CN105769926A - 大鲵皮肤黏液提取物制备抗乳腺癌药物及其应用 - Google Patents
大鲵皮肤黏液提取物制备抗乳腺癌药物及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105769926A CN105769926A CN201610136184.3A CN201610136184A CN105769926A CN 105769926 A CN105769926 A CN 105769926A CN 201610136184 A CN201610136184 A CN 201610136184A CN 105769926 A CN105769926 A CN 105769926A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- breast cancer
- skin mucus
- giant salamander
- extract
- extracts
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/56—Materials from animals other than mammals
- A61K35/65—Amphibians, e.g. toads, frogs, salamanders or newts
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种大鲵皮肤黏液提取物在制备乳腺癌药物中的应用。其特征在于：大鲵皮肤黏液通过碱液提取，脱蛋白，离子交换和凝胶层析纯化后的真空干燥提取物，以质量分数计，多糖含量为38‑41％，蛋白质含量为62‑59％，多糖蛋白中含有MaN、GlcUA、GalUA、GlcN、Glc、Gal6种单糖，蛋白分子量为28KD。采用MTT法对大鲵皮肤黏液提取物对人乳腺癌细胞MCF‑7抑制试验，0.5mg/ml以上提取物浓度，对人乳腺癌细胞MCF‑7处理48h后，其抑制率达90％以上。大鲵皮肤黏液提取物制成针剂注射治疗乳腺癌，无副作用。
Description
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及大鲵皮肤黏液提取物在制备抗乳腺癌药物中的应用。
背景技术
乳腺癌是危害妇女健康的主要肿瘤，乳腺癌患者5年生存率约60％，近50％患者治疗后复发转移，晚期乳腺癌患者平均生存时间仅18～30个月。乳腺癌的治疗手段包括手术治疗、放射治疗、化学药物治疗、内分泌治疗等传统的治疗手段。手术治疗风险高，对人体创伤大，适用于早期患者，对中、晚期患者来说，术效果也不理想，难以根治。乳腺癌的复发和转移特性，放射治疗对照射区的正常组织也有杀伤作用，造成医源性损伤，如放射性脊髓炎、放射性肺炎、放射性脑坏死等。化疗药物在抑制肿瘤细胞生长或杀伤癌细胞的同时，对机体内正常繁殖的各类细胞同样也有不同程度的毒性作用，尤其是骨髓造血细胞和胃粘膜上皮细胞受到的损害最重，化疗药物的严重毒副反应。乳腺癌内分泌治疗已成为乳腺癌各阶段的重要治疗手段，但也会产生一定的副作用。
从动物进化过程中形成特殊活性成分中发掘抗乳腺癌新药，是研发抗乳腺癌药物的新途径。大鲵(Andrias davidianus Blanchard)属大型两栖纲、有尾目、隐鳃鲵科，有“活化石”之称，在自然进化过程中为防御病原微生物及天敌的侵害，大鲵皮肤黏液细胞释放黏液，覆盖在皮肤上形成了一道天然的防护屏障。大鲵皮肤黏液物中含有丰富具有特殊的生物活性分子，具有广普抗菌、抗肿瘤作用。
发明内容
本发明的目是在于提供一种具有抗乳腺癌活性成分，来源于大鲵皮肤分泌黏液的提取物，并在制备抗乳腺癌药物中应用。
实现上述目的的技术方案：人工养殖的健康3-5龄以上的大鲵，通过无菌水清洗后，机械刺激刮取黏液，按质量分数，用0.3molNaoH水溶液按20∶1比例加入黏液中，在40℃条件下，超声波振荡提取1h，过滤液浓缩为原体积为五分之一，用SAVEG法脱蛋白三至四次，离心液中加入食用酒精至浓度75％醇沉，在0-4℃条件静置20-24h，离心去上清液，真空冷冻干燥大鲵皮肤黏液提取物。黏液提物经过DEAE-52离子交换层析，再经G-100葡聚糖凝胶层析纯化，以280nm为检测波长，收集出峰样浓缩，真空冷冻干燥。黏液提取物通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，在28KD分子量有明显蛋白条带。经高效液相和氨基酸分析仪检测，提取纯化物含有6种单糖MaN、GlcUA、GalUA、GlcN、Glc、Gal，其分子摩尔数比为63∶152∶40∶57∶37∶77，总糖含量为38-41％，蛋白质含量为62-59％，大鲵皮肤黏液提取物为糖蛋白。
