CN105596788B - 一种防治脑血管疾病药物制剂的制备方法 - Google Patents
一种防治脑血管疾病药物制剂的制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明是一种防治脑血管疾病的药物制剂及其制备方法，它由天麻、制杜仲、制草乌、制附子、独活、藁本、玄参、当归、地黄、川牛膝、槲寄生、羌活经提取精制后加适量辅料制备而成；本发明的药品具有平肝息风，活血散寒，舒筋止痛功效，主要用于肝阳化风、寒湿阻络所致缺血性脑血管疾病见筋脉挈痛、肢体麻木，行走不便，腰腿酸痛，头痛头昏、神情呆滞、语言不利等症的治疗。与现有技术相比，本发明为提取有效部位制剂，纯度高，服用剂量小，生物利用度高，而且质量稳定，疗效更优，毒性低，安全性更好。
Description
技术领域
本发明涉及防治疗脑血管疾病药物制剂的制备方法，属于药品的技术领域。
背景技术
脑血管疾病是指各种病因导致脑血管损害而引起的脑组织病变。急性发病并迅速出现脑功能障碍的脑血管疾病称为急性脑血管病，也称脑血管意外、脑中风或脑卒中，具有发病高，致残率高和再发率高的特点，是中老年人常见多发病。脑血管疾病、心血管疾病和恶性肿瘤占据人类自然死亡原因的前三位。脑血管疾病的发病率因不同的地区、民族、生活***的提高，脑血管疾病的死亡率有所降低，但致残率仍居高不下，约80％的存活者尚有不同程度的功能障碍，给患者家庭和社会带来了沉重的负担。因此降低致残率，提高康复速度以及预防是目前治疗本病的当务之急。
本发明技术是在原产品强力天麻胶囊基础上进行技术改进而来，处方由天麻、杜仲(盐制)、制草乌、制附子、独活、藁本、玄参、当归、地黄、川牛膝、槲寄生、羌活组成，原剂型制法是将天麻粉碎后与其他药材的粗提物混合制备而成，其功能主治为“散风活血，舒筋止痛。用于中风引起的筋脉挈痛、肢体麻木，行走不便，腰腿酸痛，头痛头昏等”。多年临床应用表明，原剂型临床疗效好，但存在以下不足：(1)原剂型主治完全用中医术语表述，未结合西医说明治疗什么病，给该药品的推广带来了一定局限，而临床实际运用于治疗缺血性脑中风、脑血栓、脑动脉硬化、脑供血不足、高血压等引起的筋脉痛、肢体麻木，行走不便，腰腿酸痛，头痛头昏等症；(2)原剂型制备工艺粗糙，技术含量不高，主要体现在：①原制剂中独活、藁本、当归、羌活四味药材中均含有大量挥发性物质，采用普通制剂技术不能完全保护挥发性物质而导致其大量损失，无法保证药品质量和疗效；②原制剂仅是粗提加工而成，其中含有大量杂质，给制剂带来以下问题：一是含大量杂质使其制剂量大，给用药带来不便，二是有些杂质吸水性强，容易使其制剂吸潮变质，无法保证药品质量和疗效；③原制剂中将天麻直接粉碎后制成制剂，给制剂带来以下问题：一是含大量杂质使其制剂量大，给用药带来不便，二是药材直接生粉入药，有效物质不能完全吸收，使其生物利用度低；三是药材直接生粉入药，服用后有效成分需要溶出吸收利用过程，使其药物起效缓慢。纵观整个制备工艺，不能很好体现制剂的质量及疗效。现通过技术创新进工艺改进，与现有技术相比，有以下优越性：服用剂量减少，生物利用度显著提高，药物起效快，毒副作用低，用药更安全，临床疗效更好、药品质量更稳定。
为了达到上述技术，申请人进行了大量的探索和研究。
发明内容
本发明的目的在于：在于提供一种防治脑血管疾病的药物制剂及其制备方法，本发明的药品无毒副作用，治疗效果好，且起效快，生物利用度高，制剂质量稳定，以解决现有技术存在的问题。
本发明是这样实现的：按照重量份计算，它由天麻2％～18％、制杜仲9.5％～11.5％、制草乌0.5％～1.5％、制附子0.5％～1.5％、独活5％～7％、藁本6.5％～7.5％、玄参6.5％～7.5％、当归11％～13％、地黄18.5％～20.5％、川牛膝6.5％～7.5％、槲寄生6.5％～7.5％、羌活11％～13％经提取加工制备而成。准确的说，按照重量计算，它由天麻9.6％、制杜仲10.3％、制草乌1.2％、制附子1.2％、独活6.0％、藁本7.1％、玄参7.1％、当归12.0％、地黄19.3％、川牛膝7.1％、槲寄生7.1％、羌活12.0％经提取加工制备而成。
本发明防治脑血管疾病的药物制剂是这样制备的：
(1)称取天麻原料药材，加30％～90％乙醇提取，滤过，得乙醇提取液备用，余下天麻药渣备用；称取独活、藁本、当归、羌活四味原料药材用水蒸汽蒸馏提取4～10小时，分离，得挥发油备用；余下药渣与天麻药渣、制杜仲、制草乌、制附子、玄参、地黄、川牛膝、槲寄生合并，加6～12倍量水提取1～4次，每次1～4小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至含生药浓度为1∶1～3∶1的药液，放冷至室温，加入乙醇使溶液含醇量达40％～80％，静置8～48小时，取上清液过滤得乙醇液，与天麻醇提液合并，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.40(60℃)的浸膏，合并挥发油，再加入辅料按常规制剂工艺制成不同的药物制剂。
具体的说：称取天麻原料药材，加5倍量50％乙醇回流提取2次，每次2小时，合并，滤过，得乙醇提取液备用，余下天麻药渣备用；称取独活、藁本、当归、羌活四味原料药材用水蒸汽蒸馏提取6小时，分离，得挥发油备用；余下药渣与天麻药渣、制杜仲、制草乌、制附子、玄参、地黄、川牛膝、槲寄生合并，加10倍量水提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至含生药浓度为1.0∶1的药液，放冷至室温，加入乙醇使溶液含醇量达60％，静置24小时，取上清液过滤得乙醇液，与天麻醇提液合并，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.40(60℃)的浸膏，合并挥发油，再加入辅料按常规制剂工艺制成不同的药物制剂。
(2)称取天麻原料药材，加30％～90％乙醇提取，滤过，得乙醇提取液备用，余下天麻药渣备用；称取独活、藁本、当归、羌活四味原料药材用超临界CO2提取，分离，得挥发油备用；余下药渣与天麻药渣、制杜仲、制草乌、制附子、玄参、地黄、川牛膝、槲寄生合并，加6～12倍量水提取1～4次，每次1～4小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至含生药浓度为1∶1～3∶1的药液，放冷至室温，加到树脂柱上，用30％～90％乙醇洗脱，收集洗脱液，与天麻醇提液合并，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.40(60℃)的浸膏，合并挥发油，再加入辅料按常规制剂工艺制成不同的药物制剂。
具体的说：称取天麻原料药材，加5倍量50％乙醇回流提取2次，每次2小时，合并，滤过，得乙醇提取液备用，余下天麻药渣备用；称取独活、藁本、当归、羌活四味原料药材用超临界CO2提取，分离，得挥发油备用；余下药渣与天麻药渣、杜仲、草乌、附子、玄参、地黄、川牛膝、槲寄生合并，加10倍量水提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至含生药浓度为1.0∶1的药液，放冷至室温，加到大孔吸附树脂柱上，用60％乙醇洗脱，收集洗脱液，与天麻醇提液合并，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.40(60℃)的浸膏，合并挥发油，再加入辅料按常规制剂工艺制成不同的药物制剂。
(3)称取天麻原料药材，加30％～90％乙醇提取，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.40(60℃)的浸膏，得天麻醇提浸膏备用，余下天麻药渣备用；称取独活、藁本、当归、羌活四味原料药材用超临界CO2提取，分离，得挥发油备用；余下药渣与天麻药渣、制杜仲、制草乌、制附子、玄参、地黄、川牛膝、槲寄生合并，加6～12倍量水提取1～4次，每次1～4小时，合并提取液，滤过，滤液通过膜分离过滤，收集过滤液，滤浓缩至相对密度为1.05～1.40(60℃)的浸膏，与天麻醇提浸膏、挥发油合并，再加入辅料按常规制剂工艺制成不同的药物制剂。
具体的说是：称取天麻原料药材，加5倍量50％乙醇回流提取2次，每次2小时，合并，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.40(60℃)的浸膏，得天麻醇提浸膏备用，余下天麻药渣备用；称取独活、藁本、当归、羌活四味原料药材用超临界CO2提取，分离，得挥发油备用；余下药渣与天麻药渣、制杜仲、制草乌、制附子、玄参、地黄、川牛膝、槲寄生合并，加10倍量水提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液通过陶瓷膜分离过滤，收集过滤液，滤浓缩至相对密度为1.05～1.40(60℃)的浸膏，与天麻醇提浸膏、挥发油合并，再加入辅料按常规制剂工艺制成不同的药物制剂。
上述防治脑血管疾病药物制剂的制备方法中，所述的药物制剂为口服制剂，包括颗粒剂、口服液、丸剂、片剂、硬胶囊、软胶囊及滴丸等。
具体的说，上述防治脑血管疾病的药物制剂及制备方法中，所述的药物制剂为硬胶囊剂；所述的制备方法为：取聚乙二醇-6000和聚乙二醇-4000混匀加热熔融，加入挥发油、浸膏，搅拌均匀，转移至滴丸机中于60℃保温10分钟，滴制成丸，脱油，低温干燥，灌装于空心胶囊中，即得。
本发明药物制剂方解：中风是由于气血逆乱，产生风、火、痰、瘀，导致脑脉痹阻或血溢脑脉之外。临床以突然昏仆、半身不遂、口舌否斜、言语謇涩或不语、偏身麻木为主症。本病大致相当于西医的缺血性和出血性脑血管病。中风多因积损正衰、劳倦内伤、饮食不节、情志过极等，导致瘀血阻滞、痰热内蕴，或肝阳化风、血随气逆，而引起脑脉痹阻或血溢脑脉之外所发。其诱因常见：气候骤变，烦劳过度，情志相激，跌扑努伤等。中风病位在脑，与心、肾、肝、脾密切相关。其病机有虚、火、风、痰、气、血六端，并在一定条件下相互作用，互为因果。病性多为本虚标实、上盛下虚，本为肝肾阴虚、气血衰少，标为风火相煽、痰湿壅盛、瘀血阻滞、气血逆乱。而其基本病机则为气血逆乱，上扰于脑。中风的治疗，急性期当以祛邪为主，常用平肝熄风、清热化痰、化痰痛腑、活血通络、醒神开窍等法。闭证治以祛邪开窍醒神，脱证治以扶正固脱、救阴回阳。恢复期及后遗证期，治宜扶正祛邪，常用育阴熄风、益气活血等法。方中以天麻、杜仲、川牛膝、槲寄生平肝西风，通络止痛；玄参、地黄、当归滋阴养血，以阴制阳；附子、草乌温经散寒，通络止痛；羌活、独活、藁本祛风，除湿，散寒，通络止痛。诸药合用，共奏平肝息风，活血散寒，舒筋止痛之功。
本发明的功能主治：平肝息风，活血散寒，舒筋止痛。用于肝阳化风、寒湿阻络所致缺血性脑中风、脑血栓、脑动脉硬化、脑栓塞、脑梗死、脑供血不足、高血压、脑萎缩、血管性痴呆等脑血管疾病见筋脉挈痛、肢体麻木，行走不便，腰腿酸痛，头痛头昏、神情呆滞、语言不利等。
为了验证本发明药物具有良好的治疗效果，申请人进行了一系列试验研究，具体如下：
一、工艺筛选及初步药效对比试验
(一)工艺路线及样品制备
1、原制剂工艺(原药)及样品制备：取处方十二味药材，天麻粉碎成细粉，独活、藁本、当归、羌活提取挥发油，药渣与杜仲等七味，加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成膏，与上述粉末，混合，干燥，粉碎，过筛，制成颗粒，干燥，喷入挥发油，混匀，密封包装即得原制剂样品。投料量为2.5倍处方量，制成量为1800g。样品编号：20091018。
2、新工艺1及样品制备：取处方十二味药材，天麻粉碎成粗粉，加5倍量50％乙醇回流提取2次，每次2小时，合并，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.25～1.40(60℃)的浸膏，得天麻醇提浸膏备用，独活、藁本、当归、羌活提取挥发油，药渣与杜仲等七味，加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.25～1.40(60℃)的浸膏，与上述天麻醇提浸膏，混合，干燥，粉碎，过筛，制成颗粒，干燥，喷入挥发油，混匀，密封包装即得。投料量为2.5倍处方量，制成量为1530g。样品编号：QL0910-1。
3、新工艺2及样品制备：取处方十二味药材，天麻粉碎成粗粉，加5倍量50％乙醇回流提取2次，每次2小时，合并，滤过，得乙醇提取液备用，余下天麻药渣备用；独活、藁本、当归、羌活提取挥发油，药渣与天麻药渣、杜仲杜仲等七味，加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至含生药浓度为1.0∶1的药液，放冷至室温，加到大孔吸附树脂柱上，用60％乙醇洗脱，收集洗脱液，与天麻醇提液合并，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.25～1.40(60℃)的浸膏，干燥，粉碎，过筛，制成颗粒，干燥，喷入挥发油，混匀，密封包装即得。投料量为2.5倍处方量，制成量为330g。样品编号：QL0910-2。
4、新工艺3及样品制备：取处方十二味药材，天麻粉碎成粗粉，加5倍量50％乙醇回流提取2次，每次2小时，合并，滤过，药渣备用，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.25～1.40(60℃)的浸膏，得天麻醇提浸膏备用，独活、藁本、当归、羌活提取挥发油，药渣与天麻药渣、杜仲等七味，加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，合并煎液，合并提取液，滤过，滤液通过陶瓷膜分离过滤，收集过滤液，滤浓缩至相对密度为1.25～1.40(60℃)的浸膏，与上述天麻醇提浸膏，混合，干燥，粉碎，过筛，制成颗粒，干燥，喷入挥发油，混匀，密封包装即得。投料量为2.5倍处方量，制成量为1450g。样品编号：QL0910-3。
5、新工艺4及样品制备：取处方十二味药材，天麻粉碎成粗粉，加5倍量50％乙醇回流提取2次，每次2小时，合并，滤过，得乙醇提取液备用，独活、藁本、当归、羌活提取挥发油，药渣与杜仲等七味，加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至含生药浓度为1.0∶1的药液，放冷至室温，加入乙醇使溶液含醇量达60％，静置24小时，取上清液过滤得乙醇液，与天麻醇提液合并，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.25～1.40(60℃)的浸膏，干燥，粉碎，过筛，制成颗粒，干燥，喷入挥发油，混匀，密封包装即得。投料量为2.5倍处方量，制成量为360g。样品编号：QL0910-4。
6、新工艺5及样品制备：取处方十二味药材，天麻粉碎成粗粉，加5倍量50％乙醇回流提取2次，每次2小时，合并，滤过，得乙醇提取液备用，余下天麻药渣备用，独活、藁本、当归、羌活提取挥发油，药渣与天麻药渣、杜仲等七味，加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至含生药浓度为1.0∶1的药液，放冷至室温，加入乙醇使溶液含醇量达60％，静置24小时，取上清液过滤得乙醇液，与天麻醇提液合并，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.25～1.40(60℃)的浸膏，干燥，粉碎，过筛，制成颗粒，干燥，喷入挥发油，混匀，密封包装即得。投料量为2.5倍处方量，制成量为450g。样品编号：QL0910-5。
(二)药效学对比实验实验目的：已知强力天麻杜仲胶囊原药对血小板聚集有抑制作用，本实验以天麻杜仲胶囊原药为阳性对照药，观察5种强力天麻杜仲胶囊测试药(测试药1，2，3，4，5)对正常大鼠体外ADP和凝血酶诱导的血小板最大聚集率的影响。
1、实验材料
1.1实验动物Sprague-Dawley(SD)大鼠，雄性，体重280-320g，清洁级，由苏州大学医学院实验动物中心提供(生产许可证XCYK(苏)：No2002-0008，使用许可证SYXK(苏)：No2002-0037)。喂养条件如下：六只一笼，室温22℃，湿度50-60％，通风良好，人工昼夜(12h/12h)，自由摄食摄水。实验前，将动物在饲养环境中适应1周。
1.2实验仪器TYXN-96多功能智能血液凝聚仪，上海通用机电技术研究；80-2台式低速离心机，上海医疗器械有限公司手术器械厂。
1.3药物与试剂 强力天麻杜仲胶囊原药(20091018)和5种强力天麻杜仲胶囊测试药[测试药1(QL0910-1)、测试药2(QL0910-2)、测试药3(QL0910-3)、测试药4(QL0910-4)、测试药5(QL0910-5)]，样品均由课题组提供，用蒸馏水配成混悬液；磷酸二氢纳(DihydrogenPhosphate国药集团生产批号F20090624)；磷酸氢二钠(Disodium Phosphate国药集团生产生产批号20090915)；枸缘酸钠(Sodium Citrate上海试剂一厂生产生产批号96-02-03)；ADP(Solarbio生产，生产批号A8290)；凝血酶(Thrombin)(Sigma)生产，生产批号9002-04-4)。
2、实验方法
2.1实验设计 健康雄性SD大鼠70只，体重280-320g，随机分成7组，每组10只，分别为正常对照组，强力天麻杜仲胶囊原药组(原药组，350mg/kg，相当于日服量4.2g)和强力天麻杜仲胶囊测试药1(300mg/kg，相当于日服量3.6kg)，2(67mg/kg，相当于日服量0.8)，3(283mg/kg，相当于日服量3.4g)，4(70mg/kg，相当于日服量0.84g)，5(89mg/kg，相当于日服量1.07g)组。给药组大鼠灌胃强力天麻杜仲胶囊原药或各测试药，正常对照组按0.2ml/100g灌胃蒸馏水，每天1次，连续4周。大鼠末次给药2小时后腹主动脉取血测定ADP和凝血酶诱导的血小板最大聚集率(见附图1)
2.2血小板聚集的测定 大鼠末次给药2小时后麻醉腹主动脉取血测定血小板的最大聚集率。按下列步骤操作：
(1)抗凝剂采用3.28％的枸缘酸，抽血量与抗凝剂的比应为9∶1，立即倒混匀2～3次。
(2)取得样品即PRP(富含血小板的血浆)在20～25℃条件下离心速度以500r/min，时间5Min左右，用水平式离心机。(3)待离心机慢慢自然停转，再取出，以免细胞流入PRP中，如发现PRP中仍含RBC应在上述条件下离心片刻。聚集诱导剂用ADP与凝血酶，测定血小板最大聚集率
2.3统计学分析 数据以均值±标准差表示。应用SPSS(10.0版)中相应程序，对数据进行统计处理。统计分析采用单因素方差分析(one-way ANOVA)，p＜0.05为统计学差异有显著性。
3、结果 正常大鼠灌胃强力天麻杜仲胶囊原药或测试药1，2，3，4，54周后，取血进行体外血小板聚集实验。结果表明：与正常对照组大鼠体外ADP和凝血酶诱导的血小板聚集率比较，给予原药和5种测试药均能显著降低ADP和凝血酶诱导的血小板聚集率。结果详见表1，表2。
4、结论 强力天麻杜仲胶囊原药和测试药1，2，3，4，5均具有抑制血小板聚集的作用。
表1 对正常大鼠体外ADP诱导的血小板聚集的抑制作用(mean±SD，N＝10)
| 组别 | 剂量 | ADP诱导的血小板聚集率(％) |
| 正常组 | -- | 55.70±5.65 |
| 原药组 | 350mg/kg | 42.51±8.22** |
| 测试药1组 | 300mg/kg | 44.49±7.98* |
| 测试药2组 | 67mg/kg | 49.64±13.74 |
| 测试药3组 | 283mg/kg | 43.43±12.69** |
| 测试药4组 | 70mg/kg | 45.29±8.79* |
| 测试药5组 | 89mg/kg | 41.94±13.10** |
注：给药组VS正常组，*P＜0.05，**P＜0.01。
表2 对正常大鼠体外凝血酶诱导的血小板聚集的抑制作用(mean±SD，N＝10)
| 组别 | 剂量 | Thrombin诱导的血小板聚集率(％) |
| 正常组 | -- | 85.00±8.46 |
| 原药组 | 350mg/kg | 44.64±21.62** |
| 测试药1组 | 300mg/kg | 45.55±24.55** |
| 测试药2组 | 67mg/kg | 47.36±27.44** |
| 测试药3组 | 283mg/kg | 46.61±20.93** |
| 测试药4组 | 70mg/kg | 43.95±21.72** |
| 测试药5组 | 89mg/kg | 44.87±19.43** |
注：给药组VS正常组，**P＜0.01。
5、综合评价：虽然5种测试药(新工艺)与原药在抑制血小板聚集的作用无显著性差异，但测试药1组(新工艺1)和测试药3组(新工艺3)在用药剂量上没有明显减少趋势，说明对改变工艺(降低服药剂量)指导意义不大，测试药2组(新工艺2)在用药剂量上虽然明显减少，但是药理作用不如其他组(其他新工艺)，可能采用大孔树脂纯化处理对有效物质损耗太大，所以该法不适宜本品制备技术，测试药4组(新工艺4)和测试药5组(新工艺5)结果较为理想，但测试药5组在对正常大鼠体外ADP诱导的血小板聚集的抑制作用要比测试药4组明显，其原因是天麻醇提后药渣未利用，可能损失了水溶性成分，综合考虑，选择第5种新工艺路线作为强力天麻杜仲胶囊的工艺改进研究方向，即天麻醇提，药渣与其他药材合并水提醇沉。
(三)药效学验证 实验目的：已知强力天麻杜仲胶囊原药在临床上用于脑中风后遗症引起的筋脉掣痛、肢体麻木、行走不便、腰腿酸痛、头痛头昏等症，具有很好的疗效，并能改善脑中风患者血液流变学及抑制血小板聚集。强力天麻杜仲胶囊原药对血小板聚集有抑制作用，本实验以强力天麻杜仲胶囊原药为阳性对照药，观察强力天麻杜仲胶囊测试药5(以下简称测试药)对大鼠大脑中动脉阻塞2小时/再灌注损伤的神经保护作用及其对脑中风大鼠血液流变及血小板聚集的影响。
1、实验材料
