CN105543190A - 一种酯酶bse00077及其编码基因和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种酯酶BSE00077及其编码基因和应用。本发明从芽孢杆菌(Bacillus？sp.)SCSIO？15121中开发得到新的酯酶基因bse00077，其核苷酸序列如SEQ？ID？NO.1所示，全长为741bp，其编码的酯酶BSE00077的氨基酸序列如SEQ？ID？NO.2所示，含有246个氨基酸；通过将克隆的酯酶基因bse00077在大肠杆菌BL21(DE3)中异源表达后，得到了重组表达的酯酶BSE00077。该酯酶作为催化剂常温下可通过酯类水解反应催化制备(R)-1-苯乙醇，具有较好的稳定性，而且对部分表面活性剂及有机溶剂的具有很好的耐受性；可用于手性中间体的制备、洗涤剂、生物医药、化妆品和精细化工等领域。

Description

一种酯酶BSE00077及其编码基因和应用

技术领域

本发明属于生物化工和生物技术领域，具体涉及一种酯酶BSE00077及其编码基因和应用。

背景技术

酯酶(EC3.1.1.1)广泛存在于动物、植物及微生物中，是一类催化水解或形成酯键的酶，作用的底物通常是脂肪链小于十个碳原子的酯类。酯酶属于α/β折叠水解酶超家族，催化中心由丝氨酸、天冬氨酸/谷氨酸和组氨酸组成，保守序列为丝氨酸附近的五肽(GXSXG)序列。酯酶能催化水解、酯化、转酯化等多种化学反应，是一种很重要的工业生物催化剂，被广泛运用于精细化工、洗涤、医药、食品、造纸、皮革加工、纺织、废水处理和饲料工业等领域。从催化特性来看，酯酶具有高度的化学选择性和立体异构选择性，且反应不需要辅酶、反应条件温和、副产物少。在生产应用中的酯酶的另一显著特点是它能在异相***(即油-水界面)或有机相中作用。在水相中，酯酶通常催化水解反应，而在有机相中，它却能催化酯化和转酯化反应。通过微生物酯酶的生物转化制备新型药物中间体或者去除药物消旋体的非有效成分，是一种重要的手性技术，有着非常广阔的应用前景，它可以为合成手性药物提供新的平台，为大量制备光学纯化合物提供新的方法。酶法选择性拆分消旋体化合物，具有立体专一性高，副反应少，产率高，产物光学纯度好以及反应条件温和的优点，所以是一种被广泛认可的拆分方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的酯酶BSE00077及其编码基因和应用。

本发明从一株来自海洋的芽孢杆菌(Bacillussp.)SCSIO15121中开发得到一种酯酶BSE00077及其编码基因酯酶基因bse00077，构建了含有酯酶基因bse00077的重组表达载体和基因工程菌，培养基因工程菌后获得酯酶BSE00077，其可应用于催化酯类水解反应。

本发明的第一个目的是提供一种酯酶BSE00077，其氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。

本发明的第二个目的是提供一种编码所述的酯酶BSE00077的酯酶基因bse00077。

优选，所述的酯酶基因bse00077的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。

本发明还提供一种含有所述的酯酶基因bse00077的重组表达载体。所述的重组表达载体，优选pET-28a(+)载体。

本发明还提供一种含有所述的酯酶基因bse00077的基因工程菌。所述的基因工程菌，优选大肠杆菌BL21(DE3)。

本发明的第三个目的是提供所述的酯酶BSE00077在催化酯类水解中的应用。

优选，所述的应用为酯酶BSE00077在催化乙酸苏合香酯水解生成(R)-1-苯乙醇中的应用。

本发明的第四个目的是提供所述的酯酶BSE00077在耐受正己烷和/或正庚烷环境下进行催化的应用。

本发明的酯酶基因bse00077来自深海来源的芽孢杆菌(Bacillussp.)SCSIO15121(其来源为：89°29.22′E，10°00.12′N，-3400m，pH7.8，2℃)，保存在中国科学院南海海洋研究所。本发明利用生物信息学分析方法，从基因组测序的芽孢杆菌(Bacillussp.)SCSIO15121中克隆得到酯酶基因bse00077，全长为741bp(从起始密码子到终止密码子)，其编码的酯酶BSE00077含有246个氨基酸。将酯酶基因bse00077与表达载体pET-28a(+)连接后转化大肠杆菌BL21(DE3)，培养并诱导表达后，得到了重组酯酶BSE00077。将纯化的酯酶BSE00077作为催化剂催化酯类水解反应，具有较好的稳定性，而且对部分表面活性剂及有机溶剂的具有很好的耐受性。酯酶BSE00077的特性符合洗涤剂添加剂、绿色化工业上需求，可用于洗涤剂、生物医药、化妆品和精细化工等领域。

