CN105746351A - 一种野生稻茎尖的超低温保存及恢复培养方法 - Google Patents

一种野生稻茎尖的超低温保存及恢复培养方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105746351A
CN105746351A CN201610131944.1A CN201610131944A CN105746351A CN 105746351 A CN105746351 A CN 105746351A CN 201610131944 A CN201610131944 A CN 201610131944A CN 105746351 A CN105746351 A CN 105746351A
Authority
CN
China
Prior art keywords
stem apex
culture medium
wild rice
carrier strip
sucrose
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201610131944.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105746351B (zh
Inventor
林田
杨华
王飞
魏士伟
张前荣
王国军
石群芳
李天菲
龙萍
罗利军
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
SHANGHAI MUNICIPAL AGRICULTURAL BIOLOGICAL GENE CENTER
Original Assignee
SHANGHAI MUNICIPAL AGRICULTURAL BIOLOGICAL GENE CENTER
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by SHANGHAI MUNICIPAL AGRICULTURAL BIOLOGICAL GENE CENTER filed Critical SHANGHAI MUNICIPAL AGRICULTURAL BIOLOGICAL GENE CENTER
Priority to CN201610131944.1A priority Critical patent/CN105746351B/zh
Publication of CN105746351A publication Critical patent/CN105746351A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105746351B publication Critical patent/CN105746351B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01HNEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/005Methods for micropropagation; Vegetative plant propagation using cell or tissue culture techniques
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N3/00Preservation of plants or parts thereof, e.g. inhibiting evaporation, improvement of the appearance of leaves or protection against physical influences such as UV radiation using chemical compositions; Grafting wax

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

一种野生稻茎尖的超低温保存及恢复培养方法,步骤有:取继代培养无菌组培苗,留基部放入不含激素MS培养基内培养,切离基部新萌植株,转入含0.3molL1蔗糖和脱落酸0.55mgL1培养基上培养,再转入0.7molL1和含脱落酸0.55mgL1培养基上预培养,剥取茎尖,在0.4 molL1蔗糖和甘油2moL1MS固体培养基预培养,在24%的无钙离子海藻酸钠溶液中轻蘸,放在装载条上,再浸入含有0.10.3%氯化钙、0.4 molL1蔗糖和2moL1甘油MS液体培养基中,经固定后,吸去多余液体,置于预处理溶液中处理,再转入玻璃化保护剂PVS2中进行冰浴处理,然后投入液氮中保存。其有益效果是,保存方法简便易行,稳定可靠,保存后野生稻恢复生长状况良好。

