CN105165387A - 一种利用酸枣枝屑培养秀珍菇的方法 - Google Patents

一种利用酸枣枝屑培养秀珍菇的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种利用酸枣枝屑为主料培养秀珍菇的方法，包括如下步骤：A.液体菌种的制备和培养；B.谷粒菌种的制备和培养；C.栽培用培养基的制备；D.无菌条件下，将步骤B制备得到的谷粒菌种接入步骤C制备得到的培养基，进行培养、出菇管理、采收；创新点在于，在步骤A或/和步骤B或/和步骤C的培养基中含有酸枣枝屑。本发明充分利用了林业废弃物酸枣枝，形成循环经济模式，避免了自然资源的浪费和环境的污染，而且还降低了栽培成本。利用酸枣枝屑栽培秀珍菇的栽培技术，具有显著的经济效益和生态效益，具有广阔的应用前景。

Description

一种利用酸枣枝屑培养秀珍菇的方法
技术领域
本发明属于食用真菌栽培的技术领域，具体涉及一种包含酸枣枝屑的秀珍菇培养料及其用于培养秀珍菇的方法。
秀珍菇(Pleurotusgeesteranus)在分类学秀珍菇上属于真菌门、担子菌纲、伞菌目、侧耳科侧耳属。名称来源于台湾，它不同于普通的凤尾菇是因为其较小，柄有5～6厘米，盖直径<3厘米。秀珍菇其实是凤尾菇的一个商业味比较浓厚的名称，是凤尾菇的未成熟子实体。
近几年，秀珍菇的开发与研究在日本、韩国、我国台湾等地已成为热门的话题。目前国内秀珍菇种植业已进行开发，有计划、集约性地发展秀珍菇生产，开发秀珍菇系列产品，是发展真菌事业中的一项很有现实意义的工作。
酸枣为鼠李科枣属的一种灌木。为我国北方较普通的一种野生资源，多分布在海拔200-800米的低山丘陵区，仅以河北为例，可占河北太行山总面积的48.1％。通常酸枣枝的用途为：作柴烧，作篱笆护墙用，作果园的防护墙用，作为防风固沙之用。目前，对酸枣枝桠资源化开发尚未开展，其丰富的野生资源不能充分被利用，造成极大的浪费。以酸枣枝屑为栽培原料，必然会产生很大的经济和生态效益，在完善当地经济结构调整、实现循环经济方面将发挥巨大的作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用酸枣枝屑培养秀珍菇的方法，实现酸枣枝这种林废弃物的生物资源循环利用。
为了实现上述目的，本发明提供一种利用酸枣枝屑培养毛木耳的方法，包括如下步骤：
A.液体菌种的制备和培养；
B.谷粒菌种的制备和培养；
C.栽培用培养基的制备；
D.无菌条件下，将步骤B制备得到的谷粒菌种接入步骤C制备得到的培养基，进行培养、出菇管理、采收；
创新点是在步骤A或/和步骤B或/和步骤C的培养基中含有酸枣枝屑。
所述的利用酸枣枝屑培养秀珍菇的方法，步骤A中秀珍菇的液体菌种培养基中作为底物诱导物提前加入酸枣枝屑；其优化液体菌种培养基配方重量百分比为：马铃薯20％，酸枣枝粉5％，麸皮3％，葡萄糖2％，KH2PO40.3％，MgSO40.15％，VB110mg/L，羧甲基纤维素0.3％，水1000mL，pH自然。
所述利用酸枣枝屑培养秀珍菇的方法，所述步骤A中液体菌种的制备特征在于：
a.一级液体菌种的制备
无菌条件下，将市售母种接入一级液体培养基中，26-28℃、160r/min恒温振荡培养5d，即制得一级液体菌种；
所述一级液体菌种培养基包括：以重量百分比计，马铃薯20％，麸皮3％，葡萄糖2％，KH2PO40.3％，MgSO40.15％，CMC0.3％，VB110mg/L；
b.二级液体菌种的制备
所述二级液体菌种培养基配方重量百分比为：马铃薯20％，酸枣枝粉5％，麸皮3％，葡萄糖2％，KH2PO40.3％，MgSO40.15％，CMC0.3％，VB110mg/L。制备方法是将马铃薯、酸枣枝屑粉和麸皮加水1000mL共煮，开锅后保持微沸30分钟，过滤，取滤液，趁热加入其它组分，搅拌化开后，定容至水1000mL，分装，灭菌，待接种；
无菌条件下，将一级液体菌种以10％的接种量接入二级液体培养基中，26-28℃、160r/min恒温振荡培养7d，即制得二级液体菌种。
所述的利用酸枣枝屑培养秀珍菇的方法，步骤B中秀珍菇的谷粒菌种培养基中也作为底物诱导物提前加入酸枣枝屑；其优化的谷粒菌种培养基配方：麦粒84％，酸枣枝屑15％，生石灰1％。
所述利用酸枣枝屑培养秀珍菇的方法，所述步骤B中谷粒菌种的制备特征在于：
将步骤A得到的二级液体菌种接入谷粒菌种培养基，接种量为10％，26-28℃培养至满，得到谷粒菌种。
所述的利用酸枣枝屑培养秀珍菇的方法，步骤C中酸枣枝屑作为栽培秀珍菇的主料，栽培培养基重量组成包括：酸枣枝屑60％、棉籽皮20％、麸皮19％、生石灰1％。
所述利用酸枣枝屑培养秀珍菇的方法，所述步骤C中酸枣枝屑培养基的制备特征在于：将酸枣枝、芦苇粉碎成木屑状，配以棉籽皮、麸皮和生石灰，料水比为1∶1.4，堆闷30min，装入容器内，灭菌，冷却后备用。
所述利用酸枣枝屑培养秀珍菇的方法，步骤D中谷粒菌种的接种量为5-10％。
所述利用酸枣枝屑培养基栽培秀珍菇的方法，液体培养基中所用酸枣枝屑，事先粉碎并过80目筛。
所述利用酸枣枝屑培养秀珍菇的方法，步骤C中酸枣枝屑培养基的灭菌条件为121℃高压灭菌150min或100℃常压灭菌24h。
本发明的技术进步效果表现在以酸枣枝屑作为栽培毛木耳的主要原料，优势主要有三点：
1、对于食用菌而言，为其提供生长所需碳源。
2、酸枣枝目前尚未得到开发利用，资源丰富，为食用菌栽培提供了一种价格低廉的栽培原料，生产成本低，经济效益高。
3、从生态的角度来看，实现了农林废弃物的再利用，具有可观的经济效益，应用前景广阔。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明所述内容做进一步详细的说明。
实施例：利用酸枣枝屑培养秀珍菇，秀珍菇菌种为市场采购。
如果采用常规工艺，则是PDA母种-棉籽皮原种-酸枣枝屑栽培种-酸枣枝屑出菇袋；但采用PDA母种-液体菌种-谷粒菌种-酸枣枝屑出菇袋工艺，则可以缩短生产周期近三分之一。下面重点介绍液体菌种工艺：
A.液体菌种的制备
一级液体菌种培养基配方：马铃薯20％，麸皮3％，葡萄糖2％，KH2PO40.3％，MgSO40.15％，VB110mg/L，CMC0.3％，pH自然；制备方法是马铃薯、麸皮共煮沸30min，过滤去渣得浸提液加入其他成分。一级液体菌种制备时使用500mL锥形瓶，装液量为200mL，121℃高压灭菌30min后，无菌条件下接入市售的PDA斜面菌种，每瓶接种量为4块0.5cm×0.5cm菌种块。接种后在28℃、160r/min的条件下，恒温振荡培养7d。
