CN105815112A - 一种培养蘑菇的方法及培育出的蘑菇、含有该蘑菇的药物组合物 - Google Patents

一种培养蘑菇的方法及培育出的蘑菇、含有该蘑菇的药物组合物 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种培养蘑菇的方法，该方法包括如下步骤，(1)斜面试管培养；(2)原种培养；(3)菌菇的栽培；步骤(1)‑(3)中所用的水均为低氘水，本发明的优点在于，蘑菇为药食两用菌，可以有效提高机体免疫力，使机体非特异性免疫功能、体液免疫功能和细胞免疫功能全面提高，还能促进肿瘤坏死因子的产生，加快癌细胞凋亡。2.动物实验结果表明：本发明所得的产品安全无毒；3、经药理实验证实，所述产品的抑制肿瘤生长的效果优于普通香菇子实体提取物。3.本发明的生产方法工艺简单，适合于规模化生产，具有较高的经济和社会效益。

Description

一种培养蘑菇的方法及培育出的蘑菇、含有该蘑菇的药物组合物
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体为一种培养基、采用该培养基培育的生物菌及其生物菌药物组合物。
背景技术
科学研究发现，蘑菇具有良好的抗癌效果。特别是在癌症在初起阶段，坚持吃蘑菇，可以抑制癌症发展，甚至可以使其消失。这是因为蘑菇不但含多糖，而且还含有干扰素的诱导剂——双链核糖核酸，能够进入癌细胞抑制其增殖。在各种癌症手术后，持续食用蘑菇，还可以防止癌细胞的转移。另外，蘑菇中含有一种“β-葡萄糖苷酶”的物质，可加强机体的抗癌作用。日本的一项实验证明，蘑菇中多糖体的抗癌率高达80％-95％，对多种恶性肿瘤如白血病、食管癌、胃癌、肠癌、肺癌、肝癌等都有显著疗效，那么提高香菇中多糖的含量则可进一步提升抗癌的作用，且可将多糖提取出来加以利用，制成抗癌的药物，而现有技术中培育香菇等生物菌的培养基大多采用马铃薯粉、葡萄糖、黄豆粉、琼脂等原材料，蘑菇中多糖的含量得不到提高，因此该瓶颈制约着将香菇用于抗癌组合物的良好发展前景。
发明内容
本发明为了解决上述技术问题，本发明提供一种培养蘑菇的方法及培育出的蘑菇、及其含有该蘑菇的药物组合物，旨在通过改良培养基，从而得到多糖含量高的蘑菇，进而将蘑菇扩大生产规模，用于抗癌药物，具有较高的经济和社会效益。
为了达到上述技术效果，本发明包括以下技术方案：本发明提供的一种培养蘑菇的方法，包括如下步骤，(1)斜面试管培养；(2)原种培养；(3)菌菇的栽培；步骤(1)-(3)中所用的水均为低氘水。
众所周知，自然界里存在的水一般由2个氢原子和1个氧原子组成(H20)，但氢原子有质量不同的3个同位素。质量为1的是氢(H)；质量为2的是重氢(D)，也称氘；质量为3的是超重氢(T)，也称氚。在自然界的水中，氘的含量约为150ppm。通常，我们把氘含量低于150ppm的水称为低氘水。
氘是一种可以导致生物体衰老、病变、癌变乃至死亡的有害物质。氘比氢多了一个中子，质量为2，因此，化学结合力强。早在1974年，氘就被认为是一种导致衰老的因素。一个重要的理论认为：氘可以改变参与反应的酶分子的形状。Griffiths在《重氢在衰老和其它生物机制与过程的引发与发展中的可能作用》一文中提出了这个概念。实验表明，低氘水可以提高酶的活性，增加酶反应速度。当人体饮用低氘水，提高NK细胞活性值、降低肿瘤指标值，抑制劣变细胞及癌细胞增殖。
我们研究发现，普通培养基生产的香菇中多糖的含量为28.40±0.24mg/kg，当我们用低氘水配制的培养基培养香菇时，能明显增加香菇中生物活性多糖的的含量，同时该法得到的香菇氘含量低，被人体食用后有助于降低人体内氘含量。
