CN104844497A - 一种从紫金牛根中提取活性酸的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种从紫金牛根中提取活性酸的方法，所述方法包括如下步骤：S1：制备紫金牛根粉末；S2：制备多组分复合提取液；S3：粗品的制备；S4：粗品精制；S5：纯化分离。所述方法通过多种提取工艺、参数、要素的综合选择和组合，从而使得各个要素之间取得了最好的协同效果，能够以高产率和高纯度而得到目的产物，使得原料利用率达到了最大化，在工业上尤其是植物活性成分提取技术领域具有良好的应用潜力和工业化前景。

Description

一种从紫金牛根中提取活性酸的方法
技术领域
本发明涉及一种从植物中提取活性成分的方法，更具体地涉及一种从紫金牛根中提取一种活性酸的方法，属于植物活性成分提取技术领域。
背景技术
在植物提取领域，从植物中提取活性成分已经成为目前药物领域中寻找活性成分的一种重要方法，例如植物中常见的活性酸，如吡咯酸衍生物就是一种常见的活性酸，而4-(2-甲酰基-5-羟甲基吡咯-1-基)丁酸就是一种具有多种药物活性功能的吡咯酸物质，其具有多种生物活性乳保护肝脏等，它的化学结构式如下：
正是由于该物质的如此生物活性，人们对其提取方法进行了大量的深入研究，并取得了一定的研究成果，具体如下：
戚中杰等人(“猫爪草中吡咯丁酸的含量测定研究”,中国药学杂志,2012,47(2),101-103)公开了一种从毛莨科植物猫爪草中提取上述吡咯酸的方法。
Chin Young-Won等人(“Hepatoprotective Pyrrole Derivatives of Lyciumchinese Fruits”,Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters,2003,13,79-81)公开了一种从茄科植物枸杞中提取上述吡咯酸类物质的方法，通过复杂的工艺处理，鉴定出其中一种物质就是上述吡咯酸。
中国专利申请CN103073479A报道了从十字花科植物芜青中分离吡咯衍生物的方法，得到了一定含量的上述吡咯酸化合物。
如上所述，现有技术中已经公开了多种提取该活性酸的方法，但对于其新颖的提取和分离方法，仍存在迫切的需要，这也是目前该领域内的研究热点。
紫金牛，别名小青、矮茶，为紫金牛科、紫金牛属小灌木或亚灌木植物，紫金牛全株及根供药用，治肺结核、咯血、咳嗽、慢性气管炎效果很好，是中国民间常用的中草药。然而，现有技术中却尚未发现从紫金牛中提取吡咯酸类物质的方法或工艺见诸报道，其属于吡咯酸类物质提取领域的研究空白。
本发明人针对上述潜在缺陷，通过对植物品种和药效成分分布的多年研究，而开发了一种上述4-(2-甲酰基-5-羟甲基吡咯-1-基)丁酸的新型提取工艺，其首次实现了从紫金牛科植物紫金牛根中提取、分离出吡咯酸类成分的独特工艺，提供了该类物质的新型植物来源，充分满足了药物和药剂领域对吡咯酸类物质的普遍需求，具有极大的工业推广和市场应用前景。
发明内容
如上所述，为了拓宽吡咯酸类活性物质的提取来源，开发新颖的分离方法，本发明人经过大量的创造性劳动后，研发出了一种从紫金牛根中提取吡咯酸的新方法，从而完成了本发明。
更具体而言，本发明提供了一种从紫金牛根中提取活性酸(即4-(2-甲酰基-5-羟甲基吡咯-1-基)丁酸)的方法，所述方法包括如下步骤：
S1：制备紫金牛根粉末；
S2：制备多组分复合提取液；
S3：粗品的制备；