二级液体菌种培养基配方：酸枣枝屑粉5％，马铃薯20％，麸皮3％，葡萄糖2％，KH2PO40.3％，MgSO40.15％，VB110mg/L，CMC0.3％，pH自然；其中酸枣枝屑粉碎过80目筛得粉状，与马铃薯、麸皮共煮沸30min，过滤去渣得浸提液。
制备方法是酸枣枝屑粉碎过80目筛得粉状，与马铃薯、麸皮共煮沸30min，过滤去渣得浸提液。二级液体菌种装液量规格、灭菌条件及培养条件同上，接种量为10％。
在二级液体菌种制备阶段，测定优化液体菌种发酵液中漆酶酶活及羧甲基纤维素酶酶活(CMC酶活)，以未添加酸枣枝屑粉末的培养基为对照，以发现酸枣枝粉末在液体菌种中是否有底物诱导作用的优势。酶活测定结果如表1所示。
漆酶酶活力定义：在一定条件下，每分钟使反应液OD值增加0.001的酶量定义为一个漆酶酶活力单位(U)。
羧甲基纤维素酶酶活力(CMC酶活)定义：在一定条件下，每分钟酶解底物产生1μg葡萄糖的酶量定义为一个羧甲基纤维素酶酶活力单位(U)。
表1秀珍菇的酶活数据
液体培养基 漆酶酶活(U/mL) CMC酶活(U/mL)
对照组(未添加酸枣枝屑) 47.69 66.19
本发明所述液体培养基 52.52 72.78
由表1可知，本发明所述二级液体培养基的漆酶酶活、CMC酶活均比对照组(未添加酸枣枝屑)的高，可见在液体培养基中添加酸枣枝屑对秀珍菇菌丝的漆酶与纤维素酶的分泌起到一定的底物诱导作用，让菌丝提前适应底物(酸枣枝屑)，从而加快菌丝在栽培料上的长速，缩短栽培周期。
B.谷粒菌种的制备
谷粒菌种培养基配方：麦粒84％，酸枣枝屑15％，生石灰1％。
准确称取培养基各组成成分，料水比1︰1.4进行拌料，装入17cm×32cm×0.05cm聚乙烯塑料袋，每袋装干料300g，制备120袋。将优化得到的二级液体菌种以及未添加酸枣枝屑的对照组液体菌种分别接入谷粒菌种培养基，分别接种60袋，测定菌长速，并记录满袋时间。
为了考察本发明所述谷粒菌种培养基的优势，本发明进行了对比试验，对照组培养基为麦粒培养基：麦粒99％，生石灰1％；对比试验结果如表2所示。
表2秀珍菇谷粒菌种的满袋时间
液体菌种 谷粒培养基 平均满袋时间(d)
本发明二级液体菌种(加酸枣枝屑粉末) 麦粒+酸枣枝屑 23
纯麦粒 28
对照组二级液体菌种(未添加酸枣枝屑) 麦粒+酸枣枝屑 25
纯麦粒 28
由表2可知，菌丝在“麦粒+酸枣枝屑”谷粒培养基比纯麦粒培养基的长速快，这是因为谷粒之间的间隙和酸枣枝屑的添加更有利于菌丝的生长，在液体培养基中加入酸枣枝屑，使菌丝能够更快适应生长底物，从而加快发菌速度，缩短生产周期提高生产效率。
C.秀珍菇培养料的制备
按质量比，称取酸枣枝屑60％、棉籽皮29％、麸皮10％，生石灰1％，料水比为1︰1.4进行拌料，混合均匀后，堆闷30min后装入容器中进行灭菌和接种工作。
将上述培养料装入聚乙烯袋、聚丙烯袋或玻璃瓶内，口径不限，常规扎口，高压灭菌一般以121℃灭菌150min；常压灭菌一般以100℃灭菌，保持24h；冷却后接种。
本发明在研究过程中对酸枣枝屑的用量进行了考察，具体如下：
按表3所示准确称取各组成成分，将其混匀，加水，料水比为1︰1.4，把配置好的培养料装入试管，每个配方重复5次，121℃高压灭菌150min。将步骤B所述谷粒菌种分别接入含有培养料的试管中，进行试管营养生长试验。
表3培养基配方(干料，％)
配方编号 酸枣枝屑 棉籽皮 麸皮 石灰
P0 0 89 10 1
P1 30 59 10 1
