CN105535407A - 治疗胸部肿瘤放化疗后晚期肺间质病变的中药组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了治疗胸部肿瘤放化疗后晚期肺间质病变的中药组合物及其制备方法,该治疗肺间质病变的中药组合物由以下重量百分比的原料组分制备而成:黄芪、丹参各14.30%,沙参、杏仁、大贝母、鬼剑羽、赤芍、川芎各10.7%,五味子7.14%。本发明的中药组合物减轻胸部肿瘤放化疗后晚期肺间质病变程度,改善患者生存质量,无毒副作用,无不良反应。
Description
技术领域
本发明涉及中药组合物及制备方法,具体涉及一种治疗胸部肿瘤放化疗后晚期肺间质病变的中药组合物及其制备方法。
背景技术
胸部肿瘤包括食管癌、贲门癌、纵膈肿瘤、肺癌和乳腺癌等,该类肿瘤发病率高,预后差,病死率高。临床常见的治疗方法有化学药物治疗和放射治疗,许多化学药物具有肺毒性,可引起肺间质病变的化疗药物有环磷酰胺(CTX)、白消胺、卡莫司汀(BCNU)、博莱霉素(平阳霉素)、甲氨喋呤(MTX)、紫杉醇、多西紫杉醇、NVB、拓朴替康、伊立替康、健择、易瑞沙等,以博来霉素、甲氨蝶呤、环磷酰胺及白消胺为常见。放射治疗时由于正常肺组织受到过量的放射线照射而产生放射性损伤,严重的晚期可发展为肺间质病变,使肿瘤患者生活质量下降,重则致命。肺间质病变早期常表现为肺泡炎,肺泡内有大量炎症细胞浸润,随后在炎症细胞的参与下,各种细胞因子和炎性介质大量释放,扩大了组织损伤,大量的血液细胞成分和血浆渗出到肺泡、肺泡间隔和血管、支气管周围,形成肺水肿。晚期肺间质病变以两肺间质纤维化伴蜂窝状改变为特征,主要累及肺间质、肺泡和/或细支气管,在病理学上主要改变是肺泡结构破坏、纤维化伴蜂窝肺形成、瘢痕性成纤维化病灶、斑片状分布、侵犯边缘性腺泡或小叶为主。尤其博莱霉素引起的肺损害表现更为典型,早期肺泡壁毛细血管通透性增加,肺泡及肺间质炎症,继而肺泡及间质纤维素渗出,晚期肺泡间质广泛纤维化,小动脉闭塞。临床表现为进行性加重的气短、乏力、咳嗽,尤其是气短和劳力性呼吸困难并进行性加重,呼吸浅速及动脉血氧含量下降明显。对于抗肿瘤药物及放射治疗引起的晚期肺间质病变,目前尚缺乏肯定有效的治疗方法及药物。
肺间质病变的发生发展与细胞因子和激酶激活了肺组织细胞信号转导通路有关,其中TGF-β/MAPK信号通路的激活可能发挥了重要作用。中医认为胸部肿瘤放化疗后晚期肺间质病变主要病位在血气屏障,该屏障包括肺泡屏障和血管屏障两部分,是氧气向血管内弥散必经的途径。著名中医学家王灿晖教授就认为气虚阴伤,肺络瘀阻,是放化疗后晚期肺间质病变的基本病理。
发明内容
本发明的目的在于:提供一种治疗胸部肿瘤放化疗后晚期肺间质病变的中药组合物及其制备方法,取材广泛,成本低廉,效果显著,无毒副作用。
本发明的技术解决方案是:该治疗肺间质病变的中药组合物由以下重量百分比的原料组分制备而成:黄芪、丹参各14.30%,沙参、杏仁、大贝母、鬼剑羽、赤芍、川芎各10.7%,五味子7.14%。
其中,上述治疗肺间质病变的中药组合物的制备方法包括以下步骤:
(1)筛选黄芪200克备用,沙参、杏仁、大贝母各150克备用,丹参200克备用,鬼剑羽、赤芍、川芎各150克备用;五味子100克备用;
(2)提取:将黄芪、沙参、杏仁、大贝母四味药物加水煮沸40分钟,用水抽提2次,每次3小时,水加入量为浸没药材,温度控制在80-85摄氏度,将滤液移入冷热缸进行浓缩,得稠浸膏1;将丹参、鬼剑羽、赤芍、川芎四味药物加水煮沸40分钟,用水抽提2次,每次3小时,水加入量为浸没药材,温度控制在80-85摄氏度,将滤液移入冷热缸进行浓缩,得稠浸膏2;五味子中加入质量浓度70%乙醇浸没药材,浸渍48小时后过滤,收集滤液,将滤液通过注入浓缩罐进行真空浓缩,温度控制在70摄氏度,真空度0.08MPa,浓缩得稠膏状3;
(3)混合:将步骤(2)得到的稠浸膏1、2和3移入料斗,用三维混合机进行混合,转速为10转/分,混合时间为10分钟,得到养肺中药组合物。
其中,上述养肺中药组合物制成口服液,或制成胶囊;制成口服液的方法是:将所述养肺中药组合物300ml放置容器中加灭菌蒸馏水1200ml,煮沸后继续20分钟,沉淀,过滤,取滤液真空浓缩为600ml,分瓶灌装,每瓶200毫升,灭菌密封;制成胶囊的方法是:将所述养肺中药物组合物移入容器,铺成薄薄一层,放入真空干燥箱干燥,温度为60-70摄氏度,干燥24小时,将干燥的养肺中药组合物移入粉碎机,用80目筛网进行粉碎,灭菌,用胶囊充填机装填,得养肺胶囊,胶囊灌装完用胶囊抛光机进行抛光,每粒胶囊0.25g,包装;其中,转盘转速为30-40转/分,真空压力泵0.016MPa。
其中,上述养肺中药组合物的服用方法是:口服液每日3次每次20ml,胶囊每日3次每次3粒。
本发明的优点是:根据血气屏障的组成特点,根据中医“白色入肺”的理论,选用黄芪、沙参、杏仁、大贝母白色药物组成补气养阴药物作用于肺泡屏障;根据“红色入血”的理论,选用丹参、鬼剑羽、赤芍、川芎红色药物组成活血化瘀药物作用于血管屏障,补气养阴药物和活血化瘀药物重量相等,并且采用具有收敛固涩作用的黑色药物五味子膏调和重量相等的补气养阴药与活血化瘀药物,使其完美结合;补气药温而不燥,扶阳而不碍阴;养阴药甘寒清轻,滋而不腻,寒而不滞;活血化瘀药,化瘀行血,通利脉道,能畅气行滞,增强全方灵动之性;五味子调和,收敛血气屏障;经临床使用,获得了良好的临床效果;经过动物实验的研究,对其防治胸部肿瘤放化疗后晚期肺间质病变的机理有了一定的认识,阐明了其作用机理,有望开发为一种防治胸部肿瘤放化疗后晚期肺间质病变的新药。
附图说明
图1为试验例2的养肺药物对化疗药物肺间质病变晚期大鼠肺组织p-MEK1/2蛋白表达的影响。
图2为试验例2的养肺药物对化疗药物肺间质病变晚期大鼠肺组织p-ERK1/2表达的影响。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步说明本发明的技术解决方案,实施例不能理解为是对技术方案的限制。
实施例1:依以下步骤制备治疗肺间质病变的中药组合物的口服液
(1)筛选黄芪200克备用,沙参、杏仁、大贝母各150克备用,丹参200克备用,鬼剑羽、赤芍、川芎各150克备用;五味子100克备用;
(2)提取:将黄芪、沙参、杏仁、大贝母四味药物加水煮沸40分钟,用水抽提2次,每次3小时,水加入量为浸没药材,温度控制在80摄氏度,将滤液移入冷热缸进行浓缩,得稠浸膏1;将丹参、鬼剑羽、赤芍、川芎四味药物加水煮沸40分钟,用水抽提2次,每次3小时,水加入量为浸没药材,温度控制在80摄氏度,将滤液移入冷热缸进行浓缩,得稠浸膏2;五味子中加入质量浓度70%乙醇浸没药材,浸渍48小时后过滤,收集滤液,将滤液通过注入浓缩罐进行真空浓缩,温度控制在70摄氏度,真空度0.08MPa,浓缩得稠膏状3;
(3)混合:将步骤(2)得到的稠浸膏1、2和3移入料斗,用三维混合机进行混合,转速为10转/分,混合时间为10分钟,得到养肺中药组合物;
(4)口服液:将步骤(3)的养肺中药组合物300ml放置容器中加灭菌蒸馏水1200ml,煮沸后继续20分钟,沉淀,过滤,取滤液真空浓缩为600ml,分瓶灌装,每瓶200毫升,灭菌密封。
实施例2:依以下步骤制备治疗肺间质病变的中药组合物的胶囊
(1)筛选黄芪200克备用,沙参、杏仁、大贝母各150克备用,丹参200克备用,鬼剑羽、赤芍、川芎各150克备用;五味子100克备用;
(2)提取:将黄芪、沙参、杏仁、大贝母四味药物加水煮沸40分钟,用水抽提2次,每次3小时,水加入量为浸没药材,温度控制在82.5摄氏度,将滤液移入冷热缸进行浓缩,得稠浸膏1;将丹参、鬼剑羽、赤芍、川芎四味药物加水煮沸40分钟,用水抽提2次,每次3小时,水加入量为浸没药材,温度控制在82.5摄氏度,将滤液移入冷热缸进行浓缩,得稠浸膏2;五味子中加入质量浓度70%乙醇浸没药材,浸渍48小时后过滤,收集滤液,将滤液通过注入浓缩罐进行真空浓缩,温度控制在70摄氏度,真空度0.08MPa,浓缩得稠膏状3;
(3)混合:将步骤(2)得到的稠浸膏1、2和3移入料斗,用三维混合机进行混合,转速为10转/分,混合时间为10分钟,得到养肺中药组合物;
(4)胶囊:将步骤(3)养肺中药物组合物移入容器,铺成薄薄一层,放入真空干燥箱干燥,温度为60摄氏度,干燥24小时,将干燥的养肺中药组合物移入粉碎机,用80目筛网进行粉碎,灭菌,用胶囊充填机装填,得养肺胶囊,胶囊灌装完用胶囊抛光机进行抛光,每粒胶囊0.25g,包装;其中,转盘转速为30转/分,真空压力泵0.016MPa。
实施例3:依以下步骤制备治疗肺间质病变的中药组合物的片剂
(1)筛选黄芪200克备用,沙参、杏仁、大贝母各150克备用,丹参200克备用,鬼剑羽、赤芍、川芎各150克备用;五味子100克备用;
(2)提取:将黄芪、沙参、杏仁、大贝母四味药物加水煮沸40分钟,用水抽提2次,每次3小时,水加入量为浸没药材,温度控制在85摄氏度,将滤液移入冷热缸进行浓缩,得稠浸膏1;将丹参、鬼剑羽、赤芍、川芎四味药物加水煮沸40分钟,用水抽提2次,每次3小时,水加入量为浸没药材,温度控制在85摄氏度,将滤液移入冷热缸进行浓缩,得稠浸膏2;五味子中加入质量浓度70%乙醇浸没药材,浸渍48小时后过滤,收集滤液,将滤液通过注入浓缩罐进行真空浓缩,温度控制在70摄氏度,真空度0.08MPa,浓缩得稠膏状3;
(3)混合:将步骤(2)得到的稠浸膏1、2和3移入料斗,用三维混合机进行混合,转速为10转/分,混合时间为10分钟,得到养肺中药组合物;
(4)片剂:步骤(3)所得养肺中药组合物经干燥、压片,得片剂。
试验例1:养肺中药组合物抑制化疗后大鼠晚期肺间质病变的作用
1材料
1.1动物:选用SPF级SD大鼠,体重200±20g,雌雄各半,购自南京医科大学实验动物中心。
1.2药品
养肺药物:由黄芪、沙参、丹参、川芎等组成,煎制浓缩为含生药0.675g/ml和1.35g/ml的口服液,由南京中医药大学中医治法实验室制备,中药饮片由南京药业股份有限公司提供。
***片:0.75mg/片,浙江仙琚制药股份有限公司生产,用蒸馏水配制成0.0000405g/ml的溶液。
博莱霉素:15mg/支,购自南京医科大学附属淮安第一医院药房,由日本化药株式会社生产。
1.3实验仪器
石蜡切片机:德国Leica公司生产。
光学显微镜:日本Olympus公司生产。
全自动图像获取***:OlympusDP71,日本Olympus公司生产。
1.4实验试剂:兔抗大鼠MEK1/2、ERK1/2、CTGF、TGF-β1多克隆抗体,购自武汉博士德生物技术有限公司。
2实验方法
2.1动物分组:大鼠常规适应性饲养3d后,随机分为5组:假手术组、模型组、***组、养肺药物小剂组、养肺药物大剂组,每组12只。
2.2模型制备:按文献方法制备模型,将博莱霉素用生理盐水配制成5mg/ml浓度,10%水合氯醛0.3ml/100g麻醉大鼠后,颈部皮肤消毒,剪去鼠毛,颈部行正中纵行切口,分离暴露气管,经气管软骨环间隙向心端穿刺并注入博莱霉素5mg/kg,立即将动物直立并充分旋转,使药液在肺内分布充分、均匀,然后缝合颈部皮肤;假手术组大鼠在同样麻醉条件下气管内注入等容积生理盐水;各组大鼠在相同条件下自由饮水、摄食,保持自然光照,观察并记录大鼠的活动、进食、体重等一般情况。
2.3给药方法:造模术后第2天开始每天灌胃给药,假手术组和模型组给予蒸馏水1ml/100g体重;***组给予等容积***蒸馏水溶液0.000405g/Kg·d;养肺药物小剂组给予等容积养肺药物蒸馏水溶液6.75g/Kg·d,养肺药物大剂组给予等容积养肺药物蒸馏水溶液13.5g/Kg·d,每日灌胃1次,连续给药28天。
2.4标本采集:造模及给药后饲养28天,以10%水合氯醛0.3ml/100g麻醉大鼠,颈动脉取血并处死大鼠,打开胸腔取出肺脏,摘除气管、肺门***等组织,左肺用冰盐水冲洗3遍,用滤纸吸干肺脏表面血液及水液;行10%的中性甲醛溶液固定,包埋切片,常规脱蜡,行Masson三色染色,观察肺间质病变程度,免疫组化SABC法检测肺组织MEK1/2、ERK1/2、CTGF、TGF-β1的表达。
3.数据统计:所有数据均以均数±标准差表示,采用SPSS17.0统计软件分析,多组间采用单因素方差分析。
4.实验结果
4.1一般情况观察:博莱霉素造模大鼠当天出现尾巴及四肢发凉,尾静脉呈黑紫色,聚群及耸毛现象较为明显,皮毛失去光泽,食量减少,逐渐消瘦,活动减少,各组大鼠3天后症状逐步改善,至第7天基本消失;模型组和***组大鼠体重均减轻,至第18~21天逐步恢复,***组大鼠体重减轻更为明显;假手术组则未见明显的活动减少、食量减少及体重减轻;养肺药物大剂组和养肺药物小剂组活动减少、食量减少及体重减轻均较模型组轻,养肺药物大剂组和养肺药物小剂组二组比较未见明显差异;模型组和***组大鼠各死亡3只,养肺药物小剂组死亡2只,养肺药物大剂组死亡1只。
4.2肺组织病理观察
4.2.1肉眼观察结果:假手术组肺组织结构正常,双肺呈粉红色,表面光滑,质地柔软,弹性良好;模型组见肺组织体积缩小,表面有片状凹凸不平的苍白灶,也有个别灰黑色病灶,弹性降低,质地较硬;***组有不同程度的苍白灶,但较模型组明显减少,弹性较强,质地较柔软,与假手术组有明显差异;养肺药物组接近于假手术组,未见明显改变,相比较养肺药物大剂组较养肺药物小剂组更接近于假手术组。
4.2.2Masson三色染色光镜下观察结果:假手术组大鼠肺组织含有少量胶原纤维,模型组大鼠胶原纤维明显增多,出现典型的肺间质纤维化;***组和养肺药物组大鼠也出现肺间质纤维化改变,程度较模型组明显为轻,但与假手术组有明显差异,养肺药物大剂组比养肺药物小剂组病理改变更轻。
4.2.3肺间质纤维化的程度评分比较:在光镜下观察大鼠肺组织Masson染色病理切片,参照Szapiel等方法确定肺纤维化程度,其分级和评分标准如下:肺纤维化分4级:无纤维化1分;轻度纤维化2分,受累面积小于全肺的20%,纤维化累及胸膜及胸膜下的肺间质,肺泡结构紊乱;中度纤维化3分,受累面积为20%~50%,纤维化区域从胸膜延伸,仍属局部性;重度纤维化4分,受累面积大于50%,并有融合,见大小不等的囊气腔,见表1。
表1养肺药物对肺损伤大鼠肺间质炎症评分的影响
注:与模型组比较*P<0.05**P<0.01
与***组比较△P<0.05△△P<0.01
与养肺药物小剂组比较#P<0.05##P<0.01
大鼠肺间质纤维化评分比较表明,模型组评分明显高于假手术组,具有统计学意义(P<0.01);***组和养肺药物大剂组、小剂组大鼠肺纤维化评分明显低于模型组,具有统计学意义(P<0.01);养肺药物大剂组、小剂组大鼠肺纤维化评分与***组比较未见明显差异(P﹥0.05);养肺药物大剂组、小剂组之间比较未见明显差异(P﹥0.05)。
4.3养肺药物对肺损伤大鼠肺组织细胞信号转导通路的影响:造模术后28天,处死大鼠,左肺用10%的中性甲醛溶液固定,石蜡包埋切片,常规脱蜡,用免疫组化SABC法检MEK1/2、ERK1/2、TGF-β1、CTGF的表达,采用光学显微镜和全自动图像获取***OlympusDP71在高倍镜视野(×400)下随机选取5个区域(视场),测量并记录每个视野阳性染色的平均光密度(IOD)值,作为该片的代表值,再计算该组的平均光密度,进行统计学比较。
4.3.1养肺药物对肺损伤大鼠肺组织ERK1/2水平的影响:模型组大鼠肺组织ERK1/2的水平明显高于假手术组,具有统计学意义(P<0.01);***组、养肺药物大剂组、小剂组肺组织ERK1/2的水平明显低于模型组,具有统计学意义(P<0.01);养肺药物大剂组、小剂组与***组比较未见明显差异(P﹥0.05);养肺药物大剂组、小剂组之间比较未见明显差异(P﹥0.05),见表2。
表2养肺药物对肺损伤大鼠肺组织ERK1/2的影响
注:与模型组比较*P<0.05**P<0.01
与***组比较△P<0.05△△P<0.01
与养肺药物小剂组比较#P<0.05##P<0.01
4.3.2养肺药物对肺损伤大鼠肺组织MEK1/2水平的影响:模型组大鼠肺组织MEK1/2水平明显高于假手术组,具有统计学意义(P<0.01);***组、养肺药物大剂组、小剂组肺组织MEK1/2水平明显低于模型组,具有统计学意义(P<0.01);养肺药物大剂组、小剂组与***组比较未见明显差异(P﹥0.05);养肺药物大剂组、小剂组之间比较未见明显差异(P﹥0.05),见表3。
表3养肺药物对肺损伤大鼠肺组织MEK1/2水平的影响
注:与模型组比较*P<0.05**P<0.01
与***组比较△P<0.05△△P<0.01
与养肺药物小剂组比较#P<0.05##P<0.01
4.3.3养肺药物对肺损伤大鼠肺组织CTGF水平的影响:模型组大鼠肺组织CTGF水平明显高于假手术组,具有统计学意义(P<0.01);***组、养肺药物大剂组、小剂组肺组织CTGF水平明显低于模型组,具有统计学意义(P<0.01);养肺药物大剂组、小剂组与***组比较未见明显差异(P﹥0.05);养肺药物大剂组、小剂组之间比较未见明显差异(P﹥0.05),见表4。
表4养肺药物对肺损伤大鼠肺组织CTGF水平的影响
注:与模型组比较*P<0.05**P<0.01
与***组比较△P<0.05△△P<0.01
与养肺药物小剂组比较#P<0.05##P<0.01
4.3.4养肺药物对肺损伤大鼠肺组织TGF-β1水平的影响:模型组大鼠肺组织TGF-β1水平明显高于假手术组,具有统计学意义(P<0.01);***组、养肺药物大剂组、小剂组肺组织TGF-β1水平明显低于模型组,具有统计学意义(P<0.01);养肺药物大剂组、小剂组与***组比较未见明显差异(P﹥0.05);养肺药物大剂组、小剂组之间比较未见明显差异(P﹥0.05),见表5。
表5养肺药物对肺损伤大鼠肺组织TGF-β1水平的影响
注:与模型组比较*P<0.05**P<0.01
与***组比较△P<0.05△△P<0.01
与养肺药物小剂组比较#P<0.05##P<0.01
养肺药物对肺损伤大鼠肺组织细胞信号转导通路的研究发现,模型组大鼠肺组织ERK1/2、MEK1/2、CTGF、TGF-β1水平明显高于假手术组,具有统计学意义(P<0.01);***组、养肺药物大剂组、小剂组肺组织ERK1/2、MEK1/2、CTGF、TGF-β1水平明显低于模型组,具有统计学意义(P<0.01);养肺药物大剂组、小剂组与***组比较未见明显差异(P﹥0.05);养肺药物大剂组、小剂组之间比较未见明显差异(P﹥0.05)。
试验例2:养肺药物对大鼠化疗后晚期肺间质病变肺组织MEK1/2、ERK1/2及其磷酸化的影响
1材料
1.1动物:选用SPF级SD大鼠,体重200±20g,雌雄各半,购自南京医科大学实验动物中心。
1.2药品
养肺药物:由黄芪、沙参、丹参、川芎等组成,煎制浓缩为含生药0.675g/ml和1.35g/ml的口服液,由南京中医药大学中医治法实验室制备,中药饮片由南京药业股份有限公司提供;
***片:0.75mg/片,浙江仙琚制药股份有限公司生产,用蒸馏水配制成0.0000405g/ml的溶液;
博莱霉素:15mg/支,购自淮安市第一人民医院药房,由日本化药株式会社生产。
1.3试剂及配制
1.3.1实验试剂
ECL发光液,批号1414301,购自Millipore。
RIPA裂解液(强),产品编号P0013B;PMSF,产品编号ST506;SDS-PAGE蛋白上样缓冲液,产品编号P0015;1.5MTris-HClPH8.8,产品编号ST789;1MTris-HClPH6.8,产品编号ST768;以上试剂均购自上海碧云天生物技术有限公司。
30%丙烯酰胺,批号0812A14,购自LEAGEAN。
SDS,批号325E033;Tris,批号805L073;过硫酸铵,批号603A031;甘氨酸,批号20140711;丽春红,批号801A025;Tween-20,批号505D044,以上试剂均购自北京索莱宝科技有限公司。
TEMED,批号816B023;磺基水杨酸,批号SLBB7699V,以上试剂均购自Sigma。
三氯乙酸,批号20140711,购自国药集团化学试剂有限公司;
甲醇,批号20140530,购自国药集团化学试剂有限公司;
乙醇,批号20140401,购自上海久亿化学试剂有限公司;
脱脂奶粉,批号1115345446943690,购自光明乳业股份有限公司;
1.3.2配制方法
(1)10%SDS:SDS10g,双蒸水溶解至100mL,充分混匀,常温放置。
(2)10%过硫酸铵:过硫酸铵0.1g,双蒸水溶解至1mL,4℃保存一周。
(3)电泳缓冲液:Tris30.3g,甘氨酸144g,SDS10g,双蒸水稀释至1000mL,常温保存。临用前将其用双蒸水1:9稀释。
(4)转膜缓冲液:Tris30.3g,甘氨酸144g,双蒸水稀释至1000mL,4℃保存;临用前取100mL,加入150mL甲醇,用双蒸水稀释至1000mL,4℃预冷备用。
(5)PBST:NaCl8g,KCl0.2g,Na2HPO4·12H2O3.48g,KH2PO40.2g,Tween-200.5mL,加双蒸水稀释至1000mL。
(6)5%牛奶:脱脂奶粉5g,用PBST稀释至100mL;
(7)丽春红染液:丽春红S2.0g,三氯乙酸30g,磺基水杨酸30g,加双蒸水稀释至100mL,用0.45μm滤膜过滤,使用时稀释10倍。
1.4实验仪器
石蜡切片机:德国Leica公司生产。
光学显微镜:日本Olympus公司生产。
全自动图像获取***OlympusDP71:日本Olympus公司生产。
MicroCL21R高速冷冻离心机,美国ThermoScientific公司产品。
T10BS25电动匀浆机,德国IKA公司产品。
BSA124S分析天平,德国Sartorius公司产品。
PCB-11震荡器,德国eppendorf公司产品。
LABDANCERS25涡旋仪,德国IKA公司产品。
1510全自动酶标仪,美国ThermoScientific公司产品。
移液器,德国eppendorf公司产品。
GHP-9160型隔水式恒温培养箱,上海柏欣仪器设备厂产品。
DK-S24水浴锅,上海精宏实验设备有限公司产品。
迷你离心机,德国IKA公司产品。
垂直电泳槽,美国Bio-Rad公司产品。
基础电泳仪,美国Bio-Rad公司产品。
转印槽,美国Bio-Rad公司产品。
化学发光凝胶成像***,美国Bio-Rad公司产品。
荧光定量PCR仪,美国Bio-Rad公司产品。
FS-200型封口机,永康市特立包装机械有限公司产品。
PVDF膜,0.2μm,批号K4HA4944D,美国Millipore公司产品。
1.5检测试剂:
兔抗大鼠MEK1/2、ERK1/2多克隆抗体,购自武汉博士德生物技术有限公司。
p-MEK1/2、兔抗大鼠单克隆抗体,购自CellSignalingTechnology;
p-ERK1/2兔抗大鼠单克隆抗体,购自CellSignalingTechnology;
β-actin小鼠抗大鼠单克隆抗体,购自Abcam;
HRP标记山羊抗小鼠IgG,批号113738,购自明睿生物技术有限公司;
Marker,批号00209014,购自ThermoScientific;
BCA蛋白定量分析试剂盒,批号PF204696,购自ThermoScientific;
2实验方法
2.1动物分组:大鼠常规适应性饲养3d后,随机分为5组:假手术组、模型组、***组、养肺药物小剂组、养肺药物大剂组,每组12只。
2.2模型制备:按文献方法制备模型,将博莱霉素用生理盐水配制成5mg/ml浓度,10%水合氯醛0.3ml/100g麻醉大鼠后,颈部皮肤消毒,剪去颈部鼠毛,行颈正中切口,分离暴露气管,经气管软骨环间隙向心端穿刺注入博莱霉素5mg/kg,立即将动物直立并旋转,使药液在肺内分布充分、均匀,然后缝合皮肤。假手术组大鼠在同样麻醉条件下气管内注入等量生理盐水;各组大鼠在相同条件下自由饮水、摄食,保持自然光照,观察并记录大鼠的活动、进食、体重等一般情况。
2.3给药方法:造模术后第2天开始每天灌胃给药,假手术组和模型组给予蒸馏水1ml/100g体重;***组给予等容积***蒸馏水溶液0.000405g/Kg·d;养肺药物小剂组给予等容积养肺药物蒸馏水溶液6.75g/Kg·d,养肺药物大剂组给予等容积养肺药物蒸馏水溶液13.5g/Kg·d,每日灌胃1次,连续给药28天。
2.4标本采集:造模及给药后饲养28天,以10%水合氯醛0.3ml/100g麻醉大鼠,颈动脉取血处死大鼠,打开胸腔取出肺脏,摘除气管、肺门***等组织,用滤纸吸干肺脏表面血液;左肺用冰盐水冲洗3遍,滤纸吸干水分,固定,包埋切片,常规脱蜡,行免疫组化SABC法检测肺组织MEK1/2、ERK1/2的表达;右肺-80℃冻存,行Westernblot检测p-MEK1/2、p-ERK1/2水平。
2.5指标检测
2.5.1免疫组化法:左肺用10%的中性甲醛溶液固定,石蜡包埋切片,常规脱蜡,用免疫组化SABC法检MEK1/2、ERK1/2的表达,采用光学显微镜和全自动图像获取***OlympusDP71在高倍镜视野(×400)下随机选取5个区域(视场),测量并记录每个视野阳性染色的平均光密度(IOD)值,作为该片的代表值,再计算该组的平均光密度,进行统计学比较。
2.5.2Westernblot法
(1)大鼠肺组织蛋白抽提及变性:称取肺组织置于冰上,将组织放入2mL圆底离心管中,用干净剪刀将组织块尽量剪碎;每50mg组织加入500μL预冷的RIPA裂解液,裂解液在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM;用电动匀浆机匀浆,然后置于冰上裂解半小时,直至充***解;充***解后,4℃,12000r/min,离心20分钟,取上清液;取少量上清进行蛋白定量,其余尽快按照比例(每4μL蛋白样品加入1μL,5×蛋白上样缓冲液)加入上样缓冲液,95℃水浴煮5min,然后分装并保存于-80℃冰箱中;
(2)配胶:根据分离胶大小配制合适的分离胶及浓缩胶;
(3)加样、电泳:①把蛋白样品直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内,在电泳槽中加上电泳缓冲液开始电泳;②开始电泳时,电压为60V,待样品进入分离胶后,增加电压至110V,继续电泳至溴酚蓝抵达分离胶底部;③取下胶板,小心去除一侧玻璃板,切去浓缩胶和分离胶无样品部分;
(4)转膜:①精确测量剩余胶的大小,按该尺寸剪取一张PVDF膜,浸于甲醇中1-2min;②将裁好的胶、浸过甲醇的PVDF膜和滤纸放入转膜缓冲液中,10min左右;③在转膜夹上由阴极到阳极按下列顺序安放:黑色滤网→滤纸→胶→PVDF膜→滤纸→黑色滤网;④将转膜夹放入电泳槽,放满转膜缓冲液,外面放冰块,加满水;⑤接通电源,100V恒压,等待1小时;
(5)免疫反应:①取出一小盒,加入少量丽春红;②把膜取出,扔掉胶,放入少量丽春红;③将膜剪成小条带,放入TBST中,置摇床室温条件下漂洗,5min×3次;④将膜置于5%牛奶中,常温封闭,置于摇床上轻摇1小时;⑤孵一抗:将膜放入用PBST稀释的磷酸化-ERK或磷酸化-MEK1/2抗体(一抗)中,封口膜封口,摇床上1小时,4℃冰箱过夜;⑥孵二抗:第2天,取出膜,用PBST洗膜5min×3次,然后将膜放入用PBST稀释的二抗中,置摇床,室温下孵育2小时;
(6)化学发光:①取出膜,PBST中洗,5min×3次;②用镊子将膜置于化学发光凝胶成像***,将ECL发光液加于膜上,电脑观察其条带;
(7)图象分析:用ImageLab4.0软件进行图象分析***,以β-actin条带作为内参照,计算目的蛋白与β-actin的灰度值比值,作为目的蛋白表达的相对表达量定量。
3数据统计:所有数据均以均数±标准差表示,采用SPSS17.0统计软件分析,多组间采用单因素方差分析。
4实验结果
4.1养肺药物对化疗药物晚期肺间质病变大鼠肺组织MEK1/2、ERK1/2的影响
4.1.1养肺药物对化疗药物肺间质病变晚期大鼠肺组织MEK1/2水平的影响:模型组大鼠肺组织MEK1/2水平明显高于假手术组,具有统计学意义(P<0.01);***组、养肺药物大剂组、小剂组肺组织MEK1/2水平明显低于模型组,具有统计学意义(P<0.01);养肺药物大剂组、小剂组与***组比较未见明显差异(P﹥0.05);养肺药物大剂组、小剂组之间比较未见明显差异(P﹥0.05),见表6。
表6养肺药物对化疗药物肺间质病变晚期大鼠肺组织MEK1/2水平的影响
注:与模型组比较*P<0.05**P<0.01
与***组比较△P<0.05△△P<0.01
与养肺药物小组比较※P<0.05※※P<0.01
4.1.2养肺药物对化疗药物肺间质病变晚期大鼠肺组织ERK1/2水平的影响:模型组大鼠肺组织ERK1/2的水平明显高于假手术组,具有统计学意义(P<0.01);***组、养肺药物大剂组、小剂组肺组织ERK1/2的水平明显低于模型组,具有统计学意义(P<0.01);养肺药物大剂组、小剂组与***组比较未见明显差异(P﹥0.05);养肺药物大剂组、小剂组之间比较未见明显差异(P﹥0.05),见表7。
表7养肺药物对化疗药物肺间质病变晚期大鼠肺组织ERK1/2的影响
注:与模型组比较*P<0.05**P<0.01
与***组比较△P<0.05△△P<0.01
与养肺药物小组比较※P<0.05※※P<0.01
4.2养肺药物对化疗药物肺间质病变晚期大鼠肺组织p-ERK1/2、p-MEK1/2的影响
4.2.1养肺药物对化疗药物肺间质病变晚期大鼠肺组织p-MEK1/2的影响:模型组大鼠肺组p-MEK1/2表达在造模后显著高于假手术组(P<0.01);***组、养肺药物小剂组、养肺药物大剂组p-MEK1/2表达均显著低于模型组(P<0.01);其中,养肺药物小剂组显著低于***组(P<0.01),养肺药物大剂组与***组比较无明显差异(P>0.05);养肺药物小剂组显著低于养肺药物大剂组(P<0.01),见表8和图1。
表8养肺药物对化疗药物肺间质病变晚期大鼠肺组织p-MEK1/2表达的影响
注:与模型组比较*P<0.05**P<0.01;
与地米组比较ΔP<0.05ΔΔP<0.01;
与养肺药物小组比较※P<0.05※※P<0.01
4.2.2养肺药物对化疗药物肺间质病变晚期大鼠肺组织p-ERK1/2的影响:模型组大鼠肺组p-ERK1/2表达在造模后显著高于假手术组(P<0.01);***组、养肺药物小剂组、养肺药物大剂组各给药组p-MEK1/2表达均显著低于模型组(P<0.01);其中,养肺药物小剂组、养肺药物大剂组显著低于***组(P<0.01),养肺药物小剂组显著低于养肺药物大剂组(P<0.01),见表9和图2。
表9养肺药物对化疗药物肺间质病变晚期大鼠肺组织p-ERK1/2表达的影响
注:与模型组比较*P<0.05**P<0.01;
与地米组比较ΔP<0.05ΔΔP<0.01;
与养肺药物小组比较※P<0.05※※P<0.01
研究发现,养肺药物可显著降低博莱霉素致大鼠肺间质病变晚期的肺组织ERK1/2、MEK1/2水平(P<0.01),与***作用相似(P﹥0.05),养肺药物大剂组、小剂组之间比较未见明显差异(P﹥0.05);养肺药物可以显著降低博莱霉素致大鼠肺间质病变晚期的肺组织p-MEK1/2、p-ERK1/2水平(P<0.01),较***更为显著(P<0.01),养肺药物小剂组较养肺药物大剂组更为显著(P<0.01)。
试验例3:养肺药物对大鼠放疗后晚期肺间质病变肺组织水通道蛋白的影响
1材料
1.1动物:选用SPF级SD大鼠,体重200±20g,雌雄各半,购自南京医科大学实验动物中心。
1.2药品
养肺药物:由黄芪、沙参、丹参、川芎等组成,煎制浓缩为含生药0.675g/ml和1.35g/ml的口服液,由南京中医药大学中医治法实验室制备,中药饮片由南京药业股份有限公司提供。
***片:0.75mg/片,浙江仙琚制药股份有限公司生产,用蒸馏水配制成0.0000405g/ml的溶液。
1.3试剂
AQP1mRNA、AQP5mRNAPCR引物由生工生物工程(上海)有限公司引物合成,基因引物序列见表10。
表10实时PCR引物序列
ScriptRT-PCR试剂盒:购自南京市玄武区实验器材经销部。
TRNZOL总RNA提取试剂:购自南京市玄武区实验器材经销部。
AQP-1、AQP-5放免试剂盒由北京华英生物技术研究所购自中生北控股份有限公司。
1.4仪器
7160全自动生化仪,日本日立公司生产。
OncorImpression直线加速器:德国SIEMENS公司生产。
γ-911全自动放免计数仪,中国科技大学实业总公司生产。
酶免仪器:SATATFAX2100全自动酶标仪,AwarenessTechnology.inc.USA。
PCR仪:RocheLightcycler480德国生产。
OncorImpression直线加速器:德国SIEMENS公司生产。
2方法
2.1分组及模型制备
大鼠常规适应性饲养7d后,随机数字法分为4组:正常组10只,模型组、***组、养肺药物组,每组各12只,雌雄各半;模型组、***组、养肺药物组大鼠以10%水合氯醛0.3ml/100g腹腔注射麻醉,取仰卧位四肢用橡皮圈固定于自制放射板上,模拟机下定位,采用西门子ONCOR加速器(6MV-X),以双侧锁骨下到剑突为照射区双肺放射,照射面积约3cm×3cm,其余部分用10cm厚铅砖屏蔽,照距为100cm,每次剂量5Gy,每周照射1次,连续照射3周,最高累积剂量15Gy,剂量率为230CGy/Min。
2.2给药:首次放射当天开始灌胃给药,正常组和模型组给予蒸馏水1ml/100g体重;***组给予等容积***蒸馏水溶液;养肺药物组给予等容积养肺药物蒸馏水溶液,每日灌胃1次,连续给药15天;各组大鼠在相同条件下自由饮水、摄食,保持自然光照,观察并记录大鼠的活动、进食、体重等一般情况。
2.3标本采集及检测:末次放射后次日,以10%水合氯醛0.3ml/100g麻醉大鼠,颈动脉取血处死大鼠,右肺用冰盐水冲洗3遍,滤纸吸干水分,冷冻保存,右肺匀浆后,由北京华英生物技术研究所,采用放射免疫法检测AQP-1、AQP-5含量;荧光定量RT-PCR分析肺组织AQP1、AQP5表达,取右肺中叶组织100mg,采用TRlzol试剂参照说明书提取总RNA,在260nm和280nm处使用紫外分光光度计测定RNA含量;参照cDNA第一链合成试剂说明书将RNA逆转录合成cDNA,其中2uLcDNA为模板扩增,肌动蛋白β-actin作为内参照,并设立阴性对照;反应条件相同,引物序列见表l;通过观察实时检测荧光量的变化,获得在PCR扩增过程中,不同肺组织达到一定的荧光信号(阈值)时所需的循环次数,即CT值(CycleThreshold)的改变;ΔCT值则表示肺组织AQP的CT值与其内参照物肌动蛋白β-actin的CT值之比,比较ΔCT值可分析发生ALI时各组大鼠肺组织AQP1和AQP5蛋白表达的变化;通过实时检测肺组织荧光量的变化,获取CT值,每个模板的CT值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系,起始拷贝数越多,CT值越小;△CT值越大,表示AQP的蛋白表达水平越低。
2.4数据统计:所有数据均以均数±标准差表示,采用SPSS16.0统计软件分析,多组间采用单因素方差分析。
3结果
3.1一般情况:模型组大鼠放射后出现活动减少,食量减少,逐渐消瘦,聚群与耸毛现象较为明显,皮毛失去光泽,后逐步改善,死亡2只;正常组和养肺药物组则未见明显的上述症状和体重减轻,正常组未见死亡,养肺药物组死亡2只;***组上述症状与模型组表现基本相同,体重减轻明显,死亡4只。
3.2养肺药物对放疗后肺间质病变大鼠肺组织水通道蛋白1、5的影响:放射免疫法检测结果表明,正常组大鼠肺组织AQP-1、AQP-5水平显著低于模型组,具有统计学意义(P<0.01或P<0.05);养肺药物组和***组肺组织AQP-1水平显著高于模型组,具有统计学意义(P<0.01);养肺药物组肺组织AQP-5水平高于模型组,但无统计学意义(P﹥0.05),见表11。
表11养肺药物对放疗后肺间质病变大鼠肺组织AQP-1、AQP-5的影响
注:与模型组比较*P<0.05**P<0.01
3.3养肺药物对放疗后肺间质病变大鼠肺组织水通道蛋白1、5mRNA的影响:PCR检测结果表明,正常组大鼠肺组织AQP-1mRNA水平低于模型组,但无统计学意义(P>0.05);正常组大鼠肺组织AQP-5mRNA水平显著高于模型组,具有统计学意义(P<0.05);养肺药物组和***组肺组织AQP-1mRNA水平低于模型组,但无统计学意义;养肺药物组和***组肺组织AQP-5mRNA水平显著高于模型组,具有统计学意义(P<0.05),见表12。
表12养肺药物对放疗后肺间质病变大鼠肺组织AQP-1、AQP-5mRNA的影响(△CT,)
本试验例观察到,大鼠放射治疗后肺组织AQP-1、AQP-5水平明显增高,说明放射导致的肺间质病变可导致水通道蛋白的增高,AQP-5mRNA明显降低,养肺药物治疗后肺组织AQP-1水平显著增高,AQP-5mRNA明显增高,说明养肺药物可通过增高肺组织AQP-1、AQP-5水平,调节AQP-1、AQP-5mRNA表达减肺间质病变程度,这也是养肺药物治疗放射性肺间质病变的部分机理,对于其他作用机理有待于进一步深入研究。
试验例4:养肺药物对大鼠放疗后晚期肺间质病变血管内皮损伤的影响
1材料
1.1动物:选用SPF级SD大鼠,体重200±20g,雌雄各半,购自南京医科大学实验动物中心。
1.2药品
养肺药物:由黄芪、沙参、丹参、川芎等组成,煎制浓缩为含生药0.675g/ml和1.35g/ml的口服液,由南京中医药大学中医治法实验室制备,中药饮片由南京药业股份有限公司提供。
***片:0.75mg/片,浙江仙琚制药股份有限公司生产,用蒸馏水配制成0.0000405g/ml的溶液。
1.3试剂
ICAM、VCAM和VEGF放免试剂盒由北京华英生物技术研究所购自中生北控股份有限公司。
兔抗大鼠ICAM、VCAM多克隆抗体购自武汉博士的生物公司。
1.4仪器
7160全自动生化仪,日本日立公司生产。
OncorImpression直线加速器:德国SIEMENS公司生产。
γ-911全自动放免计数仪,中国科技大学实业总公司生产。
酶免仪器:SATATFAX2100全自动酶标仪,AwarenessTechnology.inc.USA。
2方法
2.1分组及模型制备
大鼠常规适应性饲养7d后,随机数字法分为4组:正常组10只,模型组、***组、养肺药物组,每组各12只,雌雄各半;模型组、***组、养肺药物组大鼠以10%水合氯醛0.3ml/100g腹腔注射麻醉,取仰卧位四肢用橡皮圈固定于自制放射板上,模拟机下定位,采用西门子ONCOR加速器(6MV-X),以双侧锁骨下到剑突为照射区双肺放射,照射面积约3cm×3cm,其余部分用10cm厚铅砖屏蔽,照距为100cm,每次剂量5Gy,每周照射1次,连续照射3周,最高累积剂量15Gy,剂量率为230CGy/Min。
2.2给药:首次放射当天开始灌胃给药,正常组和模型组给予蒸馏水1ml/100g体重;***组给予等溶积***蒸馏水溶液;养肺药物组给予等溶积养肺药物蒸馏水溶液,每日灌胃1次,连续给药15天;各组大鼠在相同条件下自由饮水、摄食,保持自然光照,观察并记录大鼠的活动、进食、体重等一般情况。
2.3标本采集及检测:末次放射后次日,以10%水合氯醛0.3ml/100g麻醉大鼠,颈动脉取血处死大鼠,右肺用冰盐水冲洗3遍,滤纸吸干水分,冷冻保存,右肺匀浆后,由北京华英生物技术研究所,采用放射免疫法检测ICAM、VCAM和VEGF含量;左肺用10%的中性甲醛溶液固定,石蜡包埋切片,常规脱蜡,用免疫组化SABC法检测ICAM、VCAM的表达,采用光学显微镜和全自动图像获取***OlympusDP71在高倍镜视野(×400)下随机选取5个区域(视场),采用ImageProPlus6.0软件分析测量并记录每个视野阳性染色的平均光密度(IOD)值,作为该片的代表值,再计算该组的平均光密度,进行统计学比较。
2.4数据统计:所有数据均以均数±标准差表示,采用SPSS16.0统计软件分析,多组间采用单因素方差分析。
3结果
3.1一般情况:模型组大鼠放射后出现活动减少,食量减少,逐渐消瘦,聚群与耸毛现象较为明显,皮毛失去光泽,后逐步改善,死亡2只;正常组和养肺药物组则未见明显的上述症状和体重减轻,正常组未见死亡,养肺药物组死亡2只;***组上述症状与模型组表现基本相同,体重减轻明显,死亡4只。
3.2养肺药物对放疗后肺间质病变大鼠肺组织血管内皮的影响:免疫组化实验结果表明,正常组大鼠肺组织ICAM和VCAM水平与模型组比较,无统计学意义(P<0.05);贝素乙组和***组ICAM和VCAM水平高于模型组,但无统计学意义(P﹥0.05),见表13;放射免疫法实验结果表明,正常组大鼠肺组织ICAM、VCAM水平显著低于模型组,具有统计学意义(P<0.01);***组肺组织ICAM水平显著低于模型组,具有统计学意义(P<0.05);养肺药物组肺组织VCAM水平明显高于与模型组(P<0.01),养肺药物组肺组织ICAM水平高于与模型组,但无统计学意义(P﹥0.05),见表14。
表13养肺药物对放疗后肺间质病变大鼠血管内皮的影响
注:与模型组比较*P<0.05**P<0.01
表14养肺药物对放疗后肺间质病变大鼠血管内皮的影响
注:与模型组比较*P<0.05**P<0.01
3.3养肺药物对放疗后肺间质病变大鼠肺组织血管内皮生长因子的影响
放免法实验结果表明,正常组大鼠肺组织VEGF水平与模型组比较,无统计学意义(P﹥0.05);***组肺组织VEGF水平显著低于模型组,具有统计学意义(P<0.05);养肺药物组肺组织VEGF水平与模型组比较无统计学意义(P﹥0.05),见表15。
表15养肺药物对放疗后肺间质病变大鼠血管内皮生长因子的影响
注:与模型组比较*P<0.05**P<0.01
本试验例观察到,大鼠放射后肺组织ICAM和VCAM水平明显增高,说明放射肺间质病变导致的肺水肿的发生与粘连分子的水平增高密切相关,养肺药物治疗后肺组织VCAM水平明显增高((P<0.01)),说明养肺药物可通过增高VCAM水平减轻肺泡炎和肺水肿程度,这也是养肺药物治疗放射性肺炎的部分机理,对于其他作用机理有待于进一步深入研究。
试验例5:养肺药物治疗放化疗晚期肺间质病变的临床疗效观察
1临床资料
1.1一般资料
1.1.1晚期肺间质疾病诊断标准:根据国家中医药管理局《中医病证诊断疗效标准》制定的晚期肺间质疾病诊断标准,(1)以气短喘促,呼吸困难,甚至张口抬肩,鼻翼煽动,不能平卧,***发绀为特征;(2)多有慢性咳嗽,哮病,肺痨,心悸等疾病史,每遇外感及劳累而诱发;(3)呈桶状胸,叩诊胸部呈过清音,心浊音界缩小或消失,肝浊音界下移;肺呼吸音减低,可闻及干、湿性罗音或哮鸣音;或肝肿大、下肢浮肿、颈静脉怒张;(4)合并感染者,白细胞总数及中性粒细胞可增高;必要时查血钾、钠、二氧化碳结合力及X线胸部摄片,心电图,心、肺功能测定,血气分析等。
1.1.2中医证候诊断标准:根据国家中医药管理局《中医病证诊断疗效标准》制定晚期肺间质疾病中医证候诊断标准,辨证为以下二个证型者纳入研究病例;肺脾两虚:喘息短促无力,语声低微,自汗心悸,面色恍白,神疲乏力,食少便塘,舌淡苔少,脉弱;或口干咽燥,舌红,脉细;肺肾两虚:喘促日久,心悸怔忡,动则喘咳,气不接续,胸闷如窒,不能平卧,痰多而粘,或心烦不寐,唇甲紫绀,舌质紫或舌红苔少,脉微疾或结、代。
1.1.3患者一般资料:65例患者均符合以上晚期肺间质疾病和中医证候诊断标准,妊娠及哺乳期妇女,精神病患者,合并有其他***严重原发疾病或并发症者,有药物食物过敏史或已知对本药组分有过敏者,正在参加其他药物临床试验的患者,临床资料不全者均不能入组研究;所有患者随机分为两组,治疗组33例,男16例,女17例;年龄36~72岁,平均54.7±3.6岁;病程0.25~17年;对照组32例,男16例,女16例;年龄38~73岁,平均53.2±4.2岁;病程0.5~5年;两组患者年龄、性别、病情、病程等资料经统计学比较未见明显差异,具有可比性(P>0.05)。