1.1实验动物Sprague-Dawley(SD)大鼠，雄性，体重280-320g，清洁级，由苏州大学医学院实验动物中心提供(生产许可证XCYK(苏)：No 2002-0008，使用许可证SYXK(苏)：No2002-0037。喂养条件如下：六只一笼，室温22℃，湿度50-60％，通风良好，人工昼夜(12h/12h)，自由摄食摄水。实验前，将动物在饲养环境中适应1周。
1.2实验仪器 TYXN-96多功能智能血液凝聚仪，上海通用机电技术研究所；80-2台式低速离心机，上海医疗器械有限公司手术器械厂。
1.3药物与试剂 强力天麻杜仲胶囊原药和强力天麻杜仲胶囊测试药5(由课题组提供)用蒸馏水配成混悬液；磷酸二氢钠(Dihydrogen Phosphate国药集团生产，批号F20090624)；磷酸氢二钠(Disodium Phosphate国药集团生产，生产批号20090915)；枸缘酸钠(Sodium Citrate上海试剂一厂生产，生产批号96-02-03)；ADP(solarbio生产，生产批号A8290)；凝血酶(Thrombin)(Sigma生产 生产批号9002-04-4)。
2、实验方法
2.1实验设计 健康雄性SD大鼠60只，体重280-320g，拟分成6组，每组10只，分别为假手术组，缺血/再灌注对照组，强力天麻杜仲胶囊原药组(原药组，350mg/kg，相当于日服量4.2g)和测试药178mg/kg组(相当于日服量2.14g)，89mg/kg组(相当于日服量1.07g)及44.5mg/kg(相当于日服量0.535g)。大鼠脑缺血再灌注后2小时依据6分法进行行为学评分，根据行为学评分(表1)将大鼠随机分到缺血/再灌注对照组及各给药组。然后灌胃强力天麻杜仲胶囊原药和测试药，假手术组及模型组大鼠按0.2ml/100g灌胃蒸馏水，每天1次，连续4周。大鼠于术前及术后1d，3d，7d，14d，21d及28天采用Corner Test和Cylinder Test两种方法测定神经症状，并每周测定体重一次.大鼠末次(术后28天)给药2小时后腹主动脉取血测定全血高、中、低切粘度、血浆粘度、纤维蛋白原、红细胞压积、血沉、红细胞聚集指数、红细胞刚性指数和红细胞电泳指数等血液流变学指标及ADP和凝血酶诱导的血小板最大聚集率；并断头取大鼠全脑照相后，用特定的大鼠脑模子将大脑切成5片，每片厚为3mm，照相后测定损伤侧残存脑组织的体积。然后将脑片用4％甲醛固定，行石蜡包埋后，做HE染色，光镜下观察损伤侧脑组织神经细胞的损伤情况(见附图2)。
表1 各组大鼠缺血2小时/再灌注2小时后神经症状评分
2.2建立大鼠大脑中动脉阻塞再灌注脑缺血模型用4％水合氯醛(350mg/kg，ip)麻醉后将大鼠背位固定，颈正中切口，分离右侧颈总动脉并穿2根缝线备用，再分离颈内、颈外动脉，并结扎颈外动脉。在已分离的颈总动脉近心端用缝线结扎，远心端用动脉夹阻断血流，在此之间，剪一小口，将一端加热成圆珠状(直径＜0.3mm)的尼龙线(4-0)***小口，去掉动脉夹，将尼龙线缓缓推入至大脑动脉起始端(18-19mm)，通过阻断大脑中动脉的血供造成大脑中动脉缺血，缺血两小时后再灌注。缝合皮肤。假手术组织分离动脉但不插线。在整个麻醉期间，采用自动控温加热垫将大鼠肛温控制在37±0.5℃。
2.3大鼠行为学测定 大鼠脑缺血2小时/再灌注后2小时依据6分法进行行为学评分[6]：0分：没有神经缺陷。1分：阻塞侧眼睑缩小或同侧前转爪不能伸展。2分：动物持久性的向同侧转大圈。3分：动物持久性的向同侧转小圈或重复性向同侧旋转。4分：动物几乎躺在对侧不动。5分：动物麻醉恢复后死亡。大鼠于术前及术后1d，3d，7d，14d，21d及28天采用Corner Test和Cylinder Test两种方法测定神经症状，Corner Test(角测试法)：即把大鼠放在呈角的纸板中间，当大鼠深入进去后，会向前或向上进进，然后转向另一端开口.计数大鼠左右偏转次数.每只老鼠测试20次。然后计算向右转次数与总次数的比值。大鼠只有完全转向背面才算有效。Cylinder Test：将大鼠放在圆柱桶里，观察大鼠沿着圆柱桶壁做垂直运动时左右肢的使用次数，10分钟内共测定20次。最终评分以(非损伤前肢运动-损伤前肢前肢运动)/(非损伤前肢运动+2个运动)计。
2.4大鼠损伤侧残存脑组织体积的测定 大鼠断头取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，用特定的大鼠脑模子冠状切4刀分为5片，第一刀在脑前极与视交叉连线中点处，第二刀在视交叉部位，第三刀在漏斗柄处，第四刀在漏斗柄与叶尾及之间。每片厚为3mm，照相后测定损伤侧残存脑组织的体积，以损伤侧脑组织体积/非损伤侧脑组织体积表示。
2.5血液流变学的测定 大鼠末次(术后28天)给药2小时后腹主动脉取全血，采用MVIS-2000全自动血液流变分析***测定全血高、中、低切粘度、血浆粘度、纤维蛋白原、红细胞压积、血沉、红细胞聚集指数、红细胞刚性指数和红细胞电泳指数等血液流变学指标。
2.6血小板聚集的测定 大鼠末次(术后28天)给药2小时后腹主动脉取血测定血小板的最大聚集率。按下列步骤操作：(1)抗凝剂采用3.28％的枸缘酸，抽血量与抗凝剂的比应为9∶1，立即倒混匀2～3次。(2)取得样品即PRP(富含血小板的血浆)在20～25度条件下离心速度以500r/mIn，时间5Min左右，用水平式离心机。(3)待离心机慢慢自然停转，再取出，以免细胞流入PRP中，如发现PRP中仍含RBC应在上述条件下离心片刻。聚集诱导剂用ADP与凝血酶，测定血小板最大聚集率。
2.7统计学分析 数据以均值±标准差表示。应用SPSS(10.0版)中相应程序，对数据进行统计处理。统计分析采用单因素方差分析(one-way ANOVA)，P＜0.05为统计学差异有显著性。
3、结果
3.1强力天麻杜仲胶囊原药和测试药对脑缺血/再灌注大鼠行为学症状的改善作用。Corner Test结果表明：缺血再灌注对照组大鼠向右侧(健侧)转弯的百分率比假手术组明显增加。与缺血再灌注对照组大鼠相比，随灌胃时间延长，原药350mg/kg及测试药178mg/kg和89mg/kg大鼠向右侧转弯的次数显著减少，术后灌胃3-7d开始起效，术后灌胃28d大鼠向右侧转弯的次数减少最明显。测试药44.5mg/kg大鼠起效时间为术后灌胃14d，灌胃28d减少最显著。结果详见表1。Cylinder test结果表明：缺血再灌注对照组大鼠由于左侧肢体功能障碍，使用健侧前肢(右侧前肢)的次数比假手组明显增加；与缺血再灌注对照组大鼠相比，随灌胃时间延长，给予原药和测试的大鼠178mg/kg和89mg/kg右侧前肢使用次数明显减少，即受累前肢(左侧前肢)使用次数明显增加。术后灌胃14d开始起效，术后灌胃28d效果最明显。结果详见表2。结果提示：强力天麻杜仲胶囊原药和测试药对脑缺血/再灌注损伤大鼠行为学缺陷具有改善作用。
3.2强力天麻杜仲胶囊原药和测试药对脑缺血/再灌注损伤大鼠体重的影响脑缺血/再灌注损伤术后第一周各组大鼠的体重增加量均很小，随时间增加，给予原药和测试药178mg/kg和89mg/kg的大鼠体重增加明显较缺血/再灌对照组快。但测试药44.5mg/kg大鼠体重增加与缺血/再灌注对照组无明显差别。结果详见表2。结果提示：强力天麻杜仲胶囊原药和测试药能促进脑缺血/再灌注损伤大鼠体重的恢复。
3.3强力天麻杜仲胶囊原药和测试药对脑缺血/再灌注大鼠损伤侧脑体积的影响。据文献报道大鼠脑缺血性损伤早期由于存在明显的脑水肿，损伤侧脑组织体积明显增大。而在脑缺血性损伤后期(脑缺血后4周)损伤侧脑组织发生显著萎缩，体积变小。因此，脑缺血性损伤后期测定损伤侧残存的脑组织体积可以间反应脑组织的损伤程度。与文献报道一致，本研究证明大鼠脑缺血再灌注损伤后4周损伤测脑组织萎缩，体积明显变小，而给予原药和测试药178mg/kg和89mg/kg的大鼠损伤侧脑组织体积较缺血/再灌对照组显著增加。给予测试药44.5mg/kg大鼠亦使损伤侧脑组织体积有所增加，但未达到统计学上的显著水平。结果详见表4。结果提示：强力天麻杜仲胶囊原药和测试药对脑缺血/再灌注损伤的脑组织具有保护作用。
3.4强力天麻杜仲胶囊原药和测试药对脑缺血/再灌注脑组织形态学变化的影响。HE染色结果表明：大鼠脑缺血再灌注损伤4周后，损伤区脑组织的细胞数明显较少，而给予原药和测试药178mg/kg和89mg/kg的大鼠损伤区脑组织的细胞数较缺血/再灌对照组显著增加。强力天麻杜仲胶囊原药和测试药可改善脑缺血/再灌注大鼠脑组织形态学。
3.5强力天麻杜仲胶囊原药格测试药对脑缺血/再灌注大鼠血液流变学的改善作用血液流变学改变与脑梗死的发生、发展有密切的关系。据文献报道脑中风后患者或大鼠其血液流变学发生异常，表现为血液粘度升高、红细胞聚集性增加，纤维蛋白原含量增加等。与文献报道一致，大鼠脑缺血再灌注损伤后4周大鼠全血高、中、低切粘度均较假手术组明显升高，纤维蛋白原含量和红细胞压积亦显著增加，红细胞聚集指数和刚性指数虽有所增加，但未达到统计学上的显著水平。强力天麻杜仲胶囊原药和测试药178mg/kg和89mg/kg灌胃4周均可显著降低全血高、中、低切粘度，明显减少纤维蛋白原含量和减少红细胞压积，测试药178mg/kg和89mg/kg还可以显著降低红细胞聚集指数的刚性指数。测试药44.5mg/kg亦有改善大鼠血液流变学发的趋势，但除全血中切粘度显著降低外，其他指标均未达统计学上的显著水平。结果详见表5。结果提示：强力天麻杜仲胶囊原药和测试药对脑缺血/再灌注大鼠血液流变学具有改善作用。
3.6强力天麻杜仲胶囊原药和测试药对正常大鼠及脑缺血/再灌注大鼠体外ADP和凝血酶(Thrombin)诱导的血小板聚集的抑制作用。正常大鼠灌胃强力天麻杜仲胶囊原药或测试药4周后，取血进行体外血小板聚集实验。给予原药和测试药大鼠ADP和凝血酶诱导的血小板聚集率均明显降低，且测试药组呈剂量依赖性。结果详见表6，表7。进一步的实验观察强力天麻杜仲胶囊原药和测试药对脑缺血/再灌注大鼠体外ADP和凝血酶(Thrombin)诱导的血小板聚集的影响。脑缺血/再灌注大鼠灌胃强力天麻杜仲胶囊原药或测试药4周取血进行体外血小板聚集实验。结果显示：脑缺血/再灌注大鼠由ADP和凝血酶诱导的血小板聚集率均显著高于假手术组，给予原药和测试药大鼠ADP和凝血酶诱导的血小板聚集率比脑缺血/再灌注大鼠均明显降低，且测试药组呈剂量依赖性。结果详见表8，表9。结果提示：强力天麻杜仲胶囊原药和测试药具有抑制血小板聚集的作用。
表2 对脑缺血/再灌注大鼠行为学症状的改善作用(mean±SD，N＝10)
注：缺血/再灌对照组VS假手术组，##P＜0.01；给药组VS缺血/再灌对照组，**P＜0.01。
表3 对脑缺血/再灌注大鼠体重的影响(mean±SD，N＝10)
注：缺血/再灌对照组VS假手术组，##P＜0.01；给药组VS缺血/再灌对照组，*P＜0.05，**P＜0.01。
表4 对脑缺血/再灌注大鼠损伤测脑体积的影响(mean±SD，N＝10)
注：缺血/再灌对照组VS假手术组，##P＜0.01；给药组VS缺血/再灌对照组，**P＜0.01。
表5 对脑缺血/再灌注大鼠血液流变学的改善作用(mean±SD，N＝10)
注：缺血/再灌对照组VS假手术组，##P＜0.01；给药组VS缺血/再灌对照组，*P＜0.05，**P＜0.01。