进一步的，步骤(1)包括选七八分熟的子实体去菌柄基部，在无菌环境中，用75％的酒精擦拭表面消毒，用无菌镊子在菌柄与菌盖之间切下0.1-0.2cm3的小块放在试管斜面培养基上，20-30℃恒温培养5-15天，直至试管斜面长满绒毛状菌丝。
进一步的，步骤(2)包括将斜面试管培养得到的菌种接种到原种培养基中，放入20-30℃恒温培养箱中培养15-45天，直至原种白色菌丝长满培养基。
进一步的，骤(3)包括将栽培原料混合均匀后，加入低氘水，将培养料水分调至含水量为60-70％，拌匀装入塑料袋中灭菌，向培养基接入步骤(2)得到的原种，放入培养室中培养，温度保持在5-35℃，空气湿度保持在80％-95％，培养10-100天，直到子实体长出。
进一步的，步骤(1)斜面试管中培养基中含有80-120g的马铃薯、8-10g的葡萄糖、0.5-1g的过磷酸钙，0.3-0.4g的硫酸镁，8-10g的琼脂,低氘水450-500ml，并且培养基的pH为5-9。
进一步的，步骤(2)中，原种培养基包括180-200g木屑、40-50g麦麸、2-3g蔗糖、2-3g石膏，加低氘水至培养基含水量达到60％-70％，并且培养基的pH为5-9。
进一步的，步骤(3)中栽培的培养基中含有75-80％木屑、18-22％麦麸、1-2％的蔗糖、1-2％的石膏，加低氘水至培养基含水量至60％-70％，以上百分数为各成分在培养基中质量百分比。
进一步的，所述低氘水中氘的含量为10-137ppm。
进一步的，所述蘑菇品种为香菇、猴头菇、阿魏菇、灰树花、姬松茸、杏鲍菇和、草菇、平菇、金针菇、灵芝和木耳中任意一种。
本发明还公开了经上述方法培养得到的蘑菇，以及含有该蘑菇的药物组合物，其还包括药学可接受的载体。
采用上述技术方案，包括以下有益效果：香菇为药食两用菌，可以有效提高机体免疫力，使机体非特异性免疫功能、体液免疫功能和细胞免疫功能全面提高，还能促进肿瘤坏死因子的产生，加快癌细胞凋亡。2.动物实验结果表明：本发明所得的产品安全无毒；3、经药理实验证实，所述产品的抑制肿瘤生长的效果优于普通香菇子实体提取物。3.本发明的生产方法工艺简单，适合于规模化生产，具有较高的经济和社会效益。
具体实施方式
下面通过具体的实施例对本发明做进一步的详细描述。
实施例一：本发明公开的一种培养蘑菇的方法，包括如下步骤，(1)斜面试管培养；(2)原种培养；(3)菌菇的栽培；步骤(1)-(3)中所用的水均为低氘水。
众所周知，自然界里存在的水一般由2个氢原子和1个氧原子组成(H20)，但氢原子有质量不同的3个同位素。质量为1的是氢(H)；质量为2的是重氢(D)，也称氘；质量为3的是超重氢(T)，也称氚。在自然界的水中，氘的含量约为150ppm。通常，我们把氘含量低于150ppm的水称为低氘水。
氘是一种可以导致生物体衰老、病变、癌变乃至死亡的有害物质，我们在培养蘑菇时，凡是培养步骤中所需用水都采用低氘水，普通培养基生产的香菇中多糖的含量为28.40±0.24mg/kg，当我们用低氘水配制的培养基培养香菇时，可达到39.23±0.24mg/kg，能明显增加香菇中生物活性多糖的的含量，同时该法得到的香菇氘含量低，被人体食用后有助于降低人体内氘含量。多糖含量越高，越有助于提高防癌、抗癌的效果。
实施例二：本发明提供的一种培养蘑菇的方法，包括如下步骤，(1)斜面试管培养：选七八分熟的子实体去菌柄基部，在无菌环境中，用75％的酒精擦拭表面消毒，用无菌镊子在菌柄与菌盖之间切下0.1-0.2cm3的小块放在试管斜面培养基上，20-30℃恒温培养5-15天，直至试管斜面长满绒毛状菌丝；