1.2治疗方法
1.2.1治疗组给予养肺药物口服20ml,每日3次或胶囊3粒,每日3次,治疗时间30天。
1.2.2对照组给予蜜炼川贝枇杷膏,由京都念慈菴制药有限公司生产,每次10ml口服,每日3次,治疗时间30天;两组患者服药期间均嘱注意休息,注意防寒保暖,预防感冒,忌食生冷、辛辣及油腻等食物刺激。
1.3统计方法:所有数据用EXCEL软件管理,采用SPSS17.0软件分析;计量资料用t检验,等级资料用Ridit检验,计量资料采用X2检验。
2疗效观察
2.1疗效标准:依据国家中医药管理局《中医病证诊断疗效标准》制定;治愈:喘息及其它症状消失,实验室检查明显好转;好转:喘息及其它症状好转,实验室检查有改善;未愈:主症未改善或恶化者。
2.2治疗结果
2.2.1两组临床疗效比较:经治疗对照组32例患者,治愈6例,有效13例,无效13例,总有效率59.38%;治疗组33例患者,治愈18例,有效12例,无效3例,总有效率90.91%;治疗组和对照组比较,治愈率和总有效率均有显著性差异(P<0.01),见表l6。
表16两组临床疗效比较(例,%)
注:与对照组比较*P<0.05**P<0.01
与治疗前比较※P<0.05※※P<0.01
2.2.2两组症状改善比较:患者喘息气促、动则喘咳、咳痰量多、语声低微、神疲乏力、自汗心悸、食少便塘、唇甲紫绀等症状,根据严重程度分为0-10级,无症状为0分,可想象的最严重程度为10分,把每个患者所有感觉症状分值相加后计算每个患者的总分值进行统计学比较;结果发现两组患者各种临床表现分值治疗后均较治疗前明显降低(P<0.01),见表17。
表17两组症状改善比较
注:与对照组比较*P<0.05**P<0.01
与治疗前比较※P<0.05※※P<0.01
2.2.3两组症状减轻程度比较:结果发现患者喘息气促、动则喘咳、咳痰量多、语声低微、神疲乏力、自汗心悸、食少便塘、唇甲紫绀等症状,治疗后治疗组较对照组分值降低更为明显(P<0.01),见表18。
表18两组症状减轻程度比较
养肺药物治疗放化疗引起的晚期肺间质病变的临床疗效观察,研究结果显示对照组32例患者,治愈6例,有效13例,无效13例,总有效率59.38%;治疗组33例患者,治愈18例,有效12例,无效3例,总有效率90.91%,治疗组治愈率和总有效率均显著高于对照组(P<0.01);两组患者喘息气促、动则喘咳、咳痰量多、语声低微、神疲乏力、自汗心悸、食少便塘、唇甲紫绀症状,均较治疗前显著减轻(P<0.01),治疗组症状减轻程度较对照组更为显著(P<0.01),可作为治疗放化疗引起的晚期肺间质病变的新方法推广应用。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于技术领域的普通人员来说,在不脱离本发明技术原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (8)
1.治疗胸部肿瘤放化疗后晚期肺间质病变的中药组合物,其特征是该治疗肺间质病变的中药组合物由以下重量百分比的原料组分制备而成:黄芪、丹参各14.30%,沙参、杏仁、大贝母、鬼剑羽、赤芍、川芎各10.7%,五味子7.14%。
2.治疗胸部肿瘤放化疗后晚期肺间质病变的中药组合物的制备方法,其特征是该制备方法包括以下步骤:
(1)筛选黄芪200克备用,沙参、杏仁、大贝母各150克备用,丹参200克备用,鬼剑羽、赤芍、川芎各150克备用;五味子100克备用;
(2)提取:将黄芪、沙参、杏仁、大贝母四味药物加水煮沸40分钟,用水抽提2次,每次3小时,水加入量为浸没药材,温度控制在80-85摄氏度,将滤液移入冷热缸进行浓缩,得稠浸膏1;将丹参、鬼剑羽、赤芍、川芎四味药物加水煮沸40分钟,用水抽提2次,每次3小时,水加入量为浸没药材,温度控制在80-85摄氏度,将滤液移入冷热缸进行浓缩,得稠浸膏2;五味子中加入质量浓度70%乙醇浸没药材,浸渍48小时后过滤,收集滤液,将滤液通过注入浓缩罐进行真空浓缩,温度控制在70摄氏度,真空度0.08MPa,浓缩得稠膏状3;
(3)混合:将步骤(2)得到的稠浸膏1、2和3移入料斗,用三维混合机进行混合,转速为10转/分,混合时间为10分钟,得到养肺中药组合物。
3.根据权利要求2所述的治疗胸部肿瘤放化疗后晚期肺间质病变的中药组合物的制备方法,其特征是:上述养肺中药组合物制成口服液,或制成胶囊;制成口服液的方法是:将所述养肺中药组合物300ml,放置容器中加灭菌蒸馏水1200ml,煮沸后继续20分钟,沉淀,过滤,取滤液真空浓缩为600ml,分瓶灌装,每瓶200毫升,灭菌密封;制成胶囊的方法是:将所述养肺中药物组合物移入容器,铺成薄薄一层,放入真空干燥箱干燥,温度为60-70摄氏度,干燥24小时,将干燥的养肺中药组合物移入粉碎机,用80目筛网进行粉碎,灭菌,用胶囊充填机装填,得养肺胶囊,胶囊灌装完用胶囊抛光机进行抛光,每粒胶囊0.25g,包装;其中,转盘转速为30-40转/分,真空压力泵0.016MPa。
4.根据权利要求3所述的治疗胸部肿瘤放化疗后晚期肺间质病变的中药组合物的制备方法,其特征是上述养肺中药组合物的服用方法是:口服液每日3次每次20ml,胶囊每日3次每次3粒。
5.根据权利要求2所述的治疗胸部肿瘤放化疗后晚期肺间质病变的中药组合物的制备方法,其特征是:步骤(3)所得养肺中药组合物经制粒、干燥、整粒,制成颗粒剂。
6.根据权利要求2所述的治疗胸部肿瘤放化疗后晚期肺间质病变的中药组合物的制备方法,其特征是:步骤(3)所得养肺中药组合物经干燥、压片,得片剂。
7.根据权利要求2所述的治疗胸部肿瘤放化疗后晚期肺间质病变的中药组合物的制备方法,其特征是:步骤(3)所得养肺中药组合物经制丸、干燥,得微丸。
8.根据权利要求2所述的治疗胸部肿瘤放化疗后晚期肺间质病变的中药组合物的制备方法,其特征是:步骤(3)所得养肺中药组合物干燥后与适量植物油混匀,制成软胶囊。
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