CN105884852B

CN105884852B - 齐墩果酸与胆碱的共晶、其制备方法及其药物组合物

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Publication number: CN105884852B
Application number: CN201510014403.6A
Authority: CN
Inventors: 孙宏斌; 林超; 柳军; 温小安
Original assignee: China Pharmaceutical University
Current assignee: China Pharmaceutical University
Priority date: 2015-01-07
Filing date: 2015-01-07
Publication date: 2019-07-05
Anticipated expiration: 2035-01-07
Also published as: CN105884852A

Abstract

本发明涉及齐墩果酸与胆碱形成的共晶，尤其是齐墩果酸与胆碱按照2∶1的比例形成的共晶B，该共晶B具有优于齐墩果酸自身的溶解度性质和药物疗效。本发明还提供了含有齐墩果酸与胆碱的共晶的制备方法以及包含其的药物组合物。

Description

齐墩果酸与胆碱的共晶、其制备方法及其药物组合物

技术领域

本发明涉及包含齐墩果酸的新型晶体化合物，尤其是涉及齐墩果酸与胆碱形成的共晶、其制备方法以及包含其的药物组合物。

背景技术

齐墩果酸片是一个非处方保肝药，其在临床上用于急、慢性肝炎的辅助治疗，对肝损伤有一定的保护作用。另一方面，大量的研究工作表明，齐墩果酸还具有降脂、降糖、抗肿瘤、免疫调节、神经保护和抗心脑血管疾病等作用(Natural Product Reports 2011，28，543-593)。尤其值得关注的是，本发明人证明了齐墩果酸在高脂动物模型上体现了极显著的降血脂作用(201210454865.6)。目前，齐墩果酸除了在保肝方面有临床应用之外，尚无其他方面的临床应用。

齐墩果酸是一个五环三萜类化合物，为白色粉末结晶物质，极难溶于水。由于其水溶性极差，齐墩果酸口服生物利用度极低(生物利用度不到1％)，因此，为达到保肝疗效每日需服药三次，且服用剂量较大。

为了改善齐墩果酸的生物利用度，有将齐墩果酸制成口腔崩解片(200710068005.8)、磷脂复合物(200510081273.4)、滴丸(200510013611.0)和分散片(200810302500.5)等。然而，通过上述制剂手段提高药物溶解度往往导致药物成本高，且由于药剂制备工艺过程复杂而大致药物质量可控性差。另一方面，如果通过结构修饰来改善齐墩果酸的水溶性，其主要弊端在于给药物的安全性也带来很大的不确定性，尤其是作为长期服用的保肝或降脂药物，对其安全性要求极高。

在不改变药物结构的前提下，提高药物溶解度的方法还有盐型筛选。现有的齐墩果酸盐包括齐墩果酸钠盐(99113945.3)、齐墩果酸哌嗪盐(200910055705.2)和齐墩果酸乙二胺盐(201010171882.X)。齐墩果酸钠盐虽然在一定程度上解决了药物的溶解度和溶出度问题，但研究表明，齐墩果酸钠盐在5～95％的范围内持续吸湿，因而影响药物的稳定性，不适于工业化生产。齐墩果酸哌嗪盐和乙二胺盐虽然具有吸湿性低和稳定性高的特点，但哌嗪或乙二胺作为有机胺只担负着碱基成盐的功能，其本身并无疗效，尤其是长期大量服用含有此类有机胺的药物会带来潜在的安全性隐患。

在不改变药物结构的前提下，改善药物理化性质的另一种方法是形成药物共晶。所谓药物共晶是指将药物活性成分(active pharmaceutical ingredients，API)与合适的共晶形成物(cocrystal former，CCF)通过氢键自组装，或者通过带有饱和性和方向性的非共价键(如范德华力)组装形成的一种新型结构，即药物共晶。药物共晶研究也是药物晶型研究的一个重要组成部分。药物共晶之所以对制药工业有很大的吸引力在于它提供了一种不需要破坏和产生共价键就能够达到改善药物活性成分(API)的理化性质的机会。药物共晶多数是以氢键为基础形成的，一般通过氢键受体和氢键给予体的连接来形成。通过氢键形成的药物共晶既不需要形成新的共价键，也不需要破坏已有的共价键；在保留药物本身的药理性质的同时，达到了改善药物的理化性质的目的，这一点为药物共晶在制药工业方面的应用提供了更为广阔的发展空间。在不改变药物结构及本身的药理性质的情况下，形成的新晶体可以提高药物的溶解性、溶出度、生物利用度、稳定性，降低引湿性及改善机械性能等。因此，获得更多具有新颖、实用和创造性的药物共晶具有重要的现实意义，特别是一些水不溶性药物。

