CN113181229B - 甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系在抑制新型冠状病毒SARS-CoV-2中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物技术领域，公开了甘蓝型油菜‑菘蓝G单体附加系在抑制新型冠状病毒SARS‑CoV‑2中的应用。本发明首次发现甘蓝型油菜‑菘蓝G单体附加系提取物在细胞感染模型上具有显著的抗SARS‑CoV‑2病毒的效果，且对细胞无毒副作用。甘蓝型油菜‑菘蓝附加系具有大规模种植的优点，可以给抗SARS‑CoV‑2制剂的生产提取提供充足的原料，成本低，产量大，可以作为抗病毒的药食蔬菜、饲料等进行开发和利用，用作人和动物的保健性食品，保障动物及人类健康。

Description

甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系在抑制新型冠状病毒SARS- CoV-2中的应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系在抑制新型冠状病毒SARS-CoV-2中的应用

背景技术

新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 19,COVID-19)由严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)引起。但是，迄今为止，还没有公认有效的新冠肺炎治疗方法或抗SARS-CoV-2病毒的方法，因此，研究并开发新型的抗SARS-CoV-2病毒的制剂或药物具有重要意义。

甘蓝型油菜-菘蓝附加系(简称板蓝根油菜或油板)是甘蓝型油菜与菘蓝体细胞杂交融合后的附加系。油菜具有多种功能和用途，叶和花薹可蔬菜用、种子可榨油，菜籽粕和青饲料可供动物食用，油菜花还具有观赏性。油菜在世界上的种植范围比较广泛，来源广，产量大。而菘蓝是我国重要的药用植物，其根称板蓝根，其叶称大青叶，菘蓝具有抗菌、抗内毒素、抗癌、免疫调节、活血化瘀及抗病毒作用，在《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案(试行第一～七版)》，简称“诊疗方案”及13省推荐中医药治疗方案组，板蓝根是其中之一，但在所用到的18种中药中其使用频率倒数第二，仅有2次(陈冉等，免疫调节抗病毒中药的特性与应用[J].中草药，2020年3月第51卷第6期)；在相关研究及新闻报道中也指出，“复方板蓝根”而非“板蓝根”在体外细胞水平具有抗新冠病毒的作用。就来源和产量而言，菘蓝也远远低于油菜。甘蓝型油菜-菘蓝附加系是通过甘蓝型油菜和菘蓝的体细胞杂交，形成的体细胞杂种与甘蓝型油菜连续多代回交，将菘蓝的7条染色体分别附加到油菜，进而获得7个附加系(A、B、C、D、E、F、G)。目前这些附加系主要用于油菜遗传育种和菘蓝基因组结构及药用成分的解析。虽然有相关研究报道显示甘蓝型油菜-菘蓝附加系中有部分附加系对流感病毒有一定的抗病毒效果，例如中国中医科学院黄璐琦实验室利用水作为溶剂进行5个单体附加系(B单体、C单体、D单体、E单体、F单体)和一个二体异附加系(D双体)提取，发现D双体对H1N1流感病毒表现一定的抑制作用。但是关于甘蓝型油菜-菘蓝不同附加系抗SARS-CoV-2病毒的作用还未见研究报道。流感病毒属于正粘病毒科，SARS-CoV-2病毒属于冠状病毒科。根据***发育树、冠状病毒可分为四个属：α、β、γ、δ，其中β属冠状病毒又可分为A、B、C和D四个独立的亚群，已知的导致严重疾病的MERS-CoV属于β属冠状病毒C亚群、SARS-CoV属于β属冠状病毒B亚群，新型冠状病毒和SARS-CoV基因组具有较高的同源性，因此命名为SARS-CoV-2。李辉等(2019新型冠状病毒抗病毒治疗有药可期[J].中华结核和呼吸杂志，2020，Vol 43,No 3)报道，临床上常用的抗病毒药物，包括奥司他韦、帕拉米韦、扎那米韦等对流感病毒有较好作用效果的药物，对SARS-CoV-2均无效。尽管已有许多关于SARS-CoV-2的研究发表，但目前对这种新型冠状病毒的了解只是冰山一角，SARS-CoV-2感染发病机制和病毒-宿主相互作用分子机制仍然很不清楚，还没有治疗这种病毒的特效药。

