CN105567592A - 一种能同时产果胶酶和半纤维素酶的枯草芽孢杆菌及筛选方法和应用 - Google Patents

一种能同时产果胶酶和半纤维素酶的枯草芽孢杆菌及筛选方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种能同时产果胶酶和半纤维素酶的枯草芽孢杆菌，名称为16#，分类名称为：枯草芽孢杆菌Bacillus？subtilis，保藏编号为：CGMCC？No.11898，保藏日期：2015年12月22日，北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。本枯草芽孢杆菌能同时产果胶酶和半纤维素酶，几乎不产纤维素酶，将其应用于***脱胶，常温条件下脱胶96h左右，残胶率可以降低到13％左右，几乎到达纺织工业要求，该菌种还可以用于其他麻类脱胶中。

Description

一种能同时产果胶酶和半纤维素酶的枯草芽孢杆菌及筛选方法和应用
技术领域
本发明属于工业微生物技术领域，尤其是一能同时产果胶酶和半纤维素酶的枯草芽孢杆菌及筛选方法和应用。
背景技术
***，为一年生的桑科，***属植物，高度约3米。学名为Cannabissatival，也称为汉麻、寒麻、线麻、花麻等。***种植对气候和土壤的要求很低，而且在生长过程中无需农药以及外界的施肥，抗虫害能力强，生长迅速，种植收获期短等，最重要的是***纤维具有许多特有的优异性能，如抗静电、防过敏，良好的保温性、散热性，防菌、防腐、抗紫外等。***纤维是重要的纺织纤维作物。
与其他麻类相比(苎麻，亚麻等)，***纤维的生物脱胶研究相对较少，脱胶难度也要高于其他麻类。其胶质含量高达40～50％，其中以多聚糖类为主；而且其纤维结构比较特殊，单纤维长度差异较大，纤维分离性差等，这些原因都大大增加了***的脱胶难度。要使***纤维具有可纺织性，必须除去大多数的胶质，使其单纤维相互分离变得柔软，这一过程就称为脱胶。目前，麻纤维的脱胶在工业上多采用化学脱胶法，即采用强酸，强碱，表面活性剂，螯合剂等在高温高压下对原麻进行处理。此种脱胶的方法虽然所用时间比较短，在几小时之内就能得到精干麻，但是脱胶后的工业废水会给环境带来极大的污染；而且高温高压下所需能耗高，给脱胶工业增大了成本；最重要的是，所使用的化学试剂严重损伤了纤维的结构，降低了纤维的质量。随着环保意识的增强，此种方法已不再被人们所倡导。
为了克服这些缺点，改进工业上的脱胶工艺，近些年来国内外对麻纤维的微生物脱胶或是用微生物所产的酶脱胶进行了广泛地研究，同时取得了不少研究成果。生物脱胶作为一种新型的麻纤维的脱胶方法，其广阔的开发前景是显而易见的。生物脱胶主要是利用微生物产生的果胶酶和半纤维素酶等分解胶质成分，但不损伤纤维结构；具有生产成本低，反应条件温和，污染少，节水节能等优点。
目前，国内外对麻类的生物脱胶的研究多集中在苎麻，亚麻，红麻等生物脱胶方面，而对***纤维的生物脱胶研究却相对较少，在以往的研究当中，***纤维处理周期过长成为应用于生产实际的主要瓶颈。因此，寻找更为合适的脱胶菌株和脱胶条件，缩短脱胶处理时间成为当务之急。
通过检索，发现如下一篇与本发明专利申请相关的专利公开文献：
***脱胶工业用酶制剂的制备方法及其应用(CN1374398)，酶制剂的制备方法包括高酶活菌种的斜面培养和保存、摇瓶培养、种子罐培养和发酵罐生产,选用枯草芽孢杆菌No.13菌株,保藏号为CCTCCNO.M200038。***脱胶的方法包括发酵酶液过滤渣,稀释酶液3～6倍,放入脱胶罐中,将稀释酶液的pH调至7.5～9.0,原麻预处理,脱胶液与原麻浴比(10～20)∶1,脱胶时间2～10小时。本发明方法无污染，制成的***麻条平均长度、细度、断裂强度，均好于化学法。
通过对比，本发明专利申请与上述专利公开文献存在本质的不同。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一株能同时生产果胶酶和半纤维素酶的菌株，该菌株可以在温和的条件下应用于***纤维的生物脱胶中。
为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：