表6 对正常大鼠ADP诱导的血小板聚集的抑制作用(mean±SD，N＝10)
注：给药组VS正常组，**P＜0.01。
表7 对正常大鼠凝血酶诱导血小板聚集的抑制作用(mean±SD，N＝10)
注：给药组VS正常组，**P＜0.01。
表8 对缺血/再灌注大鼠ADP诱导的血小板聚集的抑制作用(mean±SD，N＝10)
注：缺血/再灌对照组VS假手术组，##P＜0.01；给药组VS缺血/再灌对照组**P＜0.01。
表9 对脑缺血/再灌注大鼠凝血酶(Thrombin)诱导的血小板聚集的抑制作用(mean±SD，N＝10)
注：缺血/再灌对照组VS假手术组，##P＜0.01；给药组VS缺血/再灌对照组**P＜0.01。
4、结论：测试药(新工艺制剂)中剂量对大鼠大脑中动脉阻塞2小时/再灌注损伤的神经保护作用及其对脑中风大鼠血液流变及血小板聚集的影响与原药无显著性差异，有增强趋势，但测试药(新工艺制剂)高剂量组明显优于原药，为工艺改进创新提供了可行可靠的理论依据。
二、制剂制备工艺及质量对比研究
(一)制备工艺研究
1、处方：天麻139.2g、杜仲(盐制)147.8g、制草乌17.4g、附子(制)17.4g、独活86.8g、藁本102.6g、玄参102.6g、当归174g、地黄278.2g、川牛膝102.6g、槲寄生102.6g、羌活174g。
2、制法：取处方药材，天麻加5倍量50％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并，滤过，得乙醇提取液备用，药渣备用，独活、藁本、当归、羌活四味加6倍量水经水蒸汽蒸馏提取6小时，分离，得挥发油备用，水溶液过滤备用，药渣与天麻药渣、杜仲、草乌、附子、玄参、地黄、川牛膝、槲寄生合并，加10倍量水提取2次，第一次3小时，第二次2小时，滤过，合并上述水溶液，滤液浓缩至含生药浓度为1∶1的药液，放冷至室温，加入乙醇使溶液含醇量达60％，静置12小时，取上清液过滤得乙醇液，与天麻醇提液合并，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.25～1.35(60℃)的浸膏备用；取聚乙二醇-6000和聚乙二醇-4000混匀加热熔融，加入挥发油、浸膏，搅拌均匀，转移至滴丸机中于60℃保温10分钟，滴制成丸，脱油，低温干燥，灌装，制成1000粒，即得。
3、工艺流程图(见附图3)：
4、提取、纯化工艺研究
4.1挥发油提取工艺优选
4.1.1加水倍量的考察 按处方比例，称取独活43.4g、藁本51.3、当归87g、羌活87g等四味药材，共取三份，每份268.7g，分别加4倍量、5倍量、6倍量水蒸馏提取挥发油，各提取5小时，接收馏出液，以石油醚洗涤冷凝管及挥发油提取器内壁，合并石油醚液与油水液，以石油醚萃取三次，每次15ml，合并石油醚液，以无水硫酸钠脱水滤过，以10ml石油醚洗涤漏斗，低温挥散石油醚至恒重，称量挥发油的重量，即得。结果见表1。
表1 加水倍量的考察
| 加水倍量 | 挥发油的量(g) |
| 4倍量 | 1.5742 |
| 5倍量 | 1.6047 |
| 6倍量 | 1.6125 |
由试验结果可知，加水4倍量所得挥发油的量较低；加水5倍量与6倍量所得挥发油的量基本相当，且均较加水4倍量的为多。故最后确定加水倍量为5倍量。
4.1.2预处理方式 按处方比例，称取独活43.4g、藁本51.3、当归87g、羌活87g等四味药材，共取三份，每份268.7g，共三份，每份均加5倍量水，第一份直接蒸馏提取挥发油5小时，第二份先冷浸1小时，再蒸馏提取挥发油5小时，第三份先加热至80℃温浸1小时，再蒸馏提取挥发油5小时，分别接收馏出液，以石油醚洗涤冷凝管及挥发油提取器内壁，合并石油醚液与油水液，以石油醚萃取三次，每次15ml，合并石油醚液，以无水硫酸钠脱水滤过，以10ml石油醚洗涤漏斗，并低温挥散石油醚至恒重，称量挥发油的重量，即得；所得挥发油另器收集备用。结果见表2。
表2 预处理方式的考察
| 预处理方式 | 挥发油的量(g) |
| 直接蒸馏提取 | 1.5984 |
| 先冷浸1小时，再蒸馏提取 | 1.6077 |
| 先80℃温浸1小时，再蒸馏提取 | 1.6294 |
由试验结果可知，先加热至80℃温浸1小时，再蒸馏提取则挥发油的提取效率较高，故最后确定先加热至80℃温浸1小时，再蒸馏提取挥发油5小时。
4.1.3蒸馏时间的考察 按处方比例，称取独活43.4g、藁本51.3、当归87g、羌活87g等四味药材，共取三份，每份268.7g，共三份，分别加5倍量水，先加热至80℃温浸1小时，再分别蒸馏提取4小时、5小时、6小时，接收馏出液，以石油醚洗涤冷凝管及挥发油提取器内壁，合并石油醚液与油水液，以石油醚萃取三次，每次15ml，合并石油醚液，以无水硫酸钠脱水滤过，以10ml石油醚洗涤漏斗，并低温挥散石油醚至恒重，称量挥发油的重量，即得；所得挥发油另器收集备用。结果见表3。
表3 蒸馏时间的考察
| 蒸馏时间 | 挥发油的量(g) |
| 4小时 | 1.5943 |
| 5小时 | 1.6239 |
| 6小时 | 1.6287 |
由试验结果可知，由于蒸馏不充分，蒸馏4小时所得挥发油的量较低；蒸馏5小时与6小时的效率基本相当，为节省时间及能源，确定选择蒸馏5小时。综合以上试验，本制剂的挥发油提取工艺为：取独活、藁本、当归、羌活等四味加5倍量水，加热至80℃温浸1小时后，蒸馏提取5小时。在大生产中，由于挥发油不易提取制得，生产中挥发油得率极低。为使本工艺更适应大生产的需要，本品中独活、藁本、当归、羌活等四味蒸馏提取6小时，接收馏出液，加入20％的氯化钠，置冷库中静置冷藏24小时，使油水分层，分取挥发油层，即得。
4.2天麻醇提工艺优选
4.2.1醇浓度考察 参照中国药典2010年版中天麻的含量测定方法，分别用30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇回流提取3小时，测定天麻药材中天麻素的含量，结果见表4。
表4 天麻工艺的考察
| 醇浓度(％) | 天麻素含量(mg/g) |
| 30 | 2.495 |
| 50 | 2.605 |
| 70 | 2.505 |
由试验结果可知，天麻中天麻素的含量随提取溶剂浓度不同会有一定的差异；用50％乙醇提取时含量最高，与药典方法用稀乙醇相同，故选择以50％乙醇为天麻提取的醇浓度。
4.2.2其他醇提因素考察
(1)因素水平确立 影响提取的因素主要有以下几个方面：加醇量、提取时间、提取次数等。因此我们对这三个主要因素进行了3因素3水平的正交考察，以优选最佳工艺参数。正交试验的因素水平表见表5。
表5 天麻醇提正交试验因素水平表
(2)指标选择与评价结果 以提取物中天麻素的提取量作为正交试验评价指标；干膏收率直接影响日服剂量和单服剂量的规定，故也以其作为正交试验评价指标之一。本试验拟采用综合评分法进行工艺条件优选，由于干膏收率与日服剂量和单服剂量有关，规定其权衡分为40分，天麻素为方中有效成分，能直接反映提取效果，故规定这两个指标的权衡分均为60分。
(3)样品制备 取50g天麻粗粉，按表6各正交试验条件进行醇提，提取液浓缩并定容至100ml，备用。
(4)天麻素提取量测定 取备用液2ml定容至25ml，测定天麻素含量，计算天麻素的提取量。
(5)干膏收率测定 精密取各正交试验浓缩后的药液20ml，分别置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，残渣于105℃干燥3小时，取出，置干燥器中放置30分钟，称重，计算干膏收率。结果见表6。
表6 天麻醇提正交试验结果表
注：干膏收率评分＝(干膏收率/最大干膏收率)×40
天麻素提取量评分＝(天麻素提取量/最大天麻素提取量)×60
综合评分＝干膏收率评分+天麻素提取量评分
表7 天麻醇提方差分析表
| 方差来源 | 平方和 | 自由度 | 均方 | F值 | 因素影响 |
| 加醇量A | 255.06 | 2 | 127.53 | 4.26 | 不显著 |
| 提取时间B | 46.45 | 2 | 23.22 | 0.77 | 不显著 |
| 提取次数C | 1226.33 | 2 | 613.16 | 20.46 | 显著 |
| 误差 | 23.63 | 2 | 0.06 |
注：F0.05(2，2)＝19.00；F0.01(2，2)＝99.00
从表6、7分析结果可知，各因素作用主次为C＞A＞B；C因素有显著性差异，A因素中A3＞A2＞A1，所以选择A3；B因素中B2＞B3＞B1，所以选择B2；C因素中C3＞C2＞C1，所以选择C3。因此最佳工艺为A3B2C3。考虑到生产实际和因素影响差异，拟天麻醇提工艺为加5倍量50％乙醇，提取3次，每次提取2小时。
4.3水提工艺优选
4.3.1因素水平确立 影响水提的因素主要有以下几个方面：加水量、提取时间、提取次数等。因此我们对这三个主要因素进行了3因素3水平的正交考察，以优选最佳工艺参数。正交试验的因素水平表见表8。
表8 水提正交试验因素水平表
4.3.2指标选择 以提取物中天麻素的提取量作为正交试验评价指标；处方中药材还含有酚类、萜类、生物碱等脂溶性活性成分，为了充分反映提取效果，我们测定提取物中60％乙醇浸出物的含量，并也以其作正交试验评价指标；另外，干膏收率也是评价提取效果的常规指标，故也以其作为正交试验评价指标之一。本试验拟采用综合评分法进行工艺条件优选，由于干膏收率与效量不成正比关系，规定其权衡分为20分，天麻素和60％乙醇浸出物为方中有效成分，能直接反映提取效果，故规定这两个指标的权衡分均为40分。
4.3.3样品制备 取1/5处方量药材，部分药材经1、2工艺提取后，收集药渣，按表8各正交试验条件进行水提，药液用300目滤布过滤后，浓缩并定容至500ml。备用。
4.3.4天麻素提取量测定 取备用液10ml定容至25ml，测定天麻素含量，计算天麻素的提取量。
4.3.5干膏收率测定 精密取各正交试验浓缩后的药液20ml，分别置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，残渣于105℃干燥3小时，取出，置干燥器中放置30分钟，称重，计算干膏收率。
4.3.6乙醇(60％)浸出物测定取备用液50ml，分别加乙醇使含醇量达60％，静置冷藏24小时，滤过，滤液水浴蒸干，残渣于105℃干燥3小时，取出，置于干燥器中放置30分钟，称重，计算浸出物收率。结果见表9
表9 水提正交试验结果表
注：干膏收率评分＝(干膏收率/最大干膏收率)×20
60％乙醇浸出物评分＝(浸出物收率/最大浸出物收率)×40
天麻素提取量评分＝(天麻素提取量/最大天麻素提取量)×40
综合评分＝干膏收率评分+60％乙醇浸出物评分+天麻素提取量评分
表10 水提方差分析表
| 方差来源 | 平方和 | 自由度 | 均方 | F值 | 因素影响 |
| A | 2.26 | 2 | 1.13 | 0.01 | 不显著 |
| B | 3098.34 | 2 | 1549.17 | 19.41 | 显著 |
| C | 19.87 | 2 | 9.93 | 0.12 | 不显著 |
| 误差 | 159.62 | 2 | 79.81 |
注：F0.05(2，2)＝19.00；F0.01(2，2)＝99.00
从表9、10分析结果可知，各因素作用主次为B＞C＞A；B因素有显著性差异，A因素中A2＞A3＞A1，所以选择A2；B因素中B2＞B3＞B1，所以选择B2；C因素中C2＞C3＞C1，所以选择C2，因此最佳工艺为A2B2C2。考虑到生产成本，所以以加10倍量水，提取2次，第一次提取3小时、第二次提取2小时。
4.4醇沉工艺优选
4.4.1因素水平确立 影响醇沉的因素主要有以下几个方面：药液浓度、醇沉醇浓度、静置时间等。因此我们对这三个主要因素进行了3因素3水平的正交考察，以优选最佳工艺参数。正交试验的因素水平表见表11。
表11 醇沉正交试验因素水平表
4.4.2评价指标和制备方式 以提取物中天麻素的提取量作为正交试验评价指标；处方中药材还含有酚类、萜类、生物碱等脂溶性活性成分，本工艺已用60％醇沉纯化，干膏收率是直接反映醇沉纯化效果，同时也直接影响日服剂量和单服剂量的规定，故也以其作为正交试验评价指标之一。本试验拟采用综合评分法进行工艺条件优选，由于干膏收率直接影响日服剂量和单服剂量，能反映醇沉纯化效果，规定其权衡分为40分，天麻素为方中有效成分，能直接反映提取效果，故规定这两个指标的权衡分均为60分。
4.4.3样品制备 取处方量药材，部分药材经1、2、3工艺提取后，收集药渣，按表11各正交试验条件进行水提，药液用300目滤布过滤后，浓缩并定容至500ml。备用。
4.4.4天麻素提取量测定 取备用液2ml定容至25ml，测定天麻素含量，计算天麻素的提取量。
4.4.5干膏收率测定 精密取各正交试验浓缩后的药液20ml，分别置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，残渣于105℃干燥3小时，取出，置干燥器中放置30分钟，称重，计算干膏收率。结果见表12
表12 醇沉正交试验结果表
注：干膏收率评分＝(干膏收率/最大干膏收率)×40
天麻素提取量评分＝(天麻素提取量/最大天麻素提取量)×60
综合评分＝干膏收率评分+天麻素提取量评分
表13 醇沉方差分析表
注：F0.05(2，2)＝19.00；F0.01(2，2)＝99.00
从表12、13分析结果可知，各因素作用主次为A＞B＞C；A因素有显著性差异，A因素中A1＞A2＞A3，所以选择A1；B因素中B3＞B2＞B1，所以选择B3；C因素中C1＞C2＞C3，所以选择C1，因此最佳工艺为A1B3C1。考虑到生产工艺实际，所以选择醇沉工艺为药液浓度为1ml药液相当于1.0g原生药，加乙醇至含醇量达60％，静置12小时。
5、制剂成型工艺研究
5.1浸膏制备 按提取、纯化工艺进行制备。挥发油另器收集，浸膏部分减压浓缩至相对密度为1.25～1.35(60℃)，备用。
5.2基质与冷却剂的选择
5.2.1冷却剂的选择 通过预试，以液体石蜡为冷却剂时，丸料沉降较快，成型差；以二甲基硅油为冷却剂时，丸料沉降较慢，能成型；以植物油为冷却剂时，丸料沉降慢，成型差；所以选择二甲基硅油为冷却剂较好。
5.2.2基质的选择 结合本方的临床应用和处方含挥发油与浸膏易吸湿的特点，按下表进行基质优选，用二甲基硅油为冷却剂，滴制温度为60℃，滴头口径为1/2mm(内/外径mm)。以分散状况、流动性及成型情况为评价指标，各指标由好至差评分为3分、2分与1分，以累计评分为综合评分。
表14 基质筛选结果
| 组成 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |
| 药物 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 | 60 | 60 | 60 | 60 | 40 | 40 |
| PEG-4000 | 50 | 25 | 0 | 0 | 0 | 25 | 20 | 0 | 0 | 20 | 40 | 20 |
| PEG-6000 | 0 | 25 | 50 | 0 | 25 | 0 | 20 | 40 | 20 | 0 | 20 | 40 |
| PEG-8000 | 0 | 0 | 0 | 50 | 25 | 25 | 0 | 0 | 20 | 20 | 0 | 0 |
| 分散状况 | 1 | 3 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 1 | 2 | 2 |
| 流动性 | 1 | 2 | 2 | 1 | 1 | 1 | 2 | 1 | 1 | 2 | 1 | 2 |
| 成型情况 | 1 | 1 | 1 | 1 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 1 | 2 | 2 |
| 综合评分 | 3 | 6 | 5 | 4 | 5 | 5 | 6 | 5 | 5 | 4 | 5 | 6 |
对各配比试验进行的评判，筛选的较好配比组成分别有药物：PEG-4000∶PEG-6000(2∶1∶1、3∶1∶1和2∶1∶2)，考虑到载药量和制剂服用量关系，选择以PEG-4000∶PEG-6000(1∶1)为基质；药物∶基质(3∶2)为成型处方配比。
5.2成型工艺的筛选 以PEG-4000∶PEG-6000(1∶1)为基质，二甲硅油为冷却剂滴制成丸，以滴丸的重量差异变异系数为指标，筛选滴头的内外径大小、滴速、滴距以及冷却剂的温度设计4因素3水平正交筛选试验，见表15。以圆整度(最短径/最短径)、丸重的相对标准偏差(RSD)、成品率为指标，将各指标的最佳测定值定为100分，依据各因素的重要性确定其权衡分为30、30、40，得到公式：综合评分＝圆整度/最大圆整度×30+最小丸重RSD/丸重RSD×30+成品率/最大成品率×40，试验结果见表16、方差分析见表17。
表15 成型工艺筛选因素水平表
表16 成型工艺筛选方案及结果
表17 成型工艺筛选方差分析
注：F0.05(2，2)＝19.00；F0.01(2，2)＝99.00
从表分析结果可知，各因素作用主次为C＞A＞B＞D；A、C因素有显著性差异，A因素中A2＞A3＞A1，所以选择A2；B因素中B1＞B2＞B3，所以选择B1；C因素中C3＞C2＞C1，所以选择C3；D因素中D2＞D3＞D1，所以选择D2，因此最佳成型工艺为A2B1C3D2，即冷却剂温度为10～15℃，滴头内外径为1/3mm，滴距为10cm，滴速为40滴/min。
4.3中试研究 取20倍处方量药材，按所制订得工艺路线进行中试生产，对生产工艺指标进行全面考核，对药材和成品进行质量评定，对各主要有效成分进行跟踪检测，结果见表18。
表18 中试试验结果
中试生产结果表明，本产品各项技术参数稳定，说明工艺可行，适合批量生产。
(二)质量对比研究 取10倍处方量药材，按原制剂制备工艺制成成品；另取10倍处方量药材，按改进工艺制成成品，模拟上市包装，采用恒温加速试验(T＝37℃，RH＝75％)对两种产品作全面的对比研究，结果见下表18，表19。
表18 工艺对比说明
表19 不同工艺制成品质量稳定性对比结果
三、制剂药效学试验研究
强力天杜仲胶囊(浓缩型)为贵州三力制药有限责任公司研制的新药，主要含天麻、杜仲等成分。本院受该公司委托，对强力天麻杜仲胶囊的抗脑缺血药理作用进行了实验观察，现将实验观察结果报告如下：
(一)试验材料
1.药品与试剂 受试药：强力天麻杜仲胶囊由委托单位贵州三力制药有限责任公司提供，批号：2009001，状态：均匀微丸状；数量：8kg；阳性对照药为原制剂强力天麻杜仲胶囊，由贵州三力制药有限责任公司生产，批号：100306；状态：均匀粉末状；数量：5kg。受试药和阳性药均临用时用蒸馏水配成混悬液。红四氮唑(TTC)为上海灵锦精细化工有限公司产品，批号：20050508。
2.动物 SD雄性大鼠，体重250±30g；昆明种小鼠，雌雄各半，体重20±2g，均由苏州大学医学部实验动物中心提供，合格证号：2007003。
3.仪器 LBY-NJ2型 血小板聚集仪(北京普生仪器公司)，7170全自动生化分析仪(日本日立公司)，BS110S精密电子天平(北京赛多利斯股份公司)，SHA-C控温水浴震荡器(深圳天南海北实业公司)，LXB-B低速大容量离心机(上海安亭仪器设备厂)，FASCO型全自动快速血粘度测定仪(重庆大学维多生物工物研究所)。
(二)方法与结果
1.小鼠耐缺氧实验
1.1对小鼠常压耐缺氧的影响 小鼠50只，随机分为5组，即空白对照组、试药强力天麻杜仲胶囊低剂量组(0.375g/kg)、中剂量组(0.75g/kg)、高剂量组(1.5g/kg)、原产品组(0.48g/kg)每组10只。灌胃给药，每天一次，连续给药7天，未次给药后1h，分别将小鼠置于250ml广口瓶中，瓶内放置10g钠石灰，用凡士林密封瓶口。测定小鼠在瓶内从封闭到呼吸停止的时间，结果与空白对照组比较，用t检验判断其有无显著性差异。结果显示，与对照组比较，强力天麻杜仲胶囊低、中剂量组对小鼠存活时间有所延长，但无明显统计学差异(P＞0.05)，高剂量组能明显延长小鼠常压存活时间(p＜0.05)，结果见表1。
表1 强力天麻杜仲胶囊对小鼠常压缺氧的影响
与对照组比较，*P＜0.05
1.2对小鼠断头所致张口喘气时间的影响 分组及给药方法同1.1。未次给药1h后，于小鼠耳下部迅速断头，记录各组小鼠断头后张口喘气的时间，用t检验判断其有无显著性差异。结果显示，与对照组比较，强力天麻杜仲胶囊高剂量组能明显延长小鼠张口喘气时间(p＜0.05)，低、中剂量组对小鼠张口喘气时间有所延长，但无明显统计学差异(P＞0.05)，结果见表2。
表2 强力天麻杜仲胶囊对小鼠断头张口喘气时间的影响
与对照组比较，*P＜0.05
2.强力天麻杜仲胶囊对大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血的影响
2.1模型制作 采用线栓法制备大脑中动脉梗塞模型，SD雄性大鼠，10％水合氯醛(350mg/kg)腹腔麻醉后，沿颈正中切开皮肤，分离右颈总、颈外及颈内动脉。于颈内、颈总动脉处用动脉夹夹闭，结扎颈外动脉近心端及远心端，中间剪断。将颈外动脉游离端与颈内动脉成一条直线，将尼龙线由颈外动脉***，***后用0号丝线结扎，以防出血，打开颈内动脉处动脉夹，将尼龙线***颈内动脉，继续***至颅内，当有轻微阻力时停止，***深度约2cm。假手术组动物麻醉后仅剥离颈总、颈内及颈外动脉而不结扎)。
2.2动物分组及给药 大鼠随机分为6组，分别为假手术组、模型组(大脑中动脉梗塞组)强力天麻杜仲低剂量组、中剂量组、高剂量组、阳性药对照药(原产品)组。假手术组：大鼠麻醉后仅分离颈总、颈内及颈外动脉而不结扎。各试药组制模前每天灌胃给药1次，连续给药5天，未次给药1h后制模，大脑中动脉梗塞后6h再给药1次。假手术组和模型组在相应时间灌胃等容量生理盐水。
2.3神经症状评分 各组动物在大脑中动脉梗塞24h后，按Bederson[3]的方法对每只鼠进行评分。根据其症状程度分级，共10分。具体评分方法如下。
结果显示，假手术组的神经症状评分为0，模型组为6.2±2.3，出现明显的神经障碍症状，强力天麻杜仲胶囊中、高剂量组大鼠神经症状均明显改善，评分分别为3.4±2.1，2.9±2.2(p＜0.05)，低剂量组作用不显著，结果见表3。
