CN105214077B - Usp33在肿瘤中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及USP33在肿瘤中的应用，更具体的涉及USP33作为肿瘤预后检测标志物和USP33在肿瘤药物开发中的应用。本发明提供的数据显示，在多种肿瘤患者中USP33表达量下降与肿瘤预后不良相关；并且USP33蛋白通过调控Slit‑Robo信号通路进而抑制肿瘤细胞转移。因此，USP33可以作为肿瘤预后检测标志物,同时USP33还可以应用于肿瘤药物的开发，为肿瘤的检测和治疗提供新的方法和方案。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及用作肿瘤标志物的USP33及其在制备治疗肺癌药物中的应用。
背景技术
肺癌是最常见的癌症，每年全球死亡约138万人，同时其5年生存率约为15％。虽然目前有众多的治疗手段，包括手术、放疗、化疗和靶向治疗甚至他们之间组合治疗，但其效果都差强人意。肺癌可以分为小细胞肺癌SCLC和非小细胞肺癌NSCLC。非小细胞肺癌，包括鳞状细胞癌、腺癌、未分化大细胞癌、腺鳞癌和支气管腺体癌；小细胞肺癌，由均匀一致的小细胞构成，典型的呈燕麦样。NSCLC占到约80％的病例。当前的肺癌的治疗主要基于肿瘤形态学和以肿瘤***转移TNM为基础的分期***。在肺癌中许多抑癌基因已经被发现，包括TP53，P16，LKB1/STK11，NF1，RASSF1，APC，BRG1，PTEN和RB。各种易感基因最近也已被发现，然而，抑制肺癌的侵袭和转移的内源性机制仍然知之甚少。
近期的报道显示，神经元导向分子被认为与肿瘤的侵袭和转移过程相关。Slit基因最初在果蝇中被发现，它的产物是一个分泌蛋白家族，充当神经导向分子的作用。最近的研究表明slit基因参与不同类型的癌症细胞的侵染和转移。Slit蛋白通过与一个单次跨膜蛋白Roundabout(Robo)的结合实现其功能。调控Slit-Robo信号传导作用的蛋白之一是泛素特异性蛋白酶33(USP33)。作为泛素特异性蛋白酶家族的一个成员之一，USP33最初发现作为底物的蛋白结合到VHL E3连接酶。在Slit信号通路调控中线部位连合轴突导向中，USP33被认为是必需的。
此外，slit信号在实现其抑制乳腺癌细胞迁移的功能中，USP33也参与其中，这表明USP33可能在癌症侵袭和转移中发挥重要作用。然而，在肺癌中USP33如何调控slit信号传导的机制并不清楚。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，提供USP33在肺癌中的应用，特别是USP33在制备检测和***药物中的应用。
为解决上述问题，本发明第一方面提供的技术方案是:USP33在肿瘤中的应用,USP33作为肿瘤预后检测标志物和USP33在肿瘤药物开发中的应用。
优选地，USP33作为肿瘤预后检测标志物，所述肿瘤包括肺癌、乳腺癌、黑色素瘤和急性髓细胞白血病。
优选地，USP33在制备肿瘤药物中的应用，所述肿瘤为肺癌。
优选地，USP33作为肿瘤治疗靶点。
优选地，USP33通过调控slit-Robo信号通路抑制肿瘤细胞转移。
本发明第二方面提供一种诊断试剂盒，该试剂盒含有检测USP33蛋白物质，所述USP33蛋白序列为Seq No.1。
本发明第三方面提供一种试剂盒,该试剂盒含有检测USP33基因的物质，所述USP33基因序列为Seq No.2。
本发明第四方面提供一种诊断试剂盒的用途，用于检测肿瘤及肿瘤预后USP33表达。
本发明第五方面提供一种肿瘤药物组合物，该药物组合物含有:USP33基因和/或其编码的蛋白，以及医学上可接受的药用辅料。
优选地，所述肿瘤为肺癌。
在这项研究中，发明人证明Slit蛋白抑制肺癌细胞的迁移过程需要USP33参与。USP33调节肺癌细胞中Robo受体的水平。这与USP33在神经元和非癌细胞的作用方式有着明显的差别(Yuasa-Kawada et al.,2009a,b)。此外，USP33在肺癌细胞中扮演肿瘤抑制剂的角色，因为USP33的低表达与肺癌患者的预后较低的生存率呈现很强的相关关系。
