不结合eTau3多肽或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SSPGSPGTPGSR(SEQ IDNO:80)内的表位。
本公开文本提供一种分离的抗体，其与包含下述各项的抗体竞争结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:65的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:66的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:67的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:68的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:69的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:70的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau2多肽，eTau1多肽，eTau3多肽，和eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau2多肽，和eTau1多肽，但不结合eTau3多肽或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SSPGSPGTPGSR(SEQ ID NO:80)内的表位。
本公开文本提供一种分离的单克隆抗体，其特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，其中该分离的抗体包含1，2，3，4，5，或6种下述CDR：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:65的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:66的VL CDR2；(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:67的VL CDR3；(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:68的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ IDNO:69的VH CDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:70的VH CDR3。在一些情况中，该抗体包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:65的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:66的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ IDNO:67的VL CDR3。在一些情况中，该抗体包含：(iv)包含氨基酸序列SEQ IDNO:68的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:69的VH CDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:70的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau2多肽，eTau1多肽，eTau3多肽，和eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau2多肽，和eTau1多肽，但不结合eTau3多肽或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SSPGSPGTPGSR(SEQ ID NO:80)内的表位。
本公开文本提供一种分离的人源化单克隆抗体，其包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区，其中该分离的抗体特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，且其中该分离的抗体包含：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:65的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:66的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:67的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:68的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:69的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:70的VHCDR3。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau2多肽，eTau1多肽，eTau3多肽，和eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau2多肽，和eTau1多肽，但不结合eTau3多肽或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SSPGSPGTPGSR(SEQ ID NO:80)内的表位。
重组抗体
主题抗Tau抗体可以是重组的。该抗体可含有轻和/或重链。用于生成重组抗体的方法是本领域已知的。例如，将编码抗体或至少重链多肽的互补决定区(CDR)或至少轻链多肽的CDR的核酸直接导入宿主细胞，并在足以诱导所编码的抗体表达的条件下温育细胞。重组抗体可以是由宿主细胞中的内源糖基化酶糖基化的；重组抗体可以是未糖基化的；或者，重组抗体可具有改变的糖基化样式。
在抗体是重组的情况中，抗体可以是嵌合的。嵌合抗体是包含人和非人部分的免疫球蛋白分子。更具体地，人源化嵌合抗体的抗原结合区(或可变区)衍生自非人来源(例如鼠类)，而嵌合抗体的恒定区(其赋予免疫球蛋白以生物学效应器功能)衍生自人来源。嵌合抗体可具有非人抗体分子的抗原结合特异性和由人抗体分子赋予的效应器功能。多种生成嵌合抗体的方法是本领域技术人员公知的。一种备选办法是通过重组DNA技术连接非人抗体的CDR区与人恒定区，由此生成人源化抗体。
涵盖对主题Tau肽特异性的重组融合抗体，其中该抗体经过修饰以包括异源蛋白。例如，重链多肽和/或轻链多肽可连接报告蛋白或具有期望治疗效果的蛋白质。报告蛋白可以是荧光蛋白。抗体还可以缀合至第二抗体(或至少其抗原结合部分)。在提供核酸序列时，用于生成感兴趣融合蛋白的方法是本领域公知的。
人源化和人抗体
框架区的人源化降低了抗体在人中引发人抗小鼠抗体(HAMA)应答的风险。可以实施本领域公认的测定免疫应答的方法以在特定患者中或在临床试验期间监测HAMA应答。可以在开始实施疗法时及贯穿疗法实施过程对施用人源化抗体的患者给予免疫原性评估。例如，使用本领域技术人员己知的方法，包括表面等离子体共振技术(BIACORE)和/或固相酶联免疫吸附测定法(ELISA)分析，通过检测来自患者的血清样品中的针对人源化治疗剂的抗体来测量HAMA应答。在许多情况中，主题的人源化抗Tau抗体基本上不引发人受试者中的HAMA应答。在一些情况中，主题的人源化抗Tau抗体具有降低的免疫原性潜力，如通过使用CD8+消减的外周血单核细胞实施的EpiScreenTM测定法所测定的那样。在一些情况中，主题的人源化抗Tau抗体展现出小于2.0的刺激指数(Stimulation Index)。
基于其对CDR构象和/或对抗原的结合的可能影响，选择来自人可变区框架残基的某些氨基酸用于取代。鼠CDR区与人可变框架区的非天然毗邻可以导致非天然的构象约束，其导致结合亲和力的丧失，除非通过取代某些氨基酸残基进行校正。
可以通过计算机建模来部分确定用于取代的氨基酸残基选择。用于产生免疫球蛋白分子的三维图像的计算机硬件和软件是本领域中己知的。一般而言，分子模型的产生是从其免疫球蛋白链或域的解析结构开始的。将要建模的链与已经解析了三维结构的链或域进行氨基酸序列相似性的比较，并选择显示最大序列相似性的链或域作为构建分子模型的起始点。选择共享至少50％序列同一性的链或域进行建模，例如选择那些共享至少60％，70％，80％，90％，或超过90％序列同一性或更多的链或域进行建模。将已解析的起始结构修饰为容许所建模的免疫球蛋白链或域中的实际氨基酸和起始结构中的氨基酸之间的差异。然后，将经修饰的结构装配成组合的免疫球蛋白。最后，通过能量最小化及通过验证所有原子在彼此的合适距离内并且键长和键角在化学可接受限度内，从而改进模型。
CDR和框架区如Kabat,Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institutes of Health,Bethesda,Md.,1987和1991)限定。备选结构限定已经由Chothia等,J.Mol.Biol.196:901(1987)；Nature 342:878(1989)；和J.Mol.Biol.186:651(1989)(collectively referred to as“Chothia”)提出。在如Kabat(见上文)所限定的框架残基构成如Chothia(见上文)限定的结构环残基时，可以选择存在于小鼠抗体中的氨基酸用于人源化抗体中的取代。“与CDR区邻近”的残基包括刚好与人源化免疫球蛋白链的一级序列中的一个或多个CDR邻近的位置中的氨基酸残基，例如在刚好与Kabat限定的CDR，或Chothia(参见例如Chothia和Lesk JMB 196:901(1987))限定的CDR邻近的位置中的氨基酸残基。这些氨基酸很可能与CDR中的氨基酸相互作用，并且若从接受体选择，则可能扭曲供体CDR并降低亲和力。此外，邻近的氨基酸可以与抗原直接相互作用(Amit等,Science,233:747(1986))，并且从供体选择这些氨基酸对于保持提供初始抗体亲和力的所有抗原接触而言可以是期望的。
主题抗Tau抗体在一些实施方案中会是人源化的。可以替代亲本非人(例如小鼠单克隆)抗体的框架区中的氨基酸以生成经修饰的抗体，它在人中的免疫原性比亲本非人抗体要低。可以使用本领域已知的多种技术来人源化抗体。如下鉴定框架替代，即对CDR和框架残基的相互作用建模来鉴定对于抗原结合重要的框架残基和比较序列以鉴定在特定位置不常见的框架残基。
抗体还可以是完全人抗体。人抗体主要由特征性人多肽序列构成。主题人抗体可以通过极其多种方法来生成。例如，最初可以在三源杂交瘤(trioma)细胞(自三种细胞(两种人的和一种小鼠的)传下来)中生成人抗体。克隆并在其它细胞(特别是非人哺乳动物细胞)中表达编码抗体的基因。通过三源杂交瘤技术生成人抗体的一般办法在本领域中已有描述。
因而，本公开文本涵盖包含编码结合本公开文本的Tau肽的抗体的核酸序列的DNA分子。本公开文本进一步涵盖含有编码主题抗体至少一个重链多肽CDR或至少一个轻链多肽CDR的外源多核苷酸的重组宿主细胞。
scFv
在一些实施方案中，主题抗体包含单一多肽链中的抗Tau抗体重链CDR和抗Tau抗体轻链CDR，例如在一些实施方案中，主题抗体是scFv。在一些实施方案中，主题抗体以N末端至C末端的次序包含：长度约5个氨基酸至约25个氨基酸的第一氨基酸序列；抗Tau抗体的重链CDR1；长度约5个氨基酸至约25个氨基酸的第二氨基酸序列；抗Tau抗体的重链CDR2；长度约5个氨基酸至约25个氨基酸的第三氨基酸序列；抗Tau抗体的重链CDR3；长度约5个氨基酸至约25个氨基酸的第四氨基酸序列；抗Tau抗体的轻链CDR1；长度约5个氨基酸至约25个氨基酸的第五氨基酸序列；抗Tau抗体的轻链CDR2；长度约5个氨基酸至约25个氨基酸的第六氨基酸序列；抗Tau抗体的轻链CDR3；和长度约5个氨基酸至约25个氨基酸的第七氨基酸序列。
在一些实施方案中，主题抗Tau抗体包含scFv多聚体。例如，在一些实施方案中，主题抗Tau抗体是scFv二聚体(例如包含2个串联的scFv(scFv2))，scFv三聚体(例如包含3个串联的scFv(scFv3))，scFv四聚体(例如包含4个串联的scFv(scFv4))，或者是超过4个scFv(例如串联)的多聚体。scFv单体可以由接头串联连接，所述接头长度为约2个氨基酸至约10个氨基酸(aa)，例如长度为2个aa，3个aa，4个aa，5个aa，6个aa，7个aa，8个aa，9个aa，或10个aa。合适的接头包括例如(Gly)x，其中x是2至10的整数。其它合适的接头是上文讨论的那些接头。在一些实施方案中，主题scFv多聚体中的每个scFv单体是人源化的，如上文所述。
抗体修饰
主题抗Tau抗体可包含一处或多处修饰。
在一些实施方案中，主题抗体包含羧基端的游离硫醇(-SH)基团，其中所述游离硫醇基团可以用于将抗体附接于第二多肽(例如另一抗体，包括主题抗体)，支架，载体，等等。
在一些实施方案中，主题抗体包含一个或多个非天然存在的氨基酸。在一些实施方案中，非天然编码的氨基酸包含羰基基团，乙酰基基团，氨氧基基团，肼基团，酰肼基团，氨基脲基团，叠氮化物基团，或炔基团。关于合适的非天然存在的氨基酸，参见例如美国专利No.7,632,924。非天然存在的氨基酸的纳入可以提供与聚合物，第二多肽，支架等的连接。例如，可以通过使包含羰基基团的水溶性聚合物(例如PEG)与主题抗体起反应生成与水溶性聚合物连接的主题抗体，其中主题抗体包含含有氨氧基，肼，酰肼或氨基脲基团的非天然编码的氨基酸。作为另一个例子，可以通过使包含含有炔的氨基酸的主题抗体与包含叠氮化物模块的水溶性聚合物(例如PFG)起反应生成与水溶性聚合物连接的主题抗体；在一些实施方案中，所述叠氮化物或炔基团经由酰胺连接与PEG分子连接。“非天然编码的氨基酸”指不是20个常见的氨基酸或吡咯赖氨酸或硒代半胱氨酸之一的氨基酸。可以与术语“非天然编码的氨基酸”同义使用的其它术语是“非天然氨基酸”，“非自然氨基酸”，“非天然存在的氨基酸”和其各种以连字符号连接和非以连字符号连接的型式。术语“非天然编码的氨基酸”还包括但不限于如下的氨基酸，其通过修饰(例如翻译后修饰)天然编码的氨基酸(包括但不限于20个常见的氨基酸或吡咯赖氨酸或硒代半胱氨酸)而存在，但是它们自身不被翻译复合物天然地掺入到生长中的多肽链中。此类非天然存在的氨基酸的例子包括但不限于N-乙酰基葡糖胺基-L-丝氨酸，N-乙酰基葡糖胺基-L-苏氨酸，和O-磷酸酪氨酸。
在一些实施方案中，主题抗体与聚合物(例如除多肽以外的聚合物)连接(例如共价连接)。合适的聚合物包括例如生物相容性聚合物和水溶性生物相容性聚合物。合适的聚合物包括合成聚合物和天然存在的聚合物。合适的聚合物包括例如经取代的或未经取代的直链或支链聚亚烷基，聚亚烯基或聚氧亚烷基聚合物或分支或未分支的多糖，例如同多糖或杂多糖。合适的聚合物包括例如乙烯乙烯醇共聚物(以通用名称EVOH或商品名EVAL公知)；聚甲基丙烯酸丁酯；聚(羟基戊酸酯)；聚(L-乳酸)；聚己酸内酯；聚(丙交酯-共-乙交酯)；聚(羟基丁酸酯)；聚(羟基丁酸酯-共-戊酸酯)；聚二恶烷酮(polydioxanone)；聚原酸酯(polyorthoester)；聚酐；聚(乙醇酸)；聚(D,L-乳酸)；聚(乙醇酸-共-三亚甲基碳酸酯(trimethylene carbonate))；聚磷酸酯(polyphosphoester)；聚磷酸酯尿烷(polyphosphoester urethane)；聚(氨基酸)；氰基丙烯酸酯类(cyanoacrylates)；聚(三亚甲基碳酸酯)；聚(亚氨基碳酸酯)；共聚(醚-酯)(例如聚(环氧乙烷)-聚(乳酸)(PEO/PLA)共聚物)；聚亚烷基草酸酯(polyalkylene oxalates)；聚磷腈(polyphosphazenes)；生物分子，如纤维蛋白，纤维蛋白原，纤维素，淀粉，胶原和透明质酸；聚氨酯(polyurethanes)；硅酮；聚酯；聚烯烃；聚异丁烯和乙烯-α烯烃(alphaolefin)共聚物；丙烯酸聚合物和共聚物；乙烯基卤化物(vinyl halide)聚合物和共聚物，如聚氯乙烯；聚乙烯醚，如聚乙烯甲醚；聚偏二乙烯卤化物(polyvinylidene halides)，诸如聚偏二氟乙烯(polyvinylidene fluoride)和聚偏二氯乙烯(polyvinylidene chloride)；聚丙烯腈；聚乙烯酮(polyvinyl ketones)；聚乙烯芳香烃(polyvinyl aromatics)，诸如聚苯乙烯；聚乙烯酯，如聚乙酸乙烯酯；乙烯基单体彼此的共聚物和乙烯基单体与烯烃的共聚物(copolymers of vinyl monomers with each other andolefins)，如乙烯-甲基丙烯酸甲酯共聚物，丙烯腈-苯乙烯共聚物，ABS树脂，和乙烯-乙酸乙烯酯共聚物；聚酰胺，如Nylon 66和聚己内酰胺；醇酸树脂；聚碳酸酯；聚甲醛(polyoxymethylenes)；聚酰亚胺(polyimides)；聚醚；环氧树脂；聚氨酯；人造丝(rayon)；人造丝-三乙酸酯；纤维素；乙酸纤维素；丁酸纤维素；乙酸丁酸纤维素；赛璐玢(cellophane)；硝酸纤维素；丙酸纤维素；纤维素醚；无定形Teflon；聚(乙二醇)；和羧甲基纤维素。
合适的合成聚合物包括未经取代的和经取代的直链或支链聚(乙二醇)，聚(丙二醇)，聚(乙烯醇)，及其衍生物，例如取代的聚(乙二醇)，如甲氧基聚(丙二醇)，及其衍生物。合适的天然存在的聚合物包括例如白蛋白，直链淀粉(amylose)，右旋糖苷，糖原，及其衍生物。
合适的聚合物的平均分子量范围可以是500Da至50000Da，例如5000Da至40000Da，或25000至40000Da。例如，在一些实施方案中，其中主题抗体包含聚(乙二醇)(PEG)或甲氧基聚(乙二醇)聚合物，PEG或甲氧基聚(乙二醇)聚合物的分子量范围可以是约0.5千道尔顿(kDa)至1kDa，约1kDa至5kDa，5kDa至10kDa，10kDa至25kDa，25kDa至40kDa，或40kDa至60kDa。
如上文所述，在一些实施方案中，主题抗体与PEG聚合物共价连接。在一些实施方案中，主题scFv多聚体与PEG聚合物共价连接。参见例如Albrecht等(2006)J.Immunol.Methods 310:100。适于蛋白质的聚乙二醇化的方法和试剂是本领域中公知的，并且可以参见例如美国专利5,849,860。适合于与蛋白质缀合的PEG于室温一般在水中可溶，并且具有通式R(O-CH2-CH2)nO-R，其中R是氢或保护基，诸如烃基或烷醇基团，且其中n是1至1000的整数。在R是保护基的情况下，其一般具有1至8个碳。
与主题抗体缀合的PEG可以是线性的。与主题蛋白质缀合的PEG也可以是分支的。分支的PEG衍生物，诸如美国专利No.5,643,575中描述的那些，“星形PEG”和多臂PEG，诸如Shearwater Polymers，Inc.产品目录“聚乙二醇衍生物1997-1998”中描述的那些。星形PEG在本领域中有描述，包括例如美国专利No.6,046,305。
主题抗体可以是糖基化的，例如主题抗体可以包含共价连接的碳水化合物或多糖模块。抗体的糖基化通常是N-连接的或O-连接的。N-连接的指碳水化合物模块附接于天冬酰胺残基的侧链。三肽序列天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸(其中X是除了脯氨酸外的任意氨基酸)是用于将碳水化合物模块酶促附接于天冬酰胺侧链的识别序列。因此，这些三肽序列中的任一种在多肽中的存在都创建了潜在的糖基化位点。O-连接的糖基化指将糖类N-乙酰半乳糖胺，半乳糖，或木糖之一附接于羟基氨基酸，最常见是丝氨酸或苏氨酸，尽管也可以使用5-羟基脯氨酸或5-羟基赖氨酸。
通过改变氨基酸序列，使得其含有一个或多个上文描述的三肽序列，从而方便实现向抗体添加糖基化位点(用于N-连接的糖基化位点)。也可以通过对初始抗体的序列添加或取代一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基，从而进行改变(用于O-连接的糖基化位点)。类似地，可以通过抗体的天然糖基化位点内的氨基酸改变来实现糖基化位点的消除。
在一些实施方案中，主题抗体会包含“不透射线的”标记物，例如使用例如x-射线可以容易显现的标记物。不透射线的材料是本领域技术人员公知的。最常见的不透射线的材料包括碘化物，溴化物或钡盐。其它不透射线的材料也是己知的，并且包括但不限于有机铋衍生物(参见例如美国专利No.5,939,045)，不透射线的多脲烷(multiurethanes)(参见美国专利No.5,346,981)，有机铋(organobismuth)合成物(参见例如美国专利No.5,256,334)，不透射线的钡多聚体复合物(参见例如美国专利No.4,866,132)，等等。
例如，可以使用戊二醛，同双功能***联剂，或异双功能***联剂将主题抗体与第二模块(例如脂质，除主题抗体以外的多肽，合成聚合物，碳水化合物，等等)共价连接。戊二醛与多肽经由其氨基模块交联。同双功能***联剂(例如同双功能性亚氨酸酯(imidoester)，同双功能性N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯，或同双功能性巯基反应***联剂)含有两个或更多个相同的反应性模块，并且可以用于一步反应程序，其中将交联剂添加至含有要连接的多肽的混合物的溶液。同双功能性NHS酯和亚氨酸酯交联含有氨基的多肽。在轻度碱性pH中，亚氨酸酯仅与伯胺起反应以形成亚氨酰氨(imidoamides)，并且交联多肽的总电荷不受影响。同双功能性巯基反应***联剂包括二马来酰亚胺己烷(bismaleimidhexane，BMH)，1,5-二氟-2,4-二硝基苯(DFDNB)，和1,4-二-(3',2'-吡啶二硫代)丙酰胺丁烷(1,4-di-(3',2'-pyridyldithio)propinoamidobutane,DPDPB)。
异双功能***联剂具有两个或更多个不同的反应性模块(例如胺反应性模块和巯基反应性模块)，并且经由胺或巯基反应性模块与多肽之一交联，然后经由未反应的模块与另一个多肽起反应。多种异双功能性卤乙酰基(haloacetyl)交联剂是可用的，吡啶基二硫化物交联剂亦然。碳化二亚胺(carbodiimides)是用于偶联羧基与胺，产生酰胺键的异双功能***联剂的一个经典的例子。
固定化
可以将主题抗体在固体支持物上固定化。合适的支持物是本领域中公知的，并且特别包括商品化的柱材料，聚苯乙烯珠，胶乳珠，磁珠，胶体金属颗粒，玻璃和/或硅芯片和表面，硝酸纤维素条，尼龙膜，片，反应盘(例如多孔板)的孔，塑料管，等等。固体支持物可以包括多种物质之任一，包括例如玻璃，聚苯乙烯，聚氯乙烯，聚丙烯，聚乙烯，聚碳酸酯，右旋糖苷，尼龙，直链淀粉，天然的和经修饰的纤维素，聚丙烯酰胺，琼脂糖，和磁铁(magnetite)。适合于将主题抗体固定于固体支持物上的方法是公知的，并且包括但不限于离子，疏水性，共价相互作用，等等。例如在水性溶液中，固体支持物可以是可溶的或不溶的。在一些实施方案中，合适的固体支持物在水性溶液中一般是不溶的。
可检测标记物
在一些实施方案中，主题抗体包含可检测标记物。合适的可检测标记物包括通过分光术，光化学，生物化学，免疫化学，电学，光学或化学手段可检测的任何成分。合适的可检测标记物包括但不限于磁珠(例如DynabeadsTM)，荧光染料(例如异硫氰酸荧光素，德克萨斯红(texas red)，罗丹明(rhodamine)，绿色荧光蛋白，红色荧光蛋白，黄色荧光蛋白，等等)，放射性标记物(例如3H，125I，35S，14C，或32P)，酶(例如辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶，萤光素酶，和在酶联免疫吸附测定法(ELISA)中通常使用的其它物质)，和比色标记物，诸如胶体金或有色玻璃或塑料(例如聚苯乙烯，聚丙烯，乳胶，等等)珠。
在一些实施方案中，主题抗体包含对比剂或放射性同位素，其中对比剂或放射性同位素是适合于用于成像，例如对人实施的成像程序的。标记物的非限制性例子包括放射性同位素，诸如1231I(碘)，18F(氟)，99Tc(锝)，111In(铟)，和67Ga(镓)，和对比剂诸如钆(Gd)，镝，和铁。放射性Gd同位素(153Gd)也是可用的，并且适合于非人哺乳动物中的成像程序。可以使用标准的技术来标记主题抗体。例如，可以使用氯胺T或1,3,4,6-四氯-3α,6α-二苯基甘脲来碘化主题抗体。对于氟化，通过氟化物离子置换反应在合成期间对主题抗体添加氟。关于具有此类放射性同位素的蛋白质合成的综述，参见Muller-Gartner,H.,TIB Tech.,16:122-130(1998)和Saji,H.,Crit.Rev.Ther.Drug Carrier Syst.,16(2):209-244(1999)。也可以通过标准技术用对比剂来标记主题抗体。例如，可以通过将低分子Gd螯合物，如Gd二乙烯三胺五乙酸(GdDTPA)或Gd四氮杂环十二烷四乙酸(GdDOTA)缀合至抗体，从而用Gd标记主题抗体。参见Caravan等,Chem.Rev.99:2293-2352(1999)和Lauffer等,J.Magn.Reson.Imaging,3:11-16(1985)。例如，可以通过将多赖氨酸-Gd螯合物缀合至抗体，从而用Gd标记主题抗体。参见例如Curtet等,Invest.Radiol.,33(10):752-761(1998)。或者，可以将包含Gd螯合剂脂质的顺磁性聚合脂质体与亲合素和生物素化的抗体一起温育，从而用Gd标记主题抗体。参见例如Sipkins等,NatureMed.,4:623-626(1998).
