CN105418616A - 一种含有4-氨基吡唑结构的jak激酶抑制剂及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种含有4-氨基吡唑结构的JAK激酶抑制剂及其制备方法和应用，该系列化合物具有通式(Ⅰ)或(Ⅱ)所示的结构。本发明还提供了该类化合物的制备方法，及其在制备预防或治疗与炎症、肿瘤、血液相关疾病的药物中的应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种含有4-氨基吡唑结构的JAK激酶抑制剂及其制备方法和应用,属于有机化合物合成与医药应用技术领域。
背景技术
JAK激酶是一组细胞内的非受体的酪氨酸激酶，在炎症调节、血液生成、及肿瘤发生中起到了很重要的生理作用。在JAK-Stat信号通路中，JAK激酶作为一种重要的媒介将上游的信号因子如干扰素、细胞因子、生长因子、G蛋白偶联受体等反馈的生物信息传递到下游的信号通路中去从而调节基因的表达。JAK激酶含有4种亚型，即JAK1，JAK2，JAK3，TYK2.其中，JAK1和JAK3能够调节与免疫功能相关的白介素因子(ILs)，JAK2则能调节与骨髓细胞及红细胞生成相关的各种细胞因子和生长因子如巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、红细胞生成素(EPO)等，TYK2则主要调节与病毒及细菌感染相关的多种细胞因子如干扰素(INF)及各种白介素等。在临床疾病中，JAK2的表达异常会导致严重的骨髓增生瘤，JAK3的过度表达则会引发各种免疫***的疾病，如严重联合免疫缺陷(SCID)，TYK2的异常表达则会部分损害抗病毒和细菌的免疫力。
因此，JAK激酶抑制剂在血液紊乱、骨髓增生及免疫缺陷等疾病中作为一种非常重要的治疗方法。迄今为止，JAK激酶抑制剂上市的仍然不多。最早上市的是辉瑞(Pfizer)公司研发的托法替尼(Tofacitinib)于2012年被FDA批准上市用于治疗风湿性关节炎，继而Incyte公司研发的鲁索替尼(Ruxolitinib)于2013年上市用于治疗骨髓纤维化。礼来公司(Lilly)和Incyte公司共同研发的Baricitinib有望在2015年上市。尽管鲁索替尼和托法替尼的成功上市，但是这两种药物都具有严重的与免疫和血液相关的副作用。
为此我们以鲁索替尼作为先导化合物，在此基础上合成了一系列含有4-氨基吡唑环骨架的JAK激酶抑制剂。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种含有4-氨基吡唑结构的JAK激酶抑制剂，本发明还提供了上述化合物的制备方法和用途。
本发明的技术方案为：
一、含有4-氨基吡唑结构的JAK激酶抑制剂
本发明含有4-氨基吡唑结构的JAK激酶抑制剂，以及其光学异构体、非对映异构体和消旋体混合物，其药学上可接受的盐，溶剂合物或前药，具有如下通式I或Ⅱ所示的结构：
其中：
R1是氢、环烷基、烷基或芳基；
R2是氢、环烷基、烷基或芳基；
R3是氢、环烷烃、烷基或芳基；
芳杂环主要包括嘧啶环、吡咯并嘧啶环、嘌呤环、吡唑并嘧啶环、呋喃并嘧啶环、噻吩并嘧啶环或喹唑啉。
*是立体构型为S或R光学纯度或其消旋体。
优选的，R1是氢、C1-C6烷基、环丙烷、环戊烷或环己烷；R2是氢、C1-C6烷基、环丙烷、环戊烷或环己烷；R3是C1-C6烷基或芳基；
更为优选的，上述化合物是下列之一：
3-(4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环戊烷基丙腈(16a)、
3-(4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环己烷基丙腈(16b)、
2-(4-(1-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑))-环己烷基乙腈(16c)、
2-(4-(1-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑))-环戊烷基乙腈(16d)、
3-(4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环戊烷基丙酰胺(17a)、
3-(4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环己烷基丙酰胺(17b)、
2-(4-(1-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑))-环己烷基乙酰胺(17c)、
2-(4-(1-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑))-环戊烷基乙酰胺(17d)、
3-(4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环己烷基-N-正丙基丙酰胺(17e)、
3-(4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环己烷基-N-异丁基丙酰胺(17f)、
3-(4-喹唑啉-4-氨基吡唑)-3-环己烷基丙酰胺(17g)、
3-(4-9H-嘌呤-4-氨基吡唑)-3-环己烷基丙酰胺(17h)、
3-(4-(7H-噻吩并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环己烷基丙酰胺(17i)、
3-(4-(1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环己烷基丙酰胺(17j)、
3-(2-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环己烷基丙酰胺(17k)、
3-(2-(4-甲胺基-5-氯嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环己烷基丙酰胺(17l)、
3-(2-(4-甲胺基-5-三氟甲基嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环己烷基丙酰胺(17m)、
3-(2-(4-对氯苯胺基-5-氯嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环己烷基丙酰胺(17n)、
3-(4-(7H-噻吩并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环己烷基-N-异丁基丙酰胺(17o)、
3-(4-喹唑啉-4-氨基吡唑)-3-环己烷基-N-异丁基丙酰胺(17p)、
3-(2-(4-甲胺基-5-氯嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环戊烷基丙酰胺(17q)或
3-(2-(4-甲胺基-5-氯嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环己烷基-N-正丙基丙酰胺(17r)。
二、含有4-氨基吡唑结构的JAK激酶抑制剂的制备方法
本发明含有4-氨基吡唑环骨架的JAK激酶抑制剂的制备方法，为下列方法之一：
(一)以4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶为起始原料，经三甲基硅基乙氧甲基保护基保护生成中间体2，中间体2与4-氨基吡唑的发生亲核取代得到中间体3，不同的醛或者酮与氰甲基磷酸二乙酯通过维蒂希反应反应得到中间体5，中间体5和中间体3通过迈克尔加成得到中间体6；中间体6在路易斯酸中温和地脱去三甲基硅基乙氧甲基保护基得到终产物16。
反应式如下：
其中，R1，R2如上述通式I中所述；
上述反应式中的试剂和条件：(a),2-氯甲氧基乙基三甲基硅烷,N,N-二甲基乙酰胺,0℃,4h；(b),4-氨基吡唑,N,N-二异丙基乙胺,正丁醇,150℃,2-3h,微波；(c),叔丁醇钾,四氢呋喃,室温,反应过夜；(d),1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯,乙腈,65℃,5-6天；(e),四氟硼基锂,乙腈/水,90℃,5-6天。
以化合物16a为例，具体制备步骤如下：
3-(4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环戊烷基丙腈(16a)的制备方法，步骤如下：
(1)4-氯-7-((2-三甲基硅基乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(2)的制备
在冰浴条件下，将4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶2.0g溶于N,N-二甲基乙酰胺50mL中，将NaH0.58g分批多次加入到溶液中搅拌15分钟，然后再在反应液中加入2-氯甲氧基乙基三甲基硅烷2.2g,并保持温度在5℃以下继续反应4h；用氯化铵的饱和溶液终止反应，水相用乙酸乙酯萃取，有机相用水，食盐水溶液各100mL洗涤三次；有机相用无水硫酸镁干燥过夜，抽滤，减压蒸除溶剂，得到粗产物；用石油醚：乙酸乙酯＝50:1体积比的硅胶柱层析纯化即可得到中间体2.为无色液体2.6g,收率：70％；
(2)4-(1H-吡唑-4-胺基)-7-((2-三甲基硅基乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(3)的制备
将中间体20.2g及4-胺基吡唑0.11g溶于正丁醇，在溶液中加入0.27g的N,N-二异丙基乙胺，在微波150℃下反应2h，反应结束后，将溶剂用减压旋转蒸发仪蒸干即得到粗品；将得到的粗品通过柱纯化二氯甲烷：甲醇＝20:1体积比得到化合物3，为黄色固体0.15g,产率:65％；
(3)3-环己烷丙烯腈(5a)的制备
在冰浴条件下，将氰甲基磷酸二乙酯5.9g溶于无水四氢呋喃100mL，再在溶液中分批多次加入叔丁醇钾5.6g，在室温条件下搅拌三小时；再将温度降到0℃，向上述反应液滴环戊烷甲醛，室温反应过夜；TLC检测反应完全后，加入氯化铵的饱和溶液100ml淬灭反应，蒸除溶剂后，将残余物用乙酸乙酯萃取，用水、饱和氯化钠溶液各100mL洗涤有机相3次；有机相用无水无水硫酸镁干燥过夜，抽滤，减压蒸除溶剂即得到粗品；粗品用石油醚：乙酸乙酯＝80:1体积比的硅胶柱层析纯化即可得到中间体5a，为无色液体2.5g,收率：67％；
(4)3-(4-(7-((2-三甲基硅基乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环戊烷基丙腈(6a)的制备
将化合物30.15g与化合物5a0.14g溶于乙腈30mL,向上述溶液中加入1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯0.10g后65℃反应5-6天，蒸除溶剂后用乙酸乙酯溶解，用水，柠檬酸水溶液，饱和氯化钠溶液各100mL洗涤3次；有机相用无水硫酸镁干燥过夜，抽滤，减压蒸除溶剂；粗品经柱纯化二氯甲烷/甲醇80:1后得到化合物6a，为黄色固体0.10g,产率:37％；
(5)3-(4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环戊烷基丙腈(16a)的制备
将化合物6a0.10g溶于20mL/5mL的乙腈/水中，加入四氟硼基锂0.6g,85℃回流反应5天后；蒸除溶剂后用乙酸乙酯溶解，用水，饱和食盐水溶液各100mL洗涤3次；有机相用无水硫酸镁干燥过夜，抽滤，减压蒸除溶剂；粗品经柱纯化二氯甲烷/甲醇20:1后得到化合物16a，为灰白色固体20mg,产率:28％。
(二)以4-硝基吡唑为起始原料，通过钯碳氢气还原得到4-氨基吡唑中间体8，中间体8用Boc保护氨基得到中间体9，中间体9再与中间体5通过迈克尔加成得到中间体10，中间体10在强碱NaOH条件下水解分别得到中间体11和中间体14，中间体11和不同的胺通过O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸缩合得到各种中间体12，中间体12和中间体14在HCl/EA中脱去Boc保护基后得到中间体13和15；中间体13和15与不同的氯代芳香杂环通过亲核进攻得到终产物17a-r。
反应式如下：
其中，R1,R2,R3如上述通式Ⅱ中所述；
上述反应式中的试剂和条件：(a),Pd/C,H2,乙醇,室温,反应过夜；(b),二碳酸二叔丁酯,NaHCO3/H2O,四氢呋喃,室温,反应过夜；(c),1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯,乙腈,65℃，2天；(d),NaOH,H2O/甲醇/二氧六环,90℃,5-6h；(e),O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸,三乙胺,R3NH2,CH2Cl2,室温,反应过夜。(f),HCl/乙酸乙酯,室温,反应过夜；(g),N,N-二异丙基乙胺,正丁醇,150℃,1-2h，微波或三氟乙酸,正丁醇,100℃,1-2h,微波；(h)NaOH,水/二氧六环,60℃,30min。
以化合物17a为例，具体制备步骤如下：
3-(4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环戊烷基丙酰胺(17a)的制备方法，步骤如下：
(1)4-氨基吡唑(8)的制备
将4-硝基吡唑5.0g溶解在160mL乙醇中,再在上述溶液中加入10％Pd/C0.8g；向反应液中通入氢气并在室温条件下反应过夜；TLC检测反应完毕后，用硅藻土过滤掉Pd/C；蒸干乙醇溶剂，即得到纯净的中间体8，为红色固体3.6g,定量反应；
(2)叔丁基-4-(1H-吡唑)氨基甲酸酯(9)的制备
将化合物83.0g溶于NaHCO3/四氢呋喃7.5g/160mL混合溶液中，加入二碳酸二叔丁酯8.6g，室温反应2天。蒸除溶剂后用乙酸乙酯溶解，用水，柠檬酸水溶液，饱和氯化钠溶液各100mL洗涤3次；有机相用无水硫酸镁干燥过夜，抽滤，减压蒸除溶剂；粗品用正己烷洗涤后即可得到纯净的中间体9，为粉色固体，5.0g，产率：75％；
(3)叔丁基-4-(1-(2-腈基-1-环戊烷乙基)-1H-吡唑)氨基甲酸酯(10a)的制备
将化合物93.0g和化合物5a2.9g溶解于150mL乙腈溶液中,并滴加1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯3.2g,反应液在65℃搅拌2天，TLC检测反应完毕后,蒸除溶剂后用乙酸乙酯溶解，用水，柠檬酸水溶液，饱和氯化钠溶液各100mL洗涤3次；有机相用无水硫酸镁干燥过夜，抽滤，减压蒸除溶剂；粗品经柱纯化二氯甲烷/甲醇80:1后得到化合物10a,为白色固体2.4g，产率48％。化合物10b的合成和这步相同；
(4)3-(4-叔丁氧甲酰氨基-1H-吡唑)-3-环己烷丙酸(11)的制备
将化合物10b4.5g溶解在水/甲醇/二氧六环16mL/16mL/100mL混合溶液中,向上述溶液加入5.4gNaOH固体，反应液在65℃搅拌6h。TLC检测反应完毕后,用1Mol的盐酸水溶液调节酸碱性至中性后，蒸除溶剂后，粗品经柱纯化二氯甲烷/甲醇50:1后得到化合物11，为白色泡沫状固体2.0g,产率45％；
(5)叔丁基-(1-(1-环己基-3-氧代-(3-丙胺基)丙基-1H-吡唑))-4-氨基甲酸酯(12a)的制备
将化合物112.4g和O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸2.6g溶解在160mL四氢呋喃中，向上述溶液滴加三乙胺2.7g.反应液在室温条件下反应半个小时，然后正丙胺0.8g逐渐滴加到上述反应液中，并在室温条件下反应过夜；TLC检测反应完毕后，蒸除溶剂后用乙酸乙酯溶解，用水，柠檬酸水溶液，饱和氯化钠溶液各100mL洗涤3次；有机相用无水硫酸镁干燥过夜，抽滤，减压蒸除溶剂；粗品经柱纯化二氯甲烷/甲醇体积比80:1后得到化合物12a，白色固体2.0g.产率77％；
(6)3-(4-氨基-1H-吡唑-1-烷)-3-环己烷-N-正丙基丙酰胺(13a)的制备
将化合物12a2.0g溶解在HCl/EtOAc50mL中，室温反应8h；等反应完全后，过滤出白色固体即为化合物13a，白色固体1.2g，产率81％；
(7)叔丁基-(1-(3-胺基-1-环戊烷-3-氧代丙烷)-1H-吡唑-4-烷)氨基甲酸酯(14a)的制备
将化合物10a0.7g溶解在水/甲醇/二氧六环16mL/16mL/100mL混合溶液中,向上述溶液加入5.4gNaOH固体，反应液在65℃搅拌6h；TLC检测反应完毕后,用1Mol的盐酸水溶液调节酸碱性至中性后，蒸除溶剂后，粗品经柱纯化二氯甲烷/甲醇60:1后得到化合物14a，为白色固体0.5g,产率67％；
(8)3-(4-氨基-1H-吡唑-1-烷)-3-环戊烷丙酰胺(15a)的制备
将化合物14a0.5g溶解在HCl/EtOAc50mL中，室温反应8h，等反应完全后，过滤出白色固体即为化合物15a，白色固体0.2g,产率61％；
(9)3-环戊烷-3-(4-((7-对甲基苯磺酰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-烷)氨基)-1H-吡唑-1-烷)丙酰胺(18a)的制备
将4-氯-7-对苯磺酰基7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶0.4g及化合物15a0.15g溶解在20mL正丁醇中,向上述溶液滴加二异丙基乙胺0.32g，反应液在微波150℃条件下反应2h；反应结束后，将溶剂用减压旋转蒸发仪蒸干即得到粗品；将得到的粗品通过柱纯化二氯甲烷：甲醇＝40:1得到化合物18a，灰白色固体0.3g，产率91％；
(10)3-(4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环戊烷基丙酰胺(17a)的制备
将化合物18a0.3g溶解在水/甲醇/二氧六环3mL/3mL/10mL向上述溶液加入0.4gNaOH固体，反应液在55℃搅拌0.5h，TLC检测反应完毕后,用1Mol的盐酸水溶液调节酸碱性至中性后，蒸除溶剂后，粗品经柱纯化二氯甲烷/甲醇20:1后得到化合物17a，白色固体80mg，产率48％。
目标化合物的结构式如下所示：
所述化合物的具体制备步骤在实施例中将加以详细说明。
本领域技术人员可以对上述步骤进行变动以提高收率，他们可据本领域的基本知识确定合成的路线，如选择反应物，溶剂和温度，可以通过使用各种常规保护基以避免副反应的发生从而提高收率。这些常规的保护方法可参见例如T.Greene,ProtectingGroupsinOrganicSynthesis.
发明详述
本文中所用的术语和定义含义如下：
“烷烃”是指指C1-C6的脂肪链，环丙烷，环丁烷，环戊烷、环己烷、环庚烷等
“芳基”是指含有芳香族碳环的基团及环上带有取代基的取代芳基，优选的芳环含有6-10个碳原子。
“芳杂环”主要包括嘧啶环、吡咯并嘧啶环、嘌呤环、吡唑并嘧啶环、呋喃并嘧啶环、噻吩并嘧啶环、喹唑啉等。
Hela细胞是生物学与医学研究中使用的一种细胞，源自一位美国妇女海莉耶塔·拉克斯(HenriettaLacks)的子***细胞的细胞系。在医学界海拉细胞被广泛应用于肿瘤研究、生物实验或者细胞培养，已经成为医学研究中非常重要的工具。
三、含有4-氨基吡唑结构的JAK激酶抑制剂的应用
活性筛选实验显示本发明化合物具有良好的体外JAK1，JAK2，JAK3的抑制活性，因此，本发明还提供化合物在制备预防或治疗与炎症、肿瘤、血液相关疾病的药物中的应用；所述的与炎症、肿瘤、血液相关疾病包括：风湿性关节炎、类风湿性关节炎、骨髓纤维化、严重综合免疫缺陷症等。
一种预防或治疗与炎症、肿瘤、血液相关疾病药物组合物，包含本发明所述的含4-氨基吡唑环骨架的JAK激酶抑制剂或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。
附图说明
图1是5μM化合物17n和17m对Hela细胞中JAK2磷酸化抑制结果图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的说明，但不限于此。
实施例1：化合物16a-16d的合成，以16a为例。
(1)4-氯-7-((2-三甲基硅基乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(2)的制备
在冰浴条件下，将4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶2.0g溶于N,N-二甲基乙酰胺50mL中，将NaH0.58g分批多次加入到溶液中搅拌15分钟，然后再在反应液中加入2-氯甲氧基乙基三甲基硅烷2.2g,并保持温度在5℃以下继续反应4h；用氯化铵的饱和溶液终止反应，水相用乙酸乙酯萃取，有机相用水，食盐水溶液各100mL洗涤三次；有机相用无水硫酸镁干燥过夜，抽滤，减压蒸除溶剂，得到粗产物；用石油醚：乙酸乙酯＝50:1硅胶柱层析纯化即可得到中间体2，为无色液体2.6g,收率：70％。1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.67(s,1H),7.87(d,J＝3.8Hz,1H),6.71(d,J＝3.6Hz,1H),5.63(s,2H),3.50(t,J＝7.9Hz,2H),0.80(t,J＝8.1Hz,2H),0.24(s,9H).ESI-MS,m/z＝284[M+H]+
(2)4-(1H-吡唑-4-胺基)-7-((2-三甲基硅基乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(3)的制备
将化合物20.2g及4-胺基吡唑0.11g溶于正丁醇，在溶液中加入0.27g的N,N-二异丙基乙胺，在微波150℃下反应2h，反应结束后，将溶剂用减压旋转蒸发仪蒸干即得到粗品。将得到的粗品通过柱纯化二氯甲烷：甲醇＝20:1得到化合物3，为黄色固体0.15g,产率:65％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.90(s,1H),8.41(s,1H),7.99(s,2H),7.66(s,1H),7.16(s,1H),5.66(s,2H),3.59(t,J＝8.0Hz,2H),0.94(dt,J＝16.0,7.7Hz,2H),0.00(s,9H).ESI-MS,m/z＝331[M+H]+
(3)3-环己烷丙烯腈(5a)的制备
在冰浴条件下，将氰甲基磷酸二乙酯5.9g溶于无水四氢呋喃100mL，再在溶液中分批多次加入叔丁醇钾5.6g，在室温条件下搅拌三小时；再将温度降到0℃，向上述反应液缓慢滴环戊烷甲醛，室温反应过夜；TLC检测反应完全后，加入氯化铵的饱和溶液100ml淬灭反应，蒸除溶剂后，将残余物用乙酸乙酯萃取，用水，饱和氯化钠溶液各100mL洗涤有机相3次；有机相用无水无水硫酸镁干燥过夜，抽滤，减压蒸除溶剂即得到粗品。粗品用硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝80:1)纯化即可得到中间体5a，为无色液体2.5g,收率：67％ESI-MS,m/z＝122[M+H]+(weak)
(4)3-(4-(7-((2-三甲基硅基乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环戊烷基丙腈(6a)的制备
将化合物30.15g与化合物50.14g溶于乙腈30mL,向上述溶液中加入1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯0.10g后65℃反应5-6天，蒸除溶剂后用乙酸乙酯溶解，用水，柠檬酸水溶液，饱和氯化钠溶液各100mL洗涤3次；有机相用无水硫酸镁干燥过夜，抽滤，减压蒸除溶剂；粗品经柱纯化二氯甲烷/甲醇80:1后得到化合物6a，为黄色固体0.10g,产率:37％；ESI-MSm/z＝452[M+H]+
(5)3-(4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环戊烷基丙腈(16a)的制备
将化合物6a0.10g溶于乙腈/水(20mL/5mL)，加入四氟硼基锂0.6g,85℃回流反应5天后；蒸除溶剂后用乙酸乙酯溶解，用水，饱和食盐水溶液各100mL洗涤3次；有机相用无水硫酸镁干燥过夜，抽滤，减压蒸除溶剂；粗品经柱纯化二氯甲烷/甲醇20:1后得到化合物，为灰白色固体20mg,产率:28％；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.63(s,1H),9.41(s,1H),8.22(m,2H),7.61(s,1H),7.25–6.99(m,1H),6.53(s,1H),4.30(td,J＝9.5,3.8Hz,1H),3.10–2.86(m,2H),2.24(m,1H),1.72–1.59(m,1H),1.57–1.25(m,5H),1.18(m,2H).HRMS(AP-ESI)m/zcalcdforC17H19N7[M+H]+322.1775,found322.1779.m.p.110-112℃.
16b-16d的合成同16a，只是起始原料的醛或者酮不同。
实施例2：化合物17a-f和17k的合成，以17a为例。
(1)4-氨基吡唑(8)的制备。
将4-硝基吡唑5.0g溶解在160mL乙醇中,再在上述溶液中加入10％Pd/C0.8g。向反应液中通入氢气并在室温条件下反应过夜。TLC检测反应完毕后，用硅藻土过滤掉Pd/C。蒸干乙醇溶剂，即得到纯净的中间体8，为红色固体3.6g,定量反应。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.92(brs,1H).6.99(s,2H),3.72(brs,2H).ESI-MS,m/z＝84[M+H]+
(2)叔丁基-4-(1H-吡唑)氨基甲酸酯(9)的制备。
将化合物83.0g溶于NaHCO3/四氢呋喃(7.5g/160mL)混合溶液中，加入Boc2O8.6g，室温反应2天。蒸除溶剂后用乙酸乙酯溶解，用水，柠檬酸水溶液，饱和氯化钠溶液各100mL洗涤3次；有机相用无水硫酸镁干燥过夜，抽滤，减压蒸除溶剂；粗品用正己烷洗涤后即可得到纯净的中间体9，为粉色固体，5.0g，产率：75％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.44(s,1H),9.07(s,1H),7.58(s,1H),7.34(s,1H),1.44(s,9H).ESI-MS,m/z＝184[M+H]+
(3)叔丁基-4-(1-(2-腈基-1-环戊烷乙基)-1H-吡唑)氨基甲酸酯(10a)的制备
将化合物93.0g和化合物5a2.9g溶解于150mL乙腈溶液中,并滴加1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯3.2g,反应液在65℃搅拌2天，TLC检测反应完毕后,蒸除溶剂后用乙酸乙酯溶解，用水，柠檬酸水溶液，饱和氯化钠溶液各100mL洗涤3次；有机相用无水硫酸镁干燥过夜，抽滤，减压蒸除溶剂；粗品经柱纯化二氯甲烷/甲醇80:1后得到化合物10a,为白色固体2.4g，产率48％。1HNMR(400MHz,DMSO)δ9.6(s,1H),7.78(s,1H),7.44(s,1H),4.30(td,J＝9.6,4.0Hz,1H),3.06(m,2H),2.27(m,1H),1.73(m,1H),1.65–1.54(m,2H),1.54–1.48(m,1H),1.46(s,9H),1.38(m,1H),1.31–1.01(m,3H).ESI-MSm/z＝305[M+H]+
化合物10b的合成和这步相同。
(4)3-(4-叔丁氧甲酰氨基-1H-吡唑)-3-环己烷丙酸(11)的制备
将化合物10b4.5g溶解在水/甲醇/二氧六环(16mL/16mL/100mL)混合溶液中,向上述溶液加入5.4gNaOH固体，反应液在65℃搅拌6h。TLC检测反应完毕后,用1Mol的盐酸水溶液调节PH至中性后，蒸除溶剂后，粗品经柱纯化二氯甲烷/甲醇50:1后得到化合物11，为白色泡沫状固体2.0g,产率45％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.18(s,1H),9.10(d,J＝17.3Hz,1H),7.58(s,1H),7.26(s,1H),4.22(dd,J＝14.0,7.7Hz,1H),2.81(dd,J＝17.2,6.2Hz,2H),1.78–1.52(m,5H),1.44(s,9H),1.29–0.97(m,4H),0.95–0.76(m,2H).ESI-MSm/z＝338[M+H]+
(5)叔丁基-(1-(1-环己基-3-氧代-(3-丙胺基)丙基-1H-吡唑))-4-氨基甲酸酯(12a)的制备
将化合物112.4g和O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸2.6g溶解在160mL四氢呋喃中，向上述溶液滴加三乙胺2.7g.反应液在室温条件下反应半个小时，然后正丙胺0.8g逐渐滴加到上述反应液中，并在室温条件下反应过夜。TLC检测反应完毕后，蒸除溶剂后用乙酸乙酯溶解，用水，柠檬酸水溶液，饱和氯化钠溶液各100mL洗涤3次；有机相用无水硫酸镁干燥过夜，抽滤，减压蒸除溶剂；粗品经柱纯化二氯甲烷/甲醇80:1后得到化合物12a，白色固体2.0g.产率77％。ESI-MSm/z＝379[M+H]+
(6)3-(4-氨基-1H-吡唑-1-烷)-3-环己烷-N-正丙基丙酰胺(13a)的制备
将化合物12a2.0g溶解在HCl/EtOAc(50mL)中，室温反应8h。等反应完全后，过滤出白色固体即为化合物13a，白色固体1.2g。产率81％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.74(s,1H),6.95(s,1H),6.90(s,1H),4.18(d,J＝5.0Hz,2H),3.06(q,J＝7.1Hz,1H),2.89(dt,J＝17.3,6.3Hz,2H),2.60(dt,J＝14.7,17.3Hz,2H),1.63(m,5H),1.27(dt,J＝14.3,7.2Hz,2H),1.6–1.05(m,4H),0.85(m,2H),0.74(t,J＝7.3Hz,3H).ESI-MSm/z＝279[M+H]+
(7)叔丁基-(1-(3-胺基-1-环戊烷-3-氧代丙烷)-1H-吡唑-4-烷)氨基甲酸酯(14a)的制备
将化合物10a0.7g溶解在水/甲醇/二氧六环(16mL/16mL/100mL)混合溶液中,向上述溶液加入5.4gNaOH固体，反应液在65℃搅拌6h。TLC检测反应完毕后,用1Mol的盐酸水溶液调节PH至中性后，蒸除溶剂后，粗品经柱纯化二氯甲烷/甲醇60:1后得到化合物14a，为白色固体0.5g,产率67％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.08(s,1H),7.56(s,1H),7.26(s,2H),6.71(s,1H),4.28(td,J＝9.6,3.9Hz,1H),2.71(dd,J＝15.1,9.9Hz,1H),2.53(d,J＝4.0Hz,1H),2.28–2.09(m,1H),1.78–1.68(m,1H),1.61–1.46(m,3H),1.44(s,9H),1.39(d,J＝7.6Hz,1H),1.25–1.06(m,3H).ESI-MSm/z＝323[M+H]+
(8)3-(4-氨基-1H-吡唑-1-烷)-3-环戊烷丙酰胺(15a)的制备
将化合物14a0.5g溶解在HCl/EtOAc(50mL)中，室温反应8h。等反应完全后，过滤出白色固体即为化合物15a，白色固体0.2g,产率61％.ESI-MSm/z＝223[M+H]+
(9)3-环戊烷-3-(4-((7-对甲基苯磺酰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-烷)氨基)-1H-吡唑-1-烷)丙酰胺(18a)的制备
将4-氯-7-对苯磺酰基7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶0.4g及化合物15a0.15g溶解在20mL正丁醇中,向上述溶液滴加DIPEA0.32g，反应液在微波150℃条件下反应2h。反应结束后，将溶剂用减压旋转蒸发仪蒸干即得到粗品。将得到的粗品通过柱纯化二氯甲烷：甲醇＝40:1得到化合物18a，灰白色固体0.3g，产率91％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.78(s,1H),8.37(s,1H),7.97(d,J＝8.3Hz,3H),7.62(d,J＝5.0Hz,2H),7.45(t,J＝10.7Hz,2H),7.28(s,1H),6.99(s,1H),6.74(s,1H),4.37(dd,J＝9.3,5.4Hz,1H),2.79–2.55(m,2H),2.35(s,3H),1.49(m,4H),1.18(m,5H).ESI-MSm/z＝494[M+H]+
(10)3-(4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环戊烷基丙酰胺(17a)的制备
将化合物18a0.3g溶解在水/甲醇/二氧六环(3mL/3mL/10mL)向上述溶液加入0.4gNaOH固体，反应液在55℃搅拌0.5h，TLC检测反应完毕后,用1Mol的盐酸水溶液调节PH至中性后，蒸除溶剂后，粗品经柱纯化二氯甲烷/甲醇20:1后得到化合物17a，白色固体80mg，产率48％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.03(s,1H),9.84(s,1H),8.29(s,1H),8.05(s,1H),7.68(s,1H),7.48(d,J＝7.8Hz,1H),7.29(s,1H),7.11(d,J＝7.7Hz,1H),6.77(s,1H),4.51–4.15(m,1H),2.80–2.55(m,2H),1.77(s,1H),1.69–1.38(m,4H),1.38–0.98(m,4H).HRMS(AP-ESI)m/zcalcdforC17H21N7O[M+H]+340.1880,found340.1884.m.p.155-157℃
其中17b-f和17k的合成与17a相同，不过起始原料的醛或者酮或者芳香杂环不同。
实施例3：化合物17g-j和17l-r的合成，以17g为例.
(1)3-(4-氨基-1H-吡唑-1-烷)-3-环己烷丙酰胺(15b)的制备
合成方法同化合物15a。
(2)3-(4-喹唑啉-4-氨基吡唑)-3-环己烷基丙酰胺(17g)的制备
将4-氯喹唑啉0.16g与化合物15b0.15g溶解在8mL正丁醇中，加入2滴TFA后，反应液在微波120℃条件下反应1h.反应结束后，将溶剂用减压旋转蒸发仪蒸干即得到粗品。将得到的粗品通过柱纯化二氯甲烷：甲醇＝20:1得到化合物17g，0.17g白色固体，产率55％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.05(s,1H),8.62(s,1H),8.44(d,J＝8.2Hz,1H),8.17(s,1H),7.87–7.78(m,2H),7.75(d,J＝8.0Hz,1H),7.60(t,J＝7.5Hz,1H),7.32(s,1H),6.75(s,1H),4.40(m,1H),2.72(m,2H),1.84–1.49(m,5H),1.35–0.74(m,6H).HRMS(AP-ESI)m/zcalcdforC20H24N6O[M+H]+365.2084,found365.2082.m.p.216-222℃
实施例4：化合物的体外抑酶活性的测试实验
通过测定化合物对JAK底物磷酸化水平然后用检测方法进行检测。
表1化合物和阳性药十字孢碱对JAK1，JAK2，JAK3的体外抑酶活性
实验结论：化合物对JAK1，JAK2，JAK3均有一定的抑制作用，IC50值在微摩尔范围，最好的是化合物17l,17m,17n。
实施例5：部分化合物对JAK2磷酸化抑制情况蛋白质印迹法(免疫印迹试验)
将浓度为3×106个/孔的细胞接种于6孔板，用浓度为5μΜ的药液设相应的溶媒对照，在37℃,5％CO2条件下培养2h后，用浓度为150ng/mL的刺激因子INF-γ处理10min,收集细胞，弃掉药液，用PBS洗一次加入蛋白裂解液60μL，裂解15min，加入2×的SDS上样缓冲液60μL,100℃煮5min致使蛋白变性，然后12000r/min离心15min，收集上清即得。
实验结论：在5μM的浓度下,化合物17n能够部分抑制JAK2的磷酸化，而化合物17m能完全抑制JAK2的磷酸化，见附图1。附图中英文注释：INF-γ为干扰素-γ，PBS为磷酸盐缓冲液，SDS为十二烷基磺酸钠，Ctrl为对照组，INF为干扰素。bar为阳性药baricitinib，P-JAK(126KD)为磷酸化的JAK，JAK的大小为126KD。ACTIN为空白对照组。
Claims (9)
1.具有如下通式I或Ⅱ所示结构的化合物，以及其光学异构体、非对映异构体和消旋体混合物，其药学上可接受的盐，溶剂合物或前药，：
其中：
R1是氢、环烷基、烷基或芳基；
R2是氢、环烷基、烷基或芳基；
R3是氢、环烷烃、烷基或芳基；
芳杂环主要包括嘧啶环、吡咯并嘧啶环、嘌呤环、吡唑并嘧啶环、呋喃并嘧啶环、噻吩并嘧啶环或喹唑啉；
*是立体构型为S或R光学纯度或其消旋体。
2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于：R1是氢、C1-C6烷基、环丙烷、环戊烷或环己烷；R2是氢、C1-C6烷基、环丙烷、环戊烷或环己烷；R3是C1-C6烷基或芳基。
3.如权利要求1所述的化合物，其特征在于为下列化合物之一：
3-(4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环戊烷基丙腈(16a)、
3-(4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环己烷基丙腈(16b)、
2-(4-(1-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑))-环己烷基乙腈(16c)、
2-(4-(1-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑))-环戊烷基乙腈(16d)、
3-(4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环戊烷基丙酰胺(17a)、
3-(4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环己烷基丙酰胺(17b)、
2-(4-(1-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑))-环己烷基乙酰胺(17c)、
2-(4-(1-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑))-环戊烷基乙酰胺(17d)、
3-(4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环己烷基-N-正丙基丙酰胺(17e)、
3-(4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环己烷基-N-异丁基丙酰胺(17f)、
3-(4-喹唑啉-4-氨基吡唑)-3-环己烷基丙酰胺(17g)、
3-(4-9H-嘌呤-4-氨基吡唑)-3-环己烷基丙酰胺(17h)、
3-(4-(7H-噻吩并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环己烷基丙酰胺(17i)、
3-(4-(1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环己烷基丙酰胺(17j)、
3-(2-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环己烷基丙酰胺(17k)、
3-(2-(4-甲胺基-5-氯嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环己烷基丙酰胺(17l)、
3-(2-(4-甲胺基-5-三氟甲基嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环己烷基丙酰胺(17m)、
3-(2-(4-对氯苯胺基-5-氯嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环己烷基丙酰胺(17n)、
3-(4-(7H-噻吩并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环己烷基-N-异丁基丙酰胺(17o)、
3-(4-喹唑啉-4-氨基吡唑)-3-环己烷基-N-异丁基丙酰胺(17p)、
3-(2-(4-甲胺基-5-氯嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环戊烷基丙酰胺(17q)或
3-(2-(4-甲胺基-5-氯嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环己烷基-N-正丙基丙酰胺(17r)。
4.如权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于，步骤如下：
(一)以4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶为起始原料，经三甲基硅基乙氧甲基保护基保护生成中间体2，中间体2与4-氨基吡唑的发生亲核取代得到中间体3，不同的醛或者酮与氰甲基磷酸二乙酯通过维蒂希反应反应得到中间体5，中间体5和中间体3通过迈克尔加成得到中间体6；中间体6在路易斯酸中温和地脱去三甲基硅基乙氧甲基保护基得到终产物16；
反应式如下：
其中，R1，R2如上述通式I中所述；
上述反应式中的试剂和条件：(a),2-氯甲氧基乙基三甲基硅烷,N,N-二甲基乙酰胺,0℃,4h；(b),4-氨基吡唑,N,N-二异丙基乙胺,正丁醇,150℃,2-3h,微波；(c),叔丁醇钾,四氢呋喃,室温,反应过夜；(d),1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯,乙腈,65℃，5-6天；(e),四氟硼基锂,乙腈/水,90℃,5-6天。
5.3-(4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环戊烷基丙腈(16a)的制备方法，步骤如下：
(1)4-氯-7-((2-三甲基硅基乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(2)的制备
在冰浴条件下，将4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶2.0g溶于N,N-二甲基乙酰胺50mL中，将NaH0.58g分批多次加入到溶液中搅拌15分钟，然后再在反应液中加入2-氯甲氧基乙基三甲基硅烷2.2g,并保持温度在5℃以下继续反应4h；用氯化铵的饱和溶液终止反应，水相用乙酸乙酯萃取，有机相用水，食盐水溶液各100mL洗涤三次；有机相用无水硫酸镁干燥过夜，抽滤，减压蒸除溶剂，得到粗产物；用石油醚：乙酸乙酯＝50:1体积比的硅胶柱层析纯化即可得到中间体2.为无色液体2.6g,收率：70％；
(2)4-(1H-吡唑-4-胺基)-7-((2-三甲基硅基乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(3)的制备
将中间体20.2g及4-胺基吡唑0.11g溶于正丁醇，在溶液中加入0.27g的N,N-二异丙基乙胺，在微波150℃下反应2h，反应结束后，将溶剂用减压旋转蒸发仪蒸干即得到粗品；将得到的粗品通过柱纯化二氯甲烷：甲醇＝20:1体积比得到化合物3，为黄色固体0.15g,产率:65％；
(3)3-环己烷丙烯腈(5a)的制备
在冰浴条件下，将氰甲基磷酸二乙酯5.9g溶于无水四氢呋喃100mL，再在溶液中分批多次加入叔丁醇钾5.6g，在室温条件下搅拌三小时；再将温度降到0℃，向上述反应液滴环戊烷甲醛，室温反应过夜；TLC检测反应完全后，加入氯化铵的饱和溶液100ml淬灭反应，蒸除溶剂后，将残余物用乙酸乙酯萃取，用水、饱和氯化钠溶液各100mL洗涤有机相3次；有机相用无水无水硫酸镁干燥过夜，抽滤，减压蒸除溶剂即得到粗品；粗品用石油醚：乙酸乙酯＝80:1体积比的硅胶柱层析纯化即可得到中间体5a，为无色液体2.5g,收率：67％；
(4)3-(4-(7-((2-三甲基硅基乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环戊烷基丙腈(6a)的制备
将化合物30.15g与化合物5a0.14g溶于乙腈30mL,向上述溶液中加入1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯0.10g后65℃反应5-6天，蒸除溶剂后用乙酸乙酯溶解，用水，柠檬酸水溶液，饱和氯化钠溶液各100mL洗涤3次；有机相用无水硫酸镁干燥过夜，抽滤，减压蒸除溶剂；粗品经柱纯化二氯甲烷/甲醇80:1后得到化合物6a，为黄色固体0.10g,产率:37％；
(5)3-(4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环戊烷基丙腈(16a)的制备
将化合物6a0.10g溶于20mL/5mL的乙腈/水中，加入四氟硼基锂0.6g,85℃回流反应5天后；蒸除溶剂后用乙酸乙酯溶解，用水，饱和食盐水溶液各100mL洗涤3次；有机相用无水硫酸镁干燥过夜，抽滤，减压蒸除溶剂；粗品经柱纯化二氯甲烷/甲醇20:1后得到化合物16a，为灰白色固体20mg,产率:28％。
6.如权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于步骤如下：
以4-硝基吡唑为起始原料，通过钯碳氢气还原得到4-氨基吡唑中间体8，中间体8用Boc保护氨基得到中间体9，中间体9再与中间体5通过迈克尔加成得到中间体10，中间体10在强碱NaOH条件下水解分别得到中间体11和中间体14，中间体11和不同的胺通过O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸缩合得到各种中间体12，中间体12和中间体14在HCl/EA中脱去Boc保护基后得到中间体13和15；中间体13和15与不同的氯代芳香杂环通过亲核进攻得到终产物17a-r；
反应式如下：
其中，R1,R2,R3如上述通式Ⅱ中所述；
上述反应式中的试剂和条件：(a),Pd/C,H2,乙醇,室温,反应过夜；(b),二碳酸二叔丁酯,NaHCO3/H2O,四氢呋喃,室温,反应过夜；(c),1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯,乙腈,65℃，2天；(d),NaOH,H2O/甲醇/二氧六环,90℃,5-6h；(e),O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸,三乙胺,R3NH2,CH2Cl2,室温,反应过夜；(f),HCl/乙酸乙酯,室温,反应过夜；(g),N,N-二异丙基乙胺,正丁醇,150℃,1-2h，微波或三氟乙酸,正丁醇,100℃,1-2h,微波；(h)NaOH,水/二氧六环,60℃,30min。
7.3-(4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环戊烷基丙酰胺(17a)的制备方法，步骤如下：
(1)4-氨基吡唑(8)的制备
将4-硝基吡唑5.0g溶解在160mL乙醇中,再在上述溶液中加入10％Pd/C0.8g；向反应液中通入氢气并在室温条件下反应过夜；TLC检测反应完毕后，用硅藻土过滤掉Pd/C；蒸干乙醇溶剂，即得到纯净的中间体8，为红色固体3.6g,定量反应；
(2)叔丁基-4-(1H-吡唑)氨基甲酸酯(9)的制备
将化合物83.0g溶于NaHCO3/四氢呋喃7.5g/160mL混合溶液中，加入二碳酸二叔丁酯8.6g，室温反应2天；蒸除溶剂后用乙酸乙酯溶解，用水，柠檬酸水溶液，饱和氯化钠溶液各100mL洗涤3次；有机相用无水硫酸镁干燥过夜，抽滤，减压蒸除溶剂；粗品用正己烷洗涤后即可得到纯净的中间体9，为粉色固体，5.0g，产率：75％；
(3)叔丁基-4-(1-(2-腈基-1-环戊烷乙基)-1H-吡唑)氨基甲酸酯(10a)的制备
将化合物93.0g和化合物5a2.9g溶解于150mL乙腈溶液中,并滴加1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯3.2g,反应液在65℃搅拌2天，TLC检测反应完毕后,蒸除溶剂后用乙酸乙酯溶解，用水，柠檬酸水溶液，饱和氯化钠溶液各100mL洗涤3次；有机相用无水硫酸镁干燥过夜，抽滤，减压蒸除溶剂；粗品经柱纯化二氯甲烷/甲醇80:1后得到化合物10a,为白色固体2.4g，产率48％；化合物10b的合成和这步相同；
(4)3-(4-叔丁氧甲酰氨基-1H-吡唑)-3-环己烷丙酸(11)的制备
将化合物10b4.5g溶解在水/甲醇/二氧六环16mL/16mL/100mL混合溶液中,向上述溶液加入5.4gNaOH固体，反应液在65℃搅拌6h；TLC检测反应完毕后,用1Mol的盐酸水溶液调节酸碱性至中性后，蒸除溶剂后，粗品经柱纯化二氯甲烷/甲醇50:1后得到化合物11，为白色泡沫状固体2.0g,产率45％；
(5)叔丁基-(1-(1-环己基-3-氧代-(3-丙胺基)丙基-1H-吡唑))-4-氨基甲酸酯(12a)的制备
将化合物112.4g和O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸2.6g溶解在160mL四氢呋喃中，向上述溶液滴加三乙胺2.7g.反应液在室温条件下反应半个小时，然后正丙胺0.8g逐渐滴加到上述反应液中，并在室温条件下反应过夜；TLC检测反应完毕后，蒸除溶剂后用乙酸乙酯溶解，用水，柠檬酸水溶液，饱和氯化钠溶液各100mL洗涤3次；有机相用无水硫酸镁干燥过夜，抽滤，减压蒸除溶剂；粗品经柱纯化二氯甲烷/甲醇体积比80:1后得到化合物12a，白色固体2.0g.产率77％；
(6)3-(4-氨基-1H-吡唑-1-烷)-3-环己烷-N-正丙基丙酰胺(13a)的制备
将化合物12a2.0g溶解在HCl/EtOAc50mL中，室温反应8h；等反应完全后，过滤出白色固体即为化合物13a，白色固体1.2g，产率81％；
(7)叔丁基-(1-(3-胺基-1-环戊烷-3-氧代丙烷)-1H-吡唑-4-烷)氨基甲酸酯(14a)的制备
将化合物10a0.7g溶解在水/甲醇/二氧六环16mL/16mL/100mL混合溶液中,向上述溶液加入5.4gNaOH固体，反应液在65℃搅拌6h；TLC检测反应完毕后,用1Mol的盐酸水溶液调节酸碱性至中性后，蒸除溶剂后，粗品经柱纯化二氯甲烷/甲醇60:1后得到化合物14a，为白色固体0.5g,产率67％；
(8)3-(4-氨基-1H-吡唑-1-烷)-3-环戊烷丙酰胺(15a)的制备
将化合物14a0.5g溶解在HCl/EtOAc50mL中，室温反应8h，等反应完全后，过滤出白色固体即为化合物15a，白色固体0.2g,产率61％；
(9)3-环戊烷-3-(4-((7-对甲基苯磺酰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-烷)氨基)-1H-吡唑-1-烷)丙酰胺(18a)的制备
将4-氯-7-对苯磺酰基7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶0.4g及化合物15a0.15g溶解在20mL正丁醇中,向上述溶液滴加二异丙基乙胺0.32g，反应液在微波150℃条件下反应2h；反应结束后，将溶剂用减压旋转蒸发仪蒸干即得到粗品；将得到的粗品通过柱纯化二氯甲烷：甲醇＝40:1得到化合物18a，灰白色固体0.3g，产率91％；
(10)3-(4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶)-4-氨基吡唑)-3-环戊烷基丙酰胺(17a)的制备
将化合物18a0.3g溶解在水/甲醇/二氧六环3mL/3mL/10mL向上述溶液加入0.4gNaOH固体，反应液在55℃搅拌0.5h，TLC检测反应完毕后,用1Mol的盐酸水溶液调节酸碱性至中性后，蒸除溶剂后，粗品经柱纯化二氯甲烷/甲醇20:1后得到化合物17a，白色固体80mg，产率48％。
8.权利要求1、2或3所述的化合物在制备预防或治疗与炎症、肿瘤、血液相关疾病的药物中的应用；所述的与炎症、肿瘤、血液相关疾病包括：风湿性关节炎、类风湿性关节炎、骨髓纤维化或严重综合免疫缺陷症。
9.一种适于口服或胃肠外给药的药物组合物，包含权利要求1、2或3所述的化合物和一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。
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