一种能同时产果胶酶和半纤维素酶的枯草芽孢杆菌，名称为16#，分类名称为：枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis，保藏编号为：CGMCCNo.11898，保藏日期：2015年12月22日，北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
而且，步骤如下：
⑴菌株的筛选和分离：
筛选来自处理生活垃圾的土壤中的菌株，并将其冻干成菌粉；
①富集培养：称取采集到并冻干的菌粉置于***富集液体培养基中，所述菌粉与***富集液体培养基的比例g：mL为1：150，在37℃下，180～220r/min富集培养24小时；
②初筛：富集培养后的菌液按照10倍梯度稀释：用灭过菌的生理盐水将富集的菌液稀释成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7不同稀释度的样品悬液，振荡混匀后分别吸取10-5、10-6、10-7的菌悬液200μL，涂布于果胶筛选固体培养基或木聚糖筛选固体培养基中，在37℃下倒置培养24小时，通过刚果红显色，测量透明圈直径R和菌落直径r，以R/r的比值来初步判断菌株的产酶能力；
然后挑取长势较好，R/r的比值较大的单菌落，点接到果胶筛选固体培养基或木聚糖筛选固体培养基中，在37℃下倒置培养24小时，挑选R/r的比值较大的单菌落在LB固体培养基中分离纯化；
这样分离纯化后所得的细菌既能产果胶酶又能产木聚糖酶，然后把这些细菌保藏于终质量浓度为15％的甘油管中，于-80℃冻存备用；
③复筛：先将初筛所保藏的细菌在LB固体培养基中活化，以一环的接种量接种到装有50mL的液体LB的250mL的三角摇瓶的培养基中，37℃下摇瓶培养16～24小时作为种子液，菌体浓度OD600达到2～2.6；
称取4-10g原麻，先沸水浴处理20～30min后装入250mL的三角摇瓶中，接种5～10mL，以浴比1:20～25加入含有0.2％氮源的自来水，所述氮源为硫酸铵、硝酸铵、尿素、草酸铵、碳酸铵中的一种或几种的混合物，在37℃下、180～220r/min脱胶10～12小时后取出，检测残胶率，选取残胶率低的菌株作为脱胶菌，命名为16#；
⑵菌株的鉴定：
菌株的个体形态鉴定：对所筛得的脱胶细菌首先进行形态学鉴定，发现16#菌菌落呈乳白色，菌落较大、粘稠、表面光滑不透明，边缘整齐，较老的菌体表面起褶皱；经过革兰氏染色都显阳性，杆短小，且在菌体中央形成芽孢，初步断定为芽孢杆菌属；
16SrDNA基因序列测定和分析：以16#菌株的基因组DNA为模板进行PCR扩增16SrDNA并测序；
在NCBI上进行Blast分析表明：16#菌株的16SrDNA序列与枯草芽孢杆菌16SrDNA序列的一致性高达99％，即得能同时产果胶酶和半纤维素酶的枯草芽孢杆菌。
而且，所述步骤⑴①中***富集液体培养基为：
***粉末2.0g，硝酸铵0.2g，磷酸氢二钾0.05g，硫酸钠0.05g，蒸馏水100mL，pH7.0。
而且，所述步骤⑴②中果胶筛选固体培养基为：果胶0.5g，硝酸铵0.2g，磷酸氢二钾0.1g，硫酸钠0.05g，硫酸镁0.06g，琼脂粉2.0g，刚果红0.02g，蒸馏水100mL，pH7.0～7.5；或者，所述步骤⑴②中木聚糖筛选固体培养基为：木聚糖1.0g，硝酸钾0.1g，硫酸镁0.05g，氯化钠0.05g，磷酸氢二钾0.05g，刚果红0.02g，琼脂粉2.0g，蒸馏水100mL，pH7.0～7.5。
而且，所述步骤⑴②中LB固体培养基为：
胰蛋白胨1.0g，酵母提取物0.5g，氯化钠1.0g，琼脂粉2.0g，蒸馏水100mL，pH7.0。
而且，所述步骤⑴③中液体LB为；
胰蛋白胨1.0g，酵母提取物0.5g，氯化钠1.0g，蒸馏水100mL，pH7.0。
一种如上所述的能同时产果胶酶和半纤维素酶的枯草芽孢杆菌在***脱胶中的应用。
而且，以所述枯草芽孢杆菌为脱胶菌接种于液体种子培养基，置于37℃摇床中，180～220rpm培养至16～24h，以体积比5％～10％接种量转接到脱胶培养基中，脱胶培养基中含有麻类原麻纤维，麻类与脱胶培养基的比例g：mL为1：20～30，脱胶温度为25～45℃，摇床转速为180～220rpm，脱胶24～96h，即得脱胶后的***。
