CN105722523A - 使用环保洗涤剂的病毒灭活方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供在治疗性多肽的制备工艺中使用环境相容的洗涤剂灭活产品原料流中病毒的方法。环境相容的洗涤剂在有效地灭活原料流中的病毒的同时对产品质量不产生不利影响。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求2013年11月15日提交的美国临时专利申请号61/905,075,以及2014年2月7日提交的美国临时专利申请号61/937,284的优先权,其内容在此整体引入作为参考。
技术领域
本发明提供使用洗涤剂的病毒灭活方法。
背景技术
出于各种目的,药物活性物质的生物技术生产需要辅助物质。洗涤剂用于合成阶段结束时,来裂解生产细胞、释放合成产品进行纯化,并提供抗病毒或细菌污染的保护作用。所需的产品纯化后,生长介质和用于产品纯化的缓冲液会被灭活,并排至废水。按照环境风险评价(ERA)针对洗涤剂作出的评估,这种排放可能造成环境问题。
当前在药物活性物质的生物技术生产中用于灭活病毒的方案常依赖于使用TritonX-100。TritonX-100的降解产品是辛基酚(octlyphenol),一种证明有***作用的生态毒素(ecotoxin)。对辛基酚排放规定的限值是0.01~0.1ppb。这样,在生物技术工艺中使用Triton-X可能需要使用复杂和昂贵的手段,以从废物流中除去辛基酚。在生物制剂的生产中需要使用环境相容的洗涤剂。
本文引用的所有参考文献,包括专利申请和出版物,通过引用将其全文并入。
发明内容
本发明提供在治疗性多肽的制备工艺中灭活产品原料流(feedstream)中病毒的方法,该方法包括用洗涤剂处理原料流的步骤,其中所述洗涤剂是与环境相容的。该方法保持了治疗性多肽的产品质量;例如,与使用TritonX-100的方法或无洗涤剂的方法相比较而言。
在一些实施方案中,治疗性多肽的产品质量导致产品变体(variant)的改变不超过产品原料流中总多肽的5%。在一些实施方案中,产品变体的增加不超过产品原料流中总多肽的5%。在一些实施方案中,产品变体是尺寸变体、电荷变体、氧化变体、脱酰胺变体、糖化变体或具有改变的聚糖分布(glycanprofiles)的变体。在一些实施方案中,产品变体是酸性和/或碱性产品变体。在本发明的一些实施方案中,洗涤剂处理原料流不造成多肽的片断化增加超过约5%。在一些实施方案中,洗涤剂处理原料流不造成原料流中聚集体的增加超过约5%。在其它实施方案中,洗涤剂处理原料流不导致制备工艺中多肽的产量降低超过约5%。
本发明提供在治疗性多肽的制备工艺中灭活产品原料流中病毒的方法,该方法包括用洗涤剂处理原料流的步骤,其中将环境相容的洗涤剂加入原料流至最终浓度约0.01%至约10%。在一些实施方案中,洗涤剂加入原料流至最终浓度约0.3%至约1%。在一些实施方案中,原料流经洗涤剂处理至少约1分钟到至少约48小时。在其它实施方案中,原料流经洗涤剂处理至少约15分钟到至少约3小时。在其它实施方案中,原料流经洗涤剂处理至少约1小时。在本发明的一些实施方案中,原料流在约4℃到约30℃接受洗涤剂处理。在其它实施方案中,原料流在约15℃到约20℃接受洗涤剂处理。
在本发明的一些实施方案中,洗涤剂是非离子洗涤剂或两性离子洗涤剂。在一些实施方案中,洗涤剂具有约12至约15的亲水亲油平衡值(HLB)。
在本发明的一些实施方案中,洗涤剂不包含或形成辛基酚。在一些实施方案中,洗涤剂不包含或形成过氧化物。
在本发明的一些实施方案中,包含洗涤剂的原料流是低浊度的。在一些实施方案中,向原料流添加洗涤剂不增加原料流的浊度。
在本发明的一些实施方案中,丢弃时,由洗涤剂使用导致的受纳水体中洗涤剂的预测环境浓度(PEC)在该洗涤剂的预测无效应浓度(PNEC)以下。在其它实施方案中,PEC比PNEC低。
在本发明的一些实施方案中,环境相容的洗涤剂包括烷基葡糖苷。在其它实施方案中,烷基葡糖苷是癸基葡糖苷。在其它实施方案中,环境相容的洗涤剂是醇乙氧基化物。在其它实施方案中,环境相容的洗涤剂是烷基聚乙二醇醚。在一些实施方案中,环境相容的洗涤剂具有CAS登记号CAS9005-64-5,CAS9005-65-6,CAS126-43-8,68515-73-1,CAS58846-77-8,CAS59122-55-3,CAS110615-47-9,CAS29836-26-8,CAS64366-70-7,CAS68937-66-6,CAS69227-22-1,CAS25322-68-3,CAS27252-75-1,CAS4292-10-8,CAS132778-08-6,CAS110615-47-9,CAS68515-73-1或CAS68439-46-3。
在一些实施方案中,洗涤剂包含一种或多种表面活性剂。在其它实施方案,洗涤剂包含一种或多种表面活性剂、防腐剂和螯合剂。
在某些方面,本发明提供了在治疗性多肽的制备工艺中灭活产品原料流中病毒的方法,该方法包括用环境相容的洗涤剂处理原料流的步骤,其中原料流包含收获的细胞培养物流体。在一些实施方案中,洗涤剂加入到收获的细胞培养物流体。在其它实施方案中,原料流包含捕获池或回收的产品池。在其它实施方案中,捕获池或回收的产品池是亲和色谱池。在又其它实施方案中,捕获池或回收的产品池是蛋白A池、蛋白G池或蛋白L池。在其它实施方案中,捕获池或回收的产品池是混合模式色谱池。在其它实施方案中,捕获池是CaptoAdhere池。
在本发明的一些实施方案中,环境相容的洗涤剂与消泡剂组合使用。在一些实施方案中,消泡剂是西甲硅油(simethicone)。
在一些实施方案中,本发明提供了在治疗性多肽的制备工艺中灭活产品原料流中病毒的方法,该方法包括用环境相容的洗涤剂处理原料流的步骤,其中病毒是有包膜病毒。在一些实施方案中,病毒是逆转录病毒、疱疹病毒、黄病毒、痘病毒、嗜肝DNA病毒、肝炎病毒、正粘病毒、副粘病毒,弹状病毒或披膜病毒。在一些实施方案中,原料流中洗涤剂的病毒对数减少值(LRV)大于约一。在其它实施方案中,病毒LRV大于约四。在一些实施方案中,LRV基于感染性测定法计算。在其它实施方案中,感染性测定法是噬斑测定法或TCID50测定法。
在本发明的一些实施方案中,方法还包括在加入洗涤剂后过滤原料流的步骤。在一些实施方案中,加入洗涤剂后至少约15分钟到至少约48小时过滤原料流。在其它实施方案中,加入洗涤剂后至少约1小时到至少约3小时过滤原料流。在其它实施方案中,加入洗涤剂后约1小时后过滤原料流。在一些实施方案中,过滤是超滤或深度过滤。
在本发明的一些实施方案中,加入洗涤剂后对原料流进行色谱处理。在一些实施方案中,色谱是亲和色谱、离子交换色谱、疏水相互作用色谱、羟基磷灰石色谱、或混合模式色谱中的一种或多种。在一些实施方案中,亲和色谱是蛋白A色谱、蛋白G色谱或蛋白L色谱。在其它实施方案中,离子交换色谱为阴离子交换色谱或阳离子交换色谱。在其它实施方案中,混合模式色谱是CaptoAdhere色谱。
在某些方面,本发明提供了在治疗性多肽的制备工艺中灭活产品原料流中病毒的方法,该方法包括用环境相容的洗涤剂处理原料流的步骤,其中治疗性多肽是抗体、免疫粘附素、酶、生长因子、受体、激素、调控因子、细胞因子、Fc融合多肽、抗原或结合剂。在其它实施方案中,抗体是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、双特异性抗体、或抗体片段。在一些实施方案中,治疗性多肽在哺乳动物细胞中生产。在一些实施方案中,哺乳动物细胞系是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或幼仓鼠肾(BHK)细胞、鼠杂交瘤细胞、或鼠骨髓瘤细胞。
附图说明
图1示出使用不同的混合方法对无洗涤剂的MAb1HCCF对照的洗涤剂混合浊度分析;无混合(菱形),搅拌棒(正方形)和顶部搅拌器(overheadagitator)(三角形)。
图2示出了用1%聚山梨醇酯20(左上)、1%聚山梨醇酯20和0.3%TnBP(右上)、1%聚山梨醇酯80(左下)和1%聚山梨醇酯80和0.3%TnBP(右下)处理的MAb1HCCF的洗涤剂混合浊度分析。无混合(菱形),搅拌棒(正方形)和顶部搅拌器(三角形),重棒(heavybar)(HCCF对照-无混合)。
图3示出了用1%SafeCare(左上)、1%EcosurfEH9(右上)、0.1M辛酸(左下)和1%癸基聚葡糖苷(右下)处理的MAb1HCCF的洗涤剂混合浊度分析。无混合(菱形),搅拌棒(正方形)和顶部搅拌器(三角形),重棒(HCCF对照-无混合)。
图4示出了在环境温度下与洗涤剂过夜孵育并在MAbSelectSure蛋白A上纯化后MAb3的肽图。
图5示出了在40℃保持至多达59天的不同时间点上,10%TritonCG-110稳定性样品的NMR谱。
图6示出了在40℃保持至多达59天的不同时间点上,10%EcosurfEH-9原液稳定性样品的NMR谱。
发明详述
本发明提供了在治疗性多肽的制备工艺中使用环境相容的(环保)洗涤剂灭活产品原料流中病毒的方法。使用环境相容的洗涤剂不对治疗性多肽的产品质量产生不利影响。例如,使用环境相容的洗涤剂不会导致产品变体的增加,例如但不限于,尺寸变体(包括产品片段和聚集体)、电荷变体(包括酸性和碱性变体)、脱氨基变体和糖化变体。在一些方面中,使用环境相容的洗涤剂不对工艺杂质(如CHOP、核酸、浸提的(leached)蛋白A、产品变体、内毒素、病毒污染物、细胞培养基成分等)的清除产生不利影响。
I.一般技术
本文描述或提及的技术和程序是本领域技术人员通常充分理解和按照常规方法学常规使用的,例如,在如下文献中描述的广泛应用的方法:Sambrooketal.,MolecularCloning:ALaboratoryManual3dedition(2001)ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.;CurrentProtocolsinMolecularBiology(F.M.Ausubel,etal.eds.,(2003));theseriesMethodsinEnzymology(AcademicPress,Inc.):PCR2:APracticalApproach(M.J.MacPherson,B.D.HamesandG.R.Tayloreds.(1995)),HarlowandLane,eds.(1988)Antibodies,ALaboratoryManual,andAnimalCellCulture(R.I.Freshney,ed.(1987));OligonucleotideSynthesis(M.J.Gait,ed.,1984);MethodsinMolecularBiology,HumanaPress;CellBiology:ALaboratoryNotebook(J.E.Cellis,ed.,1998)AcademicPress;AnimalCellCulture(R.I.Freshney),ed.,1987);IntroductiontoCellandTissueCulture(J.P.MatherandP.E.Roberts,1998)PlenumPress;CellandTissueCulture:LaboratoryProcedures(A.Doyle,J.B.Griffiths,andD.G.Newell,eds.,1993-8)J.WileyandSons;HandbookofExperimentalImmunology(D.M.WeirandC.C.Blackwell,eds.);GeneTransferVectorsforMammalianCells(J.M.MillerandM.P.Calos,eds.,1987);PCR:ThePolymeraseChainReaction,(Mullisetal.,eds.,1994);CurrentProtocolsinImmunology(J.E.Coliganetal.,eds.,1991);ShortProtocolsinMolecularBiology(WileyandSons,1999);Immunobiology(C.A.JanewayandP.Travers,1997);Antibodies(P.Finch,1997);Antibodies:APracticalApproach(D.Catty.,ed.,IRLPress,1988-1989);MonoclonalAntibodies:APracticalApproach(P.ShepherdandC.Dean,eds.,OxfordUniversityPress,2000);UsingAntibodies:ALaboratoryManual(E.HarlowandD.Lane(ColdSpringHarborLaboratoryPress,1999);TheAntibodies(M.ZanettiandJ.D.Capra,eds.,HarwoodAcademicPublishers,1995);和Cancer:PrinciplesandPracticeofOncology(V.T.DeVitaetal.,eds.,J.B.LippincottCompany,1993)。
II.定义
术语“洗涤剂”是指可包含长链脂肪族碱或酸的盐、或亲水性部分(例如糖)、并具有亲水和疏水特性的试剂。由于具有亲水和疏水特性,洗涤剂可以发挥特定作用。如本文所用,洗涤剂具有破坏病毒包膜和灭活病毒的能力。在一些实例中,洗涤剂可以是包含表面活性剂和一种或多种其它试剂(如螯合剂和防腐剂)的组合物。
“表面活性剂”(surfactant或surfaceactiveagent)是一种化合物,典型地(但不一定)是有机化合物,其包含疏水和亲水基团,因此半溶于有机溶剂和水性溶剂。表面活性剂可以是非离子、阳离子或阴离子的。
如本文所使用的,“环境相容的”物质是对环境引起极小有害影响的物质。例如,环境相容的物质对动物和/或植物的生命基本上是无毒的。
“预测环境浓度”或“PEC”是物质在排放到环境受纳水体中的废物中的预测浓度。例如,在治疗性蛋白质的制备中用于病毒灭活的洗涤剂的预测环境浓度是排放到环境中的废物流中洗涤剂的浓度。
“预测无效应浓度”或“PNEC”是预测可安全排放到环境中而没有有害影响的废物中物质的浓度;例如,对受纳淡水和/或海水的生物群没有有害影响。
术语“多肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用,指任何长度的氨基酸聚合物。该聚合物可以是直链或支链,其可以包含修饰的氨基酸,并且其可被非氨基酸中断。该术语还包括已经被天然地或通过介入修饰的氨基酸聚合物;例如,二硫键形成、糖基化、脂质化、乙酰化、磷酸化或任何其它操作或修饰,如与标记组分缀合。例如,含有一种或多种氨基酸类似物(包括例如,非天然氨基酸等)的多肽、以及含有本领域已知的其它修饰的多肽也包括在该定义内。如本文所用的术语“多肽”和“蛋白质”特别涵盖抗体。
“分离的多肽”是指已经从表达其的细胞或细胞培养物中回收的多肽。
如本文所使用的术语“多肽电荷变体”是指已经相对于其天然状态被修饰的多肽,所述修饰使得该多肽的电荷改变。在一些实例中,电荷变体比亲本多肽具有更强酸性;即,具有比亲本多肽更低的pI。在其它实例中,电荷变体比亲本多肽具有更强碱性;即,具有比亲本多肽更高的pI。这样的修饰可以是工程化的或是天然过程的结果,如氧化、脱酰胺化、赖氨酸残基的C末端加工、N-末端焦谷氨酸形成、和糖化。在一些实例中,多肽电荷变体是糖蛋白,其中结合至蛋白的聚糖被修饰,使得糖蛋白的电荷相比于亲本糖蛋白发生改变,例如,通过加入唾液酸或其衍生物。如本文中使用的“抗体电荷变体”是抗体或其片段,其中所述抗体或其片段已经相对于其天然状态被修饰,使得抗体或其片段的电荷发生改变。
如本文中可互换使用的,“核酸”指任何长度的核苷酸聚合物,包括DNA和RNA。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修饰的核苷酸或碱基、和/或其类似物、或可通过DNA或RNA聚合酶、或通过合成反应掺入聚合物中的任何底物。多核苷酸可以包含修饰的核苷酸,如甲基化的核苷酸和其类似物。如果存在的话,可以在聚合物组装之前或之后进行核苷酸结构的修饰。
“分离的核酸”是指且包括脱离其通常环境或从其通常环境分离的、非天然存在的、重组的或天然存在的序列。
“纯化的”多肽是指纯度已经被增加的多肽,这使得与其在天然环境中和/或在实验室条件下最初产生和/或合成和/或扩增时的存在形式相比,其以更纯的形式存在。纯度是一个相对术语,并不一定意味着绝对纯度。
“产品原料流”,或可选地,“原料流”,是供给用于工艺纯化方法的物质或溶液,其含有感兴趣的治疗性多肽并且其也可以含有各种杂质。非限制性实例可以包括,例如,收获的细胞培养物流体(HCCF)、或在一个或多个纯化工艺步骤后包含感兴趣治疗性多肽的收集池。
术语“抗体”以最广义使用,明确覆盖例如单一单克隆抗体(包括激动剂,拮抗剂和中和抗体)、具有多表位特异性的抗体组合物、多克隆抗体、单链抗体、多特异性抗体(例如,双特异性抗体)、免疫粘附素、和抗体片段,只要其展现出所需的生物学或免疫学活性即可。术语“免疫球蛋白”(Ig)与抗体在本文中可互换使用。
“抗体片段”包含全长抗体的部分,通常是其抗原结合区或可变区。抗体片段的实例包括Fab,Fab',F(ab')2,和Fv片段;单链抗体分子;双抗体(diabody);线性抗体;和由抗体片段形成的多特异性抗体。
如本文使用的术语“单克隆抗体”指从一群基本上同质的抗体获得的抗体,即,构成群的各个抗体之间除了可能少量存在的可能天然突变外是相同的。单克隆抗体具有高度特异性,针对单一抗原位点。此外,与多克隆抗体制剂(其包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体)不同,每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。除了它们的特异性外,单克隆抗体是有利的,因为其可以不被其它抗体污染而合成。修饰语“单克隆”不应被解释为需要通过任何特定的方法生产抗体。例如,在本发明中有用的单克隆抗体可以通过首先由Kohleretal.,Nature,256:495(1975)描述的杂交瘤方法来制备,或者可以使用重组DNA方法在细菌、真核动物或植物细胞中制备(参见,例如,美国专利号4,816,567)。“单克隆抗体”例如,也可以使用在Clacksonetal.,Nature,352:624-628(1991)和Marksetal.,J.Mol.Biol.,222:581-597(1991)中描述的技术从噬菌体抗体文库中分离。
本文中单克隆抗体包括:“嵌合”抗体,其中重链和/或轻链的一部分与来自特定物种或属于特定抗体类或亚类的抗体中的相应序列相同或同源,而链的其余部分与来自另一物种或属于另一抗体类或亚类的抗体中的相应序列相同或同源;以及此类抗体的片段(只要其展现出所需的生物学活性)(参见美国专利号4,816,567;和Morrisonetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984))。本文中感兴趣的嵌合抗体包括“灵长化”抗体(primatizedantibody),其包含来自非人灵长动物(例如,旧世界猴、猿等)的可变结构域抗原结合序列和人恒定区序列。
“人源化”抗体是非人(例如,啮齿类动物)抗体的形式,其是嵌合抗体,包含来自非人抗体的最少序列。就大部分而言,人源化抗体是人免疫球蛋白(受体抗体),其中受体的高变区残基被来自非人物种(供体抗体)的具有所需的抗体特异性、亲和性和能力的高变区残基取代,所述非人物种如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物。在一些情况下,人免疫球蛋白的构架区(FR)残基被相应的非人残基取代。此外,人源化抗体可包含未在受体抗体或供体抗体中出现的残基。这些修饰是为了进一步精化抗体的性能。一般,人源化抗体包含至少一个,通常两个可变结构域,的基本上全部,其中全部或基本上全部的高变环对应于非人免疫球蛋白的那些序列,而全部或基本上全部的FR是人免疫球蛋白序列。人源化抗体任选地还可以包含免疫球蛋白恒定区(Fc),典型地人免疫球蛋白恒定区,的至少一部分。对于更多详情,参见Jonesetal.,Nature321:522-525(1986);Riechmannetal.,Nature332:323-329(1988);andPresta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)。
“杂质”指的是与所需多肽产品不同的物质。杂质包括但不限于:宿主细胞物质,如CHOP;浸提的蛋白A;核酸;所需多肽的变体,尺寸变体,片段,聚集体或衍生物;其他多肽;内毒素;病毒污染物;细胞培养基成分等。
“超滤”是一种膜过滤形式,其中流体静压迫使流体通过半透膜。悬浮固体和高分子量溶质被保留,而水和低分子量溶质通过膜。在一些实例中,超滤膜具有1至100nm范围的孔径大小。术语“超滤膜”和“超滤过滤器”可以互换使用。
“病毒保留过滤器”、“病毒过滤器”、“病毒膜”或“病毒保留膜”是一种基于大小从含有病毒颗粒的水溶液中除去病毒的超滤过滤器/膜。特别地,病毒保留膜具有足以保留病毒、同时仍允许所需多肽产品通过的孔径。
如本文所用的术语“结垢”是指不想要的物质在工艺设备的表面上聚集和形成。结垢可表征为组合的、非稳态、动量、质量和热传递问题,其中也发生化学、溶解,腐蚀和生物学过程。结垢可由沉淀,即,磷酸钙沉淀导致。
如本文所用,“外来剂”包括病毒和细菌(包括可通过灭菌级过滤器的细菌)。“传染物”是“外来剂”的一种。
应当理解,本文描述的本发明的方面和实施方案涵盖“包含”方面和实施方案的情形,“由方面和实施方案组成”的情形、和“基本上由方面和实施方案组成”的情形。
对于本文中使用,除非明确地指出,否则使用的术语“一”(“a”或“an”)或类似术语是指一个或多个。
本文提及的“约”某值或参数包括(并且描述)涉及该值或参数本身的实施方案。例如,提及“约X”的描述包括“X”的描述。数值范围包括定义该范围的数字。
III.本发明的方法
本发明提供了在治疗性多肽的制备工艺中使用环境相容的洗涤剂灭活产品原料流中病毒的方法。使用环境相容的洗涤剂不对治疗性多肽的产品质量产生不利影响,而有效地灭活原料流中的病毒污染物。例如,使用环境相容的洗涤剂不导致产品变体的增加,例如,但不限于,包括产品片段和聚集体的尺寸变体、包括酸性和碱性变体的电荷变体、脱氨基变体和糖化变体。
典型地,治疗性多肽的制备工艺包括在宿主细胞中表达多肽。在一些实例中,裂解宿主细胞以释放多肽。在其它实例中,多肽分泌到介质中。可以对含有所需多肽的收获的细胞培养物流体进行澄清和一种或多种色谱处理,以从杂质纯化所需多肽。色谱可以包括流通色谱,其中所需产品流动通过色谱而杂质被色谱保留;和/或结合和洗脱色谱,其中所需产品被色谱保留而杂质流动通过色谱。在工艺中某点上,可以过滤原料流以除去病毒。原料流可以经过超滤和/或渗滤步骤以浓缩所需多肽和将所需多肽配制成药物制剂。使用本发明的环境相容的洗涤剂灭活病毒的方法,可在制备工艺中的任何步骤进行。在本发明的一些实施方案中,通过环境相容的洗涤剂处理HCCF,灭活病毒。在本发明的其它方法中,通过用环境相容的洗涤剂处理捕获池或回收的产品池,灭活病毒。捕获池和/或回收的产品池是在产品纯化的分离步骤如色谱、离心、过滤等中包含所需产品的原料流的分配(partition)。在本发明的其它方法中,在对原料流实施病毒过滤步骤之前,通过用环境相容的洗涤剂处理产品原料流以灭活病毒。在本发明的其它方法中,在对原料流实施病毒过滤步骤之后,通过用环境相容的洗涤剂处理产品原料流以灭活病毒。
本发明提供了在治疗性多肽的制备工艺中使用环境相容的洗涤剂灭活产品原料流中病毒的方法,其中治疗性多肽的产品质量在该工艺中得到保持,同时病毒污染物被有效灭活。在本发明的一些实施方案中,在治疗性多肽的制备工艺中用环境相容的洗涤剂处理原料流以灭活原料流中的病毒,不增加制备工艺中产品变体在产品原料流的总蛋白中所占的量;例如,与未用洗涤剂或用TritonX-100的制备工艺相比而言。在一些实施方案中,产品变体是尺寸变体、电荷变体、氧化变体、脱酰胺变体、糖化变体或具有改变的聚糖分布的变体中的任何一种或多种。在本发明的一些实施方案中,产品变体是尺寸变体。尺寸变体包括其中产品比所需产品小的变体;例如,作为产品降解的结果。在其它实例中,尺寸变体比所需产品大;例如,作为所需产品聚集的结果。在一些实施方案中,产品聚集是原料流中两个或更多个产品多肽的聚集。在一些实施方案中,产品聚集是产品多肽与原料流中其它多肽的聚集。本领域技术人员可以容易地测量尺寸变体的形成。例如,可通过尺寸排阻色谱、通过凝胶电泳、或通过容易确定多肽大小的其它方法,确定原料流中产品多肽的尺寸变体的存在。在本发明的一些实施方案中,在治疗性多肽的制备工艺中用环境相容的洗涤剂处理原料流以灭活原料流中的病毒,导致产品尺寸变体的变化超过产品原料流中总蛋白的约5%;例如,与没有用洗涤剂或用TritonX-100的制备工艺相比。在一些实施方案中,与没有用环境相容的洗涤剂(例如,没有用洗涤剂或用TritonX-100)的制备工艺相比,环境相容的洗涤剂导致产品尺寸变体的增加低于产品原料流中总蛋白的约10%,9%,8%,7%,6%,5%,4%,3%,2%,1%,0.1%中的任何一个。
本发明提供在治疗性多肽的制备工艺中使用环境相容的洗涤剂灭活产品原料流中病毒的方法,其中在该工艺中保持了治疗性多肽的产品质量,同时有效灭活病毒污染物。在本发明的一些实施方案中,在治疗性多肽的制备工艺中用环境相容的洗涤剂处理原料流以灭活原料流中的病毒,不增加制备工艺中产品变体的量;例如,与没有用洗涤剂或用TritonX-100的制备工艺相比。在一些实施方案中,变体是电荷变体。多肽的电荷变体可以包括多肽的酸性变体和亲本多肽的碱性变型。酸性变体的实例,即pI低于亲本多肽pI的变体,包括但不限于,其中一个或多个谷氨酰胺和/或天冬酰胺残基已被脱酰胺的多肽。碱性多肽变体的实例,即pI高于亲本多肽pI的变体,包括但不限于,其中天冬氨酸残基已被修饰为琥珀酰亚胺部分(moiety)的变体。分析多肽电荷变体的方法是本领域中公知的;例如,通过pH介导的离子交换色谱或通过等电聚焦分析电荷异质性(例如,icIEF)。在一些实例中,在加入洗涤剂之后,在分析治疗性多肽的电荷变体之前,对产品治疗性多肽进行一个或多个色谱处理。例如,在洗涤剂处理之后,在分析电荷变体之前(例如,pH介导的离子交换色谱),可对抗体实施亲和色谱如蛋白A色谱。在本发明的一些实施方案中,在治疗性多肽的制备工艺中用环境相容的洗涤剂处理原料流以灭活原料流中的病毒,导致产品变体量的改变超过产品原料流中总蛋白的约5%;例如,与没有用洗涤剂或用TritonX-100的制备工艺相比。在一些实施方案中,与没有用环境相容的洗涤剂(例如,没有用洗涤剂或用TritonX-100)的制备工艺相比,环境相容的洗涤剂导致产品变体量的增加低于产品原料流中总蛋白的约10%,9%,8%,7%,6%,5%,4%,3%,2%,1%,0.1%中的任一个。
在本发明的一些实施方案中,变体是脱酰胺变体。如上所讨论的,脱酰胺变体包括其中一个或多个谷氨酰胺和/或天冬酰胺残基已脱酰胺的多肽。在一些实施方案中,产品多肽的脱酰胺导致多肽电荷的改变。分析多肽脱酰胺变体的方法是本领域中公知的;例如,通过pH介导的离子交换色谱或等电聚焦。在一些实例中,在加入洗涤剂后,在分析治疗性多肽的脱酰胺变体之前,对产品治疗性多肽实施一个或多个色谱。例如,在洗涤剂处理后,在分析脱酰胺变体(例如,pH介导的离子交换色谱或等电聚焦)之前,可以对抗体进行亲和色谱如蛋白A色谱。在本发明的一些实施方案中,在治疗性多肽的制备工艺中用环境相容的洗涤剂处理原料流以灭活原料流中的病毒,导致产品脱酰胺变体的变化超过产品原料流中总蛋白的约5%;例如,与没有用洗涤剂或用TritonX-100的制备工艺相比。在一些实施方案中,与没有用环境相容的洗涤剂(例如,没有用洗涤剂或用TritonX-100)的制备工艺相比,环境相容的洗涤剂导致产品脱酰胺变体的增加低于产品原料流中总蛋白的约10%,9%,8%,7%,6%,5%,4%,3%,2%,1%,0.1%中的任一个。
在本发明的一些实施方案中,变体是氧化变体。氧化变体包括其中一个或多个氧反应性氨基酸残基(如甲硫氨酸、半胱氨酸和酪氨酸)已被氧化的多肽。在一些实施方案中,产品多肽的氧化导致多肽电荷的改变。分析多肽氧化变体的方法是本领域中公知的。例如,可以通过LC-质谱测定给定多肽中的氧化水平。在一些实例中,在加入洗涤剂之后,在分析治疗性多肽的氧化变体之前,对产品治疗性多肽进行一个或多个色谱处理。例如,在洗涤剂处理之后,在分析氧化变体之前,可对抗体实施亲和色谱如蛋白A色谱。在本发明的一些实施方案中,在治疗性多肽的制备工艺中用环境相容的洗涤剂处理原料流以灭活原料流中的病毒,导致产品氧化变体的变化超过产品原料流中总蛋白的约5%;例如,与没有用洗涤剂或用TritonX-100的制备工艺相比。在一些实施方案中,与没有用环境相容的洗涤剂(例如,没有用洗涤剂或用TritonX-100)的制备工艺相比,环境相容的洗涤剂导致产品氧化变体的增加低于产品原料流中总蛋白的约10%,9%,8%,7%,6%,5%,4%,3%,2%,1%,0.1%中的任一。
在本发明的一些实施方案中,在治疗性多肽的制备工艺中用环境相容的洗涤剂处理原料流以灭活原料流中的病毒,不改变治疗性多肽产品的糖化;例如,与没有用洗涤剂或用TritonX-100的制备工艺相比。糖化是通过形成各种类型的共价加合物而产生酸性变体的一种机制,例如这样的糖化,其中在制备过程中在富含葡萄糖的培养基中,或在储存期间在制剂中存在还原糖时,葡萄糖或乳糖可以与赖氨酸残基的伯胺反应(LyubarskayY,etal.,(2006)AnalBiochem.348:24–39;HuangL,etal.,(2005)AnalChem.77:1432–1439)。糖化物质的表征可通过肽图分析、液相色谱-质谱(LC-MS)和串联质谱(MS/MS)测序技术进行。在一些实例中,在加入洗涤剂之后,在表征糖化物质之前,对产品治疗性多肽进行一个或多个色谱处理。例如,在洗涤剂处理之后,在糖化分析(例如LC-MS或MS/MS)之前,可对糖化的抗体实施亲和色谱如蛋白A色谱。在一些实施方案中,在治疗性多肽的制备工艺中用环境相容的洗涤剂灭活原料流中的病毒,不改变治疗性多肽的糖化。在一些实施方案中,与使用TritonX-100的治疗性多肽制备工艺相比、或与不使用洗涤剂的治疗性多肽制备工艺相比,亲本多肽糖化的改变不超过约5%。在一些实施方案中,与没有用环境相容的洗涤剂(例如,没有用洗涤剂或用TritonX-100)的制备工艺相比,环境相容的洗涤剂导致产品糖化的改变低于约10%,9%,8%,7%,6%,5%,4%,3%,2%,1%,0.1%中的任一。
在本发明的一些实施方案中,在治疗性多肽的制备工艺中用环境相容的洗涤剂处理原料流以灭活原料流中的病毒,不导致治疗性多肽产品糖化模式的改变;例如,与没有用洗涤剂或用TritonX-100的制备工艺相比。在本发明的一些实施方案中,产品变体是糖化变体。糖基化是一个经常观察到的翻译后修饰,其中一个或多个单糖单元被连接至多肽。聚糖的三个主要类型是N连接、O连接和糖基磷脂酰肌醇。糖基化的治疗性多肽的例子包括在Fc链的Asn-297存在单个保守的N连接糖基化位点的单克隆抗体。在此位点的聚糖结构在补体激活和受体亲和性中起作用。在本发明的一些实施方案中,在治疗性多肽的制备工艺中将环境相容的洗涤剂用于灭活产品原料流中的病毒的应用,不改变治疗性多肽的糖化模式。例如,确定多肽(如抗体)糖基化模式的方法是本领域中公知的;例如,参见chem.agilent.com/Library/applications/5990-9774EN.pdf万维网。在一些实例中,加入洗涤剂后,在表征治疗性多肽的糖化模式之前,对产品治疗性多肽进行一个或多个色谱。例如,可以在洗涤剂处理后,在糖化分析(例如LC-MS或MS/MS)之前,对糖化抗体实施亲和色谱如蛋白A色谱。在一些实施方案中,与使用TritonX-100的治疗性多肽制备工艺相比、或与不使用洗涤剂的治疗性多肽制备工艺相比,治疗性多肽(如抗体)糖化的改变不超过约5%。在一些实施方案中,与没有用环境相容的洗涤剂(例如,没有用洗涤剂或用TritonX-100)的制备工艺相比,环境相容的洗涤剂导致产品糖化模式的改变低于约10%,9%,8%,7%,6%,5%,4%,3%,2%,1%,0.1%中的任何。
在本发明的一些实施方案中,在治疗性多肽的制备工艺中用环境相容的洗涤剂处理原料流以灭活原料流中的病毒,不降低制备工艺中的产品产量。例如,与使用TritonX-100灭活病毒的治疗性多肽制备工艺相比、或与不使用洗涤剂的治疗性多肽制备工艺相比,环境相容的洗涤剂对原料流的处理不降低制备工艺中治疗性多肽的产品产量。在一些实施方案中,与使用TritonX-100的治疗性多肽制备工艺相比、或与不使用洗涤剂的治疗性多肽制备工艺相比,治疗性多肽(如抗体)产品产量的降低不超过约5%。在一些实施方案中,与没有用环境相容的洗涤剂(例如,没有用洗涤剂或用TritonX-100)的制备工艺相比,环境相容的洗涤剂导致产品产量的降低低于约10%,9%,8%,7%,6%,5%,4%,3%,2%,1%,0.1%中的任何。
在本发明的一些实施方案中,在治疗性多肽的制备工艺中用环境相容的洗涤剂处理原料流以灭活原料流中的病毒,不改变制备工艺中工艺杂质(processimpurities)的清除。例如,与使用TritonX-100灭活病毒的治疗性多肽制备工艺相比、或与不使用洗涤剂的治疗性多肽制备工艺相比,环境相容的洗涤剂对原料流的处理不改变制备工艺中杂质的清除。在一些实施方案中,使用环境相容的洗涤剂不改变制备工艺的特定步骤(如色谱步骤、过滤步骤、浓缩步骤等)中工艺杂质的清除。在一些实施方案中,使用环境相容的洗涤剂不改变治疗性多肽的整个制备工艺中工艺杂质的清除。工艺杂质包括CHOP、核酸、浸提的蛋白A、所需多肽以外的多肽、内毒素、病毒污染物、细胞培养基组分、和所需多肽的变体、片段、聚集物或衍生物。