S4：粗品精制；
S5：纯化分离。
在本发明的所述方法中，所述步骤S1具体如下：
取质量含水量低于2％的干燥紫金牛根，用NaHCO3水溶液浸泡20-30小时，然后用去离子水洗涤2-3次，完全晾干后，粉碎、过100目筛，从而得到紫金牛根粉末(即原料)。
其中，在该步骤中，所述NaHCO3水溶液的质量百分比浓度为1-3％，例如可为1％、2％或3％。
其中，在该步骤中，用NaHCO3水溶液浸泡20-30小时，例如可浸泡20小时、25小时或30小时。
在本发明的所述方法中，所述步骤S2具体如下：
将丙酮、石油醚和2-甲基丁酸顺-3-己烯酯按照质量比2-3:1.5-2.5:1的比例混合，得到混合液；然后加入助提剂，室温下搅拌混合5-10分钟，即得多组分复合提取液。
其中，在该步骤中，丙酮、石油醚和2-甲基丁酸顺-3-己烯酯的质量比为2-3:1.5-2.5:1，其中的“2-3”例如可为2、2.5或3，其中的“1.5-2.5”例如可为1.5、2或2.5，这三者的质量比可为这些范围中任何具体点值的相互组合出的任何比例。
其中，在该步骤中，所述助提剂为1-丁基-3-甲基咪唑对甲基苯磺酸盐(CAS：410522-18-8)、1-丁基-3-甲基咪唑三氟乙酸盐(CAS：174899-94-6)或1-丁基-3-甲基咪唑二氰胺盐(CAS：448245-52-1)中的任意一种，优选为1-丁基-3-甲基咪唑二氰胺盐。
其中，在该步骤中，所述助提剂的用量为所述混合液(即丙酮、石油醚和2-甲基丁酸顺-3-己烯酯的混合液)重量的5-15％，优选为8-12％，最优选为10％。
在本发明的所述方法中，所述步骤S3具体如下：
将步骤S1的紫金牛根粉末加入到步骤S2的多组分复合提取液中，并升温至50-60℃，搅拌60-90分钟，过滤，得到滤液和滤渣；将滤渣重复进行该操作2-3次；合并所有的滤液，与等体积的去离子水混合，充分振荡，分离出有机层，减压浓缩，得到膏状物，即为粗品。
其中，在该步骤中，所述原料与多组分复合提取液的质量比为1:6-10，例如可为1:6、1:7、1:8、1:9或1:10。
其中，在该步骤中，“将滤渣重复进行该操作2-3次”意思是将滤渣重新加入到多组分复合提取液中，并升温至50-60℃，搅拌60-90分钟，过滤，再次得到滤液和滤渣；且每次滤渣与多组分复合提取液的质量比也为1:6-10，例如可为1:6、1:7、1:8、1:9或1:10。
在本发明的所述方法中，所述步骤S4具体如下：
将步骤S3得到的粗品加入到饱和NaHCO3水溶液中，振荡，使其充分溶解，然后抽滤，得到滤液和不溶物；将不溶物用温度为40-50℃的丙酮溶解，从而得到丙酮溶液；将上述滤液和丙酮溶液混合、充分振荡、静置，取上层有机相，减压浓缩，得到浸膏。
其中，在该步骤中，所述粗品与饱和NaHCO3水溶液的质量体积比为1:10-15g/ml，即将每1g粗品加入到10-15ml饱和NaHCO3水溶液中。
其中，在该步骤中，不溶物与丙酮的质量体积比为1:4-8g/ml，即每1g不溶物使用4-8ml丙酮进行溶解。
在本发明的所述方法中，所述步骤S5具体如下：
将步骤S4的浸膏溶解在乙酸乙酯中，然后倒入到色谱柱中，该色谱柱以体积百分比计，自上而下依次装填有30％中性硅胶、20％酸性硅胶和30％中性氧化铝；依次使用***、正己烷、质量百分比浓度为10％的正丁醇水溶液进行洗脱，收集正丁醇洗脱部分，减压浓缩，即得所述活性酸(即4-(2-甲酰基-5-羟甲基吡咯-1-基)丁酸)。
