CN105770858B - 一种人源性肥胖抑制肽 - Google Patents
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Abstract
本发明是一种基于人源性、具有促进白色脂肪棕色化及棕色脂肪分化的新型多肽,该多肽来源于IRS‑1蛋白,包含56个氨基酸,在肥胖与其并发症的防治中具有重要作用。本发明的动物模型依据是:我们鉴定出一种仅保留IRS‑1氨基端56aa的小鼠,较野生型和杂合子小鼠相比,该小鼠皮下白色脂肪组织明显减少,肩胛间区棕色脂肪组织明显增多,且IRS‑1‑/‑小鼠可以抵抗高脂饮食所致的肥胖。与IRS‑1基因完全剔除的小鼠相比,该小鼠具有较多的棕色脂肪,而且能抵抗高脂饮食诱导的肥胖及其并发症,从而在体内初步确定了IRS‑1氨基端56aa的作用,可以解决现有技术中减肥药品副作用大的技术问题。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域,尤其涉及一种人源性肥胖抑制肽。
背景技术
目前,全世界有将近五分之一的人口患有肥胖症,肥胖症可累及全身多个器官和***,与心脑血管疾病、高血压、糖尿病、血脂紊乱、睡眠呼吸暂停综合征甚至癌症等疾病的发生有密切关联。每年因肥胖而死亡的人数大于因战争、恐怖袭击和吸烟而死亡人数的总和;此外,肥胖症患者尤其是儿童患者因为体型肥胖容易形成胆小、社交退缩等个性和行为特征。因此,如何有效控制肥胖,一直是科学家们探索的焦点。
运动与节食是最安全的减肥方法,然而对肥胖患者仅采用单纯的节食和运动并不能够起到明显的减肥效果,而人们对身心健康及塑身美容的追求又极其迫切,从而使得新型治疗药物成为治疗肥胖症的不二选择。目前市面上的减肥药大概可以分为食欲抑制剂、胰脂肪酶抑制剂以及甲状腺素制剂等。
但是,减肥药在快速减肥塑身的同时,大多伴有多种副作用以及不良反应。如食欲抑制剂可引起神经***、胃肠道及心血管***不良反应;胰脂肪酶抑制剂可引起脂肪泻,造成脂溶性维生素缺乏,同时还可能造成肝功能损害;甲状腺素制剂在减重过程中使去脂体重过度降低,并造成骨质疏松和心血管的不良反应。
多肽药物具有分子结构小、易改造合成、纯度高、生物活性高、药用剂量小、安全性高、特异性强、产业化开发优势明显等诸多优点,目前已广泛应用于肿瘤、肝炎、艾滋病、代谢性疾病等的预防、诊断和治疗,具有广阔的研发前景。多肽可分为两大类:内源性多肽,即人体固有的内生性多肽(如脑啡肽、胸腺肽、胰脏多肽等)及外源性多肽(如蛇毒、唾液酸、蜂毒、蛙毒、蝎毒、水蛭素、竽螺毒素衍生物和苍蝇分泌的杀菌肽等)。其中,内源性多肽结构清楚、作用机制明确、质量水平接近于传统的小分子化学药物、活性接近于蛋白质药物、自身免疫反应不明显,以上特点使其成为多肽药物的主要来源。
发明内容
本发明提供一种人源性肥胖抑制肽,以解决现有技术中减肥药品副作用大的技术问题。
本发明提供一种IRS-1氨基端56aa在制备减肥药物中的应用。
优选的,所述IRS-1氨基端56aa发挥作用浓度为0.4-2μg/ml。
优选的,所述IRS-1氨基端56aa发挥作用浓度为1μg/ml。
本发明提供一种IRS-1氨基端56aa在制备减肥食品中的应用。
优选的,所述IRS-1氨基端56aa发挥作用浓度为0.4-2μg/ml。
优选的,所述IRS-1氨基端56aa发挥作用浓度为1μg/ml。
本发明的实施例提供的技术方案可以包括以下有益效果:
本发明是一种基于人源性、具有促进白色脂肪棕色化及棕色脂肪分化的新型多肽,该多肽来源于IRS-1蛋白,包含56个氨基酸,在肥胖与其并发症的防治中具有重要作用。本发明的动物模型依据是:我们鉴定出一种仅保留IRS-1氨基端56aa的小鼠,较野生型和杂合子小鼠相比,该小鼠皮下白色脂肪组织明显减少,肩胛间区棕色脂肪组织明显增多,且IRS-1-/-小鼠可以抵抗高脂饮食所致的肥胖。与IRS-1基因完全剔除的小鼠相比,该小鼠具有较多的棕色脂肪,而且能抵抗高脂饮食诱导的肥胖及其并发症,从而在体内初步确定了IRS-1氨基端56aa的作用,可以解决现有技术中减肥药品副作用大的技术问题。
