CN105541947A

CN105541947A - 拮抗tlr7/8及tlr9活化的药物分子及用途

Info

Publication number: CN105541947A
Application number: CN201610015280.2A
Authority: CN
Inventors: 李彦; 刘万成; 王宁; 杨希川; 刘鑫
Original assignee: First Affiliated Hospital of TMMU
Current assignee: First Affiliated Hospital of TMMU
Priority date: 2016-01-11
Filing date: 2016-01-11
Publication date: 2016-05-04

Abstract

本发明涉及一种拮抗TLR7/8及TLR9活化的药物分子，该药物分子为包含的序列如SEQ？ID？NO:1所示的硫代修饰分子结构。本发明所述药物分子能拮抗TLR7/8及TLR9活化，抑制TNF，IL等促炎因子的释放,达到抑炎效果；所述药物分子与生理盐水配制成注射剂，采用皮下注射方式进行治疗，可显著缓解银屑病的病理损伤。

Description

拮抗TLR7/8及TLR9活化的药物分子及用途

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种拮抗TLR7/8及TLR9活化的药物分子及用途。

背景技术

银屑病俗称牛皮癣，是临床常见的一种慢性炎症性皮肤病，青壮年者发病多，病程较长，易复发，呈进行性皮损与角质增厚。临床表现以红斑、鳞屑为主，全身均可发病。

虽然早期认识到该病是一种与遗传、感染等有关的自身免疫性疾病。但具体致病机制不清楚，致使目前尚无特效药，主要采用非特异性药物治疗，以软化角质层的对症策略，或辅助使用少量激素的治疗方案。副作用较大，且疗效不理想。

近年来，诸多报道逐步表明，银屑病的致病机制主要是由于自身免疫发生紊乱，皮肤巨噬细胞和T淋巴细胞等免疫细胞上的Toll样受体(TLRs)家族中的TLR7/8、9，在识别自身破损细胞及微生物中的核酸片段后，引发过度炎症反应，导致自身表皮细胞进一步损伤，继而又促使淋巴细胞聚集和表皮角化，由此，反复循环使其不断恶化。

最近，国外采用特殊抗体来对抗炎症因子，如：抗白介素(IL)和肿瘤坏死因子(TNF)的抗体，取得初步疗效。但是，制备工艺较为复杂，价格昂贵。

如何从TLRs活化的源头来阻断银屑病的发生和发展，是本领域技术人员关注的热点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种拮抗TLR7/8及TLR9活化的药物分子及用途。所述药物分子能拮抗TLR7/8及TLR9活化，抑制TNF，IL等促炎因子的释放,达到抑炎效果；所述药物分子与生理盐水或磷酸缓冲液配制成注射剂，采用皮下注射方式进行治疗，可显著缓解银屑病的病理损伤。

本发明的技术方案是：

拮抗TLR7/8及TLR9活化的药物分子，该药物分子为包含的序列如SEQIDNO:1所示的硫代修饰分子结构。

该分子的结构为T*G*G*C*G*C*G*C*A*C*C*C*A*C*G*G*C*C*T*G，其中*为硫代修饰。

上述药物分子在用于制备治疗银屑病药物中的用途，所述药物为注射剂，所述注射剂由上述药物分子和生理盐水组成，所述的药物分子和生理盐水的重量：体积比为1～2:3～5。

本发明所述的注射药物的制备过程：按上述核苷酸序列，通过普通化学合成、硫代修饰并纯化的方法获得，剂型为(水溶性)粉末，可单独，也可辅以甘露醇膨化剂等混合后，进行真空包装，可保存于室温或4℃冰箱中。

使用时，采用普通注射用液体(如：生理盐水，等)稀释，通过注射器在患者皮下进行注射给药。可按每天一次,可多点注射，每点10～30μg/300μl,每两周为一个疗程，实际疗程次数可按临床具体情况而定。

由于本发明所述注射剂的作用靶点与治疗位置明确、效果显著、安全性好的优点，能显著抑制促炎因子的释放，改善银屑病的病理损伤，可作为治疗银屑病的药物，具有迫切的社会健康需求和广泛的应用前景。

申请人长期从事Toll样家族相关先天免疫研究，深入的研究TLR9阻断剂c41分子的作用机制及其适应症，通过实验验证，该分子不仅可以阻断TLR9介导的炎症活化，同时能拮抗TLR7/8介导的活化；并且在银屑病动物模型上，获得了显著的疗效。而且，c41分子可通过胞内自身代谢，不影响细胞的再次应答能力，这使得c41分子既能在疾病活动期起抑制作用，又不会破坏机体正常免疫。经初步安评和药学研究，证实该分子稳定性好，无毒副作用。由此，c41分子，即本发明所述药物分子，是一种从银屑病发病的起始环节阻断炎症反应，从而到达治疗效果的药物分子，它势必为广大银屑病患者带来希望，积极推动临床治疗发展。

