CN105116126A - 一种简单快速测定滤池出水中aoc含量的方法 - Google Patents
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Abstract
一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法，它涉及一种测定水中AOC含量的方法。本发明的目的是要解决现有测定滤池出水中AOC含量的方法实验周期长和难以准确测定滤后水体中AOC含量的问题。方法：一、预处理待测水样；二、预处理接种水样；三、接种；四、测定起始细菌数；五、培养；六、测定最终细菌数；七、计算AOC含量，完成一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法。本发明可获得一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法。
Description
技术领域
本发明涉及一种测定水中AOC含量的方法。
背景技术
可生物同化有机碳(assimilableorganiccarbon，AOC)是指溶解性有机碳中能被微生物同化成自身菌体的部分，代表了最容易被生物降解的有机碳，作为表征饮用水处理单元出水的可生化性指标。滤池是最常用的饮用水常规处理单元，可生化性是评价其运行状况及处理效果的重要指标。因此，测定滤池出水的AOC浓度可以用于评价滤池的处理效果及运行状况。
AOC的测定方法最早由VanderKooij提出，即在水样中接种测试菌荧光假单胞菌P17和螺旋菌NOX，在特定条件下培养3～14天，通过平板计数获得培养的细菌数，利用标准曲线将测试菌在水样中生长的最大值换算为AOC值。但是Kooij的测定方法操作复杂、实验周期长(20天)。2005年，Hammes提出全新的AOC测定方法，利用流式细胞仪来测定微生物生长量，并采用Evian水(一种商业饮用水)作为接种液。该方法相较于传统方法具有明显的优势，不仅检测时间缩短至3天，而且操作简单。
虽然Hammes的方法大大简化了AOC的测定过程，但是滤池出水由于滤池内部生物作用导致其细菌结构与常规饮用水水体具有明显的不同，采用常规的测定方法难以准确测定其AOC值，同时长达三天的测定时间难以高效地指导工程实际，因此需要开发一种简单快速的适于滤池水质条件的AOC测定方法。
发明内容
本发明的目的是要解决现有测定滤池出水中AOC含量的方法实验周期长和难以准确测定滤后水体中AOC含量的问题，而提供一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法。
一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法，是按以下步骤完成的：
一、预处理待测水样：使用微孔滤膜过滤待测水样，得到微孔滤膜过滤后的待测水样；将微孔滤膜过滤后的待测水样置于无菌无碳的样品瓶中，得到装有微孔滤膜过滤后的待测水样的无菌无碳的样品瓶；
二、预处理接种水样：使用玻璃纤维滤膜过滤待测水样，得到玻璃纤维滤膜过滤后的待测水样；将玻璃纤维滤膜过滤后的待测水样作为同源接种水；
三、接种：在无菌环境下将步骤二得到的同源接种水接种至步骤一得到的装有微孔滤膜过滤后的待测水样的无菌无碳的样品瓶中，再使用涡旋振荡器涡旋振荡15s～30s，得到待培养水样；
步骤三中所述的待培养水样中同源接种水的体积分数为1％～20％；
四、测定起始细菌数：将步骤三得到的待培养水样与SYBRGreenI染料共孵化10min～20min，得到孵化后的待培养水样；再利用流式细胞仪测定孵化后的待培养水样中的起始细菌数T1；
步骤四中所述的待培养水样与SYBRGreenI染料的体积比为100:1；
五、培养：将孵化后的待培养水样置于温度为25℃～35℃的生化培养箱中避光培养24h～72h，得到培养后的待测水样；
六、测定最终细菌数：将步骤五得到的培养后的待测水样与SYBRGreenI染料共孵化10min～20min，得到经过孵化的培养后的待测水样；再利用流式细胞仪测定经过孵化的培养后的待测水样中的最终细菌数T2；
步骤六中所述的培养后的待测水样与SYBRGreenI染料的体积比为100:1；
七、计算AOC含量：
利用如下公式计算待测水样中的AOC含量：
AOC(μg乙酸碳/L)＝(T2-T1)/k；
上述式中：
T1为孵化后的待培养水样中的起始细菌数，单位为cells/μL；
T2为培养后的待测水样中的最终细菌数，单位为cells/μL；
k为细菌与乙酸碳的转换系数，k＝107cells/μgAOC；
根据上述公式计算出滤池出水中AOC含量，完成一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法。
本发明的原理及优点：
一、本发明提供了一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法，待测水样的除菌通过采用0.22μm的微孔滤膜过滤而实现，微孔滤膜过滤后的待测水样做稀释水用，与传统的巴氏灭菌法相比，不仅缩短了操作时间，而且保证了待测水体的水质不受影响，同时除菌效果更好；
二、本发明的一种简单快速测定滤池出水AOC含量的方法，以同源菌作为接种菌，并通过比例稀释的方法来确定接种量；同源菌代表了该水体中最具优势的菌群，以同源菌作为接种菌更符合工程实际，避免了某特定测试菌种难以在该水体水中生长或生长滞缓的问题，能够更准确地反映待测水体的AOC含量；稀释接种法较传统的特定菌定量接种更为简单，可省去特定菌菌浓度测定步骤，也避免了加入的异源接种水对待测水样水质的影响；
三、本发明的一种简单快速测定滤池出水AOC含量的方法，接种水样是使用1.76μm的玻璃纤维滤膜过滤待测水样而得到，不仅可以保留接种水中的土著菌，而且去除了水样中的不可溶解的物质，保证测定能准确进行；
四、本发明的一种简单快速测定滤池出水AOC含量的方法，通过优化实验条件，将培养时间缩短至24h，大大节省了测定时间；由于滤池出水中的微生物大部分为滤池中脱落生物膜上的微生物，处于稳定期和衰亡期为多；因此以该水体作为接种菌培养测定其AOC含量时，达到稳定期所需的时间较水源水或管网水短；若以常规的3d作为培养周期，将会大大低估滤后水体的AOC含量；通过实验确定24h为最佳的培养周期，不仅比常规的AOC测定方法节省2/3的时间，而且大大提高了测定准确性；
五、本发明的有益效果是建立了一种更适用于滤后水的生物可同化有机碳测定方法，解决了现有测定方法难以准确测定滤后水体AOC含量的难题，同时建立了比例稀释的同源菌接种方法，大大地简化了操作步骤，并较现有的AOC测定方法缩短了2/3的时间，更适用于工程实际应用。
本发明可获得一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法。
附图说明
图1为滤池出水中AOC含量的测定曲线，图1中1为实施例一中AOC含量随培养时间的变化曲线，2为实施例二中AOC含量随培养时间的变化曲线，3为实施例三中AOC含量随培养时间的变化曲线，4为实施例四中AOC含量随培养时间的变化曲线。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式是一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法是按以下步骤完成的：
一、预处理待测水样：使用微孔滤膜过滤待测水样，得到微孔滤膜过滤后的待测水样；将微孔滤膜过滤后的待测水样置于无菌无碳的样品瓶中，得到装有微孔滤膜过滤后的待测水样的无菌无碳的样品瓶；
二、预处理接种水样：使用玻璃纤维滤膜过滤待测水样，得到玻璃纤维滤膜过滤后的待测水样；将玻璃纤维滤膜过滤后的待测水样作为同源接种水；
三、接种：在无菌环境下将步骤二得到的同源接种水接种至步骤一得到的装有微孔滤膜过滤后的待测水样的无菌无碳的样品瓶中，再使用涡旋振荡器涡旋振荡15s～30s，得到待培养水样；
步骤三中所述的待培养水样中同源接种水的体积分数为1％～20％；
四、测定起始细菌数：将步骤三得到的待培养水样与SYBRGreenI染料共孵化10min～20min，得到孵化后的待培养水样；再利用流式细胞仪测定孵化后的待培养水样中的起始细菌数T1；
步骤四中所述的待培养水样与SYBRGreenI染料的体积比为100:1；
五、培养：将孵化后的待培养水样置于温度为25℃～35℃的生化培养箱中避光培养24h～72h，得到培养后的待测水样；
六、测定最终细菌数：将步骤五得到的培养后的待测水样与SYBRGreenI染料共孵化10min～20min，得到经过孵化的培养后的待测水样；再利用流式细胞仪测定经过孵化的培养后的待测水样中的最终细菌数T2；
步骤六中所述的培养后的待测水样与SYBRGreenI染料的体积比为100:1；
七、计算AOC含量：
利用如下公式计算待测水样中的AOC含量：
AOC(μg乙酸碳/L)＝(T2-T1)/k；
上述式中：
T1为孵化后的待培养水样中的起始细菌数，单位为cells/μL；
T2为培养后的待测水样中的最终细菌数，单位为cells/μL；
k为细菌与乙酸碳的转换系数，k＝107cells/μgAOC；
根据上述公式计算出滤池出水中AOC含量，完成一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法。
本实施方式步骤一中所述的待测水样与步骤二中所述的待测水样为同源水。
本实施方式的原理及优点：
一、本实施方式提供了一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法，待测水样的除菌通过采用0.22μm的微孔滤膜过滤而实现，微孔滤膜过滤后的待测水样做稀释水用，与传统的巴氏灭菌法相比，不仅缩短了操作时间，而且保证了待测水体的水质不受影响，同时除菌效果更好；
二、本实施方式的一种简单快速测定滤池出水AOC含量的方法，以同源菌作为接种菌，并通过比例稀释的方法来确定接种量；同源菌代表了该水体中最具优势的菌群，以同源菌作为接种菌更符合工程实际，避免了某特定测试菌种难以在该水体水中生长或生长滞缓的问题，能够更准确地反映待测水体的AOC含量；稀释接种法较传统的特定菌定量接种更为简单，可省去特定菌菌浓度测定步骤，也避免了加入的异源接种水对待测水样水质的影响；
三、本实施方式的一种简单快速测定滤池出水AOC含量的方法，接种水样是使用1.76μm的玻璃纤维滤膜过滤待测水样而得到，不仅可以保留接种水中的土著菌，而且去除了水样中的不可溶解的物质，保证测定能准确进行；
四、本实施方式的一种简单快速测定滤池出水AOC含量的方法，通过优化实验条件，将培养时间缩短至24h，大大节省了测定时间；由于滤池出水中的微生物大部分为滤池中脱落生物膜上的微生物，处于稳定期和衰亡期为多；因此以该水体作为接种菌培养测定其AOC含量时，达到稳定期所需的时间较水源水或管网水短；若以常规的3d作为培养周期，将会大大低估滤后水体的AOC含量；通过实验确定24h为最佳的培养周期，不仅比常规的AOC测定方法节省2/3的时间，而且大大提高了测定准确性；
五、本实施方式的有益效果是建立了一种更适用于滤后水的生物可同化有机碳测定方法，解决了现有测定方法难以准确测定滤后水体AOC含量的难题，同时建立了比例稀释的同源菌接种方法，大大地简化了操作步骤，并较现有的AOC测定方法缩短了2/3的时间，更适用于工程实际应用。
本实施方式可获得一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同点是：步骤一中所述的微孔滤膜的孔径为0.22μm。其他步骤与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二之一不同点是：步骤二中所述的玻璃纤维滤膜的孔径为1.76μm。其他步骤与具体实施方式一或二相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同点是：步骤三中所述的待培养水样中同源接种水的体积分数为5％。其他步骤与具体实施方式一至三相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一不同点是：步骤二中所述的同源接种水的接种菌为同源菌。其他步骤与具体实施方式一至四相同。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一至五之一不同点是：步骤四中所述的起始细菌数T1为流式细胞仪测定的活细菌数。其他步骤与具体实施方式一至五相同。
具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式一至六之一不同点是：步骤六中所述的最终细菌数T2为流式细胞仪测定的活细菌数。其他步骤与具体实施方式一至六相同。
具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式一至七之一不同点是：步骤五中将孵化后的待培养水样置于温度为30℃的生化培养箱中避光培养24h，得到培养后的待测水样。其他步骤与具体实施方式一至七相同。
具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式一至八之一不同点是：步骤三中所述的涡旋振荡器的功率为30W～50W。其他步骤与具体实施方式一至八相同。
具体实施方式十：本实施方式与具体实施方式一至九之一不同点是：步骤三中所述的待培养水样中同源接种水的体积分数为10％。其他步骤与具体实施方式一至九相同。
采用以下实施例验证本发明的有益效果：
实施例一：一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法是按以下步骤完成的：
一、预处理待测水样：使用孔径为0.22μm的微孔滤膜过滤待测水样，得到微孔滤膜过滤后的待测水样；将微孔滤膜过滤后的待测水样置于无菌无碳的样品瓶中，得到装有微孔滤膜过滤后的待测水样的无菌无碳的样品瓶；
二、预处理接种水样：使用孔径为1.76μm的玻璃纤维滤膜过滤待测水样，得到玻璃纤维滤膜过滤后的待测水样；将玻璃纤维滤膜过滤后的待测水样作为同源接种水；
步骤二中所述的同源接种水的接种菌为同源菌；
三、接种：在无菌环境下将步骤二得到的同源接种水接种至步骤一得到的装有微孔滤膜过滤后的待测水样的无菌无碳的样品瓶中，再使用涡旋振荡器涡旋振荡15s，得到待培养水样；
步骤三中所述的涡旋振荡器的功率为30W；
步骤三中所述的待培养水样中同源接种水的体积分数为1％；
四、测定起始细菌数：将500μL步骤三得到的待培养水样与5μLSYBRGreenI染料共孵化10min，得到孵化后的待培养水样；再利用流式细胞仪测定孵化后的待培养水样中的起始细菌数T1；
步骤四中所述的起始细菌数T1为流式细胞仪测定的活细菌数；
五、培养：将孵化后的待培养水样置于温度为30℃的生化培养箱中避光培养0h～48h，得到培养后的待测水样；
六、测定最终细菌数：将500μL步骤五得到的培养后的待测水样与5μLSYBRGreenI染料共孵化10min，得到经过孵化的培养后的待测水样；再利用流式细胞仪测定经过孵化的培养后的待测水样中的最终细菌数T2；
步骤六中所述的最终细菌数T2为流式细胞仪测定的活细菌数；
七、计算AOC含量：
利用如下公式计算待测水样中的AOC含量：
AOC(μg乙酸碳/L)＝(T2-T1)/k；
上述式中：
T1为孵化后的待培养水样中的起始细菌数，单位为cells/μL；
T2为培养后的待测水样中的最终细菌数，单位为cells/μL；
k为细菌与乙酸碳的转换系数，k＝107cells/μgAOC；
根据上述公式计算出滤池出水中AOC含量，完成一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法。
实施例一步骤一中所述的待测水样与步骤二中所述的待测水样为同源水。
实施例二：一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法是按以下步骤完成的：
一、预处理待测水样：使用孔径为0.22μm的微孔滤膜过滤待测水样，得到微孔滤膜过滤后的待测水样；将微孔滤膜过滤后的待测水样置于无菌无碳的样品瓶中，得到装有微孔滤膜过滤后的待测水样的无菌无碳的样品瓶；
二、预处理接种水样：使用孔径为1.76μm的玻璃纤维滤膜过滤待测水样，得到玻璃纤维滤膜过滤后的待测水样；将玻璃纤维滤膜过滤后的待测水样作为同源接种水；
步骤二中所述的同源接种水的接种菌为同源菌；
三、接种：在无菌环境下将步骤二得到的同源接种水接种至步骤一得到的装有微孔滤膜过滤后的待测水样的无菌无碳的样品瓶中，再使用涡旋振荡器涡旋振荡15s，得到待培养水样；
步骤三中所述的涡旋振荡器的功率为30W；
步骤三中所述的待培养水样中同源接种水的体积分数为5％；
四、测定起始细菌数：将500μL步骤三得到的待培养水样与5μLSYBRGreenI染料共孵化10min，得到孵化后的待培养水样；再利用流式细胞仪测定孵化后的待培养水样中的起始细菌数T1；
步骤四中所述的起始细菌数T1为流式细胞仪测定的活细菌数；
五、培养：将孵化后的待培养水样置于温度为30℃的生化培养箱中避光培养0h～48h，得到培养后的待测水样；
六、测定最终细菌数：将500μL步骤五得到的培养后的待测水样与5μLSYBRGreenI染料共孵化10min，得到经过孵化的培养后的待测水样；再利用流式细胞仪测定经过孵化的培养后的待测水样中的最终细菌数T2；
步骤六中所述的最终细菌数T2为流式细胞仪测定的活细菌数；
七、计算AOC含量：
利用如下公式计算待测水样中的AOC含量：
AOC(μg乙酸碳/L)＝(T2-T1)/k；
上述式中：
T1为孵化后的待培养水样中的起始细菌数，单位为cells/μL；
T2为培养后的待测水样中的最终细菌数，单位为cells/μL；
k为细菌与乙酸碳的转换系数，k＝107cells/μgAOC；
根据上述公式计算出滤池出水中AOC含量，完成一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法。
实施例二步骤一中所述的待测水样与步骤二中所述的待测水样为同源水。
实施例三：一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法是按以下步骤完成的：
一、预处理待测水样：使用孔径为0.22μm的微孔滤膜过滤待测水样，得到微孔滤膜过滤后的待测水样；将微孔滤膜过滤后的待测水样置于无菌无碳的样品瓶中，得到装有微孔滤膜过滤后的待测水样的无菌无碳的样品瓶；
二、预处理接种水样：使用孔径为1.76μm的玻璃纤维滤膜过滤待测水样，得到玻璃纤维滤膜过滤后的待测水样；将玻璃纤维滤膜过滤后的待测水样作为同源接种水；
步骤二中所述的同源接种水的接种菌为同源菌；
三、接种：在无菌环境下将步骤二得到的同源接种水接种至步骤一得到的装有微孔滤膜过滤后的待测水样的无菌无碳的样品瓶中，再使用涡旋振荡器涡旋振荡15s，得到待培养水样；
步骤三中所述的涡旋振荡器的功率为30W；
步骤三中所述的待培养水样中同源接种水的体积分数为10％；
四、测定起始细菌数：将500μL步骤三得到的待培养水样与5μLSYBRGreenI染料共孵化10min，得到孵化后的待培养水样；再利用流式细胞仪测定孵化后的待培养水样中的起始细菌数T1；
步骤四中所述的起始细菌数T1为流式细胞仪测定的活细菌数；
五、培养：将孵化后的待培养水样置于温度为30℃的生化培养箱中避光培养0h～48h，得到培养后的待测水样；
六、测定最终细菌数：将500μL步骤五得到的培养后的待测水样与5μLSYBRGreenI染料共孵化10min，得到经过孵化的培养后的待测水样；再利用流式细胞仪测定经过孵化的培养后的待测水样中的最终细菌数T2；
步骤六中所述的最终细菌数T2为流式细胞仪测定的活细菌数；
七、计算AOC含量：
利用如下公式计算待测水样中的AOC含量：
AOC(μg乙酸碳/L)＝(T2-T1)/k；
上述式中：
T1为孵化后的待培养水样中的起始细菌数，单位为cells/μL；
T2为培养后的待测水样中的最终细菌数，单位为cells/μL；
k为细菌与乙酸碳的转换系数，k＝107cells/μgAOC；
根据上述公式计算出滤池出水中AOC含量，完成一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法。
实施例三步骤一中所述的待测水样与步骤二中所述的待测水样为同源水。
实施例四：一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法是按以下步骤完成的：
一、预处理待测水样：使用孔径为0.22μm的微孔滤膜过滤待测水样，得到微孔滤膜过滤后的待测水样；将微孔滤膜过滤后的待测水样置于无菌无碳的样品瓶中，得到装有微孔滤膜过滤后的待测水样的无菌无碳的样品瓶；
二、预处理接种水样：使用孔径为1.76μm的玻璃纤维滤膜过滤待测水样，得到玻璃纤维滤膜过滤后的待测水样；将玻璃纤维滤膜过滤后的待测水样作为同源接种水；
步骤二中所述的同源接种水的接种菌为同源菌；
三、接种：在无菌环境下将步骤二得到的同源接种水接种至步骤一得到的装有微孔滤膜过滤后的待测水样的无菌无碳的样品瓶中，再使用涡旋振荡器涡旋振荡15s，得到待培养水样；
步骤三中所述的涡旋振荡器的功率为30W；
步骤三中所述的待培养水样中同源接种水的体积分数为20％；
四、测定起始细菌数：将500μL步骤三得到的待培养水样与5μLSYBRGreenI染料共孵化10min，得到孵化后的待培养水样；再利用流式细胞仪测定孵化后的待培养水样中的起始细菌数T1；
步骤四中所述的起始细菌数T1为流式细胞仪测定的活细菌数；
五、培养：将孵化后的待培养水样置于温度为30℃的生化培养箱中避光培养0h～48h，得到培养后的待测水样；
六、测定最终细菌数：将500μL步骤五得到的培养后的待测水样与5μLSYBRGreenI染料共孵化10min，得到经过孵化的培养后的待测水样；再利用流式细胞仪测定经过孵化的培养后的待测水样中的最终细菌数T2；
步骤六中所述的最终细菌数T2为流式细胞仪测定的活细菌数；
七、计算AOC含量：
利用如下公式计算待测水样中的AOC含量：
AOC(μg乙酸碳/L)＝(T2-T1)/k；
上述式中：
T1为孵化后的待培养水样中的起始细菌数，单位为cells/μL；
T2为培养后的待测水样中的最终细菌数，单位为cells/μL；
k为细菌与乙酸碳的转换系数，k＝107cells/μgAOC；
根据上述公式计算出滤池出水中AOC含量，完成一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法。
实施例四步骤一中所述的待测水样与步骤二中所述的待测水样为同源水。
实施例一、实施例二、实施例三与实施例四中使用的待测水样均为同批次水。
图1为滤池出水中AOC含量的测定曲线，图1中1为实施例一中AOC含量随培养时间的变化曲线，2为实施例二中AOC含量随培养时间的变化曲线，3为实施例三中AOC含量随培养时间的变化曲线，4为实施例四中AOC含量随培养时间的变化曲线。
从图1可知，以同源菌为接种菌来测定滤池出水中AOC含量，最佳的接种浓度为待培养水样中同源接种水的质量分数为5％，最佳的培养时间为24h，这与常规的培养时间(72h)相比缩短了2/3，大大缩小了测定时间。这是因为同源菌能最快地适应培养环境，从而大大缩短了其达到稳定期的时间，因此培养周期明显变短，这也与接种浓度和水源有一定的关系。
实施例五：一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法是按以下步骤完成的：
一、预处理待测水样：使用孔径为0.22μm的微孔滤膜过滤待测水样，得到微孔滤膜过滤后的待测水样；将微孔滤膜过滤后的待测水样置于无菌无碳的样品瓶中，得到装有微孔滤膜过滤后的待测水样的无菌无碳的样品瓶；
二、预处理接种水样：使用孔径为1.76μm的玻璃纤维滤膜过滤待测水样，得到玻璃纤维滤膜过滤后的待测水样；将玻璃纤维滤膜过滤后的待测水样作为同源接种水；
步骤二中所述的同源接种水的接种菌为同源菌；
三、接种：在无菌环境下将步骤二得到的同源接种水接种至步骤一得到的装有微孔滤膜过滤后的待测水样的无菌无碳的样品瓶中，再使用涡旋振荡器涡旋振荡15s，得到待培养水样；
步骤三中所述的涡旋振荡器的功率为30W；
步骤三中所述的待培养水样中同源接种水的体积分数为5％；
四、测定起始细菌数：将500μL步骤三得到的待培养水样与5μLSYBRGreenI染料共孵化10min，得到孵化后的待培养水样；再利用流式细胞仪测定孵化后的待培养水样中的起始细菌数T1；
步骤四中所述的起始细菌数T1为流式细胞仪测定的活细菌数；
五、培养：将孵化后的待培养水样置于温度为30℃的生化培养箱中避光培养24h，得到培养后的待测水样；
六、测定最终细菌数：将500μL步骤五得到的培养后的待测水样与5μLSYBRGreenI染料共孵化10min，得到经过孵化的培养后的待测水样；再利用流式细胞仪测定经过孵化的培养后的待测水样中的最终细菌数T2；
步骤六中所述的最终细菌数T2为流式细胞仪测定的活细菌数；
七、计算AOC含量：
利用如下公式计算待测水样中的AOC含量：
AOC(μg乙酸碳/L)＝(T2-T1)/k；
上述式中：
T1为孵化后的待培养水样中的起始细菌数，单位为cells/μL；
T2为培养后的待测水样中的最终细菌数，单位为cells/μL；
k为细菌与乙酸碳的转换系数，k＝107cells/μgAOC；
根据上述公式计算出滤池出水中AOC含量，完成一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法。
实施例五步骤一中所述的待测水样与步骤二中所述的待测水样为同源水。
对比试验：常规接种104cells/mL的同源菌测定滤池出水中AOC含量的方法是按以下方法完成的：
一、预处理待测水样：使用孔径为0.22μm微孔滤膜过滤待测水样，得到微孔滤膜过滤后的待测水样；将微孔滤膜过滤后的待测水样置于无菌无碳的样品瓶中，得到装有微孔滤膜过滤后的待测水样的无菌无碳的样品瓶；
二、预处理接种水样：使用孔径为1.76μm玻璃纤维滤膜过滤待测水样，得到玻璃纤维滤膜过滤后的待测水样；将玻璃纤维滤膜过滤后的待测水样作为同源接种水；
步骤二中所述的同源接种水的接种菌为同源菌；
三、计算接种体积：将500μL步骤二得到的预处理后的同源接种水与5μLSYBRGreenI染料共孵化10min，得到孵化后的接种水样；再利用流式细胞仪测定每μL孵化后的同源接种水样中的细菌数T(cells/μL)；
步骤三中所述的细菌数T流式细胞仪测定的活细菌数；
四、接种：在无菌环境下将步骤二得到的同源接种水接种至步骤一得到的装有微孔滤膜过滤后的待测水样的无菌无碳的样品瓶中，再使用涡旋振荡器涡旋振荡15s，得到待培养水样；
步骤四中所述的涡旋振荡器的功率为30W；
步骤四中所述的待培养水样中同源菌的浓度为104cells/mL；
五、测定起始细菌数：将500μL步骤三得到的待培养水样与5μLSYBRGreenI染料共孵化10min，得到孵化后的待培养水样；再利用流式细胞仪测定孵化后的待培养水样中的起始细菌数T1；
步骤五中所述的起始细菌数T1为流式细胞仪测定的活细菌数；
六、培养：将孵化后的待培养水样置于温度为30℃的生化培养箱中避光培养24h，得到培养后的待测水样；
七、测定最终细菌数：将500μL步骤五得到的培养后的待测水样与5μLSYBRGreenI染料共孵化10min，得到经过孵化的培养后的待测水样；再利用流式细胞仪测定经过孵化的培养后的待测水样中的最终细菌数T2；
八、计算AOC含量：
利用如下公式计算待测水样中的AOC含量：
AOC(μg乙酸碳/L)＝(T2-T1)/k；
上述式中：
T1为孵化后的待培养水样中的起始细菌数，单位为cells/μL；
T2为培养后的待测水样中的最终细菌数，单位为cells/μL；
k为细菌与乙酸碳的转换系数，k＝107cells/μgAOC；
根据上述公式计算出滤池出水中AOC含量，完成一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法。
实施例五和对比试验使用的待测水样为同一批次水。
对实施例五和对比试验进行三次平行试验，取平均值，计算滤池出水中AOC值的结果见表1。
表1
| 试验 | AOC(μg乙酸碳/L) |
| 实施例五 | 247 |
| 对比试验 | 109 |
从表1结果表明，采用实施例五的方法测得的AOC值比对比试验采用常规的接种104cells/mL所得结果高127％，说明采用实施例五的方法时，采用5％体积同源水接种能更准确地测得滤池出水的AOC值。
Claims (10)
1.一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法，其特征在于一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法是按以下步骤完成的：
一、预处理待测水样：使用微孔滤膜过滤待测水样，得到微孔滤膜过滤后的待测水样；将微孔滤膜过滤后的待测水样置于无菌无碳的样品瓶中，得到装有微孔滤膜过滤后的待测水样的无菌无碳的样品瓶；
二、预处理接种水样：使用玻璃纤维滤膜过滤待测水样，得到玻璃纤维滤膜过滤后的待测水样；将玻璃纤维滤膜过滤后的待测水样作为同源接种水；
三、接种：在无菌环境下将步骤二得到的同源接种水接种至步骤一得到的装有微孔滤膜过滤后的待测水样的无菌无碳的样品瓶中，再使用涡旋振荡器涡旋振荡15s～30s，得到待培养水样；
步骤三中所述的待培养水样中同源接种水的体积分数为1％～20％；
四、测定起始细菌数：将步骤三得到的待培养水样与SYBRGreenI染料共孵化10min～20min，得到孵化后的待培养水样；再利用流式细胞仪测定孵化后的待培养水样中的起始细菌数T1；
步骤四中所述的待培养水样与SYBRGreenI染料的体积比为100:1；
五、培养：将孵化后的待培养水样置于温度为25℃～35℃的生化培养箱中避光培养24h～72h，得到培养后的待测水样；
六、测定最终细菌数：将步骤五得到的培养后的待测水样与SYBRGreenI染料共孵化10min～20min，得到经过孵化的培养后的待测水样；再利用流式细胞仪测定经过孵化的培养后的待测水样中的最终细菌数T2；
步骤六中所述的培养后的待测水样与SYBRGreenI染料的体积比为100:1；
七、计算AOC含量：
利用如下公式计算待测水样中的AOC含量：
AOC(μg乙酸碳/L)＝(T2-T1)/k；
上述式中：
T1为孵化后的待培养水样中的起始细菌数，单位为cells/μL；
T2为培养后的待测水样中的最终细菌数，单位为cells/μL；
k为细菌与乙酸碳的转换系数，k＝107cells/μgAOC；
根据上述公式计算出滤池出水中AOC含量，完成一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法。
2.根据权利要求1所述的一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法，其特征在于步骤一中所述的微孔滤膜的孔径为0.22μm。
3.根据权利要求1所述的一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法，其特征在于步骤二中所述的玻璃纤维滤膜的孔径为1.76μm。
4.根据权利要求1所述的一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法，其特征在于步骤三中所述的待培养水样中同源接种水的体积分数为5％。
5.根据权利要求1所述的一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法，其特征在于步骤二中所述的同源接种水的接种菌为同源菌。
6.根据权利要求1所述的一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法，其特征在于步骤四中所述的起始细菌数T1为流式细胞仪测定的活细菌数。
7.根据权利要求1所述的一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法，其特征在于步骤六中所述的最终细菌数T2为流式细胞仪测定的活细菌数。
8.根据权利要求1所述的一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法，其特征在于步骤五中将孵化后的待培养水样置于温度为30℃的生化培养箱中避光培养24h，得到培养后的待测水样。
9.根据权利要求1所述的一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法，其特征在于步骤三中所述的涡旋振荡器的功率为30W～50W。
10.根据权利要求1所述的一种简单快速测定滤池出水中AOC含量的方法，其特征在于步骤三中所述的待培养水样中同源接种水的体积分数为10％。
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| CN201510594471.4A CN105116126A (zh) | 2015-09-17 | 2015-09-17 | 一种简单快速测定滤池出水中aoc含量的方法 |
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Cited By (1)
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| CN107748237A (zh) * | 2017-09-28 | 2018-03-02 | 中国地质科学院岩溶地质研究所 | 一种岩溶地下河流域惰性有机碳培养与检测方法 |
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2015
- 2015-09-17 CN CN201510594471.4A patent/CN105116126A/zh active Pending
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