2.4脑梗塞面积测定 梗塞24h后大鼠断头取脑，置脑-20℃冰箱内20min，去除嗅球，小脑和低位脑干，沿冠状面平均切五刀。然后迅速将脑片置于5ml，浓度为2％的红四氮唑(含有0.1mol/LK2HPO4)溶液中，避光37℃温育30min，其间每隔7-8min翻动一次，经染色后，正常脑组织呈红色，而梗塞区组织为白色，仔细取出白色梗塞区并称重，以梗塞组织重量占全脑重百分比计算其为梗塞范围。用t检验判断其有无显著性差异。结果显示，假手术组大脑均呈均匀玫瑰红色，未出现缺血性坏死；模型组见明显脑梗塞灶。与模型对照组比较，强力天麻杜仲胶囊中、高剂量组脑梗塞程度明显减少(P＜0.05)，见表3。
表3 对大鼠局灶性脑缺血脑梗塞范围和神经症状评分的影响
与模型组比较，*P＜0.05
2.5脑组织病理组织学观察 大鼠脑缺血24h后，断头取脑常规固定，取脑梗塞区组织，石蜡包埋，HE染色。光镜下假手术组相应区域未见损伤，细胞结构完整。模型组皮层细胞结构受损，细胞间隙增大，见神经元水肿；海马CA1区细胞排列松散，胞浆深染，胞核固缩。强力天麻杜仲胶囊高剂量组与模型组比较，皮层细胞损伤明显减轻，仅见个别细胞水肿，海马CA1区细胞形态基本完整，无明显细胞核固缩。中、低剂量组皮层及海马CA1区神经细胞损伤病理无明显改善。
2.6强力天麻杜仲胶囊对大鼠局灶性脑缺血血清乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响 大鼠大脑中动脉梗塞24h后，用10％水合氯醛(350mg/kg)腹腔麻醉，腹主动脉取血2ml，3000转/min，离心10min，取血清测定LDH活性。t检验判断其有无显著性差异。结果显示，与假手术组比较，模型组大鼠血清LDH活性明显升高(P＜0.05)，强力天麻杜仲胶囊中、高剂量组与模型组组比较，血清LDH活性明显降低(P＜0.05)，低剂量组LDH活性有所下降，但无统计学差异(P＞0.05)，结果见表4。
表4 对局灶性脑缺血大鼠血清LDH活性的影响
与假手术组比较，#p＜0.05；与模型组比较，*p＜0.05
2.7强力天麻杜仲胶囊对大鼠局灶性脑缺血血液流变学的影响 大鼠大脑中动脉梗塞24h后，10％水合氯醛(350mg/kg)腹腔麻醉，腹主动脉取血5ml注入抗凝试管内，上下缓慢旋转血液使其充分混合后，测定血液流变学各项指标。结果显示，与假手术组比较，模型对照组血浆粘度、全血粘度(高、中、低切)、全血还原粘度、红细胞压积均明显升高(P＜0.05)。与模型组比较，强力天麻杜仲胶囊高剂量组对血浆粘度、全血粘度(高、中、低切)、全血还原粘度、红细胞压积均显著降低(P＜0.05)。中剂量组能明显降低全血粘度(高、中、低切)(均P＜0.05)，对其他指标无明显影响；低剂量组作用不明显，结果见表5。
表5 对局灶性脑缺血大鼠血液流变学的影响
与假手术组比较，*p＜0.05；与模型组比较，#p＜0.05。
3.强力天麻杜仲胶囊对脑缺血再灌注大鼠脑指数、脑含水量的影响 分组及给药同2，未次给药后1h，大鼠10％水合氯醛(350mg/kg)腹腔麻醉，结扎双侧颈总动脉30min，再灌注24h后，于冰盘上将大鼠迅速断头取脑，去除脑干以下部位称重，计算脑指数。置于105℃烤箱内烤至恒重，计算其脑含水量。
脑指数＝全脑湿重/体重×100％ 脑含水量＝(脑湿重-脑干重)/脑湿重×100％
结果显示，与假手术组比较，模型组脑含水量显著增加(P＜0.05)，脑指数有增加趋势，但无统计学意义。强力天麻杜仲胶囊中、高剂量组与模型组比较，脑指数和脑含水量均明显降低(P＜0.05)，结果见表6。
表6 对脑缺血再灌注损伤大鼠脑指数、脑含水量的影响
与假手术组比较，#p＜0.05；与模型组比较，*p＜0.05
4.强力天麻杜仲胶囊对血栓形成和血小板聚集功能的影响
4.1强力天麻杜仲胶囊抗大鼠实验性血栓形成作用 SD大鼠雌雄兼用，随机分为5组：生理盐水对照组，强力天麻杜仲低、中、高剂量组(分别为0.09g/kg、0.18g/kg、0.36g/kg)及阳性药尼莫地平组。每天灌胃给药1次，连续5天，末次给药后60min，戊巴比妥钠30mg/kg静脉麻醉后仰位固定，颈部正中切口，分离右侧颈总动脉及左侧颈外静脉备用。取内径1.5mm，长12cm的硅化聚乙烯管一根，置入一长度6cm的4号手术线，管内充以肝素生理盐水(50U/ml)，然后将管的两端分别***左颈外静脉和右颈总动脉，形成颈动脉-颈静脉通路，开放血流15min，取出管内丝线称重，减去丝线原重量，即为血栓湿重。用t检验判断其有无显著性差异。结果显示，强力天麻杜仲胶囊中、高剂量组对血栓形成有较明显的抑制作用，其抑制率分别为19.4％和20.1％，结果见表7。
表7 强力天麻杜仲胶囊对血栓形成的影响
与生理盐水对照组比较，*p＜0.05
4.2强力天麻杜仲胶囊对血小板聚集功能的影响 家兔24只，随机分为4组，每组6只，强力天麻杜仲复胶囊0.18g/kg组，0.36g/kg组，生理盐水对照组及原产品0.48g/kg组。给药方法同4.1，末次给药后60min，戊巴比妥钠30mg/kg静脉麻醉，仰位固定，颈部正中切口，分离右侧颈总动脉，***聚乙烯管取血20ml，置于枸椽酸钠抗凝离心管内(9∶1)，离心800rpm，5min，吸上层悬液即为富血小板血浆(PRP)；再离心3000rpm，10min，吸上悬液制得贫血小板血浆(PPP)。取4只比色杯，一只加入PPP200ul，另三只分别加入PRP200ul，置聚集仪中37℃预热3min，在测定孔内先测PPP的血小板数，再测PRP血小板数，然后以PPP稀释PRP血小板数至测定所需量。将调好血小板数的PRP和PPP测量杯置血小板聚集仪测定孔内，于装有PRP杯中加入搅拌棒一只，再加入腺苷二磷酸(Adenosine diphosphate：ADP)7.5μmol/L或凝血酶(Thrombin：Thr)3.5u/ml，5min后记录血小板聚集曲线。根据给药组和生理盐水组的聚集曲线，以观察1、3、5min聚集强度和最大聚集强度(MA)，并计算聚集抑制百分率。用t检验判断其有无显著性差异。
结果显示，与生理盐水组比较，强力天麻杜仲胶囊各剂量可明显抑制ADP诱导的血小板聚集，见表8。对Thr诱导的血小板聚仅高剂量组产生明显抑制作用影响，结果见表9。
表8 对ADP诱导的血小板聚集的影响
与生理盐组水比较，*p＜0.05，**p＜0.01
表9 对凝血酶Thr诱导的血小板聚集的影响
与生理盐水组比较，*p＜0.05，*p＜0.01
(三)结论实验采用小鼠耐缺氧模型，大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血和缺血再灌注两个模型，观察了强力天麻杜仲胶囊抗脑缺血的作用，并观察了与脑缺血密切相关的抗血栓形成和对血小板聚集的影响，结论如下：
1.强力天麻杜仲胶囊0.72g/kg能明显延长小鼠常压存活时间和断头张口喘气时间。
2.强力天麻杜仲胶囊0.18g/kg、0.36g/kg对大鼠局灶性脑缺血能明显减少脑梗塞范围，改善神经症状，降低血清乳酸脱氢酶活性；对脑缺血再灌注损伤大鼠明显降低脑指数和脑含水量，强力天麻杜仲胶囊0.36g/kg的防治作用与原产品0.48g/kg相似。脑组织病理组织学观察结果显示，强力天麻杜仲胶囊0.36g/kg能明显减轻脑梗塞所致的皮层及海马CA1区神经元损伤程度。
3.强力天麻杜仲胶囊明显抑制ADP和THR诱导的血小板聚集，0.18g/kg和0.36/kg明显抑制实验性血栓的形成，抑制率分别为19.4％和20.1％。强力天麻杜仲胶囊明显降低实验性脑缺血大鼠血浆粘度、全血粘度(高、中、低切)、全血还原粘度及红细胞压积。
四、急性毒性试验研究
摘要观察强力天麻杜仲胶囊对小鼠的急性毒性。小鼠单次灌胃给药无死亡，无法求出半数致死量，采用最大给药量40g/kg.d-1(一日三次灌胃)连续观察14天，未见小鼠死亡，一般状况良好，无异常发现，表明强力天麻杜仲胶囊对小鼠急性毒性甚低。
1实验材料
1.1动物 昆明种小鼠，雌雄各半，体重18-22g。由苏州大学医学部实验动物中心提供，合格证号：SCXK(苏)2009-12。
1.2药物 强力天麻杜仲胶囊(批号：2009001，规格：未添加辅料的强力天麻杜仲胶囊提取物)由贵州三力制药有限责任公司提供。实验前将强力天麻杜仲胶囊用研钵磨成细粉，用蒸馏水配制成混悬液备用。
2实验方法
2.1测定半数致死量(LD50)取小鼠40只，雌雄各半，体重18-22g，随机分成4组(10只/组)：分别为空白对照组(同体积蒸馏水)、强力天麻杜仲胶囊10.5g/kg.d-1、11.3g/kg.d-1、12.1g/kg.d-1、13g/kg.d-1(最大混悬浓度)，禁食(不禁水)12小时后，单次灌胃给药(0.4ml/10g)，观察小鼠的一般情况(体重变化、饮食、皮毛、行为、分泌物、***物等)及中毒、死亡情况，连续观察14天。
2.2最大给药量实验 小鼠40只，雌雄各半，体重18-22g，随机分为空白对照组、强力天麻杜仲胶囊组。强力天麻杜仲胶囊按40g/kg.d-1分三次灌胃给药(0.4ml/10g)，空白对照组给同体积蒸馏水，观察小鼠的一般活动情况及死亡数，连续观察14天。
3结果
3.1强力天麻杜仲胶囊各给药组小鼠实验期间未见死亡，一般状况良好(体重、饮食、皮毛、行为、分泌物、***物等)，无法求出半数致死量(LD50)。
3.2采用最大给药量40g/kg.d-1(约相当于临床每日给药量的110倍)灌胃，实验期间小鼠体重均增加，与空白对照组无明显差别(见表1)，饮食及活动正常，皮毛光滑，口、鼻、眼等未见异常分泌物，给药后仅第1天大便呈褐色软便，尿未见异常。
表1 强力天麻杜仲胶囊最大给药量实验小鼠体重的比较
附图说明
图1为对正常大鼠体外血小板聚集影响的技术路线图；
图2为光镜观察损伤侧脑组织神经细胞的技术路线图；
图3为制备工艺流程图。
具体实施方式
实施例1：天麻139.2g、杜仲(盐制)147.8g、制草乌17.4g、附子(制)17.4g、独活86.8g、藁本102.6g、玄参102.6g、当归174g、地黄278.2g、川牛膝102.6g、槲寄生102.6g、羌活174g。
称取天麻原料药材，加5倍量50％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并，滤过，得乙醇提取液备用，余下天麻药渣备用；称取独活、藁本、当归、羌活四味原料药材用水蒸汽蒸馏提取6小时，分离，得挥发油备用；余下药渣与天麻药渣、制杜仲、制草乌、制附子、玄参、地黄、川牛膝、槲寄生合并，加10倍量水提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至含生药浓度为1∶1的药液，放冷至室温，加入乙醇使溶液含醇量达60％，静置24小时，取上清液过滤得乙醇液，与天麻醇提液合并，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.40(60℃)的浸膏备用；取聚乙二醇-6000和聚乙二醇-4000混匀加热熔融，加入挥发油、浸膏，搅拌均匀，转移至滴丸机中于60℃保温10分钟，滴制成丸，脱油，低温干燥，灌装于空心胶囊中，制成1000粒，即得本发明胶囊剂，规格：每粒装0.3g。用法用量：口服，一次2粒，一日2次。
