CN105063141A - 一种小分子蛹虫草活性肽及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种小分子蛹虫草活性肽及其制备方法，所述制备方法依次包括以下步骤：干燥粉碎、提取、酶解、过滤和干燥；所述酶解包括一次酶解、二次酶解和三次酶解，所述一次酶解过程为：向蛹虫草经过提取获得的蛹虫草提取液中加入相当于提取所用蛹虫草干重0.5％-1％的β-葡聚糖酶，调节溶液pH为4-5.5，一次酶解温度为40℃-60℃，一次酶解时间为4h-6h。本发明利用β-葡聚糖酶酶解技术破除了蛹虫草坚硬的细胞壁，有利于细胞内容物的溶出，有利于提取过程的顺利进行，提高蛋白质、虫草多糖及虫草腺苷等功效成分的提取效率；本发明利用多次酶解方法对蛹虫草进行酶解，可对蛹虫草中的蛋白质进行充分酶解。
Description
技术领域
本发明涉及生物活性物质提取领域，具体涉及一种小分子蛹虫草活性肽及其制备方法。
背景技术
蛹虫草又名北冬虫夏草、北虫草等，是一种名贵的中药和高级滋补品，其活性成分和功能与著名的药用真菌冬虫夏草极其相似，含有虫草多肽、虫草腺苷，虫草酸，虫草多糖以及多种氨基酸、维生素、微量元素等生物活性物质。蛹虫草和野生冬虫夏草的关键功效成分一致，但在含量上和某些特殊的功效成分上，蛹虫草是冬虫夏草的10倍至几十倍。蛹虫草中的虫草素是冬虫夏草的35倍，蛹虫草中的腺嘌呤是冬虫夏草的40倍，蛹虫草中的核苷酸总含量是野生冬虫夏草的6.25倍。
蛹虫草具有抗肿瘤、提高机体免疫功能、抗氧化、抗衰老、保护肝肾及心血管等方面多种生理功能。蛹虫草的虫草素、虫草多糖、虫草酸方面的生产研究较多，但是对于蛋白质活性肽方面的生产研究较少。蛹虫草中含蛋白质26％、糖28％、脂肪2.9％，蛋白质含量比较丰富。
蛹虫草中含丰富的蛋白质和氨基酸，通过酶解蛋白质，可以生产多种具有生理活性的多肽氮和氨基酸，这些肽可以被人体直接吸收利用，进而更加快速有效的调节身体机制，促进人体健康。在民间，蛹虫草多通过煎煮炖等方式服用，食用和携带不方便。目前市场上利用蛹虫草生产的相关产品，大多数均为蛹虫草粉碎细磨，虽然颗粒较小，但是其中仍含有大量纤维素和大分子蛋白质等物质，达不到直接吸收的效果，同时因为纤维素等物质的包埋，也影响了功效成分的吸收利用。目前市场上还未出现通过酶解蛹虫草子实体的方法来制备蛹虫草肽粉的报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的缺陷，提供一种小分子蛹虫草活性肽及其制备方法。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种小分子蛹虫草活性肽的制备方法，依次包括以下步骤：干燥粉碎、提取、酶解、过滤和干燥；
所述酶解包括一次酶解、二次酶解和三次酶解，经过三次酶解获得小分子蛹虫草活性肽溶液；所述一次酶解过程为：向蛹虫草经过提取获得的蛹虫草提取液中加入相当于提取所用蛹虫草干重0.5％-1％的β-葡聚糖酶，调节溶液pH为4-5.5，一次酶解温度为40℃-60℃，一次酶解时间为4h-6h。
本发明的有益效果是：本发明利用β-葡聚糖酶酶解技术破除了蛹虫草坚硬的细胞壁，有利于细胞内溶物的溶出，有利于提取过程的顺利进行，提高蛋白质、虫草多糖及虫草腺苷等功效成分的提取效率；本发明利用多次酶解方法对蛹虫草进行酶解，可对蛹虫草中的蛋白质进行充分酶解。
在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
进一步，所述二次酶解过程为：将经过一次酶解后的酶解液煮沸1min-5min后降温离心，离心除杂后，在一次酶解液中加入木瓜蛋白酶进行二次酶解，木瓜蛋白酶的加入量相当于蛹虫草干重0.5％-1％；调节酶解液的pH为6-7.5，二次酶解温度为45℃-55℃，二次酶解时间为2h-4h。
进一步，所述三次酶解过程为：将经过二次酶解后的酶解液中加入相当于蛹虫草干重1％-1.5％的胰蛋白酶，调节酶解液的pH值为7.5-8.5，三次酶解温度为45℃-55℃，三次酶解时间为4h-6h。
进一步，所述过滤过程为：将经过酶解获得的小分子蛹虫草活性肽溶液煮沸1min-5min后降至室温，将煮沸灭酶后的小分子蛹虫草活性肽溶液经过板框压滤，去除溶液中的大分子成分和不溶性成分。
进一步，所述干燥粉碎过程为：将蛹虫草干燥并粉碎至40目-60目。
进一步，所述提取过程为：将经过干燥粉碎的蛹虫草粉加入提取罐中，往提取罐中加入蒸馏水并搅拌均匀，提取罐中的固液比为1:8-10。
采用上述进一步方案的有益效果是：采用低温水提与酶解结合，避免了传统工艺中高温提取对蛹虫草中活性物质的破坏，保证了腺苷等功效成分的生物活性，同时大大缩短了提取时间，提高了生产效率。
进一步，所述干燥过程采用喷雾干燥。
采用上述方法即制得本发明所述的一种小分子蛹虫草活性肽，所述小分子蛹虫草活性肽为平均分子量小于1000道尔顿的低聚肽。
具体实施方式
结合以下实施例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1
本实施例的一种小分子蛹虫草活性肽的制备方法，具体包括以下步骤：
1)干燥粉碎：将蛹虫草干燥并粉碎至40目。
2)提取：将经过干燥粉碎的蛹虫草粉加入提取罐中，往提取罐中加入20℃的蒸馏水并搅拌均匀，提取罐中的固液比为1:8。本实施例采用低温水提与酶解结合，避免了传统工艺中高温提取对蛹虫草中活性物质的破坏，保证了腺苷等功效成分的生物活性，同时大大缩短了提取时间，提高了生产效率。
3)酶解：所述酶解包括一次酶解、二次酶解和三次酶解，经过三次酶解获得小分子蛹虫草活性肽溶液；所述一次酶解过程为：向蛹虫草提取液中加入相当于提取所用蛹虫草干重0.5％的β-葡聚糖酶，调节溶液pH为4，一次酶解温度为40℃，一次酶解时间为4h。
二次酶解过程为：将经过一次酶解后的酶解液煮沸1min后降温离心，离心除杂后，在一次酶解液中加入木瓜蛋白酶进行二次酶解，木瓜蛋白酶的加入量相当于蛹虫草干重0.5％；调节酶解液的pH为6，二次酶解温度为45℃，二次酶解时间为2h。
三次酶解过程为：将经过二次酶解后的酶解液中加入相当于蛹虫草干重1％的胰蛋白酶，调节酶解液的pH值为7.5，三次酶解温度为45℃，三次酶解时间为4h。
本实施例利用β-葡聚糖酶酶解技术破除了蛹虫草坚硬的细胞壁，有利于细胞内容物的溶出，有利于提取过程的顺利进行，提高蛋白质、虫草多糖及虫草腺苷等功效成分的提取效率；本实施例利用多次酶解方法对蛹虫草进行酶解，可对蛹虫草中的蛋白质进行充分酶解。
4)过滤：将经过酶解获得的小分子蛹虫草活性肽溶液煮沸1min后降至室温，将煮沸灭酶后的小分子蛹虫草活性肽溶液经过板框压滤，去除溶液中的大分子成分和不溶性成分。
5)干燥：所述干燥过程采用喷雾干燥，干燥结束后即得到本发明所述的小分子蛹虫草肽粉成品。
实施例2
本实施例的一种小分子蛹虫草活性肽的制备方法，具体包括以下步骤：
1)干燥粉碎：将蛹虫草干燥并粉碎至50目。
2)提取：将经过干燥粉碎的蛹虫草粉加入提取罐中，往提取罐中加入22℃的蒸馏水并搅拌均匀，提取罐中的固液比为1:9。本实施例采用低温水提与酶解结合，避免了传统工艺中高温提取对蛹虫草中活性物质的破坏，保证了腺苷等功效成分的生物活性，同时大大缩短了提取时间，提高了生产效率。
3)酶解：所述酶解包括一次酶解、二次酶解和三次酶解，经过三次酶解获得小分子蛹虫草活性肽溶液；所述一次酶解过程为：向蛹虫草提取液中加入相当于提取所用蛹虫草干重0.8％的β-葡聚糖酶，调节溶液pH为5，一次酶解温度为50℃，一次酶解时间为5h。
二次酶解过程为：将经过一次酶解后的酶解液煮沸3min后降温离心，离心除杂后，在一次酶解液中加入木瓜蛋白酶进行二次酶解，木瓜蛋白酶的加入量相当于蛹虫草干重0.8％；调节酶解液的pH为7，二次酶解温度为50℃，二次酶解时间为3h。
三次酶解过程为：将经过二次酶解后的酶解液中加入相当于蛹虫草干重1.5％的胰蛋白酶，调节酶解液的pH值为8，三次酶解温度为50℃，三次酶解时间为5h。
本实施例利用β-葡聚糖酶酶解技术破除了蛹虫草坚硬的细胞壁，有利于细胞内容物的溶出，有利于提取过程的顺利进行，提高蛋白质、虫草多糖及虫草腺苷等功效成分的提取效率；本实施例利用多次酶解方法对蛹虫草进行酶解，可对蛹虫草中的蛋白质进行充分酶解。
4)过滤：将经过酶解获得的小分子蛹虫草活性肽溶液煮沸3min后降至室温，将煮沸灭酶后的小分子蛹虫草活性肽溶液经过板框压滤，去除溶液中的大分子成分和不溶性成分。
5)干燥：所述干燥过程采用喷雾干燥，干燥结束后即得到本发明所述的小分子蛹虫草肽粉成品。
实施例3
本实施例的一种小分子蛹虫草活性肽的制备方法，具体包括以下步骤：
1)干燥粉碎：将蛹虫草干燥并粉碎至60目。
2)提取：将经过干燥粉碎的蛹虫草粉加入提取罐中，往提取罐中加入25℃的蒸馏水并搅拌均匀，提取罐中的固液比为1:10。本实施例采用低温水提与酶解结合，避免了传统工艺中高温提取对蛹虫草中活性物质的破坏，保证了腺苷等功效成分的生物活性，同时大大缩短了提取时间，提高了生产效率。
3)酶解：所述酶解包括一次酶解、二次酶解和三次酶解，经过三次酶解获得小分子蛹虫草活性肽溶液；所述一次酶解过程为：向蛹虫草提取液中加入相当于提取所用蛹虫草干重1％的β-葡聚糖酶，调节溶液pH为5.5，一次酶解温度为60℃，一次酶解时间为6h。
二次酶解过程为：将经过一次酶解后的酶解液煮沸5min后降温离心，离心除杂后，在一次酶解液中加入木瓜蛋白酶进行二次酶解，木瓜蛋白酶的加入量相当于蛹虫草干重1％；调节酶解液的pH为7.5，二次酶解温度为55℃，二次酶解时间为4h。
三次酶解过程为：将经过二次酶解后的酶解液中加入相当于蛹虫草干重1.5％的胰蛋白酶，调节酶解液的pH值为8.5，三次酶解温度为55℃，三次酶解时间为6h。
本实施例利用β-葡聚糖酶酶解技术破除了蛹虫草坚硬的细胞壁，有利于细胞内容物的溶出，有利于提取过程的顺利进行，提高蛋白质、虫草多糖及虫草腺苷等功效成分的提取效率；本实施例利用多次酶解方法对蛹虫草进行酶解，可对蛹虫草中的蛋白质进行充分酶解。
4)过滤：将经过酶解获得的小分子蛹虫草活性肽溶液煮沸5min后降至室温，将煮沸灭酶后的小分子蛹虫草活性肽溶液经过板框压滤，去除溶液中的大分子成分和不溶性成分。
5)干燥：所述干燥过程采用喷雾干燥，干燥结束后即得到本发明所述的小分子蛹虫草肽粉成品。
实施例4
本实施例的一种小分子蛹虫草活性肽的制备方法，具体包括以下步骤：
1)干燥粉碎：将蛹虫草干燥并粉碎至55目。
2)提取：将经过干燥粉碎的蛹虫草粉加入提取罐中，往提取罐中加入20℃的蒸馏水并搅拌均匀，提取罐中的固液比为1:8。本实施例采用低温水提与酶解结合，避免了传统工艺中高温提取对蛹虫草中活性物质的破坏，保证了腺苷等功效成分的生物活性，同时大大缩短了提取时间，提高了生产效率。
3)酶解：所述酶解包括一次酶解、二次酶解和三次酶解，经过三次酶解获得小分子蛹虫草活性肽溶液；所述一次酶解过程为：向蛹虫草提取液中加入相当于提取所用蛹虫草干重1％的β-葡聚糖酶，调节溶液pH为5.5，一次酶解温度为60℃，一次酶解时间为6h。
二次酶解过程为：将经过一次酶解后的酶解液煮沸1min后降温离心，离心除杂后，在一次酶解液中加入木瓜蛋白酶进行二次酶解，木瓜蛋白酶的加入量相当于蛹虫草干重0.5％；调节酶解液的pH为6，二次酶解温度为55℃，二次酶解时间为2h。
三次酶解过程为：将经过二次酶解后的酶解液中加入相当于蛹虫草干重1％的胰蛋白酶，调节酶解液的pH值为7.5，三次酶解温度为45℃，三次酶解时间为4h。
本实施例利用β-葡聚糖酶酶解技术破除了蛹虫草坚硬的细胞壁，有利于细胞内容物的溶出，有利于提取过程的顺利进行，提高蛋白质、虫草多糖及虫草腺苷等功效成分的提取效率；本实施例利用多次酶解方法对蛹虫草进行酶解，可对蛹虫草中的蛋白质进行充分酶解。
4)过滤：将经过酶解获得的小分子蛹虫草活性肽溶液煮沸1min后降至室温，将煮沸灭酶后的小分子蛹虫草活性肽溶液经过板框压滤，去除溶液中的大分子成分和不溶性成分。
5)干燥：所述干燥过程采用喷雾干燥，干燥结束后即得到本发明所述的小分子蛹虫草肽粉成品。
实施例5
本实施例的一种小分子蛹虫草活性肽的制备方法，具体包括以下步骤：
1)干燥粉碎：将蛹虫草干燥并粉碎至60目。
2)提取：将经过干燥粉碎的蛹虫草粉加入提取罐中，往提取罐中加入25℃的蒸馏水并搅拌均匀，提取罐中的固液比为1:10。本实施例采用低温水提与酶解结合，避免了传统工艺中高温提取对蛹虫草中活性物质的破坏，保证了腺苷等功效成分的生物活性，同时大大缩短了提取时间，提高了生产效率。
3)酶解：所述酶解包括一次酶解、二次酶解和三次酶解，经过三次酶解获得小分子蛹虫草活性肽溶液；所述一次酶解过程为：向蛹虫草提取液中加入相当于提取所用蛹虫草干重1％的β-葡聚糖酶，调节溶液pH为5.5，一次酶解温度为60℃，一次酶解时间为6h。
二次酶解过程为：将经过一次酶解后的酶解液煮沸5min后降温离心，离心除杂后，在一次酶解液中加入木瓜蛋白酶进行二次酶解，木瓜蛋白酶的加入量相当于蛹虫草干重0.5％-1％；调节酶解液的pH为7.5，二次酶解温度为55℃，二次酶解时间为4h。
三次酶解过程为：将经过二次酶解后的酶解液中加入相当于蛹虫草干重1.5％的胰蛋白酶，调节酶解液的pH值为8.5，三次酶解温度为55℃，三次酶解时间为6h。
本实施例利用β-葡聚糖酶酶解技术破除了蛹虫草坚硬的细胞壁，有利于细胞内容物的溶出，有利于提取过程的顺利进行，提高蛋白质、虫草多糖及虫草腺苷等功效成分的提取效率；本实施例利用多次酶解方法对蛹虫草进行酶解，可对蛹虫草中的蛋白质进行充分酶解。
4)过滤：将经过酶解获得的小分子蛹虫草活性肽溶液煮沸3min后降至室温，将煮沸灭酶后的小分子蛹虫草活性肽溶液经过板框压滤，去除溶液中的大分子成分和不溶性成分。
5)干燥：所述干燥过程采用喷雾干燥，干燥结束后即得到本发明所述的小分子蛹虫草肽粉成品。
采用GB/T22729-2008方法对本实施例2制得的小分子海参肽粉的分子量分布进行检测，检测结果如表1所示。
表1小分子海参肽粉的分子量分布表
| 分子量范围 | 峰面积百分比(％，λ220nm) | 数均分子量 | 重均分子量 |
| >5000 | 0.24 | 7708 | 8701 |
| 5000～3000 | 0.53 | 3622 | 3701 |
| 3000～2000 | 1.53 | 2327 | 2356 |
| 2000～1000 | 9.87 | 1263 | 1311 |
| 1000～500 | 34.82 | 755 | 770 |
| 500～180 | 48.57 | 295 | 321 |
| ＜180 | 4.44 | / | / |
由表1可知，采用实施例2所述方法制得的小分子蛹虫草活性肽粉的分子量主要分布在180道尔顿-1000道尔顿之间，该分子量区间的小分子蛹虫草活性肽粉水溶性好，更有利于蛹虫草活性成分的吸收和利用。
采用GB5009.5-2010对本实施例2所述方法制得的一种小分子蛹虫草活性肽粉的肽含量、酸溶蛋白含量、总氮含量和干燥失重进行检测，检测结果如表2所示。
表2小分子蛹虫草活性肽粉的肽含量、酸溶蛋白含量、总氮含量和干燥失重检测结果
| 肽含量(g/100g) | 81.05 |
| 酸溶蛋白含量(g/100g) | 78.10 |
| 总氮含量(g/100g) | 14.05 |
| 干燥失重(％) | 3.28 |
由表2可知，采用本实施例2所述方法制取小分子蛹虫草活性肽的得率为80％-90％，其中酸溶蛋白含量占大多数，有利于人体胃的消化吸收，具有抗肿瘤、提高机体免疫能力、抗氧化等多种生理功能。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种小分子蛹虫草活性肽的制备方法，其特征在于，依次包括以下步骤：干燥粉碎、提取、酶解、过滤和干燥；
所述酶解包括一次酶解、二次酶解和三次酶解，经过三次酶解获得小分子蛹虫草活性肽溶液；所述一次酶解过程为：向蛹虫草经过提取获得的蛹虫草提取液中加入相当于提取所用蛹虫草干重0.5％-1％的β-葡聚糖酶，调节溶液pH为4-5.5，一次酶解温度为40℃-60℃，一次酶解时间为4h-6h。
2.根据权利要求1所述一种小分子蛹虫草活性肽的制备方法，其特征在于，所述二次酶解过程为：将经过一次酶解后的酶解液煮沸1min-5min后降温离心，离心除杂后，在一次酶解液中加入木瓜蛋白酶进行二次酶解，木瓜蛋白酶的加入量相当于蛹虫草干重的0.5％-1％；调节酶解液的pH为6-7.5，二次酶解温度为45℃-55℃，二次酶解时间为2h-4h。
3.根据权利要求1或2所述一种小分子蛹虫草活性肽的制备方法，其特征在于，所述三次酶解过程为：将经过二次酶解后的酶解液中加入相当于蛹虫草干重1％-1.5％的胰蛋白酶，调节酶解液的pH值为7.5-8.5，三次酶解温度为45℃-55℃，三次酶解时间为4h-6h。
4.根据权利要求1所述一种小分子蛹虫草活性肽的制备方法，其特征在于，所述过滤过程为：将经过酶解获得的小分子蛹虫草活性肽溶液煮沸1min-5min后降至室温，将煮沸灭酶后的小分子蛹虫草活性肽溶液经过板框压滤，去除溶液中的大分子成分和不溶性成分。
5.根据权利要求1所述一种小分子蛹虫草活性肽的制备方法，其特征在于，所述干燥粉碎过程为：将蛹虫草干燥并粉碎至40目-60目。
6.根据权利要求1所述一种小分子蛹虫草活性肽的制备方法，其特征在于，所述提取过程为：将经过干燥粉碎的蛹虫草粉加入提取罐中，往提取罐中加入室温的蒸馏水并搅拌均匀，提取罐中的固液比为1:8-10。
7.根据权利要求1所述一种小分子蛹虫草活性肽的制备方法，其特征在于，所述干燥过程采用喷雾干燥。
8.一种小分子蛹虫草活性肽，其特征在于，采用如权利要求1-7任一项所述方法即制得本发明所述的小分子蛹虫草活性肽，所述小分子蛹虫草活性肽为平均分子量小于1000道尔顿的低聚肽。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20151118 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |