CN104958341B - 一种党参茎叶发酵提取物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种党参茎叶发酵提取物及其制备方法和应用，其是将鲜党参茎叶经枯草芽孢杆菌在特点条件下进行发酵后经特定的提取方法进行提取的，该提取物对禽流感具有显著的防治效果。本发明填补了党参茎叶发酵领域的空白，对党参茎叶进行了充分、合理、有效的利用，同时提供了一种能有效防治禽流感的提取物，具有良好的经济和社会效益，对推进中药现代化发展具有重要意义。
Description
技术背景
本发明涉及中药加工及生物发酵领域，具体涉及一种党参茎叶发酵提取物及其制备方法和应用。
背景技术
党参作为中国传统的补益药为人们所熟知，中药领域中所用的党参一般是指桔梗科党参属植物的根部，其味甘，性平，有补中益气、止渴、健脾益肺、养血生津之功效，在中药领域中已得到了广泛的应用。相比于党参根部的广泛应用，对党参茎叶的研究则相对较少。过去党参茎叶常被废弃掉，近年来已有报道对其成分进行了研究，发现其中含有挥发油、多种氨基酸、常量及微量元素、生物碱、淀粉等，具有一定的应用价值。在其应用方面，目前大部分是将其作为饲料，主要是对饲养动物具有保健、增重等作用。
随着中药现代化的发展，生物发酵已越来越多地应用在中药提取领域中，中药发酵是利用微生物强大的分解转化物质的能力，产生丰富的次生代谢产物，从而达到浓缩有效成分，改变药性，提高疗效，降低毒副作用，扩大适应症的目的。由于中药发酵在中药现代化研究开发方面具有的独特优势，因此发展前景广阔。目前并未见党参茎叶发酵的相关报道。
发明内容
本发明的目的是根据以上技术现状，提供一种党参茎叶发酵提取物，并进一步提供其制备方法和应用。
本发明采用如下技术方案：
技术方案一：
一种党参茎叶发酵提取物，其是采用如下方法制备的：
（1）将鲜党参茎叶洗净、烘干，粉碎至20-80目，加入其质量0.5-2%的枯草芽孢杆菌粉，在30-38℃下发酵24-48h；
（2）发酵结束后，加入发酵后物料重量2-5倍的50-70%（w/w）乙醇水溶液，在20-45℃、20-80KHz下连续超声逆流提取0.5-1h，固液分离，过滤提取液；
（3）取步骤（2）中的滤液，浓缩至原体积的5-8%，得浓缩液；
（4）将上述浓缩液真空干燥，得所述党参茎叶发酵提取物。
具体地，步骤（1）中所述枯草芽孢杆菌粉的含菌量为1000亿 cfu/ 克 。
进一步地，步骤（2）中，过滤得到的滤渣在相同条件下将所述连续超声逆流提取、固液分离和过滤步骤重复1-3次，合并滤液待用。
具体地，步骤（4）中真空干燥的条件为温度40~50℃，真空度为 0.01~0.2MPa。
技术方案二：
上述党参茎叶发酵提取物在防治禽流感中的应用。
技术方案三：
一种党参茎叶发酵提取物的制备方法，其步骤如下：
（1）将鲜党参茎叶洗净、烘干，粉碎至20-80目，加入其质量0.5-2%的枯草芽孢杆菌粉，在30-38℃下发酵24-48h；
（2）发酵结束后，加入发酵后物料重量2-5倍的50-70%（w/w）乙醇水溶液，在20-45℃、20-80KHz下连续超声逆流提取0.5-1h，过滤；
（3）取步骤（2）中的滤液，浓缩至原体积的5-8%，得浓缩液；
（4）将上述浓缩液真空干燥，得所述党参茎叶发酵提取物。
具体地，步骤（1）中所述枯草芽孢杆菌粉的含菌量为1000亿 cfu/ 克 。
进一步地，步骤（2）中，过滤得到的滤渣在相同条件下将所述连续超声逆流提取、固液分离和过滤步骤重复1-3次，合并滤液待用。
具体地，步骤（4）中真空干燥的条件为温度40~50℃，真空度为 0.01~0.2MPa。
本发明通过用枯草芽孢杆菌对党参茎叶进行发酵，并对发酵产物进行提取，意外发现得到的提取物对禽流感具有显著的防治效果，可能是枯草芽孢杆菌对党参茎叶中的成分进行代谢后产生了某种或某些活性物质，并且这些活性物质通过本发明特定的提取方法被提取了出来。
本发明填补了党参茎叶发酵领域的空白，对党参茎叶进行了充分、合理、有效的利用，同时提供了一种能有效防治禽流感的提取物，具有良好的经济和社会效益，对推进中药现代化发展具有重要意义。
具体实施方式
下面通过具体实施例来对本发明的技术方案进行详细说明。
实施例1
一种党参茎叶发酵提取物，其是采用如下方法制备的：
（1）将鲜党参茎叶洗净、烘干，粉碎至20目，加入其质量0.5%的枯草芽孢杆菌粉（含菌量为1000亿 cfu/ 克 ），在38℃下发酵24h；
（2）发酵结束后，加入发酵后物料重量2倍的60%（w/w）乙醇水溶液，在45℃、20KHz下连续超声逆流提取0.5h，过滤，滤渣再加入其2倍重量的50%（w/w）乙醇水溶液，相同条件下连续超声逆流提取0.5h，过滤，滤渣再重复提取一遍，合并三次提取的滤液；
（3）取步骤（2）中的滤液，浓缩至原体积的5%，得浓缩液；
（4）将上述浓缩液在40~50℃，真空度为 0.01~0.2MPa下真空干燥，得所述党参茎叶发酵提取物。
实施例2
一种党参茎叶发酵提取物的制备方法，其步骤如下：
（1）将鲜党参茎叶洗净、烘干，粉碎至20目，加入其质量0.5%的枯草芽孢杆菌粉（含菌量为1000亿 cfu/ 克 ），在38℃下发酵24h；
（2）发酵结束后，加入发酵后物料重量2倍的60%（w/w）乙醇水溶液，在45℃、20KHz下连续超声逆流提取0.5h，过滤，滤渣再加入其2倍重量的50%（w/w）乙醇水溶液，相同条件下连续超声逆流提取0.5h，过滤，滤渣再重复提取一遍，合并三次提取的滤液；
（3）取步骤（2）中的滤液，浓缩至原体积的5%，得浓缩液；
（4）将上述浓缩液在40~50℃，真空度为 0.01~0.2MPa下真空干燥，得所述党参茎叶发酵提取物。
实施例3
一种党参茎叶发酵提取物，其是采用如下方法制备的：
（1）将鲜党参茎叶洗净、烘干，粉碎至60目，加入其质量2%的枯草芽孢杆菌粉（含菌量为1000亿 cfu/ 克 ），在30℃下发酵48h；
（2）发酵结束后，加入发酵后物料重量3倍的70%（w/w）乙醇水溶液，在20℃、80KHz下连续超声逆流提取0.5h，过滤，滤渣再加入其3倍重量的50%（w/w）乙醇水溶液，相同条件下连续超声逆流提取0.5h，过滤，合并两次提取的滤液；
（3）取步骤（2）中的滤液，浓缩至原体积的7%，得浓缩液；
（4）将上述浓缩液在40~50℃，真空度为 0.01~0.2MPa下真空干燥，得所述党参茎叶发酵提取物。
实施例4
一种党参茎叶发酵提取物的制备方法，其步骤如下：
（1）将鲜党参茎叶洗净、烘干，粉碎至60目，加入其质量2%的枯草芽孢杆菌粉（含菌量为1000亿 cfu/ 克 ），在30℃下发酵48h；
（2）发酵结束后，加入发酵后物料重量3倍的70%（w/w）乙醇水溶液，在20℃、80KHz下连续超声逆流提取0.5h，过滤，滤渣再加入其3倍重量的50%（w/w）乙醇水溶液，相同条件下连续超声逆流提取0.5h，过滤，合并两次提取的滤液；
（3）取步骤（2）中的滤液，浓缩至原体积的7%，得浓缩液；
（4）将上述浓缩液在40~50℃，真空度为 0.01~0.2MPa下真空干燥，得所述党参茎叶发酵提取物。
实施例5
一种党参茎叶发酵提取物，其是采用如下方法制备的：
（1）将鲜党参茎叶洗净、烘干，粉碎至80目，加入其质量1%的枯草芽孢杆菌粉（含菌量为1000亿 cfu/ 克 ），在35℃下发酵36h；
（2）发酵结束后，加入发酵后物料重量5倍的50%（w/w）乙醇水溶液，在30℃、50KHz下连续超声逆流提取1h，过滤；
（3）取步骤（2）中的滤液，浓缩至原体积的8%，得浓缩液；
（4）将上述浓缩液在40~50℃，真空度为 0.01~0.2MPa下真空干燥，得所述党参茎叶发酵提取物。
实施例6
一种党参茎叶发酵提取物的制备方法，其步骤如下：
（1）将鲜党参茎叶洗净、烘干，粉碎至80目，加入其质量1%的枯草芽孢杆菌粉（含菌量为1000亿 cfu/ 克 ），在35℃下发酵36h；
（2）发酵结束后，加入发酵后物料重量5倍的50%（w/w）乙醇水溶液，在30℃、50KHz下连续超声逆流提取1h，过滤；
（3）取步骤（2）中的滤液，浓缩至原体积的8%，得浓缩液；
（4）将上述浓缩液在40~50℃，真空度为 0.01~0.2MPa下真空干燥，得所述党参茎叶发酵提取物。
对比例1
用党参替换党参茎叶，其余完全与实施例1相同。
对比例2
用酵母菌粉替换枯草芽孢杆菌，其余完全与实施例1相同。
对比例3
去掉用枯草芽孢杆菌发酵的步骤，其余完全与实施例1相同。