附图说明

图1是酯酶BSE00077的SDS-PAGE电泳图。其中，M为蛋白marker，泳道1为IPTG诱导前的含有pET-28α(+)-bse00077的大肠杆菌BL21(DE3)粗蛋白，泳道2为IPTG诱导后的含有pET-28α(+)-bse00077的大肠杆菌BL21(DE3)粗蛋白，泳道3为纯化的酯酶BSE00077蛋白。

图2是酯酶BSE00077对不同侧链长度酰基的对硝基苯酚酯的特异性。

图3是pH对酯酶BSE00077活性的影响。

图4是不同pH对酯酶BSE00077的稳定性影响。

图5是温度对酯酶BSE00077活性的影响。

图6是不同温度对酯酶BSE00077稳定性的影响。

图7是酯酶BSE00077拆分乙酸苏合香酯的GC图。

图8是底物浓度对酯酶BSE00077拆分的影响。

图9是酯酶BSE00077拆分乙酸苏合香酯反应随反应时间的变化曲线。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1：酯酶基因bse00077开放阅读框边界确定及引物设计

提取芽孢杆菌(Bacillussp.)SCSIO15121的基因组DNA，经全基因组测序后，利用生物信息学手段对基因组进行基因注释，分析其中的酯酶基因，确定了其中酯酶基因bse00077的开放阅读框，其基因序列如SEQIDNO.1所示，全长为741bp(从起始密码子到终止密码子)，其编码的酯酶BSE00077的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示，共246个氨基酸。根据分析得到的酯酶基因bse00077序列，设计全长扩增引物如下：上游引物：5′-TGCTAGCCATATGAAAGTTGTGACACCAAAACC-3′(下划线为NdeI酶切位点)；下游引物：5′-AGGAAGCTTTTACCAATCGAGCTTCTCTAAAA-3′(下划线为HindIII酶切位点)。

实施例2：酯酶基因bse00077的克隆及载体构建

2.1PCR扩增

将实施例1设计的引物(上游引物：5′-TGCTAGCCATATGAAAGTTGTGACAC-CAAAACC-3′；下游引物：5′-AGGAAGCTTTTACCAATCGAGCTTCTCTAAAA-3′)送至上海生物工程有限公司合成，合成的引物使用TE缓冲液溶解成终浓度为10μM，以提取的芽孢杆菌(Bacillussp.)SCSIO15121总DNA作为DNA模板，建立如表1所示反应体系：

表1PCR反应体系

使用以下PCR扩增程序扩增酯酶基因bse00077：94℃变性5min；94℃变性1min，62℃退火30s，72℃延伸1.5min，进行30个循环；72℃延伸10min，冷却到18℃。

将PCR产物在0.8％琼脂糖凝胶中，120V电压下电泳20min，置于凝胶成像***中观察，回收750bp左右的条带。PCR产物按照胶回收试剂盒的方法进行回收，使用20μL无菌水洗脱，得到纯化回收的PCR产物。

2.2酶切

PCR产物使用以下体系进行酶切，酶切时间1.5h。酶切体系为：NdeI1μL，HindIII1μL，DNA<0.3μg，灭菌的双蒸水加至50μL。酶切后按照胶回收试剂盒方法回收得到经过双酶切的PCR产物。

质粒pET-28a(+)的双酶切：挑取含有该质粒的大肠杆菌DH5α单菌落，过夜培养。使用质粒提取试剂盒提取质粒，用NdeI和HindIII按以下体系双酶切，酶切时间1.5h。酶切体系为：NdeI1μL，HindIII1μL，DNA<0.3μg，灭菌的双蒸水加至50μL。酶切后在0.8％琼脂糖凝胶中电泳，按照胶回收试剂盒方法回收得到经过双酶切的线性pET-28a(+)载体。