可以与主题蛋白连接的合适的荧光蛋白包括但不限于来自维多利亚多管水母属(Aequoria victoria)的绿色荧光蛋白或其突变体或衍生物，例如记载于美国专利No.6,066,476；6,020,192；5,985,577；5,976,796；5,968,750；5,968,738；5,958,713；5,919,445；5,874,304的；例如增强的GFP，可购自例如Clontech，Inc.的许多此类GFP；红色荧光蛋白；黄色荧光蛋白；来自珊瑚虫(Anthozoan)物种的多种荧光蛋白和有色蛋白的任一种；如记载于例如Matz等(1999)Nature Biotechnol.17:969-973中的；等等。
融合配偶
在一些实施方案中，主题抗体会连接(例如共价或非共价连接)至融合配偶，例如配体；表位标签；肽；抗体以外的蛋白质；等等。合适的融合配偶包括这样的肽和多肽，所述肽和多肽赋予增强的体内稳定性(例如增强的血清半衰期)；提供纯化便利，例如(His)n，例如6His，等等；提供融合蛋白自细胞的分泌；提供表位标签，例如谷胱甘肽-S-转移酶(GST)，凝集素(HA；例如YPYDVPDYA；SEQ ID NO:74)，FLAG(例如DYKDDDDK；SEQ IDNO:75)，c-myc(例如EQKLISEEDL；SEQ ID NO:76)，等等；提供可检测信号，例如生成可检测产物的酶(例如β-半乳糖苷酶，萤光素酶，辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶，等等)，或自身可检测的蛋白质，例如绿色荧光蛋白，红色荧光蛋白，黄色荧光蛋白，等等；提供多聚化；等等。
融合物还可以包含亲和域，包括可以与结合配偶相互作用的肽序列，例如固体支持物上固定化的肽序列，其可用于鉴定或纯化。连续的单一氨基酸(诸如组氨酸)在与蛋白质融合时可以用于通过对树脂柱，诸如镍Sepharose的高亲和力结合进行的融合蛋白的一步纯化。例示性的亲和域包括(His)5(HHHHH)(SEQ ID NO:81)，(His)6(HHHHHH)(SEQ ID NO:82)，C-myc(EQKLISEEDL)(SEQ ID NO:76)，Flag(DYKDDDDK)(SEQ ID NO:75)，StrepTag(WSHPQFEK)(SEQ ID NO:83)，血细胞凝集素，例如HA标签(YPYDVPDYA；SEQ ID NO:74)，谷胱甘肽-S-转移酶(GST)，硫氧还蛋白，纤维素结合域，RYIRS(SEQ ID NO:84)，Phe-His-His-Thr(SEQ ID NO:85)，几丁质(chitin)结合域，S-肽，T7肽，SH2域，C末端RNA标签，WEAAAREACCRECCARA(SEQ ID NO:86)，金属结合域，例如锌结合域或钙结合域，如来自钙结合蛋白的那些，例如钙调蛋白，肌钙蛋白C，钙调磷酸酶B(calcineurin B)，肌球蛋白轻链，恢复蛋白，S-调制蛋白(modulin)，视锥蛋白，VILIP，神经钙蛋白，海马钙蛋白(hippocalcin)，frequenin，钙牵蛋白(caltractin)，钙激活中性蛋白酶大亚基，S100蛋白，小清蛋白(parvalbumin)，钙结合蛋白D9K，钙结合蛋白D28K，和钙视网膜蛋白(calretinin)，内含肽，生物素，链霉亲合素，MyoD，亮氨酸拉链序列，和麦芽糖结合蛋白。
别的修饰
在一些实施方案中，将主题抗体修饰为包含碳水化合物模块，其中所述碳水化合物模块可以与抗体共价连接。在一些实施方案中，将主题抗体修饰为包含脂质模块，其中所述脂质模块可以与抗体共价连接。合适的脂质模块包括例如N-脂肪酰基基团，如N-月桂酰，N-油酰，等等；脂肪胺诸如十二烷基胺，油酰胺，等等；C3-C16长链脂肪族脂质；等等。参见例如美国专利No.6,638,513)。在一些实施方案中，将主题抗体掺入脂质体中。
主题抗Tau抗体可以经过修饰以包括相对于未缀合材料改变细胞摄取的模块。经修饰的抗体可展现相对于未缀合材料升高的细胞摄取。在备选实施方案中，经修饰的抗体展现相对于未修饰的抗体降低的细胞摄取。在这个方面，细胞摄取的效率可以通过连接推动胞吞的肽或蛋白质来提高或降低。例如，可以将给定抗体连接至靶受体的配体或更加容易通过胞吞机制而被吞入的大型分子(诸如另一抗体)。然后，抗体或其它配体可以通过胞吞而内在化，而且当胞吞囊泡与溶酶体融合时，有效载荷通过酸水解或酶活性而释放。因此，缀合可以是相对于未缀合抗体提高胞吞的缀合。为了降低细胞摄取，经修饰的抗体可包括将该抗体保留在细胞的表面上的配体，这作为细胞摄取的控制可能是有用的，或者在一些情况中，降低在一种细胞类型中的摄取同时提高在其它细胞类型中的摄取。
主题抗Tau抗体可包含一个或多个模块，该模块可以直接或经接头(例如柔性接头)连接(例如共价或非共价连接)至该抗Tau抗体。例如，在主题抗Tau抗体是包含抗Tau抗体和异源融合配偶多肽的融合蛋白的情况中，该异源融合配偶可以经接头连接至该抗Tau抗体。
对于在将模块附着至主题抗Tau抗体中使用合适的接头包括“柔性接头”。若存在的话，接头分子一般具有足够的长度，使得抗Tau抗体和连接载体容许抗Tau抗体和载体之间的一些灵活运动。接头分子一般长约6-50个原子。例如，接头分子也可以是芳基乙炔，含有2-10个单体单元的乙二醇寡聚物，二胺(diamines)，二酸(diacids)，氨基酸，或其组合。根据本发明可以使用能够结合多肽的其它接头分子。
合适的接头可以容易地选择，并且可以具有多种不同长度任一，如1个氨基酸(例如Gly)至20个氨基酸，2个氨基酸至15个氨基酸，3个氨基酸至12个氨基酸，包括4个氨基酸至10个氨基酸，5个氨基酸至9个氨基酸，6个氨基酸至8个氨基酸，或7个氨基酸至8个氨基酸，并且可以是1，2，3，4，5，6或7个氨基酸。
例示性的柔性接头包括甘氨酸聚合物(G)n，甘氨酸-丝氨酸聚合物(其中n是至少1的整数)，甘氨酸-丙氨酸聚合物，丙氨酸-丝氨酸聚合物，和本领域中己知的其它柔性接头。甘氨酸和甘氨酸-丝氨酸聚合物是感兴趣的，因为这两种氨基酸都是相对无结构的，因此可以充当组分间的中性系链。甘氨酸聚合物是特别感兴趣的，因为甘氨酸甚至比丙氨酸得到显著更多的phi-psi空间，并且比具有更长侧链的残基受到的约束小得多(参见Scheraga,Rev.Computational Chem.11173-142(1992))。例示性的柔性接头包括但不限于GGSG(SEQ ID NO:87)，GGSGG(SEQ ID NO:88)，GSGSG(SEQ ID NO:89)，GSGGG(SEQ ID NO:90)，GGGSG(SEQ ID NO:91)，GSSSG(SEQ ID NO:92)等。本领域技术人员会认可与上文描述的任何元件缀合的肽的设计可以包含接头，该接头是完全或部分柔性的，从而接头可以包含柔性接头及赋予较小柔性结构的一个或多个部分。
生产抗Tau抗体的方法
可以通过任何己知的方法，例如用于蛋白质合成的常规合成方法；重组DNA方法等等来生产主题抗体。
当主题抗体是单链多肽时，其可以使用标准的化学肽合成技术来合成。当通过化学合成多肽时，可以经液相或固相进行合成。固相多肽合成(SPPS)(其中将序列的C末端氨基酸附接于不溶性支持物，接着序贯添加序列中剩余的氨基酸)是适合于主题抗体的化学合成的方法的例子。各种形式的SPPS，诸如Fmoc和Boc可用于合成主题抗体。用于固相合成的技术描述于Barany和Merrifield,Solid-Phase Peptide Synthesis；第3-284页于The Peptides:Analysis,Synthesis,Biology.第2卷：Special Methods in Peptide Synthesis,Part A.,Merrifield,等J.Am.Chem.Soc.,85:2149-2156(1963)；Stewart等,Solid PhasePeptide Synthesis,2nd ed.Pierce Chem.Co.,Rockford,Ill.(1984)；和Ganesan A.2006Mini Rev.Med Chem.6:3-10和Camarero JA等2005Protein Pept Lett.12:723-8中。简言之，用其上构建有肽链的功能性单元处理小的不溶性多孔珠。在偶联/去保护的重复循环后，将附接的固相的游离N末端胺与单个受N保护的氨基酸单元偶联。然后，将此单元去保护，露出可以与别的氨基酸附接的新的N末端胺。所述肽保持固定在固相上，并且经历过滤过程，之后将其切掉。
可以使用标准重组方法来生产主题抗体。例如，将编码轻链和重链可变区(其任选地连接至恒定区)的核酸***表达载体中。可以将轻链和重链克隆于相同或不同表达载体中。将编码免疫球蛋白链的DNA区段与确保免疫球蛋白多肽表达的表达载体中的控制序列可操作地连接。表达控制序列包括但不限于启动子(例如天然关联的或异源的启动子)，信号序列，增强子元件，和转录终止序列。表达控制序列可以是载体中的真核启动子***，所述载体其能够转化或转染真核宿主细胞(例如COS或CHO细胞)。一旦将载体掺入合适的宿主中，在适合于核苷酸序列的高水平表达及抗体的收集和纯化的条件下维持宿主。
由于代码的简并性，每种免疫球蛋白氨基酸序列可以由多种核酸序列编码。可以通过从头固相DNA合成或者通过所需多核苷酸的早期制备变体的聚合酶链式反应(PCR)诱变生成期望的核酸序列。寡核苷酸介导的诱变是适合于制备靶多肽DNA的取代，缺失和***突变的方法的例子。参见Adelman等，DNA 2:183(1983)。简言之，通过将编码所需突变的寡核苷酸与单链DNA模板杂交改变靶多肽DNA。在杂交后，使用DNA聚合酶合成模板的完整第二互补链，其掺入寡核苷酸引物，并且编码靶多肽DNA中的选定变化。
合适的表达载体通常在宿主生物体中作为附加体或作为宿主染色体DNA的整合部分可复制。通常，表达载体含有选择标志物(例如氨苄青霉素抗性，潮霉素抗性，四环素抗性，卡那霉素抗性或新霉素抗性)以容许用期望的DNA序列转化的那些细胞的检测。
大肠杆菌(Escherichia coli)是可以用于克隆主题抗体编码多核苷酸的原核宿主细胞的例子。适合于使用的其它微生物宿主包括杆菌，诸如枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和其它肠杆菌科(enterobacteriaceae)，诸如沙门氏菌属(Salmonella)，沙雷氏菌属(Serratia)，和各种假单胞菌属(Pseudomonas)物种。在这些原核宿主中，也可以生成表达载体，其通常会含有与宿主细胞相容的表达控制序列(例如复制起点)。另外，会存在许多公知的启动子，诸如乳糖启动子***，色氨酸(trp)启动子***，beta-内酰胺酶启动子***，或来自噬菌体λ的启动子***。启动子通常会控制表达，任选在操纵基因序列的情况中，并且具有核糖体结合位点序列等，以启动并完成转录和翻译。
其它微生物，诸如酵母也可用于表达。酵母(例如酿酒酵母(S.cerevisiae))和毕赤酵母(Pichia)是合适的酵母宿主细胞的例子，其中合适的载体根据需要具有表达控制序列(例如启动子)，复制起点，终止序列等。典型的启动子包含3-磷酸甘油酸激酶和其它糖分解酶。诱导型酵母启动于特别包括来自醇脱氢酶，异细胞色素(isocytochrome)C，和负责麦芽糖和半乳糖利用的酶的启动子。
在微生物外，哺乳动物细胞(例如在体外细胞培养物中培养的哺乳动物细胞)也可以用于表达并生成本发明的抗Tau抗体(例如编码主题抗Tau抗体的多核苷酸)。参见Winnacker,From Genes to Clones,VCH Publishers,N.Y.,N.Y.(1987)。合适的哺乳动物宿主细胞包括CHO细胞系，各种Cos细胞系，HeLa细胞，骨髓瘤细胞系，和经转化的B细胞或杂交瘤。用于这些细胞的表达载体可以包含表达控制序列，如复制起点，启动子和增强子(Queen等,Immunol.Rev.89:49(1986))，以及必需的加工信息位点，诸如核糖体结合位点，RNA剪接位点，多聚腺苷酸化位点，和转录终止子序列。合适的表达控制序列的例子是免疫球蛋白基因，SV40，腺病毒，牛***瘤病毒，巨细胞病毒等衍生的启动子。参见Co等,J.Immunol.148:1149(1992)。
一旦合成(化学或重组方式)，可以依照本领域的标准规程，包括硫酸铵沉淀，亲和柱，柱层析，高效液相层析(HPLC)，凝胶电泳等来纯化主题抗体的全抗体，其二聚体，单独的轻链和重链，或其它形式(例如scFv等)(一般参见Scopes,Protein Purification(Springer-Verlag,N.Y.,(1982))。主题抗体可以是基本上纯的，例如至少约80％至85％纯的，至少约85％至90％纯的，至少约90％至95％纯的，或98％至99％纯的或更多，例如不含污染物，所述污染物如细胞碎片，除主题抗体以外的大分子，等等。
编码抗Tau抗体的核酸
本公开文本提供包含编码主题抗Tau抗体的核苷酸序列的核酸。本公开文本提供包含编码本公开文本的抗Tau抗体的核苷酸序列的重组表达载体，其中该核苷酸序列可操作连接至在真核细胞中有活性的转录控制元件。本公开文本提供经本公开文本的重组表达载体遗传修饰的体外宿主细胞(例如细菌细胞；真核细胞，诸如酵母细胞或哺乳动物细胞系)。
可以将编码主题抗体的核苷酸序列可操作地连接至一种或多种容许核苷酸序列在意图的靶细胞(例如经遗传修饰以合成编码的抗体的细胞)中表达的调控元件，如启动子和增强子。
合适的启动子和增强子元件是本领域中己知的。对于在细菌细胞中表达而言，合适的启动子包括但不限于lacI，lacZ，T3，T7，gpt，λP和trc。对于在真核细胞中表达，合适的启动子包括但不限于轻链和/或重链免疫球蛋白基因启动子和增强子元件；巨细胞病毒立即早期启动子(immediate earlypromoter)；单纯疱疹病毒胸苷激酶启动子；早期和晚期SV40启动子；存在于来自逆转录病毒的长末端重复中的启动子；小鼠金属硫蛋白-I启动子；和各种本领域己知的组织特异性启动子。
在一些实施方案中，例如对于在酵母细胞中的表达而言，合适的启动子是组成性启动子如ADH1启动子，PGK1启动子，ENO启动子，PYK1启动子等等，或是可调控的启动子如GAL1启动子，GAL10启动子，ADH2启动子，PHO5启动子，CUP1启动子，GAL7启动子，MET25启动子，MET3启动子，CYC1启动子，HIS3启动子，ADH1启动子，PGK启动子，GAPDH启动子，ADC1启动子，TRP1启动子，URA3启动子，LEU2启动子，ENO启动子，TP1启动子和AOX1(例如用于毕赤酵母).。合适的载体和启动子的选择完全在本领域普通技术人员的水平内。
在原核宿主细胞中使用的合适启动子包括但不限于噬菌体T7RNA聚合酶启动子；trp启动子；lac操纵子启动子；杂合启动子，例如lac/tac杂合启动子，tac/trc杂合启动子，trp/lac启动子，T7/lac启动子；trc启动子；tac启动子，等等；araBAD启动子；体内调控的启动子，如ssaG启动子或相关的启动子(参见例如美国专利公开文本No.20040131637)，pagC启动子(Pulkkinen和Miller,J.Bacteriol.,1991:173(1):86-93；Alpuche-Aranda等,PNAS,1992；89(21):10079-83)，nirB启动子(Harborne等(1992)Mol.Micro.6:2805-2813)，等等(参见例如Dunstan等(1999)Infect.Immun.67:5133-5141；McKelvie等(2004)Vaccine 22:3243-3255；和Chatfield等(1992)Biotechnol.10:888-892)；sigma70启动子，例如共有sigma70启动子(参见例如GenBank登录号AX798980，AX798961，和AX798183)；固定相启动子，例如dps启动子，spv启动子，等等；来源于病原性胰岛SPI-2的启动子(参见例如WO96/17951)；actA启动子(参见例如Shetron-Rama等(2002)Infect.Immun.70:1087-1096)；rpsM启动子(参见例如Valdivia和Falkow(1996).Mol.Microbiol.22:367)；tet启动子(参见例如Hillen,W.和Wissmann,A.(1989)于Saenger,W.和Heinemann,U.(eds),Topics inMolecular and Structural Biology,Protein-Nucleic Acid Interaction.Macmillan,London,UK,Vol.10,pp.143-162中)；SP6启动子(参见例如Melton等(1984)Nucl.Acids Res.12:7035)；等等。适于在原核细胞如大肠杆菌中使用的强启动子包括但不限于Trc，Tac，T5，T7，和Pλ。在细菌宿主细胞中使用的操纵基因的非限制性例子包括乳糖启动子操纵基因(Lacl阻遏蛋白在与乳糖接触时改变构象，由此阻止Lacl阻遏蛋白结合操纵基因)，色氨酸启动子操纵基因(在与色氨酸复合时，TrpR阻遏蛋白具有结合操纵基因的构象；在缺乏色氨酸的情况中，TrpR阻遏蛋白具有不结合操纵基因的构象)，和tac启动子操纵基因(参见例如deBoer等(1983)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.80:21-25)。
编码主题抗体的核苷酸序列可以存在于表达载体和/或克隆载体中。当主题抗体包含两个分开的多肽时，可以将编码两个多肽的核苷酸序列在相同或分开的载体中克隆。表达载体可以包含选择标志物，复制起点，和提供载体复制和/或维持的其它特征。
大量合适的载体和启动子是本领域技术人员己知的；许多是商品化的，用于生成主题重组构建体。提供下列载体作为例子。细菌：pBs，phagescript，PsiX174，pBluescript SK，pBs KS，pNH8a，pNH16a，pNH18a，pNH46a(Stratagene，La Jolla，Calif.，USA)；pTrc99A，pKK223-3，pKK233-3，pDR540，and pRIT5(Pharmacia，Uppsala，Sweden).Eukaryotic:pWLneo，pSV2cat，pOG44，PXR1，pSG(Stratagene)pSVK3，pBPV，pMSG和pSVL(Pharmacia)。
表达载体通常具有位于启动子序列附近的方便的限制性位点以提供编码异源蛋白质的核酸序列的***。可以存在在表达宿主中起作用的选择标志物。合适的表达载体包括但不限于病毒载体(例如基于痘病毒；脊髓灰质炎病毒；腺病毒(参见例如Li等,Invest Opthalmol Vis Sci 35:2543 2549,1994；Borras等,Gene Ther 6:515 524,1999；Li和Davidson,PNAS 92:7700 7704,1995；Sakamoto等,H Gene Ther 5:1088 1097,1999；WO 94/12649,WO93/03769；WO 93/19191；WO 94/28938；WO 95/11984和WO 95/00655)；腺伴随病毒(参见例如Ali等,Hum Gene Ther 9:81 86,1998,Flannery等,PNAS94:6916 6921,1997；Bennett等,Invest Opthalmol Vis Sci 38:2857 2863,1997；Jomary等,Gene Ther 4:683 690,1997,Rolling等,Hum Gene Ther 10:641 648,1999；Ali等,Hum Mol Genet 5:591 594,1996；Srivastava in WO 93/09239,Samulski等,J.Vir.(1989)63:3822-3828；Mendelson等,Virol.(1988)166:154-165；和Flotte等,PNAS(1993)90:10613-10617)；SV40；单纯疱疹病毒；人免疫缺陷病毒(参见例如Miyoshi等,PNAS 94:10319 23,1997；Takahashi等,J Virol 73:7812 7816,1999)的病毒载体)；逆转录病毒载体(例如鼠白血病病毒，脾坏死病毒，和来源于逆转录病毒诸如劳斯氏肉瘤病毒(Rous SarcomaVirus)，哈维(Harvey)肉瘤病毒，禽白血病病毒(avian leukosis virus)，人免疫缺陷病毒，骨髓增生性肉瘤病毒，和***肿瘤病毒的载体；等等。
如上文所述，主题核酸包含编码主题抗体的核苷酸序列。主题核酸可以包含编码主题抗体的重链CDR和/或轻链CDR的核苷酸序列。在一些实施方案中，主题核酸包含编码主题抗体的重链CDR和/或轻链CDR的核苷酸序列，其中CDR编码序列之间穿插有FR编码核苷酸序列。在一些实施方案中，FR编码核苷酸序列是人FR编码核苷酸序列。
宿主细胞
本公开文本提供了分离的经遗传修饰的宿主细胞(例如体外细胞)，其用主题核酸遗传修饰。在一些实施方案中，主题的分离的经遗传修饰的宿主细胞可以生成主题抗体。
合适的宿主细胞包括真核宿主细胞，诸如哺乳动物细胞，昆虫宿主细胞，酵母细胞；和原核细胞，诸如细菌细胞。例如，可以通过磷酸钙沉淀，DEAE右旋糖苷介导的转染，脂质体介导的转染，电穿孔，或其它己知的方法实现主题核酸对宿主细胞的导入。
合适的哺乳动物细胞包括原代细胞和永生化细胞系。合适的哺乳动物细胞系包括人细胞系，非人灵长类细胞系，啮齿类(例如小鼠，大鼠)细胞系，等等。合适的哺乳动物细胞系包括但不限于HeLa细胞(例如美国典型培养物保藏中心(ATCC)No.CCL-2)，CHO细胞(例如ATCC Nos.CRL9618，CCL61，CRL9096)，293细胞(例如ATCC No.CRL-1573)，Vero细胞，NIH 3T3细胞(例如ATCC No.CRL-1658)，Huh-7细胞，BHK细胞(例如ATCC No.CCL10)，PC12细胞(ATCC No.CRL1721)，COS细胞，COS-7细胞(ATCC No.CRL1651)，RAT1细胞，小鼠L细胞(ATCC No.CCLI.3)，人胚肾(HEK)细胞(ATCC No.CRL1573)，HLHepG2细胞，等等。在一些情况中，所述细胞是HEK细胞。在一些情况中，所述细胞是CHO细胞，例如CHO-K1细胞(ATCC No.CCL-61)，CHO-M细胞，CHO-DG44细胞(ATCC No.PTA-3356)，等等。
合适的酵母细胞包括但不限于巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)，芬兰毕赤酵母(Pichia finlandica)，喜海藻糖毕赤酵母(Pichia trehalophila)，Pichiakoclamae，膜醭毕赤酵母(Pichia membranaefaciens)，Pichia opuntiae，耐热毕赤酵母(Pichia thermotolerans)，柳毕赤酵母(Pichia salictaria)，Pichia guercuum，皮杰普毕赤酵母(Pichia pijperi)，树干毕赤酵母(Pichia stiptis)，甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)，毕赤酵母属菌种(Pichia sp.)，酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)，酵母属菌种(Saccharomyces sp.)，多形汉逊酵母(Hansenulapolymorpha)，克鲁维酵母属菌种(Kluyveromyces sp.)，乳糖克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)，白念珠菌(Candida albicans)，构巢曲霉(Aspergillusnidulans)，黑曲霉(Aspergillus niger)，米曲霉(Aspergillus oryzae)，里氏木霉(Trichoderma reesei)，Chrysosporium lucknowense，镰孢菌属菌种(Fusariumsp.)，禾谷镰孢菌(Fusarium gramineum)，Fusarium venenatum，粗糙链孢菌(Neurospora crassa)，莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)，等等。
合适的原核细胞包括但不限于大肠杆菌，乳杆菌属菌种(Lactobacillus sp.)等的多种实验室菌株的任一种。参见例如J.Immunol.148:1176-1181；美国专利No.6,447,784；和Sizemore等(1995)Science 270:299-302。典型地，实验室菌株是非病原性的。其它合适的细菌的非限制性例子包括但不限于枯草芽孢杆菌等。在一些实施方案中，宿主细胞是大肠杆菌。
药物配制剂