在一些实施方案中,本发明提供在治疗性多肽的制备工艺中使用环境相容的洗涤剂灭活产品原料流中病毒的方法,其中洗涤剂以约0.01%至约10%的最终浓度加入到原料流。在一些实施方案中,洗涤剂以约0.3%至约1%的最终浓度加入到原料流。在一些实施方案中,洗涤剂以约0.3%的最终浓度加入到原料流。在一些实施方案中,洗涤剂以大于约0.1%,0.2%,0.3%,0.4%,0.5%,0.6%,0.7%,0.8%,0.9%,1%,2%,3%,4%,5%,6%,7%,8%,9%或10%的最终浓度加入到原料流。在一些实施方案中,治疗性多肽的产品质量得以保持。在一些实施方案中,病毒污染物被环境相容的洗涤剂有效灭活。
在一些实施方案中,本发明提供在治疗性多肽的制备工艺中使用环境相容的洗涤剂灭活产品原料流中病毒的方法,其中原料流用洗涤剂处理约1分钟至约48小时。在一些实施方案中,原料流用洗涤剂处理约15分钟至约3小时。在一些实施方案中,洗涤剂以约0.3%至约1%的最终浓度加入到原料流。在一些实施方案中,原料流经洗涤剂处理约1小时。在一些实施方案中,原料流用洗涤剂处理超过任何下述时间:约1分钟,5分钟,15分钟,30分钟,45分钟,1小时,2小时,3小时,4小时,5小时,6小时,9小时,12小时,16小时,20小时,24小时,30小时,36小时,42小时,或48小时。在一些实施方案中,原料流经洗涤剂处理大约任何下述时间:约1分钟至5分钟,5分钟至15分钟,15分钟至30分钟,30分钟至45分钟,45分钟至1小时,1小时至2小时,2小时至3小时,3小时至4小时,4小时至5小时,5小时至6小时,6小时至9小时,9小时至12小时,12小时至16小时,16小时至20小时,20小时至24小时,24小时至30小时,30小时至36小时,36小时至42小时,或42小时至48小时。在一些实施方案中,治疗性多肽的产品质量得以保持。在一些实施方案中,病毒污染物被环境相容的洗涤剂有效灭活。
在一些实施方案中,本发明提供在治疗性多肽的制备工艺中使用环境相容的洗涤剂灭活产品原料流中病毒的方法,其中原料流在约4℃至约30℃用洗涤剂处理。在一些实施方案中,原料流在约10℃至约25℃用洗涤剂处理。在一些实施方案中,原料流在约15℃至约20℃用洗涤剂处理。在一些实施方案中,原料流在约20℃用洗涤剂处理。在一些实施方案中,原料流在约环境温度下用洗涤剂处理。在一些实施方案中,原料流在约4℃,5℃,10℃,15℃,20℃,25℃,或30℃用洗涤剂处理。在一些实施方案中,治疗性多肽的产品质量得以保持。在一些实施方案中,病毒污染物被环境相容的洗涤剂有效灭活。
在一些实施方案中,本发明提供在治疗性多肽的制备工艺中使用环境相容的洗涤剂灭活产品原料流中病毒的方法,其中包含环境相容的洗涤剂的原料流是低浊度的。在一些实施方案中,本发明提供在治疗性多肽的制备工艺中使用环境相容的洗涤剂灭活产品原料流中病毒的方法,其中洗涤剂的添加不影响原料流的浊度;例如,与没有洗涤剂的制备工艺相比,或与其中使用TritonX-100灭活病毒的制备工艺相比。确定原料流浊度的方法是本领域中公知的;例如,使用HP分光仪和1cm光程长度的比色杯。浊度计算为从340-360nm的平均吸光度。在一些实施方案中,与使用TritonX-100的治疗性多肽制备工艺相比或与没有洗涤剂的治疗性多肽制备工艺相比,原料流浊度的增加不超过约5%。在一些实施方案中,与没有用环境相容的洗涤剂(例如,没有用洗涤剂或用TritonX-100)的制备工艺相比,环境相容的洗涤剂导致原料流浊度的增加低于约10%,9%,8%,7%,6%,5%,4%,3%,2%,1%,0.1%中的任何。
在一些实施方案中,本发明提供在治疗性多肽的制备工艺中使用环境相容的洗涤剂灭活产品原料流中病毒的方法,其中原料流是收获的细胞培养物流体。在一些实施方案中,原料流包含捕获池或回收的产品池。在一些实施方案中,捕获池或回收的产品池是亲和色谱池。在一些实施方案中,捕获池或回收的产品池是蛋白A池、蛋白G池或蛋白L池。在一些实施方案中,捕获池或回收的产品池是混合模式色谱池。在一些实施方案中,捕获池是CaptoAdhere池。
在一些实施方案中,本发明提供在治疗性多肽的制备工艺中使用环境相容的洗涤剂灭活产品原料流中病毒的方法,其中加入环境相容的洗涤剂后过滤原料流。在一些实施方案中,加入洗涤剂后至少约15分钟到至少约48小时过滤原料流。在一些实施方案中,加入洗涤剂后至少约1小时到至少约3小时过滤原料流。在一些实施方案中,加入洗涤剂后至少约1小时后过滤原料流。在一些实施方案中,加入洗涤剂后约15分钟,30分钟,45分钟,1小时,2小时,3小时,4小时,5小时,6小时,12小时,18个小时,20小时,24小时,30小时,36小时,42个小时,或48小时中之任一后过滤原料流。在一些实施方案中,过滤是超滤或深度过滤。
在一些实施方案中,本发明提供在治疗性多肽的制备工艺中使用环境相容的洗涤剂灭活产品原料流中病毒的方法,其中加入洗涤剂后原料流经色谱处理。在一些实施方案中,色谱为亲和色谱、离子交换色谱(例如,阳离子交换和/或阴离子交换)、疏水相互作用色谱、羟基磷灰石色谱、或混合模式色谱中的一种或多种。亲和色谱材料的实例包括但不限于用蛋白A或蛋白G衍生的色谱材料,亲和色谱材料的实例包括但不限于,Prosep-VA,Prosep-VAUltraPlus,蛋白A琼脂糖fastflow,Tyopearl蛋白A,MAbSelect,MAbSelectSuRe和MAbSelectSuReLX。在上述的一些实施方案中,亲和色谱材料是亲和色谱柱。在上述的一些实施方案中,亲和色谱材料是亲和色谱膜。阴离子交换色谱材料的例子包括但不限于PorosHQ50,PorosPI50,PorosD,MustangQ,Q琼脂糖FF和DEAE琼脂糖。阳离子交换材料的例子包括但不限于MustangS,SartobindS,SO3Monolith,SCeramicHyperD,PorosXS,PorosHS50,PorosHS20,SPSFF,SP-琼脂糖XL(SPXL),CM琼脂糖FastFlow,CaptoS,FractogelSeHiCap,FractogelSO3或FractogelCOO。HIC色谱材料的例子包括但不限于Toyopearl己基650,Toyopear丁基650,Toyopearl苯基650,Toyopearl醚650,Source,Resource,琼脂糖Hi-Trap,辛基琼脂糖,苯基琼脂糖。羟基磷灰石色谱材料的实例包括但不限于HAUltrogel和CHT羟基磷灰石。混合模式色谱材料的实例包括但不限于CaptoAdhere,QMA,MEPHypercel,HEAHypercel,PPAHypercel,CaptoMMC。
环境相容的洗涤剂
本发明提供在治疗性多肽的制备工艺中使用环境相容的(环保的)洗涤剂灭活产品原料流中病毒的方法。使用环境相容的洗涤剂不对治疗性多肽的产品质量产生不利影响。在一些实施方案中,洗涤剂是非离子洗涤剂或两性离子洗涤剂。
在一些实施方案中,洗涤剂具有约12至约15的亲水亲油平衡值(HLB)。在一些实施方案中,HLB为约12至约14,约12至约13,约13至约14,约14至约15,约12,约13,约14,或约15中的任意。
在一些实施方案中,本发明提供了在治疗性多肽的制备工艺中使用环境相容的洗涤剂组合消泡剂灭活产品原料流中病毒的方法。消泡剂是本领域中公知的。在一些实施方案中,消泡剂是西甲硅油。
在本发明的一些实施方案中,环境相容的洗涤剂是烷基葡糖苷。在其它实施方案中,烷基葡糖苷是癸基葡糖苷。在其它实施方案中,环境相容的洗涤剂是醇乙氧基化物。在又其它实施方案中,环境相容的洗涤剂是烷基聚乙二醇醚。
在一些实施方案中,本发明提供了在治疗性多肽的制备工艺中使用环境相容的洗涤剂灭活产品原料流中病毒的方法,其中环境相容的洗涤剂是Tween20(CAS登记号9005-64-5)、Tween80(CAS登记号9005-65-6)、TBP(CAS登记号126-43-8)、癸基聚葡糖苷(CAS登记号68515-73-1)、癸基β-D-吡喃葡糖苷(CAS登记号58846-77-8)、正癸基β-D-吡喃葡糖苷(CAS登记号59122-55-3)、十二烷基葡糖苷(CAS登记号110615-47-9)、正辛基β-D-吡喃葡糖苷(CAS登记号29836-26-8)、EcoSurfEH-6(CAS登记号64366-70-7)、EcoSurfEH-9(CAS登记号64366-70-7)、EcoSurfSA-7或EcoSurfSA-9(CAS登记号68937-66-6,CAS登记号69227-22-1,CAS登记号25322-68-3)、Natsurf265(CAS登记号27252-75-1)、Lubrizol(CAS登记号4292-10-8)、APG325N(CAS登记号132778-08-6)、MackolDG(CAS登记号110615-47-9)、TritonCG110(CAS登记号68515-73-1)、或Tomodol900(CAS登记号68439-46-3)。
确定洗涤剂在本发明的制备工艺的条件下是否是环境相容的方法,是本领域中公知的。例如,经济合作与发展组织提供了用于测试化学品安全性的指南。这些指南可以见于,例如,万维网oecd.org/chemicalsafety/testing/oecdguidelinesforthetestingofchemicals.htm。这些指南的例子在下面列出。
大型溞(Daphniamagna)繁殖试验-OECD211
该试验的主要目的是评估化学品对大型溞繁殖产量的影响。为了该目的,在试验开始时年龄小于24小时的年轻雌性溞(亲本动物)被暴露于以一系列浓度加入到水中的试验物质。试验持续时间是21天。在试验结束时,评估产生的活后代的总数。亲本动物的繁殖产量可以用其它方式来表示(例如,从观察到后代的第一天起每天每只动物产生的活后代的数量),但除了应报告这些之外,也应报告在试验结束时产生的活后代的总数。由于与其它OECD无脊椎动物繁殖试验指南相比该半静态试验的特定设计,也可以计数由每个亲本动物个体产生的活后代的数量。这使得,与其它OECD无脊椎动物繁殖试验不同,如果亲本动物在试验期间意外地和/或无意地死亡,其后代产量可以从数据评估中排除。因此,如果在暴露的重复试验中发生亲本死亡,应该考虑该死亡是否遵循浓度-反应模式,例如,是否反应相对试验物质浓度具有正斜率的显著回归(对此可使用统计学检验如Cochran-Armitage趋势检验)。如果死亡不遵循浓度-反应模式,则那些亲本死亡的重复试验应从试验结果的分析中排除。如果死亡遵循浓度-反应模式,则亲本死亡应指定为试验物质的影响,重复试验不应从分析中排除。如果亲本动物在试验过程中死亡,即,由于操作不当或事故意外死亡,或由于与试验物质的影响不相关的不明原因事件而无意死亡,或证明是雄性,则重复试验被从分析中排除。试验物质对繁殖产量的毒性作用可以表示为ECx——其中通过非线性回归将数据拟合到合适的模型来估计导致繁殖产量降低x%的浓度值,或者表示为NOEC/LOEC值(OECD2006,EnvironmentalHealthandSafetyPublications,SeriesonTestingandAssessmentNumber54.OECD,Paris)。试验浓度优选应当括上最低使用效果浓度(例如,EC10)——这意味着该值通过内插而非外推计算。
淡水藻(FreshwaterAlga)和蓝藻(Cyanobacteria)生长抑制试验-OECD201
本试验的目的是确定物质对淡水微藻和/或蓝藻生长的影响。指数生长的试验生物体在分批培养中暴露于试验物质通常72小时的时间。尽管相对短的试验持续时间,但能够评估对几代的影响。
***反应是在暴露于各种浓度试验物质的一系列藻培养物(试验单元)中的生长减少。反应评估为暴露浓度的函数,与重复试验的未暴露对照培养物的平均生长比较。为了充分表示对毒性作用的***反应(最佳灵敏度),培养物被允许在养分充足并持续光照足够长时间的条件下无限制指数生长,以测量比生长率的降低。
从作为时间的函数的藻生物量测量结果可以定量生长和生长抑制。藻生物量被定义为每体积的干重,例如,mg海藻/L试验溶液。然而,干重是难以测量的,因此可使用替代参数。这些替代参数中,细胞计数是最常用的。其它替代参数包括细胞体积、荧光、光密度等。应当知道测得的替代参数和生物量之间的转换系数。
试验终点是生长的抑制,表示为在暴露期间生物量的对数增加(平均比生长率)。从在一系列的试验溶液中记录的平均比生长率,可以确定造成指定的x%生长率抑制(例如50%)的浓度,并表示为ErCx(例如,ErC50)。
本指南中使用的另外一个反应变量是产量,对于满足某些国家的特定管理规定,其可能是需要的。它被定义为在暴露期间结束时的生物量减去暴露期间开始时的生物量。从在一系列的试验溶液中记录的产量,可以计算造成指定的x%产量抑制(例如50%)的浓度,并表示为EyCx(例如,EyC50)。
此外,可以统计学确定最低可见效应浓度(LOEC)和无可见效应浓度(NOEC)。
溞属物种(Daphniasp.),急性活动抑制试验(acuteimmobilizationassay)-OECD202
在试验开始时年龄小于24小时的年轻溞暴露于一系列浓度的试验物质持续48小时。在24小时和48小时记录活动抑制,并与对照值进行比较。分析结果,以计算在48小时的EC50。可选的确定在24小时的EC50。
鱼,急性毒性试验-OECD203
鱼暴露于试验物质,优选持续96小时。在24,48,72和96小时记录死亡。
活性污泥,呼吸抑制试验(碳和氨氧化)-OECD209
在含有氧电极的封闭小池内测量3小时的接触时间后用人造污水饲喂的活性污泥样品的呼吸速率。考虑到现实的暴露情景,更长的接触时间可能是适合的。如果试验物质迅速降解(例如,通过水解作用非生物地降解)或者是挥发性的,浓度不能充分维持,则还可以使用一个较短的暴露时间,例如30分钟。应当在暴露的当天使用合适的参考物质检查每批活性污泥的灵敏度。该试验通常用于确定试验物质的ECx(例如,EC50)和/或无可见效应浓度(NOEC)。
由氧化有机碳的微生物引起的摄氧抑制可以与由氧化铵的微生物引起的摄氧抑制分开表示,通过在不存在和存在N-烯丙基硫脲时测量摄氧率来确定,N-烯丙基硫脲是第一阶段硝化细菌将铵根氧化为亚硝酸根的特异性抑制剂。在这种情况下,通过在存在和不存在特异性抑制剂N-烯丙基硫脲时,比较存在试验物质时的摄氧率和不含试验物质的相应对照的平均摄氧率,计算摄氧率的抑制百分比。
任何来自非生物过程的摄氧量可以通过确定试验物质、人造污水介质和水混合物(省去活性污泥)中的速率来检测。
快速生物降解性(readybiodegradability)-OECD301
向矿质介质中测试物质的溶液或悬浮液接种,并在黑暗中或在散射光中在有氧条件下孵育。由于接种物导致的测试溶液中DOC的量,与由于测试物质导致的有机碳的量相比,应保持尽可能低。通过运行含接种物但没有测试物质的平行空白,允许测定接种物的内源活性,但化学品存在时细胞的内源性活性将不完全与该内源对照的匹配。平行运行参考化合物来检查程序的操作。
通常,降解后测定参数,如DOC、二氧化碳产量和摄氧量,以足够频繁的时间间隔采取测量值以允许识别生物降解的开始和结束。使用自动呼吸测定仪,测量是连续的。除了其它参数外有时还测量DOC,但通常仅在测试的开始和结束时进行。也可以使用特定的化学分析来评估测试物质的最初降解和确定所形成的任何中间物质的浓度。
通常情况下,测试持续28天。然而,测试可以在28天前结束,即,一旦生物降解曲线对于至少三次测量值已经达到平台。当曲线显示降解已开始但到28天尚未达到平台时,测试也可以延长超过28天,但在这种情况下,化学品不会被归类为容易生物降解的。
在一些实施方案中,本发明提供了在治疗性多肽的制备工艺中使用环境相容的洗涤剂灭活产品原料流中病毒的方法,其中洗涤剂不包含或形成过氧化物。确定洗涤剂的过氧化物含量的方法在本领域中是公知的。例如,EMDMillipore的比色过氧化物试验可用于确定洗涤剂的过氧化物水平。在本发明的一些实施方案中,如果洗涤剂中的过氧化物水平低于约0.5ppm,0.4ppm,0.3ppm,0.2ppm,或0.1ppm中的任意,则洗涤剂是不含过氧化物的。
在一些实施方案中,本发明提供了在治疗性多肽的制备工艺中使用环境相容的洗涤剂灭活产品原料流中病毒的方法,其中洗涤剂不包含或形成辛基酚。辛基酚可以是TritonX-100的降解产品。在本发明的一些实施方案中,被排放到废水***中的原料流包含浓度小于约0.1μg/L,0.09μg/L,0.08μg/L,0.07μg/L,0.06μg/L,0.05μg/L,0.04μg/L,0.03μg/L,0.02μg/L,和0.01μg/L中的任意的辛基酚。本领域技术人员将认识到,废水***中洗涤剂对环境的影响可能随废物排放到淡水或海水中而不同。例如,在一些实施方案中,待排放到废水***中的原料流,对于淡水排放,包含浓度小于约0.1μg/L的辛基酚,而对于海水排放,包含浓度小于约0.01μg/L的辛基酚。
在本发明的一些实施方案中,在治疗性多肽的制备工艺后废物流中洗涤剂的预测环境浓度(PEC)是排放到环境受纳水体中的废物中洗涤剂的预测浓度。在本发明的一些实施方案中,预测无效应浓度(PNEC)是安全排放到环境中且没有有害影响(对例如,受纳淡水和/或海水的生物群)的废物中洗涤剂的预测浓度。在本发明的一些实施方案中,PEC小于PNEC。在本发明的一些实施方案中,PEC大于如下之任一:PNEC的约0.5倍,1倍,2倍,3倍,4倍,5倍,6倍,7倍,8倍,9倍,10倍,20倍,30倍,40倍,50倍,或100倍。
