CN105907815A - 一种高均一度大分子量Levan型果聚糖的制备方法 - Google Patents

一种高均一度大分子量Levan型果聚糖的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105907815A
CN105907815A CN201610357450.5A CN201610357450A CN105907815A CN 105907815 A CN105907815 A CN 105907815A CN 201610357450 A CN201610357450 A CN 201610357450A CN 105907815 A CN105907815 A CN 105907815A
Authority
CN
China
Prior art keywords
levan
sucrose
fructosyl
transferring enzyme
molecular
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610357450.5A
Other languages
English (en)
Inventor
徐辉
曹毅
乔代蓉
曹瑜
尚慧毅
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sichuan University
Original Assignee
Sichuan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sichuan University filed Critical Sichuan University
Priority to CN201610357450.5A priority Critical patent/CN105907815A/zh
Publication of CN105907815A publication Critical patent/CN105907815A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/18—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a glycosyl transferase, e.g. alpha-, beta- or gamma-cyclodextrins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C12N9/1055—Levansucrase (2.4.1.10)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12Y204/01—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C12Y204/0101—Levansucrase (2.4.1.10)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种高均一度大分子量Levan型果聚糖的制备方法，利用现代分子酶工程技术对果糖基蔗糖转移酶进行分子改造，获得果糖基蔗糖转移酶突变体H280R，成功在大肠杆菌中进行原核表达，通过对表达的蛋白纯化，将纯化的酶与底物蔗糖反应，经乙醇沉淀得到Levan型果聚糖样品。本发明采用的果糖基蔗糖转移酶突变体H280R制备Levan型果聚糖时，底物蔗糖的浓度可以达到40％，通过凝胶色谱法确定了其分子量的大小为2×106Da，属于大分子多糖，且Levan型果聚糖均一性好，分散度为2.06，优于目前生物法制备Levan型果聚糖。

Description

一种高均一度大分子量Levan型果聚糖的制备方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，特别涉及一种高均一度大分子量levan型果聚糖的制备方法。
背景技术
Levan型果聚糖是两种主要类型的果聚糖之一，是天然存在的果糖均聚物，其主链由重复的β-(2,6)-糖苷键连接，支链由β-(2,1)-糖苷键连接。Levan型果聚糖在许多领域都有广泛的应用，在食品工业中，果聚糖可以作为果糖源，乳化剂，包封剂和风味改良剂，由于果聚糖具有难以消化的特性，而且具有低热量和致龋性，此外还可以作为益生元来刺激益生菌在肠道菌群的增殖，因此果聚糖被用作糖替代物；在医药行业，果聚糖可以作为一种免疫调节剂，血浆的替代品，延长药物效果并作为胆固醇在肠道中的吸附剂；果聚糖还具有保湿作用，可以应用到化妆品中；此外，由运动发酵单胞菌果糖基蔗糖转移酶生成的果聚糖还具有抗肿瘤，抗病毒活性。
Levan型果聚糖可以通过果糖基蔗糖转移酶(Levansucrase，EC2.4.1.10)从蔗糖通过转糖基反应产生。果糖基蔗糖转移酶属于糖苷水解酶(GH68)家族，该家族还包括β-呋喃果糖苷酶和菊糖蔗糖酶，这三种酶都是以蔗糖作为其优先选择的底物供体，其分子结构主要由N末端的信号肽，催化中心和C末端区三个部分构成。绝大部分的果糖基蔗糖转移酶都包括了三个保守区，由三个不同的氨基酸残基构成，它们分别是亲核基团，酸/碱催化基团和过渡态稳定基团，是该酶行使催化功能的最重要的区域。