(2)原种培养：将斜面试管培养得到的菌种接种到原种培养基中，放入20-30℃恒温培养箱中培养15-45天，直至原种白色菌丝长满培养基；
(3)菌菇的栽培将栽培原料混合均匀后，加入低氘水，将培养料水分调至含水量为60-70％，拌匀装入塑料袋中灭菌，向培养基接入步骤(2)得到的原种，放入培养室中培养，温度保持在5-35℃，空气湿度保持在80％-95％，培养10-100天，直到子实体长出
以上培养步骤中，涉及到培养基中的用水均为低氘水，低氘水中氘的含量为10ppm。
可采用上述培养方法的蘑菇为香菇、猴头菇、阿魏菇、灰树花、姬松茸、杏鲍菇和、草菇、平菇、金针菇、灵芝和木耳中任意一种，采用本发明方法培养得到的蘑菇多糖含量显著提升，因此抗肿瘤效果增强，可将培养得到的蘑菇子实体干燥、粉碎、加入药物可接受的载体，例如赋性剂、稳定剂等等制成药物规模化生产以及推广使用，下述试验说明了经本发明培养的蘑菇防抗肿瘤的作用。
实验分组及模型制备：将60只小鼠随机分为六组，设正常组、模型组、普通香菇对照组、本法制得香菇低、中、高剂量组(50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg)。除正常组外，在每组小鼠的右前肢腋部皮下接种浓度为5×105个/mL的H22细胞悬液0.2mL。在接种后第二天开始，每日一次，连续灌胃10天。正常组和模型组灌胃等容积的体积分数为0.9％的氯化钠溶液。末次给药后次日称取小鼠体重，摘眼球取血，处死小鼠。取瘤块称重，按下列公式计算抑瘤率。抑瘤率(％)＝(模型组平均瘤质量-用药组平均瘤质量)/模型组平均瘤质量×100。
结果：由表可知，本法制得的不同剂量香菇胶囊糖对荷瘤小鼠有一定的抑瘤作用(P<0.01)，并且优于普通香菇胶囊(P<0.01)。
表1 香菇多糖对体质量及瘤质量的影响
注：与模型组比较#P<0.05，##P<0.01.
实施例三：本发明提供的一种培养蘑菇的方法，包括如下步骤，(1)斜面试管培养：选七八分熟的子实体去菌柄基部，在无菌环境中，用75％的酒精擦拭表面消毒，用无菌镊子在菌柄与菌盖之间切下0.1-0.2cm3的小块放在试管斜面培养基上，20-30℃恒温培养5-15天，直至试管斜面长满绒毛状菌丝，此步骤用到的培养基中含有80g的马铃薯、8g的葡萄糖、0.5g的过磷酸钙，0.3g的硫酸镁，8g的琼脂,低氘水450ml，并且培养基的pH为5-9；
(2)原种培养：将斜面试管培养得到的菌种接种到原种培养基中，放入20-30℃恒温培养箱中培养15-45天，直至原种白色菌丝长满培养基，原种培养基包括180g木屑、40g麦麸、2g蔗糖、2g石膏，加低氘水至培养基含水量达到60％，并且培养基的pH为5-9。；
(3)菌菇的栽培将栽培原料混合均匀后，加入低氘水，将培养料水分调至含水量为60-70％，拌匀装入塑料袋中灭菌，向培养基接入步骤(2)得到的原种，放入培养室中培养，温度保持在5-35℃，空气湿度保持在80％-95％，培养10-100天，直到子实体长出，本步骤用到的培养基中含有75％木屑、18％麦麸、1％的蔗糖、1％的石膏，加低氘水至培养基含水量至60％，以上百分数为各成分在培养基中质量百分比。
以上培养步骤中，涉及到培养基中的用水均为低氘水，低氘水中氘的含量为137ppm，上述培养基中选择的成分与低氘水配合除了能够实现正常的培养目的外，还可以使培养出的蘑菇含糖量高，经检测该法得到的香菇多糖含量为35.38±0.42mg/kg。