本发明提供了包含主题抗体的组合物，包括药物组合物。一般地，制剂包含有效量的主题抗体。“有效量”意指足以产生期望的结果的剂量，所述期望的结果例如与Tau病有关的不利症状的减少，Tau病症状的改善，Tau病进展的减缓，等等。一般而言，期望的结果是与对照相比至少Tau病的症状减少。可以以如下的方式递送主题抗体，从而避免血脑屏障，下文对其有更为详细的描述。可以配制和/或修饰主题抗体以使抗体能够穿过血脑屏障。合适的药学可接受赋形剂在一些实施方案对于施用于人是合适的；例如，合适的药学可接受赋形剂可以是无内毒素的。
配制剂
在主题方法中，可以使用能够产生期望的治疗效果或诊断效果的任何方便的手段对宿主施用主题抗体。如此，可以将药剂掺入多种配制剂中以进行治疗性施用。更具体来说，可以通过与合适的药学可接受载剂或稀释剂组合将主题抗体配制成药物组合物，并且可以配制成固体，半固体，液体或气体形式的制剂，如片剂，胶囊剂，粉剂，颗粒剂，软膏剂，溶液，栓剂，注射剂，吸入剂和气雾剂。
在药用剂量形式中，主题抗体可以以其药学上可接受的盐的形式施用，或者它们也可以单独或与其它药学活性化合物适当联合及组合使用。以下方法和赋形剂仅仅是示例性的，而绝不是限制性的。
对于口服制剂，主题抗体可以单独使用或与合适的添加剂组合使用以生成片剂，粉末，颗粒剂或胶囊，例如与常规的添加剂，如乳糖，甘露醇，玉米淀粉或马铃薯淀粉；粘合剂，如结晶纤维素，纤维素衍生物，***树胶(acacia)，玉米淀粉或明胶；崩解剂，如玉米淀粉，马铃薯淀粉或羧甲基纤维素钠；润滑剂，如滑石或硬脂酸镁组合使用；且若需要的话，与稀释剂，缓冲剂，湿润剂，防腐剂和矫味剂(flavoring agent)组合使用。
可以通过如下方法将主题抗体配制成注射制剂，即将它们在水性或非水性溶剂如植物油或其它类似的油，合成脂肪酸甘油酯，高级脂肪酸或丙二醇的酯中溶解，悬浮或乳化；且若需要的话，具有常规的添加剂，诸如增溶剂，等张剂，悬浮剂，乳化剂，稳定剂和防腐剂。
通过混合具有所需纯度的抗体与任选的生理学上可接受的载体，赋形剂，稳定剂，表面活性剂，缓冲剂和/或张力剂来制备包含主题抗体的药物组合物。可接受的载体，赋形剂和/或稳定剂在采用的剂量和浓度处对于接受者是无毒的，并且包括缓冲剂，如磷酸盐，柠檬酸盐，和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸，谷胱甘肽，半胱氨酸，甲硫氨酸和柠檬酸；防腐剂(如乙醇，苯甲醇，苯酚，间甲酚，对氯间甲酚，对羟苯甲酸甲酯或丙酯，苯扎氯铵或其组合)；氨基酸如精氨酸，甘氨酸，鸟氨酸，赖氨酸，组氨酸，谷氨酸，天冬氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，丙氨酸，苯丙氨酸，酪氨酸，色氨酸，甲硫氨酸，丝氨酸，脯氨酸及其组合；单糖，二糖和其它碳水化合物；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，如明胶或血清白蛋白；螯合剂如EDTA；糖类诸海藻糖，蔗糖，乳糖，葡萄糖，甘露糖，麦芽糖，半乳糖，果糖，山梨糖，棉子糖，葡糖胺，N-甲基葡糖胺，半乳糖胺，和神经氨酸；和/或非离子型表面活性剂如Tween，Brij Pluronics，Triton-X，或聚乙二醇(PEG)。
药物组合物可以为液体形式，冻干形式或自冻干形式重建的液体形式，其中冻干制剂在施用前要用无菌溶液重建。用于重建冻干的组合物的标准规程是反向添加一定体积的纯水(通常等于冻干期间除去的体积)；然而，可以使用包含抗细菌剂的溶液生成供胃肠外施用的药物组合物；还可参见Chen(1992)Drug Dev Ind Pharm 18,1311-54。
主题药物组合物中的例示性抗体浓度范围可以为约1mg/mL至约200mg/ml或约50mg/mL至约200mg/mL，或约150mg/mL至约200mg/mL。
可以在pH缓冲溶液中，例如范围为约4.0至约7.0，或约5.0至约6.0，或备选约5.5的pH中制备抗体的水性配制剂。适合于此范围内的pH的缓冲剂的例子包括磷酸盐，组氨酸盐，柠檬酸盐，琥珀酸盐，乙酸盐缓冲剂和其它有机酸缓冲剂。缓冲剂浓度可以是约1mM至约100mM，或约5mM至约50mM，这取决于例如缓冲液和配制剂的期望张力。
抗体配制剂中可以包含张力剂以调控配制剂的张力。例示性的张力剂包括氯化钠，氯化钾，甘油和来自氨基酸组的任何组分，糖类及其组合。在一些实施方案中，水性制剂是等张的，尽管高张的或低张的溶液可以是合适的。术语“等张的”意指与同其比较的一些其它溶液具有相同张力的溶液，诸如生理盐溶液或血清。张力剂可以以约5mM至约350mM，例如以100mM至350nM的量使用。
也可以将表面活性剂添加至抗体配制剂以降低配制抗体的聚集和/或最小化制剂中颗粒的形成和/或降低吸附。例示性的表面活性剂包括聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯(polyoxyethylensorbitan fatty acid ester，Tween)，聚氧乙烯烷基醚(polyoxyethylene alkyl ether)(Brij)，烷基苯基聚氧乙烯醚(alkylphenylpolyoxyethylene ether)(Triton-X)。聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物(polyoxyethylene-polyoxypropylene copolymer)(Poloxamer，Pluronic)，和十二烷基硫酸钠(SDS)。可溶性聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯的例子是聚山梨醇酯20(以Tween 20TM商标出售)和聚山梨醇酯80(以Tween 80TM商标出售)。合适的聚乙烯-聚丙烯共聚物的例子是以F68或Poloxamer188TM的名称出售的那些。合适的聚氧乙烯烷基醚的例子是以BrijTM商标出售的那些。表面活性剂的例示性浓度的范围可以是约0.001％至约1％w/v。
也可以添加冻干保护剂(lyoprotectant)以在冻干过程期间对抗去稳定化(destabilizing)条件而保护不稳定的活性成分(例如蛋白质)。例如，己知的冻干保护剂包括糖类(包括葡萄糖和蔗糖)；多元醇(包括甘露醇，山梨糖醇和甘油)；和氨基酸(包括丙氨酸，甘氨酸和谷氨酸)。冻干保护剂可以以约10mM至500nM的量包含在内。
在一些实施方案中，主题配制剂包含主题抗体，和一种或多种上文鉴定的药剂(例如表面活性剂，缓冲剂，稳定剂，张力剂)，并且基本上不含一种或多种防腐剂，如乙醇，苯甲醇，苯酚，间甲酚，对氯间甲酚，对羟苯甲酸甲酯或丙酯，苯扎氯铵及其组合。在其它实施方案中，防腐剂以例如约0.001至约2％(w/v)的浓度范围包含在配制剂中。
例如，主题配制剂可以是适合于胃肠外施用的液体或冻干配制剂，并且可以包含：约1mg/mL至约200mg/mL主题抗体；约0.001％至约1％至少一种表面活性剂；约1mM至约100mM缓冲剂；任选约l0mM至约500mM稳定剂；和约5mM至约305mM张力剂；并且具有约4.0至约7.0的pH。
作为另一个例子，主题胃肠外配制剂是液体或冻干配制剂，其包含：约1mg/mL至约200mg/mL主题抗体；0.04％Tween 20w/v；20mM L-组氨酸；和250mM蔗糖；并且具有5.5的pH。
作为另一个例子，主题胃肠外配制剂包含冻干配制剂，其包含：1)15mg/mL主题抗体：0.04％Tween 20w/v；20mM L-组氨酸；和250mM蔗糖；并且具有5.5的pH；或2)75mg/mL主题抗体；0.04％Tween 20w/v；20mM L-组氨酸；和250mM蔗糖；并且具有5.5的pH；或3)75mg/mL主题抗体；0.02％Tween 20w/v；20mM L-组氨酸；和250mM蔗糖；并且具有5.5的pH；或4)75mg/mL主题抗体；0.04％Tween 20w/v；20mM L-组氨酸；和250mM海藻糖；并且具有5.5的pH；或6)75mg/mL主题抗体；0.02％Tween 20w/v；20mML-组氨酸；和250mM海藻糖；并且具有5.5的pH。
作为另一个例子，主题胃肠外配制剂是液体配制剂，其包含：1)7.5mg/mL主题抗体；0.022％Tween 20w/v；120mM L-组氨酸；和250 125mM蔗糖；并且具有5.5的pH；或2)37.5mg/mL主题抗体；0.02％Tween 20w/v；10mM L-组氨酸；和125mM蔗糖；并且具有5.5的pH；或3)37.5mg/mL主题抗体；0.01％Tween 20w/v；10mM L-组氨酸；和125mM蔗糖；并且具有5.5的pH；或4)37.5mg/mL主题抗体；0.02％Tween 20w/v；10mM L-组氨酸；125mM海藻糖；并且具有5.5的pH；或5)37.5mg/mL主题抗体；0.01％Tween20w/v；10mM L-组氨酸；和125mM海藻糖；并且具有5.5的pH；或6)5mg/mL主题抗体；0.02％Tween 20w/v；20mM L-组氨酸；和250mM海藻糖；并且具有5.5的pH；或7)75mg/mL主题抗体；0.02％Tween 20w/v；20mM L-组氨酸；和250mM甘露醇；并且具有5.5的pH；或8)75mg/mL主题抗体；0.02％Tween 20w/v；20mM L组氨酸；和140mM氯化钠；并且具有5.5的pH；或9)150mg/mL主题抗体；0.02％Tween 20w/v；20mM L-组氨酸；和250mM海藻糖；并且具有5.5的pH；或10)150mg/mL主题抗体；0.02％Tween 20w/v；20mM L-组氨酸；和250mM甘露醇；并且具有5.5的pH；或11)150mg/mL主题抗体；0.02％Tween 20w/v；20mM L-组氨酸；和140mM氯化钠；并且具有5.5的pH；或12)10mg/mL主题抗体；0.01％Tween 20w/v；20mM L-组氨酸；和40mM氯化钠；并且具有5.5的pH。
可以在要经吸入施用的气雾剂配制剂中利用主题抗体。可以将主题抗体配制入加压的可接受推进剂如二氯二氟甲烷，丙烷，氮气等中。
此外，可以通过与多种基质如乳化基质或水溶性基质混合将主题抗体制成栓剂。可以通过栓剂经直肠施用主题抗体。栓剂可以包含媒介物如可可油，Carbowaxes和聚乙二醇，其在体温熔解，但在室温是凝固的。
可以提供用于口服或直肠施用的单位剂量形式，如糖浆剂，酏剂，和悬 浮液，其中每个剂量单位(例如茶匙(teaspoonful)，汤匙(tablespoonful)，片 (tablet)或栓剂(suppository))含有预先确定量的含有一种或多种抑制剂的组合 物。类似地，用于注射或静脉内施用的单位剂量形式可以包含在组合物中的 主题抗体，其作为无菌水，正常生理盐水或另一种药学上可接受的载体中的 溶液。
如本文中使用的，术语“单位剂量形式”指生理上适合作为人和动物受试者的单位剂量的离散单位，每个单位含有预先确定量的本公开文本的抗Tau抗体，经计算其量足以与药学可接受的稀释剂，载体或媒介物结合产生所需的效果。主题抗体的规格可以取决于采用的具体抗体和要实现的效果，以及宿主中与每种抗体相关的药效学特性。
其它施用模式也会在本公开文本的方法中得到应用。例如，可以将主题抗体配制成栓剂，以及在一些情况中是气雾剂和鼻内组合物。对于栓剂，媒介物组合物会包含传统的粘合剂和载体，如聚亚烷基二醇(polyalkylene glycol)或甘油三酯。此类栓剂可以自含有范围为约0.5％至约10％(w/w)，例如约1％至约2％的活性成分的混合物形成。
鼻内配制剂通常会包含既不引起鼻粘膜的刺激也不显著扰乱纤毛功能的媒介物。可以采用稀释剂，如水，水性盐水或其它己知的物质。鼻制剂也可以含有防腐剂，例如但不限于氯丁醇和苯扎氯铵。可以存在表面活性剂以增强鼻粘膜对主题抗体的吸附。
主题抗体可以作为可注射配制剂施用。通常，可注射组合物制备为液体溶液或悬浮液；也可以制备适合于用于液体媒介物中的溶液或悬浮液中的注射前固体形式。也可以将制剂进行乳化或者将抗体囊封于脂质体媒介物中。
合适的赋形剂媒介物是例如水，盐水，右旋糖，甘油，乙醇等，及其组合。另外，若需要的话，媒介物可以含有少量的辅助物质，如湿润剂或乳化剂或pH缓冲剂。制备此类剂量形式的实际方法是己知的，或者对于本领域技术人员是显而易见的。参见例如Remington's Pharmaceutical Sciences,MackPublishing Company,Easton,Pennsylvania，第17版，1985。要施用的组合物或配制剂无论如何都会含有足以实现所治疗受试者中期望的状态的主题抗体量。
药学上可接受的赋形剂，诸如媒介物，佐剂，载体或稀释剂是公众容易可获得的。此外，药学上可接受的辅助物质，诸如pH调节剂和缓冲剂，张力调节剂，稳定剂，湿润剂等是公众容易可获得的。
在一些实施方案中，将主题抗体配制为受控释放配制剂。可以使用本领域中公知的方法制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适的例子包括含有抗体的固体疏水性聚合物的半透性基质，其中所述基质为定形制品形式，例如膜或微胶囊。持续释放基质的例子包括聚酯，L-谷氨酸和乙基-L-谷氨酸的共聚物，不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯，水凝胶，聚交酯，可降解的乳酸-乙醇酸共聚物和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。可以通过使用合适的添加剂，通过控制含湿量及通过开发特定的聚合物基质组合物来阻止持续释放制剂中包含的抗体的生物学活性的可能丧失和免疫原性的可能变化。
在本发明的范围内的受控释放可以理解为意指多种延长释放剂量形式的任一种。出于本公开文本的目的，可以认为以下术语基本上等同于受控释放：连续释放，受控释放，延迟释放，贮积(depot)，逐渐释放，长期释放，程序化释放(programmed release)，延长释放，成比例释放，拖延释放，储库(repository)，延迟，缓慢释放，间隔释放，持续释放，时间涂层(time coat)，定时释放(timed release)，延迟作用，延长作用，分层时间作用(layered-timeaction)，长效，延长作用，重复作用，减缓起作用，持续作用，持续作用药物，和延长的释放。这些术语的其它讨论可以参见Lesczek Krowczynski,Extended-Release Dosage Forms,1987(CRC Press,Inc.)。
各种受控释放技术涵盖非常广谱的药物剂量形式。受控释放技术包括但不限于物理***和化学***。
物理***包括但不限于具有速率控制膜的贮存库(reservoir)***，如微囊化，宏囊化(macroencapsulation)，和膜***；没有速率控制膜的贮存库***，诸如中空纤维，超微孔三乙酸纤维素，和多孔聚合基底和泡沫；单片***，包括在非多孔，聚合，或弹性体基质(例如非可侵蚀的，可侵蚀的，环境因素进入(environmental agent ingression)，和可降解的)中物理溶解的那些***，和在非多孔，聚合，或弹性体基质(例如非可侵蚀的，可侵蚀的，环境因素进入，和可降解的)中物理分散的材料；层状结构，包括与外部控制层化学相似或不相似的贮存库层；和其它物理方法，如渗透泵或吸附到离子交换树脂上。
化学***包括但不限于聚合物基质的化学侵蚀(例如异质或同质侵蚀)，或聚合物基质的生物侵蚀(例如异质或同质的)。关于受控释放的***的类别的其它讨论可以参见Agis F.Kydonieus,Controlled Release Technologies: Methods,Theory and Applications,1980(CRC Press,Inc.)。
研发用于口服施用的受控释放药物配制剂有许多。这些包括但不限于渗透压控制的胃肠外递送***；流体动力学压力控制的胃肠外递送***；膜渗入控制胃肠外递送***，其包括微孔膜渗入控制胃肠外递送***；胃液抗性肠靶向控制释放胃肠外递送装置；凝胶扩散控制胃肠外递送***；和离子交换控制胃肠外递送***，其包含阳离子和阴离子药物。关于受控释放药物递送***的其它信息可以参见Yie W.Chien,Novel Drug Delivery Systems,1992(Marcel Dekker,Inc.)。
剂量
主治内科医生或其他有资格的医学人员基于各种临床因素可以确定合适的剂量。如医学领域中公知的，用于任一患者的剂量取决于许多因素，包括患者的体格，体表面积，年龄，要施用的具体化合物，患者的性别，时间，和施用路径，总体健康，和同时施用的其它药物。主题抗体可以以每剂1ng/kg体重至20mg/kg体重，例如0.1mg/kg体重至10mg/kg体重，例如0.5mg/kg体重至5mg/kg体重的量施用；然而，也涵盖低于或高于此例示性范围的剂量，特别是考虑前述因素。如果方案是连续输注，那么其范围也可以为每千克体重每分钟1μg至10mg。
本领域技术人员容易理解剂量水平可以作为具体抗体，症状的严重性和受试者对副作用的易感性的函数而变化。本领域技术人员通过多种手段容易确定给定化合物的优选剂量。
治疗方法
本公开文本提供在个体中治疗Tau病的方法。该方法一般牵涉对具有Tau病的个体施用有效量的特异性结合eTau多肽的抗体。例如，在一些实施方案中，该方法一般牵涉对具有Tau病的个体施用有效量的主题抗eTau抗体。在一些情况中，施用抗eTau抗体(例如主题抗eTau抗体)降低个体的组织中病理性Tau肽的水平且治疗该Tau病。
在本公开文本的方法的一些实施方案中，施用于个体的抗Tau抗体封装在脂质体中。在一些情况中，该抗体是与推动穿越血脑屏障的药剂一起配制的。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该施用是静脉内。在一些情况中，该施用是鞘内。在一些情况中，该施用是皮下。
本公开文本中用于治疗Tau病的方法可包括对有需要的个体施用抗Tau抗体，其中合适的抗Tau抗体包括：
1)一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体与包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:15的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ ID NO:16的抗体重链可变区的重链CDR的抗体竞争结合表位。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，且不结合eTau2，eTau3，或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SLPTPPTREPK(SEQ ID NO:77)内的表位。
2)一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含轻链，该轻链包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:15的抗体轻链可变区的轻链CDR；一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含重链，该重链包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:16的抗体重链可变区的重链CDR；或一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:15的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ IDNO:16的抗体重链可变区的重链CDR。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，且不结合eTau2，eTau3，或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SLPTPPTREPK(SEQ ID NO:77)内的表位。
3)一种分离的抗体，其与包含下述各项的抗体竞争结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQID NO:9的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:10的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:12的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:13的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:14的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，且不结合eTau2，eTau3，或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SLPTPPTREPK(SEQID NO:77)内的表位。
4)一种分离的单克隆抗体，其特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，其中该分离的抗体包含1，2，3，4，5，或6种下述CDR：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:10的VL CDR2；(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR3；(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:12的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:13的VHCDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:14的VH CDR3。在一些情况中，该抗体包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:10的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的VLCDR3。在一些情况中，该抗体包含：(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:12的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:13的VH CDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:14的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，且不结合eTau2，eTau3，或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SLPTPPTREPK(SEQ ID NO:77)内的表位。
5)一种分离的人源化单克隆抗体，其包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区，其中该分离的抗体特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，且其中该分离的抗体包含：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:10的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:12的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ IDNO:13的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:14的VH CDR3。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，且不结合eTau2，eTau3，或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SLPTPPTREPK(SEQ ID NO:77)内的表位。
6)一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体与包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ ID NO:24的抗体重链可变区的重链CDR的抗体竞争结合表位。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，且不结合eTau2，eTau3，或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SLPTPPTREPK(SEQ ID NO:77)内的表位。