此外，银屑病病理损伤主要发生在表皮、真皮及皮下。通过皮下注射能够快速使药物进入患处，阻止聚集的免疫细胞的活化，药效更佳。

本发明所述重量：体积，当重量单位为μg，体积单位则对应为μl；当重量单位为mg，体积单位则对应为ml；当重量单位为Kg，体积单位则对应为l。

附图说明

图1为所述药物抑制巨噬细胞TLR7/8，9活化；

图2为所述药物改善银屑病的病理损伤(X20,HE).其中a为安慰剂组，b为c41治疗组。

具体实施方式

下面的实施例可详细地说明本发明，但不以此限制本发明。

实施例1：注射剂制备

药物名称：c41分子

序列结构：TGGCGCGCACCCACGGCCTG

修饰结构：

(*为硫代修饰)

制备方式:化学合成,委托上海生工公司。产量，采用HPLC纯化，抽取真空，采用玻璃瓶保存于室温,按330μg/瓶(干粉)包装。

使用配置：取一小瓶，注入生理盐水600μl,稀释混匀，备用。

实施例2：c41分子抑制TLR7/8和9的活化鉴定

2.1主要材料、试剂与设备：

1)细胞株：RAW264.7(ATCC，USA.)。

2)细胞培养基：DMEM(Gibco,Inc.，USA)。

3)Elisa试剂盒：抗鼠TNF-a(eBioscience,Inc.,USA)。

4)细胞培养箱：FORMA3111.

5)酶标仪：全波长多功能酶标仪(ThermoScientific,USA).

2.2实验方法：将RAW264.7细胞稀释至1×10⁶/mL，加入96孔板(200μL/孔)，置37℃，5％CO₂培养箱培养2h后，加入TLR7/8激动剂R848(5μl，终浓度100ng/ml)为实验一组；加入TLR9激动剂CpG-ODN18265μl(5μl，终浓度4μM)为实验二组，以上各组均设8复孔。然后，各组分出4复孔，加培养液5μl,分别作为安慰剂一组、二组；各组剩余的4复孔，分别加入本发明所述药物c41分子5μl(终浓度4μM)作为治疗一组、二组。继续培养24h后，收集上清，进行Elisa检测，获取TNF-a浓度。

2.3实验结果：安慰剂一组，TLR7/8正常活化，刺激RAW264.7细胞释放大量TNF-a，安慰剂二组，TLR9正常活化，刺激RAW264.7细胞释放大量TNF-a；治疗一组和二组，在本发明所述药物c41分子作用下，RAW264.7细胞释放TNF-a水平受到显著抑制(P<0.01),所以,该药物能有效抑制银屑病的关键靶标，遏制过度炎症反应。如附图1所示。

实施例3：皮下注射治疗银屑病及其疗效。

3.1主要材料、试剂与设备：

1)动物：Balb/c(华阜康生物科技股份有限公司，中国)。

2)建模药物：咪喹莫特(明欣药业，中国)。

3)治疗药物：本发明所述注射剂(详见实施例1)

3.2实验方法：

1)小鼠剃毛后，小鼠剃毛后，咪喹莫特背部建立银屑病模型，20mg/cm2，每天1次，持续6天。

2)分组：安慰剂组，药物治疗组各5只鼠。

3)给药：安慰剂组：皮下只注射生理盐水(NS)，100μl/20g体重；治疗组：本发明所述C41药物用NS稀释为550μg/ml皮下注射C41分子100μl/20g体重。

4)各组从第一天开始治疗，持续6天。

5)6天后取各组皮肤组织，HE染色，病理观察。

3.3实验结果：

安慰剂组，皮下炎性细胞浸润，表皮增厚，角质化明显；而治疗组，无明显的炎症细胞浸润，表皮未见角化，说明，本发明所述注射剂能够有效遏制银屑病的病理损伤。如附图2所示。

Claims

1.一种拮抗TLR7/8及TLR9活化的药物分子，其特征在于：该药物分子为包含的序列如SEQIDNO:1所示的硫代修饰分子结构。

2.根据权利要求1所述的药物分子，其特征在于：所述分子的结构为T*G*G*C*G*C*G*C*A*C*C*C*A*C*G*G*C*C*T*G，其中*为硫代修饰。

3.权利要求1-2任一所述的药物分子在用于制备治疗银屑病药物中的用途。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所使用药物为注射剂。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：所述注射剂由权利要求1或2所述的药物分子和生理盐水或磷酸缓冲液组成。

6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于：所述的药物分子和生理盐水的重量：体积比为1～2:3～5。