实施例2：天麻1392g、杜仲(盐制)1478g、制草乌174g、附子(制)174g、独活868g、藁本1026g、玄参1026g、当归1740g、地黄2782g、川牛膝1026g、槲寄生1026g、羌活1740g。
称取天麻原料药材，加5倍量50％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并，滤过，得乙醇提取液备用，余下天麻药渣备用；称取独活、藁本、当归、羌活四味原料药材用水蒸汽蒸馏提取6小时，分离，得挥发油备用；余下药渣与天麻药渣、制杜仲、制草乌、制附子、玄参、地黄、川牛膝、槲寄生合并，加10倍量水提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至含生药浓度为1∶1的药液，放冷至室温，加入乙醇使溶液含醇量达60％，静置24小时，取上清液过滤得乙醇液，与天麻醇提液合并，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.40(60℃)的浸膏备用；取聚乙二醇-6000和聚乙二醇-4000混匀加热熔融，加入挥发油、浸膏，搅拌均匀，转移至滴丸机中于60℃保温10分钟，滴制成丸，脱油，低温干燥，灌装于空心胶囊中，制成10000粒，即得本发明胶囊剂，规格：每粒装0.3g。用法用量：口服，一次2粒，一日2次。
实施例3：天麻139.2g、杜仲(盐制)147.8g、制草乌17.4g、附子(制)17.4g、独活86.8g、藁本102.6g、玄参102.6g、当归174g、地黄278.2g、川牛膝102.6g、槲寄生102.6g、羌活174g。
称取天麻原料药材，加3倍量90％乙醇回流提取1次，提取4小时，合并，滤过，得乙醇提取液备用，余下天麻药渣备用；称取独活、藁本、当归、羌活四味原料药材用水蒸汽蒸馏提取10小时，分离，得挥发油备用；余下药渣与天麻药渣、制杜仲、制草乌、制附子、玄参、地黄、川牛膝、槲寄生合并，加12倍量水提取1次，提取4小时，滤过，滤液浓缩至含生药浓度为1∶1的药液，放冷至室温，加入乙醇使溶液含醇量达40％，静置12小时，取上清液过滤得乙醇液，与天麻醇提液合并，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.40(60℃)的浸膏备用；取聚乙二醇-6000和聚乙二醇-4000混匀加热熔融，加入挥发油、浸膏，搅拌均匀，转移至滴丸机中于60℃保温10分钟，滴制成丸，脱油，低温干燥，灌装于空心胶囊中，制成1000粒，即得本发明胶囊剂，规格：每粒装0.3g。用法用量：口服，一次2粒，一日2次。
实施例4：实施例1：天麻139.2g、杜仲(盐制)147.8g、制草乌17.4g、附子(制)17.4g、独活86.8g、藁本102.6g、玄参102.6g、当归174g、地黄278.2g、川牛膝102.6g、槲寄生102.6g、羌活174g。
称取天麻原料药材，加8倍量30％乙醇回流提取4次，每次1小时，合并，滤过，得乙醇提取液备用，余下天麻药渣备用；称取独活、藁本、当归、羌活四味原料药材用水蒸汽蒸馏提取4小时，分离，得挥发油备用；余下药渣与天麻药渣、制杜仲、制草乌、制附子、玄参、地黄、川牛膝、槲寄生合并，加6倍量水提取4次，每次1小时，滤过，滤液浓缩至含生药浓度为2∶1的药液，放冷至室温，加入乙醇使溶液含醇量达80％，静置48小时，取上清液过滤得乙醇液，与天麻醇提液合并，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.40(60℃)的浸膏备用；取聚乙二醇-6000和聚乙二醇-4000混匀加热熔融，加入挥发油、浸膏，搅拌均匀，转移至滴丸机中于60℃保温10分钟，滴制成丸，脱油，低温干燥，灌装于空心胶囊中，制成1000粒，即得本发明胶囊剂，规格：每粒装0.3g。用法用量：口服，一次2粒，一日2次。
实施例5：天麻139.2g、杜仲(盐制)147.8g、制草乌17.4g、附子(制)17.4g、独活86.8g、藁本102.6g、玄参102.6g、当归174g、地黄278.2g、川牛膝102.6g、槲寄生102.6g、羌活174g。
称取天麻原料药材，加5倍量50％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并，滤过，得乙醇提取液备用，余下天麻药渣备用；称取独活、藁本、当归、羌活四味原料药材用水蒸汽蒸馏提取6小时，分离，得挥发油备用；余下药渣与天麻药渣、制杜仲、制草乌、制附子、玄参、地黄、川牛膝、槲寄生合并，加10倍量水提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至含生药浓度为1∶1的药液，放冷至室温，加入乙醇使溶液含醇量达60％，静置24小时，取上清液过滤得乙醇液，与天麻醇提液合并，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.40(60℃)的浸膏，干燥，粉碎成细粉，加入辅料适量，研匀，压制成10000粒，得本发明软胶囊，规格：每粒装0.3g。用法用量：口服，一次2粒，一日2次。
实施例6：天麻13.92g、杜仲(盐制)14.78g、制草乌1.74g、附子(制)1.74g、独活8.68g、藁本10.26g、玄参10.26g、当归17.4g、地黄27.82g、川牛膝10.26g、槲寄生10.26g、羌活17.4g。
称取天麻原料药材，加5倍量30％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并，滤过，得乙醇提取液备用，余下天麻药渣备用；称取独活、藁本、当归、羌活四味原料药材用水蒸汽蒸馏提取6小时，分离，得挥发油备用；余下药渣与天麻药渣、制杜仲、制草乌、制附子、玄参、地黄、川牛膝、槲寄生合并，加10倍量水提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并，滤过，滤液浓缩至含生药浓度为1∶1的药液，放冷至室温，加入乙醇使溶液含醇量达60％，静置24小时，取上清液过滤得乙醇液，与天麻醇提液合并，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.40(60℃)的浸膏备用；取聚乙二醇-6000和聚乙二醇-4000混匀加热熔融，加入挥发油、浸膏，搅拌均匀，转移至滴丸机中于60℃保温10分钟，滴制成丸，脱油，低温干燥，制成1000丸，即得本发明滴丸剂，规格：每丸重30mg。用法用量：口服，一次20丸，一日2次。
实施例7：天麻139.2g、杜仲(盐制)147.8g、制草乌17.4g、附子(制)17.4g、独活86.8g、藁本102.6g、玄参102.6g、当归174g、地黄278.2g、川牛膝102.6g、槲寄生102.6g、羌活174g。
称取天麻原料药材，加5倍量30％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并，滤过，得乙醇提取液备用，余下天麻药渣备用；称取独活、藁本、当归、羌活四味原料药材用水蒸汽蒸馏提取6小时，分离，得挥发油备用；余下药渣与天麻药渣、制杜仲、制草乌、制附子、玄参、地黄、川牛膝、槲寄生合并，加10倍量水提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并，滤过，滤液浓缩至含生药浓度为1∶1的药液，放冷至室温，加入乙醇使溶液含醇量达60％，静置24小时，取上清液过滤得乙醇液，与天麻醇提液合并，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.40(60℃)的浸膏，加入辅料适量，混匀，制粒，干燥，加入适量润滑剂，混匀，压片，包薄膜衣，制成10000片，即得本发明片剂，规格：每片重0.3g。用法用量：口服，一次2片，一日2次。
实施例8：天麻28.9g、杜仲(盐制)166.2g、制草乌21.7g、附子(制)21.7g、独活101.2g、藁本108.4g、玄参108.4g、当归187.9g、地黄296.3g、川牛膝108.4g、槲寄生102.4g、羌活187.9g。
称取天麻原料药材，加5倍量50％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并，滤过，得乙醇提取液备用，余下天麻药渣备用；称取独活、藁本、当归、羌活四味原料药材用水蒸汽蒸馏提取6小时，分离，得挥发油备用；余下药渣与天麻药渣、制杜仲、制草乌、制附子、玄参、地黄、川牛膝、槲寄生合并，加10倍量水提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至含生药浓度为1∶1的药液，放冷至室温，加入乙醇使溶液含醇量达60％，静置24小时，取上清液过滤得乙醇液，与天麻醇提液合并，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.40(60℃)的浸膏备用；取聚乙二醇-6000和聚乙二醇-4000混匀加热熔融，加入挥发油、浸膏，搅拌均匀，转移至滴丸机中于60℃保温10分钟，滴制成丸，脱油，低温干燥，灌装于空心胶囊中，制成1000粒，即得本发明胶囊剂，规格：每粒装0.3g。用法用量：口服，一次2粒，一日2次。
实施例9：天麻260g、杜仲(盐制)137.3g、制草乌7.2g、附子(制)7.2g、独活72.3g、藁本93.9g、玄参93.9g、当归160g、地黄267.4g、川牛膝93.9g、槲寄生93.9g、羌活160g。
称取天麻原料药材，加5倍量50％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并，滤过，得乙醇提取液备用，余下天麻药渣备用；称取独活、藁本、当归、羌活四味原料药材用水蒸汽蒸馏提取6小时，分离，得挥发油备用；余下药渣与天麻药渣、制杜仲、制草乌、制附子、玄参、地黄、川牛膝、槲寄生合并，加10倍量水提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至含生药浓度为1.0∶1的药液，放冷至室温，加入乙醇使溶液含醇量达60％，静置24小时，取上清液过滤得乙醇液，与天麻醇提液合并，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.40(60℃)的浸膏备用；取聚乙二醇-6000和聚乙二醇-4000混匀加热熔融，加入挥发油、浸膏，搅拌均匀，转移至滴丸机中于60℃保温10分钟，滴制成丸，脱油，低温干燥，灌装于空心胶囊中，制成1000粒，即得本发明胶囊剂，规格：每粒装0.3g。用法用量：口服，一次2粒，一日2次。
实施例10：天麻6.96kg、杜仲(盐制)7.39kg、制草乌0.87kg、附子(制)0.87kg、独活4.33kg、藁本5.13kg、玄参5.13kg、当归8.7kg、地黄13.91kg、川牛膝5.13kg、槲寄生5.13kg、羌活8.7kg。