7)一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含轻链，该轻链包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的抗体轻链可变区的轻链CDR；一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含重链，该重链包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:24的抗体重链可变区的重链CDR；或一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ IDNO:24的抗体重链可变区的重链CDR。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，且不结合eTau2，eTau3，或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SLPTPPTREPK(SEQ ID NO:77)内的表位。
8)一种分离的抗体，其与包含下述各项的抗体竞争结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQID NO:17的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:18的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:19的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:20的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:21的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:22的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，且不结合eTau2，eTau3，或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SLPTPPTREPK(SEQID NO:77)内的表位。
9)一种分离的单克隆抗体，其特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，其中该分离的抗体包含1，2，3，4，5，或6种下述CDR：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:18的VL CDR2；(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:19的VL CDR3；(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:20的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:21的VHCDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:22的VH CDR3。在一些情况中，该抗体包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:18的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:19的VLCDR3。在一些情况中，该抗体包含：(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:20的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:21的VH CDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:22的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，且不结合eTau2，eTau3，或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SLPTPPTREPK(SEQ ID NO:77)内的表位。
10)一种分离的人源化单克隆抗体，其包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区，其中该分离的抗体特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，且其中该分离的抗体包含：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:18的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:19的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:20的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ IDNO:21的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:22的VH CDR3。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab′。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，且不结合eTau2，eTau3，或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SLPTPPTREPK(SEQ ID NO:77)内的表位。
11)一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体与包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:31的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ ID NO:32的抗体重链可变区的重链CDR的抗体竞争结合表位。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽，且不结合eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列RIPAKTPPAPK(SEQ IDNO:78)内的表位。
12)一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含轻链，该轻链包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:31的抗体轻链可变区的轻链CDR；一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含重链，该重链包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:32的抗体重链可变区的重链CDR；或一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:31的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ IDNO:32的抗体重链可变区的重链CDR。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽，且不结合eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列RIPAKTPPAPK(SEQ ID NO:78)内的表位。
13)一种分离的抗体，其与包含下述各项的抗体竞争结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:25的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ IDNO:29的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽，且不结合eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列RIPAKTPPAPK(SEQ ID NO:78)内的表位。
14)一种分离的单克隆抗体，其特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，其中该分离的抗体包含1，2，3，4，5，或6种下述CDR：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:25的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的VL CDR2；(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的VL CDR3；(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:29的VHCDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的VH CDR3。在一些情况中，该抗体包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:25的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的VLCDR3。在一些情况中，该抗体包含：(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:29的VH CDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽，且不结合eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列RIPAKTPPAPK(SEQ ID NO:78)内的表位。
15)一种分离的人源化单克隆抗体，其包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区，其中该分离的抗体特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，且其中该分离的抗体包含：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:25的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ IDNO:29的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的VH CDR3。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽，且不结合eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列RIPAKTPPAPK(SEQ ID NO:78)内的表位。
16)一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体与包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ ID NO:40的抗体重链可变区的重链CDR的抗体竞争结合表位。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽，且不结合eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列RIPAKTPPAPK(SEQ IDNO:78)内的表位。
17)一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含轻链，该轻链包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的抗体轻链可变区的轻链CDR；一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含重链，该重链包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:40的抗体重链可变区的重链CDR；或一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ IDNO:40的抗体重链可变区的重链CDR。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽，且不结合eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列RIPAKTPPAPK(SEQ ID NO:78)内的表位。
18)一种分离的抗体，其与包含下述各项的抗体竞争结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:33的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:34的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:35的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:36的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ IDNO:37的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:38的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽，且不结合eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列RIPAKTPPAPK(SEQ ID NO:78)内的表位。
19)一种分离的单克隆抗体，其特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，其中该分离的抗体包含1，2，3，4，5，或6种下述CDR：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:33的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:34的VL CDR2；(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:35的VL CDR3；(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:36的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:37的VHCDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:38的VH CDR3。在一些情况中，该抗体包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:33的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:34的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:35的VLCDR3。在一些情况中，该抗体包含：(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:36的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:37的VH CDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:38的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽，且不结合eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列RIPAKTPPAPK(SEQ ID NO:78)内的表位。
20)一种分离的人源化单克隆抗体，其包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区，其中该分离的抗体特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，且其中该分离的抗体包含：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:33的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:34的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:35的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:36的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ IDNO:37的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:38的VH CDR3。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽，且不结合eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列RIPAKTPPAPK(SEQ ID NO:78)内的表位。
21)一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体与包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:47的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ ID NO:48的抗体重链可变区的重链CDR的抗体竞争结合表位。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，且不结合eTau1多肽，eTau2多肽，或eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQID NO:79)内的表位。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽中的新表位。
22)一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含轻链，该轻链包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:47的抗体轻链可变区的轻链CDR；一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含重链，该重链包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:48的抗体重链可变区的重链CDR；或一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:47的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ IDNO:48的抗体重链可变区的重链CDR。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，且不结合eTau1多肽，eTau2多肽，或eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ ID NO:79)内的表位。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽中的新表位。
23)一种分离的抗体，其与包含下述各项的抗体竞争结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:41的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:42的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:44的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ IDNO:45的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:46的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，且不结合eTau1多肽，eTau2多肽，或eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ ID NO:79)内的表位。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽中的新表位。
24)一种分离的单克隆抗体，其特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，其中该分离的抗体包含1，2，3，4，5，或6种下述CDR：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:41的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:42的VL CDR2；(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的VL CDR3；(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:44的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:45的VHCDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:46的VH CDR3。在一些情况中，该抗体包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:41的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:42的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的VLCDR3。在一些情况中，该抗体包含：(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:44的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:45的VH CDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:46的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，且不结合eTau1多肽，eTau2多肽，或eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ ID NO:79)内的表位。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽中的新表位。
25)一种分离的人源化单克隆抗体，其包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区，其中该分离的抗体特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，且其中该分离的抗体包含：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:41的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:42的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:44的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ IDNO:45的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:46的VH CDR3。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，且不结合eTau1多肽，eTau2多肽，或eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ ID NO:79)内的表位。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽中的新表位。
26)一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体与包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:55的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ ID NO:56的抗体重链可变区的重链CDR的抗体竞争结合表位。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ IDNO:79)内的表位。
27)一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含轻链，该轻链包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:55的抗体轻链可变区的轻链CDR；一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含重链，该重链包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:56的抗体重链可变区的重链CDR；或一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:55的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ IDNO:56的抗体重链可变区的重链CDR。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ ID NO:79)内的表位。
28)一种分离的抗体，其与包含下述各项的抗体竞争结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:49的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:50的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:51的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:52的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ IDNO:53的VH CDR2和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:54的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ ID NO:79)内的表位。
29)一种分离的单克隆抗体，其特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，其中该分离的抗体包含1，2，3，4，5，或6种下述CDR：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:49的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:50的VL CDR2；(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:51的VL CDR3；(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:52的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:53的VHCDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:54的VH CDR3。在一些情况中，该抗体包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:49的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:50的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:51的VLCDR3。在一些情况中，该抗体包含：(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:52的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:53的VH CDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:54的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ ID NO:79)内的表位。
30)一种分离的人源化单克隆抗体，其包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区，其中该分离的抗体特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，且其中该分离的抗体包含：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:49的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:50的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:51的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:52的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ IDNO:53的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:54的VH CDR3。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ ID NO:79)内的表位。
31)一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体与包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:63的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ ID NO:64的抗体重链可变区的重链CDR的抗体竞争结合表位。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ IDNO:79)内的表位。
32)一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含轻链，该轻链包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:63的抗体轻链可变区的轻链CDR；一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含重链，该重链包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:64的抗体重链可变区的重链CDR；或一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:63的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ IDNO:64的抗体重链可变区的重链CDR。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ ID NO:79)内的表位。
33)一种分离的抗体，其与包含下述各项的抗体竞争结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:57的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:58的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:59的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:60的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ IDNO:61的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:62的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ ID NO:79)内的表位。
34)一种分离的单克隆抗体，其特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，其中该分离的抗体包含1，2，3，4，5，或6种下述CDR：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:57的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:58的VL CDR2；(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:59的VL CDR3；(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:60的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:61的VHCDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:62的VH CDR3。在一些情况中，该抗体包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:57的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:58的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:59的VLCDR3。在一些情况中，该抗体包含：(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:60的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:61的VH CDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:62的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ ID NO:79)内的表位。
35)一种分离的人源化单克隆抗体，其包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区，其中该分离的抗体特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，且其中该分离的抗体包含：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:57的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:58的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:59的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:60的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ IDNO:61的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:62的VH CDR3。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau4多肽，eTau1多肽，eTau2多肽，和eTau3多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列EDEAAGHVTQAR(SEQ ID NO:79)内的表位。
36)一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体与包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:71的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ ID NO:72的抗体重链可变区的重链CDR的抗体竞争结合表位。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau2多肽，eTau1多肽，eTau3多肽，和eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau2多肽，和eTau1多肽，但不结合eTau3多肽或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SSPGSPGTPGSR(SEQ ID NO:80)内的表位。
37)一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含轻链，该轻链包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:71的抗体轻链可变区的轻链CDR；一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含重链，该重链包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:72的抗体重链可变区的重链CDR；或一种分离的抗体，其结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位，其中该抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:71的抗体轻链可变区的轻链CDR和包含氨基酸序列SEQ IDNO:72的抗体重链可变区的重链CDR。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的重链恒定区。在一些情况中，该抗体是抗体片段，例如Fab片段，F(ab')2片段，scFv，或Fv。在一些情况中，该抗体结合eTau2多肽，eTau1多肽，eTau3多肽，和eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau2多肽，和eTau1多肽，但不结合eTau3多肽或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SSPGSPGTPGSR(SEQ ID NO:80)内的表位。
38)一种分离的抗体，其与包含下述各项的抗体竞争结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)中的表位：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:65的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:66的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:67的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:68的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ IDNO:69的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:70的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau2多肽，eTau1多肽，eTau3多肽，和eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau2多肽，和eTau1多肽，但不结合eTau3多肽或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SSPGSPGTPGSR(SEQ ID NO:80)内的表位。
39)一种分离的单克隆抗体，其特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，其中该分离的抗体包含1，2，3，4，5，或6种下述CDR：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:65的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:66的VL CDR2；(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:67的VL CDR3；(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:68的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:69的VHCDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:70的VH CDR3。在一些情况中，该抗体包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:65的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:66的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:67的VLCDR3。在一些情况中，该抗体包含：(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:68的VH CDR1；(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:69的VH CDR2；和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:70的VH CDR3。在一些情况中，该抗体是人源化的。例如，在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化重链框架区。在一些情况中，该抗体包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau2多肽，eTau1多肽，eTau3多肽，和eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau2多肽，和eTau1多肽，但不结合eTau3多肽或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SSPGSPGTPGSR(SEQ ID NO:80)内的表位。
40)一种分离的人源化单克隆抗体，其包含人源化轻链框架区和人源化重链框架区，其中该分离的抗体特异性结合Tau多肽(例如本公开文本的eTau多肽)，且其中该分离的抗体包含：a)轻链区，其包含：i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:65的VL CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:66的VL CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:67的VL CDR3；和b)重链区，其包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:68的VH CDR1；(ii)包含氨基酸序列SEQ IDNO:69的VH CDR2；和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:70的VH CDR3。在一些情况中，轻链区和重链区存在于分开的多肽中。在一些情况中，轻链区和重链区存在于单一多肽中。在一些情况中，重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。在一些情况中，重链区是同种型IgG4的。在这些实施方案的一些中，铰链区包含S241P替代。参见例如Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105。在一些情况中，该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab')2，或Fab'。在一些情况中，该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物，例如聚(乙二醇)聚合物。在一些情况中，该抗体直接或经接头融合至促进穿越血脑屏障的载体分子，肽或蛋白质。在一些情况中，该分离的抗体以10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合Tau多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau2多肽，eTau1多肽，eTau3多肽，和eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合eTau2多肽，和eTau1多肽，但不结合eTau3多肽或eTau4多肽。在一些情况中，该抗体结合氨基酸序列SSPGSPGTPGSR(SEQ ID NO:80)内的表位。
Tau病是以个体的组织或流体中异常水平的Tau为特征的病症。在一些情况中，Tau病以组织或流体中存在升高(高于正常)水平的Tau或Tau肽和/或病理形式的Tau为特征。例如，在一些情况中，Tau病以脑组织和/或脑脊液中存在升高水平的Tau或Tau肽和/或病理形式的Tau为特征。组织或流体中“高于正常”水平的Tau指示组织或流体中的Tau水平高于正常对照水平，例如高于相同年龄组的个体或个体群体的正常对照水平。参见Blomberg et al.(2001)“Cerebrospinal fluid tau levels increase with age in healthy individuals”Dement.Geriatr.Cogn.Disord.12:127。在一些情况中，具有Tau病的个体展现出Tau病的一种或多种其它的症状(例如认知衰退)。
在其它情况中，Tau病以组织或流体中存在低于正常水平的Tau为特征。组织或流体中“低于正常”水平的Tau指示组织或流体中的Tau水平低于正常对照水平，例如低于相同年龄组的个体或个体群体的正常对照水平。
阿尔茨海默氏病和某些形式的额颞痴呆(匹克(Pick)氏病，散发性额颞痴呆和与第17号染色体连锁的额颞痴呆伴帕金森病)是Tau病的最常见形式。因而，本发明涉及如上文描述的任何方法，其中Tau病是阿尔茨海默氏，匹克氏病，散发性额颞痴呆和与第17号染色体连锁的额颞痴呆伴帕金森病。其它Tau病包括但不限于进行性核上性麻痹(PSP)，皮质基底变性(CBD)和亚急性硬化性全脑炎(Subacute sclerosing panencephalitis)。