Description

一种野生稻茎尖的超低温保存及恢复培养方法
技术领域
本发明涉及一种野生稻茎尖的保存方法,具体的说,涉及一种普通野生稻茎尖的超低温保存方法。同时,本发明还涉及到野生稻茎尖的超低温保存后的恢复培养方法,属于植物细胞工程技术领域。
背景技术
野生稻资源是稻种资源的重要组成部份, 它保存了栽培水稻没有或已经消失了的基因, 并具有特殊的优良性状及高抗病虫害的特性,其有利基因的发掘和保存,对提高水稻产量和品质具有不可估量的价值。当前迅速恶化的环境和不利的气候条件正在侵蚀着水稻的遗传多样性;人类现代急速扩张的经济活动,导致了野生稻生境丧失及恶化、栖息地急剧减少;此外野生稻又具有柱头外露、异交结实率较高、种子落粒性强的生物学特性。这些因素使野生稻种面临灭绝的危险, 对野生稻遗传多样性的保护刻不容缓。目前,对野生稻的保护措施主要有就地保护和迁地保护,即以种子保存的种质厍、以种茎保存的种质圃。
植物组织与细胞的培养为植物的种质保存开辟了新的途径,组织培养物能迅速大量繁殖, 再生植株可保持原有的遗传特性。而超低温保存(-196℃)下,植物的生物化学活性近乎停止,贮藏过程中的生理和遗传变化能够控制在最低限度内,避免了田间保存易受自然灾害影响而导致种质变异或毁灭,以及组织培养保存中因多次继代引起遗传性状变异或污染的危险,被认为是植物遗传资源长期保存的最优选择。
关于植物超低温保存的研究,保存技术的多样化与简易化方面不断取得进步,能够保存的植物物种数也在不断地增长,但多数集中在苹果、樱桃、柑桔、香蕉、木薯等木本植物以及马铃薯、红薯、草莓等经济植物为主的植物遗传资源的超低温保存。水稻的超低温保存自1979年Sala等首先报道水稻悬浮细胞的超低温保存后,相关研究多集中在组织培养物如悬浮细胞系、愈伤组织、原生质体及胚状体上,关于水稻完整器官(如茎尖)冻存的报道仅见章志宏教授等在2000年采用程序降温法对水稻单倍体幼穗离体培养诱导的不定芽进行超低温保存,得到再生植株。野生稻的超低温保存技术相关报道更少且集中于国内,如殷晓辉教授等1996年在普通野生稻、宽叶野生稻以及瘤粒野生稻愈伤组织超低温保存研究中首次获得了冻后再生植株,实验证明了野生稻幼穗离体培养物的超低温保存是稻属资源保存的有效途径。谭光轩教授等采用程序降温法对野生稻幼穗离体培养诱导植株,直接进行超低温保存,避开愈伤组织阶段减少遗传变异的危险,但产生的绿芽一周后白化死亡。
野生稻完整器官的冻存,将是今后研究的重点,但由于野生稻茎尖分生组织体积小、由于野生稻的茎尖组织具有细小、幼嫩的特点,生理状态脆弱,且被外部护叶层层紧密包裹,在茎尖剥取、预培养及玻璃化冻存操作中容易折断及受到伤害,保存中难以成活。同时,在其后的恢复培养中也不易再生或产生白化苗。采用程序降温的冷冻方法对设备要求较高。
发明内容
由于现有技术中存在野生稻茎尖分生组织体积小、生理状态脆弱,保存中难以成活的现象。本发明的目的是提供一种野生稻茎尖的超低温保存方法,同时还提供一种野生稻茎尖超低温保存方法后解冻恢复培养方法。
为了实现本发明的目的,本发明提供了一种野生稻茎尖的超低温保存方法,包括如下步骤:
取继代3个月以上无菌组培苗,剪去上部植株,留基部约3cm,根部约1cm放入不含激素的MS 培养基。培养5-7天后,基部新萌芽0.5-1cm,将新萌植株切离后,带基部转入含蔗糖0.3molL-1及脱落酸0.5-5mgL-1的培养基上培养。培养7-10天后,转入0.7molL-1及脱落酸0.5-5mgL-1的培养基上预培养3-7天。然后解剖镜下剥取2-3mm的茎尖,在含有0.4 molL-1及甘油2moL-1的MS固体培养基上预培养16小时,其中,含有0.4 molL-1及甘油2moL-1的MS固体培养基内不含NH4+,用镊子将预培养后的茎尖在2-4%的无钙离子海藻酸钠溶液中轻蘸,然后整齐放在5mm×20mm金属网状装载条上,每条装载条上5-10个茎尖。再然后将带茎尖的装载条浸入含有0.1-0.3%氯化钙、0.4 molL-1蔗糖及2moL-1甘油的MS液体培养基,其中,含有0.1-0.3%氯化钙、0.4 molL-1蔗糖及2moL-1甘油的MS液体培养基中不含NH4+,经10-30min固定后,将装载条在无菌滤纸上吸去多余液体。将固定好的带茎尖的装载条放于预处理溶液,所述预处理溶液含有0.4 molL-1及甘油2moL-1的MS液体培养基,不含NH4+中于室温下处理20-60min后,转入玻璃化保护剂PVS2中进行2-5小时的冰浴处理,所述PVS2中不含NH4+
将带茎尖的装载条迅速投入液氮中保存。
本发明还提供一种野生稻茎尖超低温保存后的恢复培养方法,包括如下步骤:
