CN105853399B - 百秋李醇在制备治疗慢性胃炎的药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了百秋李醇在制备治疗慢性胃炎的药物中的应用。具体是百秋李醇在制备基于一氧化氮通路治疗各种类型慢性胃炎的药物中的应用。所述药物由百秋李醇和医学上可接受的辅料组成,其中每日用制剂量中含百秋李醇1~1000mg或百秋李油10%~100%。本发明所述的百秋李醇具有各种慢性胃炎的作用,其抗慢性胃炎的机制与抑制一氧化氮合酶活性及一氧化氮产生有关。因此,百秋李醇有望成为通过抑制一氧化氮合酶活性及一氧化氮产生,从而起到治疗各种慢性胃炎作用的药物,在慢性胃炎的药物开发方面具有优异的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域,涉及百秋李醇在医药技术领域的新用途。更具体地,涉及百秋李醇在制备治疗慢性胃炎的药物中的应用。
背景技术
慢性胃炎系指不同病因引起的各种慢性胃黏膜炎性病变,是一种常见病,其发病率在各种胃病中居首位。临床表现上,慢性胃炎缺乏特异性症状,症状的轻重与胃黏膜的病变程度并非一致。大多数病人常无症状或有程度不同的消化不良症状如上腹隐痛、食欲减退、餐后饱胀、反酸等。慢性萎缩性胃炎患者可有贫血、消瘦、舌炎、腹泻等,个别病人伴黏膜糜烂者上腹痛较明显,并可有出血,如呕血、黑便。症状常常反复发作,无规律性腹痛,疼痛经常出现于进食过程中或餐后,多数位于上腹部、脐周、部分患者部位不固定,轻者间歇性隐痛或钝痛、严重者为剧烈绞痛。目前,治疗方法主要是消除病因和药物治疗。(1)消除病因:祛除各种可能致病的因素,如避免进食对胃黏膜有强刺激的饮食及药品,戒烟忌酒;注意饮食卫生,防止暴饮暴食。积极治疗口、鼻、咽部的慢性疾患。加强锻炼提高身体素质;该方式是预防式的,患者难以坚持,而且治愈效果差;(2)药物治疗:疼痛发作时可用阿托品、普鲁本辛、颠茄合剂等。胃酸增高可用PPI质子泵抑制剂如雷贝拉唑、兰索拉唑、奥美拉唑等,症状较轻者可用H2受体阻滞剂如甲氰咪胍、雷尼替丁、氢氧化铝胺等;胃酸缺乏或无酸者可给予1%稀盐酸或胃蛋白酶合剂,伴有消化不良者可加用胰酶片、多酶片等助消化药;胃黏膜活检发现幽门螺杆菌者加服抗生素治疗;胆汁反流明显者可用胃复安和吗叮啉以增强胃窦部蠕动,减少胆汁反流。铝碳酸镁片、消胆胺、硫糖铝可与胆汁酸结合、减轻症状;但是总体效果不甚理想,用药繁杂、时间长。
目前,临床上使用的抗炎药物如糖皮质激素、非甾体类抗炎药等副作用均比较明显,而现在对于胃炎的治疗多是针对胃炎所引起的病症如疼痛、胃酸过多等进行对症治疗,尚无针对于胃炎进行对因治疗的药物。因此,研发具有治疗胃炎作用且副作用少的药物,具有重要的现实意义。
百秋李醇又名广藿香醇,虎尾草醇,是一种三环倍半萜类化合物,其化学名为[1R(1α,4β,4Aα,6β)]-八氢-4,8A,9,9-四甲基-1,6-亚甲基萘-1(2H)-醇,分子式为C15H26O,分子量为222.37,结构式如下结构式I所示:
式(I)
其外观为六角偏方四分面像晶体,不溶于水,可溶于乙醇和***和常用有机溶剂。
公开号为WO2004110153A1的欧洲专利申请揭示了百秋李醇及其衍生物可用于抑制真菌的无性繁殖和降低微生物的粘防作用,在伤口的清洁和愈合方面有功效;公开号为CN101194899A的中国专利申请公开了百秋李醇在制备防治老年性痴呆症的药物中的用途;CN101485647A的中国专利申请披露了百秋李醇对甲1型流感病毒、乙型流感病毒及禽流感病毒H5N1具有明显的抑制及杀灭作用;CN102920686A的中国专利申请披露了百秋李醇对柯萨奇病毒的抑制作用;CN102895218A的中国专利申请披露了百秋李醇对腺病毒的抑制作用;CN102349884A的中国专利公开了百秋李醇可选择性地抑制幽门螺旋杆菌,同时不伤及益生菌,可保持人体肠道菌群的生态平衡; CN103127038A的中国专利申请公开了百秋李醇在制备治疗细菌感染性疾病的药物中的用途;CN104306362A的中国专利申请公开了百秋李醇制备治疗胃动力障碍性疾病的药物中的应用;CN104324018A的中国专利申请公开了百秋李醇在制备男性性功能障碍药物或保健品中的应用。