应当理解的是,以上的一般描述和后文的细节描述仅是示例性和解释性的,并不能限制本发明。
附图说明
图1A是本发明实施例中提供的不同基因型小鼠身形图;
图1B是本发明实施例中提供的各基因型小鼠白色脂肪组织及棕色脂肪组织体重比例图;
图1C是本发明实施例中提供的饮食影响实验结果图;
图1D是本发明实施例中提供的三种基因型小鼠皮下白色脂肪组织及肩胛间区棕色脂肪组织的HE染色对比图;
图1E是本发明实施例中提供的三种基因型小鼠皮下白色脂肪组织的qPCR测试结果图;
图1F是本发明实施例中提供的三种基因型小鼠皮下白色脂肪组织的WB测试结果图;
图1G是本发明实施例中提供的三种基因型小鼠肩胛间区棕色脂肪组织的qPCR测试结果图;
图1H是本发明实施例中提供的三种基因型小鼠肩胛间区棕色脂肪组织的WB测试结果图;
图2A是本发明实施例中提供的IRS-1的分子二级结构示意图;
图2B是本发明实施例中提供的IRS-1分子的三维结构示意图;
图3A是本发明实施例中提供的多肽分析器测定IRS-1氨基端56aa多肽理化性质的测试结果图;
图3B是本发明实施例中提供的纯化IRS-1氨基端56aa多肽的质谱图;
图4A是本发明实施例中提供的MTT法测定不同浓度多肽对前白色脂肪细胞的增殖效应图;
图4B是本发明实施例中提供的MTT法测定不同浓度多肽对前棕色脂肪细胞的增殖效应图;
图4C是本发明实施例中提供的3H-TdR掺入法测定不同浓度多肽对前白色脂肪细胞的增殖效应图;
图4D是本发明实施例中提供的3H-TdR掺入法测定不同浓度多肽对前棕色脂肪细胞的增殖效应图;
图4E是本发明实施例中提供的不同浓度梯度的多肽干预前白色脂肪细胞成脂诱导后UCP1表达趋势图;
图4F是本发明实施例中提供的不同浓度梯度的多肽干预前棕色脂肪细胞成脂诱导后UCP1表达趋势图;
图5A是本发明实施例中提供的前白色脂肪细胞棕色化诱导后第9天油红O染色对比图;
图5B是本发明实施例中提供的前棕色脂肪细胞诱导后第9天油红O染色对比图;
图5C是本发明实施例中提供的WB检测前白色脂肪细胞棕色化诱导UCP1表达变化图;
图5D是本发明实施例中提供的WB检测前棕色脂肪细胞诱导后UCP1表达变化图。
具体实施方式
这里将详细地对示例性实施例进行说明,其示例表示在附图中。下面的描述涉及附图时,除非另有表示,不同附图中的相同数字表示相同或相似的要素。以下示例性实施例中所描述的实施方式并不代表与本发明相一致的所有实施方式。相反,它们仅是与如所附权利要求书中所详述的、本发明的一些方面相一致的装置的例子。
本说明书中的各个实施例均采用递进的方式描述,各个实施例之间相同相似的部分互相参见即可,每个实施例重点说明的都是与其它实施例的不同之处。
本发明中所出现的缩略语的说明:
iBAT:肩胛间区棕色脂肪组织
sWAT:皮下白色脂肪组织
HE:苏木素伊红染色法
WB:蛋白质印记
qPCR:实时荧光定量核酸扩增检测
MTT:比色法
3H-TdR:氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷
DMSO:二甲基亚砜
PBS:磷酸盐缓冲液
TCA:三氯乙酸
rhBMP7:人源性骨形态发生蛋白7
insulin:胰岛素
T3:三碘甲状腺原氨酸
IBMX:3-异丁基-1-甲基黄嘌呤
Dex:***
IRS-1氨基端56aa的氨基酸序列:MASPPESDGFSDVRKVGYLRKPKSMHKRFFVLRAASEAGGPARLEYYENEKKWRHK,编码所述人源性肥胖抑制肽的核苷酸序列为:atggcgagccctccggagagcgatggcttctcagacgtgcgcaaggtgggctacctgcgcaagcccaagagtatgcataagcgctttttcgtgctgcgggcggccagcgaggccgggggcccagcgcgcctggagtattatgagaacgagaagaagtggcggcacaagtcg。自发性基因突变会导致IRS-1编码氨基端56位氨基酸后的序列提前终止。
实施例1
IRS-1-/-小鼠表型验证及sWAT和iBAT变化:
随机选取1月龄雄性纯合子IRS-1-/-、杂合子IRS-1+/-及野生型IRS-1+/+小鼠各3只,分别取iBAT,sWAT并称重,比较各基因型小鼠白色及棕色脂肪组织体重比例;HE染色观察组织形态学改变;WB及qPCR检测棕色脂肪标志物UCP1的表达差异。体内确认IRS-1前56aa调控BAT分化及sWAT棕色化。
请参考图1A,所示为本发明实施例中提供的不同基因型小鼠身形图,图片从左至右依次为1月龄的IRS-1-/-、IRS-1+/-及IRS-1+/+小鼠。由图1A可以看出,IRS-1蛋白功能缺失的IRS-1-/-小鼠,与IRS-1+/-和IRS-1+/+小鼠相比,体型明显瘦小,体重减轻。
请参考图1B,所示为本发明实施例中提供的各基因型小鼠白色脂肪组织及棕色脂肪组织体重比例图。由图1B可知,IRS-1-/-小鼠皮下白色脂肪组织体重比明显减少,而iBAT质量体重比显著增加,说明本发明提供的IRS-1氨基端56aa(即IRS-1中氨基酸序列为MASPPESDGFSDVRKVGYLRKPKSMHK RFFVLRAASEAGGPARLEYYENEKKWRHK的多肽)具有促进白色脂肪棕色化的功能。
请参考图1C,所示为本发明实施例中提供的饮食影响实验结果图。本实施例随机选取1月龄雄性纯合子IRS-1-/-及野生型IRS-1+/+小鼠分别喂养普通食物和高脂食物16周,图中,曲线C-IRS-1-/-和C-IRS-1+/+分别表示纯合子及野生型小鼠喂养普通食物的体重变化;曲线HF-IRS-1-/-和HF-IRS-1+/+分别表示纯合子及野生型小鼠喂养高脂食物的体重变化。由图1C可知,无论IRS-1-/-小鼠的喂养食物是普通食物还是高脂食物,其体重均较IRS-1+/+小鼠大幅降低,且IRS-1-/-小鼠在喂养高脂食物的情况下,体重较IRS-1+/+小鼠喂养普通食物还轻,由此说明,IRS-1-/-小鼠可以抵抗高脂饮食所致的肥胖。
请参考图1D,所示为本发明实施例中提供的三种基因型小鼠sWAT及iBAT的HE染色。HE染色可见IRS-1-/-小鼠sWAT体积明显减小,且分散有较多的多房小脂滴;同时,IRS-1-/-小鼠iBAT较野生型和杂合子相比,含有大量的小脂滴,说明IRS-1氨基端56aa可以促进白色脂肪棕色化及棕色脂肪的分化。
请参考图1E、图1F、图1G和图1H,所示分别为本发明实施例中提供的三种基因型小鼠皮下白色脂肪组织的qPCR和WB测试结果图以及本发明实施例中提供的三种基因型小鼠肩胛间区棕色脂肪组织的qPCR和WB测试结果图。由图1E和图1F可知,纯合子皮下白色脂肪示棕色脂肪标志物UCP1,PGC1a及Cidea mRNA表达较其他两种基因型明显上调,在蛋白水平上,纯合子IRS-1无表达,UCP1表达上调,以上结果说明纯合子皮下白色脂肪组织存在白色脂肪棕色化现象。由图1G和图1H可知,纯合子及杂合子肩胛间区棕色脂肪组织UCP1,PGC1a及Cidea mRNA表达较野生型明显上调,在蛋白水平上,纯合子IRS-1无表达,UCP1,PGC1a表达上调,以上结果说明纯合子肩胛间区棕色脂肪组织存在分化的现象。
实施例2
IRS-1氨基端56aa分析
请参考图2A,所示为本发明实施例中提供的IRS-1的分子二级结构示意图。图2A表明IRS-1基因包含PH和PTB结构域的N末端高度保守。我们进一步对N端56个氨基酸的序列进行分析发现:56aa在人、鼠、鸡、猪甚至青蛙中也都是高度保守。请参考图2B,所示为本发明实施例中提供的IRS-1分子的三维结构示意图。对56aa这段多肽进行三维结构分析发现:这56aa能在IRS-1的N端形成4个发夹结构,此处的发夹结构与IRS-1其他部分的结构大为不同,进一步说明IRS-1N端的56aa具有特殊功能。
实施例3
根据IRS-1氨基端56aa序列合成多肽及其理化性质分析
根据人IRS-1氨基端编码56aa序列MASPPESDGFSDVRKVGYLRKPKSMHKRFFVLRAASEAGGPARLEYYENEKKWRHK,具体如下:(第6和7位氨基酸人—ES,小鼠—DT,第57aa密码子c-a即为IRS-1-/-小鼠的突变位点,由丝氨酸突变为终止密码子):
请参考图3A,所示为本发明实施例中提供的多肽分析器测定IRS-1氨基端56aa多肽理化性质的测试结果图。由图3A可知,应用多肽分析程序并对IRS-1氨基端56aa进行理化性质发现:此段多肽分子量6540.5Da,等电点10.5,PH=7时的净电荷,平均亲水性0.5,亲水残基比例45%,在水中溶解性良好。根据氨基酸序列合成IRS-1氨基端56aa多肽片段并进行功能研究。
请参考图3B,所示为本发明实施例中提供的纯化多肽的质谱图。由图3B可知,本发明多肽的理论分子量为6540.5Da(100%M+H),质谱检测条件:流速,1.0ml/min,波长为220nm,体积为20μl,流动相***为0.1%三氟醋酸/乙氰溶液-0.1%三氟醋酸/水溶液,纯化多肽的质谱表明,其分子量与计算值相符,合成后其纯度为95.97%。
实施例4
多肽对前白色脂肪细胞及前棕色脂肪细胞的增殖影响
设置不同浓度梯度的多肽干预前白色脂肪细胞和前棕色脂肪细胞,分别行MTT及3H-TdR掺入法测细胞增殖,同时用不同浓度的多肽干预前脂肪细胞,然后进行成棕色脂肪诱导分化,检测棕色脂肪标记物UCP1,最终确定干预细胞发挥作用的干预浓度为0.4-2μg/ml,最佳多肽浓度为1μg/ml。
1、小鼠原代前棕色脂肪细胞和前白色脂肪细胞培养:(以下步骤均在无菌环境下进行)
(1)前白色脂肪细胞培养:
S11:取7-10天龄小鼠6只,沿腹中线皮肤切开,剪刀钝性分离皮肤和腹膜组织并剪开下腹部及腹股沟处皮肤,取腹股沟区及皮下白色脂肪;
S12:将上述皮下白色脂肪剪成小块后,使用1mg/ml胶原酶在37℃的温度下消化45分钟,反复吹散混匀;
S13:待消化液完全成液态时,用含10%胎牛血清的F12/DMEM培养基终止消化,并在70μm滤网过滤掉成熟的脂肪细胞;
S14:1200rpm×10min离心,倒掉上清,完全培养基重悬沉淀后再离心,如此重复两遍,将细胞沉淀重悬后种在3.5cm的培养皿中,37℃,5%CO2环境下培养。
(2)前棕色脂肪细胞培养:
S21:取2-3天龄小鼠6只,沿背部中线皮肤切开,剪刀钝性分离皮肤和皮下组织,取肩胛间区棕色脂肪组织;
S22:将上述肩胛间区棕色脂肪组织剪成小块后,使用1mg/ml胶原酶在37℃的温度下消化45分钟,反复吹散混匀;
S23:待消化液完全成液态时,用含10%胎牛血清的F12/DMEM培养基终止消化,并在70μm滤网过滤掉成熟的脂肪细胞;
S24:1200rpm×10min离心,倒掉上清,完全培养基重悬沉淀后再离心,如此重复两遍,将细胞沉淀重悬后种在3.5cm的培养皿中,37℃,5%CO2环境下培养。
2、MTT检测前棕色脂肪细胞和前白色脂肪细胞增殖
S31:收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100μl,铺板使前白色脂肪细胞和前棕色脂细胞密度为5×103/孔;
S32:5%CO2,37℃的条件下孵育,至细胞单层铺满孔底(96孔平底板),12小时后,加入不同浓度梯度的多肽干预(0,10-3,10-2,10-1,1,2,5μg/ml),每孔100μl,每个浓度设8个复孔,并留8个空白孔;
S33:5%CO2,37℃的条件下孵育24小时后,每孔加入10μl MTT溶液(5mg/ml,即0.5%MTT),继续培养4小时后终止培养,小心吸去孔内培养液;
S34:每孔加入100μl DMSO,置摇床上低速振荡10分钟,使结晶物充分溶解,在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。
请参看图4A和图4B,所示分别为本发明实施例中提供的MTT法测定不同浓度多肽对前白色脂肪细胞的增殖效应图和本发明实施例中提供的MTT法测定不同浓度多肽对前棕色脂肪细胞的增殖效应图。由图4A和图4B可知,前白色脂肪细胞和前棕色脂肪细胞MTT曲线图表明多肽促进细胞增殖的浓度范围为0.4-2μg/ml,且两者OD值均在浓度为1μg/ml时达最大值,说明多肽干预细胞发挥作用的浓度为0.4-2μg/ml,其中最佳干预浓度为1μg/ml。
3、3H-TdR掺入法检测前棕色脂肪细胞和前白色脂肪细胞增殖
原理说明:胸腺嘧啶核苷(TdR)是DNA特有的碱基,也是DNA合成的必需物质,用具有放射性的同位素3H标记TdR即3H-TdR作为DNA合成的前体能掺入DNA合成代谢过程,通过测定细胞的放射性强度,可以反映细胞DNA代谢及细胞增殖情况。具体过程如下:
S41:前白色脂肪细胞或前棕色脂肪细胞以5×103/ml密度接种于96孔板,37℃,5%CO2中培养24小时;
S42:12小时后,加入不同浓度梯度的多肽干预(0,10-3,10-2,10-1,1μg/ml),每孔100μl,以未加任何药物组作为空白对照(每个浓度组设8组平行孔);
S43:在分别培养24小时后,每孔加入50μl的3H-TdR工作液(0.5uCi)培养24小时;
S44:培养结束后,离心吸去上清液,用200μl冷PBS洗涤3次,然后加200μl预冷的5%TCA洗1次,再用95%乙醇洗两次,在每孔加200μl 0.5M的NaOH溶解,用排枪将细胞裂解液转移至闪烁仪配置的专用96孔板中,在60℃干燥处理30分钟,然后使之冷却到室温;
S45:用DYQ-Ⅱ型多头细胞收集仪收集裂解液,移入闪烁板内,加闪烁液100μl,置液体闪烁计数器中测定放射性计数(cpm);
S46:以每分钟脉冲数(cpm)表示增殖程度,用刺激指数(SI)来表示实验组较对照组相比的增殖程度和增殖效率;SI=实验孔cpm/对照孔cpm;若受试样品组的SI值显著高于对照组的SI值,即可判定该项实验结果阳性。
请参看图4C和图4D,所示分别为本发明实施例中提供的3H-TdR掺入法测定不同浓度多肽对前白色脂肪细胞的增殖效应图和本发明实施例中提供的3H-TdR掺入法测定不同浓度多肽对前棕色脂肪细胞的增殖效应图。由图4C和图4D可知,前白色脂肪细胞和前棕色脂肪细胞的均在浓度为1μg/ml时达最大值,说明干预细胞发挥作用的最佳多肽浓度为1μg/ml。
4、确定最佳干预浓度
当前白色脂肪细胞和前棕色脂肪细胞贴壁80%时,分别用不同浓度梯度的多肽(0,10-3,10-2,10-1,1μg/ml)干预48小时后,3.3nM rhBMP7干预72h(day 0),使用20nM insulin,1nM T3,0.5mM IBMX,5μM Dex和0.125mM吲哚美辛成棕色脂肪诱导分化,在诱导第3天(day 3)WB检测UCP1表达,进一步明确IRS-1前56aa的多肽最佳干预浓度为1μg/ml。
请参看图4E和图4F,所示分别为本发明实施例中提供的不同浓度梯度的多肽干预前白色脂肪细胞和前棕色脂肪细胞成脂诱导后UCP1表达趋势图。由图4E和图4F可知,UCP1的表达效果随着干预浓度(0,10-3,10-2,10-1,1)的增大而上调,在干预浓度为1μg/ml时,UCP1的表达最佳,说明干预细胞发挥作用的最佳多肽浓度为1μg/ml。
IRS-1氨基末端56aa效果实验
前白色脂肪细胞及前棕色脂肪细胞分为5组:第1组为阴性对照组,其余4组进行棕色化诱导分化后再分为ins+T3(阳性对照),多肽+T3,T3,ins+多肽+T3换液,多肽干预浓度为1μg/ml,于诱导第9天(day 9)油红O染色观察细胞分化情况,并利用蛋白印迹检测棕色脂肪标志物UCP1表达变化。
请参考图5A和图5B,所示分别为本发明实施例提供的前白色脂肪细胞棕色化诱导后第9天油红O染色图和前棕色脂肪细胞诱导后第9天油红O染色图。由图5A和图5B可知,在前白色脂肪和前棕色脂肪诱导分化中,多肽+T3组较T3组脂滴数目增多,ins+多肽+T3组脂滴较ins+T3组增多,表明IRS-1氨基端56aa多肽能够促进白色脂肪棕色化及棕色脂肪分化。
分离野生型小鼠的前白色脂肪及前棕色脂肪细胞,当细胞贴壁80%时以1μg/ml的IRS-1氨基端56aa的多肽干预48小时后,3.3nM rhBMP7干预72小时后(day 0),使用20nMinsul in,1nM T3,0.5mM IBMX,5μM Dex和0.125mM吲哚美辛成棕色脂肪诱导分化3天(day3),后分别以ins+T3(阳性对照),多肽+T3,T3,ins+多肽+T3换液3次,在诱导的第9天(day 9)油红O染色,观察多肽对于成脂分化的作用。收集第9天(day 9)产物,利用WB检测UCP1的表达变化,以β-actin作为内参,比较多肽对两组细胞脂肪分化标志物的影响。
请参考图5C和图5D,所示分别为本发明实施例提供的WB检测前白色脂肪细胞棕色化诱导UCP1表达变化图和WB检测前棕色脂肪细胞诱导后UCP1表达变化图。图5C和图5D所示的WB检测结果表明多肽组UCP1表达增多,进一步验证IRS-1氨基端56aa多肽可以促进白色脂肪棕色化以及前棕色脂肪细胞的定型分化。
以上所述的本发明实施方式,并不构成对本发明保护范围的限定。任何在本发明的精神和原则之内所作的修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
以上所述仅是本发明的具体实施方式,使本领域技术人员能够理解或实现本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的技术人员来说将是显而易见的,本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下,在其它实施例中实现。因此,本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例,而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
Claims (3)
1.IRS-1氨基端56aa在制备减肥药物中的应用,其中,IRS-1氨基端56aa的氨基酸序列为:MASPPESDGFSDVRKVGYLRKPKSMHKRFFVLRAASEAGGPARLEYYENEKKWRHK。
2.根据权利要求1所述的IRS-1氨基端56aa在制备减肥药物中的应用,其特征在于,所述IRS-1氨基端56aa发挥作用浓度为0.4-2μg/ml。
3.根据权利要求2所述的IRS-1氨基端56aa在制备减肥药物中的应用,其特征在于,所述IRS-1氨基端56aa发挥作用浓度为1μg/ml。
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Mineralocorticoid Receptor Antagonism Promotes Brown-like Remodeling of Murine White Adipose Tissue Via Reduction of Autophagic Flux in Adipocytes;Vincenzo Marzolla等;《Journal of pharmacological sciences》;20131231;摘要 * |
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