CN105651765A - 一种蛋白质快速检测试纸及其制备方法与检测方法 - Google Patents

一种蛋白质快速检测试纸及其制备方法与检测方法 Download PDF

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田然
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Abstract

本发明公开了一种蛋白质快速检测试纸，该检测试纸包括基片及固定在基片上的显示试纸，显色试纸是滤纸经浸渍液充分湿润后干燥制得；浸渍液包含以下质量百分数的组分：碱剂0.5-10％、硫酸铜0.1-0.6％、络合剂0.3-1.2％、分散剂1.0-4.0％。本发明的蛋白质快速检测试纸操作简单，无需配制试剂，检测速度快，适合在线检测，克服了使用传统的大型仪器对蛋白质检测时的费时费力的不足，而且试纸制作简单、成本低廉，检测费用低，检测结果准确，重复性好，具有良好的应用前景。

Description

一种蛋白质快速检测试纸及其制备方法与检测方法
技术领域
本发明属于分析检测的技术领域，具体涉及一种蛋白质快速检测试纸及其制备方法与检测方法。
背景技术
蛋白质作为生命的物质基础，是人体进行组织更新和修补的主要原料，也是人体中最重要的营养素。人体所需的氮元素，只能通过食物中的蛋白质进行获取，所以蛋白质对于人体具有糖类和脂肪不可替代的作用。因此，蛋白质含量的检测，也已成为食品检测中的一项重要指标。
目前，进行蛋白质检测的方法有很多种，如，凯氏定氮法、分光光度法、紫外吸收法等。其中，凯氏定氮法是国标的蛋白质检测方法，但是该方法操作过于复杂，整个检测流程费时过长，并不适合于食品中蛋白质的快速检测。分光光度法、紫外吸收法检测速度较快，但是需要配制大量的检测试剂，不便携带，而且要求检测人员具有一定的专业水平。
发明内容
为了解决现有蛋白质检测技术存在的耗时长、操作复杂、不便携带等缺陷，本发明提供了一种检测迅速、检测灵敏度高的蛋白质快速检测试纸及其制备方法与检测方法。
本发明提供了一种蛋白质快速检测试纸，该检测试纸包括基片及固定在基片上的显示试纸，显色试纸是滤纸经浸渍液充分湿润后干燥制得；浸渍液包含以下质量百分数的组分：碱剂0.5-10％、硫酸铜0.1-0.6％、络合剂0.3-1.2％、分散剂1.0-4.0％。基片由PVC(聚氯乙烯)材质制成，基片最好为白色，便于观察显色试纸的颜色变化。浸渍液是一种能与蛋白质溶液发生双缩脲显色反应的碱性含铜试液，呈蓝色，当含有肽键时，试液中的铜与多肽配位，配合物呈紫色。紫色的颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，固可测定出蛋白质的含量。分散剂使检测试纸的颜色更均匀，显色效果更好。
优选的，碱剂为氢氧化钠或氢氧化钾。
优选的，络合剂为酒石酸钾钠或乙二胺四乙酸二钠。
优选的，分散剂为聚乙烯吡咯烷酮。
优选的，浸渍液还包含以下质量百分数的组分：表面活性剂1.0-3.0％、助表面活性剂0.5-1.5％。表面活性剂和助表面活性剂使得显色后试纸的颜色分布均匀，颜色效果好，检测结果最佳。
优选的，表面活性剂为吐温80、聚乙二醇辛基苯基醚、十二烷基苯磺酸钠中的任意一种。
优选的，助表面活性剂为无水乙醇、正丙醇、正丁醇、正己醇、正辛醇、乙二醇、丙二醇、甘油、聚甘油酯中的任意一种。
本发明还提供了一种蛋白质快速检测试纸的制备方法，该方法包括以下步骤：
(1)将滤纸在浸渍液中浸渍1-10min，取出后干燥，制得显色试纸；浸渍液包含以下质量百分数的组分：碱剂0.5-10％、硫酸铜0.1-0.6％、络合剂0.3-1.2％、分散剂1.0-4.0％；
(2)将干燥后的显色试纸粘贴在基片上。
干燥可采用冻干、风干、室温下晾干或加热干燥等方法。
优选的，步骤(1)的浸渍液还包含以下质量百分数的组分：表面活性剂1.0-3.0％、助表面活性剂0.5-1.5％。
