CN104974271B

CN104974271B - 一种具有抗氧化活性的漆籽多糖的制备方法

Info

Publication number: CN104974271B
Application number: CN201510426354.7A
Authority: CN
Inventors: 王成章; 陈虹霞; 周昊
Original assignee: Institute of Chemical Industry of Forest Products of CAF
Current assignee: Institute of Chemical Industry of Forest Products of CAF
Priority date: 2015-07-20
Filing date: 2015-07-20
Publication date: 2017-03-15
Anticipated expiration: 2035-07-20
Also published as: CN104974271A

Abstract

本发明涉及一种具有抗氧化活性的漆籽多糖的制备方法。该漆籽多糖是以经过压榨的漆树籽粕为原料，经过以下步骤：A脱脂：采用非极性溶剂对漆树籽粕进行脱脂，得到脱脂后的籽粕；B：按质量体积比为1:5~1:30(g:mL)，加入蒸馏水进行提取，提取液经过浓缩，加入乙醇，进行醇沉，离心得到沉淀，采用有机溶剂进行多次洗涤。C：采用不同填料的吸附材料进行脱色纯化。D：采用陶瓷膜和超滤膜技术纯化，干燥，得到漆籽多糖。本发明的漆籽多糖制备方法简便，可制备成抗氧化的功能性食品；同时该发明可变废为宝，提升漆树籽粕的综合利用率。

Description

一种具有抗氧化活性的漆籽多糖的制备方法

技术领域

本发明涉及一种具有抗氧化活性的漆籽多糖的制备方法，特指具有抗氧化作用的漆树籽粕多糖提取物，属于天然药物、保健食品领域。

背景技术

漆树（Rhus verniciflua stokes），为漆树科（Anacardiaceae）漆树属（Toxicodendron）的一种落叶乔木。漆树是我国重要的特用经济林，生漆是天然树脂涂料，素有“涂料之王”的美誉。主要分布在北纬25～42°，东经95～125°之间的山区，其中秦巴山地和云贵高原为漆树分布集中地区。生漆是漆树分泌物，为天然树脂涂料，素有“涂料之王”的美誉。

漆籽为漆树的果实，其中果皮为蜡质层，可以提取漆蜡，内核为种子，可榨取漆油，在我国现有的漆树资源中，每年的漆籽产量约为200多万吨。目前对漆籽的研究主要集中在漆脂的提取及精制加工等方面，董艳鹤等^[2-3]研究了热回流提取漆蜡的单因素和正交试验，优化漆蜡提取的最佳工艺，并采用GC—MS色谱分析了陕西野漆树和江西引种日本野漆树中漆蜡脂肪酸的化学成分，两个产地的漆蜡主要脂肪酸组成为棕桐酸、油酸和硬脂酸等。并进一步研究了漆蜡的脱色精制工艺，采用该方法制得的漆蜡的白度达85.2。漆树籽粕为漆籽压榨完后的主要剩余物，大量的漆籽粕作为废渣进行焚烧处理，不仅对环境造成浪费，且资源没有得到充分利用。

多糖是构成生命的四大基本物质之一，且有多种生物活性，关于具有抗氧化活性的漆籽多糖的制备方法至今未见国内外报道，也未见相应专利公开。

发明内容

本发明的目的在于克服漆树籽粕应用上的不足，提供一种具有抗氧化活性的漆籽多糖的制备方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

第一步

将漆树籽粕干燥、粉碎，按质量比1:5~1:30(g:mL)，加入石油醚或正己烷，于40～70℃加热回流提取2~3次，每次2h~10h，过滤，滤液合并，于40~60℃下减压蒸发回收溶剂，滤渣经过减压干燥，得到脱脂籽粕；