而且，所述液体种子培养基为LB液体培养基、肉汤培养基或无机盐培养基；或者，所述麻类为***、苎麻或亚麻；或者，所述脱胶培养基为沤麻液，该沤麻液为水或者为含有质量百分数0.05％～1％氮源的水溶液，或者，为0.05g/mL***，0.002g/mL氮源，pH7.0。
而且，所述氮源为硫酸铵、硝酸铵、尿素、草酸铵、碳酸铵中的一种或几种的混合物；或者，所述液体种子培养基为LB液体培养基：1000mL培养基中含NaCl10g，胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，pH7.0。
附图说明
图1为本发明筛得Bacillussubtilis菌落形态图；
图2为本发明筛得Bacillussubtilis个体形态图；
图3为本发明脱胶的***效果图；其中，图3-1为***未经脱胶效果图，图3-2为***经本发明筛得Bacillussubtilis脱胶效果图；
图4为本发明***的电镜图；其中，图4-1为***未经过脱胶作用的电镜图，图4-2为***经过Bacillussubtilis16#脱胶作用的电镜图。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明进一步说明；下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。
除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。
本发明所用培养基如下：
***富集培养基：***粉末2.0g，硝酸铵0.2g，磷酸氢二钾0.05g，硫酸钠0.05g，蒸馏水100mL，pH7.0。
果胶筛选培养基：果胶0.5g，硝酸铵0.2g，磷酸氢二钾0.1g，硫酸钠0.05g，硫酸镁0.06g，琼脂粉2.0g，刚果红0.02g，蒸馏水100mL，pH7.0～7.5。
木聚筛选糖培养基：木聚糖1.0g，硝酸钾0.1g，硫酸镁0.05g，氯化钠0.05g，磷酸氢二钾0.05g，刚果红0.02g，琼脂粉2.0g，蒸馏水100mL，pH7.0～7.5。
LB固体培养基：胰蛋白胨1.0g，酵母提取物0.5g，氯化钠1.0g，琼脂粉2.0g，蒸馏水100mL，pH7.0。
所述种子培养基的成分为LB琼脂培养基，即1000mL培养基中含NaCl10g，胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，琼脂18～20g，pH7.0。
所述种子液体培养基的成分为LB培养基，即1000mL培养基中含NaCl10g，胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，pH7.0。
一种能同时产果胶酶和半纤维素酶的枯草芽孢杆菌，名称为16#，分类名称为：枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis，保藏编号为：CGMCCNo.11898，保藏日期：2015年12月22日，北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
一种如上所述的能同时产果胶酶和半纤维素酶的枯草芽孢杆菌的筛选方法，步骤如下：
(1)菌株的筛选和分离：
本发明筛选菌株所用的土样来自处理生活垃圾的土壤中。
①富集培养：富集培养：称取采集到并冻干的菌粉置于***富集液体培养基中，所述菌粉与***富集液体培养基的比例g：mL为1：150，在37℃下，180～220r/min富集培养24小时。
②初筛：富集培养后的菌液按照10倍梯度稀释。用灭过菌的生理盐水将富集的菌液稀释成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7等不同稀释度的样品悬液，振荡混匀后分别吸取10-5、10-6、10-7的菌悬液200μL，涂布于果胶(木聚糖)筛选固体培养基中，在37℃下倒置培养24小时，通过刚果红显色，测量透明圈直径(R)和菌落直径(r)，以R/r的比值来初步判断菌株的产酶能力。然后挑取长势较好，R/r的比值较大的单菌落，点接到木聚糖(果胶)固体培养基中，在37℃下倒置培养24小时，挑选R/r的比值较大的单菌落在LB固体培养基中分离纯化。这样分离纯化后所得的细菌既能产果胶酶又能产木聚糖酶，然后把这些细菌保藏于终质量浓度为15％的甘油管中，于-80℃冻存备用。
