CN104995510A

CN104995510A - 脓毒症的即时测定装置和方法

Info

Publication number: CN104995510A
Application number: CN201380072913.8A
Authority: CN
Inventors: 安东尼·尼古拉斯
Original assignee: Sepsis Ltd
Current assignee: Sepsis Ltd
Priority date: 2012-12-20
Filing date: 2013-12-20
Publication date: 2015-10-21
Also published as: JP6476130B2; GB201223079D0; EP2936149A1; WO2014096856A1; US20150346189A1; EP2936149B1; US9910028B2; JP2016503165A; US20180180589A1

Abstract

披露了一种脓毒症的即时测定，该测定包括具有用于血液样品的样品入口的一次性测定筒、用以分离血浆的过滤器、用以引起血浆样品中浊度变化的多价阳离子源以及用以测量浊度变化的透明窗，并且披露了所述测定在脓毒症诊断中的用途。

Description

脓毒症的即时测定装置和方法

技术领域

本发明总体上涉及一次性测定测试装置的领域，具体而言用于供即时测定(point-of-care assay)使用。本发明还涉及使用此类装置(包括含有此类装置的套件)，以辅助血液中脓毒症(sepsis)水平的精确测量。

背景技术

脓毒症，或血中毒，是潜在致命的医学病症，其表征为由感染触发的全身性炎症状态。脓毒症是具有许多形式的一大临床实体。宿主对感染的病理生理学反应是复杂的并且全身性炎症的体征和症状可具有感染性或非感染性致病源而且不是特定的。响应于血液、尿液、肺、皮肤、或其他组织中的微生物或病毒，身体可发展全身性炎症反应，最终导致器官功能障碍和死亡。具有全身性感染的患者经常难以与无感染情况下具有相似临床体征和实验室检查结果的患者相区分。感染具有多重原因，包括由细菌、真菌、寄生虫和病毒引起的那些原因。

可通过血流中存在的致病生物来鉴别脓毒症。通常用静脉注射液和抗生素来治疗脓毒症。脓毒症可以是存在多于一个类型的生物的结果，并且在出现严重症状之前尽可能早地鉴别感染的存在以及在治疗期间定期地监测来自患者的血液样品以确保抗生素是有效的并且患者没有遭受进一步的感染这两者都是重要的。

在不幸的临床体征的同时，感染的细菌学证据可能还没有发展。另外，需要时间来使来自血液样品的生物的培养物生长以确认感染性细菌的存在，并且由于污染等原因结果可能是不正确的。如在此使用的，严重的感染可包括诊断为脓毒症、重症脓毒症、败血症、和脓毒性休克、以及弥散性血管内凝血(“DIC”)。感染的定义中还包括全身炎症反应综合征“SIRS”，尽管它可具有感染性以及非感染性的起源(两者都包含在此)。SIRS可展示或发展成为全身性炎症，最后导致多器官功能障碍综合征。患有SIRS的患者可从感染、外伤、烧伤、胰腺炎等发展该综合征。

如在此使用的，可将止血功能障碍可定义为凝固错误。对DIC和脓毒症两者而言，存在对与炎症和凝固相关的共同和重叠的病理生理学途径的日益增加的鉴别。最近的在严重脓毒症中重组人类活性蛋白C(APC)的成功治疗，尤其是在无数不成功的对策之后，将进一步支持这一点。通过凝固辅助因子即Va和VIIIa的失活，APC抑制凝血酶的产生并且还被认为具有抗炎特性。

由于现行诊断方法缺少特异性，存在对发现感染、SIRS以及止血功能障碍的早期指示物或标志物的持续需要。早期诊断可大大地增加患者恢复率并且降低与这类人群相关联的发病率和死亡率。另外，用以监测宿主响应于感染、SIRS和止血功能障碍的治疗功效的诊断标志物或测试也是需要的。