大鲵黏液提取纯化物用PBS缓冲液溶解成0.25、0.50、1.0mg/ml，同1mg/ml紫杉醇作阳性对照，加入5％CO2培养的对数期人乳腺癌细胞MCF一7细胞中，培养48h，加入20ulMTT，继续培养4h，弃去培养液，加入150ul二甲基亚砜溶解，37℃低速震荡10min，用紫外分光光度计，在570nm处检测其吸光度，对数期人乳腺癌细胞MCF一7抑制率分别为85.20％，90.62％，91.42％与59.6％，大鲵黏液提取物对人乳腺癌细胞MCF一7的抑制率明显高于阳性对照组，且提取物浓度低于阳性药物。大鲵黏液提取物处理人乳腺癌细胞MCF一7经过48h后，通过光学显微镜观察形态，外形态皱缩、变园、脱落。大鲵黏液提取物对小白鼠经口灌胃进行急毒性安全评价，大鲵黏液提取物LD50值约为4.64g/kg，大鲵黏液提取物无毒性是安全的，具有良好的抗乳腺癌药物开发前景。
具体实施方式
结合以下实施例对本发明作进一步的说明，本发明所述的大鲵皮肤黏液提取物的提取方法和抑制乳腺癌细胞试验。
1)将人工养殖的健康3-5龄以上的大鲵，用无菌水清洗后，用机械刺激大鲵产生白色黏液刮取黏液，用0.3molNaoH水溶液按20∶1比例加入黏液中，在40℃条件下，超声波振荡提取1h，过滤液浓缩为原体积为五分之一，法脱蛋白三至四次，离心液中加入食用酒精至浓度75％醇沉，在0-4℃条件静置20-24h，离心去上清液，真空冷冻干燥大鲵皮肤黏液提取物。
2)再经过DEAE-52离子交换层析，用0.2mol/NacL溶液洗脱，用280nm为检测波长，收集出峰样，大于7000D透析袋脱盐，浓缩真空冷冻干燥。
3)经SePhadexG-100凝胶层析纯化，以蒸馏水为流动相，以280nm为检测波长，收集出峰样浓缩，真空冷冻干燥成粉。
4)大鲵皮肤黏液提取物，以质量分数计，总糖含量为38-41％，蛋白质含量为62-59％，提取物中含有MaN、GlcUA、GalUA、GlcN、Glc、Gal6种单糖，蛋白分子量为28.0KD。
5)采用MTT法研究了大鲵皮肤黏液提取物对人乳腺癌细胞MCF-7的抑制作用，分别以0.25mg/mL，0.5mg/mL，1mg/mL大鲵皮肤黏液提取物对乳腺癌细胞MCF-7处理48h，对乳腺癌细胞抑制率分别为85.20％，90.62％，91.42％，显示大鲵皮肤黏液提取物对人乳腺癌细胞MCF-7有极强的抑制作用。
6)通过光学显微镜对提取物处理人乳腺癌细胞MCF-7经48h后，观察形态，结果乳腺癌细胞体积变小，细胞群体数量稀疏，贴壁细胞数量减少，出现皱缩、变圆，表明大鲵皮肤黏液提取物具有良好的抑制乳腺癌细胞作用。
7)大鲵黏液提取物对小白鼠经口灌胃进行急毒试验，大鲵黏液提取物LD50值约为5.35g/kg，黏液提取物无毒性，用于抗乳腺癌是安全的，具有良好的抗乳 腺癌药物开发前景。
8)大鲵黏液提取物通过动物腹腔直接注射，未出现应急反应，对乳腺癌病灶处直接给药治疗乳腺癌。
Claims (3)
1.大鲵皮肤黏液提取物在制备抗乳腺癌药物中的应用。其特征在于大鲵皮肤黏液通过碱液提取，脱蛋白，离子交换和凝胶层析纯化后的真空干燥提取物，以质量分数计，多糖含量为38-41％，蛋白质含量为62-59％，多糖中含有MaN、GlcUA、GalUA、GlcN、Glc、Gal6种单糖，蛋白分子量为28KD，大鲵皮肤黏液提取物对人乳腺癌细胞系MCF～7试验有抑制作用。
2.按照权利要求1所述的大鲵皮肤黏液提取物在制备抗乳腺癌药物中的应用，其特征在于：大鲵皮肤黏液提取物溶于PBS缓冲液，以质量分数计，0.5mg/ml以上提取物浓度，对人乳腺癌细胞系MCF～7处理48h后，其抑制率达90％以上。
3.按照权利要求1所述的大鲵皮肤黏液提取物在制备抗乳腺癌药物中的应用，其特征在于：大鲵皮肤黏液提取物制成针剂注射治疗乳腺癌。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610136184.3A CN105769926A (zh) | 2016-02-28 | 2016-02-28 | 大鲵皮肤黏液提取物制备抗乳腺癌药物及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610136184.3A CN105769926A (zh) | 2016-02-28 | 2016-02-28 | 大鲵皮肤黏液提取物制备抗乳腺癌药物及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105769926A true CN105769926A (zh) | 2016-07-20 |