在肺癌组织中USP33表达显著下降。高USP33表达与预后较好有关。USP33可以提高Robo1稳定性，并且是slit蛋白抑制肿瘤细胞迁移所必须的。这些发现表明，USP33是肺癌发生的一个关键参与者，有希望作为一个新的肺癌预后标志物。
本发明提供的USP33能够调节肺癌细胞中Robo受体的水平，提高Robo1蛋白稳定性，并且是slit蛋白抑制肿瘤细胞迁移所必须的。因此USP33可以作为***，特别是肺癌药物的重要组份，联合其它抗癌药物共同用药。此外，USP33还可以作为肺癌预后检测标志物,为肿瘤、特别是肺癌的检测和治疗提供新的方法和方案。
附图说明
下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述：
图1显示了25组肺癌和非肺癌组织样本中mRNA的表达水平，Y轴为表达量，GAPDH基因做参照，***P<0.001。
图2免疫组化染色检测肺癌和对照样本中USP33表达情况。其中，a和c为在正常组织中检测到USP33表达的强阳性信号，b为腺癌中的USP33阳性表达示例，d为鳞状细胞癌USP33阳性表达示例。
图3肺癌样本(N＝25)和对照正常组织样本(CTRL)(N＝25)USP33蛋白表达情况的定量分析。
该USP33-免疫组化分数的计算方法如下：USP33免疫组化得分＝(阳性肿瘤细胞的百分比)×染色信号强度。在肺癌中USP33蛋白表达量显著低于非肺癌组织(**，P<0.01)。
图4从公布的数据库中经分析发现在肺癌患者样本中USP33的表达量下降；其中，
图4A为TCGA数据库肺癌样本中USP33基因变异及表达情况。淡蓝色表示纯合性缺失；绿色表示体细胞突变；粉红色表示表达上调；蓝色表示表达下调。这些结果所依赖的计算数据来自癌症CBIO门户网站((http://www.oncomine.org).)
图4B为TCGA数据库肺癌样本中USP33氨基酸突变情况。
图4C为利用Oncomine(http://www.oncomine.org).分析五组数据库中肺癌患者USP33基因的表达水平。在五组数据库中，肺癌样本与非肿瘤样本相比，USP33的表达量发生明显下降。LUAD：肺腺癌；LuSC：肺鳞状细胞癌，Ctrl：对照。
图5为不同组织样本中USP33基因表达变化情况。
图6显示了不同癌症数据库中显示低表达USP33基因意味着较短的生存期；具体如下
图6A为TCGA肺癌数据库AgilentG4502A_07_3数据，USP33low中n＝91,USP33high中n＝91；P＝0.0436，
图6B为TCGA肺癌数据库IlluminaHiSeq_RNASeqV2数据，USP33low中n＝106,USP33high中n＝106；P＝0.0267，
图6C为GSE3141肺癌数据库中的数据是通过KM(http://kmplot.com/analysis/)进行分析。USP33low中n＝28,USP33high中n＝83；P＝0.031，
图6D为GSE31210肺癌数据库中的数据是通过KM(http://kmplot.com/analysis/)进行分析。USP33low中n＝113,USP33high中n＝113；P＝0.034，
图6E为TCGA肺癌数据库USP33low中n＝61,USP33high中n＝61；P＝0.0188，
图6F为肺癌数据库利用KM分析USP33low中n＝562,USP33high中n＝553；P＝0.034,
图6G为TCGA黑色素瘤数据库USP33low中n＝145,USP33high中n＝50；P＝0.0453，
图6H为TCGA急性髓细胞白血病数据库，USP33low中n＝77,USP33 high中n＝82；P＝0.0282。
图7A和7B分别为H1299细胞在转染siRNA或siUSP33后用对照或slit蛋白处理之后图片及计数分析图，在第三天和第四天对照组和slit处理组细胞数量没有明显变化。
图8为USP33通过泛素化催化位点调节slit抑制肺癌细胞转移；其中，图8A为转染对照siRNA或siUSP33的H1299cells伤口愈合实验图片；图8B和图8E表示细胞迁移距离。图8C显示了Western试验证明是siUSP33而不是对照siRNA可以抑制USP33基因在H1299细胞中的表达。图8D为野生型USP33或突变USP33(C163A)被用于安慰对照或slit对照。产生划痕后，边缘的细胞将会朝右侧运动，图形在划痕后不同时间点采集，白色点状线表示0小时伤口边缘。图8F为Western验证USP33野生型和突变基因(C163A)在H1299细胞中表达。
图9显示了USP33与Robo1相互作用，并影响Robo1在肺癌细胞中的稳定性。其中，图9A在H1299细胞中USP33与Robo1的相互作用。在对照和slit组中利用对照IgG或Robo1抗体开展免疫共沉淀实验。免疫沉淀获得的蛋白利用USP33抗体进行Western blotting检测,
图9B显示了对转染Robo-HA,Flag-ubiquitin,Ctrl siRNA或siUSP33的H1299进行去泛素化实验。在经过MG132(20μmol/L)处理6h后，利用HA抗体进行免疫共沉淀实验，之后对所获蛋白进行Western blotting检测,
图9C显示了转染Robo-HA,野生型USP33或突变的USP33及未转染的H1299细胞进行去泛素化情况。在经过MG132(20μmol/L)处理6h后，利用HA抗体进行免疫共沉淀实验，之后对所获蛋白进行Western blotting检测,
图9D和图9E显示了在转染siRNAs USP33#1、USP33#2,对照siRNAs后Western blot检测USP33和Robo1在H1299细胞中的表达情况,
图9F显示了H1299细胞转染siUSP33或对照siRNA后用CHX(50μg/mL)处理不同时间，进而检测Robo1的在细胞中的总量。
图9G、图9H显示了1299细胞转染siUSP33或对照siRNA后用MG132(20μmol/L)处理6h(不处理的做对照)，之后进行Western blot检测。
具体实施方式
以下结合附图描述本发明具体实施方式。
一、材料
1.实验动物或材料来源及处理
肺癌组织和非肿瘤肺组织来自第四军医大学医院病理室诊断后收集的样本，所有样本均获得患者知情同意并遵照相关机构和国家的指导方针。如下表1显示肺癌样本分布情况。
将手术切除的肿瘤组织样本迅速用液氮冻存，用以提取RNA。
肺癌组织样本经10％中性***溶液固定过夜，石蜡包埋切片，根据标准方案进行苏木精和伊红染色，进行免疫组化分析。
表1肺癌样本分布
H1299细胞(来自ATCC细胞库)，HEK293细胞(来自ATCC细胞库),用10％(v/v)胎牛血清、50mg/ml青霉素/链霉素的DMEM培养基培养,温度为37℃，二氧化碳浓度为5％。
2、药品和试剂：
2.1药品
USP33抗体购自PROTEINTECH GROUP公司，Robo抗体购自PROTEINTECH GROUP公司，beta-actin抗体购自PROTEINTECH GROUP公司；放线菌酮购自Sigma公司；MG132购自Sigma公司。Trizol购自Invitrogen公司
2.2试剂
Lipofectamine2000转染试剂购自Invitrogen公司；USP33的siRNAs(#1:5'-UCUCGACAGUGGCUUAAUUAA-3'，
#2:5'-GGAUUCAGUUGGUGAAAUUAC-3')和阴性对照siRNA(5’-CGUACGCGGAAUACUUCGATT-3’)由上海吉玛制药技术有限公司合成；SYBR green PCR mix购自ThermoFisher Scientific公司，
2.3仪器
Ultrospec5300pro分光光度计购自GE公司；ScanScope XT扫描仪购自美国Aperio公司,实时荧光定量PCR仪购自ABI公司。
分组数据以均数加减标准差表示。T检验(两个样本)或者ANOVA(多于两个样本)进行统计学意义分析。生存率分析,绘制分析曲线使用Prism软件和log-rank进行分析。所有实验至少重复三次，p<0.05的95％置信水平有意义。
二、实验方法及结果分析
1、肺癌细胞和非肿瘤肺组织细胞中USP33的表达水平。
1.1通过定量RT-PCR方法分析USP33mRNA表达水平，与非肿瘤肺组织样本相比，USP33表达显著降低(P<0.001)(图1)。
使用Trizol提取肺癌组织中总的RNA，利用Ultrospec5300分光光度计对RNA的量和纯度进行测定，用消化DNA酶I从RNA样品中除去基因组DNA，以5微克RNA为模板用寡聚引物(dT)和逆转录酶(M-MLV RT)合成cDNA第一链，利用ABI的StepOne实时定量PCR仪进行扩增所用引物如下：
USP33(5'-TGTGATGCTTAGGCAAGGAG-3',Seq No.3,
和5'-GGCCCTCCACCATAAATAGA-3'),Seq No.4；
Robo1(5'-GCATCGCTGGAAGTAGCCATACT-3',Seq No.5
和5'-CTAGAAATGGTGGGCTCAGGAT-3')Seq No.6；
GAPDH(5'-GGAGCGAGATCCCTCCAA AAT-3',Seq No.7
和5'-GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG-3'),Seq No.8。扩增程序：
95℃、15秒，60℃、30秒，72℃、30秒，共40个循环，利用2-ΔΔCT方法进行计算。
1.2接下来，发明人通过免疫组化染色方法检测样本中USP33蛋白表达情况(见图2抗USP33的特异性)。
将肺癌组织样本经10％***固定,石蜡包埋的5微米厚的肿瘤切片进行免疫化学分析。首先脱蜡，再水化，柠檬酸(pH值6.0)微波炉中加热20分钟。抗原修复后,用3％过氧化氢处理10分钟，封闭内源性过氧化物酶活性,接着用山羊血清30分钟阻塞性孵育。USP33一抗对切片4℃孵育过夜，接着孵育生物素抗体，室温30分钟。最后,切片经3,3-二氨基联苯胺染色观察。着色切片经Scanscope XT数字化。用数值来表示USP33蛋白表达高低,在每一张切片中至少选取五个随机区域放大×200后确定阳性肿瘤细胞的平均百分比。USP33强度得分如下:0,阴性；1+,弱；2+,温和3+,剧烈。阳性的肿瘤细胞，染色强度的百分比然后放大生成USP33-免疫组化染色分数。
在正常肺组织中，USP33染色信号显示范围为73.33～300.00(平均值为198.18)，而那些肺癌样品中的染色信号变化从0.00到266.00(平均值为142.38)。肺癌样品中的USP33表达水平明显低于非肿瘤肺组织(P<0.01，图2和3)。
1.3为了调查肺癌患者中USP33表达的变化是由什么原因导致的，发明人对cBioPortal癌症基因组数据库(http://cbioportal.org)中554例的数据进行了分析。肺癌患者生存率和USP33基因表达相关性使用TCGA癌症数据库和在线KM-Plotter数据库进行了分析。
在9例肺癌病例中USP33mRNA下调，2例肺癌病例该基因缺失，另外9例出现体细胞该基因突变(图4A和4B)。值得注意的是，三个USP33突变位于USP33的催化结构域里面(图4B)。因此，这些肺癌病例约4％，表现出纯合性缺失或体细胞突变或mRNA的表达水平下调。此外，体细胞USP33错义突变在肺腺癌(4.3-6.2％)和肺鳞状细胞癌(3.4％)的样品中被发现(图5)。进一步对Oncomine数据库中USP33表达谱的数据集进行分析(http://www.oncomine.org/)，该数据库含5组独立肺癌样品mRNA基因表数据。值得注意的是，与对照样品相比，在所有的5组数据中(图4C)，肺癌样品中的USP33mRNA表达水平显著降低。综上所述，这些肺癌样品中USP33表达水平的下调具有高度的一致性。
2、USP33的表达水平与临床结果
为了研究USP33的表达水平与临床之间的关系，发明人通过公开的微阵列芯片数据对USP33的表达水平与患者生存期之间的关联进行分析。发明人从癌症基因组图谱Cancer Genome Atlas(TCGA)数据中生成Kaplan-Meier(KM)生存曲线数据和网上KM-Plotter数据库。对于每组数据，依据USP33基因的表达水平，肺癌患者被分为两组。Kaplan-Meier用于分析评估USP33高表达和USP33低表达组的生存时间差异。在所有四个肺癌的数据库，较高的USP33表达水平伴随患者较长的生存期(图6A-6D)。
发明人进一步分析USP33表达水平与其他类型的癌症患者生存期的关系。结果显示，在其他类型的癌症中，包括乳腺癌(图6E和6F)，黑色素瘤(图6G)和急性髓系白血病(AML，图6H)，在一定范围内的较短的生存周期伴随USP33的低水平表达。这些数据表明，在多种人类癌症中，USP33扮演着肿瘤抑制基因的角色。
3、USP33参与Slit信号所介导的抑制肺癌细胞转移
发明人以前的研究表明，在不同的肿瘤细胞中(包括肺癌和乳腺癌)slit蛋白表达量明显下降，slit在防治癌症进一步发展中起到重要的作用。同时已有的研究结果也证明，在肺癌中，USP33参与slit的信号传导。为了探索USP33在肺癌细胞中的具体作用机制，发明人研究了它如何调控Slit信号通路从而抑制肺癌细胞的转移。
3.1重组Slit2生产和伤口愈合试验
将融合有c-myc标签的slit2基因转染HEK293细胞，生产带有c-myc标签的Slit2全长蛋白。细胞在5％胎牛血清的DMEM培养基中培养。从培养上清纯化Slit2蛋白。以没转染的HEK293细胞上清作对照。
在进行伤口愈合实验时,将H1299细胞种在涂有胶原蛋白光化学蚀刻网格玻片上，这些玻片放在35mm培养皿中。一旦细胞聚集,用无菌的10ul吸管尖端小心刮细胞单层生成伤口面积。用PBS冲洗板孔去除脱离细胞,然后在对照组和含Slit2培养基中培养。0小时和伤口形成后13-16小时，在倒置显微镜下拍摄十张图片。通过测量细胞初始位置的距离向前迁移形成的伤口来量化细胞迁移的水平。
通过细胞伤口愈合实验证明Slit蛋白可以显著减少H1299肺癌细胞的细胞迁移。而这种抑制作用在USP33被特异性siRNA(siUSP33)敲除后消失(图8A-8C)，这样的结果表明USP33通过slit信号通路影响了肺癌细胞的迁移。同时需要说明的是，在这些实验中无论是用slit处理H1299细胞或者siUSP33作用于H1299细胞，均未影响H1299细胞的增殖或细胞周期(见图7)。
为了检测是否是USP33的去泛素活性介导了这一功能，发明人使用USP33突变体来进行试验。发明人构建了一个去泛素化催化位点点突变的USP33—C163A,将野生型(Wt)USP33或者突变体C163A-mutant USP33(Mt)转化H1299细胞，之后用含有Slit的培养基或不含Slit的对照培养基进行培养，从实验结果可看出在Slit存在的情况下，USP33的突变(C163A)会增加H1299细胞的迁移。由此发明人可以得出：USP33蛋白的去泛素活性结构域对抑制肺癌细胞的迁移具有重要作用。
4、USP33调节Robo1蛋白的稳定性
已有的报道显示，在乳腺癌细胞中，USP33的作用是改变细胞内Robo1蛋白的分布，即将Robo1Robo1从细胞内重新分配到细胞表面，而不会影响Robo1蛋白的总水平。那么在肺癌细胞中USP33是否有着相似的功能。
发明人用免疫共沉淀方法检测了USP33与Robo1的相互作用(图9A)，在H1299细胞中缺失USP33基因，在MG-132(泛素蛋白酶体***的抑制剂)存在下，Robo1Robo1的泛素化水平增加(图9B)。过表达野生型USP33基因(而不是无催化活性的突变体C163A)，Robo1的泛素化水平减少(图9C)。出乎意料的是，通过siRNA方法下调USP33在H1299细胞表达水平，Robo1蛋白表达水平也降低，这与乳腺癌细胞中的结果相反(Fig.9D；Yuasa-Kawada et al.,2009a)。相反的，过表达野生型的USP33，而不是C163A突变的USP33，在H1299细胞中Robo1表达量增多(图9E)。
为了研究USP33如何维持Robo1蛋白的稳定性，发明人进行了如下实验：用对照siRNA(CTRL)或siUSP33转染H1299细胞，同时用放线菌酮(CHX，蛋白质合成抑制剂)对细胞进行不同时间段的处理。通过蛋白质印迹(WB)分析检测细胞裂解液中Robo1蛋白质表达水平。在放线菌酮处理后6小时，Robo1水平下降；处理12小时后，与对照的siRNA相比，在转染siUSP33的H1299细胞中Robo1蛋白几乎完全降解，这样的实验结果表明USP33表达水平的下调缩短Robo1的半衰期(图9F)。通过siUSP33降低Robo1蛋白水平的现象可以被蛋白酶体抑制剂MG-132所抑制的实验(图9G)，表明在H1299细胞中Robo1降解主要通过泛素-蛋白酶体体系实现的。这些结果表明，在肺癌细胞中，USP33可以提高Robo1蛋白稳定性，阻止泛素-蛋白酶体对它的降解作用。
