CN105017357B

CN105017357B - 多酚黄酮类化合物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN105017357B
Application number: CN201510490735.1A
Authority: CN
Inventors: 高慧媛; 刘晓秋; 王达; 张琳; 孙博航
Original assignee: Shenyang Pharmaceutical University
Current assignee: Shenyang Pharmaceutical University
Priority date: 2015-08-05
Filing date: 2015-08-05
Publication date: 2018-10-23
Anticipated expiration: 2035-08-05
Also published as: CN105017357A

Abstract

本发明公开了一种如式(I)的多酚黄酮类化合物及其制备方法和应用，式(I)，其中R₁、R₃可同时为H或OH或其中的1个；R₂、R₄和R₅其中至少有1个为糖基，其余为H或OH；糖基种类有葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gala)、甘露糖(Man)、鼠李糖(Rham)；糖之间还可连接形成二糖苷或三糖苷，其是从板栗总苞、板栗花、板栗壳、板栗仁中提取的含有多酚结构的黄酮类化合物，具有较好的抗人肺癌、人肝癌、人胰腺癌、人胃癌及人结肠癌活性可以和药学上可接受的载体结合制备临床上可接受的药物，用于肿瘤治疗。

Description

多酚黄酮类化合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种多酚黄酮类化合物及其制备方法和应用。

背景技术

板栗(Castanea mollissima Blume)又名栗子、栗、风蜡，是壳斗科(Fagceae)栗属(Castanea)植物，板栗种仁素有“干果之王”的美誉，是我国特产，在国外它还被称为“人参果”。中医认为，板栗性温，昧甘平，入脾、胃、肾经。关于板栗的药用价值，中医认为，栗果有养胃健脾，补肾强筋，活血止血之功能，并有益于高血压、冠心病的防治。在临床上，板栗还可用于治疗反胃、泄泻、腰腿软弱、吐血、便血、金疮等症。同时，板栗加上其他中药或食品原材料可以制成药膳，治疗气管炎、肾虚，消化不良、腹泻、中风等疾病。板栗的药理作用涉及抗凝血、升高白细胞、治疗菌痢、治疗慢性支气管炎等各个方面。

栗属植物中富含酚酸类化合物，板栗总苞、花絮、外壳中主要的化学成分皆为多酚。我们前期从板栗仁、板栗花、板栗总苞、板栗壳中分离得到数种多酚黄酮类化合物，结构含有桂皮酰基、香豆酰基、阿魏酰基、没食子酸酰基的黄酮苷类化合物结构新颖，在抗肿瘤活性评价中，均有抑制活性，该类成分和化合物可作为一种或多种可作为治疗或辅助性治疗癌症的药物。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种多酚黄酮类化合物及其制备方法和应用，制备过程简便易行，所制备的组分、单体化合物有广谱的抗肿瘤活性。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种式(I)所示的多酚黄酮类化合物，

其中R₁、R₃可同时为H或OH或其中的1个；R₂、R₄和R₅其中至少有1个为糖基，其余为H或OH；糖基种类有葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gala)、甘露糖(Man)、鼠李糖(Rham)；糖之间还可连接形成二糖苷或三糖苷，连接方式有1-2连接，1-3连接，1-4连接和1-6连接。所述糖的C-2位、C-3位、C-4位和C-6位还可连接式(II)或式(III)，

式(II)和式(III)中的R₆、R₇和R₈具有相同意义，可同时为H、OH、OCH₃，或H、OH、OCH₃中的一个或两个。

本发明还提供了上述化合物的三种制备方法：

方法一，包括如下步骤：

S11、取药材粗粉利用超声或溶剂加热提取法，采用3-15倍量水煎煮或30％-100％乙醇回流提取或30％-100％甲醇回流提取，减压回收水或醇溶剂，残渣挥至无醇味或醇度低于10％后，以水溶解后离心取上清液。

S12将所得上清液用聚酰胺或大孔树脂处理，用水-醇溶液梯度洗脱，富集30％-80％醇洗脱部分，得到粗黄酮；

S13、将所得粗黄酮经硅胶柱色谱进行分离，采用不同溶剂***进行梯度洗脱，结合中低压制备分离色谱、高效液相色谱进行制备分离，以乙腈-水***、甲醇-水***进行分离，得多酚黄酮类化合物。

方法二，包括如下步骤：

S21、取药材粗粉利用超声或溶剂加热回流提取法，采用3-10倍量的30％-100％乙醇或甲醇回流提取，减压回收醇溶剂，残渣挥至无醇味或醇度低于10％后，以水溶解，得混悬液；

S22、将所得混悬液依次用乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，萃取次数1-5次，萃取体积(1∶1-1∶8)获得各萃取部位，分别回收溶剂，得浸膏，其中乙酸乙酯层浸膏为粗总黄酮苷元组分；正丁醇层为总多酚黄酮苷类；

S23、将所得浸膏经硅胶柱色谱进行分离，采用不同溶剂***进行梯度洗脱，结合中低压制备分离色谱、高效液相色谱进行制备分离，以乙腈/水***、甲醇/水***进行分离，得多酚黄酮类化合物。

方法三，包括如下步骤：

S31、取药材粗粉利用超声或溶剂加热回流提取法，采用3-10倍量乙酸乙酯或丙酮回流提取，减压回收溶剂得浸膏，为粗总黄酮；

S32、将所得的粗总黄酮经硅胶柱色谱进行分离，采用石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、甲醇等组成的不同溶剂***进行梯度洗脱，结合中低压制备分离色谱、高效液相色谱进行制备分离，以乙腈-水***、甲醇-水***进行分离，得多酚黄酮类化合物。

