CN105925507B

CN105925507B - 具有重金属钝化和促进植物生长功能的蜡样芽孢杆菌及应用

Info

Publication number: CN105925507B
Application number: CN201610391094.9A
Authority: CN
Inventors: 李永涛; 徐会娟; 蒲强; 彭桂香; 蔡燕飞; 张玉龙
Original assignee: South China Agricultural University
Current assignee: Guangzhou Qin'an Agricultural Technology Co., Ltd
Priority date: 2016-06-02
Filing date: 2016-06-02
Publication date: 2019-05-07
Anticipated expiration: 2036-06-02
Also published as: CN105925507A

Abstract

本发明公开了一种具有重金属钝化和促进植物生长功能的蜡样芽孢杆菌及应用，属于微生物菌种技术领域。该蜡样芽孢杆菌的名称为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)B19，于2016年04月27日保藏于位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.12405。该菌株具有重金属钝化和促进植物生长功能，适合用于分解难溶性磷，用于产生长素，用于耐盐，用于耐受重金属，用于促进植物种子发芽，用于增加土壤有效磷、微生物碳氮，以及用于降低土壤有效态重金属。

Description

具有重金属钝化和促进植物生长功能的蜡样芽孢杆菌及应用

技术领域

本发明属于微生物菌种技术领域，特别涉及一种具有重金属钝化和促进植物生长功能的蜡样芽孢杆菌及应用。

背景技术

磷是植物生长所必需的矿质元素之一，以多种方式参与植物体内的各种生理生化过程，如能量代谢、光合作用、呼吸作用以及氮固定。一般农田土壤中全磷含量很高，但是有效磷含量很低。我国土壤中95％以上的磷为无效磷，植物无法吸收利用，因此只能通过外源添加磷素以供植物吸收利用；而且通过人工施入的水溶性磷肥极易被土壤中的Ca、Fe、Al结合形成难溶态的Ca-P、Fe-P、Al-P沉淀。因此，磷已经被视为耕作土壤中的一个营养限制因子。解磷微生物(Phosphate-solubilizing microoganisms，PSMs)的研究已有100余年的历史，随着研究手段的不断提高，人们对解磷微生物的了解更加的深入，发现土壤中解磷微生物分布有明显的根际效应，具有活化难溶性磷的作用以及促进作物生长的效果，能够改善土壤环境，使土壤中有效磷含量提高。多年来的实践证明了解磷微生物在农业生产中的作用，但是部分解磷微生物在试验室条件下表现出极强的溶磷能力，但是运用到实际生产过程中效果并不理想，究其原因可能是多方面的，但是菌株在自然条件下缺乏竞争力，难以生存定殖可能是主要原因之一。寻找到能够在恶劣环境中生存能力强、易于定殖到植株根部的解磷菌微生物尤为重要。芽孢杆菌具有产芽孢的功能，具有较强的抵抗外界环境胁迫的能力，能够抵抗所生存的环境中由于干燥、热和紫外线辐射所造成的伤害，从而易于定殖土壤而发挥田间肥效。因此，具有溶磷作用的芽孢杆菌在生物肥产业中具有巨大的应用前景。

目前所报道的溶磷芽孢杆菌，主要为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)等菌株研究。譬如，张维娜等(2012)报道巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)JD-2同时具解磷酸钙和卵磷脂的能力，其溶磷能力分别是对照组的22倍和25倍。吴小芹等(CN200910032681.9)报道蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)JYZ-SD1在卵磷脂液体培养基中可溶性磷含量为1.94mg/L，是对照(0.37mg/L)的5.17倍，接种JYZ-SD1菌株150天后杨树扦插苗苗高和茎粗比CK分别增长了38.1％和15.9％，鲜重和干重比CK分别增加了83.89％和72.22％。何月秋等(CN201510956941.7)报道解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)YN2010-KCCGMCC No.5722在磷酸钙培养基中培养4d后，培养液中可溶性磷含量为63.82mg/L，是对照培养液的64.46倍。这些成果显示了芽孢杆菌在土壤溶磷方面的潜力。但是，解磷微生物筛选多局限于单一功能菌株。