目前,未见有百秋李醇在治疗慢性胃炎方面的相关研究和报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有慢性胃炎治疗药物的不足和百秋李醇应用不足的缺陷,提供百秋李醇基于一氧化氮通路,在治疗胃部各种炎症包括无症状胃炎、慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、疣状胃炎、肥厚性胃炎、慢性糜烂性胃炎、以及胃炎所导致的胃黏膜萎缩、肠上皮化生、胃不典型增生等方面的应用。
本发明的目的是提供百秋李醇在制备治疗慢性胃炎的药物中的应用
本发明上述目的通过以下技术方案实现:
本发明公开了百秋李醇在制备治疗慢性胃炎的药物中的新用途。上述新用途实际上是百秋李醇基于一氧化氮通路,在治疗胃部各种慢性炎症方面的应用。
进一步地,上述药物是指能够减少胃部一氧化氮含量的药物。
另外,上述药物是指能够抑制一氧化氮诱导酶基因表达的药物,以及能够抑制一氧化氮诱导酶蛋白表达的药物。
进一步地,所述一氧化氮诱导酶是指内皮型一氧化氮合酶eNOS、诱导型一氧化氮合酶iNOS和/或神经型一氧化氮合酶nNOS。
优选地,上述慢性胃炎包括无症状胃炎、慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、疣状胃炎、肥厚性胃炎、慢性糜烂性胃炎、以及胃炎所导致的胃黏膜萎缩、肠上皮化生、胃异常增生(胃不典型增生)或胃癌等。
另外,所述慢性胃炎还包括与慢性胃炎相关的症状,包括口臭、呕吐、厌食、嗳气、恶心、腹胀、腹部不适、腹痛、反酸、消化不良、黑便、胃肠道菌群失调、中性粒细胞浸润、嗜酸性粒细胞浸润、淋巴滤泡。
一种由百秋李醇和医学上可接受的辅料组成的治疗慢性胃炎的药物,也在本发明的保护范围之内。
优选地,所述药物的每日用制剂量中含百秋李醇1~1000mg。
更优选地,所述药物的每日用制剂量中含百秋李醇10~1000mg。
另外,上述药物的剂型可以是医学上认可的任何一种剂型。
优选地,所述药物的剂型可以是常见的口服制剂,如片剂、胶囊、滴丸、颗粒剂、口服溶液剂、悬混剂、胃悬浮剂或胃滞留剂等。
另外,由于百秋李醇的化学结构复杂,合成工艺冗长而复杂,因此目前它主要来源于百秋李油,上述的百秋李醇也可用百秋李油代替。百秋李油为唇形科刺蕊草属植物百秋李的挥发油,它具有促进胃液分泌,增强消化功能,解痉,抗皮肤真菌和癣菌的作用。目前制备百秋李醇的主要生产工艺是先从百秋李中提取百秋李油,再从百秋李油中分离出百秋李醇,具体分离方法可参照公开号为CN101691323 B的专利所公开的方法实施。按照公开号CN101691323 B专利制备百秋李醇的过程中会产生百秋李油的中间产物,这些产物中的百秋李醇含量可高达70%以上,具有与百秋李醇相同的药效活性。
即上述的治疗慢性胃炎的药物也可以由含有百秋李醇的百秋李油和医学上可接受的辅料组成,其中每日用制剂量中百秋李油的含量为10%~100%。
慢性胃炎是常见的胃部疾病之一,因为慢性胃炎对胃癌的发生有一定的诱导作用,因此被WHO 认定为胃癌前疾病或癌前状态。胃癌的发生规律已经被世界公认,从正常的胃黏膜发展到慢性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、胃肠异常增生,最后发展至胃癌。对慢性胃炎的及时治疗可以有效抑制病程的发展。一氧化氮(Nitric Oxide, NO)是由NOS 催化精氨酸后生成的。正常生理状态下,NO主要由内皮型一氧化氮合酶及神经型一氧化氮合酶诱导产生,主要用于调控胃部血流量和粘液量,起到保护胃的作用。而在病理状态下,诱导型一氧化氮合酶大量产生,进而产生了过量的NO,此时过量生成的NO 可直接引起细胞毒作用或通过与氧自由基氧化生成毒性更大的过氧硝基阴离子和羟自由基,从而加剧炎症的反应。本发明研究发现,百秋李醇具有极强的抑制一氧化氮合酶的作用,通过抑制一氧化氮合酶活性,从而抑制NO的产生可以起到治疗胃炎的作用,因此,百秋李醇具有治疗各种原因导致慢性胃炎的能力。