可采用上述培养方法的蘑菇为香菇、猴头菇、阿魏菇、灰树花、姬松茸、杏鲍菇和、草菇、平菇、金针菇、灵芝和木耳中任意一种，采用本发明方法培养得到的蘑菇多糖含量显著提升，因此抗肿瘤效果增强，可将培养得到的蘑菇子实体干燥、粉碎、加入药物可接受的载体，例如赋性剂、稳定剂等等制成药物规模化生产以及推广使用，且采用该蘑菇制成的组合物无毒性，符合食品安全，见下述试验内容：
急性毒性试验：香菇菌粉急性毒性试验：设计剂量为20000mg/kg.b.wt.，称取样品20000mg加双蒸水至40mL配制成受试物。小鼠禁食过夜后，受试物分两次灌胃给予，每次灌胃容量为20mL/kg.b.wt,间隔4小时。观察期14天。试验证实香菇胶囊对动物体重无明显影响，经口给予动物后出现活动减少，第2天恢复。观察期内无动物死亡。本次试验最大耐受剂量为20000mg/kg，根据小鼠急性经口毒性分级标准，属安全无毒级。
实施例四：本发明提供的一种培养蘑菇的方法，包括如下步骤，(1)斜面试管培养：选七八分熟的子实体去菌柄基部，在无菌环境中，用75％的酒精擦拭表面消毒，用无菌镊子在菌柄与菌盖之间切下0.1-0.2cm3的小块放在试管斜面培养基上，20-30℃恒温培养5-15天，直至试管斜面长满绒毛状菌丝，此步骤用到的培养基中含有120g的马铃薯、10g的葡萄糖、1g的过磷酸钙，0.4g的硫酸镁，10g的琼脂,低氘水500ml，并且培养基的pH为5-9；
(2)原种培养：将斜面试管培养得到的菌种接种到原种培养基中，放入20-30℃恒温培养箱中培养15-45天，直至原种白色菌丝长满培养基，原种培养基包括200g木屑、50g麦麸、3g蔗糖、3g石膏，加低氘水至培养基含水量达到65％，并且培养基的pH为5-9。；
(3)菌菇的栽培将栽培原料混合均匀后，加入低氘水，将培养料水分调至含水量为60-70％，拌匀装入塑料袋中灭菌，向培养基接入步骤(2)得到的原种，放入培养室中培养，温度保持在5-35℃，空气湿度保持在80％-95％，培养10-100天，直到子实体长出，本步骤用到的培养基中含有80％木屑、22％麦麸、2％的蔗糖、2％的石膏，加低氘水至培养基含水量至65％，以上百分数为各成分在培养基中质量百分比。
以上培养步骤中，涉及到培养基中的用水均为低氘水，低氘水中氘的含量为100ppm，上述培养基中选择的成分与低氘水配合除了能够实现正常的培养目的外，还可以使培养出的蘑菇含糖量高，经检测该法得到的香菇多糖含量为33.25±0.52mg/k。
可采用上述培养方法的蘑菇为香菇、猴头菇、阿魏菇、灰树花、姬松茸、杏鲍菇和、草菇、平菇、金针菇、灵芝和木耳中任意一种，采用本发明方法培养得到的蘑菇多糖含量显著提升，因此抗肿瘤效果增强，可将培养得到的蘑菇子实体干燥、粉碎、加入药物可接受的载体，例如赋性剂、稳定剂等等制成药物规模化生产以及推广使用，且采用该蘑菇制成的组合物无毒性，符合食品安全，见下述试验内容：
急性毒性试验：香菇菌粉急性毒性试验：设计剂量为20000mg/kg.b.wt.，称取样品20000mg加双蒸水至40mL配制成受试物。小鼠禁食过夜后，受试物分两次灌胃给予，每次灌胃容量为20mL/kg.b.wt,间隔4小时。观察期14天。试验证实香菇胶囊对动物体重无明显影响，经口给予动物后出现活动减少，第2天恢复。观察期内无动物死亡。本次试验最大耐受剂量为20000mg/kg，根据小鼠急性经口毒性分级标准，属安全无毒级。
且由于多糖含量增加，本发明培育出的蘑菇抗肿瘤的效果也随之增强，见下述试验内容：