胆碱是首次由Streker在1894年从猪胆汁中分离出来，现已成为人类食品中常用的添加剂。美国的《联邦法典》将胆碱列为“一般认为安全”的产品；欧洲联盟1991年颁布的法规将胆碱列为允许添加于婴儿食品的产品。胆碱是一种强有机碱，是卵磷脂的组成成分，也存在于神经鞘磷脂之中，是机体可变甲基的一个来源而作用于合成甲基的产物，同时又是乙酰胆碱的前体。人体也能合成胆碱，所以不易造成缺乏病。胆碱耐热，在加工和烹调过程中的损失很少，干燥环境下，即使很长时间储存食物中胆碱含量也几乎没有变化。尤其值得关注的是，胆碱还具有非常好的保健和防治疾病功效。例如，胆碱可促进脂肪代谢，临床上应用胆碱可治疗肝硬化、肝炎和其他肝疾病，效果良好。胆碱具有良好的乳化特性，能阻止胆固醇在血管内壁的沉积并清除部分沉积物，同时改善脂肪的吸收与利用，因此具有预防心血管疾病的作用。

迄今为止，尚未见任何报道描述齐墩果酸与胆碱形成的盐或共晶。

发明内容

本发明的目的之一是提供新型的齐墩果酸与胆碱形成的共晶，其溶解度等理化性质要优于齐墩果酸自身。本发明的共晶包括：齐墩果酸/胆碱/异丙醇2∶1∶1共晶A或齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B。

本发明提供了包含齐墩果酸和胆碱的共晶，其具有如下特征：

1.粉末X射线衍射：

仪器：D8Advance X射线衍射仪(德国Bruker)

靶：Cu-Kα

波长：1.5406A°

管压：40KV

管流：40mA

步长：0.02°

表1、齐墩果酸/胆碱/异丙醇2∶1∶1共晶A的粉末X射线衍射特征

表2、齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B的粉末X射线衍射特征

2.差示扫描量热法(DSC)：

仪器：NETZSCH DSC 204差示扫描热分析仪

范围：40～300℃

升温速度：10℃/分钟

齐墩果酸/胆碱/异丙醇2∶1∶1共晶A的吸热转变约在116.3℃和254.6℃，此处有强吸热峰。

齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B的吸热转变约在255.5℃，此处有强吸热峰。

3.熔点：

仪器：RY-1熔点仪(天津市分析仪器厂)

齐墩果酸/胆碱/异丙醇2∶1∶1共晶A的熔点为：255～258℃。

齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B的熔点为：258～262℃。

4.红外光谱：

仪器：岛津公司IR Affinity-1

齐墩果酸/胆碱/异丙醇2∶1∶1共晶A的红外光谱波数(cm^-1)约为：3421、2972、2941、2926、2858、1681、1548、1465、1384、1373。

齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B的红外光谱波数(cm^-1)约为：3458、2941、2862、1703、1556、1462、1388、1361。

本发明的齐墩果酸、胆碱及异丙醇的共晶A，其特征在于，共晶A是由齐墩果酸、胆碱及异丙醇按照2∶1∶1的比例结合形成；使用Cu-Kα辐射，其X射线粉末衍射图，以度表示的2θ在14.3±0.2和15.5±0.2有衍射峰，特别是，在3.1±0.2、5.4±0.2、6.3±0.2、6.6±0.2、11.5±0.2、11.7±0.2、13.3±0.2、14.3±0.2、15.5±0.2、15.8±0.2、20.3±0.2有一个或多个(以任意组合，包括两个以上，或者全部)衍射峰，见图1；共晶A的DSC扫描的吸热转变主要在116.3℃和254.6℃左右，见图3；共晶A用KBr压片测得的红外吸收光谱约在：3421cm^-1、2972cm^-1、2941cm^-1、2926cm^-1、2858cm^-1、1681cm^-1、1548cm^-1、1465cm^-1、1384cm^-1和1373cm^-1处有吸收峰，见图7。

本发明的齐墩果酸与胆碱的共晶B，其特征在于，共晶B是由齐墩果酸及胆碱按照2∶1的比例结合形成；使用Cu-Kα辐射，其X射线粉末衍射图，以度表示的2θ在13.2±0.2和15.1±0.2有衍射峰，特别是，在7.3±0.2、9.8±0.2、12.1±0.2、13.2±0.2、14.1±0.2、15.1±0.2、15.9±0.2、19.8±0.2、21.0±0.2有一个或多个(以任意组合，包括两个以上，或者全部)衍射峰，见图2；共晶B的DSC扫描的最大吸热转变约在255.5℃左右，见图4；共晶B用KBr压片测得的红外吸收光谱约在：3458cm^-1、2941cm^-1、2862cm^-1、1703cm^-1、1556cm^-1、1462cm^-1、1388cm^-1、1361cm^-1处有吸收峰，见图8。

本发明的另一目的是提供制备齐墩果酸/胆碱共晶的方法。

本发明提供的齐墩果酸/胆碱/异丙醇2∶1∶1共晶A的制备方法如下：

制备方法1、步骤如下：

1.在加热条件下，将齐墩果酸溶于适量的可溶性溶剂中，所述溶剂选自水、甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、正丁醇、二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、四氢呋喃或N，N- 二甲基甲酰胺中的一种溶剂或者一种以上的混合溶剂，优选溶剂为异丙醇、乙酸乙酯或丙酮；

2.将胆碱溶液慢慢滴加到步骤1所得的溶液中，析出大量固体；所加入的胆碱的量优选为0.5～5当量；

3.过滤，用适量的上述可溶性溶剂或不溶性溶剂洗涤，得到固体；

4.将收集得到的固体用异丙醇重结晶即得齐墩果酸/胆碱/异丙醇2∶1∶1共晶A。

制备方法2、步骤如下：

1.将胆碱溶于异丙醇，所加入的胆碱的量优选为0.5～5当量；

2.在加热条件下，向上述溶液中加入齐墩果酸，搅拌得澄清溶液；

3.将上述溶液慢慢冷却至室温，静置析出白色晶体，抽滤后挥干溶剂，即得齐墩果酸/胆碱/异丙醇2∶1∶1共晶A。

本发明提供的齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B的制备方法如下：

制备方法1、步骤如下：

在室温下将齐墩果酸/胆碱/异丙醇2∶1∶1共晶A悬浮于适量的溶剂中，快速搅拌一段时间后，抽滤得白色固体，干燥即得齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B；所述溶剂选自乙酸乙酯、丙酮、乙腈、正丁醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃或N，N-二甲基甲酰胺中的一种或者一种以上的混合溶剂，优选溶剂为乙酸乙酯或丙酮。

制备方法2、步骤如下：

将齐墩果酸/胆碱/异丙醇2∶1∶1共晶A在常压或减压条件下加热一段时间后，即得齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B；所采用的加热温度为50～200℃，优选100～150℃。

本发明还提供了一种预防或治疗高血脂症、动脉粥样硬化、冠心病、心肌梗塞、糖尿病、肿瘤、肝炎、肝硬化、老年痴呆症、脑缺血、中风、肾病或类风湿性关节炎的药物组合物，其包含治疗有效剂量的齐墩果酸/胆碱/异丙醇2∶1∶1共晶A或齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B作为活性成分和药学可接受的载体。该药物组合物可以被配制以用于特定的施用途径，例如口服施用、胃肠道外施用和直肠施用等。此外，本发明的药物组合物还可以制备在固体形式中，包括胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、粉末或栓剂，或液体形式，包括溶液剂、混悬剂或乳剂。本发明的药物组合物可以经过常规的药物操作如灭菌和/或可以含有常规的惰性稀释剂、润滑剂或缓冲剂，以及佐剂如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂和缓冲剂等。

此外，本发明的药物组合物可以与可用于预防或治疗高血脂症、动脉粥样硬化、冠心病、心肌梗塞、糖尿病、肿瘤、肝炎、肝硬化、老年痴呆症、脑缺血、中风、肾病或类风湿性关节炎的其它类药物结合使用。例如，本发明的药物组合物可以与下列药物结合使用以防治高血脂症：胆固醇合成抑制剂，例如HMG-CoA还原酶抑制剂；胆固醇吸收抑制剂，如依折麦布；降低甘油三酯药物，如苯扎贝特或非诺贝特；抗高血压药，如ACE抑制剂、血管紧张素受体阻断剂、钙拮抗剂或β阻断剂；减肥胖药，如中枢减食欲药、酯酶抑制剂、CB1R拮抗剂或DGAT抑制剂；抗糖尿病药物，如胰岛素增敏剂、D2激动剂、磺酰基脲、二甲双胍、α-葡萄糖苷酶抑制剂、SGLT抑制剂或DPP-IV抑制剂，或者其它降胆固醇剂，如ACAT抑制剂。

附图说明

图1是齐墩果酸/胆碱/异丙醇2∶1∶1共晶A的粉末X射线衍射图；

图2是齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B的粉末X射线衍射图；

图3是齐墩果酸/胆碱/异丙醇2∶1∶1共晶A的DSC图；

图4是齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B的DSC图；

图5是齐墩果酸/胆碱/异丙醇2∶1∶1共晶A的TGA图；

图6是齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B的TGA图；

图7是齐墩果酸/胆碱/异丙醇2∶1∶1共晶A的红外光谱图；

图8是齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B的红外光谱图；

图9是齐墩果酸/胆碱/异丙醇2∶1∶1共晶A的¹H-NMR图谱；

图10是齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B的¹H-NMR图谱；

图11是齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B与齐墩果酸在人工模拟胃液中的溶解度测试结果；

图12是齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B与齐墩果酸在人工模拟肠液中的溶解度测试结果。

具体实施方式

下面通过实施例具体说明本发明的内容。在本发明中，以下所述的实施例是为了更好的阐述本发明，而不是用来限制本发明的范围。

实施例1

齐墩果酸/胆碱/异丙醇2∶1∶1共晶A的制备

将0.54g的胆碱水溶液(49％，胆碱含量0.27g)溶于50mL的异丙醇中，溶液呈浅黄色。在加热(80℃)条件下，加入2.0g的齐墩果酸，搅拌至溶液澄清，继续搅拌约0.5h。停止加热，慢慢冷却至室温，静置。析出白色针状结晶，抽滤，干燥后得1.58g白色固体，即为齐墩果酸/胆碱/异丙醇2∶1∶1共晶A：¹H NMR(DMSO，300MHz)δ5.07(s，2H)，3.84(m，2H)，3.77(m，1H)，3.41(m，2H)，3.12(s，9H)，2.99(m，2H)，2.78(m，2H)，1.70-1.85(m，8H)，1.20-1.60 (m，27H)，1.00-1.10(m，16H)，0.80-0.95(m，27H)，0.65-0.75(m，14H).

实施例2

齐墩果酸/胆碱/异丙醇2∶1∶1共晶A的制备

在加热(80℃)条件下，将1.20g齐墩果酸溶于85mL乙酸乙酯中，溶液澄清。在搅拌下慢慢滴加0.65g的胆碱水溶液(49％，胆碱含量0.32g)，反应液逐渐变浑浊，最终形成乳白色悬着液。停止加热，冷却至室温，抽滤得白色固体。将所得白色固体用异丙醇重结晶得齐墩果酸/胆碱/异丙醇2∶1∶1共晶A(1.25g)。

实施例3

齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B的制备

将实施例1中制得的齐墩果酸/胆碱/异丙醇2∶1∶1共晶A(1.52g)在常压下加热(150℃)烘干1小时，即得齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B(1.40g)：¹H NMR(DMSO，300MHz)δ5.05(s，2H)，3.82(m，2H)，3.40(m，2H)，3.10(s，9H)，2.98(m，2H)，2.78(m，2H)，1.70-1.85(m，8H)，1.20-1.60(m，27H)，1.00-1.10(m，9H)，0.80-0.95(m，26H)，0.65-0.75(m，13H).

实施例4

齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B的制备

在室温下，将实施例1中制得的齐墩果酸/胆碱/异丙醇2∶1∶1共晶A(1.00g)在乙酸乙酯(50mL)中打浆半小时，抽滤得齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B(0.82g)。

实施例5

齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B在人工模拟胃液中的溶解度测定

对实施例3中制备的齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B进行溶解度测定，检测步骤及条件具体如下：分别精密称取齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B和齐墩果酸各20mg于不同小瓶中，分别加入人工模拟胃液，平衡至溶解度不再发生变化，HPLC测定药物浓度，检测结果见图11。从图11中可见：齐墩果酸在人工模拟胃液中的溶解度为0.06809mg/mL；齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B在人工模拟胃液中的溶解度为0.7615mg/mL。由此可见，齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B在人工模拟胃液中的溶解度要显著优于齐墩果酸自身。

实施例6

齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B在人工模拟肠液中的溶解度测定

对实施例3中制备的齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B进行溶解度测定，检测步骤及条件具体如下：分别精密称取齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B和齐墩果酸各20mg于不同小瓶中，分别加入人工模拟肠液，平衡至溶解度不再发生变化，HPLC测定药物浓度，检测结果见图12。从图12中可见：齐墩果酸在人工模拟肠液中的溶解度为0.01692mg/mL；齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B在人工模拟肠液中的溶解度为0.1814mg/mL。由此可见，齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B在人工模拟肠液中的溶解度要显著优于齐墩果酸自身。

实施例7

齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B对豚鼠血脂水平的影响

方法：对雄性Hartley豚鼠(南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供，普通级，7-8周龄，体重240g-260g，合格证号：SCXK苏2012-0008)适应性喂养1周后，随机分成2组：分别为10只喂以标准鼠饲料的正常对照组和30只喂以高脂饲料的模型组。高脂饲料配方为：1％胆固醇，10％猪油与89％普通饲料均匀混合组成。模型组每日给予高脂饲料喂养，正常对照组不施加干预因素。高脂造模4周后，模型组的豚鼠随机分为高脂模型组(10只)(喂以溶媒)、齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B组(10只)和齐墩果酸组(10只)，加上正常对照组共为4组。其中齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B组喂以齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B(20mg/kg/d)；齐墩果酸组喂以齐墩果酸(20mg/kg/d)。所有受试药物的溶媒为0.5％CMC钠溶液。口服给药2周，每天1次。在最后一次给药前天禁食，最后一天眼眶取血，收集血液，离心取血清，用于血清脂质水平的测定。参照试剂盒说明书于全自动生化分析仪上测定血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平。TC采用CHOD-PAP法，TG采用GPO-PAP法，LDL-C和HDL-C采用直接酶法测定。

结果：受试药物对豚鼠高脂模型血脂水平的影响结果见表1。

表1、受试药物对豚鼠高脂模型血脂水平的影响

*P＜0.05，**P＜0.01与正常对照组相比(t检验)；

#P＜0.05，##P＜0.01与模型组相比(t检验)。

上述活性测试结果显示：在豚鼠高脂模型上，同等剂量的齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B的降血脂(TG、TC和LDL-C)活性显著优于齐墩果酸；两个化合物对HDL-C水平都无影响。

以上溶解度实验和药效学研究结果提示：本发明的齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B比齐墩果酸本身更适用于制备预防或治疗血脂异常相关疾病的药物。

实施例8

药用组合物的制备：片剂

将实施例3中制备的齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B(1g)与乳糖(23g)和微晶纤维素(5.7g)用混合机混合。用滚轴压紧机将所得混合物压制成型，值得薄片状压制物料。用锤式粉碎机将所述薄片状压制物料研磨成粉，使所得粉状物料通过20目筛过筛。将一份轻质二氧化硅(0.3g)和硬脂酸镁(0.3g)加入到已过筛的物料中，并混合。所得混合产物用制片机压片，制备片剂。

实施例9

药用组合物的制备：明胶胶囊剂

将实施例3中制备的齐墩果酸/胆碱2∶1共晶B(1g)与微晶纤维素(0.35g)和乳糖(0.15g)用水制粒，然后将该颗粒与铰链羧甲基纤维素钠(0.04g)和硬脂酸镁(0.01g)混合。所得混合产物填充明胶胶囊，制备明胶胶囊剂。(本发明中所用的明胶胶囊由中国苏州胶囊有限公司生产，该明胶胶囊符合药用标准)。

Claims

1.齐墩果酸与胆碱的共晶B，其特征在于，共晶B是由齐墩果酸与胆碱按照2∶1的比例结合形成，且使用Cu-Kα辐射，在其X-射线衍射图中，以度表示的2θ在13.2±0.2和15.1±0.2有衍射峰。

2.如权利要求1所述的齐墩果酸与胆碱的共晶B，使用Cu-Ka辐射，在其X-射线粉末衍射图中，以度表示的2θ还在7.3±0.2、9.8±0.2、12.1±0.2、14.1±0.2、15.9±0.2、19.8±0.2、21.0±0.2有一个或多个衍射峰。

3.如权利要求1所述的齐墩果酸与胆碱的共晶B，其特征在于：(1)具有基本上与图2所示的相同的X-射线粉末衍射图；(2)具有基本上与图8所示的相同的红外吸收光谱扫描图；(3)具有基本上与图4所示的相同的差示扫描量热分析(DSC)图。

4.权利要求1中的齐墩果酸与胆碱的共晶B的制备方法，其特征在于，将齐墩果酸、胆碱及异丙醇按照2∶1∶1的比例结合形成的共晶A在常压或减压下加热除去异丙醇，即得齐墩果酸与胆碱的共晶B。

5.一种预防或治疗高血脂症、动脉粥样硬化、冠心病、心肌梗塞、糖尿病、肿瘤、肝炎、肝硬化、老年痴呆症、脑缺血、中风、肾病或类风湿性关节炎的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中含有治疗有效剂量的如权利要求1、2或3所述的齐墩果酸与胆碱的共晶B作为活性成分和药学可接受的载体。