超低温保存后的野生稻茎尖解冻时从液氮中取出带茎尖的装载条,立即放入1.2molL-1,不含NH4+的1/2MS液体培养基中快速解冻2min,并在培养基中洗涤20min。将带茎尖的装载条在滤纸上吸干后置于不含激素和不含NH4+的1/2MS培养基中暗培养1天,然后在解剖镜下将茎尖逐一由装载条剥离,转移到含BA及NAA,不含NH4+的培养基上进行暗培养。待茎尖再生后转入含BA及NAA和不含NH4+的培养基光照培养。
本发明的有益效果是,野生稻茎尖的超低温保存方法简便易行,稳定可靠,保存后野生稻恢复生长状况良好。同时,通过添加外源激素及逐步提高预培养基中蔗糖浓度两者结合提高茎尖的抗性,通过采用金属网格作为茎尖的载体以减少各步骤中的损伤,并采用液氮直投而非依赖程序降温仪的冷冻步骤,在恢复培养基中对大量元素进行调整使之容易再生,最终得到普通野生稻的再生植株。对其它类型的野生稻及禾本科植物遗传资源的超低温保存来说,具有很好的参考价值。同时还提高茎尖的抗性,减少各步骤中的损伤,并采用液氮直投而非依赖程序降温仪的冷冻步骤,简化操作,建立普通野生稻的超低温保存体系,并为其它类型的野生稻及禾本科植物作了技术储备。
附图说明
图1是本发明中野生稻超低温保存的流程图。
图2是本发明中野生稻超低温保存后恢复培养方法的流程图。
图3是本发明中丛生苗的状态示意图。
图4是本发明中驯化苗的状态示意图。
图5是本发明中包埋过程的状态示意图。
图6是本发明中再生苗的状态示意图。
具体实施方式
为了更清楚地叙述本发明的具体实施方式,下面结合实施例对本发明做进一步的说明。
实施例 1野生稻无菌苗的获得
参照图1所示,野生稻无菌苗的诱导和继代培养步骤是:取野生稻的地下茎带萌生芽的茎段,在自来水流水下反复冲洗约1小时后,用70%酒精消毒1 min,0.1%的升汞消毒15 min,无菌水冲洗若干次后,在解剖镜下剥取约2mm的茎尖,接种于含4 mg·L-1 BA及0.5 mg·L-1 NAA的MS培养基上诱导丛生芽。培养温度为25±2℃, 光照12 h·d-1,光照强度36 µmolm-2 s-1。诱导出丛生芽后,将丛生芽切离并接种在含2mg·L-1 BA及0.5 mg·L-1NAA的MS培养基上继代培养。每3个月继代一次。
实施例 2野生稻的梯度预培养
参照图1所示,无菌苗的梯度驯化培养,剥离茎尖和茎尖预培养的步骤是:取实施例1所得的组培苗,剪去上部植株,留基部约3cm,根部约1cm放入不含激素的MS培养基培养7天后,取基部新萌1cm的芽,转入含蔗糖0.3molL-1及脱落酸5mgL-1的培养基上培养。7天后,再转入0.7molL-1及脱落酸5mgL-1的培养基上预培养5天。解剖镜下剥取2-3mm的茎尖,在含有0.4 molL-1及甘油2moL-1,不含NH4+的MS固体培养基上预培养16小时。
实施例 3野生稻茎尖的装置固定
参照图1和图5所示,茎尖固定到装载条和预处理、玻璃化处理的步骤是:用镊子将按实施例2预培养后的茎尖,在2-4%的无钙离子海藻酸钠溶液中轻蘸,即整齐放在5mm×20mm金属网状装载条上,每条装载条上10个茎尖。将带茎尖的装载条浸入含有0.2%氯化钙、0.4 molL-1蔗糖及2moL-1甘油,不含NH4+的MS液体培养基中,经20min固定后,将装载条在无菌滤纸上吸去多余液体。
实施例 4野生稻的玻璃化处理及冻存
参照图1和图5所示,茎尖的液氮超低温保存的步骤是:取实施例3所得的带茎尖的装载条放于预处理溶液,含有0.4 molL-1及甘油2moL-1,不含NH4+的MS液体培养基中于室温下处理60min后,转入玻璃化保护剂PVS2,不含NH4+中进行5小时的冰浴处理,将带茎尖的装载条迅速投入液氮中保存。
实施例 5野生稻的茎尖恢复培养与植株再生
参照图2、图3、图4、图6所示,恢复培养方法的所需步骤是,第一步:急速解冻;第二步:洗涤、吸干;第三步,茎尖恢复培养;第四步,茎尖由装载条剥离;第五步:茎尖再生培养,第六步:组培植株再生。
具体的步骤如下:解冻时从液氮中取出带茎尖的装载条,立即放入1.2molL-1,不含NH4+的1/2MS液体培养基中快速解冻2min,并在培养基中洗涤20min。将带茎尖的装载条在滤纸上吸干后置于不含激素,不含NH4+的1/2MS培养基中暗培养1天,然后在解剖镜下将茎尖逐一由装载条剥离,转移到含BA及NAA,不含NH4+的培养基上暗培养。待茎尖再生后转入含BA及NAA,含NH4+的培养基光照培养。茎尖恢复培养3d后,在解培镜下观察,即可见到有茎尖再生,继续培养约14~28 天后,部分成活茎尖褐变,部分再生成绿苗,再生率最高可达50%。
以上所述实施例仅表达了本发明的实施方式,其描述较为详细,只要本领域的技术人员在查看到本发明的实施例后,不脱离本发明构思的前提下,所做的改变都属于本发明的保护范围。但本文所述的实施例不能理解为对本发明的保护范围限制。