其中，所述甲醇的浓度为10％-100％，所述乙醇的浓度为10％-100％。

其中，所述的聚酰胺为PA6、PA66、PA11、PA12、PA46、PA610、PA612、PA1010中的一种或几种的混合物，所述的大孔树脂包括但不限于极性、非极性大孔树脂D-101、DM-301、HPD-100、AB-8。

其中，所述不同溶剂***包括但不限于石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、甲醇。

其中，所述药材粗粉采用栗属等中药或植物，为板栗总苞、板栗花、板栗壳、板栗枝条、板栗仁中的一种。

其中，备分离色谱、高效液相色谱中流动相为甲醇/水、或乙腈/水、或乙醇/水，混合比例为1∶10-90∶10，或甲醇/乙腈/水，混合比例为1∶1∶10-40∶40∶20。

上的化合物和粗总黄酮可用来制备抗肿瘤细胞生长的药物，所述肿瘤为人肺癌、人肝癌、人胰腺癌、人胃癌及人结肠癌中的一种，同时还可以配制一种药物组合物用于治疗癌症，该组合物包含治疗有效剂量的化合物、粗总黄酮和药学上可接受的载体。

本发明具有以下有益效果：

制备过程简便易行，所制备的组分、单体化合物有广谱的抗肿瘤活性。

具体实施方式

为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1

从板栗中分离粗多酚黄酮1

分别取栗总苞、板栗花、板栗壳、或板栗仁粗粉各2kg，均以8倍量70％乙醇回流提取3次，每次2h，减压回收乙醇，残渣挥至无醇味，以水溶解后离心取上清液。

上清液用2Kg大孔吸附树脂(AB-8)开放柱色谱处理，用水-醇溶液梯度洗脱，富集30％-80％醇洗脱部分，分别得到粗黄酮180g、167g、110g、109g。

实施例2

从板栗中分离粗黄酮2

取药材粗粉即栗总苞、板栗花、板栗壳、板栗仁各0.5kg，均以6倍量70％乙醇超声提取1hr，减压回收醇溶剂，残渣挥至无醇味或醇度低于5％，以水溶解后离心取上清液。上清液用开发聚酰胺(PA66)柱色谱处理，用水-乙醇溶液梯度洗脱，富集30％-70％醇洗脱部分，分别得到粗黄酮27g，23g，18g，16g。

实施例3

从板栗中分离粗黄酮3

分别取栗总苞、板栗花、板栗壳、或板栗仁粗粉各2kg，均以8倍量70％乙醇回流提取3次，每次2h，减压回收乙醇，残渣挥至无醇味，以水溶解得各悬浮液2L。混悬液依此用等体积的乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，各萃取3次，各萃取部位分别回收溶剂得浸膏，其中乙酸乙酯层浸膏为粗总黄酮苷元组分，分别为45-67g。正丁醇层浸膏为总多酚黄酮苷类，分别为61-102g，将乙酸乙酯及正丁醇层组分合并，即得粗黄酮。

实施例4

从板栗中分离粗黄酮4

分别取栗总苞、板栗花、板栗壳、或板栗仁粗粉各2Kg，以8倍量丙酮加热回流提取，每次2h，减压回收溶剂，可得粗黄酮210-320g。

实施例5

从板栗粗黄酮中分离多酚黄酮类化合物

取上述实施例1中粗总黄酮100g，经硅胶(100-300目)开放柱色谱进行分离，以氯仿：甲醇(100∶0-1∶100)进行梯度洗脱，所得流份经薄层色谱分析，合并相同组分，得到10个流份。流份1-10分别经中低压柱色谱分离处理，依此以甲醇∶水(1∶9；2∶8；3∶7；6∶4；5∶5)进行洗脱，佐以薄层色谱分析合并相同流份，除去溶剂后得各洗脱物，洗脱物经HPLC分析后进制备型HPLC制备，色谱条件为甲醇-水-甲酸(10∶90∶0.02-65∶35∶0.02)，得如下15个结构的化合物。

化合物1-15结构如下

化合物1-15结构鉴定的碳氢谱数据如下：

化合物1：黄色粉末(甲醇)。盐酸-镁粉、Molisch反应为阳性。¹H-NMR(600MHz，DMSO-d₆)δ_H：6.70(1H，br s，H-6)，6.70(1H，br s，H-8)，8.45(2H，d，J＝8.4Hz，H-2′，6′)，7.16(2H，d，J＝8.4Hz，H-3′，5′)，5.27(1H，d，J＝7.6Hz，H-1″)，7.51(2H，d，J＝8.4Hz，H-2″′，6″′)，7.16(2H，d，J＝8.4Hz，H-3″′，5″′)，7.84(1H，d，J＝16.2Hz，H-7″′)，6.51(1H，d，J＝16.2Hz，H-8″′).¹³C-NMR(150MHz，DMSO-d₆)δ_C：157.8(C-2)，133.4(C-3)，178.4(C-4)，162.8(C-5)，99.9(C-6)，166.0(C-7)，94.7(C-8)，157.7(C-9)，105.2(C-10)，121.9(C-1′)，131.9(C-2′，6′)，116.1(C-3′，5′)，161.8(C-4′)，104.1(C-1″)，76.0(C-2″)，78.4(C-3″)，71.3(C-4″)，76.0(C-5″)，64.2(C-6″)，126.1(C-1″′)，130.8(C-2″′，6″′)，116.8(C-3″′，5″′)，161.4(C-4″′)，145.2(C-7″′)，114.9(C-8″′)，167.3(C-9″′).

化合物2：黄色粉末(甲醇)。盐酸-镁粉、Molisch反应为阳性。¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δ_H：6.11(1H，d，J＝2.1Hz，H-6)，6.27(1H，d，J＝2.1Hz，H-8)，7.60(1H，d，J＝2.1Hz，H-2′)，6.79(1H，m，J＝8.4Hz，H-5′)，7.57(1H，dd，J₁＝8.4，2.1Hz，H-6′)，5.25(1H，d，J＝7.2Hz，H-1″)，7.29(2H，d，J＝8.7Hz，H-2″′，6″′)，6.79(2H，H-3″′，5″′)，6.06(1H，d，J＝15.9Hz，H-7″′)，7.39(1H，d，J＝15.9Hz；H-8″′).¹³C-NMR(150MHz，DMSO-d₆)δ_C：157.8(C-2)，133.4(C-3)，178.1(C-4)，162.9(C-5)，100.0(C-6)，165.9(C-7)，94.8(C-8)，159.1(C-9)，105.6(C-10)，123.1(C-1′)，117.4(C-2′)，145.9(C-3′)，149.7(C-4′)，115.9(C-5′)，123.4(C-6′)，103.9(C-1″)，75.7(C-2″)，78.1(C-3″)，71.8(C-4″)，75.9(C-5″)，64.4(C-6″)，127.1(C-1″′)，131.2(C-2″′)，116.8(C-3″′)，161.1(C-4″′)，131.3(C-5″′)，116.8(C-6″′)，146.5(C-7″′)，114.8(C-8″′)，168.9(C-9″′).

化合物3：黄色粉末(甲醇)。盐酸-镁粉、Molisch反应为阳性。¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)δ_H：6.09(1H，br s H-6)，6.27(1H，br s，H-8)，7.99(2H，d，J＝9.0Hz，H-2′，6′)，6.87(2H，d，J＝8.5Hz，H-3′，5′)，5.67(1H，d，J＝7.5Hz，H-1″)，5.24(1H，br s，H-1″′)，7.27(2H，d，J＝8.0Hz，H-2″′，6″′)，6.81(2H，d，J＝8.0Hz，H-3″′，5″′)，7.38(1H，d，J＝16.0Hz，H-7″′)，6.03(1H，d，J＝16.0Hz，H-8″′).¹³C-NMR(100MHz，CD₃OD)δ_C：161.6(C-2)，134.4(C-3)，178.7(C-4)，164.3(C-5)，100.4(C-6)，166.5(C-7)，95.1(C-8)，158.7(C-9)，106.6(C-10)，123.4(C-1′)，132.4(C-2′，6′)，116.4(C-3′，5′)，159.9(C-4′)，100.5(C-1″)，80.3(C-2″)，79.2(C-3″)，72.4(C-4″)，76.0(C-5″)，64.3(C-6″)，100.3(C-1″′)，72.7(C-2″′)，72.6(C-3″′)，74.4(C-4″′)，70.3(C-5″′)，17.9(C-6″′)，127.5(C-1″″)，131.5(C-2″″，6″″)，117.2(C-3″″，5″″)，161.6(C-4″″)，146.9(C-7″″)，114.9(C-8″″)，169.1(C-9″″).

化合物4：黄色粉末(甲醇)。盐酸-镁粉、Molish反应为阳性。¹H-NMR(600MHz，DMSO-d₆)δ_H：6.16(1H，d，J＝2.0Hz，H-6)，6.36(1H，d，J＝2.0Hz，H-8)，7.96(2H，d，J＝8.8Hz，H-2′，6′)，6.87(2H，d，J＝8.8Hz，H-3′，5′)，5.72(1H，d，J＝8.0Hz，H-1″)，7.40(2H，d，J＝8.5Hz，H-2″′，6″′)，6.79(2H，d，J＝8.5Hz，H-3″′，5″′)，7.35(1H，d，J＝15.8Hz，H-7″′)，6.15(1H，d，J＝15.8Hz，H-8″′)，7.55(2H，d，J＝8.6Hz，H-2″″，6″″)，6.79(2H，d，J＝8.6Hz，H-3″″，5″″)，7.61(1H，d，J＝15.8Hz，H-7″″)，6.43(1H，d，J＝15.8Hz，H-8″″).¹³C-NMR(150MHz，DMSO-d₆)δ_C：156.5(C-2)，133.2(C-3)，177.2(C-4)，161.2(C-5)，98.8(C-6)，164.3(C-7)，93.8(C-8)，156.4(C-9)，103.9(C-10)，120.0(C-1′)，130.9(C-2′，6′)，115.2(C-3′，5′)，160.2(C-4′)，100.3(C-1″)，73.9(C-2″)，73.9(C-3″)，70.2(C-4″)，74.4(C-5″)，62.8(C-6″)，125.0(C-1″′)，130.3(C-2″′，6″′)，115.9(C-3″′，5″′)，159.9(C-4″′)，144.8(C-7″′)，113.7(C-8″′)，166.2(C-9″′)，125.2(C-1″″)，130.4(C-2″″，6″″)，115.9(C-3″″，5″″)，160.1(C-4″″)，145.2(C-7″″)，114.3(C-8″″)，165.9(C-9″″).

化合物5：黄色粉末(甲醇)。盐酸-镁粉、Molish反应为阳性。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ_H：6.18(1H，d，J＝1.5Hz，H-6)，6.37(1H，d，J＝1.5Hz，H-8)，7.19(2H，s，H-2′，6′)，5.46(1H，d，J＝7.5Hz，H-1″)，4.2(1H，d，J＝12Hz，H_a-6″)，4.3(1H，dd，J₁＝12.0，5.0Hz，H_b-6″)，6.88(2H，s，H-2″′，H-6″′).¹³C-NMR(100MHz，DMSO-d₆)δ_C：155.9(C-2，C-9)，133.5(C-3)，177.7(C-4)，161.1(C-5)，98.1(C-6)，164.0(C-7)，93.9(C-8)，103.2(C-10)，121.1(C-1′)，108.9(C-2′，C-6′，C-2″′，C-6″′)，145.0(C-3′，C-5′，C-3″′，C-5″′)，136.1(C-4′)，103.9(C-1″)，73.1(C-2″)，70.0(C-4″)，76.1(C-5″)，64.0(C-6″)，120.8(C-1″′)，74.2(C-3″)，138.1(C-4″′)，165.9(C-7″′).