③复筛：先将初筛所保藏的细菌在LB固体培养基中活化，以一环的接种量接种到装有50mL的液体LB的250mL的三角摇瓶的培养基中，37℃下摇瓶培养16小时作为种子液。称取4～10g原麻，先沸水浴处理30min后装入250mL的三角摇瓶中加入自来水95mL，接入种子液5mL(浴比1:20)，在37℃下(180～220r/min)脱胶10～12小时后取出，检测残胶率，选取残胶率低的菌株作为下步的脱胶菌。
(2)菌株的鉴定：
菌株的个体形态鉴定：对所筛得脱胶细菌首先进行形态学鉴定，发现菌落呈乳白色，菌落较大、粘稠、表面光滑不透明，边缘整齐，较老的菌体表面起褶皱，如图1所示。经过革兰氏染色都显阳性，杆短小，且在菌体中央形成芽孢，初步断定2株菌都为芽孢杆菌属，如图2所示。
16SrDNA基因序列测定和分析：以16#菌株的基因组DNA为模板进行PCR扩增16SrDNA并测序。在NCBI上进行Blast分析表明：16#菌株的16SrDNA序列与枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)16SrDNA序列的一致性高达99％。
通过以上分离、筛选与菌株鉴定结果，确认该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。
本发明的相关检测结果：
本发明能同时产果胶酶和半纤维素酶的枯草芽孢杆菌的脱胶菌株果胶酶和木聚糖酶酶活的测定:
1、DNS法测定相关酶活
(1)DNS试剂的配置
准确称取3，5-二硝基水杨酸10.0g(化学纯)，加二次蒸馏水600mL，45℃下水浴搅拌，然后缓慢加入8.0g氢氧化钠，并不断搅拌，直到溶液清澈透明，再逐步加入四水合酒石酸钾钠312.0g、苯酚2.50g和无水亚硫酸钠2.50g，不断搅拌，直至完全溶解，冷却至室温后，用蒸馏水定容至1000mL，储存于棕色瓶中并避光保存，室温下存放15d后使用，保质期为6个月。
(2)pH9.0的甘氨酸—氢氧化钠缓冲溶液的配置
50mL0.2mol/L的甘氨酸与16.8mL0.2mol/L的氢氧化钠混合，加蒸馏水定容至200mL。
(3)标准曲线的制作
准确称取0.100g半乳糖醛酸(木糖)，蒸馏水溶解并定容至100mL，即为1mg/mL的半乳糖醛酸标准液。取16只25mL刻度管编号，依次加入0，0.1，0.3，0.5，0.7，0.9mL的标准液，对应的添加蒸馏水的体积为3.0，2.9，2.7，2.5，2.3，2.1mL，每组3个平行，不加标准液的对照组1个平行。然后各加入2.0mL的DNS试剂，振荡混匀后在沸水浴中准确反应7min，取出后立即用流水冷却，然后用蒸馏水定容至25mL，在560nm处测定吸光值(OD)。以半乳糖醛酸(木糖)的摩尔数(μmol)为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。得到半乳糖醛酸标准曲线：Y1＝0.175X1-0.135，R2＝0.998准曲线：Y2＝1.268X2-0.073，R2＝0.998。
(4)底物溶液的配置
果胶底物：准确称取1.0000g果胶，用pH9.0的缓冲液加热溶解，并不断搅拌，冷却至室温后定容至100mL。低温下保存备用，保存期为3天。
木聚糖底物：准确称取1.0000g木聚糖，用pH9.0的缓冲液加热溶解，并不断搅拌，冷却至室温后定容至100mL。低温下保存备用，保存期为3天。
(5)粗酶液的制备
将脱胶菌株在LB固体培养基中活化后，挑取单菌落接种于LB液体培养基中，37℃下，200r/min富集培养16h，在4℃下，8000r/min离心10min，所得上清液即为粗酶液。
(6)酶活的测定
酶活测定的主要步骤：
(1)取25mL的刻度管，加入经适当稀释倍数的粗酶液1mL，底物2mL，充分混匀，以灭活的酶液作为空白对照；
(2)在50℃水浴中反应30min，取出；
(3)加入2mLDNS试剂并摇匀，立即沸水浴精确显色5min，取出后流水冷却，定容至25mL，在540nm处测定OD值。一个酶活单位定义为，在上述的条件下，每分钟水解底物生成1μg还原糖所需的酶量为1个酶活单位。酶活力(U/mL)＝还原糖量Y×N/30；N为粗酶液的稀释倍数，30为酶促反应时间(min)。测得16#果胶酶活力为198U/mL，木聚糖酶活力为124U/mL。
经检测可以看出，本枯草芽孢杆菌能同时产果胶酶和半纤维素酶，几乎不产纤维素酶；96h内能使***纤维的残胶率降低到13％左右。
本发明能同时产果胶酶和半纤维素酶的枯草芽孢杆菌在***纤维的脱胶应用：
先把保存于甘油管中的脱胶菌株在LB固体培养基中活化，然后接种到LB液体种子培养基中，37℃，200rpm培养16～24h菌体浓度(OD600)达到2-2.6，种子液以5％～10％(体积比)接种量转接到***的沤麻液中，沤麻液可以是水，也可以是含有0.05％～1％氮源的水溶液，氮源可以是硫酸铵、硝酸铵、尿素、草酸铵、碳酸铵等中的一种、几种或全部，***与沤麻液的质量体积比为1：20～1：30，脱胶温度为25～45℃，脱胶时间24～96h，静置或者转动，摇床转速为180～220rpm。
所述液体种子培养基的成分为LB液体培养基。
较优地，所述脱胶培养基成分为：0.05g/mL***，0.002g/mL氮源，pH7.0；
较优地，所述氮源为硝酸铵或硫酸铵；
***脱胶后麻纤维完全发散，手感柔软，色泽光亮洁白(图3-2)，与未加菌液的对照组(图3-1)形成鲜明对比。通过扫描电子显微镜观察，***原麻中，内部的若干纤维束被胶质紧密包裹，几乎看不到单根纤维结构(图4-1)，经脱胶菌处理96h左右后，纤维表面光滑，几乎没有损伤，单纤维束上的胶质基本除去(图4-2)。***脱胶后的残胶率如表1，脱胶4天，***残胶率下降到8％～15％，较优地是残胶率达到13％，几乎到达纺织工业的要求。
表1.***经枯草芽孢杆菌脱胶后的残胶率表
。

Claims (10)

1.一种能同时产果胶酶和半纤维素酶的枯草芽孢杆菌，其特征在于：名称为16#，分类名称为：枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis，保藏编号为：CGMCCNo.11898，保藏日期：2015年12月22日，北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
2.一种如权利要求1所述的能同时产果胶酶和半纤维素酶的枯草芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于：步骤如下：
⑴菌株的筛选和分离：
筛选来自处理生活垃圾的土壤中的菌株，并将其冻干成菌粉；
①富集培养：称取采集到并冻干的菌粉置于***富集液体培养基中，所述菌粉与***富集液体培养基的比例g：mL为1：150，在37℃下，180～220r/min富集培养24小时；
②初筛：富集培养后的菌液按照10倍梯度稀释：用灭过菌的生理盐水将富集的菌液稀释成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7不同稀释度的样品悬液，振荡混匀后分别吸取10-5、10-6、10-7的菌悬液200μL，涂布于果胶筛选固体培养基或木聚糖筛选固体培养基中，在37℃下倒置培养24小时，通过刚果红显色，测量透明圈直径R和菌落直径r，以R/r的比值来初步判断菌株的产酶能力；
然后挑取长势较好，R/r的比值较大的单菌落，点接到果胶筛选固体培养基或木聚糖筛选固体培养基中，在37℃下倒置培养24小时，挑选R/r的比值较大的单菌落在LB固体培养基中分离纯化；
这样分离纯化后所得的细菌既能产果胶酶又能产木聚糖酶，然后把这些细菌保藏于终质量浓度为15％的甘油管中，于-80℃冻存备用；
③复筛：先将初筛所保藏的细菌在LB固体培养基中活化，以一环的接种量接种到装有50mL的液体LB的250mL的三角摇瓶的培养基中，37℃下摇瓶培养16～24小时作为种子液，菌体浓度OD600达到2～2.6；
称取4-10g原麻，先沸水浴处理20～30min后装入250mL的三角摇瓶中，接种5～10mL，以浴比1:20～25加入含有0.2％氮源的自来水，所述氮源为硫酸铵、硝酸铵、尿素、草酸铵、碳酸铵中的一种或几种的混合物，在37℃下、180～220r/min脱胶10～12小时后取出，检测残胶率，选取残胶率低的菌株作为脱胶菌，命名为16#；
⑵菌株的鉴定：
菌株的个体形态鉴定：对所筛得的脱胶细菌首先进行形态学鉴定，发现16#菌菌落呈乳白色，菌落较大、粘稠、表面光滑不透明，边缘整齐，较老的菌体表面起褶皱；经过革兰氏染色都显阳性，杆短小，且在菌体中央形成芽孢，初步断定为芽孢杆菌属；
16SrDNA基因序列测定和分析：以16#菌株的基因组DNA为模板进行PCR扩增16SrDNA并测序；
在NCBI上进行Blast分析表明：16#菌株的16SrDNA序列与枯草芽孢杆菌16SrDNA序列的一致性高达99％，即得能同时产果胶酶和半纤维素酶的枯草芽孢杆菌。
3.根据权利要求2所述的能同时产果胶酶和半纤维素酶的枯草芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于：所述步骤⑴①中***富集液体培养基为：
***粉末2.0g，硝酸铵0.2g，磷酸氢二钾0.05g，硫酸钠0.05g，蒸馏水100mL，pH7.0。
4.根据权利要求2所述的能同时产果胶酶和半纤维素酶的枯草芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于：所述步骤⑴②中果胶筛选固体培养基为：果胶0.5g，硝酸铵0.2g，磷酸氢二钾0.1g，硫酸钠0.05g，硫酸镁0.06g，琼脂粉2.0g，刚果红0.02g，蒸馏水100mL，pH7.0～7.5；或者，所述步骤⑴②中木聚糖筛选固体培养基为：木聚糖1.0g，硝酸钾0.1g，硫酸镁0.05g，氯化钠0.05g，磷酸氢二钾0.05g，刚果红0.02g，琼脂粉2.0g，蒸馏水100mL，pH7.0～7.5。
5.根据权利要求2所述的能同时产果胶酶和半纤维素酶的枯草芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于：所述步骤⑴②中LB固体培养基为：
胰蛋白胨1.0g，酵母提取物0.5g，氯化钠1.0g，琼脂粉2.0g，蒸馏水100mL，pH7.0。
6.根据权利要求2所述的能同时产果胶酶和半纤维素酶的枯草芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于：所述步骤⑴③中液体LB为；
胰蛋白胨1.0g，酵母提取物0.5g，氯化钠1.0g，蒸馏水100mL，pH7.0。
7.一种如权利要求1所述的能同时产果胶酶和半纤维素酶的枯草芽孢杆菌在***脱胶中的应用。
8.根据权利要求7所述的能同时产果胶酶和半纤维素酶的枯草芽孢杆菌在麻类脱胶中的应用，其特征在于：
以所述枯草芽孢杆菌为脱胶菌接种于液体种子培养基，置于37℃摇床中，180～220rpm培养至16～24h，以体积比5％～10％接种量转接到脱胶培养基中，脱胶培养基中含有麻类原麻纤维，麻类与脱胶培养基的比例g：mL为1：20～30，脱胶温度为25～45℃，摇床转速为180～220rpm，脱胶24～96h，即得脱胶后的***。
9.根据权利要求8所述的能同时产果胶酶和半纤维素酶的枯草芽孢杆菌在麻类脱胶中的应用，其特征在于：所述液体种子培养基为LB液体培养基、肉汤培养基或无机盐培养基；或者，所述麻类为***、苎麻或亚麻；或者，所述脱胶培养基为沤麻液，该沤麻液为水或者为含有质量百分数0.05％～1％氮源的水溶液，或者，为0.05g/mL***，0.002g/mL氮源，pH7.0。
10.根据权利要求8所述的能同时产果胶酶和半纤维素酶的枯草芽孢杆菌在麻类脱胶中的应用，其特征在于：所述氮源为硫酸铵、硝酸铵、尿素、草酸铵、碳酸铵中的一种或几种的混合物；或者，所述液体种子培养基为LB液体培养基：1000mL培养基中含NaCl10g，胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，pH7.0。
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