CN105037398B

CN105037398B - 一种Bcr‑Abl双倍体抑制剂及其制备方法和用途

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Publication number: CN105037398B
Application number: CN201510180857.0A
Authority: CN
Inventors: 郑哲彬
Original assignee: Shenzhen Pharmaceutical Ltd By Share Ltd
Current assignee: Shenzhen pharmaceutical Limited by Share Ltd
Priority date: 2014-04-16
Filing date: 2015-04-16
Publication date: 2017-10-24
Anticipated expiration: 2035-04-16
Also published as: CN105001203B; CN105037398A; CN105001203A

Abstract

一种Bcr‑Abl双倍体抑制剂及其制备方法和用途。本发明公开了式Ⅰ化合物或其药学上可接受的盐，其结构式如下所示。本发明提供的式Ⅰ化合物或其药学上可接受的盐，作为Bcr‑Abl双倍体抑制剂，能够有效抑制酪氨酸激酶活性，可有效用于该类激酶异常活化相关的疾病治疗，对恶性肿瘤具有良好的治疗作用，该类抑制剂的制备方法简便，成本低廉，具有良好的应用前景。

Description

一种Bcr-Abl双倍体抑制剂及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种Bcr-Abl双倍体抑制剂及其制备方法和用途。

背景技术

慢性粒细胞白血病是染色体产生基因突变[t(9:22)(q34；q11)]相互易位，染色体9位的ABL基因和染色体22位的BCR基因相融合产生BCR-ABL，此融合的基因编码一种210kDa酪氨酸激酶Bcr-Abl，这种蛋白是导致慢性粒细胞白血病的主要原因。c-Abl在正常细胞中是存在于胞浆里的单倍体酪氨酸激酶，与Bcr融合后形态发生变化，由单倍体变成四聚体，由此该激酶始终处于被激活状态，导致肿瘤的发生。Bcr蛋白序列中存在可以引起多聚化的氨基酸序列导致Bcr-Abl四聚化。由于c-Abl在心肌等正常细胞中发挥重要的作用，如果开发选择性抑制致癌性Bcr-Abl而非Abl的抑制剂，则有望大大降低此类抑制剂的心脏毒性等广泛的副作用。

2001年，FDA批准第一个酪氨酸激酶抑制剂(TKI)伊马替尼(Imatinib)1上市，用于慢性粒细胞白血病(CML)的治疗。作为第一代Bcr-Abl抑制剂，伊马替尼已成为治疗CML的一线药物。但大多数患者最终都对伊马替尼出现耐药。随后研究表明，IM耐药性的发生可能与G250E、Q252H、Y253F、Y253H、E255K、E355G、E255V、T315A、T315I、F317L、F317V、M351T、F359V、H396P、M244V等Abl激酶活性区的基因突变有关，基因突变导致伊马替尼与Abl激酶的亲和性下降。绝大多数基因突变使伊马替尼的亲和性下降5-30倍，这是产生耐药性的主要原因。其中T315I比较特殊，降低最为明显，IC₅₀降至6400nM左右，最近开发的坡那替尼不仅对T315I有效，对野生型与绝大多数突变株均有效。

从坡那替尼与Abl蛋白的激酶部分的x-Ray共晶结构上看，结构中的甲级哌嗪部分的氮甲基部分暴露在溶剂中，两个抑制剂该氮原子之间的直线距离为24安左右。Bcr-Abl由于是四聚体，可以同时与4个抑制剂相结合，如果通过链条将两个抑制剂连接起来，则有望大大提高对四聚化的Bcr-Abl的亲和性，从而起到选择性抑制Bcr-Abl的作用，而Abl由于是单倍体，只能与一个抑制剂相结合，双倍体抑制剂对酶的亲和性不会有大的影响。