本发明具有以下有益效果:
本发明提供了百秋李醇的一种在医药技术领域的新用途,即在治疗各种慢性胃炎中的应用。所述百秋李醇具有各种慢性胃炎的作用,其抗慢性胃炎的机制与抑制一氧化氮合酶活性及一氧化氮产生有关。因此,百秋李醇有望成为通过抑制一氧化氮合酶活性及一氧化氮产生,从而起到治疗各种慢性胃炎作用的药物,在慢性胃炎的药物开发方面具有优异的应用前景。
附图说明
图1为百秋李醇对胃部Enos、Nnos、Inos基因表达的影响。
图2为百秋李醇对胃部Enos、Nnos、Inos蛋白表达的影响。
图3为百秋李醇对胃部一氧化氮含量的影响。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明,但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明,本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明,本发明所用试剂和材料均为市购。
实施例1 百秋李醇对一氧化氮诱导酶基因表达的影响
1、材料和方法
(1)材料
氯仿(广州试剂总厂);异丙醇(广州试剂总厂);DEPC(Sigma);Super Real PreMix×Plus(SYBR Green) (TIANGEN BIOTECH CO., LTD);Trizol(Takara);Fast Quant RTKit(With gDNase) (TIANGEN BIOTECH(BEIJING)CO.,LTD);电动匀浆器(TIANGEN BIOTECHCO., LTD);冷冻离心机(Eppendorff)。
(2)药物
百秋李醇(HPLC>98%)用泊洛沙姆407配制药物。按照药物:泊洛沙姆407=1:5比例混合后,70℃水浴熔融,磁力搅拌充分混合药物,-20℃放置24小时后,使用蒸馏水配置成所需浓度。
(3)方法
1)24只SD大鼠,雌雄各半,250~300g,随机分为对照组,百秋李醇低、中、高剂量组,每组6只。空白组灌胃泊洛沙姆、给药组按照0.1mg/kg,1 mg/kg,10 mg/kg剂量灌胃百秋李醇,共7天。末次给药后1h,处死大鼠,取胃部组织使用生理盐水冲洗干净后,取100mg放入1ml TRIZOL中。按照说明书方法提取RNA,逆转录后使用Q-PCR法检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、神经型一氧化氮合酶(nNOS)表达的变化。
2)24只SD大鼠,雌雄各半,250~300g,随机分为对照组,百秋李醇低、中、高剂量组,每组6只。空白组灌胃泊洛沙姆、给药组按照0.1mg/kg,1 mg/kg,10 mg/kg剂量灌胃百秋李醇,共7天。末次给药后1h,灌胃无水乙醇1ml,1h后处死大鼠,取胃部组织使用生理盐水冲洗干净后,取100mg放入1ml TRIZOL中。按照说明书方法提取RNA,逆转录后使用Q-PCR法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达变化。引物序列见表1,扩增体系见表2,扩增条件见表3。
表1 引物序列
表2 扩增体系
表3 扩增条件
2、结果
结果如附图1所示,百秋李醇在0.1mg/kg和1mg/kg可以显著性减少正常大鼠胃部Enos的基因表达;百秋李醇在0.1mg/kg和10mg/kg可以显著性减少酒精炎症模型大鼠胃部Inos的基因表达。