上述双酶切使用的限制性内切酶为Thermo公司生产的快速内切酶，酶切后的纯化回收使用核酸纯化回收试剂盒(Magen，HipureGelPureDNAMicroKit)，质粒提取试剂盒为上海捷瑞生物工程有限公司的质粒小量制备试剂盒，操作方法按其使用说明书。

2.3连接

将经过双酶切的PCR产物和双酶切的线性pET-28a(+)载体按以下体系进行连接：双酶切PCR产物5μL，双酶切的线性pET-28a(+)载体0.5μL，T4连接酶(5U/μL)0.5μL，连接缓冲液(5×)2μL，用去离子水补足10μL；连接温度为25℃，20min。由此得到连接产物。

2.4转化及筛选

取10μL连接产物加入50μL大肠杆菌DH5α感受态细胞中，冰浴20～30min，后于42℃水浴锅热激90s，冰浴2min后加入500μLLB液体培养基，37℃200rpm转速下，孵育培养30min。取一定量的菌液涂布于含50μg/mL卡那霉素的LB平板，培养20h后挑选单菌落。单菌落于5mLLB培养基中过夜培养后提取质粒，进行双酶切验证，酶切片段与基因大小相同的即为阳性克隆。

2.5基因核苷酸序列测定

将筛选的阳性克隆送至上海美吉生物医药有限公司进行测序，测序结果与酯酶基因序列进行比对，进一步确认是将酯酶基因bse00077(其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示)***到pET-28a(+)质粒中，结果完全正确后确认得到带有酯酶基因bse00077的pET-28a(+)质粒(命名为pET-28a(+)-bse00077)，可用于进行下一步试验。

实施例3：酯酶BSE00077在大肠杆菌BL21(DE3)中的高效表达

3.1大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞制备

1.将少量大肠杆菌BL21(DE3)菌种接入5mLLB试管液中，200rpm，37℃过夜培养；

2.按1％体积比的接种量将试管中的菌液接种到200mLLB摇瓶中，200rpm，25℃过夜培养，得到原培养物；

3.将培养好的摇瓶在冰水中迅速冷却至0℃，将原培养物分装至冰预冷的离心管(50mL)，冰置数分钟；

4.4℃，4000rpm离心15min回收细胞，弃上清；

5.用冰预冷的10mL0.1M的CaCl₂重悬细胞，4℃，4000rpm离心10～15min回收细胞；

6.重复5，用10mL0.1M的CaCl₂重悬细胞，冰浴1h以上；

7.4℃，4000rpm离心10min回收细胞；

8.每50mL原培养物得到的细胞用2～3mL含15％DMSO+CaCl₂来重悬，分装于1.5mL离心管，50～100μL每管。-80℃保藏。由此得到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。

3.2转化

取实施例2中得到的pET-28a(+)-bse00077质粒0.5～1μL与50μL大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞混合，冰浴30min，于42℃水浴锅热激90s，冰浴2min后加入500μLLB液体培养基，37℃200rpm培养1h。培养物离心后涂布50μg/mL的卡那霉素LB平板，培养过夜20h后挑选单菌。由此得到含有pET-28α(+)-bse00077的大肠杆菌BL21(DE3)。

实施例4：酯酶BSE00077的表达和纯化

4.1蛋白诱导

将含有pET-28a(+)-bse00077的大肠杆菌BL21(DE3)在LB培养基中培养至OD₆₀₀为0.85左右，加IPTG至终浓度0.2mM，22℃培养18h。300mL菌液4000rpm，4℃离心20min，收集菌体，用30mL(50mM，pH7.4)PBS缓冲液重悬菌体，超声400w，超5s，停5s，破碎10min分钟，离心，收集上清。

4.2酯酶BSE00077的纯化与SDS-PAGE电泳

用镍离子亲和层析柱纯化4.1中收集的上清，具体实施方案如下：使用20mM的咪唑洗脱5个柱体积，40mM咪唑洗脱20～30个柱体积，最后使用3.5mL300mM咪唑洗脱，收集最后的2.5mL洗脱液。用脱盐柱SephadexG25进行脱盐，具体操作方法参照GE公司的操作手册进行。将纯化的表达产物进行SDS-PAGE凝胶电泳，得到纯化的酯酶BSE00077(图1)，纯化的蛋白大小约30.2kD，符合理论预期。