发明内容

本发明的目的在于提供一种Bcr-Abl双倍体抑制剂及其制备方法和用途。

本发明提供的式I化合物或其药学上可接受的盐，其结构式如下所示：

进一步的，式I中，Linker为(Z₁)_a–(Z₂)_b–(Z₃)_c；

其中，Z₁、Z₂、Z₃分别独立地选自C(O)(CH₂)_dNH、CO(CH₂)_eC(O)、(CH₂CH₂)_fNHC(O)、(CH₂CH₂)_g-C(O)NH、(CH₂)_hC(O)(OCH₂CH₂)_iNHC(O)(CH₂)_jC(O)、NH(CH₂)_k(OCH₂CH₂)_l-O(CH₂)_mNH、(CH₂)_nC(O)(OCH₂CH₂)_oNH(C(O)(CH₂)_pNH)_qC(O)-alkyl、C(O)NH(CH₂)_rNHC(O)-(CH₂)_sC(O)(NHCH₂CH₂)_tNH(C(O)(CH₂)_uNH)_v-C(O)-alkyl；

a～v分别独立地选自1～20中任一数值。

进一步的，其结构式为：

本发明还提供了制备上述化合物BP的方法。

本发明制备上述化合物BP的方法，它包括如下操作步骤：

a、制备化合物12：

b、制备化合物BP：

进一步的，它包括如下操作步骤：

i、制备化合物4：

(1)、2-甲基-5-硝基三氟甲苯在四氯化碳中，氮气保护下加入N-溴代琥珀酰亚胺、偶氮二异丁腈，回流反应24h，得到反应液；对反应液进行分离，得到化合物2；

(2)、化合物2、N-Boc-哌嗪、三乙胺在二氯甲烷中，于室温下搅拌反应3h，得到反应液；对反应液进行分离、纯化，得到化合物3；

(3)、在水和乙醇的混合溶剂中，加入还原铁粉、氯化铵、化合物3，回流反应1h，得到反应液；对反应液进行分离、纯化，得到化合物4；

ii、制备化合物8：

(4)、3-碘-4-甲基苯甲酸与氯化亚砜在四氢呋喃和N,N-二甲基甲酰胺的混合溶剂中，于60℃反应1h，得到反应液；反应液除去溶剂，得到化合物12；

(5)、化合物4、三乙胺、化合物6在二氯甲烷中，于室温下反应完全后，得到反应液；对反应液进行分离、纯化，得到化合物7；

(6)、化合物7在甲醇中，通入HCl气体，反应完全，得到反应液；反应液除去溶剂，得到化合物8；

iii、制备化合物11：

(7)、3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪在乙腈中，氮气保护下加入双三苯基磷二氯化钯、碘化亚铜、二环己基胺、三甲基硅乙炔，于80℃下反应完全，得到反应液；对反应液进行分离、纯化，得到化合物10；

(8)、化合物10与甲醇、饱和氟化钾溶液，于室温下反应完全，得到反应液；对反应液进行分离、纯化，得到化合物11；

iv、制备化合物12：

(9)、化合物8、化合物11在N,N-二甲基甲酰胺中，氮气保护下加入双三苯基磷二氯化钯、碘化亚铜、二异丙基乙胺，于室温下搅拌反应完全，得到反应液；对反应液进行分离、纯化，得到化合物12；

v、制备化合物17：

(10)、化合物13、BOC酸酐在二氯甲烷中反应完全，得到反应液；对反应液进行分离、纯化，得到化合物14；

(11)、化合物14、三乙胺、戊二酰氯在二氯甲烷中搅拌反应3h，得到反应液；对反应液进行分离、纯化，得到化合物15；

(12)、化合物15在HCl/乙酸乙酯中，于室温下搅拌反应3h，得到反应液；反应液除去溶剂，得到化合物16；

(13)、化合物16、二异丙基乙胺、3-氯丙酰氯在二氯甲烷中，于室温下搅拌反应3h，得到反应液；反应液除去溶剂，得到化合物17；

vi、制备化合物BP：

(14)、化合物12、化合物17、三乙胺在四氢呋喃中，回流反应24h，得到反应液；对反应液进行分离、纯化，得到化合物BP。

进一步的，

步骤i的(1)中，所述2-甲基-5-硝基三氟甲苯、N-溴代琥珀酰亚胺、偶氮二异丁腈的摩尔比为0.15：0.16：0.01；所述2-甲基-5-硝基三氟甲苯与四氯化碳的的摩尔体积比为0.15：200mmol/ml；

步骤i的(2)中，所述化合物2、N-Boc-哌嗪、三乙胺的摩尔比为0.146：0.16：0.22；所述化合物2与二氯甲烷的摩尔体积比为14.6：200mmol/ml；

步骤i的(3)中，所述还原铁粉、氯化铵、化合物3的摩尔比为0.5：0.3：0.1；所述化合物3与混合溶剂的摩尔体积比为0.1：200mmol/ml；所述混合溶剂中，水和乙醇的体积比为1：1；

步骤ii的(4)中，所述3-碘-4-甲基苯甲酸与混合溶剂的摩尔体积比为0.09：101mmol/ml；所述混合溶剂中，四氢呋喃和N,N-二甲基甲酰胺的体积比为100：1；

步骤ii的(5)中，所述化合物4、三乙胺、化合物6的摩尔比为0.08：0.12：0.088；所述化合物4与二氯甲烷的摩尔体积比为0.08：250mmol/ml；

步骤ii的(6)中，所述化合物7与甲醇的摩尔体积比为0.03：100mmol/ml；

步骤iii的(7)中，所述3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪与乙腈的摩尔体积比为0.05：100mmol/ml；所述3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪、双三苯基磷二氯化钯、碘化亚铜、二环己基胺、三甲基硅乙炔的摩尔比为0.05：0.0014：0.0014：0.06：0.6；

步骤iii的(8)中，所述化合物10与甲醇的摩尔体积比为0.04：50mol/ml；所述甲醇与饱和氟化钾溶液的体积比为50：20；

步骤iv的(9)中，所述化合物8、化合物11、双三苯基磷二氯化钯、碘化亚铜、二异丙基乙胺的摩尔比为17.3：19：1：1：38；所述化合物8与N,N-二甲基甲酰胺的摩尔体积比为17.3：150mmol/ml；

步骤v的(10)中，所述化合物13、BOC酸酐的摩尔比为45.5：43.18；所述化合物13与二氯甲烷的摩尔体积比为45.5：600mmol/ml；

步骤v的(11)中，所述化合物14、三乙胺、戊二酰氯的摩尔比为8.42：14.85：4.17；所述化合物14与二氯甲烷的摩尔体积比为8.42：120mmol/ml；

步骤v的(12)中，所述化合物15与HCl/乙酸乙酯的摩尔体积比为3.8：100mmol/ml；所述的HCl/乙酸乙酯，其浓度为2M；

步骤v的(13)中，所述化合物16、二异丙基乙胺、3-氯丙酰氯的摩尔比为0.90：6.15：1.81；所述化合物16与二氯甲烷的摩尔体积比为0.90：50mmol/ml；

步骤vi的(14)中，所述化合物12、化合物17、三乙胺的摩尔比为0.2：0.1：0.3；所述化合物12与四氢呋喃的摩尔体积比为0.2：10mmol/ml。

本发明还提供了上述化合物及其药学上可接受的盐在制备治疗细胞增殖疾病的药物中的用途。

上述化合物及其药学上可接受的盐在制备治疗细胞增殖疾病的药物中的用途。

进一步的，所述药物是酪氨酸激酶抑制剂。

进一步的，所述药物是ABL抑制剂类药物。

进一步的，所述药物是BCR-ABL或其突变株抑制剂类药物。

进一步的，所述BCR-ABL突变株为T315I突变株。

进一步的，所述细胞增殖疾病是癌症。

进一步的，所述癌症为慢性粒细胞白血病、肠间质瘤、妇科瘤、隆突性皮肤纤维肉瘤、Ph+ALL。

本发明提供的式I化合物或其药学上可接受的盐，作为Bcr-Abl双倍体抑制剂，能够有效抑制酪氨酸激酶活性，可有效用于该类激酶异常活化相关的疾病治疗，对恶性肿瘤具有良好的治疗作用，该类抑制剂的制备方法简便，成本低廉，具有良好的应用前景。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

具体实施方式

本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。

缩写的中文名称：

AIBN：偶氮二异丁腈；DMF：N,N-二甲基甲酰胺；TLC：薄层色谱；DCM：二氯甲烷；(Boc)₂O：BOC酸酐；DMSO：二甲基亚砜。

实施例1本发明化合物BP的制备

合成路线如下：

a、制备化合物12：

b、制备化合物BP：

制备化合物4

将2-甲基-5-硝基三氟甲苯(化合物1)(30g,0.15mol)加入到四氯化碳(200ml)中，在氮气保护下，加入N-溴代琥珀酰亚胺(28.8g,0.16mol)、AIBN(2.5g，0.01mol),电磁搅拌，升温至回流反应24h后停止反应，冷却至室温，将反应液过滤，固体用乙酸乙酯洗涤，合并乙酸乙酯相，并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，再用饱和氯化钠水溶液(10ml×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，得黄色油状物，即为化合物2，无需纯化，直接用于下一步。

制备化合物3

将上一步制备的化合物2溶解于二氯甲烷(200ml)中，并加入N-Boc-哌嗪(29.7g，0.16mol)、三乙胺(30ml，0.22mol)，室温搅拌反应3h；反应完全后，向反应液中加入水100ml，用1N盐酸调pH至2-3，分层，水相用二氯甲烷(100ml)萃去未反应完的原料及杂质，水相用1N氢氧化钠水溶液调pH至9-10后，用二氯甲烷(50ml×3)萃取产物后，有机相再用饱和氯化钠水溶液(10ml×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，得到淡黄色油状液体，即为化合物3(48.1g；以化合物1计，收率为84.4％)。

ESI-MS m/z：390.2[M+H]⁺；

¹HNMR(CDCl₃,500MHz)δ:8.52(d,J＝1.5Hz,1H),8.39(d,J＝8.5Hz,1H),8.12(d,J＝8.5Hz,1H),3.75(s,2H)，3.47(s,4H),2.45(s,4H),1.47(s,9H)。

制备化合物4：

向水(100ml)、乙醇(50ml)的混合溶剂中，加入还原铁粉(28g，0.50mol)、氯化铵(15.9g，0.30mol)，加热至回流，反应30min后，将化合物3(38.9g，0.10mol)溶解于乙醇(50ml)中，滴加至反应瓶中，加毕后反应1h，TLC(薄层色谱)检测反应，反应完全；将体系冷却至室温，过滤，用乙醇洗固体，蒸干乙醇后，用乙酸乙酯(50ml×3)萃取产物，有机相再用饱和氯化钠水溶液(10ml×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，得到淡黄色油状物，即为化合物4(34.9g；收率为97.3％)。

ESI-MS m/z:360.2[M+H]⁺；

¹HNMR(d⁶-DMSO,500MHz)δ:7.29(d,J＝8.5Hz,1H),6.86(d,J＝2Hz,1H),6.75(dd,J＝2,8.5Hz,1H),5.45(s,2H)，3.29(br s,4H),2.26-2.28(m,4H),1.38(s,9H)。

制备化合物6：

将3-碘-4-甲基苯甲酸(化合物5)(23.6g，0.09mol)加入到THF(100ml)中，加入DMF(1ml)，然后加入氯化亚砜(11.78g，0.099mol)，升温至60℃反应1h，反应完全后，蒸干溶剂，得到3-碘-4-甲基苯甲酰氯(化合物6)，直接用于下一步；

制备化合物7：

将化合物4(28.7g，0.08mol)溶解于二氯甲烷(200ml)中，加入三乙胺(17ml，0.12mol)，备用；将上一步得到的3-碘-4-甲基苯甲酰氯(化合物6)用二氯甲烷(50ml)稀释后，在冰浴条件下缓慢滴加至上述备用反应液中，加毕后升温至室温反应，1h后TCL检测反应，反应完全后，将反应液用饱和碳酸氢钠溶液(20ml×3)洗涤，有机相再用饱和氯化钠水溶液(20ml×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，得到淡黄色固体，即为化合物7(39.7g；收率为82.5％)。

ESI-MS m/z:604.2[M+H]⁺；

¹HNMR(CDCl₃,500MHz)δ:8.32(s,1H),7.91(s,2H),7.88～7.92(m,2H),7.75～7.79(m,2H),7.30(d,J＝8Hz,1H),3.62(s,2H)，3.42-3.44(m,4H),2.48(s,2H),2.39-2.41(m,4H),1.46(s,9H)。

制备化合物8：

将化合物7(18g，0.03mol)溶解于甲醇(100ml)中，通入HCl气体，反应完全后，蒸干溶剂，得到化合物8，直接用于下一步；

制备化合物10

将3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪(化合物9)(10g，0.05mol)溶解于乙腈(100ml)中，在氮气保护下，加入双三苯基磷二氯化钯(1.0g，1.4mmol)、碘化亚铜(0.3g，1.4mmol)、二环己基胺(11ml，0.06mol)，升温至80℃，将三甲基硅乙炔(8ml，0.6mol)缓慢滴加至反应液中，加毕后反应1h TLC检测，反应完全，将反应液冷却至室温，过滤，固体用二氯甲烷(200ml)洗涤，合并有机相，蒸干溶剂，将残余物加入二氯甲烷(100ml)，有机相再用饱和氯化钠水溶液(20ml×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂得粗品，粗品用乙酸乙酯/石油醚体系结晶，得到棕黑色粉末状固体，即为化合物10(8.9g；收率为81.8％)。

¹HNMR(CDCl₃,400MHz)δ:8.47(dd,J＝1.6,4.4Hz,1H),7.99(s,1H),7.96(dd,J＝1.6,9.2Hz,1H),7.10(dd,J＝4.4,9.2Hz,1H),0.33(s,9H)。

制备化合物11：

将化合物10(8g，0.04mol)用甲醇(50ml)溶解，加入饱和氟化钾溶液(20ml)，在室温下反应20min，TLC检测反应完全后，蒸干甲醇，残余物用二氯甲烷(100m)溶解，有机相再用饱和氯化钠水溶液(30ml×3)洗涤，硫酸钠干燥，蒸干溶剂，得到棕黑色粉末状固体，即为化合物11(5.2g；收率为98.4％)。

ESI-MS m/z:144.1[M+H]⁺；

¹HNMR(CDCl₃,400MHz)δ:8.48(dd,J＝1.6,4.4Hz,1H),8.02(s,1H),8.00(dd,J＝1.6,9.2Hz,1H),7.12(dd,J＝4.4,9.2Hz,1H),3.82(s,1H)。

制备化合物12

将化合物8(10g，17.3mmol)加入DMF(100ml)中，在氮气保护下，加入双三苯基磷二氯化钯(0.7g，1mmol)、碘化亚铜(0.2g，1mmol)、二异丙基乙胺(6.6ml,38mmol)，室温搅拌，将化合物11(2.7g，19mmol)用DMF(50ml)稀释后，缓慢滴加至反应液中，1h后TLC检测反应，反应完全后，将反应液倒入水(300ml)中，用二氯甲烷(50ml×3)萃取产物，有机相再用饱和氯化钠水溶液(20ml×2)洗涤，硫酸钠干燥，蒸干溶剂，得到粗品；粗品用乙醇/石油醚体系重结晶，得到淡黄色粉末状固体，即为化合物12(7.7g；收率为85.7％)。

ESI-MS m/z:519.2[M+H]⁺；

¹HNMR(d⁶-DMSO,500MHz)δ:10.57(s,1H),8.73(dd,J＝1.5,4.5Hz,1H),8.28(dd,J＝1.5,9.5Hz,1H),8.24(s,1H),8.22(d,J＝1.5,2H),8.07(d,J＝8Hz,1H),7.95(dd,J＝1.5,8Hz,1H),7.73(d,J＝8.5Hz,1H),7.55(d,J＝8.5Hz,1H),7.40(dd,J＝4.5,9.5Hz,1H),3.54(s,2H)，2.75(br s,4H),2.61(s,3H),2.34(br s,4H),1.23(br s,1H)。

制备化合物14：

将化合物13(10g，45.5mmol)溶解于500ml的DCM中，室温下，将(Boc)₂O(9.4g，43.18mmol)溶解于100ml的DCM中，缓慢滴加至反应瓶中，反应过夜；向反应液中加入水200ml，调pH至3-4后，萃去有机相杂质，水相调pH至10，再加入氯化钠饱和，萃出产物，有机相再用饱和氯化钠水溶液(10ml×6)洗去未反应完的原料，硫酸钠干燥，蒸干溶剂，得到无色油状物，即为化合物14(4.7g；收率为34.1％)。

¹H NMR(400MHz,CDCl3):δ5.11(br s,1H),3.63-3.45(m,12H),3.21(t,J＝6.0Hz,2H),2.81(t,J＝6.4Hz,2H),1.77-1.42(m,6H),1.42(s,9H).

制备化合物15：

在室温下，将化合物14(2.7g,8.42mmol)、三乙胺(1.5g,14.85mmol)溶解于二氯甲烷(100ml)中，将化合物戊二酰氯(0.7g,4.17mmol)溶解于二氯甲烷(20ml)中，向反应液中滴加，滴加时间超过1h，加毕后在室温下搅拌反应3h，然后用饱和氯化钠水溶液(100ml×2)洗涤有机相，有机相用硫酸钠干燥，真空浓缩蒸干溶剂，残余物用硅胶柱层析法纯化(二氯甲烷/甲醇＝20/1)得到无色油状物，即为化合物15(3.1g；收率100％)。

ESI-MS m/z:737.4[M+H]⁺；

¹H NMR(400MHz,CDCl3):δ6.55(br s,2H),5.06(br s,2H),3.63-3.49(m,24H),3.34(m,4H),3.20(m,4H),2.22(t,J＝7.2Hz,4H),1.93(m,2H),1.78-1.70(m,8H),1.41(s,18H)。

制备化合物16：

将化合物15(2.8g,3.80mmol)加入到HCl/乙酸乙酯(2M,100ml)中，室温下搅拌反应3h，真空浓缩蒸干溶剂，得到无色油状液体，即为化合物16(2.6g,收率:～100％)，无需进一步纯化，直接用于下一步反应；

制备化合物17：

在室温下，将化合物16(484mg,0.90mmol)、二异丙基乙胺(DIPEA)(800mg,6.15mmol)溶解于二氯甲烷(40ml)中，将3-氯丙酰氯(230mg,1.81mmol)用二氯甲烷(10ml)稀释后，向反应液中滴加，滴加时间超过1h，加毕后在室温下搅拌反应3h，然后用饱和氯化钠水溶液(50ml×2)洗涤有机相，有机相用硫酸钠干燥，减压浓缩蒸干溶剂，向残余物中加入正己烷搅拌均匀，过滤，得到白色固体，即为化合物17(330mg；收率为50.9％)。

¹H NMR(400MHz,CDCl3):δ6.85(bs,2H),6.58(bs,2H),3.81(t,J＝6.4Hz,4H),3.66-3.53(m,24H),3.39-3.31(m,8H),2.64(m,4H),2.24(t,J＝7.2Hz,4H),1.81(m,2H),1.55-1.47(m,8H)。

制备化合物BP

将化合物12(0.1g，0.2mmol)、化合物17(0.07g，0.1mmol)、三乙胺(42μl，0.3mmol)加入到10ml四氢呋喃中，升温至回流反应24h，蒸干溶剂后，用制备液相制备得到黄色粉末状固体，即为化合物BP(63mg；收率为37.5％)。

ESI-MS m/z:1681.8[M+H]⁺；

¹HNMR(D₂O,400MHz)δ:8.48(dd,J＝1.6,4.4Hz,2H),8.03(dd,J＝1.6,9.6Hz,2H),7.99(s,2H),8.97(d,J＝1.6,4H),7.82(d,J＝8Hz,2H),7.71(dd,J＝1.6,8Hz,2H),7.48(d,J＝8.8Hz,2H),7.31(d,J＝8.8Hz,2H),7.15(dd,J＝4.4,9.6Hz,2H),3.66-3.44(m,44H),3.34(s,4H),3.28(t,J＝6.8Hz,4H),3.22(t,J＝6.8Hz,4H),2.78(t,J＝6.8Hz,4H),2.26(s,6H),2.22(t,J＝7.2Hz,4H),1.87-1.70(m,10H)。

以下通过试验例具体说明本发明的有益效果。

试验例1 本发明化合物的药用活性

1、酪氨酸激酶抑制作用

参照：Amy Card et al.,Journal of Biomolecular Screening 14(1)2009；JudeDunne et al.,Assay&Drug Development Technologies Vol.2,No.2,2004。

利用Mobility Shift Assay的方法，对体外激酶Abl进行本发明化合物BP的筛选，化合物BP浓度由100μM三倍稀释法用100％DMSO依次稀释至0.005μM，共10个浓度点，进行检测(2复孔)，采用化合物staurosporine作为标准对照，设溶媒对照(10％DMSO)和阴性对照(EDTA)。

在384孔反应板上通过酶联免疫反应，检测各浓度的化合物BP对激酶Abl的抑制情况，Caliper上读取转化率数据，并把转化率转化成抑制率。

Percent inhibition＝(max-conversion)/(max-min)*100。其中max是指DMSO对照的转化率，min是指无酶活对照的转化率。根据每个浓度的抑制率计算本发明化合物BP对c-Abl酪氨酸激酶的酶活性半数抑制浓度IC₅₀。

抑制结果如下：

化合物BP的IC₅₀：0.01μM；

试验结果说明，本发明化合物BP对c-Abl酪氨酸激酶具有较强的抑制活性。

2、本发明化合物BP对KBM5(Bcr-Abl阳性)与KBM5R(T315I突变株)肿瘤细胞体外增殖抑制试验

用ATP法测定本发明BP系列化合物的细胞毒性，将KBM5和KBM5R细胞调整合适的细胞密度，以每孔140ul细胞悬液接种96孔板，每种细胞的接种密度为：2000-6000个；将上述细胞培养板在培养箱中放置24小时使其完全附着在孔壁上，采用三倍稀释法将本发明化合物BP系列中各个化合物分别配制成合适的不同浓度，加入到预先接种了细胞的96孔板相应的孔中，每孔10μL，使其最终浓度分别为：100μM、33.3μM、11.1μM、3.70μM、1.23μM、0.41μM、0.14μM、0.046μM、0.015μM。每个浓度分别设三个复孔，37℃培养箱中孵育72小时后，ATP法测定各孔细胞增殖情况，计算每个药物浓度对KBM5和KBM5R细胞增殖的抑制率和半数致死浓度(IC₅₀)。

试验结果：

化合物BP对KBM5(人源野生型Bcr-Abl)肿瘤细胞的细胞毒性如下：

化合物BP的IC₅₀：2μM；

化合物BP对KBM5R(Bcr-Abl^T315I突变株)肿瘤细胞的细胞毒性如下：

化合物BP的IC₅₀：5μM；

试验结果说明，本发明化合物BP在体外细胞水平上具有较强的抑制活性。

3、本发明化合物BP的体内白血病皮下异种移植增殖抑制试验

根据体外增殖抑制试验的结果，在本发明BP系列化合物中选择IC₅₀最小的抑制剂，评估了BP在C57BL/6(Es-1^c)裸鼠皮下移植人源白血病KBM5与KBM5R细胞的生长抑制效果。

本发明化合物BP的给药剂量分别为：80mg/Kg、160mg/Kg、350mg/Kg，同时设阳性对照组(160mg/Kg的伊马替尼Imatinib)和空白对照组(生理盐水)，荷瘤鼠分组后每日给药一次，连续腹腔注射给药两周后，检测肿瘤的体积。

考察肿瘤生长是否可以被抑制、延缓或治愈。每周两次或隔天用游标卡尺测量肿瘤直径。肿瘤体积的计算公式为：V＝0.5a×b²，a和b分别表示肿瘤的长径和短径。

数据分析：T检验用于两组间比较；三组或多组间比较用one-way ANOVA。如果F值有显著性差异，应在ANOVA分析之后再进行多重比较。two-way ANOVA用于分析联合给药组潜在的协同作用。用SPSS 17.0进行所有数据分析；p<0.05认为有显著性差异。

试验结果：对于人源白血病KBM5(Bcr-Abl阳性)皮下移植瘤模型，本发明化合物BP具有抗肿瘤药效，在80mg/kg剂量下与伊马替尼160mg/kg的抑制效果相当。对于人源白血病KBM5R(Bcr-AblT315I突变株)皮下移植瘤模型，本发明化合物BP具有与对KBM5皮下移植瘤相当的抑制效果，伊马替尼未见明显抑制效果。

4、本发明化合物BP的初步药代动力学研究

雌性C57BL/6(Es-1^c)裸鼠单剂量静脉受试本发明化合物BP后，用液相色谱串联质谱法定量测定其在主要组织中的浓度及血药浓度，考察受试药物在雌性C57BL/6(Es-1^c)裸鼠体内血液与主要组织中的分布差异；以伊马替尼作为对比。

实验方法与过程如下：雌性C57BL/6(Es-1^c)裸鼠，体重18-25g，6-8周龄，另外，3只雌性C57BL/6(Es-1^c)裸鼠用于采集空白样品，配制分析所需的标准曲线。静脉注射给药剂量为1mg/kg，给药体积均为5mL/kg。静脉注射给药溶媒：DMSO:Solutol HS15:Saline＝5:5:90,v/v/v。建立LC-MS/MS方法，用内标法定量测定受试药物血药浓度及组织浓度，线性范围1～1000ng/mL，定量下限范围一般为1ng/mL。雌性C57BL/6(Es-1^c)裸鼠经静脉注射给药后在0.25h，2h，8h和24h单次从小鼠尾静脉采集全血约20μL，用K₂EDTA抗凝，按照体积比加入3倍的重蒸水得到稀释后的血样，保存于-70℃中直至分析。同时采集心，肝，脾，肺，肾，胃，小肠，胰腺等组织样品，用生理盐水洗净，滤纸吸干后称重并记录，然后保存于-70℃中直至分析。将称重过的脏器组织解冻后，心，肝，脾，肺，肾，胃，小肠，胰腺加入3倍PBS缓冲盐用Beadbeater匀浆；骨髓样品采集时采用0.3mL的PBS缓冲盐冲洗，然后12000转离心5分钟，移去0.25mL上清液，剩余的细胞样品加入150LPBS缓冲盐匀浆。

数据分析：采用WinNonlin(版本6.2)软件，按非房室模型计算药动学参数。

实验结果表明，本发明化合物BP的半衰期(t_1/2)为3.5小时，远远大于伊马替尼的半衰期(t_1/2为1.5h)；与伊马替尼相比，本发明化合物BP在经过静脉注射后的药代动力学特性上具有非常明显的优势。

综上所述，本发明提供的式Ⅰ化合物或其药学上可接受的盐，作为Bcr-Abl双倍体抑制剂，能够有效抑制酪氨酸激酶活性，可有效用于该类激酶异常活化相关的疾病治疗，对恶性肿瘤具有良好的治疗作用，该类抑制剂的制备方法简便，成本低廉，具有良好的应用前景。

Claims

1.式Ⅰ化合物或其药学上可接受的盐，其结构式如下所示：

式I中，Linker为(Z₁)_a–(Z₂)_b–(Z₃)_c；

a～v分别独立地选自1～20中任一数值。

2.根据权利要求1所述的式Ⅰ化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：其结构式为：

3.制备权利要求2化合物BP的方法，其特征在于：它包括如下操作步骤：

a、制备化合物12：

b、制备化合物BP：

。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：它包括如下操作步骤：

i、制备化合物4：

(1)、2-甲基-5-硝基三氟甲苯(化合物1)在四氯化碳中，氮气保护下加入N-溴代琥珀酰亚胺、偶氮二异丁腈，回流反应24h，得到反应液；对反应液进行分离，得到化合物2；

ii、制备化合物8：

(4)、3-碘-4-甲基苯甲酸和氯化亚砜在四氢呋喃和N,N-二甲基甲酰胺的混合溶剂中，于60℃反应1h，得到反应液；反应液除去溶剂，得到化合物6；

iii、制备化合物11：

iv、制备化合物12：

v、制备化合物17：

vi、制备化合物BP：

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：

6.权利要求1～2任意一项所述化合物及其药学上可接受的盐在制备治疗细胞增殖疾病的药物中的用途。

7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于：所述药物是酪氨酸激酶抑制剂。

8.根据权利要求6或7所述的用途，其特征在于：所述药物是ABL抑制剂类药物。

9.根据权利要求6或7所述的用途，其特征在于：所述药物是BCR-ABL或其突变株抑制剂类药物。

10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于：所述BCR-ABL突变株为T315I突变株。

11.根据权利要求6所述的用途，其特征在于：所述细胞增殖疾病是癌症。

12.根据权利要求11所述的用途，其特征在于：所述癌症为慢性粒细胞白血病、肠间质瘤、妇科瘤、隆突性皮肤纤维肉瘤、Ph+ALL。