CN105497093B - 一种具有辅助改善记忆力功能的组合物、其制备方法及含有该组合物的胶囊 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种具有辅助改善记忆力功能的组合物，由以下组分按重量分数组成：DHA藻油40‑60份，磷脂酰丝氨酸30‑50份，红花籽油10‑20份，虾青素油5‑8份。本发明的技术优点在于：本发明复合物配伍理论体现了利用现代研究活性成分及脑营养素最新研究成果，对各种脑营养素不饱和脂肪酸及生物活性因子抗氧化成分进行合理配伍，克服了单方改善记忆力产品的缺陷，从养护脑细胞基础开始，强化整体调理，重建健康大脑。

Description

一种具有辅助改善记忆力功能的组合物、其制备方法及含有 该组合物的胶囊

技术领域

本发明涉及保健品及其制备方法领域，特别是涉及一种具有辅助改善记忆力功能的组合物、其制备方法及含有该组合物的胶囊。

背景技术

在现代生活中，人们记忆力衰退现象普遍。健忘成为都市职业人群的常见病，健忘是老年人的常见多发疾病，尤其以脑供血不足导致的健忘最为常见。青少年人群主要表现在记性差，多数是由于过度依赖电脑、书籍等，过度心理压力，经常抽烟喝酒，经常不吃早餐等不好生活习惯造成。

人体大脑的衰老从30对岁就开始了，到50多岁时大脑的衰老更加明显。老年人随着年龄的增长，大脑不同程度发生了一些老年性脑改变，严重的会发生脑萎缩，因此会出现记忆力下降。此外，如脑血管类疾病，脑部外源性损失，神经损害类药物，膳食内某些成分等同样会引起记忆功能的下降。中老年人脑病症状到了晚期多表现为缺血性痴呆、早老性痴呆(AD)。

目前亚太区的老年痴呆症患者有1400万人，至2050年可能增加至6500万人，其中40％来自中国。目前我国有老年痴呆患者约500万，包括早老性痴呆即AD和脑血管疾病所致的血管性痴呆，加之我们即将进入老龄化社会，众多中老年人群脑健康状况堪忧，给社会带来的负担也将是巨大的。

血管性痴呆——慢性脑缺血所引起的能量代谢障碍，葡萄糖利用减少，蛋白合成异常，神经递质改变，胆碱受体缺失，脑白质损害和神经元缺失构成了慢性脑缺血导致认识功能损害的病理生理学基础，严重影响着老年人的生活质量，属于老年疾病之一，因此，如何改善慢性脑缺血症状，延缓其发生、发展，已成为临床医生所关注的一个问题。氧化应激是脑缺血损伤的重要机制，已证实，神经细胞对氧自由基损伤非常敏感，自由基连锁反应，主要攻击灰质的神经元等富含脂质的脑组织，使神经元死亡，尤其是它可使初始缺血损伤不严重的神经元发生坏死。线粒体是细胞内氧自由基产生最多的场所，也更易遭受自由基损伤引起记忆力功能下降。现代研究表明痴呆前病变，包括脑梗死、高血压症、脑动脉硬化症等。赵南刚等认为，脑血管病后，病人的急躁等情绪因疾病的困扰而更加强烈，势必引起植物神经功能紊乱，内分泌机能失调，交感神经兴奋性增高，儿茶酚胺分泌增多，血压升高，血糖升高，从而促进动脉硬化，引起血液流变学的变化，更加重脑细胞的长期缺血缺氧，最终使脑细胞产生不可逆的损害，出现记忆力减退甚至导致血管性痴呆。

早老性痴呆——早老性痴呆患者皮质的胆碱***发生严重的溃变，引起学习记忆减退和认知障碍，产生痴呆症状。早老性痴呆发生时，基底前脑区的胆碱能神经元丢失，造成乙酰胆碱的合成、储存、释放减少，从而导致已记忆和识别功能障碍为主的临床表现。自由基损伤是造成AD的重要原因之一。自由基及其引发的脂质过氧化作用参与神经元的损害氧自由基可引起神经元和胶质细胞生物膜及亚细胞结构和功能的破坏。大量产生的氧自由基可导致线粒体DHA和线粒体膜损伤，而线粒体DHA损伤与AD发生有关。

人到中年后，脑的功能和结构即逐渐发生变化，神经细胞和神经纤维都会出现退行性改变，脑重量减轻，脑血流量也比年轻时减少约17％。现代医学研究发现，人的大脑具有高度可塑性和巨大潜力。随着年龄的增长，知识、经验会越来越丰富，从而会提高理解力和语言表达能力，使得老年人对问题的分析、归纳推理和判断能力超过年轻人，所以老年脑健康问题是可以加以保健预防的。

人的大脑是产生思维和意识的中枢，新陈代谢十分旺盛，大脑功能的正常进行需要多种营养物质的参与，此外，在进行脑力活动时，脑细胞需要大量的氧化，如果氧气不足就会影响大脑的思维功能，因此记忆力如果要得到提高可以通过补充大脑正常运行的必须物质、增加大脑细胞对氧的利用以及补充能够促进脑部新陈代谢产物排除的物质等途径来实现。

充养脑窍，神机得以滋养，脑神功能正常。通过改善大脑皮层血流量，使到慢性脑缺血缺氧状态得以改善，减低大脑的应急反应造成的伤害，减轻大脑组织的损伤，减低大脑神经细胞因缺血缺氧所造成的损伤及凋亡。

目前市场上的辅助改善记忆力的保健食品的主要品种有：脂类、蛋白质和氨基酸类、矿物质和微量元素类、维生素类、中草药类。美国保健食品协会专家认定对记忆力有改善作用的成分有：5羟色胺合剂、抗氧化剂、新型铬制剂、银杏制剂、石杉碱甲、w-3脂肪酸、磷脂酰丝氨酸、长春花提取物。

当今，随着知识经济时代的发展，有关人类脑研究脑健康问题已经成为世界发达国家关注的热点。美国提出“脑十年”，日本提出“理解脑、保护脑、创造脑”的口号，日本脑研究会提出脑研究以揭示脑功能、克服脑疾病和开发人工智能为支柱。我国有关权威部门也向社会推出了“预防脑瘁中，珍视脑健康”的全新理念。但目前市场响应这个理念的新成果不甚理想，尤其在健康饮食方面全面关注脑健康的领域还很有限，多数是就症治症，单一的去解决辅助治疗脑疾病症状，而没有从基础全面脑保健、脑营养方面去响应预防的重要性，当然相关的技术产品服务也是有限的。

本发明解决的技术方案，一方面为国内脑健康理念的建设添砖加瓦，另一方面也能为广大中老年人的脑健康带来福音，同时也能为社会创造出不菲的经济效益。

发明内容

本发明目的在于针对现有市场健脑口服类产品的技术局限性，提供一种综合养脑护脑安全、科学、有效，且具有辅助改善记忆力的组合物、其制备方法及含有该组合物的胶囊。

通过摄取适量、特定的脑营养和调节因子来促进人脑发育和脑部生理代谢、完善思维活动，以达到食物补脑和养脑的目的，增强大脑皮层的兴奋性和氧化应激抑制能力，保持智力灵敏，延缓大脑衰老，辅助提升脑力记忆功能。

为达到以上目的，本发明采取的技术方案是：

一种具有辅助改善记忆力功能的组合物，由以下组分按重量分数组成：

DHA藻油40-55份，磷脂酰丝氨酸30-40份，红花籽油10-20份，虾青素油5-8份。

在上述方案的基础上，所述的具有辅助改善记忆力功能的组合物，由以下组分按重量分数组成：

DHA藻油45份，磷脂酰丝氨酸33份，红花籽油14份，虾青素油8份。

为了提高本发明组合物的效果，所述DHA藻油由以下方法制备而成：

1)富油微藻原料预处理：向富油裂殖壶藻干粉中加入2-4倍量水(w/w)，浓盐酸调节PH至1-2，搅拌均匀，分别于-20℃温度下冷冻30-40min、45℃温度下溶解40-50min，反复冻融2-3次；再加入初始藻干粉2倍量水(w/w)，6MNaOH调节PH至12-13，超声功率为120W，工作时间20s，间隔时间15s，工作40-60次，4-10℃条件下进行超声震荡破壁处理；然后再加入超声破壁处理后藻泥溶液等体积纯净水，水洗1-2次，收集非水相预处理湿藻泥，50-60℃热风循环干燥至含水量不超过10％，得预处理藻泥干料；