第二步

将脱脂籽粕，按质量体积比为1:5~1:30(g:mL)，加入蒸馏水，常温或加热回流提取、或减压回流提取、或超声波辅助提取或微波辅助提取2~3次，每次30min~10h，过滤，滤液合并，于50~70℃下减压浓缩，再经真空干燥或冷冻干燥，得到粗提物；浓缩液按体积比1～10:30（v/v）的比例加入无水乙醇，进行醇沉，离心得到沉淀，沉淀再经***、丙酮和乙醇洗涤2~3次，再进行干燥，即为漆树籽粕粗多糖，以硫酸-苯酚法测定粗多糖的含量，多糖含量为28%～32.5%，收率为4.4～6.2%；

第三步

将漆树籽粕粗多糖，加入蒸馏水，配制成0.5～1mg/mL的多糖溶液，采用不同吸附填料进行脱色纯化，加入吸附填料的量与多糖溶液的体积比为1:20~50(g:mL)，放入震荡器中，转速为150～200rpm/min，温度为25～45℃，时间30min～6h，然后过滤，除去吸附填料，滤液进行真空或冷冻干燥，即为漆树籽粕多糖提取物，以硫酸-苯酚法测定粗多糖的含量，多糖含量大于60%。

第四步

采用陶瓷膜和超滤膜技术对漆树籽粕多糖提取物进一步分级纯化，陶瓷膜平均孔径为0.1-1μm，超滤膜截留分子量范围为5000-100000D，工作压力为0.1-0.5Mpa，温度为30～50℃，截留浓缩液，并用蒸馏水清洗，合并洗液与浓缩液，真空干燥或冷冻干燥，得到漆籽多糖，以硫酸-苯酚法测定粗多糖的含量，多糖含量大于90%；

第五步

将漆籽多糖进行体外抗氧化测试，0.1～0.5mg/mL的漆树籽粕多糖提取物对ABTS自由基的清除率为50～75.3%，对羟基自由基的清除除率为52.5～73.8%。

2.第一步中的漆树籽粕是来源于野漆树、漆树和缅红漆品种的一种漆籽经过压榨后的籽粕。

3.第二步中加热回流提取的温度为50~90℃，减压回流提取的真空度为0.04~0.1MPa，温度50~70℃，超声辅助提取的功率为120~600W，温度为40~60℃，微波辅助提取的功率为500~800W，温度50~70℃。

4.第三步中的吸附填料选自颗粒活性炭、860021、DM-2、D941、D101、D845、D296中的一种或几种。2. 第一步中的漆树籽粕是来源于野漆树、漆树和缅红漆品种的一种漆籽经过压榨后的籽粕。

本发明的有益效果：

本发明所提供一种漆树籽粕多糖提取物的制备方法以及其在制备，还具有以下特点：

（1）本发明操作过程简单，条件易控制，可以批量工厂化生产；

（2）本发明所得的漆籽多糖溶解性好，具有良好的抗氧化作用；

（3）同时该发明可变废为宝，提升漆树籽粕的附加值，提高漆树籽的综合利用率。

附图说明

图1为漆籽多糖对ABTS自由基的抑制作用图；

图2为漆籽多糖对羟自由基的抑制作用图。

具体实施方式

以下实施例为本发明的一些举例，不应被看做是对本发明的限定。

实施例1 苯酚硫酸法测定多糖含量

葡萄糖标准曲线制作：称取葡萄糖0.01g，用蒸馏水定溶于50 mL容量瓶中，取8个10 mL试管标号（空白，1，2，…7），吸取标准葡萄糖溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.7，0.9 mL，分别置于1-7号试管，补加蒸馏水至终体积为1.0 mL，再加入5%（w/w）苯酚1.0 mL，震荡摇匀，缓慢加入浓硫酸3.5 mL,迅速震荡摇匀，室温下显色25分钟后吸取250 μL到96孔板，每样三个孔，490 nm处测定吸光度，取平均值，蒸馏水为空白对照。以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线；得到标准曲线的线性方程为y=0.0081x-0.0139（R²=0.9992），表明两变量线性相关性较好。

粗多糖含量测定：精确称取0.05 g粗多糖于50 mL容量瓶中，用蒸馏水定溶，分别吸取0.3，0.5，0.7，0.9 mL溶液与10mL试管中，补加蒸馏水至终体积为1.0mL，再加入5%（w/w）苯酚1.0 mL，震荡摇匀，缓慢加入浓硫酸3.5 mL,迅速震荡摇匀，室温下显色25分钟后吸取250 μL到96孔板，每样三个孔，490 nm处测定吸光度，取平均值。

实施例2

将野漆树籽粕干燥、粉碎，按质量比1:5(g:mL)，加入石油醚，于40加热回流提取3次，每次10h，过滤，滤液合并，于40℃下减压蒸发回收溶剂，滤渣经过减压干燥，得到脱脂籽粕；将脱脂籽粕，按质量体积比为1:5 (g:mL)，加入蒸馏水，常温提取3次，每次10h，过滤，滤液合并，于70℃下减压浓缩，再经真空干燥，得到粗提物；浓缩液按体积比1:10（v/v）的比例加入无水乙醇，进行醇沉，离心得到沉淀，沉淀再经***、丙酮和乙醇洗涤3次，再进行干燥，即为漆树籽粕粗多糖，以硫酸-苯酚法测定粗多糖的含量，多糖含量为28%，收率为4.4%；将漆树籽粕粗多糖，加入蒸馏水，配制成0.5mg/mL的多糖溶液，采颗粒活性炭进行脱色，加入吸附填料的量与多糖溶液的体积比为1:50(g:mL)，放入震荡器中，转速为150rpm/min，温度为45℃，时间2h，然后过滤，除去吸附填料，滤液进行真空，即为漆树籽粕多糖提取物，以硫酸-苯酚法测定粗多糖的含量，多糖含量61.2%。采用陶瓷膜和超滤膜技术对漆树籽粕多糖提取物进一步分级纯化，陶瓷膜平均孔径为0.1-1μm，超滤膜截留分子量范围为5000-100000D，工作压力为0.1-0.5Mpa，温度为30～50℃，截留浓缩液，并用蒸馏水清洗，合并洗液与浓缩液，真空干燥或冷冻干燥，得到漆籽多糖，以硫酸-苯酚法测定粗多糖的含量，多糖含量大于92%。

实施例3

将漆树籽粕干燥、粉碎，按质量比1:30(g:mL)，加入正己烷，于70℃加热回流提取2次，每次2h，过滤，滤液合并，于60℃下减压蒸发回收溶剂，滤渣经过减压干燥，得到脱脂籽粕；将脱脂籽粕，按质量体积比为1:30(g:mL)，加入蒸馏水，加热回流提取，提取温度50~90℃，提取2次，每次2h，过滤，滤液合并，于50℃下减压浓缩，再经冷冻干燥，得到粗提物；浓缩液按体积比1:20（v/v）的比例加入无水乙醇，进行醇沉，离心得到沉淀，沉淀再经***、丙酮和乙醇洗涤2次，再进行干燥，即为漆树籽粕粗多糖，以硫酸-苯酚法测定粗多糖的含量，多糖含量为30.5%，收率为4.8%；将漆树籽粕粗多糖，加入蒸馏水，配制成1mg/mL的多糖溶液，采用860021树脂进行脱色纯化，加入吸附填料的量与多糖溶液的体积比为1:20 (g:mL)，放入震荡器中，转速为200rpm/min，温度为25℃，时间30min，然后过滤，除去吸附填料，滤液进行冷冻干燥，即为漆树籽粕多糖提取物，以硫酸-苯酚法测定粗多糖的含量，多糖含量60.5%。采用陶瓷膜和超滤膜技术对漆树籽粕多糖提取物进一步分级纯化，陶瓷膜平均孔径为0.1-1μm，超滤膜截留分子量范围为5000-100000D，工作压力为0.1-0.5Mpa，温度为30～50℃，截留浓缩液，并用蒸馏水清洗，合并洗液与浓缩液，真空干燥或冷冻干燥，得到漆籽多糖，以硫酸-苯酚法测定粗多糖的含量，多糖含量大于91.5%。

实施例 4

将缅红漆树籽粕干燥、粉碎，按质量比1:20(g:mL)，加入石油醚，于50℃加热回流提取3次，每次5h，过滤，滤液合并，于50℃下减压蒸发回收溶剂，滤渣经过减压干燥，得到脱脂籽粕；将脱脂籽粕，按质量体积比为1:15(g:mL)，加入蒸馏水，减压回流提取3次，每次1h，真空度为0.04~0.1Mpa，过滤，滤液合并，于50℃下减压浓缩，再经真空干燥，得到粗提物；浓缩液按体积比1:20（v/v）的比例加入无水乙醇，进行醇沉，离心得到沉淀，沉淀再经***、丙酮和乙醇洗涤2次，再进行干燥，即为漆树籽粕粗多糖，以硫酸-苯酚法测定粗多糖的含量，多糖含量为32.5%，收率为6.2%；将漆树籽粕粗多糖，加入蒸馏水，配制成1mg/mL的多糖溶液，采用DM-2树脂进行脱色纯化，加入吸附填料的量与多糖溶液的体积比为1:30(g:mL)，放入震荡器中，转速为150rpm/min，温度为30℃，时间1h，然后过滤，除去吸附填料，滤液进行冷冻干燥，即为漆树籽粕多糖提取物，以硫酸-苯酚法测定粗多糖的含量，多糖含量62.3%。采用陶瓷膜和超滤膜技术对漆树籽粕多糖提取物进一步分级纯化，陶瓷膜平均孔径为0.1-1μm，超滤膜截留分子量范围为5000-100000D，工作压力为0.1-0.5Mpa，温度为30～50℃，截留浓缩液，并用蒸馏水清洗，合并洗液与浓缩液，真空干燥或冷冻干燥，得到漆籽多糖，以硫酸-苯酚法测定粗多糖的含量，多糖含量大于94.5%。

实施例5

将漆树籽粕干燥、粉碎，按质量比1:5~1:30(g:mL)，加入正己烷，于40～70℃加热回流提取2~3次，每次2h~10h，过滤，滤液合并，于40~60℃下减压蒸发回收溶剂，滤渣经过减压干燥，得到脱脂籽粕；将脱脂籽粕，按质量体积比为1:5~1:30(g:mL)，加入蒸馏水，超声波辅助提取2~3次，每次30min，超声功率为120~600W，过滤，滤液合并，于50~70℃下减压浓缩，再经真空干燥，得到粗提物；浓缩液按体积比1～10:30（v/v）的比例加入无水乙醇，进行醇沉，离心得到沉淀，沉淀再经***、丙酮和乙醇洗涤2~3次，再进行干燥，即为漆树籽粕粗多糖，以硫酸-苯酚法测定粗多糖的含量，多糖含量为30.2%，收率为5.21%；将漆树籽粕粗多糖，加入蒸馏水，配制成0.5～1mg/mL的多糖溶液，采用D941树脂进行脱色纯化，加入吸附填料的量与多糖溶液的体积比为1:20~50(g:mL)，放入震荡器中，转速为150～200rpm/min，温度为25～45℃，时间30min～6h，然后过滤，除去吸附填料，滤液进行真空或冷冻干燥，即为漆树籽粕多糖提取物，以硫酸-苯酚法测定粗多糖的含量，多糖含量大于62.3%。采用陶瓷膜和超滤膜技术对漆树籽粕多糖提取物进一步分级纯化，陶瓷膜平均孔径为0.1-1μm，超滤膜截留分子量范围为5000-100000D，工作压力为0.1-0.5Mpa，温度为30～50℃，截留浓缩液，并用蒸馏水清洗，合并洗液与浓缩液，真空干燥或冷冻干燥，得到漆籽多糖，以硫酸-苯酚法测定粗多糖的含量，多糖含量大于95.4%。

实施例6

将漆树籽粕干燥、粉碎，按质量比1:5~1:30(g:mL)，加入正己烷，于40～70℃加热回流提取2~3次，每次2h~10h，过滤，滤液合并，于40~60℃下减压蒸发回收溶剂，滤渣经过减压干燥，得到脱脂籽粕；将脱脂籽粕，按质量体积比为1:5~1:30(g:mL)，加入蒸馏水，微波辅助提取2~3次，每次30min~1h，微波功率为500～800W，过滤，滤液合并，于50~70℃下减压浓缩，再经冷冻干燥，得到粗提物；浓缩液按体积比1～10:30（v/v）的比例加入无水乙醇，进行醇沉，离心得到沉淀，沉淀再经***、丙酮和乙醇洗涤2~3次，再进行干燥，即为漆树籽粕粗多糖，以硫酸-苯酚法测定粗多糖的含量，多糖含量为29.2%，收率为6.01%；将漆树籽粕粗多糖，加入蒸馏水，配制成0.5～1mg/mL的多糖溶液，采用D101树脂进行脱色纯化，加入吸附填料的量与多糖溶液的体积比为1:20~50(g:mL)，放入震荡器中，转速为150～200rpm/min，温度为25～45℃，时间4h～6h，然后过滤，除去吸附填料，滤液进行真空或冷冻干燥，即为漆树籽粕多糖提取物，以硫酸-苯酚法测定粗多糖的含量，多糖含量大于63.5%。采用陶瓷膜和超滤膜技术对漆树籽粕多糖提取物进一步分级纯化，陶瓷膜平均孔径为0.1-1μm，超滤膜截留分子量范围为5000-100000D，工作压力为0.1-0.5Mpa，温度为30～50℃，截留浓缩液，并用蒸馏水清洗，合并洗液与浓缩液，真空干燥或冷冻干燥，得到漆籽多糖，以硫酸-苯酚法测定粗多糖的含量，多糖含量大于93.2%。

实施例7

将缅红漆树籽粕干燥、粉碎，按质量比1:20(g:mL)，加入石油醚，于50℃加热回流提取3次，每次5h，过滤，滤液合并，于50℃下减压蒸发回收溶剂，滤渣经过减压干燥，得到脱脂籽粕；将脱脂籽粕，按质量体积比为1:15(g:mL)，加入蒸馏水，减压回流提取3次，每次1h，真空度为0.04~0.1Mpa，过滤，滤液合并，于50℃下减压浓缩，再经真空干燥，得到粗提物；浓缩液按体积比1:20（v/v）的比例加入无水乙醇，进行醇沉，离心得到沉淀，沉淀再经***、丙酮和乙醇洗涤2次，再进行干燥，即为漆树籽粕粗多糖，以硫酸-苯酚法测定粗多糖的含量，多糖含量为32.5%，收率为6.2%；将漆树籽粕粗多糖，加入蒸馏水，配制成1mg/mL的多糖溶液，采用D845树脂进行脱色纯化，加入吸附填料的量与多糖溶液的体积比为1:30(g:mL)，放入震荡器中，转速为150rpm/min，温度为30℃，时间6h，然后过滤，除去吸附填料，滤液进行冷冻干燥，即为漆树籽粕多糖提取物，以硫酸-苯酚法测定粗多糖的含量，多糖含量62.8%。采用陶瓷膜和超滤膜技术对漆树籽粕多糖提取物进一步分级纯化，陶瓷膜平均孔径为0.1-1μm，超滤膜截留分子量范围为5000-100000D，工作压力为0.1-0.5Mpa，温度为30～50℃，截留浓缩液，并用蒸馏水清洗，合并洗液与浓缩液，真空干燥或冷冻干燥，得到漆籽多糖，以硫酸-苯酚法测定粗多糖的含量，多糖含量大于94.2%。

实施例9

将漆树籽粕干燥、粉碎，按质量比1:20(g:mL)，加入石油醚，于50℃加热回流提取3次，每次5h，过滤，滤液合并，于50℃下减压蒸发回收溶剂，滤渣经过减压干燥，得到脱脂籽粕；将脱脂籽粕，按质量体积比为1:15(g:mL)，加入蒸馏水，减压回流提取3次，每次1h，真空度为0.04~0.1Mpa，过滤，滤液合并，于50℃下减压浓缩，再经真空干燥，得到粗提物；浓缩液按体积比1:20（v/v）的比例加入无水乙醇，进行醇沉，离心得到沉淀，沉淀再经***、丙酮和乙醇洗涤2次，再进行干燥，即为漆树籽粕粗多糖，以硫酸-苯酚法测定粗多糖的含量，多糖含量为32.5%，收率为6.2%；将漆树籽粕粗多糖，加入蒸馏水，配制成1mg/mL的多糖溶液，采用D296树脂进行脱色纯化，加入吸附填料的量与多糖溶液的体积比为1:30(g:mL)，放入震荡器中，转速为200rpm/min，温度为45℃，时间2h，然后过滤，除去吸附填料，滤液进行冷冻干燥，即为漆树籽粕多糖提取物，以硫酸-苯酚法测定粗多糖的含量，多糖含量63.8%。采用陶瓷膜和超滤膜技术对漆树籽粕多糖提取物进一步分级纯化，陶瓷膜平均孔径为0.1-1μm，超滤膜截留分子量范围为5000-100000D，工作压力为0.1-0.5Mpa，温度为30～50℃，截留浓缩液，并用蒸馏水清洗，合并洗液与浓缩液，真空干燥或冷冻干燥，得到漆籽多糖，以硫酸-苯酚法测定粗多糖的含量，多糖含量大于95.4%。

实施例10

准确称取Vc 50 mg于100mL容量瓶中，用蒸馏水定溶，配制成0.5 mg/mL的溶液，然后一次稀释不通过倍数得到六个浓度的溶液，分别为0.1 mg/mL，0.05 mg/mL，0.01 mg/mL，0.005 mg/mL，0.002 mg/mL，0.001 mg/mL，0.0005 mg/mL，用于后续的测定。

准确称取漆树籽粕多糖提取物0.5 g于100 mL容量瓶中，用蒸馏水定溶，配制成5mg/mL，的水溶液，然后稀释不同倍数得到六个浓度的溶液，分别为1 mg/mL，0.5 mg/mL，0.1mg/mL，0.05 mg/mL，0.01 mg/mL，0.005mg/mL用于后续测定。

A 漆树籽粕多糖提取物对ABTS自由基的清除作用

储备液的制作：将7.4mmol/L的ABTS溶液与2.6mmol/L的过硫酸钾溶液等量混合，在黑暗处常温静置反应15h，然后取1mL溶液用甲醇稀释，得到溶液在732nm处的吸光度为0.74。

取不同浓度的漆树多酚提取物和多糖提取物150μL加入2.85mL的上述储备液，混合均匀，在黑暗处常温静置反应2h，在732nm处测吸光度，计为A1。以空白溶剂作为空白对照，在黑暗处常温静置反应2h，在732nm处测吸光度，计为A2。

ABTS清除率=（（A2-A1）/A2）×100%

式中，A1—待测样品、ABTS在样品溶剂存在体系存在下的吸光度。A2—ABTS在样品溶剂存在下的吸光度。

B漆树籽粕多糖提取物对羟自由基的清除作用

将1mL的多糖溶液与1mL浓度为9mmol/L的FeSO₄溶液及1mL浓度为9mmol/L水杨酸乙醇溶液及1mL浓度为8.8mmol/L的H₂O₂溶液在37℃下水浴30min，于510nm下测吸光值A ₁；分别用蒸馏水代替多糖溶液、1mL多糖溶液与3mL蒸馏水混合，在相同条件下测吸光值A ₀与A ₂，壶瓶枣多糖对羟基自由基的清除率按式计算，以V_C作为对照。

清除率=((A0-(A1-A2))/A0) ×100%

试验数据如图1和图2所示。

由图1可见，多糖对ABTS自由基的清除能力以清除率表示，清除率越高，说明多糖的抗氧化作用越强。0.1 mg/mL的漆树籽粕多糖提取物和Vc对ABTS自由基抑制率分别为50%和79.2%，0.5mg/mL的漆树籽粕多糖提取物和Vc对ABTS自由基抑制率分别为75.3% 和94.5%，其对ABTS自由基的IC50值Vc的浓度为0.025mg/mL，漆树籽粕多糖提取物的浓度为0.1mg/mL。由图2可见，0.1 mg/mL的漆籽多糖和Vc对羟自由基抑制率分别为52.5%和70.5%，0.5mg/mL的漆籽多糖和Vc对羟自由基抑制率分别为73.8%和90.5%，其对羟自由基的IC50值Vc的浓度为0.05mg/mL，漆树籽粕多糖提取物的浓度为0.95mg/mL。

Claims

1.一种具有抗氧化活性的漆籽多糖的制备方法，其特征在于由以下步骤组成：

第一步

将漆树籽粕干燥、粉碎，按质量体积比1:5~1:30 g/mL，加入石油醚或正己烷，于40～70℃加热回流提取2~3次，每次2h~10h，过滤，滤液合并，于40~60℃下减压蒸发回收溶剂，滤渣经过减压干燥，得到脱脂籽粕；

第二步

将脱脂籽粕，按质量体积比为1:5~1:30 g/mL，加入蒸馏水，常温或加热回流提取、或减压回流提取、或超声波辅助提取或微波辅助提取2~3次，每次30min~10h，过滤，滤液合并，于50~70℃下减压浓缩，再经真空干燥或冷冻干燥，得到粗提物；浓缩液按体积比1～10:30 v/v的比例加入无水乙醇，进行醇沉，离心得到沉淀，沉淀再经***、丙酮和乙醇洗涤2~3次，再进行干燥，即为漆树籽粕粗多糖，以硫酸-苯酚法测定粗多糖的含量，多糖含量为28%～32.5%，收率为4.4～6.2%；

第三步

将漆树籽粕粗多糖，加入蒸馏水，配制成0.5～1 mg/mL的多糖溶液，采用不同吸附填料进行脱色纯化，加入吸附填料的量与多糖溶液的体积比为1:20~50 g/mL，放入震荡器中，转速为150～200rpm/min，温度为25～45℃，时间30min～6h，然后过滤，除去吸附填料，滤液进行真空或冷冻干燥，即为漆树籽粕多糖提取物，以硫酸-苯酚法测定粗多糖的含量，多糖含量大于60%；

第四步

第五步

2.根据权利要求1所述一种具有抗氧化活性的漆籽多糖的制备方法，其特征在于第一步中的漆树籽粕是来源于野漆树、漆树和缅红漆品种的一种漆籽经过压榨后的籽粕。

3.根据权利要求1所述一种具有抗氧化活性的漆籽多糖的制备方法，其特征在于第二步中加热回流提取的温度为50~90℃，减压回流提取的真空度为0.04~0.1MPa，温度50~70℃，超声辅助提取的功率为120~600W，温度为40~60℃，微波辅助提取的功率为500~800W，温度50~70℃。

4.根据权利要求1所述一种具有抗氧化活性的漆籽多糖的制备方法，其特征在于第三步中的吸附填料选自颗粒活性炭、860021、DM-2、D941、D101、D845、D296中的一种或几种。