CN104984334B - 一种狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种狂犬病弱毒苗‑吡喹酮复合剂及其制备方法与应用，原料包括吡喹酮、复合溶媒、附加剂和狂犬病弱毒苗。该狂犬病弱毒苗‑吡喹酮复合剂，在保证各有效成分药效的基础上，解决了水溶性狂犬病弱毒苗与脂溶性抗寄生虫药吡喹酮稳定混合的难题。制备方法简单可行。

Description

一种狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及的是一种狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂及其制备方法与应用。

背景技术

细粒棘球蚴病(Csystic echinococcusis,CE)，又名包虫病(Hydatidosis)，是细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosu)的中绦期幼虫寄生于牛、羊、猪、骆驼和马等家畜或多种野生动物或人的肝、肺等其他器官内所引起的一种人畜共患病。该病在人和动物之间传播，狗是其终宿主，羊、牛是其中间宿主。人因误食虫卵也可成为其中间宿主，发生包虫病。细粒棘球蚴病严重危害着人类和动物的身体健康和生命安全，是当今一个重大的公共卫生问题。该病呈世界性广泛分布，包括欧洲、北美、南美、亚洲、非洲等一些国家都有存在，我国的分布也极其广泛。这种病对感染动物的生长、发育、繁殖、畜产品质量和数量以及畜牧业发展均造成严重影响。

细粒棘球绦虫的中绦期幼虫——细粒棘球蚴多数寄生在人和动物的肝脏(将近70％)和肺(将近30％)，还有极少数寄生在心脏、脾、肌肉等部位。细粒棘球蚴的危害主要是分泌毒素和对脏器的机械性压迫，会使寄主产生炎症反应和过敏反应。人感染细粒棘球蚴后，因寄生部位不同而出现的症状各异：在肝脏，常常引起肝区腹痛；在肺部，往往引起咳嗽、血痰、胸痛；在脑部，一般引起不同程度的恶心呕吐、头疼等症状；严重时会丧失劳动力。绵羊感染细粒棘球蚴后，死亡率较高，主要症状为毛逆立、脱毛、倒地不起。牛感染细粒棘球蚴严重时，表现为消瘦、呼吸困难、咳嗽、产奶量下降等，剖检可见栗粒大到足球大的细粒棘球蚴包囊在肝和/或肺组织中寄生。细粒棘球蚴病的症状轻重与细粒棘球蚴寄生的部位、因其产生的囊肿大小、寄生的数量有很大的关系。目前关于细粒棘球蚴病的防控，较为普遍的是采用长期给动物抗寄生虫药。

狂犬病(Rabies)亦称恐水症，由狂犬病毒(Rabies virus)引起，是一种可怕的***共患病。狂犬病的防治是我国重要的公共卫生问题之一，已纳入我国传染病管理***法定报告的第二类传染病。该病的死亡率极高，一旦发病，死亡率为100％。到目前为止，世界上尚没有狂犬病的治疗方法，只能预防狂犬病的发生。所有的温血动物均易感染狂犬病，最易感的是犬科动物和猫科动物，而犬科动物是狂犬病的主要传染源。随着社会上饲养狗的风气盛行，不仅狗的数量大大增加，而且与人接触的机会也越来越多，因此，狂犬病的预防工作变得极其重要。一般预防狂犬病的措施为对伤口进行适当的处理、注射狂犬疫苗和抗狂犬病的免疫球蛋白等。

可见，犬在狂犬病及细粒棘球蚴病的传播和流行上，是重要和主要的源头。对犬注射狂犬病疫苗、服用抗寄生虫药，方可有效地防控这两种严重的***共患病。然而，常用的抗寄生虫药为脂溶性，狂犬病疫苗为水溶性，两者无法形成均相的稳定体系，只能分别用药。这样既增大了给药的难度又加重了兽医的工作强度，不利于狂犬病的预防和寄生虫病的防控。所以寻找一种能在预防狂犬病的同时，又能对诸如细粒棘球绦虫、多头绦虫、泡状带绦虫、犬复孔绦虫、线中绦虫等常见犬寄生虫进行驱虫的药物是目前在这两种疾病的防控中所面临的重大问题。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中存在的技术缺陷，一方面，提供一种同时含有狂犬病疫苗和抗寄生虫药的狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂，包括主要成份为吡喹酮、复合溶媒和附加剂的稀释液和等体积的狂犬病弱毒苗注射液；所述稀释液中吡喹酮、复合溶媒、附加剂的质量体积比(g：mL：mL)为(6.93:99:1)；所述狂犬病弱毒苗注射液中狂犬病弱毒苗的浓度为1头份/mL。

所述复合溶媒由溶媒A和溶媒B组成；溶媒A为乳酸乙酯；溶媒B选自异丙醇、丙二醇和甘油中的一种或多种，优选异丙醇。

所述溶媒A与溶媒B的体积比为(8：2)-(9:1)，优选为8:2。

所述附加剂选自吐温-80、苯甲酸、水杨酸、尿素、乌拉坦和甘油中的一种或多种，优选为吐温-80。

本发明的第二个方面在于提供制备上述狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂的方法，先将吡喹酮溶于复合溶媒中，混合均匀后与所述附加剂混合均匀得到稀释液；再将狂犬病弱毒苗由注射用水溶解得到狂犬病弱毒苗注射液；最后将稀释液与狂犬病弱毒苗注射液等体积混合均匀，即得狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂。

包括以下步骤：

(1)、将吡喹酮置于高压灭菌的安瓿瓶中，向其中加入复合溶媒，密封、震荡均匀，过滤后，制成吡喹酮浓度(质量体积百分含量，g：mL)为7％的复合溶媒吡喹酮溶液；将狂犬病弱毒苗用注射用水稀释，制成浓度为1头份/mL的狂犬病弱毒苗注射液；

(2)、取步骤(1)得到的复合溶媒吡喹酮溶液与附加剂按体积比99:1混合后，置于高压灭菌的安瓿瓶中，密封、震荡均匀，制成稀释液；

(3)、取步骤(1)得到的狂犬病弱毒苗注射液和步骤(2)得到的稀释液等体积混合均匀，即得到狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂。

本发明的第三个方面在于提供一种能让狂犬病疫苗和抗寄生虫药稳定存在于同一体系中的稀释液，主要成份包括上面提及的吡喹酮、复合溶媒和附加剂，其中，吡喹酮、复合溶媒、附加剂的质量体积比(g：mL：mL)为(6.93g:99mL:1mL)。

本发明的第四个方面在于提供制备上述稀释液的方法，先将吡喹酮溶于复合溶媒中，混合均匀后再与附加剂混合均匀，得到稀释液。

本发明的第五个方面在于提供上述狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂或上述方法制备得到的狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂在制备既能预防狂犬病又能驱虫的药物中的应用。

所述驱虫是指驱除常见犬寄生虫，包括细粒棘球绦虫、多头绦虫、泡状带绦虫、犬复孔绦虫、线中绦虫等，还包括血吸虫、华支睾吸虫、肺吸虫、姜片虫及囊虫等。

本发明的狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂，在保证各有效成分药效的基础上，解决了水溶性狂犬病弱毒苗与脂溶性抗寄生虫药吡喹酮稳定混合的难题。其优点是在国家对犬进行狂犬病强制免疫的政策基础上，不仅对狂犬病进行免疫预防接种，同时也进行了一些重要人畜共患寄生虫病及犬类和家畜共患寄生虫病的防控，并且还减少了兽医工作方面的劳力、物力和财力的支出，其生产实际意义和应用前途非常重大。

附图说明

图1所示为小鼠狂犬病毒抗体标准品的标准曲线图；

图2所示为吡喹酮标准品的标准曲线图。

具体实施方式

抗寄生虫药(antiparasitic drugs)主要是指用于灭杀、驱除和预防寄生于宿主(人和动物)体内的各种寄生虫的药物。针对不同的寄生虫选择不同的抗寄生虫药。其中，吡喹酮为广谱抗吸虫和绦虫药物，是一种白色或类白色结晶性粉末，适用于各种血吸虫病、华支睾吸虫病、肺吸虫病、姜片虫病以及绦虫病和囊虫病。由于吡喹酮不溶于水，还存在首过效应大、生物利用度低、半衰期短等缺点，因此常将其制成了脂质体、微囊等剂型口服使用。

目前我国生产的兽用狂犬病疫苗主要包括狂犬病灭活苗和狂犬病弱毒苗。狂犬病弱毒苗是一种弱毒细胞冻干疫苗，为白色干粉状，说明书标注一瓶为1头份(一只动物的用量)，使用时直接用注射用水稀释后注射使用。

临床上，目前吡喹酮药物和狂犬病疫苗均按常规单独使用，吡喹酮口服用于驱虫，狂犬病疫苗注射用于预防狂犬病。

本发明希望能将两种药物制成复合制剂以方便一次给药实现多重防控。复合制剂所面临的困难是水溶性狂犬病弱毒苗与脂溶性抗寄生虫药吡喹酮难以稳定混合，为此发明人从多种溶媒体系及助溶剂中筛选出了一种复合溶媒和附加剂，能够将不溶于水的吡喹酮和溶于水的狂犬病弱毒苗混合，形成稳定的均相狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂。注射给动物后，在保证各自药效的前提下，在预防狂犬病的同时，还能够对细粒棘球绦虫进行驱虫，一举两得，提高了防控动物疾病的效率。

以下结合具体实施例，更具体地说明本发明的内容，并对本发明作进一步阐述，但这些实施例绝非对本发明进行限制。

实施例中使用的手段，如无特别说明，均使用本领域常规的手段。

实施例：狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂及制备

本实施例用到的狂犬病弱毒苗为狂犬病活疫苗(Flury株)，批号：13021，瑞普(保定)生物药业有限公司生产。吡喹酮由新开元动物制药有限公司提供。

本发明的狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂中包括狂犬病活疫苗和吡喹酮两种活性成分，其中，吡喹酮需先制成稀释液。制备复合剂的具体步骤为：

(1)、准确称量吡喹酮0.07g,置于高压灭菌的安瓿瓶中，向其中加入复合溶媒1mL(复合溶媒由溶媒A和溶媒B按体积比(8:2)-(9:1)组成，溶媒A为乳酸乙酯；溶媒B选自异丙醇、丙二醇、甘油中的一种或多种)，密封、震荡均匀，用0.22μm有机滤膜过滤后，制成复合溶媒吡喹酮溶液；

将狂犬病弱毒苗用注射用水稀释成1头份/mL的狂犬病弱毒苗注射液(狂犬病弱毒苗是现有产品，说明书标注一瓶为1头份(一只动物的用量)，使用时直接用1mL注射用水稀释即可)；

(2)、取步骤(1)得到的复合溶媒吡喹酮溶液0.99mL与附加剂0.01mL(附加剂选自吐温-80、苯甲酸、水杨酸、尿素、乌拉坦和甘油中的一种或多种)混合后，置于高压灭菌的安瓿瓶中，密封、震荡均匀，制成稀释液。

(3)、取步骤(2)得到的稀释液1mL与步骤(1)得到的狂犬病弱毒苗注射液1mL(按体积比1:1)混合，制成狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂。

按上述方法，制备得到一系列狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂，其各原料的组成见表1。生产中，各原料用量可按表1数值同步放大。

表1所列实施例中，吡喹酮用量是根据《Plumb’s兽药手册》中，吡喹酮对犬一次性皮下或肌内注射的用量约为6mg/kg/头，一头中等犬的体重一般为10～15kg，因此吡喹酮的一次性用量约为60mg～90mg/头。本实施例采用吡喹酮的有效注射量70mg(0.07g)搭配1头份的狂犬病弱毒苗制备得到狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂。

表1狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂的组成

实验例一、不同配比的复合溶媒对本发明狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂的影响

为了研究不同配比的复合溶媒对本发明狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂的影响，从而筛选出最优的复合溶媒，制备得到一系列由溶媒A和溶媒B组成的复合溶媒1-5(溶媒A与溶媒B的体积比分别为7:3、8.5:1.5、9.5:0.5、8:2、8:2)，溶媒A为乳酸乙酯，溶媒B选自异丙醇、丙二醇、甘油中的一种或多种，溶媒A和溶媒B的体积比做调整(见表2)。按照上述方法使用本实验例得到的一系列复合溶媒制备得到一系列狂犬病弱毒苗-吡喹酮的复合剂1-5(其中吡喹酮为0.0693g，狂犬病弱毒苗(1头份/mL)为1mL)，观察制备得到的各复合剂表观状态。实验结果见表2。

表2的实验结果可以看出，当复合溶媒中溶媒A和溶媒B的体积比不在(8:2)-(9：1)的范围(溶媒A在复合溶媒中占80-90体积％)内时，制成的复合剂均不能成为均相、澄清的液体；溶媒A的含量过高会出现狂犬病弱毒苗无法溶解而以白色絮状沉淀的形式析出，溶媒B的含量过高会出现分层现象。而当溶媒A和溶媒B的体积比在(8:2)-(9：1)的范围内时，复合剂是均相澄清的液体；并且溶媒B中可以为几种物质的混合，混合比例没有限制，对吡喹酮和狂犬病弱毒苗的共同溶解不会产生影响。

表2不同配比的复合溶媒对本发明狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂的影响

实验例二：本发明狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂的抗体浓度测定

1、所用仪器设备与试剂：

多功能酶标仪Synergy4,美国Bio-Tek公司生产；TG16-W微量高速离心机，长沙湘仪离心机仪器有限公司制造；排枪、移液枪，德国eppendorf制造。

小鼠狂犬病毒抗体(Rv-Ab)ELISA试剂盒，上海裕平生物有限公司出品。

2、实验动物及分组：

将70只18～22g云南昆明系小白鼠随机分成7组。第1组为阴性对照组，第2组为阳性对照组，第3-7组为实验组。实验组根据小鼠与犬的体表面积剂量换算公式换算成等价药物剂量。第1组注射生理盐水作为阴性对照，第2组注射狂犬疫苗水溶液作为阳性对照，第3-7组注射本发明实施例1-5的狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂，其中第2-7组中狂犬病弱毒苗的含量相同。

3、实验方法：

①小鼠血清收集：小鼠正常饲养3-5天后，按分组肌肉注射0.5mL的待测药物，10d后，摘小鼠眼球采血1mL，置于离心管中，3000r/min离心15min，收集上清，为待测样品，-20℃保存备用。

按照小鼠狂犬病毒抗体(Rv-Ab)ELISA试剂盒中的说明书测定待测样品中的抗体浓度，其中的标准品稀释液、酶标试剂、样品稀释液、浓缩洗涤液、显色剂A、显色剂B和终止液等试剂都由小鼠狂犬病毒抗体(Rv-Ab)ELISA试剂盒提供或给出具体配方，具体为：

②小鼠狂犬病毒抗体标准品的稀释与加样：在酶标板上设标准品孔10个孔，在第一孔、第二孔中分别加小鼠狂犬病毒抗体标准品100μL，然后在第一孔、第二孔中加标准品稀释液50μL，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μL，分别加到第三孔和第四孔，再在第三孔、第四孔中分别加标准品稀释液50μL，混匀；在第三孔、第四孔中，各取50μL弃掉，再各取50μL分别加到第五孔、第六孔中，再在第五孔、第六孔中分别加标准品稀释液50μL，混匀；再从第五孔、第六孔中各取50μL，分别加到第七孔、第八孔中，再在第七孔、第八孔中分别加标准品稀释液50μL，混匀；然后再从第七孔、第八孔中各取50μL，分别加到第九孔、第十孔中，再在第九孔、第十孔中分别加标准品稀释液50μL，混匀；再从第九孔、第十孔中各取50μL弃掉。(稀释后各孔加样量为50μL，小鼠狂犬病毒抗体标准品的浓度分别为180pg/mL，120pg/mL，60pg/mL，30pg/mL，15pg/mL)。

③加样：分别设空白对照孔(不加待测样品及酶标试剂，其余各步骤相同)和待测样品孔。在酶标板上待测样品孔先加样品稀释液40μL，然后再加待测样品10μL(样品最终稀释5倍)，待测样品孔重复设两个。

④温育:用封板膜封酶标板后37℃温育30min。

⑤配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍释后备用。

⑥洗涤:小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30s后弃去，如此重复5次，拍干。

⑦加酶:每孔加入酶标试剂50μL，空白孔除外；同步骤④进行温育；同步骤⑥进行洗涤。

⑧显色:每孔加入显色剂A 50μL，再加入显色剂B 50μL，轻轻振荡混匀，37℃避光显色15min。

⑨终止:每孔加终止液50μL，终止反应。

⑩测定:以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光值(OD)，测定在加终止液后15min以内进行。测得小鼠狂犬病毒抗体标准品的吸光度后，以吸光度为纵坐标，以小鼠狂犬病毒抗体标准品的浓度为横坐标，得到小鼠狂犬病毒抗体标准品的标准曲线(如图1所示)和标准曲线方程(y＝0.0115x)。将待测样品的吸光度值代入标准曲线方程中，得到待测样品中的小鼠狂犬病毒抗体浓度，以实施例3为代表，其余实施例结果相差无异，不再赘述，结果见表3。

表3各组小鼠狂犬病毒抗体浓度

注：CV(％)变异系数

由表3可以看出，实施例1-3组产生的抗体明显比阴性对照组多，与阳性对照组相比，没有显著差异。这就说明本发明复合剂中狂犬病弱毒苗的有效含量与阳性对照组的狂犬病弱毒苗水溶液中的狂犬病弱毒苗有效含量基本相同，本发明复合剂可以用作狂犬疫苗使用。实验结果显示：通过对实验动物注射狂犬病弱毒苗及狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂抗体效价的测定，两组产生抗体差异不显著，表明吡喹酮驱虫药与狂犬病弱毒苗混合后对狂犬病弱毒苗的效价无明显影响。

实验例三：吡喹酮溶液及狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂中吡喹酮的含量测定

1、所用仪器设备与试剂：

电子天平(BS 224S)，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司生产；高效液相色谱仪(LC-2010A HT)，日本岛津公司制造；数控超声波清洗器(KQ-700DV)，昆山市超声仪器有限公司出品；循环水式多用真空泵(SHB-Ⅲ)，郑州世纪双科实验仪器有限公司经销。

吡喹酮标准品，批号：10129462，德国Sigma生产；吡喹酮原粉，新开元动物制药有限公司提供；吡喹酮注射剂7mg/mL，内蒙古农业大学寄生虫学实验室制备；甲醇，色谱纯，德国Sigma出品；狂犬病弱毒苗为狂犬病活疫苗(Flury株)，批号：13021，瑞普(保定)生物药业有限公司提供。

2、实验方法：

①HPLC方法的建立

色谱条件：色谱柱：sigma C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-水(A/B)梯度洗脱，即0.01min—2.00min，A/B＝60/40；2.00min-10min，A/B＝60/40-68/32；10.00-12.00min，A/B＝68/32-60/40；12.00min-15.00min，A/B＝60/40；流速1.0mL/min；检测波长：263nm；柱温：35℃；进样量：20μL。

②标准曲线的绘制：精密称取吡喹酮标准品，用甲醇配制成浓度为0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL、0.8mg/mL、1.2mg/mL、1.6mg/mL的吡喹酮标准液。经0.45μm有机滤膜过滤后，用HPLC进行检测，测出各浓度吡喹酮的峰面积。每个浓度重复三遍，求出各浓度吡喹酮的峰面积平均值，然后将各浓度吡喹酮峰面积的平均值缩小106倍，以峰面积为纵坐标，以吡喹酮的浓度为横坐标，最后绘制出吡喹酮峰面积-吡喹酮浓度的标准曲线(见图2)，得到标准曲线方程(y＝1.3639x+0.014)。

③加样回收率：分别称取吡喹酮标准品配制成浓度为0.84mg/ml、0.70mg/ml、0.56mg/ml的吡喹酮标准品溶液。经HPLC测定后计算回收率，每个浓度重复三遍，结果见表4。

④精密度和准确度的测定：日内差异：同一天内不同时间点测定浓度为0.2mg/mL、0.6mg/mL、1.2mg/mL的吡喹酮标准液。每个浓度重复五次，计算出每个浓度样品的日内变异系数，结果见表5。

日间差异：连续3天测定浓度为0.2mg/ml、0.6mg/ml、1.2mg/ml的吡喹酮标准液。每个浓度重复三遍，计算出每个浓度样品的日间变异系数，结果见表6。

⑤灵敏度考察：用甲醇配制不同浓度的吡喹酮标准品溶液，以信噪比S/N＝3时的浓度为最低检测限，S/N＝12时为最低定量限。

⑥吡喹酮注射液含量测定：将自制的三批吡喹酮标准品溶液用甲醇100倍稀释后(终浓度约为0.7mg/mL)，经0.45μm有机滤膜过滤，在步骤①的色谱条件下，测定各批吡喹酮标准品溶液的峰面积。然后将吡喹酮的峰面积经106倍缩小处理后，代入标准曲线方程计算得到各批吡喹酮标准品溶液的浓度，结果见表7。

⑦狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂中吡喹酮浓度的测定：将实施例1-5的复合剂经100倍稀释后(吡喹酮的终浓度约为0.35mg/mL)，用0.45μm有机滤膜过滤，在步骤①的色谱条件下，测定吡喹酮的峰面积，最后根据峰面积，计算实施例1-5中吡喹酮的浓度，以实施例3为代表，其余实施例结果相差无异，不再赘述，结果见表8。

表4吡喹酮加样回收率结果

由表4可以看出，HPLC法测定不同浓度吡喹酮标准品溶液时，加样回收率高，测定结果真实可信，说明该方法可以用来测定本发明狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂中吡喹酮含量。

表5日间差异精密度数据统计

表6日内差异精密度数据统计

由表5和表6可以看出，HPLC法测定不同浓度吡喹酮标准液的日间差异和日内差异不显著，表明该方法具有较高的准确度与精密度，可以用于狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂中吡喹酮含量的测定。

表7三批吡喹酮标准品溶液中吡喹酮浓度

注：吡喹酮百分标示量：在吡喹酮含量已知的情况下(0.07)检测吡喹酮的检出率。

表8三批狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂中吡喹酮浓度

注：三批复合剂是平行样。

实验结果同时显示(表7和表8)：通过HPLC法，测定吡喹酮溶液及狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂中吡喹酮的含量，结果显示三批吡喹酮溶液及狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂中吡喹酮含量均在90％以上，表明有机溶剂及狂犬病弱毒苗对吡喹酮的含量几乎无影响。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (11)

1.一种狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂，其特征在于，包括主要成份为吡喹酮、复合溶媒和附加剂的稀释液和等体积的狂犬病弱毒苗注射液；所述稀释液中吡喹酮、复合溶媒、附加剂的质量体积比为6.93g:99mL:1mL；所述狂犬病弱毒苗注射液中狂犬病弱毒苗的浓度为1头份/mL；

所述复合溶媒由溶媒A和溶媒B组成；溶媒A为乳酸乙酯；溶媒B选自异丙醇、丙二醇和甘油中的一种或多种；所述溶媒A与溶媒B的体积比为(8：2)-(9:1)；

所述附加剂选自吐温-80、苯甲酸、水杨酸、尿素、乌拉坦和甘油中的一种或多种。

2.根据权利要求1所述狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂，其特征在于，所述溶媒B选自异丙醇。

3.根据权利要求2所述狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂，其特征在于，所述溶媒A与溶媒B的体积比为8:2。

4.根据权利要求1-3任一所述狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂，其特征在于，所述附加剂为吐温-80。

5.制备权利要求1-4任一所述狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂的方法，其特征在于，先将吡喹酮溶于复合溶媒中，混合均匀后与所述附加剂混合均匀得到稀释液；再将狂犬病弱毒苗由注射用水溶解得到狂犬病弱毒苗注射液；最后将稀释液与狂犬病弱毒苗注射液等体积混合均匀，即得狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂。

6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)、将吡喹酮置于高压灭菌的安瓿瓶中，向其中加入复合溶媒，密封、震荡均匀，过滤后，制成吡喹酮质量体积百分含量，g：mL为7％的复合溶媒吡喹酮溶液；将狂犬病弱毒苗用注射用水稀释，制成浓度为1头份/mL的狂犬病弱毒苗注射液；

(2)、取步骤(1)得到的复合溶媒吡喹酮溶液与附加剂按体积比99:1混合后，置于高压灭菌的安瓿瓶中，密封、震荡均匀，制成稀释液；

(3)、取步骤(1)得到的狂犬病弱毒苗注射液和步骤(2)得到的稀释液等体积混合均匀，即得到狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂。

7.一种用在狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂中的稀释液，其特征在于，主要成份包括权利要求1至4任一提及的吡喹酮、复合溶媒和附加剂，其中，吡喹酮、复合溶媒、附加剂的质量体积比为6.93g:99mL:1mL。

8.制备权利要求7所述稀释液的方法，其特征在于，先将吡喹酮溶于复合溶媒中，混合均匀后再与附加剂混合均匀，得到稀释液。

9.权利要求1-4任一所述狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂或权利要求5或6所述方法制备得到的狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂在制备既能预防狂犬病又能驱虫的药物中的应用。

10.根据权利要求9所述应用，其特征在于，所述驱虫是指驱除常见犬寄生虫。

11.根据权利要求10所述应用，其特征在于，所述常见犬寄生虫为细粒棘球绦虫、多头绦虫、泡状带绦虫、犬复孔绦虫、线中绦虫、血吸虫、华支睾吸虫、肺吸虫、姜片虫和/或囊虫。