CN105902696B - 紫花地丁在制备防治登革热ⅱ型病毒感染的药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及紫花地丁在制备防治登革热Ⅱ型病毒感染的药物中的应用。本发明所述的应用中的紫花地丁水提物对登革Ⅱ型病毒有明显抑制作用，可用于制备防治登革热Ⅱ型病毒感染的药物。本发明所述的防治登革热Ⅱ型病毒感染的药物是由紫花地丁水提物与常规用量的医学上可接受的辅料制成的临床上可接受的固体或液体口服制剂。

Description

紫花地丁在制备防治登革热Ⅱ型病毒感染的药物中的应用
技术领域
本发明涉及含来自植物的未确定结构的药物制剂，具体涉及堇菜科堇菜属紫花地丁植物在制药中的新用途。
背景技术
登革病毒在分类上属黄病毒科、黄病毒属。包括4个不同血清型,即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型登革病毒。登革热是由登革病毒引起的急性传染病，主要通过埃及伊蚊和白纹伊蚊传播，传播途径是伊蚊叮咬病毒血症患者的血液后被感染。临床表现主要为高热、头痛、肌肉和关节痛、皮疹、***肿大及白细胞减少等，严重者可出现出血或休克，甚至死亡。该病主要流行于热带和亚热带地区，目前全球已有100多个国家和地区有病例发生，有约25～30亿人处于登革病毒感染的危险中。该病已经严重影响了人们的身体健康和社会经济发展。由于目前尚无登革热疫苗，也缺乏相应的抗病毒药物，如何应对这一新发传染病已成为医药学界亟需应对的重大课题。
紫花地丁(Viola yedoensis)系堇菜科(Violaceae)堇菜属(Viola L.)多年生草本植物，又名光萼堇菜、犁头草、地丁草和紫地丁等。味苦、辛、寒。归心、肺经。具有清热解毒，凉血消肿，清热利湿的作用，主治疔疮，痈肿，瘰疬，黄疸，痢疾，腹泻，目赤，喉痹，毒蛇咬伤。现代药理学研究发现其具有较好的抗病毒、抗炎、抑菌及抗肿瘤活性。临床上多用于治疗疔疮肿毒、***、蜂窝组织炎、***炎、咽炎、痢疾、黄疸、目赤肿痛等。目前文献报道中还没有出现紫花地丁抗登革热病毒活性报道及其在抗登革热病毒方面的应用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供紫花地丁在制药中的新用途。
上述新用途具体是，紫花地丁在制备防治登革热Ⅱ型病毒感染的药物中的应用。
上述应用中，所述的药物是紫花地丁水提物与常规用量的医学上可接受的辅料制成的临床上可接受的固体或液体口服制剂。
上述应用中，所述的固体口服制剂具体是临床上可接受的颗粒剂、胶囊剂或片剂。
上述应用中，所述的液体口服制剂具体是临床上可接受的口服液。
上述应用中，所述的紫花地丁水提物可采用本领域常用的方法提取得到。本发明人推荐的方法如下所述：
本发明所述水提物是用水为溶剂采用常规的回流提取得到，其中，本发明人推荐的提取方法分别如下所述。
取紫花地丁药材，加入10倍水，回流提取30分钟，放冷，滤过，取滤液，浓缩，干燥，即得紫花地丁水提物。
本发明所述的固体口服制剂的制备方法为药典上所规定的常规制备方法，即将紫花地丁水提物与固体口服制剂常用的辅料按临床上可接受配比混合制得。
本发明所述的液体口服制剂的制备方法为药典上所规定的常规制备方法，即将紫花地丁水提物加水稀释后与液体口服制剂常用的辅料按临床上可接受配比混合，搅匀，滤过，灌装，灭菌，即得。
本发明所述的固体口服制剂或液体口服制剂具有抗Ⅱ型登革热病毒的作用，可用于防治登革热感染。
以下通过实验来进一步说明本发明的药物的安全性和有益效果。
本发明是采用细胞病变抑制法研究紫花地丁水提物对登革热Ⅱ型病毒的抑制作用，观察紫花地丁水提物对BHK-21细胞的毒性作用和对登革热Ⅱ型病毒的抑制作用，利用CCK-8检测试剂测得受试药物的半数有毒浓度(CC50)为35.21，半数最大效应浓度(EC50)为12.92，其选择指数SI是2.73，为低毒高效。具体实验方法如下所述。
1.实验材料
1.1细胞株 乳仓鼠肾细胞(BHK-21)，引自武汉病毒研究所，T11代。本室冻存保种。
1.2实验组及其对应的受试药物
受试样品：取下述实施例1制备的紫花地丁水提物加水溶解，制得相当于每毫升含生药100mg的药液。
1.3病毒株 登革Ⅱ型病毒引自武汉病毒研究所