实验分组及模型制备：将60只小鼠随机分为六组，设正常组、模型组、普通香菇对照组、本法制得香菇低、中、高剂量组(50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg)。除正常组外，在每组小鼠的右前肢腋部皮下接种浓度为5×105个/mL的H22细胞悬液0.2mL。在接种后第二天开始，每日一次，连续灌胃10天。正常组和模型组灌胃等容积的体积分数为0.9％的氯化钠溶液。末次给药后次日称取小鼠体重，摘眼球取血，处死小鼠。取瘤块称重，按下列公式计算抑瘤率。抑瘤率(％)＝(模型组平均瘤质量-用药组平均瘤质量)/模型组平均瘤质量×100。
结果：由表可知，本法制得的不同剂量香菇胶囊糖对荷瘤小鼠有一定的抑瘤作用(P<0.01)，并且优于普通香菇胶囊(P<0.01)。
表1 香菇多糖对体质量及瘤质量的影响
注：与模型组比较#P<0.05，##P<0.01.
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种培养蘑菇的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤，(1)斜面试管培养；(2)原种培养；(3)菌菇的栽培；步骤(1)-(3)中所用的水均为低氘水。
2.根据权利要求1所述培养蘑菇的方法，其特征在于，步骤(1)包括选七八分熟的子实体去菌柄基部，在无菌环境中，用75％的酒精擦拭表面消毒，用无菌镊子在菌柄与菌盖之间切下0.1-0.2cm3的小块放在试管斜面培养基上，20-30℃恒温培养5-15天，直至试管斜面长满绒毛状菌丝。
3.根据权利要求1所述培养蘑菇的方法，其特征在于，步骤(2)包括将斜面试管培养得到的菌种接种到原种培养基中，放入20-30℃恒温培养箱中培养15-45天，直至原种白色菌丝长满培养基。
4.根据权利要求1所述培养蘑菇的方法，其特征在于，步骤(3)包括将栽培原料混合均匀后，加入低氘水，将培养料水分调至含水量为60-70％,拌匀装入塑料袋中灭菌，向灭菌后的培养基接入步骤(2)得到的原种，放入培养室中培养，温度保持在5-35℃，空气湿度保持在80％-95％，培养10-100天，直到子实体长出。
5.根据权利要求1所述培养蘑菇的方法，其特征在于，步骤(1)斜面试管中培养基中含有80-120g的马铃薯、8-10g的葡萄糖、0.5-1g的过磷酸钙，0.3-0.4g的硫酸镁，8-10g的琼脂,低氘水450-500ml，并且培养基的pH为5-9。
6.根据权利要求1所述培养蘑菇的方法，其特征在于，步骤(2)中，原种培养基包括180‐200g木屑、40‐50g麦麸、2‐3g蔗糖、2‐3g石膏，加低氘水至培养基含水量达到60％‐70％，并且培养基的pH为5‐9；步骤(3)中栽培的培养基中含有75‐80％木屑、18‐22％麦麸、1‐2％的蔗糖、1‐2％的石膏，加低氘水至培养基含水量至60％‐70％，以上百分数为各成分在培养基中质量百分比。
7.根据权利要求1所述培养蘑菇的方法，其特征在于，所述低氘水中氘的含量为10‐137ppm。
8.根据权利要求1所述培养蘑菇的方法，其特征在于，所述蘑菇品种为香菇、猴头菇、阿魏菇、灰树花、姬松茸、杏鲍菇、草菇、平菇、金针菇、灵芝和木耳中任意一种。
9.一种蘑菇，其特征在于，该蘑菇经权利要求1‐8制备方法制得。
10.一种药物组合物，其特征在于，包括经权利要求1‐8制备方法得到的蘑菇、药学可接受的载体。
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