4.3酯酶BSE00077活性测定

酯酶BSE00077活力测定采用对硝基苯酚酯，具体方法如下：①用DMSO配制200mM的对硝基苯酚酯溶液；②在0.5mL反应体系中加入495μLPBSbuffer(50mM，pH8.0)，2μL对硝基苯酚酯溶液，3μL酯酶BSE00077纯酶液(0.0645μg/μL)；③38℃下，反应2min后，加入0.5mL正丙醇终止反应，于405nm测定吸光度。

酶活单位定义：1min内水解对硝基苯酚酯，释放1μM对硝基苯酚所需的酶量定义为一个酶活单位。

实施例5：酯酶BSE00077的酶学性质

5.1水解不同侧链长度的对硝基苯酚酯

按照4.3的测定条件，比较酯酶BSE00077水解不同长度酰基的对硝基苯酚酯C₂-C₁₂，结果如图2。说明酯酶BSE00077对长链对硝基苯酚酯特异性差，而对于短链长度的对硝基苯酚酯的作用效果较好，最佳的底物是C₄，即对硝基苯酚丁酸酯。

5.2最适pH和pH稳定性

配制不同的缓冲溶液，这些缓冲溶液具有不同的pH，如表2所示，其浓度均为50mM。

表2不同pH的缓冲体系

将4.3中测定条件所述的缓冲液(PBS缓冲液)按照表2中的缓冲溶液分别进行替换，测定不同pH的缓冲溶液中重组酯酶BSE00077的酶活力，底物为对硝基苯酚丁酸酯。pH对重组酯酶BSE00077活性的影响结果见图3。在pH8.0的PBS缓冲溶液中时，酯酶BSE00077的酶活性最高，在pH7.0-8.5之间的缓冲溶液中有较高的酶活性；当pH低于7或高于9时，其活性迅速降低。酯酶BSE00077在4℃不同pH的缓冲溶液中的稳定性见图4。pH在8.0，9.0时酶活性较稳定，处理12h后残余活性分别为67％、71％。而在过酸过碱条件下，酶活丧失则较为明显。

5.2最适温度和温度稳定性

使用50mM的PBSpH8.0作为缓冲液，对硝基苯酚丁酸酯作为底物，按照4.3中的反应体系，在不同温度下测定酶活。测得酯酶BSE00077催化水解对硝基苯酚丁酸酯的最适温度为38℃(图5)。在25-42℃间的酶活力达74.50％以上，温度大于42℃时酶活性急剧下降。将酯酶BSE00077在不同温度(25-50℃)下预处理，间隔一定时间取出按4.3中测定方法测酶活，结果见图6。酯酶BSE00077在低于40℃时，酶活保持较高，处理12h后残余酶活仍保持50％以上；40℃处理12h后残余酶活为46.10％；随着处理温度的升高，酯酶残余酶活力逐渐下降，当温度高于45℃时酶活急剧降低，在50℃处理1h后，残余酶活力基本丧失(图6)，说明酯酶BSE00077在低于40℃时稳定性较好。

5.3酯酶BSE00077水解对硝基苯酚酯动力学参数

在最适温度38℃和最适pH8.0条件下，以不同对硝基苯酚酯为底物并改变底物浓度，按照4.3的方法测定酶的反应速率的变化，采用Lineweaver-Burk双倒数作图，求出反应的Km和Vmax。测定结果见表3。