在本发明的一些实施方案中,环境相容的洗涤剂包含表面活性剂和一种或多种附加组分。在一些实施方案中,洗涤剂包含表面活性剂和一种或多种螯合剂和/或防腐剂。在一些实施方案中,螯合剂是乙二胺四乙酸(EDTA)。
病毒的灭活
本发明提供了灭活产品原料流中病毒的方法,包括用环境相容的洗涤剂处理原料流。病毒可以是本文详述的任何病毒(例如,有包膜病毒),原料流可以是本文详述的任何原料流,如收获的细胞培养流体(HCCF)、捕获池或回收的产品池。在原料流中灭活的病毒可以是任何与产品(例如,多肽、细胞、组织)生产工业相关的病毒。工业相关的病毒是本领域技术人员已知的。工业相关的病毒的非限制性-实例包括逆转录病毒,疱疹病毒,黄病毒,痘病毒,嗜肝DNA病毒,肝炎病毒,正粘病毒,副粘病毒,弹状病毒,或披膜病毒。在本发明的任何变型中,病毒选自腺病毒(Adenovirus),非洲猪瘟系病毒(Africanswinefever-linevirus),沙粒病毒(arenavirus),动脉炎病毒(arterivirus),星状病毒(astrovirus),杆状病毒(baculovirus),杆状DNA病毒(badnavirus),杆状RNA病毒(barnavirus),双RNA病毒(birnavirus),雀麦花叶病毒(bromovirus),布尼亚病毒(bunyavirus),杯状病毒(calicivirus),毛状病毒组(capillovirus),香石竹潜病毒组(carlavirus),花椰菜花叶病毒(caulimovirus),圆环病毒(circovirus),线形病毒组(closterovirus),豇豆花叶病毒组(comovirus),冠状病毒(coronavirus),被盖病毒(cotricovirus),囊状病毒(cystovirus),δ病毒(deltavirus),香石竹病毒组(dianthovirus),耳突花叶病毒(enamovirus),线状病毒(filovirus),黄病毒(flavivirus),真菌传杆状病毒组(furovirus),fusellovirus,双粒病毒组(geminivirus),嗜肝DNA病毒(hepadnavirus),疱疹病毒(herpesvirus),大麦病毒(hordeivirus),hypovirus,ideaovirus,丝状病毒(inovirus),虹彩病毒(iridovirus),轻小病毒(levivirus),脂毛病毒(lipothrixvirus),黄矮病毒组(luteovirus),玉米褪绿斑驳病毒组(machlomovirus),marafivovirus,微小病毒(microvirus),肌病毒(myovirus),坏死病毒组(necrovirus),野田村病毒(nodavirus),正粘病毒(orthomyxovirus),乳多空病毒(papovavirus),副粘病毒(paramyxovirus),双分病毒(partitivirus),细小病毒(parvovirus),藻DNA病毒(phycodnavirus),小RNA病毒(picornavirus),plamavirus,短尾病毒(podovirus),多DNA病毒(polydnavirus),马铃薯X病毒组(potexvirus),马铃薯Y病毒组(potyvirus),痘病毒(poxvirus),呼肠孤病毒(reovirus),逆转录病毒(retrovirus),弹状病毒(rhabdovirus),根前毛菌病毒属(Rhizidiovirus),sequevirus,长尾病毒(siphovirus),南方菜豆花叶病毒组(sobemovirus),覆盖层病毒(tectivirus),细病毒组(tenuivirus),四病毒(tetravirus),烟草花叶病毒(tobamavirus),烟草脆裂病毒组(tobravirus),披膜病毒,番茄丛矮病毒组(tombusvirus),全病毒(totivirus),纤毛病毒(trichovirus),芜菁黄花叶病毒组(tymovirus)和幽影病毒(umbravirus)。在一个变型中,本发明提供灭活原料流中亚病毒因子的方法,包括用环境相容的洗涤剂处理原料流。在一些方面,亚病毒因子是类病毒或卫星病毒。在另一种变型中,本发明提供灭活原料流中病毒样因子的方法,包括用环境相容的洗涤剂处理原料流。
原料流中病毒的灭活可以使用本领域中已知的方法来测量。在本发明的一些实施方案中,病毒灭活表示为对数减少值(LRV)。LRV计算为:LRV=log10×(用洗涤剂处理后原料流中的总病毒/用洗涤剂处理前原料流中的总病毒)。
在本发明的一些实施方案中,原料流中环境相容的洗涤剂的LRV大于约1。在本发明的一些实施方案,原料流中环境相容的洗涤剂的LRV大于约4。本发明的一些实施方案中,原料流中环境相容的洗涤剂的LRV大于约1,2,3,4,5,6中的任意,在本发明的一些实施方案中,原料流中环境相容的洗涤剂的LRV在大约如下之任一之间:1至2,1至3,1至4,1至5,1至6,2至3,2至4,2至5,3至4,3至5,3至6,4至5,4至6,或5至6。
测量病毒活性的方法是本领域中公知的。实例包括,但不限于TCID50测定法(即,测定使接种的细胞培养物的50%产生病理变化的中值组织培养感染剂量)和噬斑测定法。其它已知的方法可以包括,例如,转化测定法,其可以用于测定具有引起细胞生长转化的能力的非噬斑形成病毒的生物活性效价;或荧光聚焦测定法,其依赖于使用抗体染色方法来检测单层感染细胞内的病毒抗原;或终点稀释测定法,其可用于确定许多病毒的滴度,包括不感染单层细胞的病毒(作为噬斑测定法的替代);或病毒酶测定法,其中测量病毒编码的酶,如逆转录酶或病毒蛋白酶。
本发明的多肽
由本文详述的制备工艺和方法生产的多肽以及在本文提供的组合物中存在的多肽可以与用来生产该多肽的宿主细胞同源,或者优选地,可以是外源的,这意味着它们与使用的宿主细胞异源,即是外来的,诸如由中国仓鼠卵巢细胞生产的人蛋白质,或由哺乳动物细胞生产的酵母多肽。在一些实施方案中,哺乳动物细胞系是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或幼仓鼠肾(BHK)细胞,鼠杂交瘤细胞,或鼠骨髓瘤细胞。在一个变型中,多肽是由宿主细胞直接分泌到培养基中的哺乳动物多肽(如抗体)。在另一变型中,多肽通过裂解包含编码多肽的分离核酸的细胞释放到培养基中。
可在宿主细胞中表达的任何多肽都可以根据本公开的内容制备,并可以存在于本文提供的组合物中。多肽可以由宿主细胞的内源性基因表达,或者由基因工程导入宿主细胞的基因表达。多肽可以是天然存在的多肽,或者可以具有经人工工程化或选择的序列。工程化的多肽可以从各自天然存在的其它多肽片段组装,或可包含一个或多个非天然存在的片段。
可能期望根据本发明表达的多肽常可以基于感兴趣的生物或化学活性而选择。例如,本发明可用于表达任何药学或商业相关的酶、受体、抗体、激素、调控因子、抗原、结合剂、细胞因子、Fc融合多肽、抗原、免疫粘附素,等。
可以根据本文提供的方法生产各种多肽,该多肽可以存在于本文提供的组合物中。细菌多肽的实例包括,例如,碱性磷酸酶和β内酰胺酶。哺乳动物多肽的实例包括分子如肾素,生长激素包括人生长激素;牛生长激素;生长激素释放因子;甲状旁腺激素;促甲状腺激素;脂蛋白;α-1-抗胰蛋白酶;胰岛素A链;胰岛素B-链;胰岛素原;***;降钙素;促黄体激素;胰高血糖素;凝血因子如因子VIIIC、因子IX、组织因子和血管性血友病因子;抗凝血因子如蛋白C;心房钠尿肽;肺表面活性剂;纤溶酶原激活剂,如尿激酶或人尿或组织型纤溶酶原激活剂(t-PA);铃蟾肽;凝血酶;造血生长因子;肿瘤坏死因子-α和-β;脑啡肽酶;RANTES(受活化调节的正常T细胞表达和分泌的因子);人巨噬细胞炎性蛋白(MIP-1-α);血清白蛋白如人血清白蛋白;苗勒氏管抑制物质(mullerian-inhibitingsubstance);松弛素A链;松弛素B链;松弛素原;小鼠***相关肽;微生物蛋白,如β-内酰胺酶;DNA酶;抑制素;激活素;血管内皮生长因子(VEGF);激素或生长因子的受体;整合素;蛋白A或D;类风湿因子;神经营养因子,如骨衍生的神经营养因子(BDNF),神经营养因子-3,-4,-5或-6(NT-3,NT-4,NT-5或NT-6),或神经生长因子如NGF-β;血小板衍生的生长因子(PDGF);成纤维细胞生长因子,如aFGF和bFGF;表皮生长因子(EGF);转化生长因子(TGF)如TGF-α和TGF-β,包括TGF-β1,TGF-β2TGF-β3TGF-β4或TGF-β5;***-I和-II(IGF-I和IGF-II);des(1-3)-IGF-I(脑IGF-I),***结合蛋白;CD蛋白如CD-3,CD-4,CD-8和CD-19;***;骨诱导因子;免疫毒素;骨形态发生蛋白(BMP);干扰素如干扰素-α,-β,和-γ;集落刺激因子(CSF),例如M-CSF,GM-CSF和G-CSF;白细胞介素(IL),例如IL-1至IL-10;超氧化物歧化酶;T细胞受体;表面膜蛋白;衰变加速因子;病毒抗原,如,AIDS包膜的部分;转运蛋白;归巢受体;地址素(addressing);调节蛋白;抗体;和任何上述所列多肽的片段。
原料(feedstock)将含有至少一种蛋白,在一个实施方案中其是抗体。基本的4链抗体单元是由两条相同的轻(L)链和两个相同的重(H)链组成的异四聚体糖蛋白(IgM抗体由5个基本异四聚体单元与称为J链的另外多肽组成,因此包含10个抗原结合位点,而分泌型IgA抗体可聚合形成多价集合体,包括2-5个基本4链单元和J链)。在IgG的情况中,4链单元通常是约150,000道尔顿。每个L链通过一个共价二硫键连接到H链,而取决于H链同种型,两个H链通过一个或多个二硫键彼此连接。每个H和L链还具有规则间隔的链内二硫键。每个H链在N端具有可变结构域(VH),对于α和γ链,随后是三个恒定结构域(CH),对于μ和ε同种型,随后是四个CH结构域。每个L链在N端具有可变结构域(VL),随后在其另一端具有恒定结构域(CL)。VL与VH对齐(aligned),CL与重链的第一恒定结构域(CH1)对齐。据信特定氨基酸残基形成轻链和重链可变结构域之间的界面。一个VH和一个VL配对在一起形成一个抗原结合位点。对于不同类别抗体的结构和特性,例如,见BasicandClinicalImmunology,第8版,DanielP.Stites,AbbaI.TerrandTristramG.Parslow(eds.),Appleton&Lange,Norwalk,CT,1994,71页和第6章。
来自任何脊椎动物物种的L链都可以基于其恒定结构域的氨基酸序列而分为两种明显不同的类型(称为κ和λ)之一。根据其重链恒定结构域(CH)的氨基酸序列,免疫球蛋白可分为不同的类或同种型。有五类免疫球蛋白:IgA,IgD,IgE,IgG和IgM,其分别具有命名为α,δ,ε,γ和μ的重链。γ和α类可基于其CH序列和功能中相对小的差异进一步分为亚类,例如,人类表达下列亚类:IgG1,IgG2,IgG3,IgG4,IgA1,和IgA2。
抗体的木瓜蛋白酶消化产生两个相同的抗原结合片段,称为“Fab”片段,和一个残余的“Fc”片段(名称反映其易于结晶的能力)。Fab片段由一个完整的L链和H链的可变区结构域(VH)和一条重链的第一恒定结构域(CH1)组成。每个Fab片段就抗原结合而言是单价的,即其具有一个抗原结合位点。抗体的胃蛋白酶处理产生一个大的F(ab')2片段,其大致相当于具有二价抗原结合活性的二硫键连接的两个Fab片段,其仍能够交联抗原。Fab'片段不同于Fab片段,差异在于其在CH1结构域的羧基端具有另外几个残基,包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab'-SH在本文中是如下Fab'的名称,在该Fab’中恒定结构域的半胱氨酸残基(一个或多个)携带游离硫醇基。F(ab')2抗体片段最初作为之间具有铰链半胱氨酸的Fab'片段对生成。抗体片段的其它化学偶联也是已知的。
Fc片段包含通过二硫键保持在一起的两个H链的羧基端部分。抗体的效应子功能由Fc区的序列确定,这区域也是某些类型的细胞上发现的Fc受体(FcR)所识别的部分。
“Fv”是包含完整的抗原识别和结合位点的最小抗体片段。此片段由紧密且非共价结合的一个重链可变区结构域和一个轻链可变区结构域的二聚体组成。从这两个结构域的折叠发出六个高变环(分别来自H和L链的各3个环),其提供抗原结合的氨基酸残基,并赋予抗体抗原结合特异性。然而,即使是一个可变结构域(或Fv的一半——仅包含抗原特异的三个CDR)也具有识别和结合抗原的能力,尽管比完整结合位点的亲和力低。
“单链Fv”也简称为“sFv”或“scFv”,是包含连接成一个多肽链的VH和VL抗体结构域的抗体片段。优选,sFv多肽还包含VH和VL结构域之间的多肽接头,使得sFv形成用于抗原结合所需的结构。对于sFv的综述,参见PluckthuninThePharmacologyofMonoclonalAntibodies,vol.113,RosenburgandMooreeds.,Springer-Verlag,NewYork,pp.269-315(1994);AntibodyEngineering,2ndedition(C.Borrebaeck,ed.,OxfordUniversityPress,1995。
术语“双抗体”(diabody)是指通过构建在VH和VL结构域之间具有短接头(约5-10个残基)的sFv片段(见上一段)制备的小抗体片段,从而这导致V结构域的链间而非链内配对,形成二价片段,即具有两个抗原结合位点的片段。双特异性双抗体是两个“交叉”sFv片段的异二聚体,其中两个抗体的VH和VL结构域存在于不同的多肽链上。双抗体更完整地描述于,例如EP404,097;WO93/11161;和Hollinger等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993)。
非人(例如,啮齿动物)抗体的“人源化”形式是嵌合抗体,其包含来自非人抗体的最小序列。就大部分而言,人源化抗体是人免疫球蛋白(受体抗体),其中受体的高变区残基被具有所需抗体特异性、亲和性和能力的来自非人物种(供体抗体)的高变区残基取代,所述非人物种如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物。在一些情况下,人免疫球蛋白的构架区(FR)残基被相应的非人残基取代。此外,人源化抗体可包含未在受体抗体或供体抗体中出现的残基。这些修饰是为了进一步精化抗体的性能。一般,人源化抗体包含至少一个,通常两个可变结构域,的基本上全部,其中全部或基本上全部的高变环对应于非人免疫球蛋白的,而全部或基本上全部的FR是人免疫球蛋白序列。人源化抗体任选还可以包含免疫球蛋白恒定区(Fc),通常是人免疫球蛋白恒定区,的至少一部分。对于更多详情,参见Jonesetal.,Nature321:522-525(1986);Riechmannetal.,Nature332:323-329(1988);和Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)。
用于生产多肽的方法
细胞
本文提供的方法和组合物可使用任何适于在本文所述培养基中生长和/或生产多肽(例如,抗体)的细胞,包括动物、酵母或昆虫细胞。在一个方面,方法和组合物的细胞是适于细胞培养和表达多肽的任何哺乳动物细胞或细胞类型。因此本文提供的方法(例如,灭活细胞培养基中病毒的方法)和组合物可使用任何适宜的细胞类型,包括动物细胞。在一个方面,方法和组合物使用哺乳动物细胞。方法和组合物也可以使用杂交瘤细胞。在一种变型中,所述哺乳动物细胞是非杂交瘤哺乳动物细胞,其已转化了编码所需多肽的外源分离核酸,所述多肽为如抗体、抗体片段(包括配体结合片段)和嵌合抗体。在一个变型中,方法和组合物使用选自以下的哺乳动物细胞:人成视网膜细胞(PER.C6(CruCell,Leiden,TheNetherlands));用SV40转化的猴肾CV1系(COS-7,ATCCCRL1651);人胚肾系(293细胞或亚克隆用于悬浮培养生长的293细胞,Grahametal.,J.GenVirol.,36:59(1977));幼仓鼠肾细胞(BHK,ATCCCCL10);中国仓鼠卵巢细胞/-DHFR(CHO,UrlaubandChasin,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77:4216(1980));小鼠支持细胞(TM4,Mather,Biol.Reprod.,23:243-251(1980));猴肾细胞(CV1ATCCCCL70);非洲绿猴肾细胞(VERO-76,ATCCCRL-1587);人***细胞(HeLa细胞,ATCCCCL2);犬肾细胞(MDCK,ATCCCCL34);buffalo大鼠肝细胞(BRL3A,ATCCCRL1442);人肺细胞(W138,ATCCCCL75);人肝细胞(HepG2,HB8065);小鼠乳腺肿瘤(MMT060562,ATCCCCL51);TRI细胞(Matheretal.,AnnalsN.Y.Acad.Sci.,383:44-68(1982));MRC5细胞;FS4细胞;和人肝细胞瘤系(HepG2细胞)。在一个具体的变型中,方法和组合物使用CHO细胞。在一个具体的变型中,培养CHO细胞系,和自CHO细胞系表达多肽(例如,抗体)。多肽(例如,抗体)可被分泌到本文公开的培养基,可从该培养基中分离和/或纯化多肽,或可通过裂解含有编码多肽的分离核酸的细胞使多肽释放到本文公开的培养基中。