实施例2 百秋李醇对一氧化氮诱导酶蛋白表达的影响
1、材料和方法
(1)材料
组织蛋白裂解液(碧云天);PMSF(碧云天);PVDF膜(Milipore);Protein Marker(Thermo);冷冻离心机(Eppendorff);垂直电泳槽、电源(六一)。
(2)药物
百秋李醇(HPLC>98%)用泊洛沙姆407配制药物。按照药物:泊洛沙姆407=1:5比例混合后,70℃水浴熔融,磁力搅拌充分混合药物,-20℃放置24小时后,使用蒸馏水配置成所需浓度。
(3)方法
1)24只SD大鼠,雌雄各半,250~300g,随机分为对照组,百秋李醇低、中、高剂量组,每组6只。空白组灌胃泊洛沙姆、给药组按照0.1mg/kg,1 mg/kg,10 mg/kg剂量灌胃百秋李醇,共7天。末次给药后1h,处死大鼠,取胃部组织使用生理盐水冲洗干净后,取100mg放入组织裂解液中,匀浆提取总蛋白,Western Blot法检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、神经型一氧化氮合酶(nNOS)表达的变化。
具体方法而言,提取的总蛋白加入适量的生理盐水稀释使得最后的总蛋白上样量为100μg,使用7.5%聚丙烯酰胺凝胶电泳,30min 80v电泳置平行,后使用90min 120v电泳。90min 200mA横流转膜置PVDF膜上,5%脱脂奶粉(含有0.05%吐温)封闭1小时,TBST洗膜3次,每次5min。使用相应的一抗4℃孵育(eNOS及nNOS均为1:500使用脱脂奶粉稀释)过夜。第二天洗膜后,采用二抗(1:1000)室温孵育2小时。洗膜后,ECL曝光记录数据。
2)24只SD大鼠,雌雄各半,250~300g,随机分为对照组,百秋李醇低、中、高剂量组,每组6只。空白组灌胃泊洛沙姆、给药组按照0.1mg/kg,1 mg/kg,10 mg/kg剂量灌胃百秋李醇,共7天。末次给药后1h,灌胃无水乙醇1ml,1h后处死大鼠,取胃部组织使用生理盐水冲洗干净后,取100mg放入组织裂解液中,匀浆提取总蛋白,Western Blot法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达变化。
具体方法而言,提取的总蛋白加入适量的生理盐水稀释使得最后的总蛋白上样量为40μg,使用8%聚丙烯酰胺凝胶电泳,30min 80v电泳置平行,后使用90min 120v电泳。90min 350mA横流转膜置PVDF膜上,5%脱脂奶粉(含有0.05%吐温)封闭1小时,TBST洗膜3次,每次10min。使用相应的一抗4℃孵育(iNOS为1:200使用脱脂奶粉稀释)过夜。第二天洗膜后,采用二抗(1:5000)室温孵育1小时。洗膜后,ECL曝光记录数据。
2、结果
结果如附图2所示,百秋李醇在0.1mg/kg,1mg/kg和10mg/kg可以显著性减少正常大鼠胃部Enos的蛋白表达;百秋李醇在10mg/kg可以显著性减少酒精炎症模型大鼠胃部Inos的蛋白表达。
实施例3 百秋李醇对胃部一氧化氮含量的影响
1、材料与方法
(1)材料
一氧化氮测试试剂盒(碧云天);PMSF(碧云天);组织蛋白提取液(碧云天);BCA蛋白定量试剂盒(碧云天);冷冻离心机(Eppendorff);酶标仪(Thermo)。
(2)药物
百秋李醇(HPLC>98%)用泊洛沙姆407配制药物。按照药物:泊洛沙姆407=1:5比例混合后,70℃水浴熔融,磁力搅拌充分混合药物,-20℃放置24小时后,使用蒸馏水配置成所需浓度。
(3)方法