表3酯酶BSE00077水解对硝基苯酚酯的动力学参数

由表3中的结果可看出，酯酶BSE00077水解对硝基苯酚丁酸酯的Km值最小，Kcat最大，说明对丁酸酯的亲和力和水解效率最高。

5.4金属离子、表面活性剂对酯酶BSE00077活性的影响

按照表4中的金属离子或表面活性剂种类和对应的终浓度，在反应体系PBS(pH8.0)缓冲溶液中加入金属离子或表面活性剂处理酯酶BSE00077，反应条件为38℃，孵育1h，以未添加任何离子或表面活性剂的反应体系中的酶活为100％作为对照，再按4.3测定方法(以对硝基苯酚丁酸酯作为底物)测定相对酶活。金属离子对酯酶BSE00077酶活性的影响见表4。与对照相比，Ca²⁺对酯酶BSE00077催化对硝基苯酚丁酸酯的活力有激活作用，10mM的Ca²⁺浓度作用下酶的活力高达153.11％，而且低浓度的Ca²⁺比高浓度的激活作用更明显。低浓度的Mg²⁺、K⁺对酯酶BSE00077酶活无影响，但增加浓度会降低酶活。10mM的Cu²⁺、Ni²⁺、Zn²⁺、Mn²⁺对酯酶BSE00077酶活有抑制作用。表面活性剂对酯酶BSE00077酶活性的影响见表4。在0.1％和0.5％两个质量浓度下，TPP和Tween-80对酶活影响不大，而0.1％浓度的Tween-20对酶活的抑制作用比上述两种表面活性剂影响大，并且随着浓度增加抑制作用增强。SDS、SDBS、TritonX-100在0.1％浓度下对酯酶BSE00077酶活具有强抑制性。

表4金属离子与表面活性剂对酯酶BSE00077活力的影响

a表示未检测

5.5有机溶剂对酯酶BSE00077活性的影响

按照表5中所示有机溶剂种类和终浓度，在反应体系PBS(pH8.0)缓冲溶液中加入有机溶剂处理酯酶BSE00077酶液，反应条件为38℃，孵育1h，以未加入有机溶剂的反应体系中酯酶BSE00077活性为100％作为对照，再按照4.3的测定方法(以对硝基苯酚丁酸酯作为底物)测定相对酶活，结果如表5所示。在10％的浓度下，正庚烷对酯酶BSE00077有激活作用，正己烷、正辛烷、甲苯、二甲苯、二甲基亚砜无明显影响，而乙醇、丙酮、正丙醇和三氯甲烷对酯酶BSE00077有抑制作用。在20％浓度下，正己烷和正庚烷对酶活无影响，但是其他溶剂使酶活性减少。在高浓度(50％)下，酯酶BSE00077在正己烷、正庚烷、甲苯和二甲苯仍保持较高的酶活，最高达为86.25％。以上结果说明酯酶BSE00077能够耐有机溶剂，尤其对正己烷和正庚烷的耐受性较好。

表5有机溶剂对酯酶BSE00077活性的影响

a表示检测不到活性，b表示未检测

实施例6：酯酶BSE00077拆分乙酸苏合香酯

6.1有机溶剂对酯酶BSE00077拆分乙酸苏合香酯的影响

在反应体系PBS(pH8.0)缓冲溶液中加入终浓度为0.26mg/mL酯酶BSE00077纯酶，50mM乙酸苏合香酯底物，10％(v/v)表6中的有机溶剂，以未加有机溶剂为对照，在38℃下反应3h，用气相色谱手性柱检测，根据峰面积计算底物对映体过量值(ee_s)、产物对映体过量值(ee_p)和转化率(C)，结果见表6。

公式1：公式2：公式3：式中：A_S和A_R分别表示S-乙酸苏合香酯和R-乙酸苏合香酯的峰面积，B_S和B_R分别表示产物(S)-1苯乙醇和(R)-1-苯乙醇峰面积，A₀和A分别表示反应前和反应后乙酸苏合香酯的峰面积。

表6有机溶剂对酯酶BSE00077拆分乙酸苏合香酯的影响

从表6中可看出有机溶剂对酯酶BSE00077的立体选择性影响不大，但能一定程度上提高转化率。以甲苯为溶剂的立体选择性最高，以烷类为溶剂的立体选择性次之，但在甲苯中的转化率最低，烷类的转化率较好。在低浓度正庚烷中酯酶BSE00077的活性得到激活，因此后续的实验采用正庚烷为溶剂。图7为反应体系中添加10％(v/v)正庚烷组的酯酶BSE00077拆分乙酸苏合香酯的GC图，在酯酶BSE00077的催化作用下，乙酸苏合香酯绝大部分的转化为(R)-1-苯乙醇。