Claims (7)

1.一种野生稻茎尖的超低温保存方法,其特征在于,所述保存方法包括如下步骤:
步骤a:取继代培养3个月以上的无菌组培苗,剪去上部植株,留基部放入不含激素的MS培养基内进行培养;
步骤b:通过步骤a培养5-7天后,将基部新萌植株切离后,带基部转入含0.3molL-1的蔗糖和脱落酸0.5-5mgL-1的培养基上培养;
步骤c:经过步骤b培养7-10天后的植株,再转入0.7molL-1蔗糖和含脱落酸0.5-5mgL-1的培养基上预培养3-7天;
步骤d:经过步骤c预培养3-7天后的植株在解剖镜下剥取2-3mm的茎尖,在含有0.4 molL-1蔗糖及甘油2moL-1的MS固体培养基上预培养16小时,所述MS固体培养基中不含NH4 +
步骤e:用镊子将经过步骤d预培养后的茎尖在2-4%的无钙离子海藻酸钠溶液中轻蘸,然后整齐放在5mm×20mm金属网状装载条上,每条装载条上5-10个茎尖;
步骤f:将带茎尖的装载条浸入含有0.1-0.3%氯化钙、0.4 molL-1蔗糖和2moL-1甘油的MS液体培养基中,经10-30min固定后,将装载条在无菌滤纸上吸去多余液体,所述MS液体培养基中不含NH4 +
步骤g:将固定好的带茎尖的装载条放于预处理溶液中在室温下处理20-60min后,转入玻璃化保护剂PVS2中进行2-5小时的冰浴处理,将带茎尖的装载条迅速投入液氮中保存,其中,所述预处理溶液含有0.4 molL-1蔗糖及甘油2moL-1,不含NH4 +的MS液体培养基,所述玻璃化保护剂PVS2不含NH4 +
2.根据权利要求1所述的野生稻茎尖的超低温保存方法,其特征在于,所述步骤a中的继代3个月以上无菌组培苗,剪去上部植株,留基部约3cm,根部约1cm放入不含激素的MS 培养基。
3.根据权利要求1所述的野生稻茎尖的超低温保存方法,其特征在于,步骤b中的基部新萌芽的长度为0.5-1cm。
4.一种野生稻超低温保存后的恢复培养方法,其特征在于,所述野生稻经过权利要求1所述的超低温保存方法保存过。
5.根据权利要求4所述的恢复培养方法,其特征在于,解冻时从液氮中取出带茎尖的装载条,立即放入1.2molL-1的1/2MS液体培养基中快速解冻2min,并在培养基中洗涤20min,所述1.2molL-1的1/2MS液体培养基不含NH4 +
6.根据权利要求5所述的恢复培养方法,其特征在于,将带茎尖的装载条在滤纸上吸干后置于不含激素的1/2MS培养基中暗培养1天,然后在解剖镜下将茎尖逐一由装载条剥离,转移到含BA及NAA的培养基上进行暗培养,所述含BA及NAA的培养基不含NH4 +
7.根据权利要求6所述的恢复培养方法,其特征在于,经过权利要求4处理过的茎尖再生后转入含BA及NAA的培养基光照培养,所述茎尖再生后转入含BA及NAA的培养基含NH4 +
CN201610131944.1A 2016-03-09 2016-03-09 一种野生稻茎尖的超低温保存及恢复培养方法 Expired - Fee Related CN105746351B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610131944.1A CN105746351B (zh) 2016-03-09 2016-03-09 一种野生稻茎尖的超低温保存及恢复培养方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610131944.1A CN105746351B (zh) 2016-03-09 2016-03-09 一种野生稻茎尖的超低温保存及恢复培养方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105746351A true CN105746351A (zh) 2016-07-13
CN105746351B CN105746351B (zh) 2018-06-15

Family

ID=56332776

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610131944.1A Expired - Fee Related CN105746351B (zh) 2016-03-09 2016-03-09 一种野生稻茎尖的超低温保存及恢复培养方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105746351B (zh)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106561637A (zh) * 2016-10-28 2017-04-19 上海市农业生物基因中心 一种大薯类原球茎的超低温保存及恢复培养方法
CN109089879A (zh) * 2018-07-18 2018-12-28 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所 一种利用紧穗野生稻茎为外植体获得再生植株的方法
CN109380216A (zh) * 2018-10-30 2019-02-26 上海市农业生物基因中心 一种药用野生稻茎尖的超低温保存及恢复培养方法
CN109601378A (zh) * 2018-11-30 2019-04-12 广东省生物工程研究所(广州甘蔗糖业研究所) 一种甘蔗组培苗种源的低温保存方法以及培育方法
CN110800734A (zh) * 2019-11-21 2020-02-18 上海市农业生物基因中心 一种野生稻茎尖的超低温保存方法
CN115843687A (zh) * 2022-12-06 2023-03-28 上饶师范学院 一种红芽芋包埋玻璃化超低温疗法脱毒促进试管芋膨大的方法