神经变性性Tau病包括阿尔茨海默氏病，肌萎缩性侧索硬化(amyotrophiclateral sclerosis)/帕金森病-痴呆复合症(parkinsonism-dementia complex)，嗜银颗粒性痴呆(argyrophilic grain dementia)，英国型淀粉样血管病(British typeamyloid angiopathy)，脑淀粉样血管病(cerebral amyloid angiopathy)，皮质基底变性，克雅氏病(Creutzfeldt-Jakob disease)，拳击员痴呆(dementiapugilistica)，弥散性神经纤维缠结伴钙化，唐氏综合征(Down's syndrome)，额颞痴呆，与第17号染色体连锁的额颞痴呆伴帕金森病，额颞叶变性，格斯特曼-施特劳斯纳-杉克病(Gerstmann-Straussler-Scheinker disease)，哈勒沃登-施帕茨病(Hallervorden-Spatz disease)，包涵体肌炎(inclusion body myositis)，多***萎缩(multiple system atrophy)，肌强直性营养不良(myotonicdystrophy)，尼曼-匹克病(Niemann-Pick disease)C型，非关岛运动神经元病(non-Guamanian motor neuron disease)伴神经纤维缠结，皮克氏病(Pick'sdisease)，脑炎后帕金森病(postencephalitic parkinsonism)，朊病毒蛋白脑淀粉样血管病(prion protein cerebral amyloid angiopathy)，进行性皮质下神经胶质增生(progressive subcortical gliosis)，进行性核上性麻痹，亚急性硬化性全脑炎(subacute sclerosing panencephalitis)，仅缠结痴呆(Tangle only dementia)，多发性梗死性痴呆(multi-infarct dementia)，缺血性中风(ischemic stroke)，慢性创伤性脑病(chronic traumatic encephalopathy，CTE)，创伤性脑损伤(traumaticbrain injury，TBI)和中风。
本公开文本还提供治疗共核蛋白病(synucleinopathy)，例如帕金森氏病(Parkinson's disease，PD)；路易体痴呆(dementia with Lewy Bodies，DLB)；多器官萎缩(MSA)等的方法。例如，PD伴痴呆(PDD)可以用主题方法治疗。
在一个实施方案中，本公开文本的主题Tau抗体阻止或延迟受试者中神经变性性Tau病的至少一种症状的发作。在一个实施方案中，主题抗Tau抗体降低或消除受试者中神经变性性Tau病的至少一种症状。所述症状可以是在受试者的脑或脊髓中形成下列一项或多项：病理性Tau沉积物；细胞外可溶性Tau和/或Tau片段；超磷酸化Tau沉积物；不溶性Tau沉积物；神经纤维缠结；神经纤维纤维；前缠结磷酸-Tau聚集体(pre-tangle phospho-tau aggregate)；神经元内神经纤维缠结；神经元活动过度；和神经元外神经纤维缠结。所述症状可以是神经学症状，例如，受损的认知功能，记忆损伤，运动功能丧失，等。在一些情况中，本公开文本的抗Tau抗体能改善认知功能。在一些情况中，本公开文本的抗Tau抗体能降低认知功能的衰退速率。在一些情况中，本公开文本的抗Tau抗体能改善运动功能。在一些情况中，本公开文本的抗Tau抗体能降低运动功能的下降速率。
症状也可以是个体的CSF中的主题Tau肽水平。例如，在一些实施方案中，与在用抗Tau抗体治疗前个体的CSF中的Tau肽水平相比，主题抗Tau抗体在作为单一疗法或在联合疗法中以一剂或多剂对具有Tau病的个体施用时将个体的CSF中本公开文本的Tau肽水平降低至少约10％，至少约15％，至少约20％，至少约25％，至少约30％，至少约40％，至少约50％，或超过50％。
对个体施用主题抗Tau抗体能导致下列一项或多项：脑组织中游离细胞外Tau的量减少；Tau(例如Tau片段)的细胞至细胞传播(例如神经元至神经元传播)降低；Tau聚集体(例如细胞内(例如神经元内)Tau聚集体)的量减少；脑组织中神经纤维缠结的量减少；小胶质和/或星形细胞活化水平降低；磷酸化Tau的量减少；超磷酸化Tau的量减少；总Tau(例如总细胞内Tau；和/或总细胞外Tau)减少；游离Tau(例如未与主题抗Tau抗体结合的Tau)减少；神经元活动过度降低；和N端Tau片段的量减少。“总Tau”可以包括任何同等型的全长Tau；和存在并展示出受到主题抗Tau抗体识别的表位的任何N端Tau片段的总和。可以使用任何己知的方法，例如使用抗磷酸-Tau抗体的免疫学方法，来测定磷酸化Tau的减少。
在一些实施方案中，主题抗Tau抗体的施用导致下列一项或多项的变化：a)脑组织中游离细胞外Tau的量；b)间质液(ISF)中游离细胞外Tau的量；c)脑脊液(CSF)中游离细胞外Tau的量；d)Tau的神经元至神经元传播；e)神经元内Tau聚集体的量；f)小胶质和/或星形细胞活化的程度；g)磷酸化或超磷酸化Tau的量；h)ISF或CSF中总Tau或游离Tau的量；i)细胞内N端Tau片段的量；j)神经元活动过度；k)CSF中Aβ40和/或Aβ42的量；l)Aβ斑负荷；m)来自神经元的Aβ40和/或Aβ42分泌；n)淀粉样前体蛋白(APP)启动子活性；o)APP mRNA和/或蛋白质水平；p)β-分泌酶和/或γ-分泌酶的活性；q)Aβ诱导的信号传导途径的活化状态；r)细胞内总Tau或游离Tau的量；s)ISF或CSF中抗Tau抗体结合的Tau的量；和t)细胞内抗Tau抗体结合的Tau的量。
对个体施用主题抗Tau抗体能导致下述一项或多项：脑组织中游离细胞外Tau肽的量降低；Tau肽的细胞至细胞传播(例如神经元至神经元传播)降低；Tau聚集体(例如细胞内(例如神经元内)Tau聚集体)的量降低；和脑组织中神经纤维缠结的量降低。在一些情况中，对个体施用主题抗Tau抗体能改善个体的认知功能，或至少降低个体的认知功能的衰退速率。
在一些情况中，与施用抗Tau抗体前个体中游离细胞外Tau肽量相比，对个体施用主题抗Tau抗体将游离细胞外Tau肽量(例如脑组织中的游离细胞外Tau肽量)减少至少约10％，至少约20％，至少约25％，至少约50％，或超过50％。
在一些情况中，与用施用主题抗Tau抗体前的细胞至细胞传播相比，对个体施用主题抗Tau抗体将Tau肽(例如病理性Tau肽)的细胞至细胞(例如神经元至神经元)传播降低至少约10％，至少约20％，至少约25％，至少约50％，或超过50％。
在一些情况中，与施用抗Tau抗体前Tau聚集体的量相比，对个体施用主题抗Tau抗体将Tau聚集体(例如细胞内(例如神经元内)Tau聚集体)的量减少至少约10％，至少约20％，至少约25％，至少约50％，或超过50％。
在一些情况中，对个体施用主题抗Tau抗体降低个体中的神经毒性；和/或降低个体中的神经炎症；和/或降低小胶质和星形细胞的活化；和/或降低病理性电生理效应的诱导；和/或降低外来体中Tau的量。
在一些情况中，供本文中公开的方法中使用的抗体不同于Tau12抗体，Tau13抗体，TNT1抗体，5A6抗体，HJ9.4抗体，HT7抗体，或6C10抗体。
本公开文本的抗Tau抗体可存在于药物组合物中。如此，本公开文本提供一种药物组合物，其包含：a)本公开文本的抗Tau抗体；和b)药学可接受载剂。主题抗Tau抗体可以依照本领域公知的方法来配制；参见例如Remington:The Science and Practice of Pharmacy(2000)by the University ofSciences in Philadelphia,ISBN 0-683-306472。合适的药物载剂的例子是本领域公知的，而且包括磷酸盐缓冲盐水溶液，水，乳液，诸如油/水乳液，各种类型的润湿剂，无菌溶液等。包含此类载剂的组合物可以通过公知的常规方法来配制。这些药物组合物可以以合适的剂量施用于受试者。
可以通过不同方式，例如通过静脉内，鞘内，腹膜内，皮下，颅内，动脉内(例如经由颈动脉)，肌肉内，鼻内，表面或皮内施用或脊髓或脑投递来实现合适组合物的施用。气溶胶配制剂诸如鼻喷雾配制剂包括活性剂及防腐剂和等张剂的纯化后的水性或其它溶液。将此类配制剂调节至与鼻粘膜相容的pH和等张状态。
在一些情况中，以如下的方式修饰或配制主题抗Tau抗体，从而提供抗体穿过血脑屏障的能力。可以通过各种肠内和胃肠外施用路径，包括口服，静脉内，等对具有Tau病的个体施用此类抗体或抗体组合物。
用于胃肠外施用的制备物包括无菌水性或非水性溶液，悬浮液和乳状液。非水性溶剂的例子有丙二醇，聚乙二醇，植物油诸如橄榄油，和可注射有机酯，诸如油酸乙酯。水性载剂包括水，醇性(alcoholic)/水性溶液，乳状液或悬浮液，包括盐水和缓冲介质。胃肠外媒介包含氯化钠溶液，林格氏右旋糖(Ringer's dextrose)，右旋糖和氯化钠，林格氏乳酸盐(lactated Ringer's)，或不挥发性油。静脉内媒介包含液体和营养补充物，电解质补充物(诸如基于林格氏右旋糖的那些)，等等。也可以存在防腐剂和其它添加剂，诸如例如抗微生物剂，抗氧化剂，螯合剂，和惰性气体，等等。此外，根据药物组合物的预定用途，本发明的药物组合物可以包含其它药剂，诸如多巴胺或精神药理学药物。
主治医师或其他医学人员会基于各种临床因素确定剂量方案。如医学领域中公知的，任一患者的剂量取决于多种因素，包括患者的体型，体表面积，年龄，要施用的具体化合物，性别，施用次数和路径，总体健康，和并行施用的其它药物。主题抗Tau抗体的剂量范围可以是例如0.001μg至1000μg；然而，低于或高于此例示性范围的剂量也涵盖在内，尤其是考虑到上述的因素。一般来说，剂量范围可以是例如约0.0001至100mg/kg，或约0.01至5mg/kg(例如0.02mg/kg，0.25mg/kg，0.5mg/kg，0.75mg/kg，1mg/kg，2mg/kg，等等)宿主体重。例如，剂量可以是1mg/kg体重或10mg/kg体重或在1-10mg/kg的范围内，或至少1mg/kg。上述范围中的中间剂量也意图在本发明的范围内。受试者可以每天，隔天(on alternative days)，每周或根据通过经验分析确定的任何其它日程表施用此类剂量。一种例示性的治疗需要在例如至少6个月的延长时段里施用多个剂量。别的例示性的治疗方案需要每两周一次或一月一次或每3至6个月一次施用。例示性的剂量日程表包括连续几天1-10mg/kg或15mg/kg，隔天30mg/kg或每周60mg/kg。在一些方法中，同时施用两种或更多种具有不同结合特异性的单克隆抗体，在该情况中施用的每种抗体的剂量落在指定的范围内。可以通过定期评估监测进展。
联合疗法
可以单独(例如作为单一疗法)；或在与一种或多种别的治疗剂的联合疗法中对有此需要的个体施用本公开文本的抗Tau抗体。
为了治疗AD，合适的别的治疗剂包括但不限于乙酰胆碱酯酶抑制剂，包括但不限于安理申(Aricept)(多奈哌齐(donepezil))，艾斯能(Exelon)(利凡斯的明(rivastigmine))，美曲膦酯(metrifonate)，和他克林(tacrine)(Cognex)；抗Aβ抗体；非类固醇消炎剂，包括但不限于布洛芬(ibuprofen)和茚甲新(indomethacin)；环加氧酶-2(Cox2)抑制剂，诸如西乐葆(Celebrex)；和单胺氧化酶抑制剂，诸如司来吉兰(Selegilene)(Eldepryl或Deprenyl)。每种上述药剂的剂量是本领域中己知的。
在治疗AD中的另一种合适的别的治疗剂是抑制Tau聚集的药剂，例如抑制Tau聚集的萘醌衍生物，如美国专利No.7,605,179中所记载的。另一种合适的别的治疗剂是抑制Tau磷酸化的药剂，例如抑制Tau蛋白激酶1的3-取代-4-嘧啶酮衍生物，如美国专利No.7,572,793中所记载的。
如本文中使用的，“与……组合”指如下的用法，例如其中第一化合物在第二化合物的整个施用过程期间施用；其中第一化合物施用的一段时间与第二化合物的施用交叠，例如其中第一化合物的施用在第二化合物的施用前开始，并且第一化合物的施用在第二化合物的施用结束前结束；其中第二化合物的施用在第一化合物的施用前开始，并且第二化合物的施用在第一化合物的施用结束前结束；其中第一化合物的施用在第二化合物的施用开始前开始，并且第二化合物的施用在第一化合物的施用结束前结束；其中第二化合物的施用在第一化合物的施用开始前开始，并且第一化合物的施用在第二化合物的施用结束前结束。因此，“组合”也可以指涉及两种或更多种化合物的施用的方案。如本文中使用的，“与……组合”也指可以在相同或不同配制剂中，通过相同或不同路径，及在相同或不同剂量形式类型中施用的两种或更多种化合物的施用。
要治疗的个体
对于用主题抗Tau抗体治疗合适的个体包括已经诊断为具有Tau病的个体；处于比一般群体更大风险发生Tau病的个体(例如具有发生Tau病的遗传素因的个体)；诸如此类。在一些情况中，该个体是成人。在一些情况中，该成人是40岁年龄或更老，50岁年龄或更老，60岁年龄或更老，70岁年龄或更老，或80岁年龄或更老。例如，该成人可以是40岁至50岁，50岁至60岁，60岁至70岁，或比70岁更老。
检测方法
本公开文本提供在自个体获得的生物学样品中检测细胞外Tau(eTau)多肽(例如本公开文本的Tau多肽)的方法；和在活的个体中体内检测Tau肽的方法。可以使用本公开文本的检测方法来确定个体是否具有Tau病或处于发生Tau病的风险。可以使用本公开文本的检测方法来确定Tau病的阶段(严重程度)。可以使用本公开文本的检测方法来测定患者对用于治疗Tau病的治疗方案的响应。可以使用主题检测方法测试生物学样品，其中该生物学样品是自怀疑具有Tau病的个体，已经诊断为具有Tau病的个体，具有发生Tau病的遗传素因的个体，等获得的。
本公开文本提供诊断个体中的神经变性性Tau病的方法。该方法一般涉及(a)评估自个体获得的生物学样品中eTau多肽的水平；并(b)将eTau多肽水平与指示一位或多位对照受试者中病理性修饰或聚集Tau水平的参照，标准，或正常对照值进行比较。病理性修饰或聚集Tau水平和正常对照值之间的差异或相似指示个体具有神经变性性Tau病。
本公开文本提供监测个体中神经变性性Tau病的进展或对神经变性性Tau病的治疗的响应的方法。该方法一般涉及将第一时间点时自个体获得的生物学样品中的eTau多肽水平与第二时间点时自个体获得的生物学样品中的eTau多肽水平进行比较。在第二时间点时自个体获得的生物学样品中的eTau多肽水平与在第一时间点时自个体获得的生物学样品中的eTau多肽水平相比的差异可以提供关于下述各项的指示：i)Tau病是否在进展或疾病的进展是否已经停止；和/或ii)Tau病进展有多快；和/或iii)个体是否对用于治疗Tau病的药物治疗或其它治疗方案展现出有益的临床响应。
本公开文本提供对Tau病分期的方法。例如，主题方法可以提供对阿尔茨海默氏病的分期。例如，来自活个体的生物学样品(例如CSF或其它液体生物学样品)中的eTau多肽水平可以提供关于AD的Braak阶段的指示。Braak andBraak(1995)Neurobiol.Aging 16:271。例如，来自活个体的生物学样品中的主题Tau肽水平可以提供关于个体是否为AD的跨内嗅带(transentorhinal)I-II期；AD的边缘III-IV期；或AD的新皮质V-VI期的指示。
可以通过本领域中己知的任何合适的方法来评估生物学样品中的eTau多肽水平。合适的方法包括但不限于蛋白质(“Western”)印迹，免疫沉淀，酶联免疫吸附测定法(ELISA)，放射性免疫测定法(RIA)，荧光活化细胞分选(FACS)，二维凝胶电泳，质谱术(MS)，基质辅助激光解吸/离子化-飞行时间-MS(MALDI-TOF)，表面增强的激光解吸离子化-飞行时间(SELDI-TOF)，高效液相层析(HPLC)，快速蛋白质液相层析(FPLC)，多维液相层析(LC)接着是串联质谱术(MS/MS)，和激光密度计量术。
体内成像
如上文讨论的，本公开文本提供检测活个体中的eTau多肽的方法，例如通过体内成像技术进行。例如，在一个实施方案中，可以通过正电子发射断层摄影术(PET)，单光子发射断层摄影术(SPECT)，近红外(NIR)光学成像，或磁共振成像(MRI)实现eTau多肽的体内成像。对个体施用主题抗Tau抗体，并检测Tau肽的存在和/或水平。抗Tau抗体可以包含适合于在PET，SPECT，NIR或MRI中使用的标记物。此类标记物包括对比剂或放射性同位素，其中对比剂或放射性同位素是适合于在成像(例如对人实施的成像规程)中使用的，如上文描述的。
生成报告
在一些情况中，主题检测方法包括检测自个体获得的生物学样品中的eTau多肽；并基于检测到的Tau的水平，生成报告和/或指导获得生物学样品的个体的疗法或管理。
报告可以包括下列一项或多项：关于个体是否可能具有Tau病的指示；Tau病严重程度的指示；关于个体是否展现出对Tau病治疗的有益临床响应的指示；等等。
因此，报告可以包括诸如预测的个体具有或会发生Tau病的可能性；关于进一步评估的推荐；关于治疗性药物和或其它健康管理干预的推荐；等等信息。
例如，本文中公开的方法可以进一步包括产生或输出提供主题评估的结果的报告的步骤，所述报告可以以电子介质(例如计算机监视器上的电子显示器)形式，或以有形介质(例如纸或其它有形介质上印刷的报告)形式提供。关于个人具有或有风险发生Tau病的可能性的评估可以称为“风险报告”，“风险得分”，或“可能性得分”。准备报告的个人或单位(“报告生成者”)也可以实施诸如样品收集，样品加工，等步骤。或者，报告生成者以外的单位可以实施诸如样品收集，样品加工，等步骤。可以给用户提供风险评估报告。“用户”可以是健康专业人员(例如临床医生，实验室技术人员或内科医生)。
指导健康管理
在一些情况中，主题检测方法包括检测自个体获得的生物学样品中的eTau多肽；并基于检测到的Tau的水平，生成报告和/或指导获得生物学样品的个体的疗法或管理。
因此，例如根据主题检测方法的结果，可以做出推荐，其推荐个体进行Tau病的治疗性干预(治疗)和/或考虑个体进行特殊健康管理。
治疗性干预可以包括例如用于治疗阿尔茨海默氏病的药物疗法。用于治疗阿尔茨海默氏病的药物疗法的例子包括但不限于乙酰胆碱酯酶抑制剂，包括但不限于安理申(Aricept)(多奈哌齐(donepezil))，艾斯能(Exelon)(利凡斯的明(rivastigmine))，美曲膦酯(metrifonate)，和他克林(tacrine)(Cognex)；抗Aβ抗体(例如bapineuzumab；solanezumab)；抗Tau抗体；非类固醇消炎剂，包括但不限于布洛芬(ibuprofen)和茚甲新(indomethacin)；环加氧酶-2(Cox2)抑制剂，诸如西乐葆(Celebrex)；和单胺氧化酶抑制剂，诸如司来吉兰(Selegilene)(Eldepryl或Deprenyl)。每种上述药剂的剂量是本领域已知的。例如，安理申可以以每天50mg口服施用6周，并且若个体耐受良好的话，此后每天以10mg施用。
试剂盒和测定装置
本公开文本提供用于实施本文中描述的诊断方法的试剂盒和测定装置。
试剂盒
本公开文本提供用于实施本文中描述的诊断方法的试剂盒。在一些情况中，主题试剂盒包括本公开文本的抗Tau抗体。在其它情况中，主题试剂盒包括本公开文本的Tau肽。
包含抗Tau抗体的试剂盒
在一些情况中，主题试剂盒包括本公开文本的抗Tau抗体。该抗Tau抗体可以是在不溶性支持物(例如测试条，多孔板的孔，珠(例如磁珠)，等)上固定化的，如上文描述的。
抗Tau抗体可包含可检测标记物。在抗体包含可检测标记物的情况中，主题试剂盒可包括一种或多种用于显现该可检测标记物的试剂。经标记的抗体可包含标记物，诸如化学发光剂，颗粒标记物，比色剂，能量转移剂，酶，荧光剂，或放射性同位素。合适的可检测标记物包括通过光谱学，光化学，生物化学，免疫化学，电学，光学，或化学手段可检测的任何组合物。合适的可检测标记物包括但不限于荧光标记物(例如荧光素异硫氰酸，德克萨斯红，罗丹明，绿色荧光蛋白，红色荧光蛋白，黄色荧光蛋白，诸如此类)；放射性标记物(例如3H，125I，35S，14C，或32P)；和酶(例如辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶，萤光素酶，和作用于底物以生成可以通过荧光，比色，或分光光度手段检测的产物的其它酶)。
在一些实施方案中，主题试剂盒包括纯化后的本公开文本的Tau肽，该纯化后的Tau肽可以用作阳性对照，其中该Tau肽是超过90％纯的，超过95％纯的，超过98％纯的，或超过99％纯的。标准Tau肽可以合成制备，可以自生成该Tau肽的细胞分离，或可以自包含生成该Tau肽的细胞的细胞培养物的培养液分离。在一些情况中，标准Tau肽是合成制备的，例如使用用于肽合成的标准化学方法。在一些情况中，纯化后的Tau肽对于生成标准曲线是合适的，例如用于量化在来自测试个体的测试生物学样品中检测到的Tau肽。对于生成标准曲线合适的Tau肽的量的例子包括例如0.5μg，1.0μg，1.5μg，2.0μg，和5.0μg。
包含Tau肽的试剂盒
在其它情况中，主题试剂盒包括本公开文本的Tau肽。此类试剂盒可以用于检测特异性结合该试剂盒的Tau肽的抗体的存在。在一些情况中，该Tau肽是超过90％纯的，超过95％纯的，超过98％纯的，或超过99％纯的。
该试剂盒中存在的Tau肽可包括可检测标记物。合适的可检测标记物包括通过光谱学，光化学，生物化学，免疫化学，电学，光学或化学手段可检测的任何模块。合适的可检测标记物包括但不限于磁珠(例如DynabeadsTM)；荧光蛋白(例如绿色荧光蛋白，红色荧光蛋白，黄色荧光蛋白，诸如此类)；荧光染料(例如荧光素异硫氰酸，德克萨斯红，罗丹明或罗丹明衍生物(例如罗丹明B；TAMRA)，7-氨基-4-甲基-香豆素(AMC)，5-((2-氨基乙基)氨基)萘-1-磺酸(EDANS)，7-硝基苯-2-氧杂-1,3-二唑(NBD)，等)；荧光淬灭剂(例如Dabcyl，Dansyl，2,4-二硝基酚，等)；对硝基苯胺；放射性标记物(例如3H，125I，35S，14C，14N，13C，15N，或32P)；酶(例如辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶，萤光素酶，和酶联免疫吸附测定法(ELISA)中常用的其它酶)；比色标记物，诸如胶态金或有色玻璃或塑料(例如聚苯乙烯，聚丙烯，胶乳，等)珠；诸如此类。
该试剂盒中存在的Tau肽可以是直接或经接头附着至固体支持物的。合适的支持物是本领域公知的，而且特别包括商品化的柱材料，聚苯乙烯珠，胶乳珠，磁珠，胶态金属颗粒，玻璃和/或硅芯片和表面，硝酸纤维素条，尼龙膜，片，反应盘(例如多孔板)的孔，塑料管，等。固体支持物可包含多种物质任一，包括例如玻璃，聚苯乙烯，聚氯乙烯，聚丙烯，聚乙烯，聚碳酸酯，右旋糖苷，尼龙，直链淀粉，天然和修饰的纤维素，聚丙烯酰胺，琼脂糖，和磁石。用于将主题Tau肽固定化到固体支持物上的合适方法是公知的，而且包括但不限于离子，疏水，共价相互作用，诸如此类。固体支持物可以是可溶性的或不溶性的，例如在水性溶液中。在一些实施方案中，合适的固体支持物在水性溶液中一般是不溶性的。
别的成分
根据期望，试剂盒的各种成分可以存在于分开的容器中，或者某些相容成分可以预先组合到单一的容器中。主题试剂盒可以进一步包括一种或多种别的成分，其中合适的别的成分包括：1)阳性对照；2)缓冲液(例如结合缓冲液；清洗缓冲液；等)；3)用于产生可检测信号的试剂；诸如此类。试剂盒的其它任选成分包括：蛋白酶抑制剂；可检测标记物；等。
在上文提及的成分外，主题试剂盒可以包括使用试剂盒的成分实施主题方法的用法说明书。一般在合适的记录介质上记录用于实施主题方法的用法说明书。例如，可以在基底，诸如纸或塑料等上印刷用法说明书。因此，用法说明书可以以包装插页存在于试剂盒中，在试剂盒或其成分(即与包装或分包有关)的容器的标签等中。在其它实施方案中，用法说明书以合适的计算机可读存储介质，例如光碟只读存储器(CD-ROM)，数字通用盘(DVD)，磁盘等上存在的电子存储数据文件存在。在又一些实施方案中，试剂盒中不存在真正的用法说明书，但是提供了用于从远端来源获得用法说明书的手段，例如通过因特网。此实施方案的一个例子是包括可以查看用法说明书和/或可以下载用法说明书的网址的试剂盒。就用法说明书而言，在合适的基质上记录这种用于获得用法说明书的手段。
测定装置
本公开文本提供用于实施主题诊断方法的测定装置。本公开文本的测定装置可用于在自个体获得的液体生物学样品中检测本文中描述的Tau肽。
主题装置可包括定义轴向流路程的模具。该模具可包含：i)在流路程上游端接收液体样品的样品接收区。该模具可进一步包含：ii)一个或多个位于流路程内且在样品接收区下游的测试区，该一个或多个测试区每个包含对主题Tau肽特异性的抗体，在每个测试区中，其中固定化抗体每种能够结合液体样品中存在的不同Tau肽，以形成固定化Tau肽。该模具可进一步包含：iii)一个或多个位于流路程内且在样品接收区下游的对照区，其中该一个或多个对照区可包括阳性和/或阴性对照。测试区和对照区可以以交替形式位于流路程内，以位于任何对照区上游的测试区开始。在一些情况中，该测定装置只具有一个位于流路程内且在样品接收区下游的测试区，其中该一个测试区包含对主题Tau肽特异性的抗体。
在使用此类测定装置时，在一些实施方案中，在将液体样品应用于该装置的样品接收区之前，可首先将经标记的对主题Tau肽特异性的抗体与液体样品混合，其中所述混合产生经标记的抗体/Tau肽复合物。在这些实施方案中，将包含经标记的抗体/Tau肽复合物的液体样品应用于测定装置的样品接收区。液体样品沿着装置流动，直至液体样品到达测试区。测试区中存在的抗体结合经标记的抗体/Tau肽复合物中存在的Tau肽；然后可进行检测。