Family
ID=56388430
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610136184.3A Pending CN105769926A (zh) | 2016-02-28 | 2016-02-28 | 大鲵皮肤黏液提取物制备抗乳腺癌药物及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105769926A (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106361776A (zh) * | 2016-11-16 | 2017-02-01 | 张家界金姑大鲵开发有限公司 | 一种大鲵粘液用于止血的作用 |
| CN106511399A (zh) * | 2016-11-16 | 2017-03-22 | 太鲵生物科技（天津）有限公司 | 一种大鲵粘液的用途 |
| CN107648276A (zh) * | 2017-09-28 | 2018-02-02 | 凯瑞欧（天津）生物技术有限公司 | 一种低温超声裂解提取大鲵黏液有效成分的工艺方法 |
| CN108421080A (zh) * | 2018-05-07 | 2018-08-21 | 魏泓 | 大鲵分泌物水凝胶及其制备方法和应用 |
| CN110818773A (zh) * | 2018-08-10 | 2020-02-21 | 浙江楚沅生物科技有限公司 | 纯化非人动物羊水中活性物质的方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1451393A (zh) * | 2002-04-19 | 2003-10-29 | 清华大学 | 一种文蛤提取物及其制备方法与应用 |
| CN103621869A (zh) * | 2013-11-15 | 2014-03-12 | 贵阳学院 | 一种大鲵低聚糖肽保健品 |
| CN104840489A (zh) * | 2015-05-23 | 2015-08-19 | 汉中领维生物科技发展有限公司 | 大鲵皮肤黏液提取物在制备抗肺癌药物中的应用 |
-
2016
- 2016-02-28 CN CN201610136184.3A patent/CN105769926A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1451393A (zh) * | 2002-04-19 | 2003-10-29 | 清华大学 | 一种文蛤提取物及其制备方法与应用 |
| CN103621869A (zh) * | 2013-11-15 | 2014-03-12 | 贵阳学院 | 一种大鲵低聚糖肽保健品 |
| CN104840489A (zh) * | 2015-05-23 | 2015-08-19 | 汉中领维生物科技发展有限公司 | 大鲵皮肤黏液提取物在制备抗肺癌药物中的应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 徐伟良等: "大鲵皮肤黏液糖蛋白的提取纯化及抗肺癌活性研究", 《中国生化药物杂志》 * |
| 李莉等: "中国养殖大鲵的食用、药用价值及其开发利用研究进展", 《食品工业科技》 * |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106361776A (zh) * | 2016-11-16 | 2017-02-01 | 张家界金姑大鲵开发有限公司 | 一种大鲵粘液用于止血的作用 |
| CN106511399A (zh) * | 2016-11-16 | 2017-03-22 | 太鲵生物科技（天津）有限公司 | 一种大鲵粘液的用途 |
| CN106511399B (zh) * | 2016-11-16 | 2023-12-01 | 太鲵生物科技（天津）有限公司 | 一种大鲵粘液的用途 |
| CN106361776B (zh) * | 2016-11-16 | 2024-03-19 | 张家界金姑大鲵开发有限公司 | 一种大鲵粘液用于止血的作用 |