Non-Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
吴昀: "超低温保存种植资源的新途径—小滴玻璃化法", 《植物生理学报》 *
吴诗光: "水稻组织培养物超低温保存研究的现状", 《信阳师范学院学报(自然科学版)》 *
吴雪梅: "包埋玻璃化法超低温保存植物种质的研究进展", 《植物学通报》 *
张峰: "《细胞工程》", 31 July 2014 *
林田: "香石竹茎尖的改良小液滴玻璃化法超低温保存", 《现代园林》 *
王君晖: "水稻胚性悬浮细胞的玻璃化法超低温保存和可育植株再生", 《科学通报》 *
石茹: "马铃薯茎尖玻璃化法超低温保存及其遗传稳定性研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑》 *
章志宏等: "水稻单倍体不定芽超低温保存和植株再生及其遗传稳定性研究", 《武汉植物学研究》 *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106561637A (zh) * 2016-10-28 2017-04-19 上海市农业生物基因中心 一种大薯类原球茎的超低温保存及恢复培养方法
CN109089879A (zh) * 2018-07-18 2018-12-28 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所 一种利用紧穗野生稻茎为外植体获得再生植株的方法
CN109380216A (zh) * 2018-10-30 2019-02-26 上海市农业生物基因中心 一种药用野生稻茎尖的超低温保存及恢复培养方法
CN109601378A (zh) * 2018-11-30 2019-04-12 广东省生物工程研究所(广州甘蔗糖业研究所) 一种甘蔗组培苗种源的低温保存方法以及培育方法
CN109601378B (zh) * 2018-11-30 2021-08-24 广东省生物工程研究所(广州甘蔗糖业研究所) 一种甘蔗组培苗种源的低温保存方法以及培育方法
CN110800734A (zh) * 2019-11-21 2020-02-18 上海市农业生物基因中心 一种野生稻茎尖的超低温保存方法
CN115843687A (zh) * 2022-12-06 2023-03-28 上饶师范学院 一种红芽芋包埋玻璃化超低温疗法脱毒促进试管芋膨大的方法
CN115843687B (zh) * 2022-12-06 2023-09-01 上饶师范学院 一种红芽芋包埋玻璃化超低温疗法脱毒促进试管芋膨大的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN105746351B (zh) 2018-06-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105746351A (zh) 一种野生稻茎尖的超低温保存及恢复培养方法
Sekizawa et al. Cryopreservation of in vitro-grown shoot tips of carnation (Dianthus caryophyllus L.) by vitrification method using aluminium cryo-plates
Bajaj Regeneration of plants from potato meristems freeze-preserved for 24 months
CN103749136A (zh) 一种紫楠扦插育苗方法
CN104041412B (zh) 一种贵州半蒴苣苔的组织培养快速繁殖方法
WO2019134331A1 (zh) 一种通过胚拯救技术快速培育百山祖冷杉幼苗的方法
CN102379281A (zh) 一种香石竹的超低温保存方法以及再培养方法
CN103202225B (zh) 一种植物微茎尖超低温保存和解冻、恢复培养的方法
CN102763591B (zh) 一种白术的保存方法以及再培养方法
CN110800734A (zh) 一种野生稻茎尖的超低温保存方法
CN103004588B (zh) 老鸦瓣的组织培养与快速繁殖方法
CN104304238A (zh) 毛葡萄茎尖的包埋干燥超低温保存方法
CN104336009B (zh) 富民枳微滴玻璃化法超低温保存方法
CN108901845A (zh) 一种植物水角的离体繁殖方法
CN104686347A (zh) 一种防风愈伤组织超低温保存技术
Bajaj Casava plants from meristem cultures freeze-preserved for three years
Joshi et al. High frequency of shoot regeneration on leaf explants of Bacopa monnieri
CN110178726A (zh) 一种用于垂柳组培快繁的生根培养基和垂柳组培快繁方法
CN108668901A (zh) 蒙药贺兰山丁香茎尖再生扩繁的方法
CN102144558B (zh) 滇海水仙花四倍体植株的培育方法
CN109380216A (zh) 一种药用野生稻茎尖的超低温保存及恢复培养方法
CN106508678B (zh) 一种沙生柽柳组织培养生根方法
CN108834895A (zh) 一种百合离体快速繁殖方法
Volk et al. Strategies for improved efficiency when implementing plant vitrification techniques
CN103703976A (zh) 苦玄参扦插栽培方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20180615

Termination date: 20210309

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee