CN105123621A - 山羊资源群体的构建方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于群体遗传资源库的构建领域，提供了一种科学地山羊资源群体库的构建方法，提供了一个山羊参考家系构建案例，涉及两个国家级遗传资源品种——大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）。该资源群体构建利用大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）正、反交，F1避免亲缘关系随机交配，使孟德尔遗传性状出现分离，然后利用基因组手段定位山羊经济性状QTL或功能基因，为山羊育种提供相对精确的遗传标记。该遗传资源库包括山羊群体、系谱信息数据库、表型性状数据库、DNA样本库、RNA样本库和遗传变异信息数据库。
Description
技术领域
本发明涉及一种山羊资源群体构建方法及其个体基因组变异信息数据库构建。
背景技术
山羊（Caprahircus）作为人类最早驯养的家畜之一，在全世界范围内被广泛饲养，尤其是在中国、印度等发展中国家，据估计2013年止，全世界山羊养殖数量超过10亿只。山羊能为人类提供肉、毛（绒）、皮、奶、肠衣等产品，并且是***人民的食物之一，故而养羊业的健康发展对提高人们水平和促进民族团结具有重要意义。山羊品种是保障养羊业健康发展的脊柱，但世界范围内山羊遗传改良进展缓慢。随着人类基因组计划的完成，动物基因组计划也发展到一个关键时期，越来越多的研究将人类基因组计划的技术、方法和思路应用到动物基因组领域。与人类基因组计划不一样的是，动物基因组重点在于绘制出控制畜禽性状的遗传图谱和物理图谱，从而精确定位影响畜禽性状的数量性状基因座（Quantitativetraitloci,QTL）并挖掘出优势性状功能基因，然后结合DNA重组技术将这些信息用于改良畜禽品种。
我国是山羊养殖大国，其养殖历史悠久，品种（或遗传资源）资源丰富，据统计我国现存山羊品种70个（赵有璋，中国养羊学，2013）。近年来我国山羊饲养由个体散养向规模化饲养转型，随着山羊养殖规模化、集约化不断提高，品种单一、整体生产水平难以提高等产业发展困境凸显，严重阻碍了我国山羊产业的健康可持续发展，急需围绕山羊遗传资源的合理开发利用、良种高效繁育等开展前沿技术研究，深入理解复杂性状的分子机制和鉴定目标基因。
大足黑山羊因原产于重庆市大足区而得名，属于肉皮兼用型地方优良山羊品种。公、母羊初生重分别为2.2kg和2.1kg，6月龄重分别为22.3kg和19.0kg，周岁公、母羊分别为37.6kg和27.7kg，成年公、母羊体重分别为59.6kg和40.2kg。12月龄宰前活重公、母羊分别为35.10kg和24.04kg，公、母羊屠宰率分别为44.93%和44.72%，净肉率分别为34.24%和33.18%。该种群具有性成熟早、繁殖力高的基本特性。公羊在2～3月龄左右即表现出性行为，一般初配年龄为7～8月；母羊在3月龄出现初情，6月龄开始配种。初产母羊平均产羔率为218.0%，2～6胎经产母羊产羔率为272.2%。
内蒙古绒山羊主要产于内蒙古西部地区。其中心产区为温带极端大陆气候，冬季漫长而寒冷，夏季温暖而短促，干旱少雨，风大沙多，昼夜温差大。内蒙古绒山羊成年公羊平均体高、体长、胸围和体重分别为65.4cm、70.8cm、85.1cm、47.8kg，成年母羊分别为56.4cm、59.1cm、70.7cm、27.4kg，屠宰率40%～50%。内蒙古绒山羊剪毛量公羊平均为570g，母羊平均为257g；抓绒量成年公羊平均为385g，成年母羊平均为305g。绒毛长度公羊平均为7.6cm，母羊平均为6.6cm；绒毛细度公羊平均为14.6μm，母羊平均为15.6μm；粗毛长度公羊平均为17.6cm，母羊平均为13.5cm。该品种繁殖率低，多产单羔，羔羊发育快，成活率高。产羔率100%～105%。
大足黑山羊和内蒙古绒山羊分别是以产肉和产绒为主的品种，是我国重要遗传资源。本发明以建立大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）参考家系为案例，创建一种山羊资源群体构建方法，结合基因组研究技术、方法和思路挖掘SNPs、SV和CNVs，研究复杂性状遗传机理；联合使用DNA（SNPs、SV和CNVs等）、RNA（表达谱、microRNA）、蛋白质组学的信息，深入理解复杂性状的分子机制和鉴定目标基因；利用现行育种方案，结合基因组选择、快繁技术培育具有优势性能的新品种。从而为我国现代畜牧业发展提供强有力的科技支撑，实现健康养殖数量、质量和效益并重。
发明内容
本发明的目的在于：提供一种科学地山羊资源群体构建方法，提供案例大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）参考家系的构建方案。
本发明已构建国家级遗传资源品种——大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）参考家系，其中信息包括：系谱信息数据库、表型性状数据库、组织样本库、DNA样本库、RNA样本库和遗传变异信息数据库。本发明提供的参考家系案例目前已采集50只山羊（其中母羊40只，公羊10只）基本体征信息和血液样本50份，并完成了体征信息数据库的录入和样品基因组DNA提取和保存。
该山羊资源群体具有一下特点：1、研究意义明显，大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）均属国家级遗传资源，品种改良有助于提高国家经济水平和国际竞争实力；2、样本结构对比明显，大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）在被毛颜色、生产方向、繁殖性能等多方面差异明显，正、反交可促使基因分离，有利用寻找目标性状QTL或功能基因；3、资料齐全、保存完整、可供持续研究，本发明涉及的资源群体系谱信息、体征信息、产绒性能、产肉性能、繁殖性能和皮用性能等相关性状记录完善，组织样本、RNA和DNA样本收录齐全，单核苷酸多态性（Singlenucleotidepolymorphism,SNP）、结构变异（Structuralvariation,SV）和拷贝数变异（Copynumbervariation,CNV）等数据库建立结构完整；4、构建时机恰当，结合近两年快速发展的组学技术（尤其是DNA测序技术）、山羊参考基因组和山羊高密度芯片，可快速挖掘山羊经济性状功能基因。
本发明的技术方案：一种山羊资源群体库的构建方法。构建山羊遗传资源库的具体步骤如下：
一、拟定资源群体构建方案及数据记录表，包括具体实施方案、引种方案（包括引种注意事项和品种标准）、山羊品种资源调查个体登记表、样本采集耗材、体型指数测量工具，工作人员分组。
二、购买无血缘关系大足黑山羊和内蒙古绒山羊，按照图1的构建方案进行资源群体构建。
三、体型组研究人员对资源群体所涉及的个体进行耳号编制，以及基本体征信息的收集并记录。
四、绒研组研究人员待资源群体中的绒山羊脱绒季节进行抓绒，并记录相关数据记录。
五、繁殖组研究人员对资源群体中的公、母羊分别进行繁殖性状的测定和记录，并采集胎盘、脐带血样本若干，保存于装有RNA保护液的冻存管中。
六、肉研组研究人员待山羊屠宰时进行产肉性能信息收集，并采集心、肝、脾、肺、肾、肌肉、皮肤、大脑、小脑和垂体等部位样本若干，数据记录。
七、皮研组研究人员对资源群体中的山羊个体进行皮用性状采集并记录。
八、采血组研究人员对资源群体所有个体于6月龄时进行颈静脉采血（多次采集），分别采用肝素钠抗凝、ACD抗凝和EDTA-Na2抗凝，对血样进行编号并登记相关内容。
九、实验处理组Ⅰ负责提取肉研组采集的组织样本RNA和采血组采集的血液样本DNA。RNA置于装有RNA保护液的冻存管中，管身注明样本ID号和提取日期，并填写RNA样品信息表；DNA样采用TEBuffer溶解并保存于1.5ml冻存管中，管身分别标注样ID号和提取日期，并填写DNA样品信息表。
十、实验处理组Ⅱ负责安排基因组测序和芯片基因分型，挖掘SNP、SV和CNV等遗传变异信息。
十一、建立资源群体系谱信息数据库、表型性状数据库、组织样本库、RNA样本库、DNA样本库和遗传变异信息数据库：遗传资源所有原始书面资料编号装订后封存，信息资料存入电脑，用Access软件建立***详实的信息数据库，同时刻录光盘保存，遗传变异变异数据库放置于自己搭建的FTP服务器上，并备份于硬盘保存。所有数据库由专职研究人员负责管理工作。
十二、汇编山羊资源群体信息数据库目录并编制各类样品领用规则。
步骤三中体型组采集的基本体征信息应包括以下信息：被毛颜色、肤色、体躯、角型、肉垂、皱纹、胡须、鼻部、胫部、耳型、蹄质、蹄型、四肢、***形状、***是否均匀、有无副***、角长（cm）、耳长（cm）、耳宽（cm）、体高（cm）、体重（kg）、胸围（cm）、管围（cm）、腰角宽（cm）、睾丸围（cm）、头长（cm）、头宽（cm）、体长（cm）、胸宽（cm）、胸深（cm）、十字部高（cm），见图2。
步骤四中绒研组采集性状应包括：毛色、绒色、绒毛比、羊绒长度（μm）、羊绒细度（μm）、羊绒密度（根/cm2）、绒层高度（cm）、羊绒强度（CN），净绒率，见图3。
步骤五繁殖组采集的繁殖性能信息应包括：产羔类型、羔羊性别、胎次、初生重（g）、子叶＜1cm、子叶≥2-3cm、子叶≥1-2cm、子叶≥4-5cm、子叶≥3-4cm、子叶≥5cm、胎盘重（g）、子叶宽径（cm）、睾丸围（cm）、***密度、***量（μL）、***活力、***畸形率、顶体完整率、***活力、***生存指数、***PH值、***渗透压、GOT（谷草转氨酶）释放量、受胎率，见图4。
步骤六中肉研组采集指标应包括：初生重（g）、育肥始重（kg）、断奶重（kg）、育肥终重（kg）、6月龄重（kg）、宰前活重（kg）、周岁龄重（kg）、胴体重（kg）、18月龄重（kg）、屠宰率、成年重（24月龄）（kg）、胴体净肉率、胴体品质、背膘厚（cm）、肉色（5分制）、眼肌面积（cm2）、大理石花纹（12分制）、肋肉厚（GR值）、脂肪色泽（7分制）、肉骨比、失水率、PH值、贮藏损失率、嫩度（剪切力）、瘦肉率、肉骨比，见图5。
步骤七中皮研组应采集以下信息：毛卷性状、丝性、毛卷大小、毛长测定、花案面积、花案清晰度、被毛密度、皮张厚度、正身面积、板质、毛色、花纹宽度、弯曲、图案、光泽、毛色均匀度、皮张面积、皮重等，见图6。
步骤八中采血组采集血液每次应为5ml，每次采集的血液样本应及时提取基因组DNA，若短期保存可置于-20℃冰箱，若长期保存要置于-80℃冰箱。
步骤九涉及的基因组DNA提取方法均为酚-氯抽提法，DNA样品信息记录表应包括以下内容：耳号、管号、品种、组织、抗凝剂、提取方法、溶解液、OD260/280、OD260/230、浓度C(ng/μl)、提取日期、DNA体积等信息；RNA提取应在步骤六肉研组采完样后立即提取，提取采用天根RNA提取试剂盒，加入的RNA保护液为TRIzol，RNA样品信息记录表应包括以下内容耳号、管号、品种、组织、提取方法、溶解液、OD260/280、OD260/230、浓度C(ng/μl)、提取日期、体积等信息。
步骤十涉及的遗传变异数据按照不同类型类型存放于FTP服务器。
步骤三至步骤十所涉及的所有信息均录入Access数据库，并根据不同类别刻录光盘保存。
附图说明
图1是资源群体构建方案设计图；
图2是资源群体基本体征信息记录表；
图3是资源群体产绒性状记录表；
图4是资源群体繁殖性能记录表；
图5是资源群体产肉性状记录表；
图6是资源群体皮用性状记录表；
图7是DNA样品信息记录表；
图8是RNA样品信息记录表；
图9是表型性状数据库截图。
具体实施方式
下面结合本发明大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）参考家系构建对本发明作进一步说明，但不作为对本发明的限制。
山羊资源群体构建案例：大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）参考家系（DIReferenceFamily,DIRF）构建，按以下步骤进行：
一、查阅资料，拟定山羊参考家系构建方案，制定配种记录表、基本体征信息记录表、产绒性能记录表、产肉性能记录表、繁殖性能记录表和皮用性能记录表，准备样本采集所需试剂耗材，并组织相关工作人员。
二、购买无血缘关系、符合品种标准的大足黑山羊公羊5只，母羊20只，内蒙古绒山羊（阿拉善型）公羊5只，母羊20只，以这50只山羊作为亲代（P）。
三、采用同期发情技术，按公、母羊1:4分成3组，分别用大足黑山羊公羊（D）与内蒙古绒山羊（I）母羊进行正交，大黑山羊母羊（D）与内蒙古绒山羊公羊（I）进行反交得到F1代。
四、正、反交系后代公、母羊避免亲缘关系进行随机交配得到F2代，构建方案见图1。
五、准备各类性能采集耗材，主要包括：配种记录表、基本体征信息记录表、产绒性能记录表、产肉性能记录表、繁殖性能记录表、皮用性能手套、口罩、记录表、笔、卷尺、直尺、测杖、骨盆器、硫酸纸、PH试纸、计量称、注射器、肝素钠抗凝管、EDTA-Na2抗凝管和ACD抗凝管等。
六、性能采集人员分组为：体型组、绒研组、肉研组、繁殖组、皮研组、采血组、实验处理组Ⅰ和Ⅱ。
七、体型组成员在山羊出生时、2月龄、6月龄、12月龄和24月龄分别对资源群体所有个体进行基本体征普查和记录。
八、绒研组每年在山羊脱绒季节进行抓绒，并测定产绒性能所涉及的所有性状指标并记录在案。
九、肉研组负责收集参考家系个体生长性状，在资源群体山羊屠宰时测定并记录所有产肉性能记录表涉及的指标，并负责采集各组织样品。
十、繁殖组负责执行涉及参考家系的同情发情技术，记录繁殖性能记录表的所有繁殖性状参数。
十一、皮研组负责采集所有参考家系个体皮用性能记录表所涉及的指标。
十二、采血组在6月龄采集颈静脉血液（可多次采集），分别采用肝素钠抗凝、ACD抗凝和EDTA-Na2抗凝，对血样进行编号并登记相关内容。
十三、实验处理组Ⅰ负责对采血组和肉研组采集的样品进行血样基因组DNA和组织样RNA提取，核对样品ID号并保存样本备用。
十四、实验处理组Ⅱ负责安排参考家系所有个体基因组测序和芯片基因分型，挖掘SNP、SV和CNV等变异信息。
十五、建立系谱信息数据库：汇编参考家系的配种记录表，整理结果编制系谱信息数据。
十六、建立组织样本库：将肉研组采集的组织样本装入无菌冻存管中，管身注明ID号、组织名、采集日期等，所有组织样本按照一定顺序置于液氮保存，以备DNA或RNA提取之用。
十七、建立参考家系DNA样本库：将实验处理组提取的样本基因组DNA核对编号后分别保存于-80℃超低温冰箱中（每个个体保存2份基因组DNA样本）。
十八、建立参考家系RNA样本库：将实验处理组提取的RNA样本核对编号后保存于液氮中备用。
十九、建立参考家系表型性状数据库：包括纸质版数据库和电子档数据库。纸质版数据库按照不同类别统一封存存放；电子档数据库基于纸质版记录，通过Access软件制定完成，并且刻录光盘保存。并由专职研究人员负责数据库的记录管理工作。
二十、建立参考家系遗传变异信息数据库：将参考家系所有个体进行基因组测序或芯片扫描，挖掘SNP、SV和CNV等变异，将这些变异数据按照变异类型和个体ID分类别存放，以备后用。
二十一、建立大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）参考家系总数据库（简称为DIRF数据库）：总数据库包括系谱信息数据库、组织样品库、表型性状数据库、DNA样本库、RNA样本库和遗传变异信息数据库，汇编总数据库目录，制定总数据库查看领用规则和管理办法。
步骤九肉研组采集组织包括：心、肝、脾、肺、肾、肌肉、皮肤、大脑、小脑和垂体等。
步骤十二采血组采集的颈静脉血液分别利用肝素钠、ACD和EDTA-Na2抗凝，可多次采血。
步骤十九参考家系表型性状数据库包括体型组、绒研组、肉研组、繁殖组和皮研组收集的所有性状，包括：被毛颜色、肤色、体躯、角型、肉垂、皱纹、胡须、鼻部、胫部、耳型、蹄质、蹄型、四肢、***形状、***是否均匀、有无副***、角长（cm）、耳长（cm）、耳宽（cm）、体高（cm）、体重（kg）、胸围（cm）、管围（cm）、腰角宽（cm）、睾丸围（cm）、头长（cm）、头宽（cm）、体长（cm）、胸宽（cm）、胸深（cm）、十字部高（cm）；毛色、绒色、绒毛比、羊绒长度（μm）、羊绒细度（μm）、羊绒密度（根/cm2）、绒层高度（cm）、羊绒强度（CN），净绒率；产羔类型、羔羊性别、胎次、初生重（g）、子叶＜1cm、子叶≥2-3cm、子叶≥1-2cm、子叶≥4-5cm、子叶≥3-4cm、子叶≥5cm、胎盘重（g）、子叶宽径（cm）、睾丸围（cm）、***密度、***量（μL）、***活力、***畸形率、顶体完整率、***活力、***生存指数、***PH值、***渗透压、GOT（谷草转氨酶）释放量、受胎率；初生重（g）、育肥始重（kg）、断奶重（kg）、育肥终重（kg）、6月龄重（kg）、宰前活重（kg）、周岁龄重（kg）、胴体重（kg）、18月龄重（kg）、屠宰率、成年重（24月龄）（kg）、胴体净肉率、胴体品质、背膘厚（cm）、肉色（5分制）、眼肌面积（cm2）、大理石花纹（12分制）、肋肉厚（GR值）、脂肪色泽（7分制）、肉骨比、失水率、PH值、贮藏损失率、嫩度（剪切力）、瘦肉率、肉骨比；毛卷性状、丝性、毛卷大小、毛长测定、花案面积、花案清晰度、被毛密度、皮张厚度、正身面积、板质、毛色、花纹宽度、弯曲、图案、光泽、毛色均匀度、皮张面积、皮重等。
Claims (16)
1.一种山羊遗传资源库构建方法，涉及研究国家遗传资源大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）性状机理的参考家系的构建，其特征在于：
一、拟定资源群体构建方案，制定基本体征信息记录表、产绒性能记录表、产肉性能记录表、繁殖性能记录表、皮用性能记录表等，准备样本采集试剂耗材，实验人员分组；
二、按照资源群体构建方案要求购买无血缘关系亲代大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型），分别用大足黑山羊公羊（D）与内蒙古绒山羊（I）母羊进行正交，大黑山羊母羊（D）与内蒙古绒山羊公羊（I）进行反交得到F1代，正、反交系后代公、母羊避免亲缘关系进行随机交配得到F2代；
三、体型组成员在山羊出生时、2月龄（断奶）、6月龄、12月龄和24月龄分别对资源群体所有个体进行基本体征普查和记录；
四、绒研组每年在山羊脱绒季节进行抓绒，并测定产绒性能所涉及的所有性状指标并记录在案；
五、肉研组在资源群体山羊屠宰时测定并记录所有产肉性能记录表涉及的指标，并负责采集各组织样品；
六、繁殖组负责执行涉及资源群体的同情发情技术，制定配种方案和系谱记录，并采集繁殖性能记录表的所列繁殖性状参数；
七、皮研组负责采集所有资源群体个体皮用性能记录表所涉及的指标；
八、采血组在6月龄采集颈静脉血液（可多次采集），分别采用肝素钠抗凝、ACD抗凝和EDTA-Na2抗凝，对血样进行编号并登记相关内容；
九、实验处理组Ⅰ负责对采血组和肉研组采集的样品进行基因组DNA和组织样RNA提取，核对样品ID号并保存样本备用；