P2 40 49 10 1
P3 50 39 10 1
P4 60 29 10 1
P5 70 19 10 1
P6 80 9 10 1
每隔2天观察一次试管中菌丝的长速和长势情况，用游标卡尺(精确度0.02mm)测定菌丝的长速。菌丝长速长势结果如表4所示。
表4秀珍菇的菌丝生长情况
配方 菌丝长速(mm/d) 菌丝长势
P0 5.66±0.01 +++
P1 5.50±0.02 +++
P2 5.45±0.04 +++
P5 5.36±0.03 +++
P3 5.23±0.01 ++
P4 5.18±0.02 ++
P6 5.02±0.03 +
注：列出长速均为平均值±标准误；+++表示生长致密，++表示生长较致密，+表示生长一般。
由表4可以看出，当酸枣枝屑添加量P4时，其长势较好，菌丝洁白、较致密，与纯棉籽皮培养基具有可比性。
按表3P4中的配方称取各成分，混合均匀，料水比1︰1.4进行拌料，装入17cm×32cm×0.05cm聚乙烯塑料袋，每袋装干料约300g，接种量为“液体菌种→酸枣枝屑+棉籽皮”制种的谷粒菌种一接种勺，观察并记录各个配方的生长情况并计算生物转化率。试验结果如表5所示。
表5秀珍菇的生物转化率
培养基编号 平均产量(g) 平均生物效率(％)
P0 216.30 72.10
P1 210.69 70.23
P4 207.30 69.10
P3 205.62 68.54
P2 194.07 64.69
P5 186.30 62.10
P6 183.66 61.22
从表5可以看出，当以酸枣枝屑为主要碳源达到60％，秀珍菇菌株的生物转化率达到了69.10％，尽管未达到栽培料主料纯棉籽皮的生物转化率72.10％，但酸枣枝屑可以成为秀珍菇种植中的主料，酸枣枝屑这一林业废弃物也得到了资源化利用，对生态农业建设具有重要意义。
本发明最终确定适宜配方为酸枣枝屑60％、棉籽皮29％、麸皮10％、生石灰1％，料水比为1︰1.4进行拌料。
D.接种、培养、采收
将灭菌冷却后的出菇袋，无菌操作下按照5-10％的接种量接入步骤B所得谷粒菌种。可将接好种的菌袋置于24℃左右室温下进行避光培养，使菌种尽快萌发、定植。待菌丝满袋后，敞开袋口进行生殖生长管理阶段。
原基分化阶段应拉大温差，使昼夜形成需8～10℃的温差，同时给予适量的散射光线，保持空气相对湿度在85％～90％，刺激菌丝形成较为整齐的原基。
子实体原期形成后，栽培场所要尽量减少温、湿度差，气温要尽量控制在18～22℃，空气相对湿度稳定在85％～90％，每天向空中或地面喷水3～5次，切忌向子实体原基上喷水。每次喷水后，应加强通风，否则高温高湿极易导致病菌感染，发现料面有积水，要及时清掉。待大部分原基出现后，可适当减少温差，提高棚内温度，有利于子实体生长。当棚内温度超过25℃或低于8℃时，应设法降温或增温；空气相对湿度可在80％～95％之间波动，在此范围内湿度越大，子实体长得越肥厚、敦实。
采收：菌盖长至2～3厘米、菌盖边缘内卷、孢子尚未弹射采收为宜。采收时一手压住培养料，一手抓住菇体轻轻扭转即可拔下。秀珍菇多为丛生，采收时必须整丛一次性采收完，清理菇脚即可进行包装上市。
综上所述，本发明所述酸枣枝屑为主料可用于栽培秀珍菇，因此，将酸枣枝作为可循环利用的生物资源，用于产业化开发具有重要的创新意义和现实价值，再结合细胞工程定向选育适宜分解酸枣枝屑的优良菌株，将会产生更好效果。

Claims (10)

1.一种利用酸枣枝屑培养秀珍菇的方法，包括如下步骤：
A.液体菌种的制备和培养；
B.谷粒菌种的制备和培养；
C.栽培用培养基的制备；
D.无菌条件下，将步骤B制备得到的谷粒菌种接入步骤C制备得到的培养基，进行培养、出菇管理、采收；
其特征在于：在步骤A或/和步骤B或/和步骤C的培养基中含有酸枣枝屑。
2.根据权利要求1所述的利用酸枣枝屑培养秀珍菇的方法，其特征包括：步骤A中秀珍菇的液体菌种培养基中作为底物诱导物提前加入酸枣枝屑；其优化液体菌种培养基配方重量百分比为：马铃薯20％，酸枣枝粉5％，麸皮3％，葡萄糖2％，KH2PO40.3％，MgSO40.15％，VB110mg/L，羧甲基纤维素0.3％，水1000mL，pH自然。
3.根据权利要求2所述利用酸枣枝屑培养秀珍菇的方法，所述步骤A中液体菌种的制备特征在于：
a.一级液体菌种的制备
无菌条件下，将市售母种接入一级液体培养基中，26-28℃、160r/min恒温振荡培养5d，即制得一级液体菌种；
所述一级液体菌种培养基包括：以重量百分比计，马铃薯20％，麸皮3％，葡萄糖2％，KH2PO40.3％，MgSO40.15％，CMC0.3％，VB110mg/L；
b.二级液体菌种的制备
所述二级液体菌种培养基配方重量百分比为：马铃薯20％，酸枣枝粉5％，麸皮3％，葡萄糖2％，KH2PO40.3％，MgSO40.15％，CMC0.3％，VB110mg/L。制备方法是将马铃薯、酸枣枝屑粉和麸皮加水1000mL共煮，开锅后保持微沸30分钟，过滤，取滤液，趁热加入其它组分，搅拌化开后，定容至水1000mL，分装，灭菌，待接种；
无菌条件下，将一级液体菌种以10％的接种量接入二级液体培养基中，26-28℃、160r/min恒温振荡培养7d，即制得二级液体菌种。
4.根据权利要求1所述的利用酸枣枝屑培养秀珍菇的方法，其特征包括：步骤B中秀珍菇的谷粒菌种培养基中也作为底物诱导物、提前加入酸枣枝屑；其优化的谷粒菌种培养基配方：麦粒84％，酸枣枝屑15％，生石灰1％。
5.根据权利要求4所述利用酸枣枝屑培养秀珍菇的方法，所述步骤B中谷粒菌种的制备特征在于：
将步骤A得到的二级液体菌种接入谷粒菌种培养基，接种量为10％，26-28℃培养至满，得到谷粒菌种。
6.根据权利要求1所述的利用酸枣枝屑培养秀珍菇的方法，其特征包括：步骤C中酸枣枝屑作为栽培秀珍菇的主料，栽培培养基重量组成包括：酸枣枝屑60％、棉籽皮20％、麸皮19％、生石灰1％。
7.根据权利要求6所述利用酸枣枝屑培养秀珍菇的方法，所述步骤C中酸枣枝屑培养基的制备特征在于：将酸枣枝、芦苇粉碎成木屑状，配以棉籽皮、麸皮和生石灰，料水比为1∶1.4，堆闷30min，装入容器内，灭菌，冷却后备用。
8.根据权利要求1所述利用酸枣枝屑培养秀珍菇的方法，其特征在于，步骤D中谷粒菌种的接种量为5-10％。
9.根据权利要求2所述利用酸枣枝屑培养基栽培秀珍菇的方法，其特征在于，液体培养基中所用酸枣枝屑，事先粉碎并过80目筛。
10.根据权利要求1所述利用酸枣枝屑培养秀珍菇的方法，其特征在于，步骤C中酸枣枝屑培养基的灭菌条件为121℃高压灭菌150min或100℃常压灭菌24h。
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