凝固筛查测定的时间依赖性测量分布图已与预测先天性、后天性失衡以及止血功能障碍相关联，如吉文斯(Givens)等人在WO 96/41291和都(Toh)等人在WO 00/46603中所述。曾经这种分布图是关于活化的部分凝血激酶时间(“APTT”)测定的分布图，该测定在凝块形成前具有降低的血浆透光率，现在这种分布图通常称为双相波(在此也称为BPW)。该BPW已与患有DIC的危重患者相关联，该DIC在许多原发性疾病(包括脓毒症)中为常见的。凝固仪器上的双相波提供了简单且快速的测试以用于止血功能障碍(包括DIC)的早期诊断。

如WO 01/96864(2001年12月20日)中所述，在C反应蛋白(CRP)与脂蛋白(特别是极低密度脂蛋白(VLDL))之间的钙离子依赖性复合体已被鉴别为双相波下潜藏的分子机制。该复合体除了可用于鉴别患有可导致出血或血栓形成(包括DIC)的其他止血功能障碍的患者之外还可用于鉴别患有脓毒症、SIRS和败血症的患者。另外，WO 01/96864描述了通过以下方式来检测复合体：凝血测定、乳胶凝聚测定或金溶胶测定、以及免疫测定法，由此取决于所使用的试剂在凝块形成之前或不存在凝块形成的情况下形成沉淀物。

虽然双相波和CRP-脂蛋白复合体提供了在不同种类的严重感染和止血功能障碍(包括DIC和脓毒症)在早期诊断中的进展,但存在对进一步简化测定的持续需要,并且因此可使用少量血液进行并立即给出结果的一种简单的即时测定形式是高度期望的。

发明内容

披露了脓毒症的即时测定，该即时测定包括具有用于血液样品的样品入口的一次性测定筒、用以分离血浆的过滤器、用以引起存在脓毒症的血浆样品中浊度变化的多价阳离子源以及用以测量浊度变化的透明窗。这些多价阳离子可以是二价阳离子。这些二价阳离子可以是钙离子。可将这些阳离子干燥到该装置筒的表面上。本发明还包括用于测量样品中浊度变化的读取装置仪器。该读取仪器被配置为使装置筒保持在可见光束中，并且测量样品随时间推移的透光度。该装置可用于测量脓毒症。

附图说明

图1示出了使用常规分光光度计测试脓毒症和对照样品的结果。

图2示出了在本发明的卡片(card)装置上的相同的脓毒症和对照样品的结果。

图3示出了表1和2所示的数据的图解绘图。

具体实施方式

披露了脓毒症的即时测定方法，该即时测定方法包括具有用于血液样品的样品入口的一次性测定筒、用以分离血浆的过滤器、用以引起存在脓毒症的血浆样品中浊度变化的多价阳离子源以及用以测量浊度变化的透明窗。这些多价阳离子可以是三价阳离子或二价阳离子。这些二价阳离子可以是钙离子。可将这些阳离子干燥到该装置筒的表面上以使得它们通过添加血浆为再悬浮的。本发明还包括用于测量样品中浊度变化的读取装置仪器。该读取仪器被配置为使装置筒保持在可见光束中，并且测量样品随时间推移的透光度。该测定是相对于不存在阳离子的情况下的对照而执行的，在即时检测装置中可以在相同装置上进行，在第二分离的反应室中、或者在相同反应室的分离部分中进行。该装置可以是单次使用筒，该筒在单个样品被测量后被弃置。

用于脓毒症的现有测定测量由二价金属离子诱发的血浆浊度的变化。该测定可在微量滴定板上进行。该现有测试使用氯化钙并且通过样品随着时间的推移测量光透射的损失。患有脓毒症的患者在存在钙离子的情况下诱发快速沉淀，并且因此由于浊度的增加致使光透射减少。在没患有脓毒症的患者中，溶液保持清澈并且透射不变。可以在可见光谱中的任何波长(例如405-580nm)处监测透光度。该沉淀/浊度的增加快速发生，并且可以用30-60秒测量到。

本发明的一方面在于，二价阳离子可被干燥到微量滴定板的表面上，并且通过添加未稀释的血浆样品而再悬浮。还可将这种干燥的阳离子源施加到即时检测装置的反应室或通道上。阳离子浓度窗可以是大于10mM，例如10-100mM。这些阳离子可以是金属离子，例如钙离子。在规定了浓度的情况下，所提及的浓度是正测量透光度/浊度的再水合样品的浓度。

该即时检测装置要求将样品作为全血来施加，并且因此然后装置必须能够包括例如用于移除细胞物质并且确保仅血浆进入反应室的器件例如过滤器。该装置可适配有可附接到合适的过滤器的入口，例如适用于注射器的鲁尔入口。该过滤器可附接至注射器而不是该装置本身以使得该过滤器可在该装置进入有待读取的读取器之前移除。因此，本发明要求该筒具有适合于过滤器的连接或从全血分离血浆的其他方法，但是该过滤器不必与该装置物理地整合在一起。必须将全血施加到该装置，并且该装置必须包含用于获得血浆的器件，并且因此该装置必须包含过滤器或具有可利用可被直接附接并移除的过滤器使血液样品借以转化为血浆的器件。必须在将血液样品施加到该装置的点处附接过滤器，但是一旦已经施加了血液样品则可移除该过滤器。可将该过滤器整合到该装置上以使得它的移除是不可能的。

可将该血液样品作为未稀释的全血来施加，或者例如用柠檬酸离子来处理以防止在添加到测定装置之前发生沉淀。将血液施加到该装置后，在没有进一步稀释的情况下处理该样品。该血液样品能从例如手指尖获得，其能被直接施加到该装置，或者能从注射器抽血获得。如果血液被抽进注射器，则为了获得血浆，当样品进入装置时可实施过滤。

该过滤器可由纤维状基质形成以用于延迟例如红细胞的运动。合适的材料包括泡沫、玻璃纤维(例如硼硅酸盐)、溶胶-凝胶过滤器、层析介质(例如滤纸)或者膜(例如硝酸纤维素、聚砜或聚酯)。在一些实施例中，该过滤器可包括试剂，例如，结合剂，如结合至来自水性样品的不需要成分并将其移除的抗体或珠粒。该过滤器也可包括一个或多个预处理剂、沉淀剂、表面活性剂/洗涤剂、测定试剂、染料、阻断剂或者配体结合抑制剂。阻断剂和配体结合抑制剂可限制水性样品的特定成分(例如人血清白蛋白(HSA))对该测定的干扰。因此，该过滤器可包括HSA提取方式例如像抗-HSA抗体，或者使用例如沉淀、固定化等的任何其他方式。

该装置必须包含预先载入的多价阳离子(例如二价阳离子)源。预先载入意味着阳离子必须在引入血液血浆样品前存在于该装置中。这些阳离子可存在于一个或多个反应室内。这些阳离子可以按潮湿或干燥的形式存在。这些阳离子可存在于该装置的仅一部分中，该装置可具有多于一个反应室。这些阳离子可存在于具有多于一个室的装置的一个室内，例如该装置可具有两个反应室，其中一个包含钙离子。该两个或多个室可以从中央样品入口区域发散，在该中央样品入口区域处样品被引入到测定装置。该过滤器可位于中央区域中，或者该样品可在进入样品入口之前已被过滤。如果这些阳离子是干燥的形态，反应室的仅一部分可包含这些阳离子，并且因此能在一个室内测量反应和对照两者。在提及阳离子的所有例子中，这些阳离子可以是金属离子，包括钙离子或镁离子。阳离子浓度窗可以是大于10mM，例如10-100mM。

术语‘干燥形式’的使用是指维持处于通常基本上不含或耗尽液体或水分的形式的部件；即它们直到通过测定本身的进行来重构才处于溶液态，而不是先于或单独于测定程序被重构。因此，该水性样品本身重构一种或多种干燥试剂，由此消除了对于单独的重构缓冲液和步骤的需要。

该装置的反应室可包括闭合的通道。该反应室可以是流动通道。该反应室可具有限定的体积。该反应室的体积可以是例如10-50微升(μL)。该通道的大小可以是例如在高度和深度上为0.5mm-2mm，并且在长度上为1-3cm。该通道的大小可以是在高度上为大约1.5mm，在深度上为1.5mm，并且在长度上为2cm。

该反应室或通道可包括两亲性聚合物。两亲性聚合物可用于促进流体流动和/或水性溶液与例如利用结合在两亲性聚合物内或者作为两亲性聚合物涂层之上或之下的层的‘干燥’组分的混合。两亲性聚合物的使用还具有下述优点：流体的横向流得以改进，例如超过利用如在US 6,485,982中披露的多孔材料进行的传统‘芯吸’。现有技术的芯吸方法依赖于支撑载体(例如纸或膜)的使用，液体通过该支撑载体借助于毛细管作用被吸取。两亲性聚合物的使用消除了对支撑载体(例如膜)的需要，具有下述效果：相比于单独的毛细管作用，液体可沿着例如微管、表面、疏水表面等行进更大距离或者以更大速度行进。因此，与单独通过毛细管作用所预期的相比，通过使用两亲性聚合物毛细流动速率增加和/或流体流动/行进了更大距离。

两亲性聚合物可用于涂覆液体流动路径。可替代地，两亲性聚合物可以在流动路径表面上处于涂层或膜的形式，或者可以在流动路径的空隙或空腔内处于粉末、小丸、微粒、纳米颗粒、皮米颗粒、或者填料的形式。在两亲性聚合物为空腔内的填料的情况下，其可完全填满空腔或者可部分地由例如空缺填充。该两亲性聚合物可将流动路径形成为，例如，沿流体流动可发生的疏水表面上的轨道或途径。例如，该两亲性聚合物可被印刷(例如用喷墨或气泡-喷射印刷)、刷、喷雾或涂敷到表面(例如平面)以用于例如形成‘轨道’和/或层。试剂可例如通过混合与两亲性聚合物结合，或者可被安排作为两亲性聚合物之上、之下或旁边的层。

聚乙二醇(PEG)是两亲性聚合物。有用的PEG分子量包括从大约600到10,000Da，并且在大约1000到3000Da之间。聚乙二醇又称聚环氧乙烷(PEO)或聚氧化乙烯(POE))，是环氧乙烷的低聚物或聚合物。PEG在300g/mol到10,000,000g/mol的宽的分子量范围内为可利用的。PEG具有以下总体结构：

HO-(CH₂-CH₂-O-)_n-H

数字经常被包括在PEG名字中以指示它们的平均分子量。例如，n＝80的PEG将具有大约3500道尔顿的平均分子量并且将被标记为PEG 3500。

通常PEG包括具有多个分子量分布的分子。具有不同的分子量的PEG根据它们的不同的物理特性(例如粘性)发现可用于多种应用，然而它们的化学特性几乎完全相同。根据用于聚合过程的引发剂可获得不同形式的PEG，例如单功能甲基醚PEG(甲氧基聚(乙二醇))，缩写为mPEG。也可获得具有不同几何形式的PEG。支链形PEG具有从中央核心基团处发出的3到10个PEG链。星形PEG具有从中央核心基团处发出的10到100个PEG链。梳状PEG具有正常接枝到聚合物骨架上的多重PEG链。还可以在称为聚乙二醇化(PEGylation)的过程中将PEG共价联接到其他分子上，当使用PEG的流体流动特性用于例如试剂混合时该所述聚乙二醇化可以是有利的。

两亲性聚合物的其他实例是两亲性多肽，即，具有一种使得多肽既有亲水面又有疏水面的二级结构的多肽。其他两亲性聚合物包括聚乙烯醇(PVA)和离子型聚合物。

该通道可包括沿其长度的一部分的干燥的阳离子源。这些阳离子可处于距样品入口最远的通道部分中。

可以按多价有机化合物的形式提供这些阳离子。这些有机化合物可以是聚合物，例如聚赖氨酸。这些有机化合物可被干燥到该装置的表面上。

在这些阳离子是金属离子时，将这些阳离子干燥到该装置的表面内，使用聚合物试剂来帮助分散、稳定和再悬浮。这些聚合物试剂可以是聚乙二醇，例如甲基聚乙二醇。可替代地，这些金属离子可以是微囊化的。这些阳离子必须以这样一种形式来干燥，该形式在添加血浆样品时允许快速再悬浮。

筒的反应室必须包括可透过可见光的观察窗。该观察窗在480nm下是透明的。该透明窗的光学路径长度可以是0.5mm到10mm。该透明窗的光学路径长度可以是0.5mm到2mm。该光学路径长度可以是1mm或1.5mm。

该装置可由塑料或玻璃制成。该透明窗可由透明塑料制成。可将干燥的试剂预吸收到这些表面的一个上，并且然后装配该装置以用于结合干燥的试剂并且形成限定的反应室。例如可以按带的形式制备将干燥的试剂，并且该带用于密封开口通道以形成具有限定体积的闭合反应室。

该反应室可为下述尺寸，在该尺寸下血浆样品能通过毛细管作用被吸取进来。可替代地，可在负大气压下密封该室从而通过抽吸来吸取样品。该反应室可具有出口以在流体进入时允许空气逃逸。

读取器装置

包含反应的筒装置能在读取器装置上进行测量。该读取器装置应能够保持反应筒，并且包含可见光源。该光源的波长可以是在405-508nm之间，例如480nm。该光源可以是电灯泡、激光或发光二极管(LED)。该读取器可包括激发滤光片以选择激发波长。该读取器可包括用于检测通过样品的透射的测量元件。该读取器可包括针孔以使得到达测量元件的光的量最小化。该测量元件可以是光电二极管。

该测定读取器的外壳通常被适配为使其能被放置为与测定筒处于功能通信。例如，该测定筒装置可被***到、放置在或附接到读取器上，并且该读取器可包括对接器件，例如槽，或者对齐器件以使得该测定装置能适当地***、放置或附接。

该针孔的直径可以是例如3mm。该针孔的直径可以是小于3mm。该针孔的直径可以是0.5-1mm。该针孔的直径可以是0.5、0.8或1mm。

可将样品保持在距离光电二极管1-10cm之间以进行测量。可将样品保持在距离光电二极管3-6cm之间以进行测量。

该读取器能够连续地或者在预定时间点记录透光度。该读取器还可包括分析软件以经一段时间(例如120秒)绘制透光度的记录。该读取器可以在预定的时间点进行测量。该读取器可以在3个或更多个预定的时间点(例如10、30和60秒)进行测量。该读取器可被配置成使得不需要用户输入来产生测试结果。

使用方法

在此所包括的是针对血液脓毒症的即时测定的使用。该使用涉及检测脓毒症的方法，该方法包括如下步骤；

a)获得全血样品；

b)将血液样品添加到即时检测装置中，该即时检测装置包括用以获得血浆的过滤器以及多价阳离子源；

c)测量血浆浊度变化；并且

d)使该光透射的减弱与脓毒症的存在相关联。

该即时检测装置可具有上述特征中的任一个。可在如上所限定的读取仪器上进行测量。

套件

在本发明的另一个方面中，提供了包括用于执行脓毒症测定的部件的包装的套件。

该套件可包括许多部件中的一个或更多个，例如(i)在例如通过指尖血样品或通过注射器抽吸来采集血液样品之前对患者皮肤进行杀菌的器件。常规器件为一件织物或纱布，该织物或纱布包括灭菌剂(例如乙醇)、或者抗菌剂(例如二双胍类，例如氯己定作为在水性溶液或醇溶液中的可溶性盐)；(ii)皮肤穿刺器件，例如优选包括安全套筒的常规的柳叶刀装置。可替代地，针可以是包括针筒和柱塞的常规注射器组件的一部分；(iii)根据本发明第一方面的测定装置；(iv)用于覆盖皮肤穿刺伤口的纱布或橡皮膏；(v)提供了该装置的使用细节的说明单(vi)避免血液接触的一次性手套；(vii)测定读取器。

测试数据和实例

1.在飞利浦PU8730分光光度计上进行的测定：

使用具有1.5mm路径长度的分光光度计小池进行测定。将吸光度设置为480nm。对空白读数而言，将2μL的PBS添加至双相的血浆样品(18μL)。将此混合物充分混合并添加至小池(20μL)。然后关闭门并且每隔10秒进行读数直到4分钟为止。然后将小池用PBS洗涤并且允许干燥。将这个过程用100mM CaCl₂(2μL)取代PBS重复进行。

针对测试血浆样品中的每一个对该整个程序进行了重复。

2.在具有反应通道的原型装置平台上进行的测定：

构建清晰的反应室以有效地监测脓毒症浊度测定。为了获得原型卡片(prototype card)，两片黄晶塑料与由卡迪拉克塑料有限公司(8010MC.175)提供的清晰的膜片的内容物一起使用。一片被切成两半，并且沿卡片长度建立1mm通道(大约1mm光学路径长度)。这进而被黑色遮蔽胶带截开以便允许光通过希望的读取区域。

样品制备：

由于测定需要取得空白读数(在缓冲液里的样品)，故在卡片上的反应室在空白测试后必须洗涤。由于反应快速发生，故不可能进行空白样品测量并且然后将钙离子原位添加到反应室。因此如下制备样品：

空白混合物：

将5μL的PBS缓冲液添加到45μL的双相的血浆样品中(样品参考号035278)(样品由科林·唐尼(Colin Downey)-利物浦大学提供)。混合该反应混合物并且将20μL添加至原型卡片。然后通过以下方式对此进行读取：在原型读取器上利用皮可安培计(设置为uA)经1分钟周期获取定期的读数。然后将此卡片移除，用PBS洗涤并允许干燥。

反应混合物：

将5μL的100mM CaCl₂添加到45μL的双相的血浆样品(035278)中。再次快速混合这种混合物，之后将20μL添加到卡片，并且在读取器软件上使用‘连续模式’经3分钟周期进行读取。然后将此卡片移除，用PBS洗涤并允许干燥，之后再次测试。

将这整个程序重复用于8个双相的和3个标准的样品，如下所示：

在本研究中使用的样品参考数字如下所示：

双相的

360925 37226 52424 40578 40579 52031 53388 30785

标准的

1232889 1239931 1232934

图1示出了在常规分光光度计上测量的样品。图2示出了在原型卡片装置上测量的相同的样品。在原型装置上的总体数据示出了通道装置与分光光度计小池之间的等同性。在两个平台之间的总体趋势显现是一致的。信号损失是可比的，除了两个样品52031&53388。然而，两种方法均会导致相同的临床结论。由于路径长度的增加(它为1.5mm而不是在卡片上的1mm)，在分光光度计中有稍微更大的透射损失。

由于在添加到卡片或小池之前样品的‘离线’混合，初期反应路径的计时又是困难的。这使得紧密监测反应的最初20-40秒(对于观察信号损失为关键的)是极其困难的。我们看到‘标准’样品信号损失和/或增加的原因也是不清楚的。尽管这在整个规模的反应中是微不足道的，但可能是因为在卡片使用后的洗涤步骤可在室中留下痕量钙离子沉淀物，这导致了信号的变化。这在单次使用一次性卡片时不会发生。

优化和测试读取器参数

如上文所示进行反应卡片、空白样品和血浆样品的制备。

读取器说明书

·将白光LED用作光源。

·480nM的窄带通高帽(tophat)过滤器用于控制波长。

·将二极管连接到皮可安培计。

·然后将包含二极管的载物台定位为在二极管与样品之间给出3或6cm的距离。

·将0.5mm的排斥针孔(rejection pinhole)添加到光路中。

·然后测试这种配置。

结果：

表1：来自读取器修正的各种阶段的结果。

该结果示出，利用针孔并且通过增加样品与测量元件间的距离(检测器)改进了在读取器上的测试的精确度。

重复测定以在最优读取器配置下记录样品035278和没有钙离子时的样品的两个时间分布图，(0.8mm光路长度，6cm样品到检测器距离，1mm排斥针孔)：

表2：最终读取器修正之后的结果。

图3示出了表1和表2所示的数据的绘图。该结果示出了读取器已经经历的各种最优化和修正步骤，从而能够在通道形式(channel format)中监测脓毒症浊度测定。该两相血浆样品示出，在不存在钙离子时没有透光度损失。从曲线图可明确，排斥针孔的添加以及样品-检测器距离的增加已改进了以此形式进行的测定的分辨率。

Claims

1.一种使用装置检测脓毒症的方法，该装置包括具有用于血液样品的样品入口的一次性测定筒、用以从该血液样品中分离血浆的过滤器、包含引起在脓毒症的存在下的血浆样品中浊度变化的多价阳离子源的反应室以及用以测量该浊度变化的透明窗。

2.根据权利要求1所述的方法，其中该装置是一次性单次使用的装置。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中该多价阳离子是二价阳离子。

4.根据任一前述权利要求所述的方法，其中这些二价阳离子是金属离子。

5.根据权利要求4所述的方法，其中该金属是钙。

6.根据任一前述权利要求所述的方法，其中这些阳离子是作为该装置表面上的干燥材料被提供的。

7.根据任一前述权利要求所述的方法，其中该装置包括限定体积的反应室。

8.根据权利要求7所述的方法，其中该反应腔的该体积是10-50微升(μL)。

9.根据任一前述权利要求所述的方法，其中该窗在480nm下是透明的。

10.根据任一前述权利要求所述的方法，其中该透明窗的光学路径长度是0.5mm至10mm。

11.根据任一前述权利要求所述的方法，其中该透明窗的光学路径长度是0.5mm至2mm。

12.根据任一前述权利要求所述的方法，其中该装置包括第二反应室，该第二反应室不包括二价阳离子源。

13.根据任一前述权利要求所述的方法，其中当已经添加该血浆时，这些二价阳离子以大于10mM的最终浓度存在于该反应室中。

14.根据权利要求6所述的方法，其中这些阳离子是在水溶性聚合物层中干燥。

15.根据权利要求14所述的方法，其中该聚合物是聚乙二醇或甲基聚乙二醇。

16.根据权利要求6所述的方法，其中这些阳离子被干燥到该反应室表面的仅一部分上。

17.根据任一前述权利要求所述的方法，其中使用一种包括可见光源的读取仪器来对该装置进行测量。

18.根据权利要求17所述的方法，其中该读取仪器包括一种用于检测通过该样品的光的量的测量元件。

19.根据权利要求18所述的方法，在其中该测量元件是光电二极管。

20.根据权利要求18所述的方法，其中该读取仪器包括在该测量元件与该样品之间的针孔。

21.一种检测脓毒症的方法，该方法包括将血液样品添加到包括过滤器的即时检测装置以获得血浆和多价阳离子源；测量该血浆中的浊度变化；并且使该光透射的减弱与脓毒症的存在相关联。