其中，在该步骤中，所述浸膏与色谱柱填料(即其中的中性硅胶、酸性硅胶和中性氧化铝)的质量比为1:100-150，例如可为1:100、1:120：、1:140或1:150。
其中，在该步骤中，将浸膏溶解在乙酸乙酯中，所述乙酸乙酯的量以恰好能够较浸膏溶解完全为宜，如此可方便后续的洗脱操作。
其中，在该步骤中，所述中性硅胶、酸性硅胶和中性氧化铝的数值是指填充体积占色谱柱总体积的比值，例如以30％中性硅胶为例，其填充体积为色谱柱体积的30％，所述酸性硅胶和中性氧化铝也具有同样含义。
其中，在该步骤中，所述中性硅胶和中性氧化铝均为非常公知的市售产品，例如其粒度可为200-300目，在此不再一一赘述。
其中，在该步骤中，所述酸性硅胶是按照如下步骤制得的：
I、将200目-300目的中性硅胶于500℃的马弗炉中焙烤3-5小时，焙烤结束后，降温至250-280℃并保温40-50分钟，最后冷却至室温，得到活化硅胶；
II、向活化硅胶中加入滴加加入质量百分比浓度为20-30％的硫酸水溶液，所述活化硅胶与硫酸水溶液中所含硫酸的质量比为1:0.02-0.06，然后充分振荡均匀，真空干燥完全，即得酸性硅胶。
其中，在该步骤中，洗脱所用的***、正己烷、质量百分比浓度为10％的正丁醇水溶液的体积分别为色谱柱填层体积(即中性硅胶、酸性硅胶和中性氧化铝的总体积)的2-3倍、2-2.5倍和0.6-1.2倍。
如上所述，本发明提供了一种从紫金牛根中提取活性酸的全新方法，所述方法通过多个要素的选择，如合适的提取操作、提取液的配制、洗脱液的选择、色谱柱的填充种类等等而取得了良好的提取效果，开拓了吡咯酸类物质的提取来源，并通过实验探索来对工艺条件进行优化而最终获得了提取的最佳工艺组合，具有广阔的工业应用价值。
具体实施方式
下面通过具体的实施例对本发明进行详细说明，但这些例举性实施方式的用途和目的仅用来例举本发明，并非对本发明的实际保护范围构成任何形式的任何限定，更非将本发明的保护范围局限于此。
制备例：酸性硅胶的制备
I、将200-300目的中性硅胶于500℃的马弗炉中焙烤4小时，焙烤结束后，降温至260℃并保温45分钟，最后冷却至室温，得到活化硅胶；
II、向活化硅胶中加入滴加加入质量百分比浓度为25％的硫酸水溶液，所述活化硅胶与硫酸水溶液中所含硫酸的质量比为1:0.04，然后充分振荡均匀，真空干燥完全，即得酸性硅胶。
除非另有说明，在如下实施例中使用的酸性硅胶均为该制备例得到的酸性硅胶。
实施例1
S1：制备紫金牛根粉末
取质量含水量低于2％的干燥紫金牛根，用质量百分比浓度为1％的NaHCO3水溶液浸泡20小时，然后用去离子水洗涤2-3次，完全晾干后，粉碎、过100目筛，从而得到紫金牛根粉末(即原料)；
S2：制备多组分复合提取液
将丙酮、石油醚和2-甲基丁酸顺-3-己烯酯按照质量比2:1.5:1的比例混合，得到混合液；然后加入为混合液重量5％的助提剂1-丁基-3-甲基咪唑二氰胺盐，室温下搅拌混合5分钟，即得多组分复合提取液；
S3：粗品的制备
将步骤S1的紫金牛根粉末加入到步骤S2的多组分复合提取液中(其中所述原料与多组分复合提取液的质量比为1:6)，并升温至50℃，搅拌90分钟，过滤，得到滤液和滤渣；将滤渣重复进行该操作2次；合并所有的滤液，与等体积的去离子水混合，充分振荡，分离出有机层，减压浓缩，得到膏状物，即为粗品；
S4：粗品精制
将步骤S3得到的粗品加入到饱和NaHCO3水溶液中(所述粗品与饱和饱和NaHCO3水溶液的质量体积比为1:10g/ml)，振荡，使其充分溶解，然后抽滤，得到滤液和不溶物；将不溶物用温度为40℃的丙酮溶解(该不溶物与丙酮的质量体积比为1:4g/ml)，从而得到丙酮溶液；将上述滤液和丙酮溶液混合、充分振荡、静置，取上层有机相，减压浓缩，得到浸膏；
S5：纯化分离
将步骤S4的浸膏溶解在适量乙酸乙酯中，然后倒入到色谱柱中，该色谱柱以体积百分比计，自上而下依次装填有30％中性硅胶、20％酸性硅胶和30％中性氧化铝(所述浸膏与色谱柱填料的质量比为1:100)；依次使用2倍色谱柱填层体积的***、2倍色谱柱填层体积的正己烷、0.6倍色谱柱填层体积的质量百分比浓度为10％的正丁醇水溶液进行洗脱，收集正丁醇洗脱部分，减压浓缩，即得所述活性酸(即4-(2-甲酰基-5-羟甲基吡咯-1-基)丁酸)，其纯度经过HPLC测定为99.3％，其核磁表征数据如下：
1H NMR(CD3OD,600MHz)δ：9.42(1H,s,H-6),6.96(1H,d,J＝4.2Hz,H-3),6.27(1H,d,J＝4.2Hz,H-4),4.57(2H,s,H-7),4.33(2H,t,J＝7.8Hz,H-4’),2.17(2H,t,J＝7.2Hz,H-2’),1.94(2H,dt,J＝7.8,7.2Hz,H-3’)。
13C NMR(CD3OD,150MHz)δ：181.2(s,C-1′),180.1(d,C-6),144.6(s,C-5),133.4(s,C-2),126.2(d,C-3),111.5(d,C-4),56.3(t,C-7),46.5(t,C-4′),35.6(t,C-2′),29.1(t,C-3′)。
经过计算，在本实施例中，每处理100g步骤S1中的紫金牛根粉末得到94.3mg上述活性酸。
实施例2
S1：制备紫金牛根粉末
取质量含水量低于2％的干燥紫金牛根，用质量百分比浓度为2％的NaHCO3水溶液浸泡25小时，然后用去离子水洗涤2-3次，完全晾干后，粉碎、过100目筛，从而得到紫金牛根粉末(即原料)；
S2：制备多组分复合提取液
将丙酮、石油醚和2-甲基丁酸顺-3-己烯酯按照质量比2.5:2:1的比例混合，得到混合液；然后加入为混合液重量10％的助提剂1-丁基-3-甲基咪唑二氰胺盐，室温下搅拌混合8分钟，即得多组分复合提取液；
S3：粗品的制备
将步骤S1的紫金牛根粉末加入到步骤S2的多组分复合提取液中(其中所述原料与多组分复合提取液的质量比为1:8)，并升温至55℃，搅拌75分钟，过滤，得到滤液和滤渣；将滤渣重复进行该操作3次；合并所有的滤液，与等体积的去离子水混合，充分振荡，分离出有机层，减压浓缩，得到膏状物，即为粗品；
S4：粗品精制
将步骤S3得到的粗品加入到饱和NaHCO3水溶液中(所述粗品与饱和饱和NaHCO3水溶液的质量体积比为1:15g/ml)，振荡，使其充分溶解，然后抽滤，得到滤液和不溶物；将不溶物用温度为50℃的丙酮溶解(该不溶物与丙酮的质量体积比为1:8g/ml)，从而得到丙酮溶液；将上述滤液和丙酮溶液混合、充分振荡、静置，取上层有机相，减压浓缩，得到浸膏；
S5：纯化分离
将步骤S4的浸膏溶解在适量乙酸乙酯中，然后倒入到色谱柱中，该色谱柱以体积百分比计，自上而下依次装填有30％中性硅胶、20％酸性硅胶和30％中性氧化铝(所述浸膏与色谱柱填料的质量比为1:120)；依次使用3倍色谱柱填层体积的***、2.2倍色谱柱填层体积的正己烷、1.2倍色谱柱填层体积的质量百分比浓度为10％的正丁醇水溶液进行洗脱，收集正丁醇洗脱部分，减压浓缩，即得所述活性酸(即4-(2-甲酰基-5-羟甲基吡咯-1-基)丁酸)，其纯度经过HPLC测定为98.9％，其核磁表征数据同实施例1。