本发明又提供了一种利用检测试纸快速检测蛋白质含量的方法，将检测试纸置于标准蛋白质溶液各梯度样品和待测样品溶液3-5s，取出后平放，3-10min后测定其反光值，以标准蛋白质溶液各梯度样品的浓度和反光值拟合标准曲线，将待测样品溶液的反光值代入标准曲线中计算蛋白质含量。
本发明的检测试纸在测试时，只需将试纸浸入待测蛋白液几秒，取出后平置，待显色试纸颜色稳定后，即可通过光电测色仪进行检测或者目测比色分析，从而测出测液中的蛋白质含量。本发明的检测方法可以在几分钟内完成待测样品的蛋白质含量测定，实现蛋白质的快速检测。
本发明的有益效果：本发明的检测试纸操作简单，无需配制试剂，检测速度快，适合在线检测，克服了使用传统的大型仪器对蛋白质检测时的费时费力的不足，而且试纸制作简单、成本低廉，检测费用低，检测结果准确，重复性好，具有良好的应用前景。
附图说明
图1为本发明蛋白质快速检测试纸的结构示意图；
1、基片；2、显色试纸。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行详细地解释说明。
实施例1
一种蛋白质快速检测试纸，该检测试纸包括基片及固定在基片上的显示试纸，显色试纸是滤纸经浸渍液充分湿润后干燥制得；浸渍液包含以下质量百分数的组分：氢氧化钾0.5％、硫酸铜0.1％、酒石酸钾钠0.3％、聚乙烯吡咯烷酮1.0％。
一种蛋白质快速检测试纸的制备方法，该方法包括以下步骤：
(1)称取0.5g氢氧化钾、0.1g硫酸铜、0.3g酒石酸钾钠，用50mL蒸馏水溶解；然后加入1.0g的聚乙烯吡咯烷酮，搅拌均匀，后用蒸馏水稀释至100mL，制得浸渍液。
(2)将滤纸置于浸渍液中浸渍1min，取出，在55℃干燥箱中干燥20min，将干燥后的显色试纸粘贴在基片上，制得所述检测试纸。
利用所述检测试纸快速检测蛋白质含量的方法为：将检测试纸置于标准蛋白质溶液各梯度样品和待测样品溶液3s，取出后平放，10min后测定其反光值，以标准蛋白质溶液各梯度样品的浓度和反光值拟合标准曲线，将待测样品溶液的反光值代入标准曲线中计算蛋白质含量。
实施例2
一种蛋白质快速检测试纸，该检测试纸包括基片及固定在基片上的显示试纸，显色试纸是滤纸经浸渍液充分湿润后干燥制得；浸渍液包含以下质量百分数的组分：氢氧化钠4.0％、硫酸铜0.4％、乙二胺四乙酸二钠0.6％、甘氨酸1.8％、氯化钠0.14％、聚乙烯吡咯烷酮3.0％、吐温801.0％、无水乙醇0.5％。
一种蛋白质快速检测试纸的制备方法，该方法包括以下步骤：
(1)称取4.0g氢氧化钠、0.4g硫酸铜、0.6g乙二胺四乙酸二钠、1.8g甘氨酸、0.14g氯化钠，用50mL蒸馏水溶解，然后加入3.0g聚乙烯吡咯烷酮、1.0g吐温80、0.5g无水乙醇，混合均匀，后用蒸馏水稀释至100mL，制得浸渍液。
(2)将滤纸置于浸渍液中浸渍5min，取出，在60℃干燥箱中干燥15min；将干燥后的显色试纸粘贴在基片上，制得所述检测试纸。
利用所述检测试纸快速检测蛋白质含量的方法为：将检测试纸置于标准蛋白质溶液各梯度样品和待测样品溶液4s，取出后平放，3min后测定其反光值，以标准蛋白质溶液各梯度样品的浓度和反光值拟合标准曲线，将待测样品溶液的反光值代入标准曲线中计算蛋白质含量。
实施例3
一种蛋白质快速检测试纸，该检测试纸包括基片及固定在基片上的显示试纸，显色试纸是滤纸经浸渍液充分湿润后干燥制得；浸渍液包含以下质量百分数的组分：氢氧化钠10％、硫酸铜0.6％、酒石酸钾钠1.2％、聚乙烯吡咯烷酮4.0％、十二烷基苯磺酸钠3.0％、聚甘油酯1.5％。
一种蛋白质快速检测试纸的制备方法，该方法包括以下步骤：
(1)称取10g氢氧化钠、0.6g硫酸铜、1.2g酒石酸钾钠，用50mL蒸馏水溶解，然后加入4.0g的聚乙烯吡咯烷酮、3.0g十二烷基苯磺酸钠、1.5g聚甘油酯，混合均匀，后用蒸馏水稀释至100mL，制得浸渍液。
(2)将滤纸置于浸渍液中浸渍10min，取出，在55℃干燥箱中干燥20min；将干燥后的显色试纸粘贴在基片上，制得所述检测试纸。
利用所述检测试纸快速检测蛋白质含量的方法为：将检测试纸置于标准蛋白质溶液各梯度样品和待测样品溶液5s，取出后平放，5min后测定其反光值，以标准蛋白质溶液各梯度样品的浓度和反光值拟合标准曲线，将待测样品溶液的反光值代入标准曲线中计算蛋白质含量。
对比实施例1
现有的蛋白质检测试纸的检测方法：
(1)双缩脲试剂的制备：称取1.90g硫酸铜、2.85gEDTA-Na2·2H2O、8.75g甘氨酸、7.00g氯化钠、用350mL蒸馏水溶解，在搅拌下加入28.00g氢氧化钠，用蒸馏水稀释至500mL，储存备用。
(2)配制1.5倍双缩脲标准试剂浓度的溶液100mL，加入TritonX—1000.35g、聚乙烯吡咯烷酮0.25g，溶解后，将试纸置于溶液中充分浸泡10min，取出，在60℃干燥箱中干燥15min，将干燥后的试纸粘贴在PV胶版上，裁成2cm×0.5cm的小条，放入加有干燥剂的瓶中保存。
(3)取不同浓度的蛋白标准溶液各20μL滴加在试纸上，反应10min后放入光电检测仪，在波长560nm下进行检测，以标准蛋白质溶液各梯度样品的浓度和反光值拟合标准曲线。取样品溶液，各取20μL滴加在试纸上，反应10min后放入光电检测仪，于波长560nm下进行检测，记录结果，在标准曲线上查出蛋白质浓度，计算出蛋白质含量(g/100g)。
本发明的检测试纸法对蛋白质的检出限为0.5mg/mL，现有的检测试纸法对蛋白质的检出限为0.85mg/mL，而且本发明的检测试纸法的重复性要优于现有的检测试纸法。
本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明实质内容上所作的任何修改、等同替换和简单改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种蛋白质快速检测试纸，其特征在于，该检测试纸包括基片及固定在基片上的显示试纸，显色试纸是滤纸经浸渍液充分湿润后干燥制得；浸渍液包含以下质量百分数的组分：碱剂0.5-10％、硫酸铜0.1-0.6％、络合剂0.3-1.2％、分散剂1.0-4.0％。
2.根据权利要求1所述的蛋白质快速检测试纸，其特征在于，碱剂为氢氧化钠或氢氧化钾。
3.根据权利要求1所述的蛋白质快速检测试纸，其特征在于，络合剂为酒石酸钾钠或乙二胺四乙酸二钠。
4.根据权利要求1所述的蛋白质快速检测试纸，其特征在于，分散剂为聚乙烯吡咯烷酮。
5.根据权利要求1所述的蛋白质快速检测试纸，其特征在于，浸渍液还包含以下质量百分数的组分：表面活性剂1.0-3.0％、助表面活性剂0.5-1.5％。
6.根据权利要求5所述的蛋白质快速检测试纸，其特征在于，表面活性剂为吐温80、聚乙二醇辛基苯基醚、十二烷基苯磺酸钠中的任意一种。
7.根据权利要求5所述的蛋白质快速检测试纸，其特征在于，助表面活性剂为无水乙醇、正丙醇、正丁醇、正己醇、正辛醇、乙二醇、丙二醇、甘油、聚甘油酯中的任意一种。
8.一种制备权利要求1所述的蛋白质快速检测试纸的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)将滤纸在浸渍液中浸渍1-10min，取出后干燥，制得显色试纸；浸渍液包含以下质量百分数的组分：碱剂0.5-10％、硫酸铜0.1-0.6％、络合剂0.3-1.2％、分散剂1.0-4.0％；
(2)将干燥后的显色试纸粘贴在基片上。
9.根据权利要求8所述的蛋白质快速检测试纸的制备方法，其特征在于，步骤(1)的浸渍液还包含以下质量百分数的组分：表面活性剂1.0-3.0％、助表面活性剂0.5-1.5％。
10.一种利用权利要求1所述的检测试纸检测蛋白质含量的方法，其特征在于，将检测试纸置于标准蛋白质溶液各梯度样品和待测样品溶液3-5s，取出后平放，3-10min后测定其反光值，以标准蛋白质溶液各梯度样品的浓度和反光值拟合标准曲线，将待测样品溶液的反光值代入标准曲线中计算蛋白质含量。
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