适应于在重组脊椎动物细胞培养物中合成感兴趣的多肽的适宜方法、载体和宿主细胞在本领域中是已知的,描述在例如,Gethingetal.,Nature,293:620-625(1981);Manteietal.,Nature,281:40-46(1979);Levinsonetal.;EP117,060;和EP117,058。对于多肽的哺乳动物细胞培养表达,特别有用的质粒是pRK5(EP公开号307,247)或pSVI6B(PCT公开号WO91/08291,公布于1991年6月13日)。
可以用表达或克隆载体转化宿主细胞,并在经改良而适于诱导启动子、选择转化子或扩增编码所需序列的基因的营养培养基中培养。对于哺乳动物细胞,优选GrahamandvanderErb,Virology,52:456-457(1978)的硫酸钙沉淀法或Lipofectamine.TM.(GibcoBRL)MethodofHawley-Nelson,Focus15:73(1193)。哺乳动物细胞宿主***转化的一般方面是本领域中已知的,并且已经例如由Axel描述在1983年8月16日授权的美国专利号4,399,216中。用于转化哺乳动物细胞的各种技术,见,例如,Keownetal.,MethodsinEnzymology(1989),Keownetal.,MethodsinEnzymology,185:527-537(1990),和Mansouretal.,Nature,336:348-352(1988)。
方法和组合物也包括使用在细胞培养中分泌单克隆抗体的杂交瘤。单克隆抗体可以通过如下制备:从免疫的动物回收免疫细胞(通常为脾细胞或来自***组织的淋巴细胞),以常规方式使细胞永生化(例如,通过与骨髓瘤细胞融合或通过Epstein-Barr(EB)病毒转化),和筛选表达所需抗体的克隆。杂交瘤技术由KohlerandMilstein,Eur.J.Immunol.,6:511(1976)最初描述,并且也描述在Hammerlingetal.,In:MonoclonalAntibodiesandT-CellHybridomas,Elsevier,N.Y.,pp.563-681(1981),该技术已被广泛应用于生产可以分泌高水平的抗许多特定抗原的单克隆抗体的杂交细胞系。
多肽
由本文详述的组合物(例如,细胞)和方法生产的多肽以及在本文提供的组合物中存在的多肽可以与宿主细胞同源,或者优选地,可以是外源的,这意味着它们与使用的宿主细胞异源,即是外来的,诸如由中国仓鼠卵巢细胞生产的人蛋白质,或由哺乳动物细胞生产的酵母多肽。在一个变型中,多肽是由宿主细胞直接分泌到培养基中的哺乳动物多肽(如抗体)。在另一变型中,多肽通过裂解包含编码多肽的分离核酸的细胞释放到培养基中。
在一个变型中,多肽的氨基酸序列的链长足以形成更高水平的三级和/或四级结构。在一个方面,多肽具有至少约5-20kD的分子量,或者至少约15-20kD,优选至少约20kD的分子量。
可以根据本公开的内容制备在宿主细胞中可表达的任何多肽,该多肽可以存在于本文提供的组合物中。多肽可以由宿主细胞的内源性基因表达,或者由通过基因工程导入宿主细胞的基因表达。多肽可以是天然存在的多肽,或者备选地可以具有经人工工程化或选择的序列。工程化的多肽可以从天然单独存在的其它多肽片段组装,或可包含一个或多个非天然存在的片段。
可能期望根据本发明表达的多肽常常可以基于感兴趣的生物或化学活性而选择。以上描述了本发明多肽的例子。
例如,本发明可用于表达任何药学或商业相关的酶、受体、抗体、激素、调控因子、抗原、结合剂,等。
细胞生长和多肽的生产
通常,可以在促进细胞生长、维持和/或多肽生产的一个或多个条件下,使细胞与任何本文描述的细胞培养基组合(接触)。生长细胞和生产多肽的方法使用培养容器(生物反应器)以容纳细胞和细胞培养基。培养容器可以由适于培养细胞的任何材料制成,包括玻璃、塑料或金属。典型地,培养容器至少为1升,可为10、100、250、500、1000、2500、5000、8000、10000升或以上。可以在培养过程中调节的培养条件,包括但不限于pH和温度。
细胞培养一般在初始生长阶段在利于细胞培养物存活、生长和活力(维护)的条件下维持。精确的条件根据细胞类型、细胞的来源生物、以及所表达多肽的性质和特性而有所不同。
在初始生长阶段,细胞培养的温度主要基于该细胞培养物维持活力的温度范围选择。例如,在初始生长阶段,CHO细胞在37℃生长良好。在一般情况下,大多数哺乳动物细胞在约25℃至42℃的范围内生长良好。优选地,哺乳动物细胞在约35℃至40℃的范围内生长良好。本领域普通技术人员能够根据细胞的需要和生产要求,选择生长细胞的合适温度(一个或多个)。
在本发明的一个实施方案,初始生长阶段的温度保持在单一一个恒定的温度。在另一个实施方案中,初始生长阶段的温度保持在一个温度范围内。例如,在初始生长阶段,温度可以稳定地增加或降低。可替代地,在初始生长阶段,温度可以在不同时间以不连续的量增加或降低。本领域普通技术人员能够确定是否应该使用一个或多个温度,以及是否应该稳定地或以不连续的量调整温度。
细胞可以在初始生长阶段生长更长或更短的时间。在一个变型中,细胞生长足以达到如下活细胞密度的一段时间,所述活细胞密度为在允许细胞不受干扰地生长的情况下细胞将最终达到的最大活细胞密度的给定百分比。例如,细胞可以生长足以达到如下所需活细胞密度的一段时间,其中所需活细胞密度为最大活细胞密度的1,5,10,15,20,25,30,35,40,45,50,55,60,65,70,75,80,85,90,95或99%。
在另一个实施方案中,细胞被允许生长限定的时间。例如,根据细胞培养的起始浓度、细胞生长的温度、和细胞固有的生长速率,细胞可生长0,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20天或更多天。在一些情况下,可以允许细胞生长一个月或更长时间。
在初始培养阶段可以搅动或振荡细胞培养物以增加氧合和养分向细胞的扩散。根据本发明,本领域普通技术人员将理解,在初始生长阶段控制或调节生物反应器的某些内部条件可能是有益的,包括但不限于pH、温度、氧合等。例如,可以通过提供适当量的酸或碱来控制pH值,可以用本领域公知的吹扫装置(spargingdevice)控制氧合。
初始培养步骤是生长阶段,其中可以改变分批细胞培养条件以增强重组细胞的生长,以产生种子罐(seedtrain)。生长阶段通常指的是指数生长期,其中细胞通常快速***,例如,生长。在这个阶段中,培养细胞一段时间,一般为1至4天,例如,1,2,3或4天,并且在对于细胞生长最佳的条件下进行培养。可以通过本领域技术人员公知的方法,针对特定宿主细胞,确定宿主细胞的生长周期。
在生长阶段中,分批向培养容器中提供基础培养基和细胞。在一个方面,培养基包含少于约5%,或少于1%或少于0.1%的血清及其它动物来源的蛋白质。然而,如果需要,可以使用血清和动物来源的蛋白质。在一个具体的变型中,基础培养基在HTST处理以灭活病毒的期间具有约pH5.0至约pH6.9的pH。在一个方面,在细胞培养的多肽生产阶段之前,在HTST处理以灭活病毒的期间,将基础培养基的pH降低至约pH5.0至约pH6.9之间。在进一步的方面中,然后调整培养基的pH值至约pH6.9至约pH7.2用于细胞培养的多肽生产阶段。在进一步的方面,在HTST处理后,培养基的pH值调整至约pH6.9至约pH7.2用于细胞培养的多肽生产阶段。在另一个特定的变型中,在HTST处理以灭活病毒的期间,基础培养基包含限制总量到小于约10mM的磷酸和钙。在一个方面,在细胞培养的多肽生产阶段前、在HTST处理以灭活病毒期间,培养基中磷酸和钙的总量限制到小于约10mM。在进一步的方面,然后在细胞培养的多肽生产期间,将培养基中磷酸和钙的总量升高到足以生产多肽的水平。在另一个变型中,在HTST处理以灭活病毒期间,基础培养基具有约pH5.0至约pH6.9之间的pH,磷酸和钙的总量小于约10mM。在一个方面中,在细胞培养的多肽生产阶段前、在HTST处理以灭活病毒期间,基础培养基的pH降低至约pH5.0至约pH6.9之间,且包含总量小于约10mM的磷酸和钙。在进一步的方面中,在细胞培养的多肽生产期间,培养基中的pH然后调整至约pH6.9至约pH7.2,培养基中磷酸和钙的总量提高到足以用于生产多肽的水平。在任何方面,基础培养基可以是化学确定的培养基。在任何方面,基础培养基可以是化学不确定的培养基。可以使用一倍或两倍于欧洲专利EP307,247或美国专利6,180,401所详述范围的氨基酸,维生素,微量元素和其它培养基组分,这些文件在此通过整体引用作为参考。
可替代地,可商购的培养基诸如Ham'sF10(Sigma),最小必需培养基(MinimalEssentialMedium([MEM],Sigma)),RPMI-1640(Sigma),和Dulbecco氏改良的Eagle氏培养基([DMEM],Sigma)适用于培养动物细胞,并且可以补充如本文详述的化学确定的培养基组分(例如,通过使用提供的试剂盒)。此外,可以使用以下文献描述的任何培养基作为宿主细胞的培养基:HamandWallace,Meth.Enz.,58:44(1979),BarnesandSato,Anal.Biochem.,102:255(1980),美国专利号4,767,704;4,657,866;4,927,762;或4,560,655;WO90/03430;WO87/00195;美国专利号Re.30,985;或美国专利号5,122,469,所有这些文献的公开内容通过引用全部并入本文,其中每一个培养基都可以补充如本文详述的化学确定的培养基组分(例如,通过使用提供的试剂盒)。
本文所提供的任何培养基,也可以根据需要补充激素和/或其它生长因子(如胰岛素、转铁蛋白、或表皮生长因子),离子(如钠、氯、钙、镁和磷酸盐),缓冲液(诸如HEPES),核苷(如腺苷和胸苷),微量元素(定义为通常以微摩尔范围的最终浓度存在的无机化合物),微量金属(如铁和铜),和葡萄糖或等效能量来源。本领域技术人员已知的任何其它必需补充剂也可以以适当浓度包括在内。
在其生长的特定点,细胞可形成接种物以在生产阶段在培养开始时接种培养基。可替代地,生产阶段可以是生长阶段的连续。细胞生长阶段之后通常跟随多肽生产阶段。
在多肽生产阶段中,细胞培养可维持在第二组培养条件下(相对于生长阶段而言),以有利于细胞培养物的存活和活力以及适于所需多肽的表达。例如,在随后的生产阶段,CHO细胞在25℃至35℃的范围内很好地表达重组多肽和蛋白质。可以使用多个不连续的温度迁移,以增加细胞密度或活力或提高重组多肽或蛋白质的表达。如本文所用,术语“多肽生产阶段”或“蛋白表达阶段”可以指细胞培养物生产生物药品(例如,多肽)的细胞培养阶段。
可以在随后的生产阶段维持细胞直到达到所需的细胞密度或生产滴度。在一个实施方案中,在随后的生产阶段维持细胞直到重组多肽的滴度达到最大值。在其它实施方案中,可在此点之前收获培养物。例如,细胞可维持足以达到如下活细胞密度的一段时间,所述活细胞密度是最大活细胞密度的1,5,10,15,20,25,30,35,40,45,50,55,60,65,70,75,80,85,90,95或99%。在某些情况下,可能期望使活细胞密度达到最大,然后在收获培养物之前允许活细胞密度下降到某个水平。
在某些情况下,在随后的多肽生产阶段向细胞培养物补充已被细胞耗竭或代谢的营养物或其它培养基组分,可能是有利的或必需的。例如,可能有利的是,向细胞培养物补充在细胞培养物监测期间观察到已经耗竭的营养物或其它培养基组分。在一些方面,在随后的生产阶段之前,该一种或多种被耗竭的组分包括钙,磷酸,铁和铜。一些方面中,补充培养基组分包括钙,磷酸,铁,和铜。备选地或另外地,可能有利或必要的是,在随后的多肽生产阶段之前补充细胞培养物。在一些方面中,在随后的生产阶段之前,用一种或多种培养基组分(包括钙、磷酸盐、铁和铜)补充细胞培养物。作为非限制性的例子,可能有利的或必需的是,向细胞培养物补充激素和/或其它生长因子,特定离子(例如钠、氯、钙、镁和磷酸),缓冲液,维生素,核苷或核苷酸,微量元素(通常以非常低的最终浓度存在的无机化合物),微量金属(如铁和铜),氨基酸,脂质,或葡萄糖或其它能量来源。如本文所用的术语“补料培养基”或“生产培养基”指的是在细胞培养的多肽生产阶段中使用的细胞培养基。
IV.示例性实施方案
1.一种在治疗性多肽的制备工艺中灭活产品原料流中病毒的方法,所述方法包括用洗涤剂处理原料流的步骤,其中所述洗涤剂是环境相容的。
2.根据实施方案1所述的方法,其中与使用TritonX-100的方法或不使用洗涤剂的方法相比,所述方法保持治疗性多肽的产品质量。
3.根据实施方案2所述的方法,其中治疗性多肽的产品质量导致产品变体的改变不超过产品原料流中总多肽的5%。
4.根据实施方案3所述的方法,其中产品变体的增加不超过产品原料流中总多肽的5%。
5.根据实施方案3或4所述的方法,其中产品变体是尺寸变体、电荷变体、氧化变体、脱酰胺变体、糖化变体、或具有改变的聚糖分布的变体。
6.根据实施方案3-5中的任一项所述的方法,其中产品变体是酸性和/或碱性产品变体。
7.根据实施方案1-6中任一项所述的方法,其中原料流用洗涤剂处理不导致多肽的片断化增加超过约5%。这可以通过尺寸排阻色谱(SEC)来测定。
8.根据实施方案1-7中任一项所述的方法,其中原料流用洗涤剂处理不导致原料流中的聚集增加超过约5%。这可以通过SEC来测定。
9.根据实施方案1-8中任一项所述的方法,其中原料流用洗涤剂处理不导致制备工艺中多肽的产量降低超过约5%。这可以通过SEC来测定。
10.根据实施方案1-9中任一项所述的方法,其中洗涤剂加入到原料流至最终浓度约0.01%至约10%。
11.根据实施方案1-10中任一项所述的方法,其中洗涤剂加入到原料流至最终浓度约0.3%至约1%。
12.根据实施方案1-11中任一项所述的方法,其中原料流用洗涤剂处理至少约1分钟到至少约48小时。
13.根据实施方案1-12中任一项所述的方法,其中原料流用洗涤剂处理至少约15分钟到至少约3小时。
14.根据实施方案1-13中任一项所述的方法,其中原料流用洗涤剂处理至少约1小时。
15.根据实施方案1-14中任一项所述的方法,其中原料流在约4℃到约30℃用洗涤剂处理。
16.根据实施方案1-15中任一项所述的方法,其中原料流在约15℃到约20℃用洗涤剂处理。
17.根据实施方案1-16中任一项所述的方法,其中洗涤剂是非离子洗涤剂或两性离子洗涤剂。
18.根据实施方案1-17中任一项所述的方法,其中洗涤剂具有约12至约15的亲水亲油平衡值(HLB)。
19.根据实施方案1-18中任一项所述的方法,其中洗涤剂不包含或形成辛基酚。
20.根据实施方案1-19中任一项所述的方法,其中洗涤剂不包含或形成过氧化物。
21.根据实施方案1-20中任一项所述的方法,其中包含洗涤剂的原料流是低浊度的。这可以通过340-360nm的平均吸光度来测定。
22.根据实施方案1-21中任一项所述的方法,其中,向原料流添加洗涤剂不增加原料流的浊度。这可以通过340-360nm的平均吸光度来测定。
23.根据实施方案1-22中任一项所述的方法,其中,丢弃后,由洗涤剂使用导致的洗涤剂在受纳水体中的预测环境浓度(PEC)在洗涤剂的预测无效应浓度(PNEC)以下。
24.根据实施方案23所述的方法,其中PEC比PNEC低。
25.根据实施方案1-24中任一项所述的方法,其中环境相容的洗涤剂包括烷基葡糖苷。
26.根据实施方案25所述的方法,其中烷基葡糖苷是癸基葡糖苷。
27.根据实施方案1-24中任一项所述的方法,其中环境相容的洗涤剂是醇乙氧基化物。
28.根据实施方案1-24中任一项所述的方法,其中环境相容的洗涤剂是烷基聚乙二醇醚。
29.根据实施方案1-24中任一项所述的方法,其中环境相容的洗涤剂具有CAS登记号CAS9005-64-5,CAS9005-65-6,CAS126-43-8,68515-73-1,CAS58846-77-8,CAS59122-55-3,CAS110615-47-9,CAS29836-26-8,CAS64366-70-7,CAS68937-66-6,CAS69227-22-1,CAS25322-68-3,CAS27252-75-1,CAS4292-10-8,CAS132778-08-6,CAS110615-47-9,CAS68515-73-1或CAS68439-46-3。
30.根据实施方案1-29中任一项所述的方法,其中洗涤剂包含一种或多种表面活性剂。
31.根据实施方案1-30中任一项所述的方法,其中洗涤剂包含一种或多种表面活性剂、防腐剂和螯合剂。
32.根据实施方案1-31中任一项所述的方法,其中原料流包含收获的细胞培养物流体。
33.根据实施方案32所述的方法,其中洗涤剂加入到收获的细胞培养物流体。
34.根据实施方案1-33中任一项所述的方法,其中原料流包含捕获池或回收的产品池。