化合物6：黄色粉末(甲醇)。盐酸-镁粉、Molish反应为阳性。¹H-NMR(600MHz，C₅D₅N)δ_H：6.69(1H，d，J＝2.2Hz，H-6)，6.74(1H，d，J＝2.2Hz，H-8)，8.26(1H，d，J＝2.2Hz，H-2′)，7.23(1H，d，J＝8.2Hz，H-5′)，3.81(3H，s，OCH₃)，7.38(1H，dd，J₁＝8.2，2.2Hz，H-6′)，5.23(1H，d，J＝7.5Hz，H-1″)，7.71(2H，s，H-2″′，H-6″′).¹³C-NMR(150MHz，C₅D₅N)δ_C：157.8(C-2)，135.1(C-3)，178.6(C-4，)，162.8(C-5)，100.0(C-6)，166.0(C-7)，94.8(C-8)，157.7(C-9)，105.3(C-10)，121.3(C-1)，114.6(C-2′)，151.4(C-3′)，148.1(C-4′)，116.3(C-5′)，123.1(C-6′)，56.4(OCH₃)，104.7(C-1″)，76.0(C-2″)，78.4(C-3″)，71.2(C-4″)，76.2(C-5″)，64.2(C-6″)，121.0(C-1″′)，110.3(C-2″′，C-6″′)，147.2(C-3″′，C-5″′)，140.6(C-4″′)，167.0(C-7″′).

化合物7：黄色粉末(甲醇)。盐酸-镁粉、Molish反应为阳性。¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)δ_H：6.56(1H，d，J＝2.3Hz，H-6)，6.87(1H，d，J＝2.3Hz，H-8)，7.64(1H，d，J＝2.1Hz，H-2′)，6.80(1H，m，J＝8.4Hz，H-5′)，7.58(1H，dd，J₁8.4，2.1Hz，H-6′)，5.86(1H，d，J＝7.9Hz，H-1″)，7.63(2H，s，H-2″′/6″′).¹³C-NMR(100MHz，CD₃OD)δ_C：158.2(C-2)，135.1(C-3)，178.4(C-4)，163.1(C-5)，99.2(C-6)，166.1(C-7)，94.5(C-8)，158.8(C-9)，105.6(C-10)，123.0(C-1′)，117.2(C-2′)，145.7(C-3′)，149.7(C-4′)，115.9(C-5′)，123.6(C-6′)，100.0(C-1″)，76.6(C-2″)，76.1(C-3″)，71.1(C-4″)，77.6(C-5″)，61.3(C-6″)，121.2(C-1″′)，111.0(C-2″′，6″′)，146.3(C-3″′，5″′)，140.2(C-4″′)，169.1(C-7″′).

化合物8：黄色粉末(甲醇)。盐酸-镁粉、Molish反应为阳性。¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)δ_H：6.56(1H，d，J＝2.3Hz，H-6)，6.87(1H，d，J＝2.3Hz，H-8)，8.55(2H，d，J＝8.2Hz，H-2′，6′)，7.66(2H，d，J＝8.2Hz，H-3′，5′)，5.86(1H，d，J＝7.9Hz，H-1″)，7.63(2H，s，H-2″′/6″′).¹³C-NMR(100MHz，CD₃OD)δ_C：158.2(C-2)，133.1(C-3)，178.4(C-4)，163.1(C-5)，99.2(C-6)，166.1(C-7)，94.5(C-8)，158.8(C-9)，105.6(C-10)，123.0(C-1′)，133.0(C-2′，6′)，117.2(C-3′，5′)，162.7(C-4′)，100.0(C-1″)，76.6(C-2″)，76.1(C-3″)，71.1(C-4″)，77.6(C-5″)，61.3(C-6″)，121.2(C-1″′)，111.0(C-2″′，6″′)，146.3(C-3″′，5″′)，140.2(C-4″′)，169.1(C-7″′).

化合物9：黄色粉末(甲醇)。盐酸-镁粉、Molish反应为阳性。¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)δ_H：6.13(1H，d，J＝2.1Hz，H-6)，6.30(1H，d，J＝2.1Hz，H-8)，7.20(2H，s，H-2′，6′)，5.76(1H，d，J＝7.9Hz，H-1″)，7.12(2H，s，H-2″′，6″′).¹³C-NMR(100MHz，CD₃OD)δ_C：158.2(C-2)，133.1(C-3)，178.9(C-4)，1δ3.1(C-5)，99.9(C-6)，166.3(C-7)，94.6(C-8)，158.4(C-9)，105.7(C-10)，122.2(C-1′)，109.9(C-2′，6′)，146.4(C-3′，5′)，137.9(C-4′)，100.7(C-1″)，76.2(C-2″)，76.6(C-3″)，71.5(C-4″)，78.7(C-5″)，62.5(C-6″)，121.4(C-1″′)，110.6(C-2″′，6″′)，146.5(C-3″′，5″′)，140.0(C-4″′)，168.1(C-7″′).

化合物10：黄色粉末(甲醇)。盐酸-镁粉、Molish反应为阳性。¹H-NMR(600MHz，C₅D₅N)δ_H：6.65(1H，d，J＝2.2Hz，H-6)，6.67(1H，d，J＝2.2Hz，H-8)，8.83(1H，d，J＝2.2Hz，H-2′)，7.21(1H，d，J＝8.2Hz，H-5′)，3.81(3H，s，OCH₃ )，7.80(1H，dd，J＝8.2，2.2Hz，H-6′)，5.80(1H，d，J＝8.0Hz，H-1″)，7.41(2H，d，J＝8.8Hz，H-2″′，H-6″′)，7.12(2H，d，J＝8.8Hz，H-3″′，H-5″′)，7.70(1H，d，J＝16.0Hz，H-7″′)，6.35(1H，d，J＝16.0Hz，H-8″′).¹³C-NMR(150MHz，C₅D₅N)δ_C：157.6(C-2)，135.1(C-3)，178.5(C-4)，162.7(C-5)，99.9(C-6)，166.0(C-7)，94.7(C-8)，157.6(C-9)，105.2(C-10)，121.2(C-1′)，114.6(C-2′)，151.3(C-3′)，148.0(C-4′)，116.3(C-5′)，123.1(C-6′)，56.4(OCH₃)，104.7(C-1″)，76.0(C-2″)，78.3(C-3″)，71.2(C-4″)，76.2(C-5″)，64.2(C-6″)，125.2(C-1″′)，131.0(C-2″′，C-6″′)，116.1(C-3″′，C-5″′)，160.3(C-4″′)，144.5(C-7″′)，112.9(C-8″′)，167.1(C-9″′).

化合物11：黄色粉末(甲醇)。盐酸-镁粉、Molish反应为阳性。¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)δ_H：6.29(1H，br s H-6)，6.57(1H，br s，H-8)，7.11(1H，d，J＝2.1Hz，H-2′)，6.23(1H，m，J＝8.4Hz，H-5′)，7.12(1H，dd，J＝8.4，2.1Hz，H-6′)，5.46(1H，d，J＝7.5Hz，H-1″)，5.12(1H，br s，H-1″′)，7.60(2H，s，H-2″′，6″′).¹³C-NMR(100MHz，CD₃OD)δ_C：158.1(C-2)，133.9(C-3)，178.7(C-4)，163.4(C-5)，100.1(C-6)，166.2(C-7)，95.1(C-8)，158.5(C-9)，106.9(C-10)，122.9(C-1′)，116.9(C-2′)，145.1(C-3′)，149.5(C-4′)，116.2(C-5′)，100.1(C-1″)，80.1(C-2″)，79.0(C-3″)，71.8(C-4″)，76.9(C-5″)，64.2(C-6″)，103.3(C-1″′)，72.1(C-2″′)，72.2(C-3″′)，74.8(C-4″′)，70.9(C-5″′)，18.2(C-6″′)，119.5(C-1″″)，108.1(C-2″″，6″″)，145.4(C-3″″，5″″)，138.2(C-4″″)，165.0(C-7″″).

化合物12：黄色粉末(甲醇)。盐酸-镁粉、Molish反应为阳性。¹H-NMR(600MHz，DMSO-d₆)δ_H：6.05(1H，br s，H-6)，6.24(1H，br s，H-8)，7.89(2H，d，J＝8.8Hz，H-2′，6′)，6.78(2H，d，J＝8.8Hz，H-3′，5′)，5.57(1H，d，J＝8.0Hz，H-1″)，7.34(2H，d，J＝8.4Hz，H-2″′，6″′)，6.70(2H，d，J＝8.4Hz，H-3″′，5″′)，7.55(1H，d，J＝16.0Hz，H-7″′)，6.25(1H，d，J＝16.0Hz，H-8″′).¹³C-NMR(150MHz，DMSO-d₆)δ_C：158.1(C-2)，134.6(C-3)，178.8(C-4)，162.8(C-5)，100.4(C-6)，165.4(C-7)，94.5(C-8)，158.0(C-9)，105.7(C-10)，122.6(C-1′)，132.0(C-2′，6′)，116.0(C-3′，5′)，161.2(C-4′)，99.6(C-1″)，75.7(C-2″)，76.2(C-3″)，71.5(C-4″)，78.6(C-5″)，62.5(C-6″)，127.1(C-1″′)，131.0(C-2″′6″′)，116.6(C-3″′5″′)，160.9(C-4″′)，146.6(C-7″′)，115.0(C-8″′)，168.1(C-9″′).

化合物13：黄色粉末(甲醇)。盐酸-镁粉、Molish反应为阳性。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)：6.17(1H，d，J＝2.1Hz，H-6)，6.33(1H，d，J＝2.1Hz，H-8)，7.56(1H，d，J＝2.4Hz，H-2′)，6.72(1H，d，J＝9.0Hz，H-5′)，7.54(1H，m，H-6′)，5.19(1H，d，J＝7.5Hz，H-1″)，δ6.94(2H，s，H-2″′，6″′).¹³C NMR(100MHz，CD₃OD)：δ：158.3(C-2)，133.2(C-3)，179.3(C-4)，162.8(C-5)，99.9(C-6)，165.8(C-7)，94.9(C-8)，159.3(C-9)，105.6(C-10)，123.0(C-1′)，117.2(C-2′)，145.7(C-3′)，149.7(C-4′)，115.9(C-5′)，123.6(C-6′)，104.2(C-1″)，75.7(C-2″)，78.0(C-3″)，71.5(C-4″)，75.9(C-5″)，64.3(C-6″)，121.3(C-1″′)，110.2(C-2″′，6″′)，146.3(C-3″′，5″′)，139.7(C-4″′)，165.8(C-7″′).

化合物14：黄色粉末(甲醇)。盐酸-镁粉、Molish反应为阳性。¹H-NMR(600MHz，DMSO-d₆)δ_H：6.70(1H，br s，H-6)，6.70(1H，br s，H-8)，8.45(2H，d，J＝8.4Hz，H-2′，6′)，7.16(2H，d，J＝814Hz，H-3′，5′)，5.26(1H，d，J＝7.6Hz，H-1″)，7.08(1H，d，J＝1.5Hz，H-2″′)，6.85(1H，d，J＝8.0Hz，H-5″′)，6.99(1H，dd，J＝8.0，1.5Hz，H-6″′)，7.54(1H，d，J＝16.0Hz，H-7″′)，6.24(1H，d，J＝16.0Hz，H-8″′).¹³C-NMR(150MHz，DMSO-d₆)δ_C：157.1(C-2)，133.6(C-3)，179.2(C-4)，163.1(C-5)，99.9(C-6)，165.9(C-7)，94.2(C-8)，157.1(C-9)，104.8(C-10)，122.3(C-1′)，132.1(C-2′，6′)，116.0(C-3′，5′)，161.9(C-4′)，104.1(C-1″)，76.5(C-2″)，73.2(C-3″)，71.3(C-4″)，76.0(C-5″)，64.2(C-6″)，127.1(C-1″′)，131.8(C-2″′，6″′)，116.1(C-3″′，5″′)，161.9(C-4″′)，145.0(C-7″′)，115.2(C-8″′)，167.0(C-9″′).

化合物15：黄色粉末(甲醇)。盐酸-镁粉、Molish反应为阳性。¹H-NMR(600MHz，DMSO-d₆)δ_H：6.70(1H，br s，H-6)，6.71(1H，br s，H-8)，8.45(2H，d，J＝8.4Hz，H-2′，6′)，7.16(2H，d，J＝8.4Hz，H-3′，5′)，5.23(1H，d，J＝7.6Hz，H-1″)，7.53(1H，d，J＝16.0Hz，H-7″′)，6.24(1H，d，J＝16.0Hz，H-8″′).6.85(1H，d，J＝8.5Hz，H-5″′)，6.99(1H，dd，J＝8.5，2.5Hz，H-6″′)，7.07(1H，d，J＝2.5Hz，H-2″′)，3.78(3H，s，-OCH₃)。¹³C-NMR(150MHz，DMSO-d₆)δ_C：157.8(C-2)，133.3(C-3)，178.7(C-4)，162.8(C-5)，100.0(C-6)，166.0(C-7)，94.7(C-8)，157.7(C-9)，105.2(C-10)，121.9(C-1′)，131.9(C-2′，6′)，116.1(C-3′，5′)，161.8(C-4′)，104.1(C-1″)，76.0(C-2″)，78.4(C-3″)，71.3(C-4″)，76.0(C-5″)，64.2(C-6″)，125.5(C-1″′)，110.0(C-2″′)，147.9(C-3″′)149.4(C-4″′)，115.4(C-5″′)，123.4(C-6″′)，145.3(C-7″′)，114.5(C-8″′)，166.5(C-9″′)，55.7(-OCH₃)

实施例6取实施例2中粗黄酮50g，以硅胶干柱色谱法进行分离，洗脱剂为二氯甲烷-丙酮(100∶0-1∶2)，洗脱完成后将全柱分成8个组分，将各组分洗脱可得流份1-8。将各流份用中低压快速色谱以ODS为填料进行梯度洗脱，流动相为甲醇-水(30∶70、50∶50、80∶20、100∶0)，其中50％甲醇洗脱、30％洗脱物进制备型HPLC制备，色谱条件为乙腈∶水∶甲酸(15∶85∶0.04-40∶60∶0.04)，可得化合物16-22。结构如下：

化合物16-22的碳氢谱数据如下：

化合物16：黄色粉末(甲醇)。盐酸-镁粉、Molish反应为阳性。¹H-NMR(600MHz，DMSO-d₆)δ_H：6.71(1H，br s，H-6)，6.72(1H，br s，H-8)，8.49(2H，d，J＝8.4Hz，H-2′，6′)，7.18(2H，d，J＝8.4Hz，H-3′，5′)，6.14(1H，d，J＝7.8Hz，H-1″)，7.52(2H，d，J＝8.4Hz，H-2″′，6″′)，7.16(2H，d，J＝8.4Hz，H-3″′，5″′)，7.84(1H，d，J＝15.6Hz，H-7″′)，6.49(1H，d，J＝15.6Hz，H-8″′).¹³C-NMR(150MHz，DMSO-d₆)δ_C：157.8(C-2)，133.4(C-3)，178.8(C-4)，162.7(C-5)，99.9(C-6)，166.1(C-7)，94.7(C-8)，157.6(C-9)，105.2(C-10)，121.8(C-1′)，131.9(C-2′，6′)，116.1(C-3′，5′)，161.8(C-4′)，105.0(C-1″)，70.8(C-2″)，73.1(C-3″)，69.9(C-4″)，74.7(C-5″)，64.4(C-6″)，126.1(C-1″′)，130.7(C-2″′，6″′)，116.8(C-3″′，5″′)，161.4(C-4″′)，145.3(C-7″′)，114.8(C-8″′)，167.2(C-9″′)，

化合物17：黄色粉末(甲醇)。盐酸-镁粉、Molish反应为阳性。¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)δ_H：6.33(1H，d，J＝2.3Hz，H-6)，6.12(1H，d，J＝2.3Hz，H-8)，8.19(2H，d，J＝8.4Hz，H-2′，6′)，7.20(2H，d，J＝8.4Hz，H-3′，5′)，5.24(1H，d，J＝7.2Hz，H-1″)，7.16(2H，s，H-2″′，6″′).¹³C-NMR(100MHz，CD₃OD)δ_C：158.1(C-2)，135.5(C-3)，178.3(C-4)，163.9(C-5)，100.2(C-6)，166.1(C-7)，94.2(C-8)，158.1(C-9)，105.2(C-10)，121.8(C-1′)，131.9(C-2′，6′)，116.1(C-3′，5′)，161.8(C-4′)，100.1(C-1″)，76.1(C-2″)，76.0(C-3″)，69.8(C-4″)，77.2(C-5″)，61.1(C-6″)，122.8(C-1″′)，112.0(C-2″′，6″′)，147.6(C-3″′，5″′)，137.8(C-4″′)，171.2(C-7″′).

化合物18：黄色粉末(甲醇)。盐酸-镁粉、Molisch反应为阳性。¹H-NMR(600MHz，DMSO-d₆)δ_H：6.19(1H，d，J＝1.8Hz，H-6)，6.40(1H，d，J＝1.8Hz，H-8)，8.49(2H，d，J＝8.4Hz，H-2′，6′)，7.18(2H，d，J＝8.4Hz，H-3′，5′)，5.36(1H，d，J＝7.8Hz，H-1″)，6.87(2H，s，H-2″′，6″′).¹³C-NMR(150MHz，DMSO-d₆)δ_C：156.3(C-2)，133.5(C-3)，177.4(C-4)，161.2(C-5)，98.7(C-6)，164.2(C-7)，93.6(C-8)，156.4(C-9)，103.9(C-10)，121.8(C-1′)，131.9(C-2′，6′)，116.1(C-3′，5′)，161.8(C-4′)，100.1(C-1″)，71.1(C-2″)，72.8(C-3″)，67.8(C-4″)，72.4(C-5″)，62.0(C-6″)，119.1(C-1″′)，108.6(C-2″′，6″′)，145.5(C-3″′，5″′)，138.5(C-4″′)，165.4(C＝O).

化合物19：黄色粉末(甲醇)。盐酸-镁粉、Molisch反应为阳性。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ_H：6.23(1H，d，J＝2.5Hz，H-6)，6.37(1H，d，J＝2.5Hz，H-8)，8.52(2H，d，J＝8.3Hz，H-2′，6′)，7.21(2H，d，J＝8.4Hz，H-3′，5′)，5.44(1H，d，J＝7.5Hz，H-1″)，4.25(d，J＝12Hz，H_a-6″)，4.32(dd，J₁＝5Hz，J₂＝12Hz，H_b-6″)，6.71(2H，d，J＝8.7Hz，H-2″′，H-6″′)，7.56(2H，d，J＝8.7Hz，H-3″′，H-5″′).¹³C-NMR(100MHz，DMSO-d₆)δ_C：157.2(C-2)，133.5(C-3)，177.9(C-4，C＝O)，161.8(C-5)，99.6(C-6)，165.4(C-7)，94.6(C-8)，157.7(C-9)，104.5(C-10)，121.3(C-1′)，130.9(C-2′，6′)，115.6(C-3′，5′)，161.1(C-4′)，103.5(C-1″)，72.4(C-2″)，74.1(C-3″)，69.5(C-4″)，74.8(C-5″)，64.0(C-6″)，120.1(C-1″′)，107.5(C-2″′，C-6″′)，142.5(C-3″′，C-5″′)，136.62(C-4″′)，166.8(C-7″′).

化合物20：黄色粉末(甲醇)。盐酸-镁粉、Molish反应阳性。¹H-NMR(400MHz，DMSO)δ_H：6.20(1H，d，J＝2.2Hz，H-6)，6.44(1H，d，J＝2.2Hz，H-8)，6.60(1H，d，J＝8.1Hz，H-5′)，7.49(1H，d，J＝3.0Hz，H-2′)，7.12(1H，dd，J₁＝8.1，3.0Hz，H-6′)，5.28(1H，d，J＝7.8Hz，H-1″)，6.71(2H，d，J＝8.7Hz，H-2″′，H-6″′)，7.58(2H，d，J＝8.7Hz，H-3″′，H-5″′).¹³C-NMR(100MHz，DMSO)δ_C：157.2(C-2)，134.0(C-3)，177.9(C-4，C＝O)，161.8(C-5)，99.9(C-6)，165.0(C-7)，93.2(C-8)，159.9(C-9)，103.6(C-10)，121.8(C-1′)，116.6(C-2′)，144.8(C-3′)，148.2(C-4′)，115.2(C-5′)，121.7(C-6′)，103.3(C-1″)，73.1(C-2″)，74.1(C-3″)，69.0(C-4″)，75.2(C-5″)，63.9(C-6″)，161.9(C-1″′)，114.8(C-2″′，C-6″′)，132.5(C-3″′，C-5″′)，121.1(C-4″′)，166.8(C-7″′).

化合物21：黄色粉末(甲醇)。盐酸-镁粉、Molisch反应为阳性。¹H-NMR(400MHz，DMSO)δ_H：6.18(1H，d，J＝2.5Hz，H-6)，6.37(1H，d，J＝2.5Hz，H-8)，6.73(1H，d，J＝8.0Hz，H-5′)，7.45(1H，d，J＝3.0Hz，H-2′)，7.59(1H，dd，J₁＝8.0，3.0Hz，H-6′)，5.44(1H，d，J＝7.5Hz，H-1″)，4.25(1H，d，J＝12.0Hz，H_a-6″)，4.32(dd，J₁＝12.0，5.0H_b-6″)，3.3-3.8(m，sugar protons)，6.90(2H，s，H-2″′，H-6″′).¹³C-NMR(100MHz，DMSO)δ_C：156.3(C-2)，133.2(C-3)，177.0(C-4，C＝O)，161.2(C-5)，98.9(C-6)，165.0(C-7)，93.6(C-8)，160.9(C-9)，103.6(C-10)，121.7(C-1′)，115.6(C-2′)，144.8(C-3′)，148.8(C-4′)，115.2(C-5′)，120.7(C-6′)，104.3(C-1″)，73.9(C-2″)，74.1(C-3″)，69.3(C-4″)，76.2(C-5″)，62.9(C-6″)，119.1(C-1″′)，108.5(C-2″′，C-6″′)，145.5(C-3″′，C-5″′)，138.62(C-4″′)，165.8(C-7″′).

化合物22：黄色粉末(甲醇)。盐酸-镁粉、Molish反应为阳性。¹H-NMR(600MHz，DMSO-d₆)δ_H：6.13(1H，d，J＝2.0Hz，H-6)，6.38(1H，d，J＝2.0Hz，H-8)，8.01(2H，d，J＝8.5Hz，H-2′，6′)，6.87(2H，d，J＝8.5Hz，H-3′，5′)，5.70(1H，d，J＝4.0Hz，H-1″)，7.36(2H，d，J＝8.5Hz，H-2″′，6″′)，6.79(2H，d，J＝8.5Hz，H-3″′，5″′)，7.55(1H，d，J＝15.9Hz，H-7″′)，6.15(1H，d，J＝15.9Hz，H-8″′)，7.44(2H，d，J＝8.5Hz，H-2″″，6″″)，6.77(2H，d，J＝8.5Hz，H-3″″，5″″)，7.61(1H，d，J＝15.8Hz，H-7″″)，6.43(1H，d，J＝15.8Hz，H-8″″).¹³C-NMR(150MHz，DMSO-d₆)δ_C：157.1(C-2)，133.1(C-3)，177.5(C-4)，161.1(C-5)，98.5(C-6)，164.5(C-7)，94.0(C-8)，156.9(C-9)，104.3(C-10)，121.0(C-1′)，131.1(C-2′，6′)，115.4(C-3′，5′)，160.1(C-4′)，98.5(C-1″)，73.1(C-2″)，73.5(C-3″)，70.1(C-4″)，74.2(C-5″)，62.3(C-6″)，125.5(C-1″′)，130.0(C-2″′，6″′)，115.2(C-3″′，5″′)，159.2(C-4″′)，144.1(C-7″′)，113.3(C-8″′)，166.7(C-9″′)，125.1(C-1″″)，130.4(C-2″″，6″″)，115.5(C-3″″，5″″)，160.0(C-4″″)，145.5(C-7″″)，114.8(C-8″″)，165.2(C-9″″).

实施例7

22个黄酮化合物及四种板栗粗黄酮的体外抗人肺癌细胞(H292)，人胃癌细胞(N87)，人肝癌细胞(HuH-7)，人胰腺癌细胞(PANC-1)，和人结肠癌细胞(HT-29)的活性测定。

通过CCK-8法检测样品对肿瘤细胞株的增殖抑制作用，得IC₅₀。

实验操作：

(1)细胞培养

收集对数生长期细胞，计数，用完全培养基重新悬浮细胞，然后调整细胞浓度至合适浓度，接种96孔板，每孔接种100μl细胞悬液，最后细胞在37℃，100％相对湿度，5％CO₂培养箱中孵育24小时。

(2)样品制备

用DMSO稀释化合物至相应浓度。

(3)IC₅₀实验

(a)收集对数生长期细胞，计数，用完全培养基重新悬浮细胞，调整细胞浓度至合适浓度(依照细胞密度优化试验结果确定)，接种96孔板，每孔加100μl细胞悬液。细胞在37℃，100％相对湿度，5％CO₂培养箱中孵育24小时。

(b)用DMSO稀释待测化合物，化合物从终浓度至0μM，共10个浓度点。

(c)加药后，细胞置于37℃，100％相对湿度，5％CO₂培养箱中孵育72小时；

(d)吸弃培养基，加入含10％CCK-8的完全培养基置于37℃培养箱中孵育2-6小时。

(e)轻轻震荡后在酶标仪上测定450nm波长处的吸光度，以650nm处吸光度作为参比，计算抑制率。

(4)按下式计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率：

肿瘤细胞生长抑制率％＝[(Ac-As)/(Ac-Ab)]×100％

As：样品的OA(细胞+CCK-8+待测化合物)

Ac：阴性对照的OA(细胞+CCK-8+DMSO)

Ab：阳性对照的OA(培养基+CCK-8+DMSO)

采用软件Graphpad Prism 5拟合IC₅₀曲线并计算出IC₅₀值。

(5)活性结果如表l。

表1：22个化合物及板栗总黄酮的IC₅₀值。

鉴于多酚黄酮化合物及总黄酮组分活性较好，该类成分和化合物可作为一种或多种可作为治疗或辅助性治疗癌症的药物。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种式(I)所示的多酚黄酮类化合物，

式(II)和式(III)中的R₆、R₇和R₈具有相同意义，可同时为H、OH、OCH₃，或H、OH、OCH₃中的一个或两个；

所述多酚黄酮类化合物结构如下：

2.如权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S21、取药材粗粉利用超声提取法，采用6倍量的70％乙醇提取，减压回收醇溶剂，残渣挥至无醇味或醇度低于5％后，以水溶解，得混悬液；

S22、将所得混悬液离心取上清液，上清液用开发聚酰胺柱色谱处理，用水-乙醇溶液梯度洗脱，富集30％-70％醇洗脱部分，得到粗黄酮；

S23、将所得粗黄酮经硅胶干柱色谱法进行分离，洗脱剂为二氯甲烷-丙酮，洗脱完成后将全柱分成8个组分，将各组分洗脱可得流份1-8，将各流份用中低压快速色谱以ODS为填料进行梯度洗脱，流动相为甲醇-水，其中50％甲醇洗脱、30％洗脱物进制备型HPLC制备，色谱条件为乙腈∶水∶甲酸，得多酚黄酮类化合物；

其中，所述药材粗粉为板栗总苞、板栗花、板栗壳、板栗仁中的一种；

洗脱剂二氯甲烷-丙酮的混合比例为：100∶0-1∶2；

流动相甲醇-水的混合比例为：30∶70、50∶50、80∶20、100∶0；

色谱条件乙腈∶水∶甲酸的混合比例为：15∶85∶0.04-40∶60∶0.04。

3.如权利要求2制备的化合物和粗总黄酮在制备抗肿瘤细胞生长的药物中的应用，其特征在于，所述肿瘤为人肺癌、人肝癌、人胰腺癌、人胃癌及人结肠癌中的一种。