中药材药效与活性物质含量及组成存在密切的关系，而提取方法的不同又会影响中药材活性物质的浸出及组成。本发明中以甲醇为溶剂、采用55℃超声处理后，在旋转蒸发仪上50℃旋转蒸发的方法对不同附加系有效成分进行提取，提取产物在50℃烘干后用于后续试验。有研究报道(罗云等，不同干燥工艺对板蓝根水提物中有效成分的影响[J].中草药，2011年8月第42卷第8期)，不同干燥方式对板蓝根水提取物中甲酸、水杨酸、腺苷和多糖的含量存在较大影响。李礼斌等研究了3种提取方法对三叶青乙醇浸提物中黄酮类活性成分含量及抗肺癌细胞A549增殖活性的影响，结果发现不同提取工艺对三叶青黄酮类物质的浸出具有一定的影响，进而影响了三叶青中发挥主效肿瘤抑制效果的活性物质的浸出(李礼斌等，不同提取方法对三叶青乙醇浸提物含量及肺癌细胞A549增殖抑制的影响[J].浙江中医杂志，2019年5月第54卷第5期)。

本发明中，对甘蓝型油菜-菘蓝不同附加系提取物进行抗SARS-CoV-2病毒的筛选，发现其中一个附加系的提取物对SARS-CoV-2病毒具有显著的抑制作用，在细胞水平和新冠病毒致死性小鼠感染模型中具有显著的抗新冠病毒效果和缓解新冠病毒对小鼠肺部组织损伤的作用，减轻因SARS-CoV-2感染导致的体重下降，提高小鼠的存活率。随着新冠肺炎的爆发，对抗病毒感染及治疗给健康和医疗保健带来沉重负，寻找抗病毒药物的科学尝试很快就会面临大规模生产的挑战，甘蓝型油菜-菘蓝附加系具有大规模种植的优点，可以给抗SARS-CoV-2制剂的生产提取提供充足的原料，同时甘蓝型油菜-菘蓝附加系也可以作为药食蔬菜、饲料等进行开发和利用，用作人和动物的保健性食品，保障动物及人类健康。

发明内容

本发明的目的在于弥补现有技术的不足，针对严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV-2)难以预防和治疗的问题，提供了一种甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系在制备治疗或预防新型冠状病毒SARS-CoV-2感染制剂中的应用。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术措施：

甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系在制备治疗或预防新型冠状病毒SARS-CoV-2感染制剂中的应用，

所述的应用包括：

甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系在制备抑制SARS-CoV-2药物中的应用；

甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系在制备治疗或预防SARS-CoV-2感染的药物中的应用；

甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系在制备缓解SARS-CoV-2感染后体重降低的药物中的应用；

甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系在制备提升SARS-CoV-2感染后机体存活率的药物中的应用；

甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系在制备降低SARS-CoV-2感染后机体肺部病毒含量的药物中的应用。

甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系在制备治疗或预防小鼠SARS-CoV-2感染的药物中的应用；

甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系在制备提高治疗小鼠SARS-CoV-2感染存活率的药物中的应用；

甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系在制备缓解小鼠SARS-CoV-2感染后体重降低的药物中的应用；

或甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系在制备降低小鼠SARS-CoV-2感染后机体肺部病毒含量的药物中的应用。

以上所述的应用中，优选的，所述的小鼠SARS-CoV-2感染中的SARS-CoV-2为新型冠状病毒SARS-CoV-2/WBP-1，保藏编号为CCTCC NO：V202031。

以上所述的应用中，优选的，所述的药物的主效成分为甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系提取物，其提取方法包括：

甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系粉末和甲醇混合，50-60℃超声处理，取上清蒸发掉甲醇，获得甲醇粗提物；用单蒸水溶解蒸发掉甲醇的粗提物，用乙酸乙酯萃取，下层为水层含有效成分，将水分蒸发烘干即得。

本发明的保护范围还包括：一种感染新型冠状病毒小鼠的药物筛选模型的构建方法，其方法包括：感染了保藏编号为CCTCC NO：V202031的小鼠，以甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系提取物为治疗药物标准品，筛选其他治疗感染了保藏编号为CCTCC NO：V202031的小鼠的药物。

