CN105181405A - 一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法,针对茶叶或茶青样品中的内源物质对测试产生特殊干扰,研发出一种专用于提取茶叶中的残留农药的农药提取试剂,用此试剂提取茶叶中的农药残留,无需调节pH﹑过层析柱以及氧化过程,所用试剂安全环保且用量少。首创将胆碱酯酶与DTNB复合成Et试剂,在检测时直接将其与样品待测液进行酶抑制反应,使得操作过程中少加一种试剂,检测方法更加简便,并减少实验器材的使用。该方法简单快速,从样品处理到报告检测结果全流程20分钟,并可实现多通道同时检测。
Description
技术领域
本发明属于分析化学领域,具体涉及一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法。
背景技术
目前可查阅的茶叶中的农药快速检测方法有以下两种,但都存在着检测步骤烦琐,耗时长,及所用试剂有毒有害的问题,因此无法在基层实验室和种植、生产、销售现场推广应用。下面简单介绍两种方法的操作步骤加以说明:
1.2002年发布了一个推荐性国家标准《茶中有机磷及氨基甲酸酯农药残留量的简易检验方法酶抑制法》GB/T18625-2002,但因为茶叶样品会对测试产生特殊的干扰,分析方法中仍无法避免冗长繁杂、并且耗费大量有机试剂的提取、净化等前处理步骤,其分析操作时间甚至不会少于在实验室仪器分析方法。因此这个分析方法并不能很好解决实际应用中的问题。
其分析步骤是:
(1)样品提取:0.5g茶加5ml丙酮浸泡5分钟再加0.2g碳酸钙。
(2)氧化:取0.5mL丙酮提取液于5mL烧杯中,吹干后加入0.3mL缓冲液溶解。加入氧化剂(预先配制)0.1mL,摇匀后放置10min,再加入还原剂(预先配制)0.3mL摇匀。
(3)酶解:加入酶液(预先制备)0.2mL摇匀,放置10min,再加入底物0.2mL,显色剂(预先配制)0.1mL,放置5min后测定。
(4)测定:在分光光度计波长调至600nm测定,当测定值在1.0以下时,为未检出。当测定值在1.0~1.3之间时,为可能检出,但残留量较低。当测定值为1.3以上时,为检出。测定值越高,说明农药残留量越高。
2、另有资料显示使用农药速测卡测定茶叶中的农药残留
操作作步骤如下:
(1)样品处理
绿茶样品:取2g绿茶适当剪碎,放入带盖瓶中,加入10mL纯净水,充分摇匀后,静止15min。
铁观音、茉莉花、乌龙、普洱、红茶样品:取2g茶叶适当剪碎,放入带盖瓶中,加入10mL纯净水,加入5滴试剂A充分摇匀,静止15min。
(2)预反应
绿茶样品:取3mL浸泡液加入反应管中,摇匀;直接过滤(或4000rpm离心3min),取1mL滤液或上清液于小烧杯中,用酸性调节剂调节pH值为4~5之间。
铁观音、茉莉花、乌龙、普洱、红茶样品:取3mL浸泡液加入反应管中,摇匀;静置3min,取1mL上清液或滤液于小烧杯中,用酸性调节剂调节pH值为4~5之间。
(3)过柱
先取1mL纯净水加入层析柱中,用针管加压排空后,再取1mL上述处理液加入层析柱中,用针管缓慢加压,(弃去第一滴)收集无色澄清滤液即为待测液。滴2滴(80ul)待测液于速测卡白色药片上。
(4)反应
将速测卡置于40℃恒温装置中放置10min进行预反应,预反应后恒温装置恒温3min,使红色药片与白色药片叠合发生反应,根据白色药片的颜色变化判断结果。每批测定应设一个纯净水或蒸馏水的空白对照卡。
以上两种方法在具体操作时步骤烦琐,国标法使用的试剂繁多,既有有机溶剂,又有氧化剂和还原剂。许多试剂还须预先配制。而用农药速测卡时其操作要过滤样品提取液,还须用酸调节待测液的pH,并且要经过层析柱处理。因此在实际应用中不能达到快速简便的目的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法,针对茶叶或茶青样品中的内源物质对测试产生特殊干扰,研发出一种专用于提取茶叶中的残留农药的农药提取试剂,用此试剂提取茶叶中的农药残留,无需调节pH﹑过层析柱以及氧化过程,所用试剂安全环保且用量少。首创将胆碱酯酶与DTNB复合成Et试剂,在检测时直接将其与样品待测液进行酶抑制反应,使得操作过程中少加一种试剂,检测方法更加简便,并减少实验器材的使用。该方法简单快速,从样品处理到报告检测结果全流程20分钟,并可实现多通道同时检测。
为实现上述目的,本发明采用如下技术方案:
一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法,茶叶或茶青中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的检测步骤:
(1)试剂的配制:
Et试剂:无需配制,直接开封启用;
Sub试剂:在10mL蒸馏水中加入10-60mg碘化硫代乙酰胆碱,摇匀使之溶解;
农药提取液:在20-80mL磷酸盐或碳酸盐缓冲溶液中加入50-300mL丙三醇,混匀后再加入100-300mL95wt.%乙醇溶液,混匀;
缓冲液:在500mL蒸馏水中加入5-15g磷酸氢二钠和0.2-0.8g磷酸二氢钾,混匀;
(2)检测
样品提取:
称取0.5克茶叶样品,加入1.0mL农药提取液,使样品充分浸润并静置10分钟,底部溶液即为待测液;
对照测定:
吸取Et试剂100μL,加入1.5mL缓冲液,摇匀,加入200μL农药提取液,摇匀,静置10分钟,加入100μLSub试剂,摇匀后移入0.5cm比色皿,及时放在农药残留测试仪上进行对照测试;
样品测定:
吸取Et试剂100μL,加入1.5mL缓冲液,摇匀,加入200μL待测液,摇匀,静置10分钟,加入100μLSub试剂,摇匀后移入0.5cm比色皿,及时放在农药残留测试仪上进行样品测试;
测定结果的判定:
当检测结果的酶抑制率读数超过50%时,表明样品农药残留毒性可能超过安全标准,应当确认操作步骤无误、仪器工作正常、试剂没有污染失效,重新进行对照测试并对此样品进行2次以上的重复检测,如检测结果重复并仍然超过50%,则需用气相色谱作进一步的确认。
所述的Et试剂为胆碱酯酶和5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)的混合液,两者的重量比为1︰40~100。
本发明的显著优点在于:针对茶叶或茶青样品中的内源物质对测试产生特殊干扰,研发出一种专用于提取茶叶中的残留农药的农药提取试剂,用此试剂提取茶叶中的农药残留,无需调节pH﹑过层析柱以及氧化过程,所用试剂安全环保且用量少。首创将胆碱酯酶与DTNB复合成Et试剂,在检测时直接将其与样品待测液进行酶抑制反应,使得操作过程中少加一种试剂,检测方法更加简便,并减少实验器材的使用。该方法简单快速,从样品处理到报告检测结果全流程20分钟,并可实现多通道同时检测。以3~8通道为例,每样品平均检测时间只有3-8分钟。
具体实施方式
一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法,茶叶或茶青中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的检测步骤:
(1)试剂的配制:
Et试剂:无需配制,直接开封启用;所述的Et试剂为胆碱酯酶和5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)的混合液,两者的重量比为1︰0.002。
Sub试剂:在10mL蒸馏水中加入10-60mg碘化硫代乙酰胆碱,摇匀使之溶解;
农药提取液:在20-80mL磷酸盐或碳酸盐缓冲溶液中加入50-300mL丙三醇,混匀后再加入100-300mL95wt.%乙醇溶液,混匀;
缓冲液:在500mL蒸馏水中加入5-15g磷酸氢二钠和0.2-0.8g磷酸二氢钾,混匀;
(2)检测
样品提取:
称取0.5克茶叶样品,加入1.0mL农药提取液,使样品充分浸润并静置10分钟,底部溶液即为待测液;
对照测定:
吸取Et试剂100μL,加入1.5mL缓冲液,摇匀,加入200μL农药提取液,摇匀,静置10分钟,加入100μLSub试剂,摇匀后移入0.5cm比色皿,及时在农药残留测试仪上进行对照测试;
样品测定:
吸取Et试剂100μL,加入1.5mL缓冲液,摇匀,加入200μL待测液,摇匀,静置10分钟,加入100μLSub试剂,摇匀后移入0.5cm比色皿,及时在农药残留测试仪上进行样品测试;
测定结果的判定:
当检测结果的酶抑制率读数超过50%时,表明样品农药残留毒性可能超过安全标准,应当确认操作步骤无误、仪器工作正常、试剂没有污染失效,重新进行对照测试并对此样品进行2次以上的重复检测,如检测结果重复并仍然超过50%,则需用气相色谱作进一步的确认。
实施例1
一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法,茶叶或茶青中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的检测步骤:
(1)试剂的配制:
Et试剂:2mg(或1ku)胆碱酯酶溶解于500ml磷酸盐缓冲溶液(称取磷酸氢二钠5~15g和磷酸二氢钾0.2~0.9g于试剂瓶中加入500mL蒸馏水溶解,混匀;)中,加入2~10g牛血清白蛋白和3~15g海藻糖搅拌溶解;另称取80~200mg的DTNB和0.5~5g的牛磺胆酸钠加入,并搅拌至完全溶解后即成为Et试剂,将其封装在5ml的安瓿中并置于冰箱(0~5℃)保存。使用时取出开封即可。
Sub试剂:在10mL蒸馏水中加入30mg碘化硫代乙酰胆碱,摇匀使之溶解;
农药提取液:在50mL磷酸盐或碳酸盐缓冲溶液中加入200mL丙三醇,混匀后再加入200mL95%乙醇溶液,混匀;
缓冲液:在500mL蒸馏水中加入10g磷酸氢二钠和0.5g磷酸二氢钾,混匀;
(2)检测
样品提取:
称取0.5克茶叶样品,加入1.0mL农药提取液,使样品充分浸润并静置10分钟,底部溶液即为待测液;
对照测定:
吸取Et试剂100μL,加入1.5mL缓冲液,摇匀,加入200μL农药提取液,摇匀,静置10分钟,加入100μLSub试剂,摇匀后移入0.5cm比色皿,及时在农药残留测试仪上进行对照测试;
样品测定:
吸取Et试剂100μL,加入1.5mL缓冲液,摇匀,加入200μL待测液,摇匀,静置10分钟,加入100μLSub试剂,摇匀后移入0.5cm比色皿,及时在农药残留测试仪上进行样品测试;
测定结果的判定:
当检测结果的酶抑制率读数超过50%时,表明样品农药残留毒性可能超过安全标准,应当确认操作步骤无误、仪器工作正常、试剂没有污染失效,重新进行对照测试并对此样品进行2次以上的重复检测,如检测结果重复并仍然超过50%,则需用气相色谱作进一步的确认。
应用上述检测方法,在铁观音茶叶和实验室栽种的无农药的茶青进行农药加样测定,得到上述方法的不同农药的检测灵敏度如下:
以上所述仅为本发明的较佳实施例,凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰,皆应属本发明的涵盖范围。
Claims (2)
1.一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法,其特征在于:茶叶或茶青中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的检测步骤:
(1)试剂的配制:
Et试剂:无需配制,直接开封启用;
Sub试剂:在10mL蒸馏水中加入10-60mg碘化硫代乙酰胆碱,摇匀使之溶解;
农药提取液:在20-80mL磷酸盐或碳酸盐缓冲溶液中加入50-300mL丙三醇,混匀后再加入100-300mL95wt.%乙醇溶液,混匀;
缓冲液:在500mL蒸馏水中加入5-15g磷酸氢二钠和0.2-0.8g磷酸二氢钾,混匀;
(2)检测
样品提取:
称取0.5克茶叶或茶青样品,加入1.0mL农药提取液,使样品充分浸润并静置10分钟,底部溶液即为待测液;
对照测定:
吸取Et试剂100μL,加入1.5mL缓冲液,摇匀,加入200μL农药提取液,摇匀,静置10分钟,加入100μLSub试剂,摇匀后移入0.5cm比色皿,放入农药残留检测仪及时进行对照测试;
样品测定:
吸取Et试剂100μL,加入1.5mL缓冲液,摇匀,加入200μL待测液,摇匀,静置10分钟,加入100μLSub试剂,摇匀后移入0.5cm比色皿,放入农药残留检测仪及时进行样品测试;
测定结果的判定:
当检测结果的酶抑制率读数超过50%时,表明样品农药残留毒性可能超过安全标准,应当确认操作步骤无误、仪器工作正常、试剂没有污染失效,重新进行对照测试并对此样品进行2次以上的重复检测,如检测结果重复并仍然超过50%,则需用气相色谱作进一步的确认。
2.根据权利要求1所述的茶叶或茶青中农药残留的检测方法,其特征在于:所述的Et试剂为胆碱酯酶和5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)的混合液,两者的重量比为1︰40~100。
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