24只SD大鼠,雌雄各半,250-300g,随机分为对照组,百秋李醇低、中、高剂量组,每组6只。空白组灌胃泊洛沙姆、给药组按照10mg/kg,20 mg/kg,40 mg/kg剂量灌胃百秋李醇,共7天。末次给药后1h,处死大鼠,取胃部组织使用生理盐水冲洗干净后,取100mg放入组织裂解液中,匀浆提取总蛋白,BCA法测定提取液蛋白浓度,试剂盒法测定提取液中NO含量。
2、结果:
结果如附图3所示,百秋李醇在10mg/kg,20 mg/kg和40 mg/kg可以显著性减少正常大鼠胃部NO的含量。
实施例4 片剂
取百秋李醇为原料药,加入医学上可接受的辅料组成,制备成片剂。口服,其中每日用制剂量中含百秋李醇1~1000 mg。用于治疗慢性浅表性胃炎。
实施例5 片剂
取百秋李醇为原料药,加入医学上可接受的辅料组成,制备成片剂,百秋李醇含量为0.1~100 mg/片。口服,每日1~3 次,每次1~3片。用于治疗慢性萎缩性胃炎。
实施例6 胶囊
取百秋李醇为原料药,加入医学上可接受的辅料组成,制备成胶囊。口服,其中每日用制剂量中含百秋李醇0.1~1000 mg。用于治疗慢性萎缩性胃炎。
实施例7 胶囊
取百秋李醇为原料药,加入医学上可接受的辅料组成,制备成胶囊,百秋李醇含量为0.1~100 mg/粒。口服,每日1~3次,每次1~3粒。用于治疗慢性浅表性胃炎。
实施例8 滴丸
取百秋李醇为原料药,加入医学上可接受的辅料组成,制备成滴丸。口服,其中每日用制剂量中含百秋李醇0.1~1000 mg。用于治疗慢性萎缩性胃炎。
实施例9 滴丸
取百秋李醇为原料药,加入医学上可接受的辅料组成,制备成滴丸,百秋李醇含量为0.1~100 mg/粒。口服,每日1~3次,每次1~3粒。用于治疗慢性浅表性胃炎。
实施例10 颗粒剂
取百秋李醇为原料药,加入医学上可接受的辅料组成,制备成颗粒剂。口服,其中每日用制剂量中含百秋李醇0.1~1000 mg。用于治疗慢性胃炎所导致的胃黏膜萎缩、肠上皮化生、胃不典型增生等。
实施例11 颗粒剂
取百秋李醇为原料药,加入医学上可接受的辅料组成,制备成颗粒剂,百秋李醇含量为0.1~100 mg/袋。口服,每日1~3次,每次1~3袋。用于治疗慢性浅表性胃炎。
实施例12 口服溶液剂
取百秋李醇为原料药,加入医学上可接受的辅料组成,制备成口服溶液剂。口服,其中每日用制剂量中含百秋李醇0.1~1000 mg。用于治疗慢性糜烂性胃炎。
实施例13 口服溶液剂
取百秋李醇为原料药,加入医学上可接受的辅料组成,制备成口服溶液剂,百秋李醇含量为0.1~100 mg/瓶。口服,每日1~3次,每次1~3瓶。用于治疗慢性浅表性胃炎。
实施例14 胃悬浮剂、胃滞留剂
取百秋李醇为原料药,加入医学上可接受的辅料组成,制备成胃悬浮剂、胃滞留剂。口服,其中每日用制剂量中含百秋李醇0.1~1000 mg。用于治疗慢性糜烂性胃炎。
Claims (5)
1.百秋李醇在制备治疗由酒精导致的慢性胃炎的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述应用,其特征在于,所述药物是指能够减少胃部一氧化氮含量的药物。
3.根据权利要求1所述应用,其特征在于,所述药物是指能够抑制一氧化氮诱导酶基因表达的药物。
4.根据权利要求1所述应用,其特征在于,所述药物是指能够抑制一氧化氮诱导酶蛋白表达的药物。
5.根据权利要求3或4所述应用,其特征在于,所述一氧化氮诱导酶是指内皮型一氧化氮合酶eNOS、诱导型一氧化氮合酶iNOS和/或神经型一氧化氮合酶nNOS。
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Legal Events
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PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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