CN105475129A - 一种竹叶兰组培快繁的方法 - Google Patents
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Abstract
一种竹叶兰组培快繁的方法，其特征在于：步骤1外植体材料选择与消毒：选取高位芽为外植体，消毒备用；步骤2不定芽的诱导培养：高位芽顶部切除，接种到不定芽诱导培养基上，诱导出不定芽；步骤3丛生芽的增殖培养：将不定芽接种到丛生芽诱导培养基上，获得丛生芽；再将丛生芽接种到增殖培养基上，获得丛生芽团块；步骤4壮苗和生根培养：将步骤3获得的丛生芽大团块分切成小团块，再与步骤3获得的丛生芽小团块接种到壮苗和生根培养基上，丛生芽小团块生长粗壮并长出新根。步骤5炼苗与驯化移栽：当苗长至株高4-8厘米，根1-3条时，进行炼苗培养，然后取出，浸泡在甲基托布津药液中，最后用苔藓移栽；降低了竹叶兰继代增殖培养中发生变异的几率。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域，特别是一种竹叶兰组培快繁的方法。
背景技术
竹叶兰(AluminagraminifoliaHochr)系兰科竹叶兰属多年生草本植物，主要分布于东南亚地区，在我国产于福建、江西、浙江、广东、海南、广西、四川、贵州、湖南、云南等地。其花朵美丽清雅，有淡香味，花期长，观赏价值高，可盆栽，也可用于庭院绿化。竹叶兰还具有很高的药用价值，全草入药．具有调补气血、清热解毒、祛风湿、消炎、利尿之功效。可用于治疗风湿性腰腿痛、胃痛、***、毒蛇咬伤、食物中毒等。因此，充分开发和利用竹叶兰的观赏和药用价值具有广阔的市场前景。
竹叶兰种子发育不全，无胚乳，直播不萌发，在野外需与共生菌共生才能萌发且发芽率极低。因此，传统的竹叶兰人工繁殖手段只能采取分株繁殖、扦插繁殖和高位芽繁殖。其中，高位芽繁殖可采用以下两种方法：待开花结实的茎枝或受损的老枝上长出高位芽长至10厘米左右时，将其摘下并***育苗基质的苗床中，待根长出后便可移栽；也可让高位芽与母株一起生长，待长出气生根后再摘下移栽。传统的人工繁殖方法一年繁殖1-2次且需要大量栽培2-3年的母株，故其繁殖成本高，效率低，无法满足生产需要。当前，已有利用植物组织培养技术繁育竹叶兰种苗的报道。陈之林等（2006年）利用竹叶兰种子进行离体培养，成功获得竹叶兰原球茎和试管苗。张文珠等（2011年）以竹叶兰种子为外植体进行无菌播种，也成功诱导出原球茎并获得再生植株，建立了以种子为外植体的组培快繁体系。但是，种子无菌播种获得的试管苗是实生苗，其性状易发生分离，不能获得遗传物质一致的种苗。且以原球茎发生方式组培快繁种苗,经过脱分化和再分化过程，种苗易发生遗传变异，通常变异率为8%左右。
发明内容
本发明的目的是针对以上现有技术的不足，提供一种利用竹叶兰高位芽作为外植体，采用丛生芽发生方式进行一种竹叶兰组培快繁的方法。
本发明的技术方案是：其特征在于：
步骤1外植体材料选择与表面消毒：
以高位芽距离栽培基质上表面10厘米以上且长度3-5厘米饱满的高位芽为选取材料，切下高位芽作为外植体，先在自来水下冲洗干净，之后在无菌条件下，用70-75%酒精消毒30-60秒，无菌水冲洗一次，再用0.1%升汞消毒8-12分钟，最后无菌水冲洗3-5次，无菌滤纸吸干备用；
步骤2不定芽的诱导培养：
在无菌条件下，先将消毒好的高位芽顶部1-3厘米部位切除，再把剩下部分按照基部朝下方式接种到含植物生长调节剂6-BA2.0-3.0mg/L+NAA0.1mg/L组合或TDZ0.2-0.3mg/L+NAA0.1mg/L组合的MS不定芽诱导培养基上，在培养室内光照培养,保持光照强度1500-2000LX,光照时间每天12小时，温度24-26℃,45-60天后，切除顶部的高位芽基部诱导出不定芽；
步骤3丛生芽的增殖培养：
在无菌条件下，将步骤2获得的产物接种到含植物生长调节剂6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L组合或TDZ0.2mg/L+NAA0.1mg/L组合的MS丛生芽诱导培养基上，在培养室内光照培养,保持光照强度2000-2500LX,光照时间每天12小时,温度24-26℃,45-50天后，获得丛生芽；再将上述丛生芽接种到含植物生长调节剂6-BA0.5-1.0mg/L+NAA0.1mg/L组合或TDZ0.05-0.1mg/L+NAA0.1mg/L组合的MS丛生芽增殖培养基上，在培养室内光照培养,保持光照强度2000-2500LX,光照时间每天12小时,温度24-26℃,45-50天后，获得大量的丛生芽团块；
步骤4壮苗和生根培养：
在无菌条件下，先将步骤3获得的苗4株以上的丛生芽大团块分切成苗2-4株的丛生芽小团块，再与步骤3直接获得的苗2-4株的丛生芽小团块一起接种到含IBA0.5mg/L或NAA0.1mg/L的MS+香蕉泥50g/L+活性碳1.0g/L壮苗和生根培养基上，在培养室内光照培养,保持光照强度2000-2500LX,光照时间每天16小时,温度24-26℃,45-60天后，苗2-4株的丛生芽小团块生长粗壮并长出新根；
步骤5组培苗的炼苗与驯化移栽：
当步骤4获得的苗2-4株的丛生芽小团块中苗长至株高4-8厘米，根1-3条时即可移入炼苗室进行7-14天炼苗培养，以提高其环境适应能力。炼苗结束后，先从培养瓶中取出上述丛生芽团块，洗净根部培养基，再浸泡在稀释800倍的甲基托布津药液中15-20分钟，最后用苔藓基质进行移栽。
本发明优点在于：
由于本专利采用高位芽作为外植体，能够确保外植体材料遗传物质均一性，从而保证了竹叶兰组培快繁种苗的遗传稳定性。且高位芽再生能力强，受栽培基质中微生物影响小，表面消毒效果好，容易建立无菌系；由于本专利采用丛生芽发生方式组培快繁竹叶兰种苗，不经过脱分化和再分化过程，从而降低了竹叶兰继代增殖培养中发生变异的几率。
本发明通过以高位芽为外植体、采用丛生芽发生方式、缩短诱导时间、简化培养过程等技术措施，可降低组培苗变异率，节约组培苗生产成本，提高生产效率和利润，因此本发明的竹叶兰组培快繁的方法繁殖速度快，种苗变异率低，生产成本低。
具体实施方式
实施例一：
本发明竹叶兰组培快繁的方法包括以下步骤：
步骤1外植体材料选择与表面消毒：
以高位芽距离栽培基质上表面10厘米以上且长度3-5厘米饱满的高位芽为选取材料，切下高位芽作为外植体，先在自来水下冲洗干净，之后在无菌条件下，用70-75%酒精消毒30-60秒，无菌水冲洗一次，再用0.1%升汞消毒8-12分钟，最后无菌水冲洗3-5次，无菌滤纸吸干备用。
步骤2不定芽的诱导培养：
在无菌条件下，先将消毒好的高位芽顶部1-3厘米部位切除，再把剩下部分按照基部朝下方式接种到含植物生长调节剂6-BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L组合的MS培养基上，在培养室内光照培养,保持光照强度1500-2000LX,光照时间每天12小时，温度24-26℃,45-60天后，切除顶部的高位芽基部可诱导出不定芽。
步骤3丛生芽的增殖培养：
在无菌条件下，将步骤2获得的产物接种到含植物生长调节剂6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L组合的MS培养基上，在培养室内光照培养,保持光照强度2000-2500LX,光照时间每天12小时,温度24-26℃,45-50天后，获得丛生芽；再将上述丛生芽接种到到含植物生长调节剂6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L组合的MS培养基上，在培养室内光照培养,保持光照强度2000-2500LX,光照时间每天12小时,温度24-26℃,45-50天后，平均增殖系数可达3.2左右。
步骤4壮苗和生根培养：
在无菌条件下，先将步骤3获得的苗4株以上的丛生芽大团块分切成苗2-4株的丛生芽小团块，再与步骤3直接获得的苗2-4株的丛生芽小团块一起接种到含IBA0.5mg/L或NAA0.1mg/L的MS+香蕉泥50g/L+活性碳1.0g/L培养基上，在培养室内光照培养,保持光照强度2000-2500LX,光照时间每天16小时,温度24-26℃,45-60天后，2-4株的丛生芽团块生长粗壮并长出新根。
步骤5组培苗的炼苗与驯化移栽：
当步骤4获得的苗2-4株的丛生芽团块中苗长至株高4-8厘米，根1-3条时即可移入炼苗室进行7-14天炼苗培养，以提高其环境适应能力。炼苗结束后，先从培养瓶中取出上述丛生芽团块，洗净根部培养基，再浸泡在稀释800倍的甲基托布津药液中15-20分钟，最后用苔藓基质进行移栽。
实施例二：
步骤1外植体材料选择与表面消毒：
以高位芽距离栽培基质上表面10厘米以上且长度3-5厘米饱满的高位芽为选取材料，切下高位芽作为外植体，先在自来水下冲洗干净，之后在无菌条件下，用70-75%酒精消毒30-60秒，无菌水冲洗一次，再用0.1%升汞消毒8-12分钟，最后无菌水冲洗3-5次，无菌滤纸吸干备用。
步骤2不定芽的诱导培养：
在无菌条件下，先将消毒好的高位芽顶部1-3厘米部位切除，再把剩下部分按照基部朝下方式接种到含植物生长调节剂TDZ0.3mg/L+NAA0.1mg/L组合的MS培养基上，在培养室内光照培养,保持光照强度1500-2000LX,光照时间每天12小时，温度24-26℃,45-60天后，切除顶部的高位芽基部可诱导出不定芽。
步骤3丛生芽的增殖培养：
在无菌条件下，将步骤2获得的产物接种到含植物生长调节剂TDZ0.2mg/L+NAA0.1mg/L组合的MS培养基上，在培养室内光照培养,保持光照强度2000-2500LX,光照时间每天12小时,温度24-26℃,45-50天后，获得的丛生芽；再将上述丛生芽接种到到含植物生长调节剂TDZ0.1mg/L+NAA0.1mg/L的MS培养基上，在培养室内光照培养,保持光照强度2000-2500LX,光照时间每天12小时,温度24-26℃,45-50天后，平均增殖系数可达3.5左右。
步骤4壮苗和生根培养：
在无菌条件下，先将步骤3获得的苗4株以上的丛生芽大团块分切成苗2-4株的丛生芽小团块，再与步骤3直接获得的苗2-4株的丛生芽小团块一起接种到含IBA0.5mg/L或NAA0.1mg/L的MS+香蕉泥50g/L+活性碳1.0g/L培养基上，在培养室内光照培养,保持光照强度2000-2500LX,光照时间每天16小时,温度24-26℃,45-60天后，2-4株的丛生芽团块生长粗壮并长出新根。
步骤5组培苗的炼苗与驯化移栽：
当步骤4获得获得的苗2-4株的丛生芽小团块中苗长至株高4-8厘米，根1-3条时即可移入炼苗室进行7-14天炼苗培养，以提高其环境适应能力。炼苗结束后，先从培养瓶中取出所述组培苗，洗净根部培养基，再浸泡在稀释800倍的甲基托布津药液中15-20分钟，最后用苔藓基质进行移栽。
由于本发明采用较高浓度细胞***素6-BA2.0-3.0mg/L与低浓度植物生长激素NAA0.1mg/L组合或新型高效植物生长调节剂TDZ0.2-0.3mg/L与植物生长激素NAA0.1mg/L组合的MS培养基作为诱导高位芽产生不定芽的培养基，所以有效促进丛生芽诱导，缩短诱导时间；由于本发明采用较低浓度植物生长调节剂6-BA0.5-1.0mg/L和NAA0.1mg/L组合或TDZ0.05-0.1mg/L和NAA0.1mg/L组合的MS培养基作为增殖培养基，所以既能有效促进丛生芽增殖又能提高继代增殖所得丛生芽质量；由于本发明将壮苗培养与生根培养两过程合并成壮苗和生根一个过程，所以简化了培养过程；由于本发明采用IBA0.5mg/L或NAA0.1mg/L的MS+香蕉泥50g/L+活性碳1.0g/L培养基作为壮苗培养基并通过将苗4株以上的丛生芽大团块分切成苗2-4株的丛生芽小团块，来降低壮苗和生根过程接种密度，为丛生芽小团块中小苗生长提供充足养分和生长空间，所以能够有效够促丛生芽壮苗和生根。
本发明通过以高位芽为外植体、采用丛生芽发生方式、缩短诱导时间、简化培养过程等技术措施，可降低组培种苗变异率至3%以内，节约组培苗生产成本，提高生产效率和利润，因此本发明的竹叶兰组培快繁的方法繁殖速度快，种苗变异率低，生产成本低。
Claims (2)
1.一种竹叶兰组培快繁的方法，其特征在于：其特征在于：
步骤1外植体材料选择与表面消毒：
以高位芽距离栽培基质上表面10厘米以上且长度3-5厘米饱满的高位芽为选取材料，切下高位芽作为外植体，先在自来水下冲洗干净，之后在无菌条件下，用70-75%酒精消毒30-60秒，无菌水冲洗一次，再用0.1%升汞消毒8-12分钟，最后无菌水冲洗3-5次，无菌滤纸吸干备用；
步骤2不定芽的诱导培养：
在无菌条件下，先将消毒好的高位芽顶部1-3厘米部位切除，再把剩下部分按照基部朝下方式接种到含植物生长调节剂6-BA2.0-3.0mg/L+NAA0.1mg/L组合或TDZ0.2-0.3mg/L+NAA0.1mg/L组合的MS不定芽诱导培养基上，在培养室内光照培养,保持光照强度1500-2000LX,光照时间每天12小时，温度24-26℃,45-60天后，切除顶部的高位芽基部诱导出不定芽；
步骤3丛生芽的增殖培养：
在无菌条件下，将步骤2获得的产物接种到含植物生长调节剂6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L组合或TDZ0.2mg/L+NAA0.1mg/L组合的MS丛生芽诱导培养基上，在培养室内光照培养,保持光照强度2000-2500LX,光照时间每天12小时,温度24-26℃,45-50天后，获得丛生芽；再将上述丛生芽接种到到含植物生长调节剂6-BA0.5-1.0mg/L+NAA0.1mg/L组合或TDZ0.05-0.1mg/L+NAA0.1mg/L组合的MS丛生芽增殖培养基上，在培养室内光照培养,保持光照强度2000-2500LX,光照时间每天12小时,温度24-26℃,45-50天后，获得大量的丛生芽团块；
步骤4壮苗和生根培养：
在无菌条件下，先将步骤3获得的苗4株以上的丛生芽大团块分切成苗2-4株的丛生芽小团块，再与步骤3直接获得的苗2-4株的丛生芽小团块一起接种到含IBA0.5mg/L或NAA0.1mg/L的MS+香蕉泥50g/L+活性碳1.0g/L壮苗和生根培养基上，在培养室内光照培养,保持光照强度2000-2500LX,光照时间每天16小时,温度24-26℃,45-60天后，苗2-4株的丛生芽小团块生长粗壮并长出新根；
步骤5组培苗的炼苗与驯化移栽：
当步骤4获得的苗2-4株的丛生芽小团块中苗长至株高4-8厘米，根1-3条时即可移入炼苗室进行7-14天炼苗培养，以提高其环境适应能力。
2.炼苗结束后，先从培养瓶中取出上述丛生芽团块，洗净根部培养基，再浸泡在稀释800倍的甲基托布津药液中15-20分钟，最后用苔藓基质进行移栽。
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|---|---|
| CN (1) | CN105475129A (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105830928A (zh) * | 2016-05-05 | 2016-08-10 | 宁波大学 | 一种油点草组织培养与快速繁殖的方法 |
| CN107637494A (zh) * | 2017-10-20 | 2018-01-30 | 三明市农业科学研究院 | 一种提高文心兰组培苗移栽成活率的方法 |
| CN107646684A (zh) * | 2017-10-23 | 2018-02-02 | 广东省农业科学院环境园艺研究所 | 一种竹叶兰的培育方法及其应用 |
| CN110301355A (zh) * | 2019-07-31 | 2019-10-08 | 三明市农业科学研究院 | 一种墨兰组织培养方法 |
| CN114097609A (zh) * | 2021-10-21 | 2022-03-01 | 云南省热带作物科学研究所 | 一种植物组织培养时外植体灭菌方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102144566A (zh) * | 2011-03-30 | 2011-08-10 | 贵州省亚热带作物研究所 | 兴仁金线莲试管苗的培育方法 |
| CN102318560A (zh) * | 2011-09-01 | 2012-01-18 | 贵州省生物研究所 | 一种文心兰组培育苗的方法 |
| CN103718954A (zh) * | 2013-11-20 | 2014-04-16 | 苏州田园农业技术开发有限公司 | 铁皮石斛的高效快速繁殖方法 |
| CN103718952A (zh) * | 2013-11-20 | 2014-04-16 | 苏州田园农业技术开发有限公司 | 一种铁皮石斛的快速繁殖方法 |
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2015
- 2015-05-29 CN CN201510285360.5A patent/CN105475129A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102144566A (zh) * | 2011-03-30 | 2011-08-10 | 贵州省亚热带作物研究所 | 兴仁金线莲试管苗的培育方法 |
| CN102318560A (zh) * | 2011-09-01 | 2012-01-18 | 贵州省生物研究所 | 一种文心兰组培育苗的方法 |
| CN103718954A (zh) * | 2013-11-20 | 2014-04-16 | 苏州田园农业技术开发有限公司 | 铁皮石斛的高效快速繁殖方法 |
| CN103718952A (zh) * | 2013-11-20 | 2014-04-16 | 苏州田园农业技术开发有限公司 | 一种铁皮石斛的快速繁殖方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| SUPRIYA DAS等: "In Vitro propagation of Arundina graminifolia D.DON.hochr-A Bamboo Orchid", 《ASIAN JOURNAL OF PHARMACEUTICAL AND CLINICAL RESEARCH》 * |
| 张文珠: "竹叶兰的无菌播种快繁技术研究", 《热带农业科学》 * |
| 陆顺教: "秋石斛侧芽外植体消毒方法发的研究", 《基因组学与应用生物学》 * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105830928A (zh) * | 2016-05-05 | 2016-08-10 | 宁波大学 | 一种油点草组织培养与快速繁殖的方法 |
| CN105830928B (zh) * | 2016-05-05 | 2018-03-02 | 宁波大学 | 一种油点草组织培养与快速繁殖的方法 |
| CN107637494A (zh) * | 2017-10-20 | 2018-01-30 | 三明市农业科学研究院 | 一种提高文心兰组培苗移栽成活率的方法 |
| CN107646684A (zh) * | 2017-10-23 | 2018-02-02 | 广东省农业科学院环境园艺研究所 | 一种竹叶兰的培育方法及其应用 |
| CN110301355A (zh) * | 2019-07-31 | 2019-10-08 | 三明市农业科学研究院 | 一种墨兰组织培养方法 |
| CN114097609A (zh) * | 2021-10-21 | 2022-03-01 | 云南省热带作物科学研究所 | 一种植物组织培养时外植体灭菌方法 |
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