效果例1：实施例1及对比例1-3制得的提取物对H3N2禽流感的防治试验
分别采用实施例1以及对比例1-3制得的提取物进行H3N2禽流感防治试验，具体方法如下：
取50日龄优质黄鸡200只，随机分成五组，每组40只。将含H3N2禽流感病毒的鸡胚尿囊液稀释至0.5×10-5，每只鸡腹部注射0.2ml接种，接种后当天各组给药，1~4组分别每日喂实施例1、对比例1、对比例2、对比例3的提取物10mg（用生理盐水溶解），5组喂等量生理盐水作为对照组，连喂8天，结果见表1。
表1
由表1可见，本发明通过枯草芽孢杆菌发酵后的党参茎叶提取物对H3N2禽流感病毒具有意外的防治效果，比用党参根发酵、用酵母菌发酵以及不发酵等方法的防治效果均要好。
效果例2：实施例1及对比例1-3制得的提取物对H5N1禽流感的防治试验
某鸡场养殖的蛋鸡大量出现精神萎靡、咳嗽、流泪、产蛋率下降、拉灰绿色稀便现象，经检验确认已感染H5N1禽流感病毒。将该鸡场的1000只鸡随机分成5组，每组200只，各组之间相互隔离，1-4组分别每日喂实施例1、对比例1、对比例2、对比例3的提取物15mg（用生理盐水溶解），5组喂等量生理盐水作为对照组，连喂14天，统计每天鸡只的死亡情况，结果见表2。
表2
由表2可见，本发明提取物对H5N1型禽流感也具有显著的防治效果。
效果例3：实施例1及对比例1-3制得的提取物对H9N2禽流感的防治试验
在H9N2禽流感爆发期，对确认没有感染H9N2禽流感病毒的500只种鸡进行预防试验，将该500只种鸡随机分成5组，每组100只，各组之间相互隔离，1-4组分别每日喂实施例1、对比例1、对比例2、对比例3的提取物5mg（用生理盐水溶解），5组喂等量生理盐水作为对照组，H9N2禽流感爆发期结束后，统计各组感染病毒的鸡只数量，结果见表3。
表3
由表3可见，本发明提取物对H9N2禽流感具有显著有效的预防作用。
以上仅为本发明的较佳实施例，并非本发明可行实施方式的穷举，凡在本发明精神和原则下进行的不具有创造性的改变均应理解为在本发明的保护范围内。
Claims (6)
1.一种党参茎叶发酵提取物，其特征在于其是采用如下方法制备的：
（1）将鲜党参茎叶洗净、烘干，粉碎至20-80目，加入其质量0.5-2%的枯草芽孢杆菌粉，在30-38℃下发酵24-48h；所述枯草芽孢杆菌粉的含菌量为1000 亿 cfu / 克 ；
（2）发酵结束后，加入发酵后物料重量2-5倍的50-70% w/w乙醇水溶液，在20-45℃、20-80KHz下连续超声逆流提取0.5-1h，过滤；
（3）取步骤（2）中的滤液，浓缩至原体积的5-8%，得浓缩液；
（4）将上述浓缩液真空干燥，得所述党参茎叶发酵提取物。
2.根据权利要求1所述的一种党参茎叶发酵提取物，其特征在于：步骤（2）中，过滤得到的滤渣在相同条件下将所述连续超声逆流提取、固液分离和过滤步骤重复1-3次，合并滤液待用。
3.根据权利要求1所述的一种党参茎叶发酵提取物，其特征在于：步骤（4）中真空干燥的条件为温度40~50℃，真空度为 0.01~0.2MPa。
4.一种党参茎叶发酵提取物的制备方法，其特征在于其步骤如下：
（1）将鲜党参茎叶洗净、烘干，粉碎至20-80目，加入其质量0.5-2%的枯草芽孢杆菌粉，在30-38℃下发酵24-48h；所述枯草芽孢杆菌粉的含菌量为1000亿 cfu / 克；
（2）发酵结束后，加入发酵后物料重量2-5倍的50-70% w/w乙醇水溶液，在20-45℃、20-80KHz下连续超声逆流提取0.5-1h，过滤；
（3）取步骤（2）中的滤液，浓缩至原体积的5-8%，得浓缩液；
（4）将上述浓缩液真空干燥，得所述党参茎叶发酵提取物。
5.根据权利要求4所述的一种党参茎叶发酵提取物的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，过滤得到的滤渣在相同条件下将所述连续超声逆流提取、固液分离和过滤步骤重复1-3次，合并滤液待用。
6.根据权利要求4所述的一种党参茎叶发酵提取物的制备方法，其特征在于：步骤（4）中真空干燥的条件为温度40~50℃，真空度为 0.01~0.2MPa。
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