目前可以产生果糖基蔗糖转移酶的微生物包括芽孢杆菌(Bacillus)、运动发酵单胞菌(Zymomonas mobilis)、多黏类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)、金山乳杆菌(Lactobacillus sanfranciscensis)、粘性放线菌(Actinomyces viscosus)和假单胞菌(Pseudomonas)等。运动发酵单胞菌是革兰氏阴性细菌，主要是拿来作为生产乙醇的菌株，近年来研究其生产果糖基蔗糖转移酶也越来越多，野生型的运动发酵单胞菌可以产生大分子量的果聚糖，但是重组蛋白的和底物反应产生的果聚糖的分子量却相对较小，有的只能合成寡聚糖。果聚糖的化学合成以及从植物中提取均一度高的果聚糖都非常的困难，微生物发酵产果聚糖是目前工业上应用的最广泛的方法，但是其发酵产物的分子量往往变化较大，而且催化效率不高。因此，提供可以产均一度高的大分子果聚糖的果糖基蔗糖转移酶对于Levan型果聚糖工业化生产和应用具有十分重要的意义。
目前中国发明专利201310403373.9公开了一种枯草芽孢杆菌左聚糖蔗糖酶突变体 T305A，是利用现代分子酶工程技术对来源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的左聚糖蔗糖酶氨基酸序列进行分子改造，通过易错PCR和活力筛选，获得突变体T305A，将其基因***pSE380构建重组载体，导入大肠杆菌宿主表达。该突变体酶与野生型酶相比，在以蔗糖为底物转糖苷形成左聚糖反应中的底物浓度耐受性显著提高，达到最高转化率时的底物浓度由野生型酶的10％提高到突变体酶的25％。在该发明中没有提到该专利能够制造均一、高分子量的Levan型果聚糖，而且果糖基蔗糖转移酶对底物耐受只能耐受25％浓度的底物。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种高均一度大分子量Levan型果聚糖的制备方法，以克服现有方法底物耐受性不高，产生的果聚糖的分子量却相对较小，有的只能合成寡聚糖的问题，改善酶法制备Levan型果聚糖的效果。
为了解决上述技术问题，本发明通过以下方式来实现：
一种高均一度大分子量Levan型果聚糖的制备方法，包括以下步骤：
(1)构建果糖基蔗糖转移酶突变体H280R
设计利用引物F：H280R为5'-CTCTTTACGATCAGCCGTGATTCGACTTATG-3'，引物R：H280R为5'-CATAAGTCGAATCACGGCTGATCGTAAAGAG-3'，并以质粒pET-32a-lev为模板，根据Dpn I法定点突变的反应原理，构建果糖基蔗糖转移酶突变体H280R，设定PCR程序；
PCR扩增反应体系为：10μL Primer STAR Max，1μL引物F：H280R，1μL引物R：H280R，2μL模板pET-32a-lev，反应总体积为20μL；
PCR扩增条件为：94℃预变性3min，94℃变性30s；54℃褪火30s；72℃延伸3min45s；共进行30个循环反应；然后于72℃继续延伸10min；
PCR产物验证、回收后，经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切消化，克隆到PGEX-4T-1质粒，转入E.coli BL21(DE3)；
(2)果糖基蔗糖转移酶突变体H280R的表达与纯化
将步骤(1)中构建好的含有的果糖基蔗糖转移酶突变体H280R的野生型和突变型重组菌株的菌液，分别转接到含有一定浓度氨苄青霉素的200ml液体LB培养基中，37℃培养3～4h，当OD600达到0.6～0.8时，加入终浓度为0.2～0.5mmol/L的诱导剂IPTG，在28℃的温度下诱导培育4h左右，并在12000rpm的转速下离心5min收集菌体，利用向沉淀中加入细胞裂解缓冲液，并在冰上超声破碎2min至菌液澄清，再将离心管放入转速为12000rpm、温度为4℃的离心机中，离心10min，取上清移至另一干净离心管；
重组菌株经诱导剂IPTG培养过夜后收集湿菌体，破碎收集含有果糖基蔗糖转移酶的粗 酶液，然后将粗酶液加载到含目His标签的纯化柱中，通过含有20mmol/L的PB、500mmol/L的NaCl和20mmol/L的咪唑缓冲液I和含有20mmol/L的PB、500mmol/L的NaCl和500mmol/L的咪唑缓冲液II，缓冲液I和缓冲液II的酸碱度pH为7.4，进行梯度洗脱，层析结束后对洗脱的收集液，进行SDS-PAGE验证；
(3)酶法合成制备Levan型果聚糖
将步骤(2)中纯化的果糖基蔗糖转移酶与25～40％浓度的蔗糖反应，添加pH为6.0的柠檬酸缓冲液，保持反应的温度为40～50℃，反应时间为48h，利用sevag法去除蛋白，加入三倍体积于果糖基蔗糖转移酶反应液的酒精，在4℃低温条件下使多糖沉淀并收集沉淀，再利用浓度为60～80％的乙醇溶液洗涤两次后，将沉淀再用三级水溶解收集，经冻干机冷冻获得粉末状的Levan型果聚糖。
进一步的，所述步骤(2)中的氨苄青霉素的浓度为30～60μg/mL。
所述步骤(2)中冰上超声破碎的超声波需求功率为120W，且超声破碎为每隔2s时间超声破碎1s。
与现有技术相比，本发明具有的有益效果：
1、采用果糖基蔗糖转移酶突变体H280R制备Levan型果聚糖时，底物蔗糖的浓度可以达到40％；
2、本发明克隆得到了果糖基蔗糖转移酶突变体H280R，并成功在BL21(DE3)大肠杆菌中进行原核表达，通过对表达的蛋白纯化，将纯化的酶与底物蔗糖反应经乙醇沉淀得到多糖样品，通过凝胶色谱法确定了其分子量的大小为2×106Da，属于大分子多糖；
3.本发明制备的Levan型果聚糖均一性好，分散度为2.06，优于目前生物法制备Levan型果聚糖。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明。
一种高均一度大分子量Levan型果聚糖的制备方法，包括以下步骤：
(1)构建果糖基蔗糖转移酶突变体H280R
设计利用引物F：H280R为5'-CTCTTTACGATCAGCCGTGATTCGACTTATG-3'，引物R：H280R为5'-CATAAGTCGAATCACGGCTGATCGTAAAGAG-3'，并以质粒pET-32a-lev为模板，根据Dpn I法定点突变的反应原理，构建果糖基蔗糖转移酶突变体H280R，设定PCR程序；
PCR扩增反应体系为：10μL Primer STAR Max，1μL引物F：H280R，1μL引物R： H280R，2μL模板pET-32a-lev，反应总体积为20μL；
PCR扩增条件为：94℃预变性3min，94℃变性30s；54℃褪火30s；72℃延伸3min45s；共进行30个循环反应；然后于72℃继续延伸10min；
PCR产物验证、回收后，经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切消化，克隆到PGEX-4T-1质粒，转入E.coli BL21(DE3)；
(2)果糖基蔗糖转移酶突变体H280R的表达与纯化
将步骤(1)中构建好的含有的果糖基蔗糖转移酶突变体H280R的野生型和突变型重组菌株的菌液，分别转接到含有浓度为30～60μg/mL的氨苄青霉素的200ml液体LB培养基中，37℃培养3～4h，当OD600达到0.6～0.8时，加入终浓度为0.2～0.5mmol/L的诱导剂IPTG，在28℃的温度下诱导培育4h左右，并在12000rpm的转速下离心5min收集菌体，利用向沉淀中加入细胞裂解缓冲液，并在冰上超声破碎2min至菌液澄清，所述冰上超声破碎的超声波需求功率为120W，且超声破碎为每隔2s时间超声破碎1s，再将离心管放入转速为12000rpm、温度为4℃的离心机中，离心10min，取上清移至另一干净离心管；
重组菌株经诱导剂IPTG培养过夜后收集湿菌体，破碎收集含有果糖基蔗糖转移酶的粗酶液，然后将粗酶液加载到含目His标签的纯化柱中，通过含有20mmol/L的PB、500mmol/L的NaCl和20mmol/L的咪唑缓冲液I和含有20mmol/L的PB、500mmol/L的NaCl和500mmol/L的咪唑缓冲液II，缓冲液I和缓冲液II的酸碱度pH为7.4，进行梯度洗脱，层析结束后对洗脱的收集液，进行SDS-PAGE验证；
(3)酶法合成制备Levan型果聚糖
将步骤(2)中纯化的果糖基蔗糖转移酶与25～40％浓度的蔗糖反应，添加pH为6.0的柠檬酸缓冲液，保持反应的温度为40～50℃，反应时间为48h，利用sevag法去除蛋白，加入三倍体积于果糖基蔗糖转移酶反应液的酒精，在4℃低温条件下使多糖沉淀并收集沉淀，再利用浓度为60～80％的乙醇溶液洗涤两次后，将沉淀再用三级水溶解收集，经冻干机冷冻获得粉末状的Levan型果聚糖。
对合成制备的Levan型果聚糖进行分析与鉴定
分别取1％的蔗糖、1％的Levan型果聚糖以及1％的葡萄糖为标准品，利用二苯胺为显色剂，展开剂为正丁醇：冰乙酸：水为2～3：1～2：1～2，放置在温度为80℃的烘箱中10min，观察显色情况。
选取纯化后冻干的Levan型果聚糖粉末，配制成浓度为5mg/ml的溶液，经过0.45um滤膜过滤去除杂质，采用凝胶色谱法测定其相对分子质量，色谱条件为色谱柱UltrahydrogelTMLinear 300mm×7.8mm×2，流动相为0.1mol/L的NaNO3溶液，流速为0.9mL/min，色谱 柱温度为45℃，测定Levan型果聚糖的分子量为2×106Da。
精确称取20mg纯化的Levan型果聚糖粉末置于棕色安瓿瓶中，加入1mol/L H2SO4后真空封管，在90℃温度下持续反应4h，待果聚糖完全水解后冷却，用BaCO3中和，离心，重复多次，直到H2SO4溶液完全除尽；取其上清液经过孔径为0.45um的滤膜过滤后，用高效液相色谱法进行分析，并以果糖，葡萄糖作为标准品，其中色谱条件：色谱柱为CarboPac PA20(3mm×150mm，6μm)，流速为0.5mL/min；采用梯度洗脱的方法，混合流动相为250mmol/L的NaOH溶液、1mol/L的NaAc溶液及超纯水，其中梯度洗脱过程为：在0～21min内，NaOH溶液1.8％、NaAc溶液0％；在21～30min内，NaOH溶液1.8％、NaAc溶液从5％上升到20％；在30～50min内，NaOH溶液80％、NaAc溶液0％。
以上所述仅是本发明的实施方式，再次声明，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进，这些改进也列入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (3)

1.一种高均一度大分子量Levan型果聚糖的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)构建果糖基蔗糖转移酶突变体H280R
设计利用引物F：H280R为5'-CTCTTTACGATCAGCCGTGATTCGACTTATG-3'，引物R：H280R为5'-CATAAGTCGAATCACGGCTGATCGTAAAGAG-3'，并以质粒pET-32a-lev为模板，根据Dpn I法定点突变的反应原理，构建果糖基蔗糖转移酶突变体H280R，设定PCR程序；
PCR扩增反应体系为：10μL Primer STAR Max，1μL引物F：H280R，1μL引物R：H280R，2μL模板pET-32a-lev，反应总体积为20μL；
PCR扩增条件为：94℃预变性3min，94℃变性30s；54℃褪火30s；72℃延伸3min45s；共进行30个循环反应；然后于72℃继续延伸10min；
PCR产物验证、回收后，经BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切消化，克隆到PGEX-4T-1质粒，转入E.coli BL21(DE3)；
(2)果糖基蔗糖转移酶突变体H280R的表达与纯化
将步骤(1)中构建好的含有的果糖基蔗糖转移酶突变体H280R的野生型和突变型重组菌株的菌液，分别转接到含有一定浓度氨苄青霉素的200ml液体LB培养基中，37℃培养3～4h，当OD600达到0.6～0.8时，加入终浓度为0.2～0.5mmol/L的诱导剂IPTG，在28℃的温度下诱导培育4h左右，并在12000rpm的转速下离心5min收集菌体，利用向沉淀中加入细胞裂解缓冲液，并在冰上超声破碎2min至菌液澄清，再将离心管放入转速为12000rpm、温度为4℃的离心机中，离心10min，取上清移至另一干净离心管；
重组菌株经诱导剂IPTG培养过夜后收集湿菌体，破碎收集含有果糖基蔗糖转移酶的粗酶液，然后将粗酶液加载到含目His标签的纯化柱中，通过含有20mmol/L的PB、500mmol/L的NaCl和20mmol/L的咪唑缓冲液I和含有20mmol/L的PB、500mmol/L的NaCl和500mmol/L的咪唑缓冲液II，缓冲液I和缓冲液II的酸碱度pH为7.4，进行梯度洗脱，层析结束后对洗脱的收集液，进行SDS-PAGE验证；
(3)酶法合成制备Levan型果聚糖
将步骤(2)中纯化的果糖基蔗糖转移酶与25～40％浓度的蔗糖反应，添加pH为6.0的柠檬酸缓冲液，保持反应的温度为40～50℃，反应时间为48h，利用sevag法去除蛋白，加入三倍体积于果糖基蔗糖转移酶反应液的酒精，在4℃低温条件下使多糖沉淀并收集沉淀，再利用浓度为60～80％的乙醇溶液洗涤两次后，将沉淀再用三级水溶解收集，经冻干机冷冻获得粉末状的Levan型果聚糖。
2.根据权利要求1所述的一种高均一度大分子量Levan型果聚糖的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中的氨苄青霉素的浓度为30～60μg/mL。
3.根据权利要求1所述的一种高均一度大分子量Levan型果聚糖的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中冰上超声破碎的超声波需求功率为120W，且超声破碎为每隔2s时间超声破碎1s。
CN201610357450.5A 2016-05-25 2016-05-25 一种高均一度大分子量Levan型果聚糖的制备方法 Pending CN105907815A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610357450.5A CN105907815A (zh) 2016-05-25 2016-05-25 一种高均一度大分子量Levan型果聚糖的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610357450.5A CN105907815A (zh) 2016-05-25 2016-05-25 一种高均一度大分子量Levan型果聚糖的制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105907815A true CN105907815A (zh) 2016-08-31

Family

ID=56742333

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610357450.5A Pending CN105907815A (zh) 2016-05-25 2016-05-25 一种高均一度大分子量Levan型果聚糖的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105907815A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113444704A (zh) * 2021-07-27 2021-09-28 光明乳业股份有限公司 三种果聚糖蔗糖酶及其应用

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995013389A1 (en) * 1993-11-09 1995-05-18 E.I. Du Pont De Nemours And Company Transgenic fructan accumulating crops and methods for their production
WO2001090319A2 (en) * 2000-05-25 2001-11-29 Nederlandse Organisatie Voor Toegepast-Wetenschappelijk Onderzoek Fructosyltransferases (inulosucrase and levansucrase) from lactobacillus reuteri
CN1746311A (zh) * 2004-09-10 2006-03-15 中国农业科学院生物技术研究所 运动发酵单胞菌果聚糖蔗糖酶基因突变的工程菌及其构建和用途
WO2010061383A1 (en) * 2008-11-26 2010-06-03 Biodalia Microbiological Technologies Ltd. A method of in-situ enrichment of foods with fructan
CN103074396A (zh) * 2013-01-14 2013-05-01 暨南大学 大蒜果聚糖合成酶在生产高果聚糖中的应用
CN103190478A (zh) * 2013-04-09 2013-07-10 山东大学 含Levan果聚糖的酸奶的制备方法
CN103484482A (zh) * 2013-09-06 2014-01-01 广西大学 一种枯草芽孢杆菌左聚糖蔗糖酶突变体t305a及其应用

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995013389A1 (en) * 1993-11-09 1995-05-18 E.I. Du Pont De Nemours And Company Transgenic fructan accumulating crops and methods for their production
WO2001090319A2 (en) * 2000-05-25 2001-11-29 Nederlandse Organisatie Voor Toegepast-Wetenschappelijk Onderzoek Fructosyltransferases (inulosucrase and levansucrase) from lactobacillus reuteri
CN1746311A (zh) * 2004-09-10 2006-03-15 中国农业科学院生物技术研究所 运动发酵单胞菌果聚糖蔗糖酶基因突变的工程菌及其构建和用途
WO2010061383A1 (en) * 2008-11-26 2010-06-03 Biodalia Microbiological Technologies Ltd. A method of in-situ enrichment of foods with fructan
CN103074396A (zh) * 2013-01-14 2013-05-01 暨南大学 大蒜果聚糖合成酶在生产高果聚糖中的应用
CN103190478A (zh) * 2013-04-09 2013-07-10 山东大学 含Levan果聚糖的酸奶的制备方法
CN103484482A (zh) * 2013-09-06 2014-01-01 广西大学 一种枯草芽孢杆菌左聚糖蔗糖酶突变体t305a及其应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
M. BEKERS 等: "Fructooligosaccharide and levan producing activity of Zymomonas mobilis extracellular levansucrase", 《PROCESS BIOCHEMISTRY》 *
宋廷富 等: "产大分子levan的果糖基蔗糖转移酶的原核表达及酶学性质", 《应用与环境生物学报》 *
陆娟 等: "Levan蔗糖酶及其在Levan果聚糖合成中的应用", 《微生物学报》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113444704A (zh) * 2021-07-27 2021-09-28 光明乳业股份有限公司 三种果聚糖蔗糖酶及其应用
CN113444704B (zh) * 2021-07-27 2023-03-03 光明乳业股份有限公司 三种果聚糖蔗糖酶及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11203742B2 (en) Sucrose phosphorylase mutant with improved enzyme activity and construction method thereof and use thereof
CN110452919B (zh) 一种截短的褐藻胶裂解酶Aly7B-CDII基因及其应用
US9902983B2 (en) Agarooligosaccharide hydrolase and method for producing 3,6-anhydro-L-galactose and galactose from agarose by using same
CN112322565A (zh) 提高重组大肠杆菌中2’-岩藻糖基乳糖产量的方法
WO2022148008A1 (zh) 产塔格糖的枯草芽孢杆菌基因工程菌及制备塔格糖的方法
WO2024113998A1 (zh) 一种酶法制备超低分子量石斛寡聚糖的方法及其应用
Yang et al. Novel endotype xanthanase from xanthan-degrading Microbacterium sp. strain XT11
CN114480350B (zh) 卡拉胶酶在降解κ-卡拉胶和红藻胶中的应用
Hövels et al. Characterization of a novel endo-levanase from Azotobacter chroococcum DSM 2286 and its application for the production of prebiotic fructooligosaccharides
Zhou et al. Discovery and characterization of a novel α-L-fucosidase from the marine-derived Flavobacterium algicola and its application in 2′-fucosyllactose production
CN107603967B (zh) 一种壳聚糖酶csn4及其编码基因和应用
CN105907815A (zh) 一种高均一度大分子量Levan型果聚糖的制备方法
CN105647888B (zh) 内切几丁质酶及其编码基因和在生产几丁二糖中的应用
CN116622747A (zh) 一种编码右旋糖酐蔗糖酶的基因及其应用
CN110331122B (zh) 一种分泌表达褐藻胶裂解酶的大肠杆菌及其应用
Yan et al. Production of neoagarobiose from agar through a dual-enzyme and two-stage hydrolysis strategy
Duan et al. Efficient 2-O-α-D-glucopyranosyl-sn-glycerol production by single whole-cell biotransformation through combined engineering and expression regulation with novel sucrose phosphorylase from Leuconostoc mesenteroides ATCC 8293
CN115975989A (zh) 一种制备玉米抗性淀粉的iii型普鲁兰水解酶突变体及其制备方法和应用
CN116200318A (zh) 一种胞外分泌表达d-阿洛酮糖3-差向异构酶的重组枯草芽孢杆菌
CN103484482B (zh) 一种枯草芽孢杆菌左聚糖蔗糖酶突变体t305a及其应用
CN107236772B (zh) 一种制备褐藻寡糖的方法
EP3359656A1 (en) Compositions and methods comprising the use of exiguobacterium acetylicum and bacillus coagluans alpha-glucanotransferase enzymes
CN108660170B (zh) 一种酶法降解褐藻多糖生成deh的方法
CN113564092B (zh) 一种定向合成右旋糖酐的融合酶及其构建方法与应用
CN108611340A (zh) 一种β-1,4-葡聚糖酶编码基因及其制备与应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20160831

RJ01 Rejection of invention patent application after publication