目前，土壤中的重金属污染较为严重，特别是重金属镉。同时具有高效解磷和产生长素以及钝化重金属镉的多种功能蜡样芽孢杆菌在土壤中进行应用，不仅有利于促进植物生长，也有利于土壤修改。同时具有重金属钝化和促进植物生长功能的蜡样芽孢杆菌未见报道。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种具有重金属钝化和促进植物生长功能的蜡样芽孢杆菌。

本发明的另一目的在于提供所述具有重金属钝化和促进植物生长功能的蜡样芽孢杆菌的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种具有重金属钝化和促进植物生长功能的蜡样芽孢杆菌，名称为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)B19，于2016年04月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC NO.12405，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

所述具有重金属钝化和促进植物生长功能的蜡样芽孢杆菌的16S rDNA核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

所述的具有重金属钝化和促进植物生长功能的蜡样芽孢杆菌的形态特征如下：为革兰氏阳性菌，菌体细胞杆状，末端方，呈短或长链，菌落大，表面粗糙，扁平，不规则；在牛肉膏蛋白胨培养基上培养24h后形成的菌落为圆形或近似圆形、质地软、无色素、稍有光泽的白色菌落。

所述的具有重金属钝化和促进植物生长功能的蜡样芽孢杆菌的生理生化特征如下：纤维素分解阳性、淀粉酶阳性、过氧化氢酶阳性、吲哚阴性、产生物膜阴性、甲基红试验阴性、铁载体弱阳性。

所述具有重金属钝化和促进植物生长功能的蜡样芽孢杆菌的应用，包括用于分解难溶性磷，用于产生长素，用于耐盐，用于耐受重金属，用于促进植物种子发芽，用于增加土壤有效磷、微生物碳氮，以及用于降低土壤有效态重金属。

所述的难溶性磷指的是难溶性磷酸钙、磷酸铁和磷酸铝中的至少一种。

所述的重金属为镉。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

本发明发明人经过大量实验研究，从广东韶关市曲江区马坝镇石堡种植甘蔗地土壤中筛选出一株蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)B19。此菌株兼具高效分解难溶性磷酸钙、磷酸铁、磷酸铝、产生长素方面、耐盐、耐受重金属方面以及促进植物种子发芽和增加土壤有效磷、微生物碳氮以及降低土壤有效态镉的功能。

应用该菌株后，小白菜种子发芽、第三天根长以及第七天茎长、根长与对照相比分别增加了8％、39％、28％、33％。实验室模拟实验显示：施用菌剂后显著的增加了土壤有效磷含量，在不同镉浓度土壤施用菌剂后有效磷比不施用菌剂分别增加了30％、22％以及22％。施用菌剂后显著的增加了微生物碳含量，在不同镉浓度土壤施用菌剂后有效磷比不施用菌剂分别增加了24％、21％以及22％；微生物氮比不施用菌剂分别增加了32％、24％以及29％。施用菌剂后显著的降低了土壤有效态镉含量，在不同镉浓度土壤施用菌剂后有效磷比不施用菌剂分别减少了2％、27％以及19％。上述结果表明该菌株在提高土壤中难溶磷的有效性和磷肥利用率的同时，还可显著促进小白菜种子发芽、提高微生物碳氮以及降低土壤有效态镉含量。

附图说明

图1是B19菌的革兰氏染色显微照片图。

图2是B19菌的芽孢染色显微照片图。

图3是B19菌在难溶无机磷培养基下产水溶性磷浓度的对比图。

图4是B19菌产生长素定性实验对比图；其中，从左到右，第1和2列为阳性对照，浓度分别为0、10、20、50、50μg/mL；第3列为阴性对照，第4列为B19，分别设3个平行孔。

图5是B19菌耐受不同盐浓度实验对比图；其中，从左到右，再从上到下，氯化钠浓度分别为0.5％、1.5％、3.5％、5.5％、7.5％、9.5％。

图6是B19菌耐受不同镉浓度实验对比图。

图7是B19菌耐受重金属镉平板照片图；其中，图A为镉浓度为25mg/L，图B为镉浓度为50mg/L。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

本发明所用的培养基如下：

①难溶无机磷培养基：葡萄糖10g，磷酸三钙5g，硫酸铵0.5g，氯化钠0.2g，硫酸镁0.1g，氯化钾0.2g，酵母浸膏0.5g，硫酸锰0.002g，硫酸亚铁0.002g，0.4％(w/v)溴酚蓝(pH6.7)6mL，蒸馏水定容至l 000mL，pH 7.0，固体培养基另加琼脂18.0g。

②无机磷筛选培养基A由下述组分构成：葡萄糖10g，磷酸钙5g，氯化镁5g，硫酸镁0.25g，氯化钾0.2g，硫酸铵0.1g，蒸馏水定容至1 000mL，pH 7.0。

③无机磷筛选培养基B与无机磷筛选培养基A的区别仅在于用磷酸铁代替磷酸钙作为唯一磷源。

④无机磷筛选培养基C与无机磷筛选培养基A的区别仅在于用磷酸铝代替磷酸钙作为唯一磷源。

⑤液体培养基：酵母粉5g、蛋白胨10g、氯化钠10g，水定容至1L，pH7.0。

⑥LB液体培养基：酵母提取物5.0g，胰蛋白胨10.0g，氯化钠10.0g，蒸馏水定容至l000mL，pH 7.0。

⑦LB固体培养基：酵母提取物5.0g，胰蛋白胨10.0g，氯化钠10.0g，琼脂粉18.0g，蒸馏水定容至l 000mL，pH 7.0-7.2。

⑧牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3.0g，蛋白胨5.0g，氯化钠5.0g，琼脂18.0g，蒸馏水定容至1000mL，pH值7.0-7.2。

⑨含重金属培养基：在LB培养基里加入氯化镉使之达到所设计的浓度，配制液体培养基时，不需要加入琼脂。以上培养基均需要121℃灭菌15min。

实施例1菌株的分离、纯化

(1)分离

①初筛

称取广东韶关市曲江区马坝镇石堡种植甘蔗地土壤10.0g，放入装有90mL无菌水的250mL三角瓶中(加玻璃珠)，25℃，200r/min摇床振荡30min，静置20～30s，取10mL上清液置于50mL灭菌三角瓶中，于90℃水浴10min，取1mL水浴后上清液加入到难溶无机磷培养基，(150mL三角瓶中含有30mL培养液)，每个土样设置两个重复。置于摇床进行富集培养，转速150r/min，温度30℃。富集培养周期为5～7d，第一次富集培养结束后取1mL培养液各自加入到新的培养基中进行第二次富集培养，同样的操作进行第三次富集培养，每次富集结束后在超净工作台中用移液枪取上清液适量，置于离心管中，离心，取上清液，采用钼锑抗比色法测定上清液中水溶性磷含量。其中，命名为B19菌的水溶性磷含量为255.34μg/mL；

②复筛

选择解磷效果较好的菌株，分别接种到无机磷筛选培养基B和无机磷筛选培养基C中，30℃摇床150r/min，培养3d后测定培养液中有效磷的浓度。其中，B19菌磷酸铁培养基中水溶性磷含量为48.22μg/mL，磷酸铝培养基中水溶性磷含量为24.27μg/mL，采用甘油管保存法保存该菌株。

(2)纯化

将筛选出的B19菌利用平板划线法纯化后，保存于牛肉膏蛋白胨培养基所制的斜面，置于4℃冰箱备用。

实施例2特性鉴定

将实施例1筛选得到的B19菌进行生理生化鉴定和分子生物学鉴定。

(1)菌体形态特性

B19菌为革兰氏阳性菌，菌体细胞杆状，末端方，呈短或长链，菌落大，表面粗糙，扁平，不规则。菌体革兰氏染色显微照片如图1所示，菌体呈现紫色。芽孢孔雀绿染液染色，显微照片如图2所示，芽孢呈现绿色。

B19菌在牛肉膏蛋白胨培养基上培养24h后形成的菌落为圆形或近似圆形、质地软、无色素、稍有光泽的白色菌落。

(2)生长特性

在液体培养基中，转速180rpm，温度37℃，起始pH值为7.0的条件下，培养18小时，测得活菌数为3.00±0.08×10⁸cfu/mL。

(3)生理、生化特性的测定方法参考《常见细菌***鉴定手册》(东秀珠)，鉴定结果见表1。

表1 B19菌生理生化特性

注：+表示为阳性；－表示为阴性；w表示为弱阳性；

(4)分子生物学特性

采用试剂盒法(购自上海生工生物工程有限公司)提取B19菌总DNA。采用细菌16SrDNA通用引物27F(AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG)和1492R(TAC GGC TAC CTT GTT ACGACT T)，PCR扩增细菌的16S rDNA，50μL的PCR反应体系为：DNA模板2μL，引物27F(l mM)1μL，引物1492R(l mM)1μL，rTaq酶25μL，dd H₂O 21μL。

PCR扩增反应程序：95℃预变性3min，进入热循环；95℃变性30s，52℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环；72℃延伸10min。

1.0％琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物的长度和浓度，在1000bp附近出现明显的条带，将PCR扩增产物回收后，测序由广州艾基生物生物技术有限公司完成，将获得的DNA序列(如SEQ ID NO.1所示)输入美国国立生物信息中心NCBI网页上进行BLAST比对，以Blast程序对数据库中的所有序列进行比较分析，结果发现本发明所述菌株的16S rDNA序列和与GenBank中蜡样芽孢杆菌具有较高的同源性，其相似度为99％。结合上述的菌体形态特性、平板菌落特征、生理生化特性、16S rDNA序列分析的结果，初步鉴定该菌株为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)，命名为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)B19，于2016年04月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC NO.12405，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

实施例3 B19菌在难溶性无机磷培养基培养下产水溶性磷的效果实验

(1)待测液的制备

挑取保存于牛肉膏蛋白胨斜面培养基上B19菌体划线于LB固体培养基平板上，30℃下培养24h。将平板上B19菌体接入含有20mL LB液体培养基的150mL三角瓶中，30℃，150r/min，摇床培养24h。将培养液6000r/min离心5min，用无菌水重悬菌体，在涡旋混合仪上扩散均匀，用移液枪将菌悬液等量接入含有30mL无机磷筛选培养基的150mL三角瓶，30℃、150r/min，摇床培养7d。

(2)水溶性磷含量测定

将培养液在10000g，25℃离心15min，取上清液，采用钼锑抗比色法测定水溶性磷含量。设不接B19菌，接入等量无菌水为对照，每个处理重复3次。水溶性磷含量变化(单位为μg/mL，即表示每毫升样品中所含水溶性磷的微克数)的试验结果见图3。

图3的结果表明：B19菌解磷酸钙的水溶性磷含量高达255.34μg/mL，磷酸铁的水溶性磷含量为48.22μg/mL，磷酸铝的水溶性磷含量为24.27μg/mL。

实施例4 B19菌产生长素效果试验

(1)生长素定性测定：将B19菌接种于含有L-色氨酸(100μg/mL)的20mL LB液体培养基的150mL三角瓶中，30℃、150r/min摇床培养24h。取50μL培养液滴于白色陶瓷板上，同时加50μL Salkowski比色液(35％HClO₄+1mL 0.5mol/LFeCl₃)，设50μL的灭菌LB培养基作为阴性对照，10、20、50(μg/mL)生长素的比色液作为阳性对照。将白色陶瓷板于室温、避光条件下放置30min后观察，颜色变红者表示能够产生长素，试验结果见图4，可见，B19的颜色显示为淡粉色，颜色介于对照和10μg/mL之间。

(2)生长素定量测定：将B19菌接种于含有L-色氨酸(μg/mL)的50mL LB液体培养基中，三个重复，30℃、150r/min摇床培养24h。将培养液分别在6000×g下离心10min，取4mL上清液加入4mL Salkowski比色液，混匀，室温、黑暗中静置30min，使用紫外分光光度计，在530nm下测吸光度，同时用无菌培养基做相同处理作为对照，采用0、10、20、30、50(μg/mL)的生长素作标准曲线。试验结果见表2。B19菌产生长素量达到8.72μg/mL。

表2 B19菌产生长素效果试验结果

菌株编号	产IAA量(μg/mL)
		CK	0
B19	8.72

实施例5 B19菌耐盐试验

营养培养基：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂18.0g，蒸馏水1000mL，pH7.0-7.2。依据不同的氯化钠浓度，添加氯化钠。

将B19菌划线到氯化钠浓度分别为0.5％、1.5％、3.5％、5.5％、7.5％、9.5％、11.5％、13.5％的营养琼脂平板上，培养24h，观察菌株的生长情况。试验结果见图5，随着氯化钠的含量越高，菌体的生长量越少，至9％，菌体的菌落已经很稀疏，至13％，观察不到菌落。结果表明：B19菌耐受9％的NaCl。

实施例6 B19菌耐受重金属镉试验

取30μL的B19菌液接种于3mL的LB液体培养基中，于37℃、180rpm培养8-10h，进行活化。将活化后的B19菌液按照1％的接种量加入含0、1、5、10、25、30mg/L Cd²⁺的3mL LB液体培养基中，37℃，180rpm摇床培养，每隔30min测定培养基的吸光值A600，绘制重金属耐受曲线。试验结果见图6及图7。结果表明：B19菌耐受30mg/L的Cd²⁺。

实施例7 B19菌促进植物种子发芽实验室效果试验

(1)菌悬液制备：

①将菌种活化后点接入LB液体培养基，经过24h振荡培养，培养温度为30℃，转速为150r/min；

②将菌液滴入血球计数板，在光学显微镜下计数，得出菌液中菌体细胞浓度；

③将菌液于高速离心机中离心，转速6000r/min，离心5min；

④将菌体用无菌水重悬；

⑤用于浸泡小白菜种子的菌株浓度为2.0×10⁷cfu/ml的菌悬液。

(2)种子表面灭菌处理：种子用75％乙醇浸泡1min，再用2％次氯酸钠溶液浸泡2min，置于灭菌滤纸上自然晾干。

(3)采用B19菌和空白对照进行效果对比试验，共分2个处理组(第1组采用25mLB19菌菌重悬液)，用B19表示，第2组采用25mL无菌水水处理作为空白对照，用CK表示)。各处理组设四个重复，各重复含10颗小白菜种子(随机选取表面灭菌后大小均一的种子)。处理组B19采用菌悬液浸泡30min，CK采用无菌水作同样处理。取灭菌培养皿，加入两层无菌滤纸，倒去浸泡液后，用无菌镊子夹取种子放入培养皿中，每皿10颗，再加盖一层无菌滤纸，以浸润保存水分，置于25℃培养箱培养7天，每天浇水适量，每皿的水量要相同，均匀，定期测定发芽率，茎长、根长等指标。试验结果见表3。从表3可以看出本发明分离的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)B19菌能够显著增加白菜种子发芽，促进小白菜种子根茎的生长，第三天根长以及第七天茎长、根长与对照相比分别增加了39％、28％、33％。