1.3试剂和仪器 新生小牛血清及DMEM培养基(Gibco公司)；DMSO(广州市康洋化工有限公司)；胰蛋白酶(美国DIFCO公司；上海生工生物工程公司代理)。Olympus PM-6倒置显微镜(日本OLYMPUS公司)；；E-52AA旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；BP221S电子分析天平(上海精密仪器表有限公司)。
2.方法
2.1紫花地丁水提物在BHK-21细胞上毒性浓度的测定
将密度为0.5×105cell/ml BHK-21细胞接种于96孔细胞培养板中，每孔100μL。生长24h细胞成片(80-90％)贴壁后备用。将药物用细胞维持培养液(含2％血清)从连续2倍梯度稀释6个梯度，每孔加入所配制药液100μL，设正常细胞对照，每孔加入100μL细胞维持培养液。设溶剂对照组，于37℃的5％CO2培养箱中培养。加药培养48h后加入含100μL10％CCK-8试剂的培养基，在37℃孵育1h。按照下面方法计算：
以450nm检测吸光度，药物对细胞的毒性以细胞的活性表示，计算公式：
细胞活率(％)＝(药物组-空白对照)/(细胞对照-空白对照)×100％。
2.2病毒抑制率的测定
选择生长旺盛、成层良好细胞，倾弃生长液，加入胰酶消化，用生长液分散使细胞悬液浓度为105个/孔。用移液器将细胞悬液加入96孔板中，每孔100uL。将培养板置于培养箱中培养12～18小时，待细胞在96孔板中长成单层后，吸去培养液，每孔加入100ul的不同稀释浓度的药物和100uL的100TCID50病毒液，每一药物浓度设置2个复孔，同时设置空白对照组、正常细胞对照组、病毒对照组和阳性对照组，置于培养箱中孵育1h，吸去含药培养液和病毒液。在病毒对照组75％-100％病变时吸去维持液，加入100μL 10％CCK-8，在酶标仪450nm测定吸光度，计算药物的病毒抑制率。
病毒抑制率＝(试验组平均OD值-病毒对照组平均OD值)/(细胞对照组平均OD值-病毒对照组平均OD值)×100％
3.结果
3.1药物毒性结果如表1。
表1
3.2药物对病毒抑制率的测定结果如表2。
表2
上述实验结果表明本发明所述水提物对登革Ⅱ型病毒有明显抑制作用。选择指数大于2，可用于制备登革热的治疗和预防药物。
具体实施方式
例1：
取干燥的紫花地丁全草10kg，加100L蒸馏水浸泡30分钟，煎煮30分钟，趁热过滤，浓缩至1.05～1.1比重的稠浸膏，干燥，得紫花地丁水提物。
例2：(颗粒剂)
取实施例1的水提物300g，加入蔗糖、糊精等辅料，置于沸腾制粒机中混合、制粒，干燥，分装，每袋9g。本品为棕绿色颗粒，味微甜、苦。其它项目应符合中华人民共和国药典2010年版颗粒剂项下的有关规定。
例3：(胶囊剂)
取实施例1的水提物300g，加入淀粉等辅料，置于沸腾制粒机中混合、制粒，干燥。将所得颗粒装入1号硬明胶胶囊中，每粒0.3g，分装100粒。本品为胶囊剂，内容物为棕绿色的颗粒或粉末，味微苦，供口服使用。其它项目应符合中华人民共和国药典2010年版胶囊剂项下的有关规定。
例4：(片剂)
取实施例1的水提物100g，加入淀粉等辅料，置于沸腾制粒机中混合、制粒，干燥后加入适量硬脂酸镁压片，每片0.2g，分装500片。本品为棕绿色片剂，味微苦，供口服使用。其它项目应符合中华人民共和国药典2010年片剂项下的有关规定。
例5：(口服液)
取实施例1的水提物50g，加水适量溶解，滤过，加入单糖浆及苯甲酸钠适量，加水至1000ml，搅匀，静置，滤过，灌封，灭菌，每支10ml。本品为棕色澄清液体，味甜、微苦供口服使用。其它项目应符合中华人民共和国药典2010年口服液项下的有关规定。

Claims (3)

1.紫花地丁水提物作为唯一活性成分在制备防治登革热Ⅱ型病毒感染的药物中的应用，其中所述的紫花地丁水提物由以下方法制备得到：
取紫花地丁，加入10倍水，回流提取30分钟，放冷，滤过，取滤液，浓缩，干燥，即得紫花地丁水提物。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征是，所述的药物是由紫花地丁水提物与常规用量的医学上可接受的辅料制成的临床上可接受的固体或液体口服制剂。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征是，所述的固体或液体口服制剂是颗粒剂、胶囊剂、片剂或口服液。
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