三、结果分析
发明人的研究结果提供的证据表明USP33在肺癌中是一个新的成员，调节slit信号通路。发明人证明了在肺癌中USP33的表达下调与临床结果相关。USP33通过调节slit信号通路的活性抑制肺癌细胞迁移。此外，USP33通过抑制蛋白降解酶活性来提高Robo1蛋白稳定性。这些结果揭示了USP33在肺癌细胞中介导slit-robo信号一个先前未知的作用。
USP33参与许多细胞过程，发明人的研究第一次证明USP33是一种肺癌相关基因，而且该基因在肺癌组织样品中表达量是降低的。这种下调USP33表达情况是在肺癌多微阵列数据库中，以及通过实时定量RT-PCR和免疫组织化学分析所证实。USP33的高表达与肺癌患者预后较好相关。人类USP33基因位于1号染色体p31.1，在非小细胞肺癌中约有50％的该区域等位基因缺失。在该区域中，一些肿瘤抑制基因已被确定。例如，与DnaJ-like热休克蛋白(HLJ1)定位在这个区域已被识别为抑制肺癌细胞的增殖，锚定非依赖性生长，肿瘤发生，细胞转移和侵袭。cAMP-依赖性蛋白激酶β(PRKACB)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中被下调，并且PRKACB的上调可以防止非小细胞肺癌的发展。在本研究中，发明人的研究结果表明，USP33是肺癌发生的关键参与者，可以是作为预测肺癌进展的一个潜在的预后生物标志物。
最近的研究表明，泛素化蛋白家族中不同基因表达的改变与不同类型的癌症相关，包括肺癌等。例如，USP44在人肺腺癌中被下调。患者USP44酶表达水平较低表明总生存期将显著减少。在肺癌细胞系已发现该去泛素(BAP1)纯合子内重排和缺失。USP1/UAF1可以作为一种致癌基因，因为USP1/UAF1的抑制剂与顺铂在抑制非小细胞肺癌顺铂耐药细胞增殖中发挥协同作用。本发明专利申请研究表明：USP33可能是肺癌中一种新的抑癌基因。
在人类肺癌中，Slit2蛋白的低表达与肺癌晚期及病人的病情预后不佳相关。Robo1缺陷的小鼠表现出支气管上皮增生及局灶性增生，即早期肺癌相关的病理特点。在发明人的研究中，Slit2蛋白显著抑制肺癌细胞的迁移，支持slit-Robo信号通路对肺癌有抑制作用。
发明人的研究证明，slit抑制乳腺癌细胞迁移依赖于USP33的作用，在肺癌细胞中，USP33与Robo1相互作用，并且是slit抑制肺癌细胞的迁移所必需的。泛素介导的修饰作用在调节蛋白的稳定性中起到关键作用(Ciechanover and Schwartz,1994)。然而，USP33与Robo1相互作用，是slit所介导的Robo1再分配到质膜所需要的，但不影响总Robo1蛋白的水平。
在此研究中表明，USP33通过抑制泛素蛋白酶体途径从而稳定Robo1蛋白在肺癌细胞中的表达水平。USP33调控slit信号在肺癌细胞中的传导，这需要USP33的酶活性，因为USP33催化部位突变后(C163A)，slit不再抑制肺癌细胞迁移。有趣的是，在cBioPortal肺癌样本基因组学数据库中已确定4个在USP33的催化结构域错义突变。综合对乳腺癌的发明专利申请研究可表明，在不同的癌细胞中，USP33可能通过不同的机制调控slit信号传导。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实例的限制，上述实例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。
Claims (3)
1.USP33在制备检测肿瘤预后发展情况药物中的应用,所述肿瘤为肺癌、黑色素瘤和急性髓细胞白血病,所述预后指患者的生存周期。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述USP33作为肿瘤抑制基因。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：在肺癌中，所述USP33通过调控slit-Robo信号通路作为肿瘤抑制基因。
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