2)油脂提取：向步骤1)所得预处理藻泥干料中加入1-2倍量95％乙醇(w/v)，搅拌均匀后，迅速转移至超临界CO₂萃取柱内，萃取柱环境温度控制在35-45℃，萃取柱内压力控制在35-40MPa，待温度、压力平稳时，控制CO₂流速1.6-1.8L/min开始萃取回收，提取时间为2-3h，收集萃取毛油；

3)DHA富集纯化：向步骤2)所得毛油中加入6-8倍量0.5M KOH-CH₃OH溶液(w/v)，60℃加热搅拌至完全融合，再加入初始毛油2-3倍量石油醚(w/v)，搅拌均匀后静置15-20min，分离收集下层滤液，浓盐酸调节PH至1-2，之后加入初始毛油6-8倍量石油醚(w/v)，静置25-30min，收集醚层溶液减压浓缩至完全去除石油醚，得游离油脂；然后迅速加入游离油脂10-15倍量12％尿素乙醇溶液(w/v)，搅拌均匀后于0℃条件下冬化16-20h；冬化结束后迅速抽滤，收集富集了不饱和脂肪酸DHA的滤液；向滤液内加入初始游离油脂2-4倍量纯净水(w/v)，浓盐酸调节PH至中性，加入初始游离油脂2-4倍量石油醚(w/v)，静置收集醚层，用纯净水洗涤1-2次，收集醚层，加入醚层溶液体积2-3％的无水硫酸钠(v/w)，除水2-4h后进行减压蒸馏收集富集DHA 藻油；

4)DHA藻油成品精制：向步骤3)所得富集DHA藻油中加入0.02％维生素E(w/v)，0.015％维生素C棕榈酸酯(w/v)，于4℃温度下冬化8-12h，得浅黄色精制DHA藻油。

一种如上所述的具有辅助改善记忆力功能的组合物的制备方法，具体步骤如下：

将DHA藻油、磷脂酰丝氨酸、虾青素油、红花籽油按组份配比投料于低温高压匀质机中，于15-20℃、30-35MPa条件下匀质。匀质为两次均质，第一次6000-8000r/min匀质10-15min，第二次8000-10000r/min匀质5-8min。

为了使用方便，本发明的组合物可以制备成胶囊，其中，上述的具有辅助改善记忆力功能的组合物作为胶囊的内容物；制备方法为：

将内容物填充入软胶囊，最后在低温(20-30℃)、低湿(相对湿度22％-28％)条件下干燥至含水量在6％-8％。

本发明的优点在于：

本发明复合物配伍成分的来源及性质如下：

DHA藻油：科学研究表明来自深海鱼油中的W-3不饱和脂肪酸(DHA、EPA)有助于脑细胞中氧的进入和二氧化碳的逸出，对于改善大脑的发育过程，预防和治疗神经性和精神性等脑部疾病，延缓大脑的衰老过程均具有非常重要的作用。日本的营养学家研究发现，人体如缺少不饱和脂肪酸，记忆、思维能力则难以处于正常状态。

DHA主要存在于磷脂酰乙醇胺和磷脂酰丝氨酸的组分中，而磷脂酰乙醇胺又是神经细胞膜的主要磷脂组成。随着人们年龄的增长，大脑中DHA含量相应减少，因而会产生健忘和痴呆等现象，DHA可以活化脑神经细胞、消除体内自由基，有助于推迟脑细胞老化、保持脑细胞活力，补充DHA可防止和延缓衰老过程。现在研究广泛认可神经元的发育和突触的可塑性需要DHA，这点可以从阿尔兹海默病(AD)病发生后脑磷脂中DHA含量降低得到验证。

研究发现鱼油来源DHA是乙酯型，微藻来源DHA是甘油三酯型，乙酯DHA在人体的吸收、代谢效率要低的多，并且在代谢过程中还会产生氧化压力，给人体带来不利影响。相对于鱼油DHA，微藻DHA更容易被人体吸收及代谢，生物利用度高，资源稳定，纯天然、安全的植物性来源，不含鱼腥味。DHA藻油自微藻中提取，其生产技术、安全性及在食品、药品等领域的应用，在国内已经成为了热点。超临界萃取油技术逐渐取代传统的有机溶剂提取物方式，提高了制品的安全性。

因此，本发明采用现代提取技术从富油微藻裂殖壶藻中精炼出藻油DHA，作为本发明复合物软胶囊主要脑营养及活性成分配伍使用。

磷脂酰丝氨酸：科学家在大豆磷脂中分离出一种特殊氨基酸物质磷脂酰丝氨酸，磷脂酰丝氨酸在临床上主要用于治疗脑衰老，近几年更以“脑专一性营养物质”引起大家的广泛关注。实验证实，磷脂酰丝氨酸可促进氧与营养物质进入大脑细胞，同时刺激“多巴胺”(一种非常重要的男神经传递质)的分泌。在改善大脑功能方面的作用如信号传导、分泌小泡的释放及细胞之间的信息传递也已经得到验证。此外，磷脂酰丝氨酸相关研究也发现，补充DHA可以促进磷脂酰丝氨酸的积累，从而发挥抑制神经细胞死亡的功能。

研究表明，给患有AD的病人口服磷脂酰丝氨酸能减缓甚至逆转痴呆或者与衰老相关的学***上可以起到保护神经细胞的作用，进一步肯定了磷脂酰丝氨酸具有促进学习、增强记忆和改善老年性疾病的作用。

因此，选用磷脂酰丝氨酸作为本发明复合物软胶囊配伍成分中重要的协同提升活性物。

虾青素：虾青素是类胡萝卜素的含氧衍生物，能有效地淬灭活性氧，具有较高的营养和药用价值。美国国立研究院的Brandon K.Harvey教授最新的一篇研究成果表明，虾青素能够有效地降低成年大白鼠中由于缺血性脑损伤引起的伤害，其作用机制为阻止脑部的氧化应激反应，减少谷氨酸盐的释放，抑制细胞凋亡。国内相关领域研究表明，虾青素对缺血性小鼠显示显著的神经保护作用，对改善血管痴呆症记忆发挥有益的作用；虾青素对丙烯酰胺(一种积蓄性的神经毒素)引起的海马神经细胞抗氧化酶***的损伤具有一定的修复作用，对丙烯酰胺作用下的海马神经细胞线粒体损伤具有保护作用。

临床医学研究表明，虾青素具有预防动脉硬化、冠心病和缺血性脑损伤等心脑血管疾病的作用。此外研究还发现，虾青素能穿过动物的血-脑屏障，在屏障外产生抗氧化活性，可有效预防和治疗帕金森综合症等神经性疾病，从而可发挥延缓衰老、保护大脑细胞的作用。

因此，选用虾青素作为本发明复合物软胶囊配伍成分中重要的调节因子，可起到保护或修复大脑细胞因氧化应激反应所带来的损害。

红花籽油：红花籽油富含具有生命活性的天然维生素E，是所有天然植物中含量最高的，此外其主要成分为亚油酸，也是天然已知植物中含量最高的。亚油酸在体内可以合成其他两种必须的不饱和脂肪酸(亚麻酸、花生四烯酸)，所以亚油酸是人体最最重要的不饱和脂肪酸，是生命的基础物质，参与脂质代谢，预防心脑血管疾病。现代研究结果表明，红花籽油可以明显提高线粒体抑制脂质过氧化的能量，从而改善线粒体膜流动性、膨胀度和ATP酶活性，通过亚细胞器线粒体途径起增强细胞抗氧化能力的作用。实验证明，长期食用红花籽油具有降血脂、软化血管、稳定血压以及促进微循环的作用。

因此，本发明复合物软件囊中的油基配伍成分选用红花籽油，可起到基础调节脂质代谢的作用，使其他脑营养活性成分更好的发挥作用。

本发明的技术优点在于：

本发明专注于海洋源天然营养素及功能活性因子的开发与利用。汲取广阔生命摇篮中的精华，富集产生于微藻生物体中，利用现代技术手段，高效地提炼出高稳定性的生物大分子不饱和脂肪酸藻油DHA，以高生物效价的形式应用于本发明复合物口服类产品中。

由于DHA在加工过程中，易被氧化，所以本发明所制备的DHA藻油中添加了抗氧化剂，此外本发明组合物配伍成分也具有超强的抗氧化性，因此本发明技术方案可大大提高DHA的稳定性，提高其生物效价。此外，本发明所述DHA藻油制备工艺中，采用反复冻融法结合低温超声震荡法对富油微藻进行破壁预处理粗炼，再近一步进行低温超临界萃取油脂，最大程度的保持了DHA分子机构的稳定性，并提高其有效收率。富油基料预处理采用了酸炼反复冻融和碱炼超声震荡组合的方法，一方面可大大提高裂殖壶藻细胞破壁程度，同时也进行了初步油脂溶出，提升后续工艺油脂提取率及效率，另一方面低温条件也保障了目标油脂成分的稳定性、有效收率；在总油脂提炼中采用了最新成熟的超临界萃取技术，获得的毛油不含萃取剂，色泽气味好，由于是低温萃取，不会破坏目标油脂的生理活性和有效含量，效率高、安全，大大降低了有机溶剂的使用量，产业化更环保；在DHA富集纯化工艺中采用了尿素包合结合冬化的方法，不仅提高了目标产物藻油DHA含量及纯度，也最大程度的保持了有效成分的稳定性，无助剂残留，保障了目标产物的品质。

本发明复合物配伍理论体现了利用现代研究活性成分及脑营养素最新研究成果，对各种脑营养素不饱和脂肪酸及生物活性因子抗氧化成分进行合理配伍，克服了单方改善记忆力产品的缺陷，从养护脑细胞基础开始，强化整体调理，重建健康大脑。

具体实施方式

实施例1

一种DHA藻油的制备方法，具体步骤如下：

1)微藻原料预处理：向裂殖壶藻干粉中加入2倍量水(w/w)，浓盐酸调节PH至1，搅拌均匀，分别于-20℃温度下冷冻40min、45℃温度下溶解40min，反复冻融3次；再加入初始藻干粉2倍量水(w/w)，6MNaOH调节PH至12，超声功率为120W，工作时间20s，间隔时间15s，工作40次，8℃条件下进行超声震荡破壁处理；然后再加入超声破壁处理后藻泥溶液等体积纯净水，水洗2次，收集非水相预处理湿藻泥，50℃热风循环干燥至含水量不超过10％，得预处理藻泥干料；

2)油脂提取：向步骤1)所得预处理藻泥干料中加入2倍量95％乙醇(w/v)，搅拌均匀后，迅速转移至超临界CO₂萃取柱内，萃取柱环境温度控制在38℃，萃取柱内压力控制在40MPa，待温度、压力平稳时，控制CO₂流速1.6L/min开始萃取回收，提取时间为2h，收集萃取毛油；

3)DHA富集纯化：向步骤2)所得毛油中加入6倍量0.5M KOH-CH₃OH溶液(w/v)，60℃加热搅拌至完全融合，再加入初始毛油2倍量石油醚(w/v)，搅拌均匀后静置15min，分离收集下层滤液，浓盐酸调节PH至1，再加入初始毛油8倍量石油醚(w/v)，静置25min，收集醚层溶液减压浓缩至完全去除石油醚，得游离油脂；然后迅速加入游离油脂10倍量12％尿素乙醇溶液(w/v)，搅拌均匀后于0℃条件下冬化18h；冬化结束后迅速抽滤，收集富集了不饱和脂肪酸DHA的滤液；向滤液内加入初始游离油脂4倍量纯净水(w/v)，浓盐酸调节PH至中性，加入初始游离油脂3倍量石油醚(w/v)，静置收集醚层，用纯净水洗涤2次，收集醚层，加入醚层溶液体积2％的无水硫酸钠(v/w)，除水4h后进行减压蒸馏收集富集DHA藻油；

4)DHA藻油成品精制：向步骤3)所得富集DHA藻油中加入0.02％维生素E(w/v)和0.015％维生素C棕榈酸酯(w/v)，于4℃温度下冬化8h，得浅黄色精制DHA藻油。

所述精制DHA藻油DHA含量为86.2％，DHA总提取率为15.3％，颜色较浅，具有微藻特有的藻香味，无鱼腥味。

所述裂殖壶藻干粉采购自内蒙古金达威药业有限公司。

实施例2

一种具有辅助改善记忆力功能的DHA藻油复合物软胶囊，内容物由以下重量份数的组分制备而成：DHA藻油45份，磷脂酰丝氨酸33份，红花籽油14份，虾青素油8份。所述磷脂酰丝氨酸采购自韩国斗山集团(Doosan Corporation)，所述虾青素油采购自美国西亚诺泰克公司(cyanotech)，所述红花籽油采购自邯郸晨光珍品油脂有限公司。

具体制备方法如下：

1)将DHA藻油、磷脂酰丝氨酸、虾青素油、红花籽油按组份配比投料于低温高压匀质机中，于20℃、35MPa条件下匀质两次，第一次6000r/min匀质15min，第二次8000r/min匀质8min，得藻油复合物乳化液(胶囊内容物)。

2)将步骤1)所得乳化液按500mg/粒规格计量填充软胶囊。最后进行低温(30℃)低湿(相对湿度28％)干燥至干丸含水量在8％、拣丸得本发明具有辅助改善记忆力的DHA藻油复合物软胶囊制剂。

实施例3

一种具有辅助改善记忆力功能的DHA藻油复合物软胶囊，内容物由以下重量份数的组分制备而成：DHA藻油40份，磷脂酰丝氨酸40份，红花籽油15份，虾青素油5份。所述磷脂酰丝氨酸采购自韩国斗山集团(Doosan Corporation)，所述虾青素油采购自美国西亚诺泰克公司(cyanotech)，所述红花籽油采购自邯郸晨光珍品油脂有限公司。

具体制备方法如下：

1)将DHA藻油、磷脂酰丝氨酸、虾青素油、红花籽油按组份配比投料于低温高压匀质机中，于20℃、35MPa条件下匀质两次，第一次7000r/min匀质12min，第二次9000r/min匀质6min，得藻油复合物乳化液(胶囊内容物)。

2)将步骤1)所得乳化液按600mg/粒规格计量填充软胶囊。最后进行低温(28℃)低湿(相对湿度26％)干燥至干丸含水量在8％、拣丸得本发明具有辅助改善记忆力的DHA藻油复合物软胶囊制剂。

实施例4

一种具有辅助改善记忆力功能的DHA藻油复合物软胶囊，内容物由以下重量份数的组分制备而成：DHA藻油55份，磷脂酰丝氨酸30份，红花籽油10份，虾青素油5份。所述磷脂酰丝氨酸采购自韩国斗山集团(Doosan Corporation)，所述虾青素油采购自美国西亚诺泰克公司(cyanotech)，所述红花籽油采购自邯郸晨光珍品油脂有限公司。

具体制备方法如下：

1)将DHA藻油、磷脂酰丝氨酸、虾青素油、红花籽油按组份配比投料于低温高压匀质机中，于20℃、35MPa条件下匀质两次，第一次8000r/min匀质10min，第二次10000r/min匀质5min，得藻油复合物乳化液(胶囊内容物)。

将步骤1)所得乳化液按550mg/粒规格计量填充软胶囊。最后进行低温(28℃)低湿(相对湿度30％)干燥至干丸含水量在8％、拣丸得本发明具有辅助改善记忆力的DHA藻油复合物软胶囊制剂。

辅助改善记忆力功效及安全性评价：

实验动物：SPF级雌性昆明种小鼠，3-4周龄，20±2克；300只小鼠，随机分成3批，每批100只分别进行跳台试验、避暗试验、水迷宫试验，每批100只随机分为10组，每组10只作为阴性对照组及各受试物不同剂量试验组小鼠。