经过计算，在本实施例中，每处理100g步骤S1中的紫金牛根粉末得到94.6mg上述活性酸。
实施例3
S1：制备紫金牛根粉末
取质量含水量低于2％的干燥紫金牛根，用质量百分比浓度为3％的NaHCO3水溶液浸泡30小时，然后用去离子水洗涤2-3次，完全晾干后，粉碎、过100目筛，从而得到紫金牛根粉末(即原料)；
S2：制备多组分复合提取液
将丙酮、石油醚和2-甲基丁酸顺-3-己烯酯按照质量比3:2.5:1的比例混合，得到混合液；然后加入为混合液重量15％的助提剂1-丁基-3-甲基咪唑二氰胺盐，室温下搅拌混合10分钟，即得多组分复合提取液；
S3：粗品的制备
将步骤S1的紫金牛根粉末加入到步骤S2的多组分复合提取液中(其中所述原料与多组分复合提取液的质量比为1:10)，并升温至60℃，搅拌60分钟，过滤，得到滤液和滤渣；将滤渣重复进行该操作3次；合并所有的滤液，与等体积的去离子水混合，充分振荡，分离出有机层，减压浓缩，得到膏状物，即为粗品；
S4：粗品精制
将步骤S3得到的粗品加入到饱和NaHCO3水溶液中(所述粗品与饱和饱和NaHCO3水溶液的质量体积比为1:12g/ml)，振荡，使其充分溶解，然后抽滤，得到滤液和不溶物；将不溶物用温度为45℃的丙酮溶解(该不溶物与丙酮的质量体积比为1:6g/ml)，从而得到丙酮溶液；将上述滤液和丙酮溶液混合、充分振荡、静置，取上层有机相，减压浓缩，得到浸膏；
S5：纯化分离
将步骤S4的浸膏溶解在适量乙酸乙酯中，然后倒入到色谱柱中，该色谱柱以体积百分比计，自上而下依次装填有30％中性硅胶、20％酸性硅胶和30％中性氧化铝(所述浸膏与色谱柱填料的质量比为1:150)；依次使用2.5倍色谱柱填层体积的***、2.5倍色谱柱填层体积的正己烷、0.8倍色谱柱填层体积的质量百分比浓度为10％的正丁醇水溶液进行洗脱，收集正丁醇洗脱部分，减压浓缩，即得所述活性酸(即4-(2-甲酰基-5-羟甲基吡咯-1-基)丁酸)，其纯度经过HPLC测定为98.8％，其核磁表征数据同实施例1。
经过计算，在本实施例中，每处理100g步骤S1中的紫金牛根粉末得到94.1mg上述活性酸。
实施例4-9
实施例4-6：除分别将实施例1-3中的助提剂替换为1-丁基-3-甲基咪唑对甲基苯磺酸盐外，其它所有操作均不变，从而顺次得到了实施例4-6。
实施例7-9：除分别将实施例1-3中的助提剂替换为1-丁基-3-甲基咪唑三氟乙酸盐外，其它所有操作均不变，从而顺次得到了实施例7-9。
相对于每100g步骤S1中的紫金牛根粉末而言，所得活性酸的产量和纯度见下表1：
表1：助提剂的考察
由此可见，助提剂的种类对于最终的产物提取率和纯度有着显著的影响，其中，1-丁基-3-甲基咪唑二氰胺盐具有最好的助提效果，而1-丁基-3-甲基咪唑对甲基苯磺酸盐和1-丁基-3-甲基咪唑三氟乙酸盐的提取率和纯度都有一定程度的降低，尤其是提取率。
实施例10-12
除分别将实施例1-3步骤S1中的NaHCO3水溶液浸泡处理省略掉外，其它所有操作均不变，从而顺次得到了实施例10-12。
相对于每100g步骤S1中的紫金牛根粉末而言，所得活性酸的产量和纯度见下表2：
表2：NaHCO3水溶液浸泡处理的影响
由此可见，当未使用NaHCO3水溶液进行浸泡处理时，活性酸总量和纯度有所降低，有可能是经过该浸泡而萃取出了部分影响后续提取的杂质，从而在一定程度上提高了产量和纯度，发明人意欲进行进一步的研究。