| CN107648276A (zh) * | 2017-09-28 | 2018-02-02 | 凯瑞欧（天津）生物技术有限公司 | 一种低温超声裂解提取大鲵黏液有效成分的工艺方法 |
| CN108421080A (zh) * | 2018-05-07 | 2018-08-21 | 魏泓 | 大鲵分泌物水凝胶及其制备方法和应用 |
| CN108421080B (zh) * | 2018-05-07 | 2021-01-26 | 魏泓 | 大鲵分泌物水凝胶及其制备方法和应用 |
| CN110818773A (zh) * | 2018-08-10 | 2020-02-21 | 浙江楚沅生物科技有限公司 | 纯化非人动物羊水中活性物质的方法 |
| CN110818773B (zh) * | 2018-08-10 | 2023-04-11 | 浙江楚沅生物科技有限公司 | 纯化非人动物羊水中活性物质的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105769926A (zh) | 大鲵皮肤黏液提取物制备抗乳腺癌药物及其应用 | |
| He et al. | Antioxidant and antitumor activities in vitro of polysaccharides from E. sipunculoides | |
| CN101455736B (zh) | 一种酸枣仁提取物的应用 | |
| CN102417544B (zh) | 一种紫阳富硒绿茶含硒多糖及其制备方法和用途 | |
| CN102114044B (zh) | 一种人工加工熊胆粉及其制备方法 | |
| Wang et al. | In vivo immunological activity of carboxymethylated-sulfated (1→ 3)-β-D-glucan from sclerotium of Poria cocos | |
| CN103800390B (zh) | 具有增强免疫力及保肝功能的保健品及其制备方法与应用 | |
| KR20050112071A (ko) | 신규한 인삼잎 및 줄기 다당체, 그 제조방법 및 그를활성성분으로 함유하는 항암제 및 항암보조제 조성물 | |
| CN105707072A (zh) | 一种螺旋藻多糖及其应用 | |
| CN110790848A (zh) | 沙棘总多糖的制备方法及其应用 | |
| CN106632614A (zh) | 一种美洲大蠊免疫调节肽及其制备方法和医药用途 | |
| CN110433188A (zh) | 蓝花参提取物在制备治疗或预防炎症性肠病的药物中的应用 | |
| CN101816653A (zh) | 黄连素作为制备肿瘤放射治疗增敏药物中的应用 | |
| CN106177187B (zh) | 具有增效减毒抗肝癌作用的茶多酚茶多糖组合物 | |
| CN101167755B (zh) | 具有抗肿瘤活性的蜈蚣多糖蛋白复合物的制备方法及用途 | |
| CN107184875A (zh) | 一种兽用抗菌中药制剂 | |
| CN106728038A (zh) | 一种防治水产动物肝胆疾病的中药饲料预混剂及其制备方法 | |
| CN110698567B (zh) | 阿魏菇中抗氧化多糖提取物及其制备方法和应用 | |
| CN113717296B (zh) | 一种杜仲酸性多糖、提取方法及其在制备抗结肠癌药物中的应用 | |
| CN112569252B (zh) | 火棘多糖的应用和含有火棘多糖的药物组合物及含有该药物组合物的载药囊泡 | |
| CN103316062A (zh) | 乳苣的新用途 | |
| CN109400669B (zh) | 核桃仁皮的小分子蛋白质提取方法及应用 | |
| Ye et al. | Free radical scavenging activity and anti-inflammatory property of the saponin from seeds of Camellia oleifera abel | |
| CN108379252B (zh) | 醋栗花青素在制备抗肝纤维化药品或保健品中的应用 | |
| CN102178701A (zh) | 一种具有抗肿瘤活性多糖组合物的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20160720 |
|
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |