CN104849119A - 鸡肉中8种糖皮质激素类药物残留检测的前处理方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种鸡肉中8种糖皮质激素药物残留检测的前处理方法,该方法包括待测样品的称量、液液萃取、旋转蒸发等操作；所用仪器包括恒温振荡器、离心机等；用本前处理方法制备出的样品溶液可以直接用液相色谱-串联质谱法进行检测。该前处理方法与现有方法相比,具有操作简单有效、耗时少、成本低、重现性好等优点，具有很强的可操作性，有望在环保、商检及出入境检验检疫等行业大规模推广应用，具有显著的经济效益。

Description

鸡肉中8种糖皮质激素类药物残留检测的前处理方法

技术领域

本发明属于分析化学的前处理领域，更具体涉及一种鸡肉中8种糖皮质激素检测的前处理方法。

背景技术

糖皮质激素属于类固醇激素（甾体激素），糖皮质激素在体内作用广泛，不仅为糖、蛋白质、脂肪代谢的调控所必需，且具有调节钾、钠和水代谢的作用，对维持机体内外环境平衡起重要作用。

糖皮质激素属于畜产品常用的药物，它常被用于治疗家畜的炎症反应、免疫性疾病、牛的酮病等。合成类糖皮质激素普遍的非法用途是用于增加家畜的饲料摄入量从而使其达到增重的目的。畜牧业中使用该激素已有60年的历史，在特定的饲养条件下，它可以提高饲料转化率，但同时也会造成激素在食品中的残留，从而对人类健康构成危险，如果长期摄入该类药物会导致内分泌紊乱和性早熟，大大增加致癌、致畸的风险。作为生长促进剂已被欧盟禁用并且建立最大残留限量的有***、倍他米松（肝脏：2μg/kg；肌肉：0.75μg/kg；牛奶：0.3μg/L），甲基***龙（肌肉，脂肪，肝脏，肾脏：10μg/kg）及***龙（肌肉，脂肪：4μg/kg；牛奶：6μg/L；肝脏，肾脏：10μg/kg）。2008年，国家农业部将“动物源性食品中糖皮质激素类药物多残留检测”立项，该标准同时测定8种糖皮质激素，规定检出限***、***龙、甲基***龙、***、倍他米松（肌肉，鸡蛋：0.5μg/kg，肝脏：1μg/kg；牛奶：0.2μg/L），倍氯米松、氟氢可的松（肌肉，鸡蛋：1μg/kg，肝脏：2μg/kg；牛奶：0.4μg/L），氢化可的松（肌肉，鸡蛋：2μg/kg，肝脏：4μg/kg；牛奶：0.8μg/L）。

鉴于上述原因，有必要研究糖皮质激素多残留的有效检测方法，达到有效监控其在食品中残留，减少对人类健康的危害。现阶段对于糖皮质激素多残留的检测方法多样，但都包含了样品前处理过程。前处理过程包括液液萃取、旋转蒸发、固相萃取、氮气吹干等步骤。前处理过程中多需要使用有机溶剂反复多次萃取，之后使用硅胶柱等固相萃取柱除去杂质和油脂的干扰，洗脱液还得氮气吹干，最后才能定容上机测定。此类前处理技术的关键缺点是反复萃取损失大、处理过程耗时长、经济成本高、过程繁琐。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种操作简单、耗时短的鸡肉中8种糖皮质激素类药物检测的前处理方法,经该方法处理后的待测样品能够直接用液相色谱-串联质谱法进行检测。

本发明的鸡肉中8种糖皮质激素类药物残留检测的前处理方法包括以下步骤：

（1）准确称取样品2.00 g，精确至0.01 g，置于50 mL离心管中，加入15 mL乙酸乙酯，漩涡混合，4000 r/min离心15 min，移取乙酸乙酯层；于残渣中加入0.1 mol/L氢氧化钠溶液10 mL，混匀，加乙酸乙酯20 mL，漩涡混合，4000 r/min离心15 min，移取乙酸乙酯层；合并两次提取液置于鸡心瓶中，40 ℃旋转蒸至近干；

（2）往鸡心瓶中加入2 mL 体积分数为10%~50%的乙腈水溶液和2 mL正己烷，漩涡混合，静置分层，移取下层溶液，过0.22 μm微孔滤膜，所得滤液即可上机测试。

所述鸡肉样品中8种糖皮质激素类药物残留包括***、***龙、氢化可的松、甲基***、***、倍他米松、倍氯米松、氟氢可的松乙酸盐。

步骤（2）中乙腈水溶液的体积分数为20%。

本发明的前处理方法与现有国标方法农业部1031号公告-2-2008相比，具有操作简单有效、耗时短、成本低、重现性好等优点，具有很强的可操作性。

本发明的显著优点为:

1)    目前报导的大部分糖皮质激素类药物的提取方法是针对牛奶、化妆品、饲料等而设计，而本方法是针对鸡肉中8种糖皮质激素类药物残留检测的一种提取方法；

2)    目前报道的前处理方法都需要使用Silica固相萃取柱将8种糖皮质激素类药物从基质中分离出来净化，而本方法不需要使用固相萃取柱从而节省了前处理成本、简化了分离步骤、节省了分析时间；

3)    国标方法采用氮气吹干的方法进行浓缩富集，耗时较长，而本方法采用最佳分配比的溶剂20%乙腈/水和正己烷达到既能出去杂质、油脂的目的，又能很好得将目标物溶解出来。本方法耗时少，操作方便，有机提取剂用量少。

附图说明

 图1为本发明方法的流程图。

具体实施方式

本发明用下列实施例来进一步说明本发明，但本发明的保护范围并不限于下列实施例。

按照本发明的发明内容实施本发明，所需试剂溶液的配制方法如下：

0.1 mol/L氢氧化钠溶液：4.0 g氢氧化钠溶于1000 mL去离子水中，超声脱气；

20 %乙腈/水：200 mL乙腈与800 mL去离子水混匀，超声脱气；

标准工作液：取1.0 μg/mL标准中间液1.0 mL用20 %乙腈/水稀释至50 mL，得到20 μg/L工作液；

定量曲线：用20 %乙腈/水配置定量曲线标液，各个组分的浓度为0.0005 μg/mL、0.001 μg/mL、0.002 μg/mL、0.005 μg/mL、0.010 μg/mL；

基质混合校准曲线：分别取2.00 mL浓度为0.0005 μg/mL、0.001 μg/mL、0.002 μg/mL、0.005 μg/mL、0.010 μg/mL的标准溶液对空白样品进行洗脱，20 %乙腈/水溶液定容，过滤得基质混合校准溶液。

溶剂的最佳分配比见表1，本方法对空白鸡肉中8种糖皮质激素药物残留的检出限见表2，达到国内外检测的要求。

表1 溶剂的最佳分配比

确定了最佳分配比的溶剂让糖皮质激素类药物的前处理过程大大缩减，成本也大大降低，利用经乙腈饱和的正己烷既能达到去除油脂的目的，也减少了水分对提取过程的干扰，杂峰少、耗时短、检出限和回收率也能达到国标和进出口要求；

表2  8种糖皮质激素的加标回收率、相对标准偏差、最低检测限和最低定量限（n=6）

实施例1

以下实施例结合附图来叙述本发明的具体工作原理：

本发明所说的鸡肉中8种糖皮质激素药物残留检测的前处理方法的具体操作流程如附图1所示。包括液液萃取、旋转蒸发等操作。

具体步骤：

（1）准确称取样品2.00 g，精确至0.01 g，置于50 mL离心管中，加入15 mL乙酸乙酯，漩涡混合，4000 r/min离心15 min，移取乙酸乙酯层；于残渣中加入0.1 mol/L氢氧化钠溶液10 mL，混匀，加乙酸乙酯20 mL，漩涡混合，4000 r/min离心15 min，移取乙酸乙酯层；合并两次提取液置于鸡心瓶中，40 ℃旋转蒸至近干；

（2）往鸡心瓶中加入2 mL 20 %乙腈/水和5 mL正己烷，漩涡混合，静置分层，移取下层溶液，过0.22 μm微孔滤膜，所得滤液即可上机测试。

注意事项：

1、每批检测样做样顺序为试剂空白、样品空白、加标回收，样品。

2、加标回收：添加20 μg/L混合标准工作液1 mL，相当于0.20 mg/kg添加水平。空白鸡肉样品进行加标回收试验结果表明:在10 μg/kg添加水平时平均回收率在70 %-110 %左右。

3、初测时选用使用基质的任一样品加标、加标水平为10 μg/kg，复测做平行样、加标水平与初测值相当，样品浓度较高时减小称样量或提高标准曲线浓度，使检测值在曲线范围之内。

4、使用基质混合标准溶液、检测结果需校正回收率。

5、每次检测结果应与标准谱图对照，回收率应在质控范围内，如回收率超出质控范围时查找原因。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (3)

1.一种鸡肉中8种糖皮质激素类药物残留检测的前处理方法，其特征在于：具体包括以下步骤：

（1）准确称取鸡肉样品2.00 g，置于50 mL离心管中，加入15 mL乙酸乙酯，漩涡混合，4000 r/min离心15 min，移取乙酸乙酯层；于残渣中加入0.1 mol/L氢氧化钠溶液10 mL，混匀，加乙酸乙酯20 mL，漩涡混合，4000r/min离心15min，移取乙酸乙酯层；合并两次提取液置于鸡心瓶中，40℃旋转蒸至近干；

（2）往鸡心瓶中加入2 mL 体积分数为10%~50%的乙腈水溶液和2 mL正己烷，漩涡混合，静置分层，移取下层溶液，过0.22μm微孔滤膜，所得滤液即可上机测试。

2.根据权利要求1中所述的鸡肉中8种糖皮质激素类药物残留检测的前处理方法，其特征在于：所述鸡肉样品中8种糖皮质激素类药物残留包括***、***龙、氢化可的松、甲基***、***、倍他米松、倍氯米松、氟氢可的松乙酸盐。

3.根据权利要求1中所述的鸡肉中8种糖皮质激素类药物残留检测的前处理方法，其特征在于：步骤（2）中乙腈水溶液的体积分数为20%。