称取天麻原料药材，加5倍量50％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并，滤过，得乙醇提取液备用，余下天麻药渣备用；称取独活、藁本、当归、羌活四味原料药材用水蒸汽蒸馏提取6小时，分离，得挥发油备用；余下药渣与天麻药渣、制杜仲、制草乌、制附子、玄参、地黄、川牛膝、槲寄生合并，加10倍量水提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至含生药浓度为1.0∶1的药液，放冷至室温，加入乙醇使溶液含醇量达60％，静置24小时，取上清液过滤得乙醇液，与天麻醇提液合并，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.40(60℃)的浸膏备用；取聚乙二醇-6000和聚乙二醇-4000混匀加热熔融，加入挥发油、浸膏，搅拌均匀，转移至滴丸机中于60℃保温10分钟，滴制成丸，脱油，低温干燥，灌装于空心胶囊中，制成50000粒，即得本发明胶囊剂，规格：每粒装0.3g。用法用量：口服，一次2粒，一日2次。
实施例11：天麻139.2g、杜仲(盐制)147.8g、制草乌17.4g、附子(制)17.4g、独活86.8g、藁本102.6g、玄参102.6g、当归174g、地黄278.2g、川牛膝102.6g、槲寄生102.6g、羌活174g。
称取天麻原料药材，加5倍量50％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并，滤过，得乙醇提取液备用，余下天麻药渣备用；称取独活、藁本、当归、羌活四味原料药材用超临界CO2提取，分离，得挥发油备用；余下药渣与天麻药渣、制杜仲、制草乌、制附子、玄参、地黄、川牛膝、槲寄生合并，加10倍量水提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至含生药浓度为1.0∶1的药液，放冷至室温，加到大孔吸附树脂柱上，用60％乙醇洗脱，收集洗脱液，与天麻醇提液合并，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.40(60℃)的浸膏备用；取聚乙二醇-6000和聚乙二醇-4000混匀加热熔融，加入挥发油、浸膏，搅拌均匀，转移至滴丸机中于60℃保温10分钟，滴制成丸，脱油，低温干燥，灌装于空心胶囊中，制成50000粒，即得本发明胶囊剂，规格：每粒装0.3g。用法用量：口服，一次2粒，一日2次。
实施例12：天麻1392g、杜仲(盐制)1478g、制草乌174g、附子(制)174g、独活868g、藁本1026g、玄参1026g、当归1740g、地黄2782g、川牛膝1026g、槲寄生1026g、羌活1740g。
称取天麻原料药材，加3倍量30％乙醇回流提取2次，每次1小时，合并，滤过，得乙醇提取液备用，余下天麻药渣备用；称取独活、藁本、当归、羌活四味原料药材用超临界CO2提取，分离，得挥发油备用；余下药渣与天麻药渣、制杜仲、制草乌、制附子、玄参、地黄、川牛膝、槲寄生合并，加12倍量水提取1次，提取4小时，滤过，滤液浓缩至含生药浓度为2∶1的药液，放冷至室温，加到聚酰胺树脂柱上，用80％乙醇洗脱，收集洗脱液，与天麻醇提液合并，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.40(60℃)的浸膏备用；取聚乙二醇-6000和聚乙二醇-4000混匀加热熔融，加入挥发油、浸膏，搅拌均匀，转移至滴丸机中于60℃保温10分钟，滴制成丸，脱油，低温干燥，灌装于空心胶囊中，制成10000粒，即得本发明胶囊剂，规格：每粒装0.3g。用法用量：口服，一次2粒，一日2次。
实施例13：天麻1392g、杜仲(盐制)1478g、制草乌174g、附子(制)174g、独活868g、藁本1026g、玄参1026g、当归1740g、地黄2782g、川牛膝1026g、槲寄生1026g、羌活1740g。
称取天麻原料药材，加8倍量90％乙醇回流提取1次，每次4小时，滤过，得乙醇提取液备用，余下天麻药渣备用；称取独活、藁本、当归、羌活四味原料药材用超临界CO2提取，分离，得挥发油备用；余下药渣与天麻药渣、制杜仲、制草乌、制附子、玄参、地黄、川牛膝、槲寄生合并，加8倍量水提取4次，每次1小时，滤过，滤液浓缩至含生药浓度为1∶1的药液，放冷至室温，加到聚酰胺树脂柱上，用40％乙醇洗脱，收集洗脱液，与天麻醇提液合并，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.40(60℃)的浸膏备用；取聚乙二醇-6000和聚乙二醇-4000混匀加热熔融，加入挥发油、浸膏，搅拌均匀，转移至滴丸机中于60℃保温10分钟，滴制成丸，脱油，低温干燥，灌装于空心胶囊中，制成10000粒，即得本发明胶囊剂，规格：每粒装0.3g。用法用量：口服，一次2粒，一日2次。
实施例14：天麻139.2g、杜仲(盐制)147.8g、制草乌17.4g、附子(制)17.4g、独活86.8g、藁本102.6g、玄参102.6g、当归174g、地黄278.2g、川牛膝102.6g、槲寄生102.6g、羌活174g。
称取天麻原料药材，加5倍量50％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.40(60℃)的浸膏，得天麻醇提浸膏备用，余下天麻药渣备用；称取独活、藁本、当归、羌活四味原料药材用超临界CO2提取，分离，得挥发油备用；余下药渣与天麻药渣、制杜仲、制草乌、制附子、玄参、地黄、川牛膝、槲寄生合并，加10倍量水提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液通过陶瓷膜分离过滤，收集过滤液，滤浓缩至相对密度为1.05～1.40(60℃)的浸膏备用；取聚乙二醇-6000和聚乙二醇-4000混匀加热熔融，加入挥发油、浸膏，搅拌均匀，转移至滴丸机中于60℃保温10分钟，滴制成丸，脱油，低温干燥，灌装于空心胶囊中，制成1000粒，即得本发明胶囊剂，规格：每粒装0.3g。用法用量：口服，一次2粒，一日2次。
实施例15：天麻1392g、杜仲(盐制)1478g、制草乌174g、附子(制)174g、独活868g、藁本1026g、玄参1026g、当归1740g、地黄2782g、川牛膝1026g、槲寄生1026g、羌活1740g。
称取天麻原料药材，加5倍量50％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.40(60℃)的浸膏，得天麻醇提浸膏备用，余下天麻药渣备用；称取独活、藁本、当归、羌活四味原料药材用超临界CO2提取，分离，得挥发油备用；余下药渣与天麻药渣、制杜仲、制草乌、制附子、玄参、地黄、川牛膝、槲寄生合并，加10倍量水提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液通过陶瓷膜分离过滤，收集过滤液，滤浓缩至相对密度为1.05～1.40(60℃)的浸膏备用；取聚乙二醇-6000和聚乙二醇-4000混匀加热熔融，加入挥发油、浸膏，搅拌均匀，转移至滴丸机中于60℃保温10分钟，滴制成丸，脱油，低温干燥，灌装于空心胶囊中，制成10000粒，即得本发明胶囊剂，规格：每粒装0.3g。用法用量：口服，一次2粒，一日2次。
实施例11：天麻139.2g、杜仲(盐制)147.8g、制草乌17.4g、附子(制)17.4g、独活86.8g、藁本102.6g、玄参102.6g、当归174g、地黄278.2g、川牛膝102.6g、槲寄生102.6g、羌活174g。
称取天麻原料药材，加5倍量50％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并，滤过，得乙醇提取液备用，余下天麻药渣备用；称取独活、藁本、当归、羌活四味原料药材用超临界CO2提取，分离，得挥发油备用；余下药渣与天麻药渣、制杜仲、制草乌、制附子、玄参、地黄、川牛膝、槲寄生合并，加10倍量水提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至含生药浓度为1∶1的药液，放冷至室温，加到大孔吸附树脂柱上，用60％乙醇洗脱，收集洗脱液，与天麻醇提液合并，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05～1.40(60℃)的浸膏，干燥，粉碎成细粉，加入辅料适量，研匀，压制成10000粒，得本发明软胶囊，规格：每粒装0.25g。用法用量：口服，一次2粒，一日2次。
Claims (1)
1.一种防治脑血管疾病药物制剂的制备方法，所述药物制剂的中药原料按重量百分比为：天麻9.6％、制杜仲10.3％、制草乌1.2％、制附子1.2％、独活6.0％、藁本7.1％、玄参7.1％、当归12.0％、地黄19.3％、川牛膝7.1％、槲寄生7.1％、羌活12.0％；其特征在于：
将上述中药原料制备成药物制剂的方法为：称取天麻原料药材，加5倍量50％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并，滤过，得乙醇提取液备用，余下天麻药渣备用；称取独活、藁本、当归、羌活四味原料药材用水蒸汽蒸馏提取6小时，分离，得挥发 油备用；余下药渣与天麻药渣、制杜仲、制草乌、制附子、玄参、地黄、川牛膝、槲寄生合并，加 10倍量水提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至含生药浓度为1∶1的药液，放冷至室温，加入乙醇使溶液含醇量达60％，静置24小时，取上清液过滤得乙醇液，与天麻醇提液合并，回收乙醇并浓缩至60℃相对密度为1.05～1.40 的浸膏，合并挥发油，再加入辅料按常规制剂工艺制成不同的药物制剂。
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Address after: 561100 Xia Yun Industrial Park, Pingba District, Anshun, Guizhou Applicant after: Guizhou three power Pharmacy stock Co., Ltd Address before: 550003 No. 104 Guigong Road, Guiyang City, Guizhou Province Applicant before: Guizhou Sanli Pharmacy Ltd. |
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| CB02 | Change of applicant information | ||
| GR01 | Patent grant | ||
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