十、实验处理组Ⅱ负责挖掘资源群体个体SNP、SV和CNV变异数据；
十、建立系谱信息数据库：根据繁殖的配种信息相关记录建立资源群体信息数据库；
十一、建立组织样本库：将肉研组采集的组织样本装入无菌冻存管中，管身注明ID号、组织名、采集日期等，所有组织样本按照一定顺序置于液氮保存，以备DNA或RNA提取；
十二、建立资源群体DNA样本库：将实验处理组提取的样本基因组DNA核对编号后分别保存于-80℃超低温冰箱中（每个个体保存2份基因组DNA样本）；
十三、建立资源群体RNA样本库：将实验处理组提取的RNA样本核对编号后保存于液氮中备用；
十四、建立遗传变异信息数据库：将实验处理组Ⅱ的变异数据分类型存放于FTP服务器；
十五、建立资源群体表型性状数据库：包括纸质版数据库和电子档数据库；2.纸质版数据库按照不同类别统一封存存放；电子档数据库基于纸质版记录，通过Access软件制定完成，并且刻录光盘保存；3.并由专职研究人员负责数据库的记录管理工作；
十六、建立大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）参考家系总数据库（简称为DIRF数据库）：总数据库包括系谱信息数据库、组织样品库、表型性状数据库、DNA数据库、RNA数据库和遗传变异信息数据库，汇编总数据库目录，制定总数据库查看领用规则和管理办法。
2.根据权利要求1所述大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）参考家系构建方法，其特征在于：步骤一资源群体构建方案涉及两种国家遗传资源山羊品种无血缘关系正、反交，正、反交后代避免亲缘关系随机交配；准备工作包括配种记录表、基本体征信息记录表、产绒性能记录表、产肉性能记录表、繁殖性能记录表、皮用性能记录表的制定；实验人员分组为体型组、绒研组、肉研组、繁殖组、皮研组、采血组、实验处理组Ⅰ和Ⅱ。
3.根据权利要求1所述大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）参考家系构建方法，其特征在于：步骤三体型组采集的性状包括：被毛颜色、肤色、体躯、角型、肉垂、皱纹、胡须、鼻部、胫部、耳型、蹄质、蹄型、四肢、***形状、***是否均匀、有无副***、角长（cm）、耳长（cm）、耳宽（cm）、体高（cm）、体重（kg）、胸围（cm）、管围（cm）、腰角宽（cm）、睾丸围（cm）、头长（cm）、头宽（cm）、体长（cm）、胸宽（cm）、胸深（cm）、十字部高（cm）。
4.根据权利要求1所述大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）参考家系构建方法，其特征在于：步骤四绒研组采集的性状包括：毛色、绒色、绒毛比、羊绒长度（μm）、羊绒细度（μm）、羊绒密度（根/cm2）、绒层高度（cm）、羊绒强度（CN），净绒率。
5.根据权利要求1所述大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）参考家系构建方法，其特征在于：步骤五肉研组采集的性状包括：初生重（g）、育肥始重（kg）、断奶重（kg）、育肥终重（kg）、6月龄重（kg）、宰前活重（kg）、周岁龄重（kg）、胴体重（kg）、18月龄重（kg）、屠宰率、成年重（24月龄）（kg）、胴体净肉率、胴体品质、背膘厚（cm）、肉色（5分制）、眼肌面积（cm2）、大理石花纹（12分制）、肋肉厚（GR值）、脂肪色泽（7分制）、肉骨比、失水率、PH值、贮藏损失率、嫩度（剪切力）、瘦肉率、肉骨比。
6.根据权利要求1所述大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）参考家系构建方法，其特征在于：步骤六中繁殖组收集的性状包括：产羔类型、羔羊性别、胎次、初生重（g）、子叶＜1cm、子叶≥2-3cm、子叶≥1-2cm、子叶≥4-5cm、子叶≥3-4cm、子叶≥5cm、胎盘重（g）、子叶宽径（cm）、睾丸围（cm）、***密度、***量（μL）、***活力、***畸形率、顶体完整率、***活力、***生存指数、***PH值、***渗透压、GOT（谷草转氨酶）释放量、受胎率。
7.根据权利要求1所述大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）参考家系构建方法，其特征在于：步骤七皮研组收集的性状包括：毛卷性状、丝性、毛卷大小、毛长测定、花案面积、花案清晰度、被毛密度、皮张厚度、正身面积、板质、毛色、花纹宽度、弯曲、图案、光泽、毛色均匀度、皮张面积、皮重。
8.根据权利要求1所述大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）参考家系构建方法，其特征在于：步骤八采血组每次采集血液5ml，至少采集三次，分别置于肝素钠抗凝、ACD抗凝和EDTA-Na2抗凝。
9.根据权利要求1所述大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）参考家系构建方法，其特征在于：步骤九实验处理组Ⅰ采取酚-氯提取法提取基因组DNA，采用天根试剂盒提取组织RNA，然后分别填写DNA样本信息表和RNA样本信息表。
10.根据权利要求1所述大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）参考家系构建方法，其特征在于：步骤十的实验处理组Ⅱ利用全基因组测序和高密度芯片筛查单核苷酸多态性（Singlenucleotidepolymorphism,SNP）、结构变异（Structuralvariation,SV）和拷贝数变异（Copynumbervariation,CNV）等信息，这些信息按照不同类别和个体ID号存放于FTP服务器。
11.根据权利要求1所述大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）参考家系构建方法，其特征在于：步骤九、十二的组织样和RNA样均保存于液氮中。
12.根据权利要求1所述大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）参考家系构建方法，其特征在于：步骤九的DNA样保存于-80℃冰箱中。
13.根据权利要求1所述大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）参考家系构建方法，其特征在于：步骤十五中建立的表型性状数据库包括纸质版档案、录入的电子档Access数据库和刻录的光盘资料。
14.根据权利要求1所述大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）参考家系构建方法，其特征在于：步骤十六DIRF参考家系数据库包括系谱信息数据库、组织样品库、表型性状数据库、DNA数据库、RNA数据库和变异信息数据库，汇编总数据库目录，制定总数据库查看领用规则和管理办法。
15.一种大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）参考家系构建方法，其特征在于：构建了大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）参考家系，构建了大足黑山羊和内蒙古绒山羊（阿拉善型）遗传资源库。
16.如权利要求1-15中任意一项所述方法或步骤在构建其他山羊群体遗传资源库中的应用。
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