测定装置可进一步包括标记区，其包含经标记的对Tau肽特异性的抗体，其中该经标记的抗体能够结合固定化Tau肽复合物中存在的Tau肽，以形成经标记的Tau肽复合物，其中该经标记的抗体是在液体样品存在下可动员的。在使用此类测定装置时，将包含Tau肽的液体样品应用于该装置的样品接收区；标记区中存在的抗体结合Tau肽，形成经标记的抗体/Tau肽复合物，其像经标记的抗体一样是可动员的；并且，经标记的抗体/Tau肽复合物沿着装置流动，直至液体样品到达测试区。测试区中存在的抗体结合经标记的抗体/Tau肽复合物中存在的Tau肽；然后可进行检测。
经标记的抗体可包含标记物，诸如化学发光剂，颗粒标记物，比色剂，能量转移剂，酶，荧光剂，或放射性同位素。合适的标记物在上文中有描述。
对照区包括阳性对照区和阴性对照区。
模具一般是不溶性支持物，其中合适的不溶性支持物包括但不限于聚二氟乙烯(PVDF)，纤维素，硝酸纤维素，尼龙，诸如此类。模具可以是柔性的，或者可以是相对非柔性的。模具可以位于包含支持物和任选盖子的托架内，其中该托架含有一个应用孔和一个或多个观察口。测定装置可以是多种形式任一，例如测试条，蘸棍，等。
实施例
提出以下实施例，从而给本领域普通技术人员提供如何产生和使用本发明的完全公开和描述，而并不意图限制发明人视为其发明的主题的范围，它们也不意图表示下文的实验是实施的所有或唯一实验。就使用的数字(例如量，温度等)而言已经努力确保精确性，但是应当考虑一些实验误差和偏差。除非另有指示，份数是重量份，分子量是重量平均分子量，温度以摄氏度计，而压力为或接近大气压。可以使用标准缩写，例如bp，碱基对；kb，千碱基；pl，皮升；s或sec，秒；min，分钟；h或hr，小时；aa，氨基酸；kb，千碱基；bp，碱基对；nt，核苷酸；i.m.，肌肉内；i.p.，腹膜内；s.c.，皮下；kd或kDa，千道尔顿；Ab，抗体；等等。
实施例1：细胞外Tau肽的分离和表征
自皮质神经元的条件化培养基分离细胞外Tau(“eTau”)形式，该皮质神经元衍生自自具有阿尔茨海默氏病的个体生成的iPSC。
将自来自AD患者皮肤打孔的成纤维细胞生成的iPSC分化成皮质神经元，通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)将来自这些神经元的条件化培养基(CM)分开，并用IPN002和Tau H-150抗体进行Western印迹。
图3呈现数据，显示多份样品中的eTau肽水平。一个健康(“H”)和一个PSEN1fAD(家族性AD)系的多份生物学复制品显示，与健康系相比，fAD系中存在更多eTau。已经为这项和其它实验及系(包括多个健康系，这个fAD系和一个唐氏系(具有APP复制))量化这些数据，它们一致显示fAD或唐氏系中的eTau与健康系相比的一定范围(30％至100％)升高。这些升高与AD CSF中存在的Tau水平与健康患者CSF相比的升高一致。
这些N端eTau条带提示条件化培养基中存在Tau切割产物，而且这些片段的蛋白质序列先前没有描述。如此，开发了分离这些eTau反应性蛋白质的工艺；并测定了片段的氨基酸序列。将条件化培养基(1.6升，自sAD(散发性AD)和fAD患者iPSC衍生的皮质神经元培养物合并)在IgG偶联的Sepharose 4B树脂上预澄清，然后在柱上进行亲和分离，其中将IPN001抗体(Tau氨基酸反应性#2-18)偶联至Sepharose 4B树脂。将来自IPN001树脂的流出液添加至Tau46C端抗体偶联的Sepharose 4B柱，并经低pH甘氨酸缓冲液的洗脱进行亲和分离。浓缩来自这两个柱的洗出液，并用IPN002和Dako Tau(C端Tau)探查在Western印迹上测试的小级分。
图4显示，IPN002识别IPN001洗出液中处于全长分子量大小50kd的一条弱带和大小为20-30kd的多条IPN002反应性eTau条带。与之对比，Tau14洗出液的Dako C端抗体探针不显示免疫反应性条带，提示AD iPSC条件化培养基含有N端形式的Tau，但是不含C端完整Tau。
为了测定IPN002免疫反应性条带的序列，将剩余样品在SDS-PAGE上分开，用考马斯染色，并自凝胶切出四条带(20-30kd)中存在的eTau条带，以及全长Tau，并提交LC/MS/MS分析。用三种不同蛋白酶(胰蛋白酶，糜蛋白酶，和弹性蛋白酶)分开蛋白水解加工这些凝胶切片。将蛋白水解片段分开，并通过配有连接ThermoFisher Orbitrap Velos Pro的Waters NanoAcquity HPLC***的nano LC/MS/MS加工。使用Mascot针对Swissprot人数据库搜索序列数据。
图1A中描绘称作eTau1(氨基酸2-166；氨基酸2-172；和氨基酸2-176)，eTau2，eTau3，和eTau4的eTau片段的氨基酸序列。
实施例2：Tau肽的主动免疫接种
在非人动物模型中对Tau肽测试Tau肽在动物模型中诱导有效降低Tau病的一项或多项病理学特征的免疫应答的能力。
合适的非人动物模型包括表达具有P301L突变的人Tau同等型的转基因小鼠；例如表达突变型(P301L)Tau的JNPL3转基因小鼠。参见例如Lewis et al.(2000)Nat.Genet.25:402；和Lin et al.(2003)Am.J.Pathol.162:213。
将本公开文本的Tau肽吸附到磷酸铝颗粒上以生成免疫原，或连接至载体，诸如匙孔虫戚血蓝蛋白(KLH)。在约2个月龄，或4个月龄，或比4个月龄老时开始，将Tau肽免疫原皮下注射(有或无CFA或IFA)入小鼠；大约每两周实施后续免疫接种。给对照小鼠施用没有Tau肽的磷酸铝颗粒。
使用ELISA测定针对该肽的抗体应答以检测自小鼠采集的血浆中对Tau肽免疫原特异性的抗体的存在。用主题Tau肽包被96孔板的孔；将来自小鼠的血浆添加至孔；并使用可检测标记的对小鼠IgG特异性的二抗检测血浆抗体的结合。例如，二抗可以连接酶，诸如辣根过氧化物酶。
测定免疫接种Tau肽对Tau病的各种病理学特征的影响。例如，使用免疫组织化学方法对Tau肽免疫接种小鼠和对照小鼠的脑分析Tau聚集体的存在。例如，使用免疫组织化学方法对Tau肽免疫接种小鼠和对照小鼠的齿状圆分析Tau聚集体的存在。可以评估神经纤维缠结的存在和量。
可以分析免疫接种Tau肽对Tau病的行为特征的影响。参见例如Carter,R.J.,Morton,J.and Dunnett,S.B.2001.Motor Coordination and Balance inRodents.Current Protocols in Neuroscience.8.12.1-8.12.14。例如，可以测试运动活性。可以将Tau肽免疫接种小鼠和对照小鼠提交转杆测试(rotarod test)(参见例如Jones and Roberts(1968)J Pharm Pharmacol.1968Apr；20(4):302-4.“The quantitative measurement of motor inco-ordination in naive mice using anaccelerating rotarod”)；和/或过梁测试(traverse beam test)。参见例如Brooks andDunnett(2009)Nat.Rev.Neurosci.10:519-29:“Tests to assess motor phenotypein mice:a user's guide”。
可以测试免疫接种Tau肽对认知功能的影响。例如，可以将Tau肽免疫接种小鼠和对照小鼠提交自发对象识别测试(其测量短期记忆缺陷)。参见例如Ennaceur and Delacour(1988)Behav.Brain Res.31:47。可以采用设计用于评估学习和记忆缺陷的行为测试。此类测试的一个例子是Morris Water迷宫(Morris(1981)Learn Motivat 12:239-260)。可以使用工作记忆损伤的3跑道挡板(试图通过四个选择点处的三个挡板门的两个不正确挡板)来研究记忆和学习缺陷(Ohno et al.,Pharmacol Biochem Behav 57:257-261(1997))。
实施例3：抗Tau抗体的被动免疫接种
在非人动物模型中对抗Tau抗体测试抗Tau抗体降低Tau病的一项或多项病理学特征的能力。
合适的非人动物模型包括表达具有P301L突变的人Tau同等型的转基因小鼠；例如实施例2中所述表达突变型(P301L)Tau的JNPL3转基因小鼠。
将对本公开文本的Tau肽特异性的抗体腹膜内注射入小鼠；给对照小鼠注射小鼠IgG。在约3个月龄，4个月龄，或比4个月龄老时给小鼠注射抗Tau抗体；接着是相隔7天的别的注射。
可以如实施例2所述分析小鼠。
实施例4：患者样品中eTau的检测
材料和方法
自iPSC来源的皮质神经元的条件化培养基收集
使用Yamanaka法(Takahashi et al.(2007)Cell 131(5),861)从健康年龄匹配对照和阿尔茨海默氏病患者生成iPSC(诱导多能性干细胞)，如记载于Dimos et al.(2008)Science 321:1218中的。大体上符合使用双重SMAD单层法的发表方案(Chambers et al.(2009)Nat.Biotechnol.27:275)将iPSC分化成皮质神经元，接着进行皮质神经元分化，其类似于记载于Burkhardt et al.(2012)Mol.Cell Neurosci.56C:355-364中的。将培养108天的iPSC衍生的皮质神经元(iPSC-CN)进行清洗，添加新鲜的培养基，并在3天后收集条件化培养基，除非另外指明。对所述品系(line)进行多次分拣(differentiation)以确保eTau水平的再现性。将条件化培养基以15,000rpm旋转15分钟，之后加工以进行Western印迹或Tau ELISA。对于布雷菲尔德菌素(brefeldin)A实验，用PBS清洗iPSC-CN培养物，之后添加具有和没有1μM布雷菲尔德菌素A的新鲜培养基，并将培养基条件化1小时，之后收集。
自人初级皮质神经元的条件化培养基收集
制备人皮质神经元培养物(HCC)，如记载于Wright et al.(2007)Neurobiol.Aging 28:226中的。简言之，通过Advanced Bioscience Resources(Alameda，CA)并且遵守联邦胎儿研究指南(federal guidelines for fetal research)和统一解剖捐赠法案(Uniformed Anatomical Gift Act)获得人胎儿脑皮质组织。将组织在汉克氏缓冲盐水溶液(Cellgro)中漂洗，并且在存在1μg/ml DNA酶(EMD)的情况中磨碎，并通过100μm细胞过滤器。在离心后，将沉淀物在0.05％胰蛋白酶/EDTA(Invitrogen)中于37℃重悬20min。通过添加等体积的含有10％胎牛血清(FBS)的培养基灭活胰蛋白酶，并在存在DNA酶的情况下再次温和磨碎样品。在离心后，将细胞在铺板培养基(含有B27的Neurobasal，Invitrogen)中重悬，并计数。将细胞在用多聚-d-赖氨酸及层粘连蛋白包被的盖玻片上或板中铺开。清洗3周龄HCC，添加新鲜培养基，并在条件化3天后收集培养基。将条件化培养基以15,000rpm旋转15分钟，之后加工以进行Western印迹。
P301L小鼠ISF和人CSF收集
使用异氟烷(2％,800mL/min O2)使小鼠麻醉。使用布比卡因(Bupivacain)/肾上腺素进行局部止痛法，并使用fynadine或carprophen进行手术期间/术后止痛。将动物置于立体定位架(Kopf instruments,USA)中。将推拉式微透析探头(磷脂酰乙醇胺(PEE)膜，Brainlink，the Netherlands)***海马体中(3mm暴露表面)。手术后24和48小时实施微透析取样。在取祥当天，将动物的探头用氟化乙烯丙烯(FEP)管道与微灌注泵(Harvard PHD 2000注射器泵，Holliston，MA或类似装置)连接。用含有147mM NaCl，3.0mM KC1，1.2mM CaCl2，和1.2mM MgCl2，和0.15％牛血清白蛋白(BSA)的人工CSF(aCSF)以0.75μL/min的流速灌注微透析探头。将微透析样品收集60分钟时段。在稳定期后，收集基底样品。在取样的第二天，重复上述程序(Brains Online)。将间质液(ISF)以15,000rpm旋转15分钟，并使用经澄清的上清液进行eTau Western印迹。
将来自10名健康者(Precision Med)，10名AD患者(Precision Med)和10名PSP患者的集合的10ml CSF(Precision Med)收集，以15,000rpm旋转15分钟，将上清液在IgG亲和树脂上预先澄清，接着在IPN002抗Tau亲和树脂上进行Tau分离，清洗，用50mM甘氨酸，pH 2.3及150mM NaCl洗脱到含有1M TBS，pH 8.3的管中以中和pH，在YM10滤器上浓缩，并制备用于Tau Western印迹。与阳性对照类似地分离来自fAD PSEN1患者的iPSC-CN条件化培养基以比较条带型。
Western印迹
将条件化培养基在Laemmli缓冲液(Sigma)中稀释。将培养的神经元用PBS漂洗，之后在DMEM(Invitrogen)中的0.05％胰蛋白酶中温育，漂洗，并在Laemmli缓冲液中裂解。将所有样品煮沸，在tris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶(Invitrogen)上分开，并使用iBlot(Invitrogen)转移至硝化纤维素。将膜在封闭缓冲液(LiCor)中温育，用含有0.1％Tween-20的封闭缓冲液中0.5μg/ml针对Tau的IPN001抗体和针对β-肌动蛋白的抗体(1:2000；Abcam)，和抗小鼠680和抗兔800二抗(LiCor)探查。用Odyssey SA红外成像***扫描印迹，并使用Odyssey SA软件(LiCor)分析。
Tau ELISA
在3天条件化期后从iPSC衍生的皮质神经元培养物收集培养基，并使用Alphascreen同质测定法测定以测量Tau。将10μg/ml抗Tau AlphaLISA受体珠和1nM生物素化的抗Tau抗体与条件化培养基于室温混合过夜。将40μg/ml链霉亲合素-供体珠(Perkin Elmer)于室温添加30分钟，并在Envision读板仪上读板。
eTau纯化
将自来自AD患者的iPSC-CN收集的条件化培养基以15,000rpm旋转15分钟，收集上清液，并在IgG亲和树脂上预先澄清。将预先澄清的上清液通过IPN002抗Tau抗体树脂，清洗，并用50mM柠檬酸钠，pH 2.3及150mM NaCl将eTau洗脱到含有1M TBS，pH 8.3的管中以中和pH。将洗脱液浓缩.并将缓冲液交换成PBS。
结果
进行测定法以检测各种流体中的eTau片段。图5中显示了结果。
如图5A左侧小图中显示的，内源Tau从来源于人诱导多能干细胞(人iPSC-皮质神经元；iPSC-CN)的皮质神经元分泌，其中分泌性Tau称为细胞外Tau或“eTau”。如图5A，左起第二个小图中显示的，eTau也存在于来自人初级神经元(人皮质细胞；“HCC”)的条件化培养基中，这确认了eTau不是iPSC分化的人为因素。在神经元裂解物中也检出这些eTau片段，提示了Tau在eTau分泌前在神经元内部被切割。
如图5A，中间小图中显示的，在来自P301L Tau小鼠的间质液(ISF)中检出类似的Tau片段，其中在任一***中没有检出全长Tau。P301L小鼠是转基因的，所述转基因是对于具有P301L突变的人Tau形式而言；P301L小鼠是人Tau病模型。参见例如et al.(2001)J.Biol.Chem.276:529；和Lewis et al.(2000)Nature Genetics 25:402。
如图5A，右侧小图中显示的，与来自健康患者的品系相比，eTau水平在来自AD患者的CSF中及来自家族性AD(fAD)患者的多个品系中是升高的。如图5A，右侧小图中显示的，在来自PSP患者的CSF中也检出了eTau。
为了阐明eTau分泌的机制，表征了eTau释放的动力学。图5B所示数据显示eTau是快至添加新鲜培养基后2分钟时自健康和fAD衍生神经元分泌的。
用规范ER-Golgi分泌途径抑制剂布雷菲尔德菌素A处理神经元。如图5C所示，布雷菲尔德菌素A对eTau分泌没有显著影响，提示eTau分泌的非规范途径。这些数据显示eTau自神经元快速分泌，并提示AD神经元中升高的eTau水平和来自AD患者的CSF中升高的Tau水平之间的有趣平行。
用IPN002(一种识别Tau氨基酸15-24内的表位的单抗)；HT7(一种结合人Tau氨基酸159-163内的表位的小鼠单克隆抗体)；或T46(一种结合Tau C端区中的表位的抗体)免疫沉淀来自健康个体和可能有慢性创伤性脑病(CTE)的个体的CSF。在凝胶上将免疫沉淀的材料分开，将分开的材料转移至膜，并用IPN001(一种识别Tau氨基酸1-30内的表位的单抗)探查膜。数据显示于图6。N3是培养基对照；CM是来自fAd iPSC-CN系11369.1的条件化培养基。在相同凝胶中运行重组全长Tau(“rTau”)和eTau1a(氨基酸2-166；SEQ IDNO:3)，以及分子量(MW)标志物。数据指示Tau片段存在于具有CTE的个体的CSF中，而且这些Tau片段受到IPN002和HT7识别，但是不受T46识别。
用IPN001免疫沉淀来自iPSC-CN的条件化培养基，该iPSC-CN衍生自自健康个体，具有AD的个体，和具有FTD的个体获得的细胞。在凝胶上将免疫沉淀的材料分开，将分开的材料转移至膜，并用IPN002探查膜。数据显示于图7。如图7所示，IPN001/IPN002反应性Tau片段存在于衍生自自具有AD的个体和具有FTD的个体获得的细胞的iPSC-CN中。
实施例5：eTau诱导神经元活动过度
方法
使用填充溶液的微移液管(2-5MOhm)在正常人星形胶质细胞的单层上培养的iPSC-CN的全细胞膜片钳记录，所述溶液含有(mM)：K-甲基-硫酸盐(140)，NaCl(10)，CaCl2(1)，Mg-ATP(3)；Na-GTP(0.4)，EGTA(0.2)，HEPES(10)，磷酸肌酸(10)，具有调节的pH＝7.3和mOsm＝305。用含有(mM)：NaCl(140),KCl(2.5)，MgCl2(2)，CaCl2(2)，Hepes(10)，D-葡萄糖(10)，蔗糖(20)的人工脑脊髓液灌注(2ml/min))神经元，调节pH＝7.4和mOsm＝310。使用pClamp-10.3数据获得软件(Molecular Devices)和MultiClamp 700B放大器(Axon Instrument；Foster City CA)完成记录。使用MiniSquirt微灌注***(AutoMate，Berkeley，CA)实施eTau，或eTau与抑制剂河豚毒素(TTX)(Tocris)，MK801(Sigma)，或NBOX(Tocris)的喷出(puff)应用。离线数据分析使用Clampfit 10.2分析软件(Molecular Devices)。于34-37℃进行记录。
结果
为了测定eTau是否可以改变神经元功能，将纯化的eTau片段应用于iPSC-CN或HCC。如图8A中显示的，将eTau添加到这些神经元上促进活动过度。如图8B中显示的，由eTau诱导的活动过度被河豚毒素(TTX)及被NMDA和AMPA谷氨酸受体拮抗剂(分别为MK801和NBQX)抑制。TTX通过结合神经细胞膜中电压门控的快速钠通道阻断神经中的动作电位。这些数据提示了eTau诱导的神经元活动过度依赖于动作电位介导的谷氨酸释放。比较而言，如图8A的中间小图中显示的，全长Tau的应用即使是在实际上更高的浓度也不产生神经元活性的可检测变化，显示了eTau诱导的活动过度依赖于Tau片段。这些eTau诱导的活动过度结果强烈提示了在神经元中可发生钙动员。为了测定钙动员是否在神经元中发生，测试eTau对钙动员的影响。如图8C中显示的，eTau-1a强力动员钙。若在慢性背景诸如AD中维持，则此类神经元活动过度可以经由改变的突触触发和异常的神经元刺激导致神经元功能障碍。
实施例6：小鼠皮质神经元对eTau的摄取
方法
对小鼠皮质神经元eTau的摄取
如Wright et al.(2012)Neurobiol.Aging 33:1379所述自15日龄小鼠皮质/海马(BrainBits)制备小鼠皮质细胞(MCC)，并在包括青霉素/链霉素，Glutamax和B27(Invitrogen)的神经基础培养基中培养3周。除非另有说明，将MCC用生长培养基中的50nM eTau处理1天。还在5μg/ml细胞松弛素D(Sigma)存在1小时下或在MCC于4℃温育接着eTau处理1小时后实施eTau摄取测定法。
免疫荧光
将MCC用PBS漂洗，在4％低聚甲醛中固定，用PBS中的10％正常驴血清(Jackson ImmunoResearch)封闭，用PBS中的0.2％Triton-x-100透化(除非另有规定)15分钟，并使用针对Tau的IPN001抗体及驴抗小鼠-A488二抗(MolecularProbes)和DAPI(Invitrogen)染色。使用Leica DMI 600B显微镜以40倍使用LASAF软件(Leica)获得图像。使用Nikon Eclipse Ti共焦显微镜(Nikon)获得共焦图像。
结果
为了解决eTau是否得到接受者神经元摄取，自AD患者iPSC-CN条件化培养基纯化人eTau，并添加至小鼠皮质神经元。发现eTau与皮质神经元有关，如通过人Tau印迹(图9A)和Tau免疫荧光(图9B)检测的。如图9B所示，检测eTau要求细胞透化，确认了eTau在神经元内部。eTau优势分布在躯体(soma)内，但是还沿着神经元突起(process)存在。如通过共焦成像检测的，eTau的样式看来在胞质囊泡中，而且提示eTau经胞吞而内在化，如图9C所示。
为了了解eTau摄取入神经元的机制，表征了eTau的摄取率。如图8D所示，eTau早在2分钟时开始受到接受者神经元摄取，并在60分钟时达到最大水平，贯穿72小时维持稳态水平。eTau很可能是通过主动转运机制来摄取的，因为肌动蛋白聚合抑制剂细胞松弛素D处理和4℃温育抑制摄取，如图9E所示。总之，这些数据第一次证明Tau的新颖形式，eTau的内源分泌，并为Tau摄取和eTau在AD中的潜在作用建立一种神经元模型。
图10描绘在体外eTau摄取入小鼠皮质神经元(MCC)。第1道描绘培养基中的eTau-1a(重组eTau-1a；“reTau1a”)；第2道描绘培养基中的eTau2(重组eTau2；“reTau2”)；第3道描绘培养基中的重组eTau3(“reTau3”)；第4道描绘MW梯形物；第5道描绘未在eTau存在下培养的MCC；第6道描绘MCC中的reTau1a；第7道描绘MCC中的reTau2；而第8道描绘MCC中的reTau3。数据显示在体外eTau受到MCC摄取。
实施例7：eTau的体内摄取
将细胞外Tau片段注射入小鼠。将海马脑切片用IPN001染色。结果显示于图11。如图11所示，eTau受到海马中的神经元摄取。
实施例8：来自神经元培养液的eTau的质谱术分析
通过质谱术(MS)分析自iPS衍生皮质神经元分泌入条件化培养基的eTau。如实施例1所述，自成纤维细胞生成iPSC，该成纤维细胞来自AD患者的皮肤打孔，并分化成皮质神经元。将来自这些皮质神经元的条件化培养基提交使用结合Tau的抗体IPN001的亲和层析。如此获得的亲和纯化后的eTau称作“Prep 19”eTau。通过10-20％梯度Tricine聚丙烯酰胺凝胶电泳将亲和纯化后的Prep 19eTau分开。对凝胶进行印迹，并对印迹用结合Tau的抗体IPN001染色。图12所示结果显示，约30kDa条带是条件化培养基中存在的主要Tau产物。显示Tau-383(全长)进行比较。
图13描绘考马斯染色的下述各项的凝胶：i)重组生成的eTau 2-172(“eTau1批号1”)；ii)自iPSC分化的皮质神经元的条件化培养基中存在的eTau，该iPSC衍生自具有AD的患者(“内源eTau Prep19”和“内源eTauPrep20”)；和iii)重组生成的eTau 2-166(“eTau1a批号11”；和“eTau1a批号15”)。使用MOPS运行缓冲液在12％NuPAGE凝胶上将样品中的蛋白质分开。将凝胶用考马斯蓝染色。图12显示重组生成的eTau 2-166(“eTau1a批号11”；和“eTau1a批号15”)样品具有比自iPSC(该iPSC是自具有AD的患者衍生的)分化的皮质神经元的条件化培养基中存在的eTau要略低的分子量(MW)。自iPSC(该iPSC是自具有AD的患者衍生的)分化的皮质神经元的条件化培养基中存在的eTau具有与重组生成的eTau 2-172相似的MW。
亲和纯化内源eTau Prep 19，并提交质谱术(MS)分析。如图14B所示，观察到优势峰17668.80，和次要峰17512.80，18092.60，和17710.60。图14A描绘eTau 2-166的氨基酸序列(SEQ ID NO:3)，与Tau 0N3R(SEQ ID NO:73)相比。eTau 2-172和eTau 2-176的C端氨基酸以箭描绘。MW为17669的主要种类与含有氨基酸2-172的Tau的乙酰化片段一致。图14C提供一张表，显示内源eTau Prep19中存在的eTau种类的预期和观察分子量。
实施例9：抗Tau抗体
如上所述，鉴定了自AD患者诱导的多能干细胞衍生的皮质神经元培养物的条件化培养基中存在的数种Tau片段。使用Tau特异性的单克隆抗体通过亲和层析自培养物上清液纯化这些Tau片段。纯化后，鉴定了四种主要片段(eTau1，eTau2，eTau3和eTau4)，而且这些片段通过LC/MS的测序确认了它们是自Tau的N端域衍生的。
为了制备针对每种eTau片段的抗体及鉴定新表位抗体(即针对蛋白质的蛋白水解切割后生成的表位的抗体)，给小鼠免疫接种自每种肽的C端区衍生的肽(表2)，该肽是经游离半胱氨酸残基缀合至牛血清清蛋白(BSA)的。
简言之，如下生成针对eTau片段的抗体：给NZBW小鼠免疫接种缀合至BSA的特定肽(表2)，并使用本领域技术人员已知技术(参见例如Galfre et al.,Methods in Enzymology 73:346(1981))用固定化到96孔板上的含有相同序列或延伸肽序列的肽(表2)筛选所得杂交瘤文库。用作免疫原的肽中的Tau衍生序列在图1A中标有下划线。使用流式细胞术生成单一细胞克隆，并使用液相单克隆抗体捕捉测定法对来自这些个体克隆的上清液筛选对生物素标记的全长Tau或重组表达的eTau片段的结合，诸如Nix et al.,in Immunoassays,APractical Approach,editor J.P.Gosling,pp.239-261,Oxford University Press(2000)中披露的。
表2：用于生成和筛选对eTau片段特异性的抗体的肽
1使用纯文本中的半胱氨酸氨基酸将肽缀合至BSA
表3汇总了在每项文库筛选中鉴定的单克隆抗体的数目，并鉴定了最高亲和力克隆，选择它们用于进一步表征。通过蛋白A层析自组织培养物上清液纯化八种选择的单克隆抗体，并在直接结合ELISA型测定法中进一步表征纯化后的抗体。
表3：杂交瘤筛选的结果：鉴定对eTau片段特异性的抗体
1使用纯文本中的半胱氨酸氨基酸将肽缀合至BSA
如表4所示，七种纯化后的抗Tau抗体以高亲和力(KD范围8.00E-11至6.68E-9M)结合全长重组Tau(0N4R)。令人惊讶地，在来自免疫接种来自eTau4片段C端的肽的小鼠的杂交瘤文库中鉴定的抗体7299-M2没有显示任何检测得到的对全长Tau的结合。为了进一步定义纯化后的单克隆抗体的特异性，使用每一种分离的重组eTau片段实施了结合测定法。
表4：抗eTau单克隆抗体的表征
抗体 同种型 靶蛋白 对Tau 0N4R的结合KD(M)
7295-M6 IgG2b eTau1 1.17E-10
7295-M8 IgG2b eTau1 8.00E-11
7297-2M1 IgG1 eTau2 2.21E-09
7298-M1 IgG2a eTau3 6.68E-09
7298-M2 IgG2a eTau3 4.41E-09
7299-M2 IgG1 eTau4 ND1
7299-M5 IgG2b eTau4 5.11E-10
7299-M9 IgG1 eTau4 277E-10
1ND–无检测得到的对Tau 0N4R的结合
如表5所示，抗体展现预期范围的特异性。例如，针对eTau1C端生成的抗体只结合eTau1片段。针对eTau2的生成的抗体结合eTau2和eTau1二者，因而eTau1含有整个eTau2序列。抗体7299-M2展现唯一的对eTau4的特异性，对其它eTau片段没有检测得到的结合(表5和图15)。因为eTau4片段包含在所有更长eTau片段内，这些数据提示抗体7299-M2是对由eTau4C端定义的新颖表位(新表位)特异性的。
表5：所选择的单克隆抗体对特定eTau片段的结合
1ND–无检测得到的结合
使用已知方法(MCLAB，South San Francisco，CA)进行每种抗Tau抗体的VH和VL区的氨基酸测序。具体而言，为每种单克隆抗体制备细胞团粒，并使用-4PCR试剂盒(Life Technologies Inc.，Grand Island，NY)提取RNA。使用针对鼠类抗体信号序列的简并引物集合连同针对IgMVH，IgGVH，IgκVL和IgλVL的恒定区引物通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增V区。纯化自每项成功扩增获得的聚合酶链式反应(PCR)产物，并克隆入‘TA’克隆载体(Easy，Promega，Madison，WI)，自其获得序列。图17-20中提供表6-9，提供了每种抗体的VH和VL区的推导氨基酸序列。表6-9中还提供了每种相应抗体的CDR，是使用www.bioinf.org.uk/abs/(“How toidentify the CDRs by looking at a sequence”)处描述的方法确定的。
抗Tau抗体可用于在生物学样品中检测eTau片段的方法。图16提供此类测定法的一个例子。
虽然本发明已经参考其具体的实施方案进行了描述，但是本领域技术人员应当理解，可以在不偏离本发明的真正精神和范围的前提下进行各种变化及可以替代等同方案。另外，可以进行许多修改以使具体的情况，材料，物质组成，方法，一个或多个方法步骤适合于本发明的目的，精神和范围。所有此类修改均意图在所附的权利要求书的范围内。

Claims (86)

1.一种药物组合物，其包含：
a)分离的Tau肽，其中该Tau肽包含与SEQ ID NO:1-3任一中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约175个氨基酸的长度；和
b)药学可接受赋形剂。
2.一种药物组合物，其包含：
a)分离的Tau肽，其中该Tau肽包含与SEQ ID NO:4中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约150个氨基酸的长度；和
b)药学可接受赋形剂。
3.一种药物组合物，其包含：
a)分离的Tau肽，其中该Tau肽包含与SEQ ID NO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约121个氨基酸的的长度；和
b)药学可接受赋形剂。
4.一种药物组合物，其包含：
a)分离的Tau肽，其中该Tau肽包含与SEQ ID NO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约67个氨基酸的长度；和
b)药学可接受赋形剂。
5.权利要求1-4任一项的药物组合物，其中该Tau肽包含至少一个乙酰化氨基酸。
6.权利要求5的药物组合物，其中该至少一个乙酰化氨基酸是乙酰化N端氨基酸。
7.权利要求1-6任一项的药物组合物，其中该Tau肽包含磷酸化丝氨酸残基和/或磷酸化苏氨酸残基。
8.权利要求1-7任一项的药物组合物，其中该肽包含非肽等排连接和/或非天然氨基酸。
9.权利要求8的药物组合物，其中该非天然氨基酸是D-氨基酸。
10.权利要求1-6任一项的药物组合物，其中该肽与相同氨基酸序列的细胞内Tau肽相比是低磷酸化的。
11.权利要求1-10任一项的药物组合物，其中该肽是在固体支持物上固定化的。
12.权利要求11的药物组合物，其中该固体支持物是珠，测试条，或多孔板的孔。
13.权利要求1-10任一项的药物组合物，其中该肽包含可检测标记物。
14.权利要求13的药物组合物，其中该可检测标记物是化学发光剂，颗粒标记物，比色剂，能量转移剂，酶，荧光剂，对比剂，或放射性同位素。
15.权利要求1-12任一项的药物组合物，其进一步包含佐剂。
16.权利要求15的药物组合物，其中该佐剂对于在人中使用是合适的。
17.权利要求1-12任一项的药物组合物，其中该组合物是无菌的。
18.权利要求1-12任一项的药物组合物，其中该组合物是无内毒素的。
19.一种可检测标记的分离的Tau肽，其中该Tau肽包含：
a)与SEQ ID NO:1-3任一中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约175个氨基酸的长度；
b)与SEQ ID NO:4中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约150个氨基酸的长度；
c)与SEQ ID NO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约121个氨基酸的长度；或
d)与SEQ ID NO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约67个氨基酸的长度。
20.一种生成对Tau肽特异性的抗体的方法，该方法包括：
a)对非人哺乳动物施用该肽，其中该肽包含：
i)与SEQ ID NO:1-3任一中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约175个氨基酸的长度；
ii)与SEQ ID NO:4中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约150个氨基酸的长度；
iii)与SEQ ID NO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约121个氨基酸的长度；或
iv)与SEQ ID NO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约67个氨基酸的长度，其中所述施用诱导针对该肽的抗体产生；并
b)自该哺乳动物分离该抗体和/或产生该抗体的细胞。
21.一种在个体中刺激针对Tau肽的免疫应答的方法，该方法包括对该个体施用权利要求1-10任一项的药物组合物，其中所述施用在该个体中刺激针对该肽的免疫应答。
22.权利要求21的方法，其中所述免疫应答包含对Tau特异性的抗体产生。
23.权利要求21的方法，其中所述免疫应答导致下述一项或多项中的变化：
a)脑组织中游离细胞外Tau的量；
b)间质液(ISF)中游离细胞外Tau的量；
c)脑脊液(CSF)中游离细胞外Tau的量；
d)Tau的神经元至神经元传播；
e)神经元内Tau聚集体的量；
f)小胶质和/或星形细胞活化的程度；
g)磷酸化或高磷酸化Tau的量；
h)ISF或CSF中总Tau或游离Tau的量；
i)细胞内N端Tau片段的量；
j)神经元活动过度；
k)CSF中Aβ40和/或Aβ42的量；
l)Aβ斑负荷；
m)来自神经元的Aβ40和/或Aβ42分泌；
n)淀粉样前体蛋白(APP)启动子活性；
o)APP mRNA和/或蛋白质水平；
p)β-分泌酶和/或γ-分泌酶的活性；
q)Aβ诱导的信号传导途径的活化状态；
r)细胞内总Tau或游离Tau的量；
s)ISF或CSF中抗Tau抗体结合的Tau的量；和
t)细胞内抗Tau抗体结合的Tau的量。
24.一种包含编码Tau肽的核苷酸序列的重组表达载体，其中该Tau肽包含：
a)与SEQ ID NO:1-3任一中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约175个氨基酸的长度；
b)与SEQ ID NO:4中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约150个氨基酸的长度；
c)与SEQ ID NO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约121个氨基酸的长度；或
d)与SEQ ID NO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约67个氨基酸的长度。
25.权利要求24的重组载体，其中该核苷酸序列是可操作连接至转录控制元件的。
26.一种经遗传修饰的宿主细胞，其包含权利要求24或权利要求25的重组载体。
27.一种分离的单克隆抗体，其特异性结合细胞外Tau(eTau)多肽内的表位。
28.权利要求27的抗体，其中该eTau多肽包含：
a)与SEQ ID NO:1-3任一中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约175个氨基酸的长度；
b)与SEQ ID NO:4中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约150个氨基酸的长度；
c)与SEQ ID NO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约121个氨基酸的长度；或
d)与SEQ ID NO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约67个氨基酸的长度。
29.权利要求27的抗体，其中该表位是线性表位。
30.权利要求27的抗体，其中该表位是在该肽的C端处的新表位(neoepitope)。
31.权利要求27的抗体，其中该表位在该肽的C端区中。
32.权利要求27的抗体，其中该抗体以不依赖于该表位内氨基酸磷酸化的方式特异性结合该表位。
33.权利要求27的抗体，其中该表位不包含磷酸化氨基酸。
34.权利要求27的抗体，其中该表位包含磷酸化氨基酸，硝酸化氨基酸，或磷酸化氨基酸和硝酸化氨基酸二者。
35.权利要求27-34任一项的抗体，其中该抗体是人源化的。
36.权利要求35的抗体，其中该抗体包含人源化轻链框架。
37.权利要求35的抗体，其中该抗体包含人源化重链框架。
38.权利要求35的抗体，其中该抗体包含人源化轻链框架和人源化重链框架。
39.权利要求27-38任一项的抗体，其中该抗体包含：
a)VL区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:10，和SEQ IDNO:11的互补决定区(CDR)；和/或
b)VH区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:12，SEQ ID NO:13，和SEQ IDNO:14的互补决定区(CDR)。
40.权利要求27-38任一项的抗体，其中该抗体包含：
a)VL区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:17，SEQ ID NO:18，和SEQ IDNO:19的互补决定区(CDR)；和/或
b)VH区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:21，和SEQ IDNO:22的互补决定区(CDR)。
41.权利要求27-38任一项的抗体，其中该抗体包含：
a)VL区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:65，SEQ ID NO:66，和SEQ IDNO:67的互补决定区(CDR)；和/或
b)VH区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:68，SEQ ID NO:69，和SEQ IDNO:70的互补决定区(CDR)。
42.权利要求27-38任一项的抗体，其中该抗体包含：
a)VL区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:25，SEQ ID NO:26，和SEQ IDNO:27的互补决定区(CDR)；和/或
b)VH区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:28，SEQ ID NO:29，和SEQ IDNO:30的互补决定区(CDR)。
43.权利要求27-38任一项的抗体，其中该抗体包含：
a)VL区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:33，SEQ ID NO:34，和SEQ IDNO:35的互补决定区(CDR)；和/或
b)VH区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:36，SEQ ID NO:37，和SEQ IDNO:38的互补决定区(CDR)。
44.权利要求27-38任一项的抗体，其中该抗体包含：
a)VL区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:41，SEQ ID NO:42，和SEQ IDNO:43的互补决定区(CDR)；和/或
b)VH区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:44，SEQ ID NO:45，和SEQ IDNO:46的互补决定区(CDR)。
45.权利要求27-38任一项的抗体，其中该抗体包含：
a)VL区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:49，SEQ ID NO:50，和SEQ IDNO:51的互补决定区(CDR)；和/或
b)VH区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:53，和SEQ IDNO:54的互补决定区(CDR)。
46.权利要求27-38任一项的抗体，其中该抗体包含：
a)VL区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:57，SEQ ID NO:58，和SEQ IDNO:59的互补决定区(CDR)；和/或
b)VH区，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:60，SEQ ID NO:61，和SEQ IDNO:62的互补决定区(CDR)。
47.权利要求27-46任一项的抗体，其中轻链区和重链区存在于分开的多肽中。
48.权利要求27-46任一项的抗体，其中轻链区和重链区存在于单一多肽中。
49.权利要求27-46任一项的抗体，其中该抗体包含重链恒定区，且其中重链区是同种型IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4的。
50.权利要求27-46任一项的抗体，其中该抗体是Fv，scFv，Fab，F(ab′)2，或Fab′。
51.权利要求27-46任一项的抗体，其中该抗体包含共价连接的非肽合成聚合物。
52.权利要求51的抗体，其中该合成聚合物是聚(乙二醇)聚合物。
53.权利要求27-46任一项的抗体，其中该抗体以至少10-7M，10-8M，10-9M，10-10M，或10-11M的解离常数(KD)结合eTau多肽。
54.权利要求27-46任一项的分离的抗体，其中该抗体是在不溶性支持物上固定化的。
55.权利要求27-46任一项的分离的抗体，其中该抗体包含可检测标记物。
56.权利要求55的分离的抗体，其中该可检测标记物是化学发光剂，颗粒标记物，比色剂，能量转移剂，酶，荧光剂，对比剂，或放射性同位素。
57.权利要求27-56任一项的分离的抗体，其中该表位不在该Tau多肽的氨基酸15-24，或氨基酸5-20，或氨基酸2-18，或氨基酸19-46内。
58.一种药物配制剂，其包含：
a)依照权利要求26-57任一项的抗体；和
b)药学可接受赋形剂。
59.一种包含编码权利要求27-50任一项的抗体的核苷酸序列的重组表达载体，其中该核苷酸序列是可操作连接至在真核细胞中有活性的转录控制元件的。
60.一种经权利要求59的重组表达载体遗传修饰的体外宿主细胞。
61.一种在个体中治疗特征在于组织或流体中异常水平Tau的Tau病的方法，该方法包括对该个体施用权利要求27-53任一项的抗体或权利要求58的药物组合物，其中所述施用治疗该Tau病。
62.权利要求61的方法，其中所述施用导致下述一项或多项中的变化：
a)脑组织中游离细胞外Tau的量；
b)间质液(ISF)中游离细胞外Tau的量；
c)脑脊液(CSF)中游离细胞外Tau的量；
d)Tau的神经元至神经元传播；
e)神经元内Tau聚集体的量；
f)小胶质和/或星形细胞活化的程度；
g)磷酸化或高磷酸化Tau的量；
h)ISF或CSF中总Tau或游离Tau的量；
i)细胞内N端Tau片段的量；
j)神经元活动过度；
k)CSF中Aβ40和/或Aβ42的量；
l)Aβ斑负荷；
m)来自神经元的Aβ40和/或Aβ42分泌；
n)淀粉样前体蛋白(APP)启动子活性；
o)APP mRNA和/或蛋白质水平；
p)β-分泌酶和/或γ-分泌酶的活性；
q)Aβ诱导的信号传导途径的活化状态；
r)细胞内总Tau或游离Tau的量；
s)ISF或CSF中抗Tau抗体结合的Tau的量；和
t)细胞内抗Tau抗体结合的Tau的量。
63.权利要求61的方法，其中所述施用导致下述一项或多项：
a)该个体中认知功能的改善；
b)该个体中认知功能衰退速率的降低；
c)该个体中运动功能的改善；和
d)该个体中运动功能衰退速率的降低。
64.权利要求61的方法，其进一步包括施用至少一种别的治疗该Tau病的药剂。
65.权利要求61的方法，其中所述施用是静脉内，鞘内，肌肉内，或皮下。
66.权利要求61的方法，其中该抗体是与推动穿越血脑屏障的药剂一起配制的。
67.权利要求61的方法，其中该Tau病是阿尔茨海默氏病。
68.一种在自个体获得的生物学样品中检测细胞外Tau(eTau)多肽的方法，该方法包括：
a)使该样品与对该Tau肽特异性的抗体接触；并
b)检测该抗体对该样品中存在的Tau肽的结合。
69.权利要求68的方法，其中该eTau多肽包含：
a)与SEQ ID NO:1-3任一中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约175个氨基酸的长度；
b)与SEQ ID NO:4中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约150个氨基酸的长度；
c)与SEQ ID NO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约121个氨基酸的长度；或
d)与SEQ ID NO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约67个氨基酸的长度。
70.权利要求68的方法，其中该个体怀疑具有Tau病，已经诊断为具有Tau病，或具有发生Tau病的遗传素因。
71.权利要求68的方法，其中该Tau病是阿尔茨海默氏病。
72.权利要求68的方法，其中该生物学样品是血液，血清，血浆，尿液，唾液，或脑脊液。
73.一种在活的个体中体内检测细胞外Tau(eTau)多肽的方法，该方法包括对该个体施用权利要求27-53任一项的抗体；并使用成像方法检测该抗体对该个体中脑组织中Tau肽的结合。
74.一种试剂盒，其包含权利要求27-56任一项的分离的抗体。
75.权利要求74的试剂盒，其进一步包含用作阳性对照的试剂。
76.权利要求75的试剂盒，其中该阳性对照是纯化后的eTau多肽。
77.权利要求74的试剂盒，其中该抗体包含可检测标记物。
78.权利要求74的试剂盒，其中该抗体是在固体支持物上固定化的。
79.权利要求78的试剂盒，其中该固体支持物是测试条。
80.一种用于在自个体获得的液体生物学样品中检测细胞外Tau(eTau)多肽的测定装置，该装置包含定义轴向流路程的模具，该模具包含在流路程上游端接收液体样品的样品接收区。
81.权利要求80的测定装置，其中该eTau多肽包含：
a)与SEQ ID NO:1-3任一中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约175个氨基酸的长度；
b)与SEQ ID NO:4中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约150个氨基酸的长度；
c)与SEQ ID NO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约121个氨基酸的长度；或
d)与SEQ ID NO:5中所列氨基酸序列具有至少约95％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该Tau肽具有约5个氨基酸至约67个氨基酸的长度。
82.权利要求80的测定装置，其进一步包含：
一个或多个位于流路程内且在样品接收区下游的测试区，所述一个或多个测试区每个包含对Tau病诊断性Tau肽特异性的抗体，其中该抗体是在所述测试区每个中固定化的，其中所述固定化抗体每种能够结合所述液体样品中存在的不同Tau肽，以形成固定化抗体/Tau肽复合物。
83.权利要求80的测定装置，其进一步包含一个或多个位于流路程内且在样品接收区下游的对照区。
84.权利要求80的测定装置，其中该装置是测试条。
85.权利要求80的测定装置，其中该装置是蘸棍测定装置。
86.权利要求80的测定装置，其中该液体样品是血液，血清，血浆，尿液，唾液，或脑脊液。
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