35.根据实施方案34所述的方法,其中捕获池或回收的产品池是亲和色谱池。
36.根据实施方案34或35所述的方法,其中捕获池或回收的产品池是蛋白A池、蛋白G池或蛋白L池。
37.根据实施方案34所述的方法,其中捕获池或回收的产品池是混合模式色谱池。
38.根据实施方案34或37所述的方法,其中捕获池是CaptoAdhere池。
39.根据实施方案1-38中任一项所述的方法,其中洗涤剂与消泡剂组合使用。
40.根据实施方案39所述的方法,其中消泡剂是西甲硅油。
41.根据实施方案1-40中任一项所述的方法,其中病毒是有包膜病毒。
42.根据实施方案1-41中任一项所述的方法,其中病毒是逆转录病毒、疱疹病毒、黄病毒、痘病毒、嗜肝DNA病毒、肝炎病毒、正粘病毒、副粘病毒,弹状病毒或披膜病毒。
43.根据实施方案1-42中任一项所述的方法,其中原料流中洗涤剂的病毒对数减少值(LRV)大于约一。
44.根据实施方案1-43中任一项所述的方法,其中病毒LRV大于约四。
45.根据实施方案43或44所述的方法,其中LRV基于感染性测定法计算。
46.根据实施方案45所述的方法,其中感染性测定法是噬斑测定法或TCID50测定法。
47.根据实施方案1-46中任一项所述的方法,其中方法还包括在加入洗涤剂后过滤原料流的步骤。
48.根据实施方案47所述的方法,其中加入洗涤剂后至少约15分钟到至少约48小时过滤原料流。
49.根据实施方案47或48所述的方法,其中加入洗涤剂后至少约1小时到至少约3小时过滤原料流。
50.根据实施方案47-49中任一项所述的方法,其中加入洗涤剂后约1小时后过滤原料流。
51.根据实施方案47-50中任一项所述的方法,其中过滤是超滤或深度过滤。
52.根据实施方案1-51中任一项所述的方法,其中加入洗涤剂后原料流经过色谱处理。
53.根据实施方案52所述的方法,其中色谱是亲和色谱、离子交换色谱、疏水相互作用色谱、羟基磷灰石色谱、或混合模式色谱中的一种或多种。
54.根据实施方案53所述的方法,其中亲和色谱是蛋白A色谱、蛋白G色谱或蛋白L色谱。
55.根据实施方案53所述的方法,其中离子交换色谱为阴离子交换色谱或阳离子交换色谱。
56.根据实施方案53所述的方法,其中混合模式色谱是CaptoAdhere色谱。
57.根据实施方案1-56任一项所述的方法,其中治疗性多肽是抗体、免疫粘附素、酶、生长因子、受体、激素、调控因子、细胞因子、Fc融合多肽、抗原或结合剂。
57.根据实施方案56所述的方法,其中抗体是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、双特异性抗体、或抗体片段。
58.根据实施方案1-57中任一项所述的方法,其中治疗性多肽在哺乳动物细胞中生产。
59.根据实施方案58所述的方法,其中哺乳动物细胞系是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或幼仓鼠肾(BHK)细胞、鼠杂交瘤细胞、或鼠骨髓瘤细胞。
在本说明书中公开的各特征可被起到相同、等效或类似目的的替代特征所代替。因此,除非明确声明,否则公开的各特征仅是上位的一系列等效或类似特征的例子。
本文所公开的所有参考文献都通过引用以其整体并入本文中用于所有目的。
实施例
提供以下实施例以举例说明但不限制本发明。
实施例1:洗涤剂的评估
为纯化治疗性多肽和灭活外来剂如有包膜病毒,筛选了许多洗涤剂以替代工艺中的TritonX-100。替代洗涤剂的标准包括但不限于以下之任一项:洗涤剂的非离子或两性离子性质、可弃性(disposability)、强的病毒灭活、成本、安全性/OSHA、溶解性、粘度、约12-15的亲水/亲油平衡、材料可得性和来源、对工艺和产品质量的影响、和原材料≥24个月的稳定性。评估的洗涤剂的例子示于表1。
表1评估的洗涤剂的实例。
使用几轮筛选评估洗涤剂。
第1轮:候选洗涤剂加入到单克隆抗体(MAb)的水溶液中至最终浓度高达1%(v/v),在环境温度保持三小时。三种多肽溶液用于这些研究中。MAb1HCCF,是在MAb1生产中得到的收获的细胞培养物流体;Mab3HCCF,是在MAb3生产中得到的收获的细胞培养物流体;和MAb3MSS是在MAb3制剂的蛋白A色谱后经调整的池级分。评估洗涤剂对混合、浊度、产品产量和产品质量的影响。
混合研究:测试的洗涤剂是:1%聚山梨醇酯20±TnBP,1%聚山梨醇酯80±TnBP,1%SafeCare1000,1%EcosurfEH-9,1%EcosurfEH-6,1%EcosurfEH-3,1%EcosurfSA9,1%EcosurfSA7,0.1M辛酸盐,0.5%或1%聚葡糖苷,和1%TritonX-100。结果与未添加洗涤剂的对照比较。
在设定的时间点采取浊度样品:0小时,1小时,2小时,3小时,过滤后,过滤后1小时,和过夜放置后。最终混合时间后溶液通过0.2μm的过滤器过滤。
在PhyTip蛋白A上纯化后接尺寸排阻色谱(SEC)、成像毛细管等电聚焦(用于电荷异质性)(icIEF)、和毛细管电泳(用于聚糖含量),分析样品。尺寸排阻色谱揭示低分子量物质(例如,降解产品)和高分子量物质(例如,聚集体)的存在。iCIEF揭示电荷变体(例如,酸性电荷变体和碱性电荷变体)。毛细管电泳揭示聚糖结构。使用内部的多产品ELISA,检测了中国仓鼠卵巢细胞蛋白(CHOP)水平。对于调整的蛋白A池,使用蛋白AHPLC测定法,使用280nm的吸光度,测量了HCCF中的Mab1或Mab3浓度。
图1示出了使用各种混合方法进行的无洗涤剂的MAb1HCCF对照的洗涤剂混合浊度分析。未处理的混合的HCCF有低水平的浊度,在混合、过滤、和过夜孵育期间保持不变。图2示出了用1%聚山梨醇酯20(左上)、1%聚山梨醇酯20与0.3%TnBP(右上)、1%聚山梨醇酯80(左下)和1%聚山梨醇酯80与0.3%TnBP(右下)处理的MAb1HCCF的洗涤剂混合浊度分析。对于用聚山梨醇酯20±TNBP或聚山梨醇酯80±TNBP处理的HCCF,浊度增加,并在过滤后重新形成。图3示出了用1%SafeCare(左上)、1%EcosurfEH-9(右上)、0.1M辛酸盐(左下)和1%聚葡糖苷(右下)处理的MAb1HCCF的洗涤剂混合浊度分析。浊度随着SafeCare或辛酸盐的添加和混合而增加,但过滤和过夜孵育后浊度没有重新形成。用EcosurfEH-9或聚葡糖苷的测试条件没有观察到混浊增加。
表2示出了洗涤剂混合对MAb1HCCF产品质量的结果。使用聚山梨酸酯20和聚山梨醇酯80与TnBP,观察到高分子量物质的增加。使用辛酸盐,观察到产量损失和CHOP减少。使用其它洗涤剂,没有观察到聚糖或CHOP改变(数据未显示)。
表2.MAb1HCCF产品质量的洗涤剂混合研究。
表3示出了暴露于洗涤剂3小时对MAb3HCCF和MAb3MSS池的浊度的结果。对于EcosurfEH-3和辛酸盐条件,观察到显著浊度;对于聚山梨酸酯20或80加TnBP以及对于SafeCare,观察到轻微混浊。
表3.用MAb3:HCCF或调整的蛋白A池(MSS)筛选洗涤剂
表4示出了使用MAb3HCCF和调整的蛋白A池筛选洗涤剂的CHOP和DNA结果。除了辛酸盐处理的HCCF和蛋白A池中CHOP和DNA沉淀导致40%产品产量损失外,没有观察到影响。对于其它测试的洗涤剂,没有注意到产量损失(未示出数据)。
表4.使用MAb3HCCF和调整的蛋白A池筛选洗涤剂
表5示出了用MAb3:HCCF或调整的蛋白A池筛选洗涤剂的SEC结果。在环境温度下用洗涤剂处理三小时。除了辛酸处理HCCF导致了HMWS减少到0.8%外,没有观察到HMW或LMW物质的显著变化。
表5.用MAb3:HCCF和调整的蛋白A池的洗涤剂筛选。
表6显示用MAb3HCCF或调整的蛋白A池在洗涤剂筛选中的iCIEF结果。在环境温度下用洗涤剂处理三小时。除了EcosurfSA-9处理的蛋白A池的酸性峰减少且主峰增加外,没有观察到电荷变体的显著差异。这可能归因于样品处理,在用MAb3进行的随后实验中重新测试了该洗涤剂条件,没有观察到电荷谱变化。
表6.用MAb3:HCCF和调整的蛋白A池的洗涤剂筛选。
由于沉淀和产量损失,从进一步的筛选中除去了辛酸盐和EcoSurfEH-3。
第2轮:候选洗涤剂加入到单克隆抗体(MAb)的水溶液中至最终浓度1%(v/v),在环境温度下过夜。评估洗涤剂对MAb3的色谱性能、步骤产量和产品质量的影响。测试了产品质量,使用SECHPLC以测量变体尺寸(HMW和LMW)和使用IEC(用羧肽酶处理)以测定电荷变体。如Zhang等(AnalyticalChem.2008,80:2379-2390)所述,使用硼酸盐亲和色谱测定糖化。还采用胰蛋白酶肽图谱阐明蛋白质的其它改变,如氧化或脱酰胺。使用多产品CHOPELISA、浸提的蛋白A(LpA)ELISA和TaqManPCR检测法(用于DNA定量),测定了杂质清除过程。
表7显示了使用MAb3HCCF的洗涤剂评估,其中使用洗涤剂过夜处理,随后用MabSelectSuRe蛋白A色谱进行纯化。对于EcosurfSA7处理的样品,观察到在MabSelectSuRe上的非典型色谱图和低的步骤产量。没有观察到对CHOP或DNA清除的显著影响。在洗涤剂处理的HCCF中DNA水平是变化的,这可能表明样品中的洗涤剂对DNA测定法的一些干扰。将进一步用最终候选洗涤剂进行研究。对于每种测试的洗涤剂条件,浸提的蛋白A的水平相当。对于测试的任何洗涤剂,均没有注意到糖化分布的改变。
表7.使用MAb3HCCF评估洗涤剂。
图4示出,在室温下与洗涤剂过夜孵育并在MabSelectSuRe上纯化后,MAb3中和的蛋白A池的肽图。如用胰蛋白酶肽图谱评估的,对任何洗涤剂,均没有看到产品质量上的差异。
表8示出过夜暴露于候选洗涤剂后MAb3HCCF的SEC和IEC分析的结果。分析前用羧肽酶B(CpB)处理IEC样品。对于任何测试的洗涤剂,没有看到对产品质量的影响。
表8.MAb3HCCF的洗涤剂评估。
由于非典型色谱图和低的产量,EcosurfSA-7从进一步的筛选中删除。聚葡糖苷是烷基葡糖苷的混合物,用各单种烷基葡糖苷置换用于进一步研究。
第3轮:候选洗涤剂加入到单克隆抗体(MAb)的水溶液中至最终浓度1%(v/v),在环境温度下过夜。多肽溶液用于这些研究中。MAb1HCCF,MAb1MSS,Mab3,和MAb2HCCF。就浊度和产品质量影响以及蛋白A色谱后洗涤剂的清除,评估了洗涤剂。
MAb1,MAb2和MAb3HCCF与1%(v/v)洗涤剂在室温下过夜孵育。然后使用MabSelectSuRe色谱纯化MAb1。通过SEC,iCIEF分析汇合的级分,并通过NMR进行洗涤剂清除测试。浊度、MabSelectSuRE上的产量、以及调整的蛋白A池的产品质量示于表9。用1%聚山梨醇酯+0.3%TnBP处理的HCCF具有高浊度和在MabSelectSuRe蛋白A色谱上的低产量。该条件也造成了大量HMW的形成。LutensolXP90处理的样品与对照相比,具有高约4%的酸性变体水平。
表9.MAb11.3HCCF的洗涤剂评估
通过中和的蛋白A池的NMR评估了蛋白A色谱期间洗涤剂的清除,示于表10。在蛋白A色谱期间所有洗涤剂被清除至很低的水平。
表10.用MAb1HCCF的洗涤剂评估,NMR分析。
使用MAb3HCCF(表11)和MAb2HCCF(表12),用PhyTip蛋白A纯化、随后通过SEC-HPLC,iCIEF和CE(用于聚糖),进行了类似分析。
表11.使用MAb3HCCF的洗涤剂评估。
对于MAb3,相对于对照,对于任何所测试洗涤剂,均没有见到混浊或产品质量的显著变化。没有观察到聚糖分布的改变(数据未显示)。
表12.使用MAb2HCCF的洗涤剂评估。
对于MAb2,相对于对照,对于任何所测试洗涤剂,均没有看到混浊或产品质量的显著变化。用LutensolXP90和TergitolL64看到稍高的酸性物质百分比。没有观察到聚糖分布的改变(数据未显示)。
从这一轮的测试起,由于对MAb1浊度和产品质量的影响,聚山梨醇酯80+TnBP被去除。
还在20℃、在MAb1HCCF中评估了洗涤剂的病毒灭活作用(xMuLV)。洗涤剂加入到MAb1HCCF至0.3%的最终浓度。该含洗涤剂物质被掺入了XMuLV(5%v/v)。样品在20℃孵育30分钟到6小时,测定异嗜性鼠白血病病毒(XMuLV)(模式逆转录病毒)的存在。利用PG-4指示细胞,通过TCID50测定法,测定了XMuLV的存在。病毒灭活结果表示为LRV(对数减少值),并在表13中示出。
表13.在20℃用MAb1HCCFa的xMuLV灭活
a除非另有说明,否则使用的原料是HCCF。
使用单独的聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20或TnBP的xMuLV灭活效果较差。注意到辛酸盐样品的沉淀。
在室温下,使用rProtein1CaptoAdhere池,在更下游的池中评估了有和没有溶剂的聚山梨醇酯80对病毒的灭活(XMuLV)。XMuLV灭活结果列于表14。使用单独的聚山梨醇酯80在1小时获得了有效的XMuLV灭活。使用聚山梨醇酯80加溶剂在5分钟内观察到完全的病毒灭活。
表14.在室温下在rProtein1CaptoAdhere池中用有和没有溶剂的聚山梨醇酯80对XMuLV的灭活。
NT=未测试
由候选洗涤剂在MAb2HCCF中对XMuLV的灭活示于表15。在20℃、1小时,以0.5%和1%浓度测试的所有洗涤剂均实现了完全且有效的病毒灭活。
表15.在20℃MAb3的病毒灭活。
NT=未测试
在12℃的较低温度下、0.3%和0.5%浓度的候选洗涤剂对MAb2HCCF和rProtein1HCCF中XMuLV的灭活示于表16。除了TergitolL64无效外,以0.3%和0.5%浓度测试的其他所有洗涤剂在12℃、1小时均实现了完全且有效的病毒灭活。因而,TergitolL64从进一步的考虑中删除。
表16.在较低温度和洗涤剂浓度下Mab2和rProtein1的XMuLV灭活
NT=未测试
不同浓度的TritonCG-110对rProtein2HCCF中XMuLV的灭活示于表17。观察到浓度依赖性病毒灭活。0.05%TritonCG-110浓度灭活是无效的,其中得到小于1的LRV。
表17在12℃,1小时,XMuLV灭活,rProtein2HCCF
Triton CG-110浓度(%) | LRV |
0.05 | 0.1 |
0.10 | 1.1 |
0.15 | 2.3 |
0.20 | 3.6 |
0.25 | 5.8 |
0.30 | ≥5.4 |
0.35 | ≥5.4 |
0.40 | 5.8 |
实施例2使用西甲硅油来减轻发泡:对病毒灭活的影响
对于使用西甲硅油减轻TritonCG110的发泡问题,评估了该应用对病毒灭活的影响。
洗涤剂(0.3%)加入到有或没有西甲硅油(消泡剂)的rProtein3HCCF中,最终浓度0.1%。评估样品的病毒灭活(xMuLV)。结果示于表18。0.1%西甲硅油对TritonCG110的xMuLV灭活没有影响。
表18.使用西甲硅油减轻发泡对TritonCG110的病毒灭活没有影响。
还评估了洗涤剂灭活其它有包膜病毒的能力。将洗涤剂加入到rProtein1HCCF中至最终浓度0.3%。向含洗涤剂的物质中分别掺入各种病毒(5%v/v)。样品在12℃孵育1和/或3小时,测定XMuLV、伪狂犬病病毒(Pseudorabiesvirus,PRV)或牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的存在。使用基于细胞的感染性测定法,测定病毒的存在。利用PG-4指示细胞,通过TCID50测定法,测定了XMuLV。分别使用CV-1和BT指示细胞、通过噬斑测定法,测定了PRV和BVDV的存在。结果示于表19。APG325N和TritonCG110对所有三个病毒均提供了有效的灭活。
表19.在12℃、1小时,rProtein1中的有包膜病毒的病毒灭活
比较了TritonCG110及EcosurfEH-9灭活有包膜病毒的能力和TritonX-100灭活有包膜病毒的能力。TritonCG110、TritonX-100或EcosurfEH-9加入到rProtein2HCCF,最终浓度0.3%。向含洗涤剂的物质中分开地掺入PRV和BVDV(5%v/v)。样品在20℃孵育30分钟和1小时,使用噬斑测定法测定伪狂犬病病毒(PRV)或牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的存在。测定病毒的对数减少值。结果示于表20。
表20.用TritonX-100、TritonCG110和EcosurfEH-9,在20℃、0.3%洗涤剂浓度,在rProtein2HCCF中的病毒灭活
EcosurfEH-9和TritonCG110提供了有效的灭活,与TritonX-100相当。
实施例3.使用额外分子的筛选
就产品质量,进一步筛选了有或没有西甲硅油的洗涤剂。测试了以下条件。
1.对照HCCF(无洗涤剂)
2.HCCF+0.1%西甲硅油
3.HCCF+EcosurfEH9
4.HCCF+0.7%TritonCG110
5.HCCF+0.7%TritonCG110+0.1%西甲硅油。
样品在环境温度下温育15小时,然后储存于2-8℃。Phytip蛋白A纯化后,通过SEC、iCIEF和聚糖分析,分析了样品的产品质量。HCCF包括HCCFMAb4、MAb5、MAb6、MAb7、MAb3、MAb8和MAb9。结果示于表21-26。
Mab4HCCF的洗涤剂±西甲硅油处理的结果示于表21。对于每一个测试条件,均没有注意到对产品质量的影响。没有观察到聚糖改变(未示出数据)。
表21.筛选额外分子:对MAb4产品质量的影响
Mab5HCCF的洗涤剂±西甲硅油处理的结果示于表22。对于每个测试条件,没有注意到对产品质量的影响。没有观察到聚糖改变(未示出数据)。
表22.筛选额外分子:对Mab5产品质量的影响
Mab6HCCF的洗涤剂±西甲硅油处理的结果示于表23。对于每个测试条件,没有注意到对产品质量的影响。没有观察到聚糖改变(未示出数据)。
表23.筛选额外的分子:对Mab6产品质量的影响
Mab7HCCF的洗涤剂±西甲硅油处理的结果示于表24。对于每个测试条件,没有注意到对产品质量的显著影响。在TritonCG-110处理的样品中观察到略高的%酸性变体和较低的%碱性变体。没有观察到聚糖改变(数据未示出)。
表24.筛选额外分子:对Mab7产品质量的影响
Mab8HCCF的洗涤剂西甲硅油处理的结果示于表25。对于每个测试条件,没有注意到对产品质量的影响。没有观察到聚糖改变(未示出数据)。
表25.筛选额外分子:对Mab8产品质量的影响
Mab9HCCF的洗涤剂西甲硅油处理的结果示于表26。对于每个测试条件,没有注意到对产品质量的影响。没有观察到聚糖改变(未示出数据)。
表26.筛选额外分子:对Mab9产品质量的影响
实施例4吹扫研究
评估了考虑中的四种洗涤剂的发泡和西甲硅油减轻发泡的效果。
评估的洗涤剂包括APG325、TritonCG110、EcosurfEH9和LutensolXP90。洗涤剂(0.5%)加入到两升发酵罐中的HCCF中。以50RPM的速率混合溶液。以每分钟10标准立方厘米(SCCM)的速度用室内空气吹扫发酵罐,或者不吹扫发酵罐。消泡剂1%西甲硅油以2mL/L培养物加入。
EcosurfEH9显示比烷基葡糖苷洗涤剂更少发泡且具有更小的气泡。消泡剂的加入除去了所有泡沫,且在72小时没有重新形式额外的泡沫。
TritonCG110显示大的气泡(airybubble)。消泡剂的添加减少了泡沫,但并没有完全去除泡沫。在72小时没有形成额外的泡沫。
APG325N显示冒出容器的大气泡的迅速形成。消泡剂的加入对泡沫的影响很小,加入消泡剂之后有额外的泡沫形成。与此相反,APG325N加入到无吹扫的HCCF中具有很少的泡沫或没有泡沫。
实施例5.两种洗涤剂的稳定性。
EcosurfEH9的不稳定性由NMR分析指出。EcosurfEH9的10%储备溶液在室温40℃放置,并在第0天、第7天、第15天和第36天通过NMR分析。结果在表17示出。检测到降解和芳烃的形成。
EcosurfEH-9的不稳定性是由NMR分析指出。EcosurfEH9和TritonCG-110的10%储备溶液在室温40℃放置,并在第0天、第7天、第15天、第30天和第59天通过NMR分析。EcosurfEH9降解产物的定量结果在表27示出。对于EcosurfEH9,检测到降解和芳烃形成。图5和6分别显示TritonCG-110和EcosurfEH9的稳定性样品的NMR谱。TritonCG-110是稳定的,高达59天具有很小的变化。与此相反,可看到在EcosurfEH9溶液储存期间降解产物的形成。
表27.EcosurfEH9的不稳定性。
样品 | 总降解(μg/mL) | 总芳烃(μg/mL) |
第0天40℃ | 98.9 | 1.0 |
第7天40℃ | 234.5 | 50.5 |
第15天40℃ | 392.9 | 106.5 |
第36天40℃ | 630.1 | 174.9 |
第36天室温 | 115.1 | 8.8 |
此外,经八周分析了EcosurfEH9和TritonCG110在10%(v/v)洗涤剂水性储备溶液中形成的过氧化物。使用了EMDMillipore比色过氧化物试验1.10001.0001测试。结果以ppm表示在表28。原料与储备溶液储存在环境温度下,并用铝箔覆盖避光。EcosurfEH9原料在大约8个月前曾被打开并重新密封。检测EcosurfEH9原料和10%储备溶液中的过氧化物。在八周中未检测到TritonCG110储备溶液中可检测的过氧化物(<0.5ppm)。
表28.过氧化物(ppm水平)的形成。
实施例6.洗涤剂的EHS评估。
对21种不同候选材料的环境健康和安全性进行了综述。每种材料经研究以确定其基本的物理和毒理特性。从制备商和政府文献获得此EHS信息,并汇总在表29中。
表29.分析的洗涤剂
选择了五个候选材料进行进一步的生态毒性研究:
EcosurfEH-9
TritonCG-110
Tomadol
APG325
LutensolXP-90
生态毒性研究的目的是要建立各候选材料对水生生物没有显著风险的最高存在浓度。这个浓度被称为预测无效应浓度(PNEC),用于开发各候选材料的具体PNEC的方法在欧盟的风险评估技术指导文件(TechnicalGuidanceDocumentforRiskAssessment)2003(TGD)中详细说明。
为了开发PNEC,使用经济合作发展组织(OECD)的试验方法测定活性污泥呼吸抑制(OECD209)、藻类生长抑制(OECD201)、溞急性活动抑制(OECD202)、溞长期繁殖(OECD211)和鱼类急性毒性试验(OECD203),评估了这五个候选材料。
这些研究产生了用于接收工艺废水的废水处理工厂的PNEC(PNECSTP),也产生了用于受纳水体的PNEC(PNECRW)。
在制备场所使用候选物质将导致候选物质在废水处理厂中的浓度(称为污水处理厂的预测环境浓度(PECSTP))、以及候选物质在受纳水体中的浓度(称为受纳水体的预测环境浓度(PECRW))。污水处理厂也可以从废水中去除一部分候选物质,该量是使用OECD的易生物降解性试验(OECD301F)通过测试各候选材料而计算的量。
比较五个候选物质的PEC和PNEC提供了有用的环境相容性谱。当候选物质的PEC比其PNEC低时,候选物质被认为是环保的。
Claims (60)
1.一种在治疗性多肽的制备工艺中灭活产品原料流中病毒的方法,所述方法包括用洗涤剂处理原料流的步骤,其中所述洗涤剂是环境相容性的。
2.根据权利要求1所述的方法,其中与使用TritonX-100的方法或不使用洗涤剂的方法相比,所述方法保持治疗性多肽的产品质量。
3.根据权利要求2所述的方法,其中治疗性多肽的产品质量导致产品变体的改变不超过产品原料流中总多肽的5%。
4.根据权利要求3所述的方法,其中产品变体的增加不超过产品原料流中总多肽的5%。
5.根据权利要求3或4所述的方法,其中产品变体是尺寸变体、电荷变体、氧化变体、脱酰胺变体、糖化变体、或具有改变的聚糖分布的变体。
6.根据权利要求3-5中的任一项所述的方法,其中产品变体是酸性和/或碱性产品变体。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法,其中用洗涤剂处理原料流不导致多肽的片断化增加超过约5%。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法,其中用洗涤剂处理原料流不导致原料流中的聚集增加超过约5%。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法,其中用洗涤剂处理原料流不导致制备工艺中多肽的产量降低超过约5%。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法,其中洗涤剂加入到原料流中至最终浓度约0.01%至约10%。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法,其中洗涤剂加入到原料流中至最终浓度约0.3%至约1%。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法,其中原料流用洗涤剂处理至少约1分钟到至少约48小时。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法,其中原料流用洗涤剂处理至少约15分钟到至少约3小时。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法,其中原料流用洗涤剂处理至少约1小时。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法,其中原料流在约4℃到约30℃用洗涤剂处理。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的方法,其中原料流在约15℃到约20℃用洗涤剂处理。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法,其中洗涤剂是非离子洗涤剂或两性离子洗涤剂。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的方法,其中洗涤剂具有约12至约15的亲水亲油平衡值(HLB)。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的方法,其中洗涤剂不包含或形成辛基酚。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的方法,其中洗涤剂不包含或形成过氧化物。
21.根据权利要求1-20中任一项所述的方法,其中包含洗涤剂的原料流是低浊度的。
22.根据权利要求1-21中任一项所述的方法,其中向原料流添加洗涤剂不增加原料流的浊度。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的方法,其中丢弃后,接收由洗涤剂使用引起的洗涤剂在受纳水体中的预测环境浓度(PEC)在洗涤剂的预测无效应浓度(PNEC)以下。
24.根据权利要求23所述的方法,其中PEC比PNEC低。
25.根据权利要求1-24中任一项所述的方法,其中环境相容的洗涤剂包括烷基葡糖苷。
26.根据权利要求25所述的方法,其中烷基葡糖苷是癸基葡糖苷。
27.根据权利要求1-24中任一项所述的方法,其中环境相容的洗涤剂是醇乙氧基化物。
28.根据权利要求1-24中任一项所述的方法,其中环境相容的洗涤剂是烷基聚乙二醇醚。
29.根据权利要求1-24中任一项所述的方法,其中环境相容的洗涤剂具有CAS登记号CAS9005-64-5,CAS9005-65-6,CAS126-43-8,68515-73-1,CAS58846-77-8,CAS59122-55-3,CAS110615-47-9,CAS29836-26-8,CAS64366-70-7,CAS68937-66-6,CAS69227-22-1,CAS25322-68-3,CAS27252-75-1,CAS4292-10-8,CAS132778-08-6,CAS110615-47-9,CAS68515-73-1或CAS68439-46-3。
30.根据权利要求1-29中任一项所述的方法,其中洗涤剂包含一种或多种表面活性剂。
31.根据权利要求1-30中任一项所述的方法,其中洗涤剂包含一种或多种表面活性剂、防腐剂和螯合剂。
32.根据权利要求1-31中任一项所述的方法,其中原料流包含收获的细胞培养物流体。
33.根据权利要求32所述的方法,其中洗涤剂加入到收获的细胞培养物流体中。
34.根据权利要求1-33中任一项所述的方法,其中原料流包含捕获池或回收的产品池。
35.根据权利要求34所述的方法,其中捕获池或回收的产品池是亲和色谱池。
36.根据权利要求34或35所述的方法,其中捕获池或回收的产品池是蛋白A池、蛋白G池或蛋白L池。
37.根据权利要求34所述的方法,其中捕获池或回收的产品池是混合模式色谱池。
38.根据权利要求34或37所述的方法,其中捕获池是CaptoAdhere池。
39.根据权利要求1-38中任一项所述的方法,其中洗涤剂与消泡剂组合使用。
40.根据权利要求39所述的方法,其中消泡剂是西甲硅油。
41.根据权利要求1-40中任一项所述的方法,其中病毒是有包膜病毒。
42.根据权利要求1-41中任一项所述的方法,其中病毒是逆转录病毒、疱疹病毒、黄病毒、痘病毒、嗜肝DNA病毒、肝炎病毒、正粘病毒、副粘病毒,弹状病毒或披膜病毒。
43.根据权利要求1-42中任一项所述的方法,其中原料流中洗涤剂的病毒对数减少值(LRV)大于约一。
44.根据权利要求1-43中任一项所述的方法,其中病毒LRV大于约四。
45.根据权利要求43或44所述的方法,其中LRV基于感染性测定法计算。
46.根据权利要求45所述的方法,其中感染性测定法是噬斑测定法或TCID50测定法。
47.根据权利要求1-46中任一项所述的方法,其中方法还包括在加入洗涤剂后过滤原料流的步骤。
48.根据权利要求47所述的方法,其中加入洗涤剂后至少约15分钟到至少约48小时过滤原料流。
49.根据权利要求47或48所述的方法,其中加入洗涤剂后至少约1小时到至少约3小时过滤原料流。
50.根据权利要求47-49中任一项所述的方法,其中加入洗涤剂后约1小时后过滤原料流。
51.根据权利要求47-50中任一项所述的方法,其中过滤是超滤或深度过滤。
52.根据权利要求1-51中任一项所述的方法,其中加入洗涤剂后原料流进行色谱处理。
53.根据权利要求52所述的方法,其中色谱是亲和色谱、离子交换色谱、疏水相互作用色谱、羟基磷灰石色谱、或混合模式色谱中的一种或多种。
54.根据权利要求53所述的方法,其中亲和色谱是蛋白A色谱、蛋白G色谱或蛋白L色谱。
55.根据权利要求53所述的方法,其中离子交换色谱为阴离子交换色谱或阳离子交换色谱。
56.根据权利要求53所述的方法,其中混合模式色谱是CaptoAdhere色谱。
57.根据权利要求1-56任一项所述的方法,其中治疗性多肽是抗体、免疫粘附素、酶、生长因子、受体、激素、调控因子、细胞因子、Fc融合多肽、抗原或结合剂。
58.根据权利要求57所述的方法,其中抗体是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、双特异性抗体、或抗体片段。
59.根据权利要求1-58中任一项所述的方法,其中治疗性多肽在哺乳动物细胞中生产。
60.根据权利要求59所述的方法,其中哺乳动物细胞系是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或幼仓鼠肾(BHK)细胞、鼠杂交瘤细胞、或鼠骨髓瘤细胞。
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Cited By (4)
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CN111050799A (zh) * | 2017-08-25 | 2020-04-21 | 伊克诺斯科学公司 | 灭活病毒污染物的方法 |
CN111108193A (zh) * | 2017-09-18 | 2020-05-05 | 拜耳医药保健有限公司 | 使用n-甲基葡糖酰胺及其衍生物灭活病毒的方法 |
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108333261A (zh) * | 2017-01-20 | 2018-07-27 | 湖北生物医药产业技术研究院有限公司 | 检测蛋白电荷变异体的方法及确定生物制品生产工艺的方法 |
SG11202004725PA (en) | 2017-12-19 | 2020-07-29 | CSL Behring Lengnau AG | Protein purification and virus inactivation with alkyl glycosides |
KR102270048B1 (ko) | 2020-07-10 | 2021-06-28 | 주식회사 녹십자 | 바리셀라 조스터 바이러스 표면 단백질 항원의 생산 방법 |
WO2020069124A1 (en) | 2018-09-28 | 2020-04-02 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Wash reagent containing alkoxylated fatty alcohol and methods of production and use thereof |
CA3119629A1 (en) * | 2018-11-15 | 2020-05-22 | Bayer Healthcare Llc | Viral inactivation methods for continuous manufacturing of antibodies |
AU2020240034A1 (en) | 2019-03-19 | 2021-08-19 | Amgen Inc. | Alternate detergents for viral inactivation |
CN111318264B (zh) * | 2020-02-15 | 2021-11-23 | 江苏大学 | 一种硼亲和分子印迹搅拌棒的制备方法及应用于邻苯二酚的吸附分离 |
WO2022074088A1 (en) | 2020-10-06 | 2022-04-14 | Qiagen Gmbh | Method for virus detection |
WO2022175429A1 (en) | 2021-02-19 | 2022-08-25 | Qiagen Gmbh | Method for virus detection |
WO2023020914A1 (en) * | 2021-08-18 | 2023-02-23 | Biotest Ag | Dry heat treatment of plasma-derived factor viii |
WO2023115027A2 (en) | 2021-12-16 | 2023-06-22 | Bristol-Myers Squibb Company | Detergent for viral inactivation |
WO2024115344A1 (en) | 2022-11-29 | 2024-06-06 | Merck Patent Gmbh | Method for inactivating enveloped viruses |
WO2024130163A1 (en) * | 2022-12-16 | 2024-06-20 | Avirmax Biopharma Inc. | Methods for manufacturing viruses and viral particles |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5614405A (en) * | 1991-06-20 | 1997-03-25 | Immuno Aktiengesellschaft | Method of determining the virus inactivation capacity of an inactivation treatment |
CN103370072A (zh) * | 2010-12-15 | 2013-10-23 | 巴克斯特国际公司 | 使用改进的溶剂-清洁剂方法进行病毒灭活 |
Family Cites Families (37)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
USRE30985E (en) | 1978-01-01 | 1982-06-29 | Serum-free cell culture media | |
US4399216A (en) | 1980-02-25 | 1983-08-16 | The Trustees Of Columbia University | Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials |
US4560655A (en) | 1982-12-16 | 1985-12-24 | Immunex Corporation | Serum-free cell culture medium and process for making same |
US4657866A (en) | 1982-12-21 | 1987-04-14 | Sudhir Kumar | Serum-free, synthetic, completely chemically defined tissue culture media |
US4713339A (en) | 1983-01-19 | 1987-12-15 | Genentech, Inc. | Polycistronic expression vector construction |
AU2353384A (en) | 1983-01-19 | 1984-07-26 | Genentech Inc. | Amplification in eukaryotic host cells |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US4767704A (en) | 1983-10-07 | 1988-08-30 | Columbia University In The City Of New York | Protein-free culture medium |
GB8516415D0 (en) | 1985-06-28 | 1985-07-31 | Celltech Ltd | Culture of animal cells |
US4927762A (en) | 1986-04-01 | 1990-05-22 | Cell Enterprises, Inc. | Cell culture medium with antioxidant |
IL87737A (en) | 1987-09-11 | 1993-08-18 | Genentech Inc | Method for culturing polypeptide factor dependent vertebrate recombinant cells |
WO1990003430A1 (en) | 1988-09-23 | 1990-04-05 | Cetus Corporation | Cell culture medium for enhanced cell growth, culture longevity and product expression |
US4939176A (en) * | 1988-12-20 | 1990-07-03 | Miles Inc. | Viral inactivation process |
DE3920358A1 (de) | 1989-06-22 | 1991-01-17 | Behringwerke Ag | Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung |
EP0502036B1 (en) | 1989-11-22 | 1995-12-20 | Genentech, Inc. | Latency associated peptide and uses therefor |
US5122469A (en) | 1990-10-03 | 1992-06-16 | Genentech, Inc. | Method for culturing Chinese hamster ovary cells to improve production of recombinant proteins |
DE69233528T2 (de) | 1991-11-25 | 2006-03-16 | Enzon, Inc. | Verfahren zur Herstellung von multivalenten antigenbindenden Proteinen |
HRP940645A2 (en) * | 1993-10-06 | 1996-12-31 | Immuno Ag | Process for virus deactivation in the presence of polyalkylene glycol and the pharmaceutical preparation thus obtained |
US5856179A (en) | 1994-03-10 | 1999-01-05 | Genentech, Inc. | Polypeptide production in animal cell culture |
AT405939B (de) * | 1997-02-24 | 1999-12-27 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von lipidumhüllten viren |
US6610316B2 (en) * | 1997-05-30 | 2003-08-26 | Shanbrom Technologies, Llc | Disinfection by particle-bound and insolubilized detergents |
EP1345968A2 (en) | 2000-12-28 | 2003-09-24 | Altus Biologics Inc. | Crystals of whole antibodies and fragments thereof and methods for making and using them |
US20030228244A1 (en) | 2002-06-05 | 2003-12-11 | Perez Libardo A. | Inhibition of the depletion of metal values from pregnant lixiviant solutions |
WO2005014777A2 (en) * | 2002-10-16 | 2005-02-17 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions for increasing the efficacy of biologically-active ingredients |
EP1711513B1 (en) | 2003-12-01 | 2014-07-02 | Novo Nordisk Health Care AG | Nanofiltration of factor vii solutions to remove virus |
US7390788B2 (en) | 2005-06-23 | 2008-06-24 | Pert Candace B | Peptide pharmaceutical compositions |
EP2016097A2 (en) * | 2006-05-04 | 2009-01-21 | Genentech, Inc. | Methods and compositions relating to zpa polypeptides |
US8080645B2 (en) | 2007-10-01 | 2011-12-20 | Longhorn Vaccines & Diagnostics Llc | Biological specimen collection/transport compositions and methods |
US7838485B2 (en) | 2007-03-08 | 2010-11-23 | American Sterilizer Company | Biodegradable alkaline disinfectant cleaner with analyzable surfactant |
US8871807B2 (en) * | 2008-03-28 | 2014-10-28 | Ecolab Usa Inc. | Detergents capable of cleaning, bleaching, sanitizing and/or disinfecting textiles including sulfoperoxycarboxylic acids |
TWI445714B (zh) | 2009-05-27 | 2014-07-21 | Baxter Int | 產製用於皮下使用之高濃度免疫球蛋白製備物之方法 |
MX2012001882A (es) * | 2009-08-13 | 2012-04-11 | Crucell Holland Bv | Anticuerpos contra el virus sincitial respiratorio (rsv) humano y metodos de uso. |
EP3736338A1 (en) * | 2009-09-01 | 2020-11-11 | F. Hoffmann-La Roche AG | Enhanced protein purification through a modified protein a elution |
WO2012036700A1 (en) * | 2010-09-17 | 2012-03-22 | Ecolab Usa Inc. | Laundry composition for treatment of sunscreen stains based on extended chain surfactants |
US8580727B2 (en) * | 2010-09-17 | 2013-11-12 | Ecolab Usa Inc. | Reduced caustic laundry detergents based on extended chain surfactants |
BR112013010673A2 (pt) * | 2010-11-16 | 2019-09-24 | Dow Global Technologies Llc | composição de limpeza de superfície dura |
AU2012237026A1 (en) | 2011-03-25 | 2013-10-24 | Genentech, Inc. | Novel protein purification methods |
-
2014
- 2014-11-13 HU HUE14862284A patent/HUE065394T2/hu unknown
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-
2016
- 2016-05-13 US US15/154,235 patent/US10611795B2/en active Active
- 2016-12-20 HK HK16114478A patent/HK1225990A1/zh unknown
-
2019
- 2019-11-18 JP JP2019208228A patent/JP2020063253A/ja not_active Withdrawn
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5614405A (en) * | 1991-06-20 | 1997-03-25 | Immuno Aktiengesellschaft | Method of determining the virus inactivation capacity of an inactivation treatment |
CN103370072A (zh) * | 2010-12-15 | 2013-10-23 | 巴克斯特国际公司 | 使用改进的溶剂-清洁剂方法进行病毒灭活 |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109022377A (zh) * | 2017-06-12 | 2018-12-18 | 舒泰神(北京)生物制药股份有限公司 | 一种杆状病毒表达***中杆状病毒的灭活方法 |
CN111050799A (zh) * | 2017-08-25 | 2020-04-21 | 伊克诺斯科学公司 | 灭活病毒污染物的方法 |
CN111108193A (zh) * | 2017-09-18 | 2020-05-05 | 拜耳医药保健有限公司 | 使用n-甲基葡糖酰胺及其衍生物灭活病毒的方法 |
CN115066266A (zh) * | 2019-12-12 | 2022-09-16 | 伊莱利利公司 | 用环保洗涤剂灭活病毒的方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN105722523B (zh) | 2022-06-14 |
KR20160085321A (ko) | 2016-07-15 |
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ES2970817T3 (es) | 2024-05-30 |
JP2020063253A (ja) | 2020-04-23 |
CA2930687A1 (en) | 2015-05-21 |
EP3068417C0 (en) | 2023-12-27 |
EP4389157A2 (en) | 2024-06-26 |
HUE065394T2 (hu) | 2024-05-28 |
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PL3068417T3 (pl) | 2024-05-13 |
US10611795B2 (en) | 2020-04-07 |
HK1225990A1 (zh) | 2017-09-22 |
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