6.2反应温度和pH对酯酶BSE00077拆分乙酸苏合香酯的影响

在反应体系PBS(pH8.0)缓冲溶液中加入终浓度为0.26mg/mL酯酶BSE00077纯酶，50mM乙酸苏合香酯底物，10％(v/v)正庚烷为溶剂，反应时间为6h。在不同温度下测定酯酶BSE00077拆分乙酸苏合香酯的立体选择性，结果见表7。ee_s和C随着温度升高先增加后减少，在25-40℃之间，ee_p降低不明显。当温度高于40℃ee_s、ee_p和C显著降低，这与高温影响酶的活性有关。

在不同pH的反应体系中加入终浓度为0.26mg/mL酯酶BSE00077纯酶，50mM乙酸苏合香酯底物，10％(v/v)正庚烷为溶剂，30℃反应6h。测定酯酶BSE00077拆分乙酸苏合香酯的立体选择性，结果见表7。在pH6.0时，ee_p最高，但转化率最低，只有9.2％。在中性和碱性条件下，ee_p逐渐降低。综合考虑，优化后的条件为30℃，pH7.0PBS缓冲液。

表7反应温度与pH对酯酶拆分乙酸苏合香酯的影响

a表示PBS缓冲液，b表示Tris/HCl缓冲液

6.3表面活性剂对酯酶BSE00077拆分乙酸苏合香酯的影响

在优化条件下(30℃，pH7.0PBS缓冲液)，在反应体系加入终浓度为0.26mg/mL纯酶，50mM乙酸苏合香酯底物，0.1％(w/v)表8中的表面活性剂(三聚磷酸钠(TPP)、Tween-20、Tween-80)，反应6h后，样品用于GC检测，结果见表8。从表8中可看出，与对照相比，三种表面活性剂对酯酶BSE00077拆分乙酸苏合香酯无明显影响。

表8表面活性剂对酯酶拆分乙酸苏合香酯的影响

6.4底物浓度对酯酶BSE00077拆分的影响

在优化条件下(30℃，pH7.0PBS缓冲液)，在反应体系加入终浓度为0.26mg/mL酯酶BSE00077纯酶，10-100mM乙酸苏合香酯底物，10％(v/v)正庚烷为溶剂，反应6h后，样品用于GC检测，结果见图8。从图8中可看出，随着底物浓度增加，产物对映体过量值ee_p缓慢增加，但是底物对映体过量值ee_s和转化率C会迅速下降。说明较高浓度的底物会抑制酶的反应，使转化率下降。

6.5反应时间对酯酶BSE00077拆分乙酸苏合香酯的影响

在优化条件下(30℃，pH7.0PBS缓冲液)，在反应体系加入终浓度为0.26mg/mL酯酶BSE00077纯酶，50mM乙酸苏合香酯底物，10％(v/v)正庚烷为溶剂，每间隔1h取出500μL，用乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠除水，加入十二烷作为内标，用气相色谱手性柱检测，根据峰面积计算底物对映体过量值(ee_s)、产物对映体过量值(ee_p)、转化率(C)和选择性(E)。不同反应时间酯酶BSE00077拆分乙酸苏合香酯的结果见表9和图9。

公式4：

从表9、图9中可看出，随着时间的延长，ee_s和C逐渐升高，经过3h反应，转化率基本达到最高。这可能是随着反应的进行，生成的乙酸降低反应体系中的pH值，从而影响酶的活性，使得转化率不再增加。3h之后，酯酶BSE00077的选择性逐渐降低。

表9不同反应时间酯酶BSE00077拆分乙酸苏合香酯的变化

Claims (10)

1.一种酯酶BSE00077，其特征在于，其氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。

2.一种编码权利要求1所述的酯酶BSE00077的酯酶基因bse00077。

3.根据权利要求2所述的酯酶基因bse00077，其特征在于，所述的酯酶基因bse00077的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。

4.一种含有权利要求2所述的酯酶基因bse00077的重组表达载体。

5.根据权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于，所述的重组表达载体为pET-28a(+)载体。

6.一种含有权利要求2所述的酯酶基因bse00077的基因工程菌。

7.根据权利要求6所述的基因工程菌，其特征在于，所述的基因工程菌为大肠杆菌BL21(DE3)。

8.权利要求1所述的酯酶BSE00077在催化酯类水解中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的应用为酯酶BSE00077在催化乙酸苏合香酯水解生成(R)-1-苯乙醇中的应用。

10.权利要求1所述的酯酶BSE00077在耐受正己烷和/或正庚烷环境下进行催化的应用。