实验物料：

全价颗粒鼠饲料、无菌水、花生油、受试物包括：本发明实施例2制备的胶囊内容物1(DHA藻油45份，磷脂酰丝氨酸33份，红花籽油14份，虾青素油8份)、对比受试物2(DHA藻油45份、花生油55份)、对比受试物3(花生油45份，磷脂酰丝氨酸33份，红花籽油14份，虾青素油8份)

实验灌胃剂量：

根据人体推荐服用量，分别取1.7g、3.3g、10g胶囊内容物及对比受试物溶于100ml花生油中，灌胃量为10ml/kg.bw，得低剂量A：0.17g/kg.bw受试物，中剂量B：0.33g/kg.bw受试物，高剂量C：1g/kg.bw受试物

实验组：

阴性对照组：灌胃10ml/kg.bw花生油

低剂量A1组：灌胃0.17g/kg.bw本发明胶囊内容物1

低剂量A2组：灌胃0.17g/kg.bw对比受试物2

低剂量A3组：灌胃0.17g/kg.bw对比受试物3

中剂量B1组：灌胃0.33g/kg.bw本发明胶囊内容物1

中剂量B2组：灌胃0.33g/kg.bw对比受试物2

中剂量B3组：灌胃0.33g/kg.bw对比受试物3

高剂量C1组：灌胃1g/kg.bw本发明胶囊内容物1

高剂量C2组：灌胃1g/kg.bw对比受试物2

高剂量C3组：灌胃1g/kg.bw对比受试物3

实验方法：

每天灌胃一次，连续灌胃30天，末次灌胃后次日进行跳台试验、避暗试验、水迷宫试验。实验期间各组小鼠正常摄食、自由饮水。

跳台实验：将小鼠放入反应箱内适应3min，随即通以36V交流电刺激小鼠。然后将小鼠放在绝缘平台上，记录各小鼠第一次跳下平台的潜伏期、5min内每鼠跳下平台的错误次数和各组跳下平台的动物数(记忆获得)。24h或48h后重复测试，记录第一次跳下平台的潜伏期、3min内跳下平台的错误次数和各组跳下平台的动物数(记忆巩固)。末次灌胃后停止训练，继续饲养4天进行消退试验(记忆再现)。

避暗实验：将小鼠面部背向洞口放入明室，同时启动计时器，记录每鼠进入暗室的潜伏期(每只小鼠自放入明室至进入暗室遭电击的间隔时间)、5min内进入暗室的错误次数和各组金融暗室的动物数(记忆获得)。24h后重复测试，记录每鼠进入暗室的潜伏期、5min内进入暗室的错误次数和各组金融暗室的动物数(记忆巩固)。末次灌胃后停止训练，继续饲养4天进行消退试验(记忆再现)。

水迷宫实验：小鼠训练时间限定为120s，在120s内未到达终点的小鼠均记为120s.每天训练一次，连续训练5天，训练期间继续给予受试物。最后以5天的总学习成绩进行评价，计算各组5天到达终点的总时间、总错误次数和各组2min内到达终点的动物数。末次灌胃后继续饲养5天进行消退试验(记忆再现)。

结果如表1、表2和表3所示；

表1：跳台实验结果

注：与阴性对照组相比*P<0.05,**P<0.01

表2：避暗实验结果

注：与阴性对照组相比*P<0.05,**P<0.01

表3：水迷宫实验结果

注：与阴性对照组相比*P<0.05,**P<0.01

结果分析：

以上实验结果显示，连续经口灌胃给予小鼠低、中、高三个不同剂量的本发明实施例2制备的胶囊内容物受试物30天，跳台实验、避暗实验均呈阳性结果，其中本发明受试物中、高剂量实验组水迷宫实验也是阳性结果；与阴性对照组相比对小鼠记忆巩固、记忆再现具有显著的差异；对比受试物中、高剂量实验组在跳台实验、避暗实验、水迷宫实验中也呈现了部分阳性结果。表明本发明DHA藻油复合物软胶囊制剂具有辅助改善小鼠记忆的功能；与对比受试物实验组比较，本发明受试物配伍合理、稳定，改善记忆力效果突出；给予各剂量受试物灌胃小鼠实验训练期间状态良好，表明本发明具有辅助改善记忆力DHA藻油复合物软胶囊制剂安全、无不良适应症。

上述实施方案为本发明最佳的实施方案，但本发明的实施方案并不受上述实施方案的限制，其他的任何不违背本发明原理的条件下，可以通过改变参数的形式所产生的实施例，都包含于本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种具有辅助改善记忆力功能的组合物，其特征在于，由以下组分按重量分数组成：

DHA藻油40-55份，磷脂酰丝氨酸30-40份，红花籽油10-20份，虾青素油5-8份；

所述DHA藻油由以下方法制备而成：

1)料预处理：向裂殖壶藻干粉中加入2-4倍量水(w/w)，浓盐酸调节pH至1-2，搅拌均匀，分别于-20℃温度下冷冻30-40min、45℃温度下溶解40-50min，反复冻融2-3次；再加入初始藻干粉2倍量水(w/w)，6M NaOH调节pH至12-13，超声功率为120W，工作时间20s，间隔时间15s，工作40-60次，4-10℃条件下进行超声震荡破壁处理；然后再加入超声破壁处理后藻泥溶液等体积纯净水，水洗1-2次，收集非水相预处理湿藻泥，50-60℃热风循环干燥至含水量不超过10％，得预处理藻泥干料；

2)油脂提取：向步骤1)所得预处理藻泥干料中加入1-2倍量95％乙醇(w/v)，搅拌均匀后，迅速转移至超临界CO₂萃取柱内，萃取柱环境温度控制在35-45℃，萃取柱内压力控制在35-40MPa，待温度、压力平稳时，控制CO₂流速1.6-1.8L/min开始萃取回收，提取时间为2-3h，收集萃取毛油；

3)DHA富集纯化：向步骤2)所得毛油中加入6-8倍量(w/v)0.5M KOH-CH₃OH溶液，60℃加热搅拌至完全融合，再加入初始毛油2-3倍量石油醚(w/v)，搅拌均匀后静置15-20min，分离收集下层滤液，浓盐酸调节pH至1-2，之后加入初始毛油6-8倍量石油醚(w/v)，静置25-30min，收集醚层溶液减压浓缩至完全去除石油醚，得游离油脂；然后迅速加入游离油脂10-15倍量12％尿素乙醇溶液(w/v)，搅拌均匀后于0℃条件下冬化16-20h；冬化结束后迅速抽滤，收集富集了不饱和脂肪酸DHA的滤液；向滤液内加入初始游离油脂2-4倍量纯净水(w/v)，浓盐酸调节pH至中性，加入初始游离油脂2-4倍量石油醚(w/v)，静置收集醚层，用纯净水洗涤1-2次，收集醚层，加入醚层溶液体积2-3％的无水硫酸钠(w/v)，除水2-4h后进行减压蒸馏收集富集DHA藻油；

4)DHA藻油成品精制：向步骤3)所得富集DHA藻油中加入0.02％维生素E(w/v)和0.015％维生素C棕榈酸酯(w/v)，于4℃温度下冬化8-12h，得浅黄色精制DHA藻油。

2.根据权利要求1所述的具有辅助改善记忆力功能的组合物，其特征在于，由以下组分按重量分数组成：

DHA藻油45份，磷脂酰丝氨酸33份，红花籽油14份，虾青素油8份。

3.一种根据权利要求1或2所述的具有辅助改善记忆力功能的组合物的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

将DHA藻油、磷脂酰丝氨酸、虾青素油、红花籽油按组分配比投料于低温高压匀质机中，于15-20℃、30-35MPa条件下匀质。

4.一种根据权利要求3所述的具有辅助改善记忆力功能的组合物的制备方法，其特征在于，匀质为两次均质，第一次6000-8000r/min匀质10-15min，第二次8000-10000r/min匀质5-8min。

5.一种含有权利要求1或2所述的具有辅助改善记忆力功能的组合物的胶囊，其特征在于：所述组合物作为胶囊的内容物。

6.一种根据权利要求5所述的胶囊的制备方法，其特征在于：具体的步骤为：

将内容物填充入软胶囊，最后在20-30℃的低温、相对湿度22％-28％的低湿条件下干燥至含水量在6％-8％。