表3 B19菌对小白菜种子发芽促进效果试验结果

注：数据为3次重复的平均值±标准差，表中同列*表示在0.05水平差异显著(独立样本t检验)。

实施例8 B19菌对土壤养分以及重金属影响试验

(1)菌悬液制备：

①将菌种活化后点接入LB液体培养基，经过24h振荡培养，培养温度为30℃，转速为150r/min；所述液体培养基成分为：酵母提取物5.0g/L，胰蛋白胨10.0g/L，氯化钠10.0g/L，pH 7.0；

③将菌液于高速离心机中离心，转速6000r/min，离心5min；

④将菌体用无菌水重悬；

⑤用于接种土壤的菌株浓度为3.0×107cfu/mL的菌悬液。

(2)试验设计：

从大宝山金属矿区采集水稻土，测定土壤的理化指标，结果见表4。向土壤分别加入1mg/kg和3mg/kg的Cd²⁺，并老化14d。

用B19菌和不加菌进行效果对比试验，共分6个处理组：第1组原土加无菌水，用T1表示；第2组原土加入B19菌3×10⁶cfu/g土壤，用T2表示；第3组外源添加1mg/kg Cd²⁺土壤加入无菌水，用T3表示；第4组外源添加1mg/kg Cd²⁺土壤加入B19菌3×10⁶cfu/g土壤，用T4表示；第5组外源添加3mg/kg Cd²⁺土壤加入无菌水，用T5表示；第6组外源添加3mg/kg Cd²⁺土壤加入B19菌3×10⁶cfu/g土壤，用T6表示。每个处理组重复3次。每天浇水适量，维持40％土壤含水量。

施用菌剂5天后取鲜土做微生物碳氮，并将剩余土壤自然风干，做土壤有效磷、有效态镉实验。实验结果分别见下表5。实验结果显示，施用B19菌剂后有效磷、微生物碳、微生物氮均显著的增加，有效镉含量显著降低。

表4实验室模拟实验土壤理化性质

表5 B19菌剂对土壤养分以及有效镉效果试验结果

注：T1表示原土，T2表示原土加菌B19，T3表示加1mg/kg Cd老化后土，T4表示加1mg/kg Cd老化后土再加菌B19，T5表示加3mg/kg Cd老化后土，T6表示加3mg/kg Cd老化后土再加菌B19。数据为3次重复的平均值±标准差，表中同列*表示在0.05水平差异显著(独立样本t检验)。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种具有重金属钝化和促进植物生长功能的蜡样芽孢杆菌，其特征在于：名称为蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）B19，于2016年04月27日保藏于位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.12405。

2.根据权利要求1所述具有重金属钝化和促进植物生长功能的蜡样芽孢杆菌，其特征在于：所述的蜡样芽孢杆菌的16S rDNA核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

3.根据权利要求1所述具有重金属钝化和促进植物生长功能的蜡样芽孢杆菌，其特征在于：所述的蜡样芽孢杆菌的形态特征如下：为革兰氏阳性菌，菌体细胞杆状，末端方，呈短或长链，菌落大，表面粗糙，扁平，不规则；在牛肉膏蛋白胨培养基上培养24h后形成的菌落为圆形或近似圆形、质地软、无色素、稍有光泽的白色菌落。

4.根据权利要求1所述具有重金属钝化和促进植物生长功能的蜡样芽孢杆菌，其特征在于：所述的蜡样芽孢杆菌的生理生化特征如下：纤维素分解阳性、淀粉酶阳性、过氧化氢酶阳性、吲哚阴性、产生物膜阴性、甲基红试验阴性、铁载体弱阳性。

5.权利要求1～4任一项所述具有重金属钝化和促进植物生长功能的蜡样芽孢杆菌的应用，其特征在于：所述的蜡样芽孢杆菌在如下任一方面中的应用：用于分解难溶性磷，用于产生长素，用于耐盐，用于耐受重金属，用于促进植物种子发芽，用于增加土壤有效磷、微生物碳氮，以及用于降低土壤有效态重金属；

所述的重金属为镉。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述的难溶性磷指的是难溶性磷酸钙、磷酸铁和磷酸铝中的至少一种。