与现有技术相比，本发明优点如下：

1)甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系提取物在细胞感染模型上具有显著的抗SARS-CoV-2病毒的效果，且对细胞无毒副作用。

2)甘蓝型油菜-菘蓝附加系具有大规模种植的优点，可以给抗SARS-CoV-2制剂的生产提取提供充足的原料，成本低，产量大。

3)甘蓝型油菜-菘蓝附加系具有天然健康、无毒副作用、不产生抗药性等优点。

4)甘蓝型油菜-菘蓝附加系可以作为抗病毒的药食蔬菜、饲料等进行开发和利用，用作人和动物的保健性食品，保障动物及人类健康。

附图说明

图1甘蓝型油菜-菘蓝不同附加系在体外细胞水平对SARS-CoV-2病毒增殖的影响。

其中A、B、C、D-1、E-1、F-1、G为油菜-菘蓝单体附加系；D-2、F-2为双体附加系。

图2甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系提取物对Caco-2细胞的细胞毒性示意图。

图3甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系提取物不同使用量对SARS-CoV-2病毒增殖的影响。

图4甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系提取物对SARS-CoV-2病毒感染小鼠体重的影响示意图。图5甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系提取物对SARS-CoV-2病毒感染小鼠存活率的影响示意图。

图6甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系提取物对SARS-CoV-2病毒感染小鼠肺脏形态的影响示意图。

图7甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系提取物对SARS-CoV-2病毒感染小鼠肺脏组织病理变化的影响。

具体实施方式：

为了更好地理解本发明的内容，下面结合具体实施例对本发明内容作进一步说明，但本发明的保护内容不局限于以下实施例。本发明实施例中的试验方法和条件如无特殊说明，均为常规方法。本发明所述的技术方案，如无特殊说明，均为领域的常规方案；所述试剂或材料如无特殊说明，均来源于商业渠道。本发明中所有与严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV-2)活病毒相关的试验均在生物安全三级实验室(ABSL3)完成。

目前，抗病毒药物评价模型主要分为体外模型(in vitro model)和体内模型(invivo model)。

体外模型主要使用各种细胞系对药物进行评价，其优点在于可提供大量遗传性状相同的细胞为研究对象，操作方便，可消除其它外界因素的影响，并可以检测药物毒性、有效浓度等，为后期机理研究提供更多基础。体内模型一般使用各种模式动物感染模型，通过药物处理后的各种表型指标来衡量药物在活体动物内的整体效果。其优点是可对候选药物在活体内的效果进行真实、***的评价。本发明中采用人结肠癌细胞系Caco-2对甘蓝型油菜-菘蓝不同附加系提取物的体外抗SARS-CoV-2效果进行测定；采用小鼠适应性毒株WBP-1感染模型，对甘蓝型油菜-菘蓝附加系提取物的体内抗SARS-CoV-2效果进行评价。

实验材料：

(1)实验所需细胞系、实验动物及病毒

细胞系：Caco-2细胞为华中农业大学实验室保存；

实验动物：SPF级4至6周龄Balb/c小鼠，购自三峡大学实验动物中心；

新型冠状病毒SARS-CoV-2/WBP-1，保藏编号为CCTCC NO：V202031，已在CN111961653A中公开，在本发明中，将该病毒简称为新型冠状病毒WBP-1或小鼠适应性毒株WBP-1；

(2)实验所需甘蓝型油菜-菘蓝附加系及其亲本

实验中使用的甘蓝型油菜-菘蓝附加系及其亲本由华中农业大学植物科学技术学院李再云老师团队提供

甘蓝型油菜-菘蓝附加系是通过甘蓝型油菜和菘蓝的体细胞杂交，形成的体细胞杂种与甘蓝型油菜连续多代回交，将菘蓝的7条染色体分别附加到油菜，进而获得7个单体附加系(A、B、C、D、E、F、G)，甘蓝型油菜-菘蓝单体附加系的具体制备过程参考文献《Development of a complete set of monosomic alien addition lines betweenBrassica napus and Isatis indigotica(Chinese woad)》(Kang Lei et.al,2014,PlantCell Rep)；甘蓝型油菜-菘蓝双体(二体)附加系的具体制备过程参考文献《甘蓝型油菜—菘蓝二体附加系的创制和细胞学分析》(杨汉等，中国油料作物学报，2016，38(3):281-286)。

(3)实验所需试剂：

DMEM培养基，胎牛血清(FBS)均购自于GIBCO公司；

细胞活性检测试剂盒：TransDetect Cell Counting Kit(CCK)购于北京全式金生物。

实施例1：

甘蓝型油菜-菘蓝附加系提取物的制备：

将大田种植的甘蓝型油菜-菘蓝不同附加系整株收获后自然阴干或低温烘干、粉碎、过80目筛网，收集的粉末用于粗提取的制备，具体提取步骤如下：

1)在2000mL锥形瓶加入100g不同附加系粉末和1000mL甲醇。55℃超声处理40-60min，过滤后分别收取上清和滤渣；

2)向步骤1的滤渣中加1000mL甲醇继续超声处理，按步骤1循环5-6次，合并得到的所有的上清液；

3)将步骤2中的上清液在旋转蒸发仪50℃蒸发掉甲醇；

4)用单蒸水溶解蒸发掉甲醇的粗提物，之后用等体积的乙酸乙酯萃取，下层为水层含有效成分，从分液漏斗下端流出，上层为乙酸乙酯有机层从上口倒出，上层回收后重复利用，下层水层重复萃取4-5次至上层变为清透浅色；

5)将萃取完成的下层水溶物用旋转蒸发仪于50℃蒸发掉水分，将旋转瓶取下放置于50℃烘箱烘干称重；

6)烘干后的提取物用单蒸水溶解，转移至灭菌瓶中，并用乙酸乙酯液封，待用。

甘蓝型油菜和菘蓝亲本提取方法同上。

实施例2：

甘蓝型油菜-菘蓝不同附加系提取物在体外细胞水平对SARS-CoV-2病毒增殖的影响

1、细胞培养

取冻存复苏后的Caco-2细胞经过2次传代后，用含10％胎牛血清和双抗(青霉素100U/ml，链霉素100ug/ml)的DMEM培养基扩大培养。

2、甘蓝型油菜-菘蓝附加系提取物处理细胞并感染新冠病毒WBP-1

1)将生长状态良好的Caco-2细胞进行消化传代，用细胞培养基调整细胞密度为1×10⁵/ml，每孔1ml接种于12孔板。

2)细胞生长单层密度达到80％时，向12孔板内Caco-2细胞中添加甘蓝型油菜-菘蓝不同附加系的提取物，提取物浓度均为200mg/mL，工作浓度为400μg/mL。

3)不同附加系提取物处理24h后感染新冠病毒(MOI为1)，37℃培养箱内孵育1h，弃去病毒孵育液，加入含有同样浓度的对应附加系提取物的培养基，继续培养细胞24h。

4)24h后收集病毒细胞培养液，进行免疫印记检测。

3.蛋白印迹实验(Western Blotting)

新冠病毒(WBP-1)感染Caco-2细胞后，采用Western Blotting实验验证甘蓝型油菜-菘蓝附加系提取物对新冠病毒增殖的影响，具体步骤如下：

1)取步骤2中收集的细胞培养病毒液，加5x蛋白loading，沸水煮10min，短暂离心待用。

2)SDS-PAGE电泳：配制分离胶为10％的聚酰胺凝胶，点样电泳，浓缩胶恒压80V，30min，分离胶恒压120V，1-1.5h。

3)转膜：转膜时，提前将转膜液预冷，将电泳完成的PAGE胶放入转膜槽，恒压100V转膜1h。

4)封闭：转膜完成后取出NC膜用封闭液封闭1h。

5)一抗二抗孵育：封闭后的NC膜孵一抗2h或4℃过夜，去掉一抗后用1x TBST洗6次，每次5min。一抗孵育洗膜后用HRP标记的二抗孵育1h，1x TBST洗6次，每次5min。

6)显色：采用Thermo的ECL显色试剂盒进行显色。

结果如图1所示，在甘蓝型油菜-菘蓝9个附加系中，F-1单体附加系和G单体附加系均具有一定程度的抗新冠病毒的作用，而其他7个附加系与对照相比无显著性差异，即对新冠病毒WBP-1无抑制作用。其中G单体具有显著的抗新冠病毒的作用，该单体对新冠病毒WBP-1的抑制作用强于菘蓝，能够显著性抑制新冠病毒在细胞上的增值，感染病毒后，G单体处理组细胞液中病毒含量显著性的低于未处理的感染对照组。

实施例3：

甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系在体外细胞水平对SARS-CoV-2病毒增殖的抑制作用：

根据实施例2的结果可知，G单体附加系提取物在工作浓度为4mg/mL时对新冠病毒有显著抑制作用，实施例3进一步证实了G单体附加系提取物抗新冠病毒的作用及其不同使用浓度对新冠病毒增殖的抑制效果。

1、G单体提取物对细胞的毒性作用

1)取生长良好的Caco-2细胞进行消化传代，用细胞生长液(DMEM培养基+10％胎牛血清+双抗)调整细胞密度为2×10⁶/ml，接种96孔板，每孔接种100μl；

2)每孔再加入100μl用培养基液(DMEM培养基+10％血清+双抗)配制的不同浓度的G单体提取物，混匀。设定7个浓度梯度，加入G单体的浓度分别对应为0μg/mL；50μg/mL；100μg/mL；200μg/mL；400μg/mL；800μg/mL；1600μg/mL。

3)同时设置细胞对照，放置于37℃，5％CO₂培养箱培养。

4)培养48h后，使用TransDetect细胞计数盒测定细胞活性，向处理培养后的96孔板细胞中加入含有CCK试剂10μl，37℃避光孵育2h，酶标仪检测OD450nm读数，计算

细胞存活率：

细胞存活率(％)＝药物处理组/未处理对照组*100％

试验结果如图2，测定细胞存活率能反应G单体提取物对Caco-2细胞的毒性作用，从图2中可以看出，在G单体的工作浓度为400μg/mL时，细胞活性在80％以上。

2、不同浓度G单体提取物对SARS-CoV-2病毒增殖的抑制效果

1)将生长状态良好的Caco-2细胞进行消化传代，用细胞培养基调整细胞密度为1×10⁵/ml，每孔1ml接种于12孔板。

2)细胞生长单层密度达到80％时，向12孔板内添加浓度为200mg/mL的G单体提取物，G单体提取物浓度分别是0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL。

3)不同浓度G单体提取物处理24h后感染新冠病毒(MOI为1)，37℃培养箱内孵育1h，弃去病毒孵育液，加入含有对应浓度的G单体提取物的培养基，继续培养细胞24h。

4)24h后收集病毒细胞培养液，进行免疫印记(Western Blotting)检测。

结果如图3，WB检测显示，随着G单体的浓度的增加，SARS-CoV-2-NP蛋白的灰度值随之减少，表明G单体提取对SARS-CoV-2的增殖具有抑制作用，并且具有剂量依赖性，随着G单体提取物使用量的增加，其对SARS-CoV-2的抑制作用不断增加。

实施例4：

G单体提取物在小鼠致死性感染模型中的抗病毒效果评价

在新冠病毒小鼠致死性感染模型中进行了G单体抗新冠病毒的体内效果评价，小鼠动物试验具体步骤如下：

1)将6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为2大组，第一大组为不感染病毒组，分别为PBS对照组、甘蓝型油菜(Brassica napus)亲本组、菘蓝(Isatis indigotica)亲本组、G单体附加系组，每组8只小鼠；第二大组为感染SARS-CoV-2病毒组，分别为PBS+SARS-CoV-2对照组、甘蓝型油菜(Brassica napus)亲本+SARS-CoV-2组、菘蓝(Isatis indigotica)亲本+SARS-CoV-2组、G单体附加系组+SARS-CoV-2，每组10只小鼠。

2)将甘蓝型油菜、菘蓝和G单体3种植物提取物及PBS进行小鼠灌胃，连续灌胃一周，每天一次，每只小鼠每次100μL(200mg/mL)。

3)植物提取物灌胃一周后，进行新冠病毒WBP-1攻毒感染，每只小鼠滴鼻感染2×10⁵PFU的新型冠状病毒鼠适应株SARS-CoV-2/WBP-1，感染剂量50μl，感染病毒后每天观察并记录小鼠的体重和存活情况，连续记录10天。

4)根据统计结果，绘制出体重变化曲线、存活率曲线。

5)另将40只6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为4组，分别为PBS+SARS-CoV-2对照组、甘蓝型油菜(Brassica napus)亲本+SARS-CoV-2组、菘蓝(Isatis indigotica)亲本+SARS-CoV-2组、G单体附加系组+SARS-CoV-2，每组10只小鼠，给药和感染操作同上，并在感染SARS-CoV-2后第5天解剖小鼠，每组随机解剖3只小鼠，取肺部组织样品，采集的肺部组织样品用组织固定液(4％PFA)固定，用于组织病理学分析。

小鼠体内抗SARS-CoV-2结果显示，G单体在动物体内也具有较好的抗新冠病毒的效果。

小鼠体重变化结果如图4和表1所示，灌服PBS和3种植物提取物的未感染新冠病毒小鼠，在监测期间小鼠体重没有下降，且随着日龄增加体重逐渐增加，说明G单体及其亲本提取物对小鼠生长和健康没有影响，使用健康安全；感染新冠病毒的4个组中，攻毒后小鼠体重均开始下降，PBS组和菘蓝亲本组在感染后体重逐渐下降并于感染后第7天全部死亡，油菜组感染后体重也不断下降并在感染后第8天全部死亡，但G单体组体重下降后在第9天体重开始恢复。

表1甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系提取物对SARS-CoV-2病毒感染小鼠体重的影响

小鼠存活率结果如图5和表2所示，未感染新冠病毒的4个小组中，小鼠全部存活(图5中，PBS组，Brassica napus组，Radix lsatidis组，G monosome组线条重合)；对应的感染新冠病毒的4个小组中G单体处理组小鼠存活率为50％；油菜亲本组、菘蓝亲本组和PBS组小鼠存活率为0。

表2甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系提取物对SARS-CoV-2病毒感染小鼠存活率的影响

肺脏组织外观形态显示，G单体提取物能够减轻新冠病毒感染对肺脏组织形态的改变(图6)；肺脏组织病理切片检测结果如图7示：对照组小鼠肺中观察到严重的炎症细胞浸润，肺脏充血，而G单体附加系组中病毒对肺脏组织的损害明显减弱。

上述结果说明，G单体附加系在细胞水平和小鼠体内均有明显的抗新冠病毒效果。鉴于上述结果，G单体可用于制备预防或治疗SARS-CoV-2感染的制剂。

Claims (8)

1.甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系在制备治疗或预防新型冠状病毒SARS-CoV-2感染的药物中的应用。

2.甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系在制备抑制SARS-CoV-2药物中的应用。

3.甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系在制备缓解SARS-CoV-2感染后体重降低的药物中的应用。

4.甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系在制备提升SARS-CoV-2感染后机体存活率的药物中的应用。

5.甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系在制备降低SARS-CoV-2感染后机体肺部病毒含量的药物中的应用。

6.根据权利要求3或4或5所述的应用，所述应用中的感染对象为小鼠，感染的SARS-CoV-2病毒的保藏编号为CCTCC NO：V202031。

7.根据权利要求1或2或3或4或5所述的应用，所述药物的主要药效成分为甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系提取物，其提取方法包括：

甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系粉末和甲醇混合，50-60℃超声处理，取上清蒸发掉甲醇，获得甲醇粗提物；用单蒸水溶解蒸发掉甲醇的粗提物，用乙酸乙酯萃取，下层为水层含有效成分，将水分蒸发烘干即得。

8.一种防治新型冠状病毒感染的药物筛选模型的构建方法，其方法包括：以感染了保藏编号为CCTCC NO：V202031病毒的小鼠作为动物模型，以甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系提取物为治疗药物标准品，筛选其他防治保藏编号为CCTCC NO：V202031的病毒感染的药物。

Images