实施例13-15
除分别将实施例1-3步骤S2中多组分复合提取液中的2-甲基丁酸顺-3-己烯酯予以省略掉外(即只使用丙酮和石油醚的混合物作为复合提取液)，其它所有操作均不变，从而顺次得到了实施例13-15。
相对于每100g步骤S1中的紫金牛根粉末而言，所得活性酸的产量和纯度见下表3：
表3：多组分复合提取液的考察
由此可见，在本发明的所述多组分复合提取液中，2-甲基丁酸顺-3-己烯酯必不可少，当省略掉该组分后，虽然所得活性酸的纯度基本没有发生改变，但产量却有着大幅度的降低。
实施例16-24
实施例16-18：除实施例1-3的步骤S5中的色谱柱分别仅用中性硅胶装填(装填量仍为原来三种填料的总体积量)外，其它操作均不变，从而顺次得到了实施例16-18。
实施例19-21：除实施例1-3的步骤S5中的色谱柱分别仅用酸性硅胶装填(装填量仍为原来三种填料的总体积量)外，其它操作均不变，从而顺次得到了实施例19-21。
实施例22-24：除实施例1-3的步骤S5中的色谱柱分别仅用中性氧化铝装填(装填量仍为原来三种填料的总体积量)外，其它操作均不变，从而顺次得到了实施例22-24。
相对于每100g步骤S1中的紫金牛根粉末而言，所得活性酸的产量和纯度见下表4：
表4：色谱柱填料的考察
由此可见，在本发明的分离纯化步骤中，色谱柱的填料选择非常重要，只有同时使用中性硅胶、酸性硅胶和中性氧化铝的组合，才能取得本发明的良好提取效果和纯度，而采用单一填料时，均导致产量和纯度有着大幅度的降低。
实施例25-36
实施例25-27：除实施例1-3的步骤S5中分别只使用质量百分比浓度为10％的正丁醇水溶液进行洗脱(即省略了之前的***和正己烷洗脱)外，其它操作均不变，从而顺次得到了实施例25-27。
实施例28-30：除实施例1-3的步骤S5中分别只使用***和质量百分比浓度为10％的正丁醇水溶液进行洗脱(即省略了之前的正己烷洗脱)外，其它操作均不变，从而顺次得到了实施例28-30。
实施例31-33：除实施例1-3的步骤S5中分别只使用正己烷和质量百分比浓度为10％的正丁醇水溶液进行洗脱(即省略了之前的***洗脱)外，其它操作均不变，从而顺次得到了实施例31-33。
实施例34-36：除实施例1-3的步骤S5中分别只使用***和正己烷进行洗脱(即省略了最后的正丁醇水溶液洗脱)以及收集***和正己烷洗脱液进行后续纯化外，其它操作均不变，从而顺次得到了实施例34-36。
相对于每100g步骤S1中的紫金牛根粉末而言，所得活性酸的产量和纯度见下表5：
表5：洗脱剂的考察
由此可见，在本发明的分离纯化步骤中，洗脱剂的联合运用、先后洗脱非常重要：当只使用质量百分比浓度为10％的正丁醇水溶液进行洗脱时，虽然产量有所提高，但纯度大幅度降低；当使用***和该正丁醇水溶液进行洗脱以及使用正己烷和该正丁醇水溶液进行洗脱时，无论是产量还是纯度均有显著降低；而当省略掉正丁醇水溶液洗脱时，则产物的产量和纯度降低最为显著，已经没有了任何工业化实施的必要性。所有的这些证明了同时使用***、正己烷和该正丁醇水溶液进行顺次洗脱的重要性和非显而易见性，且取得了意想不到的技术效果。
如上所述，本发明提供了一种从紫金牛根中提取活性酸的方法，所述方法通过多种提取工艺、参数、要素的综合选择和组合，从而使得各个要素之间取得了最好的协同效果，能够以高产率和高纯度而得到目的产物，使得原料利用率达到了最大化，在工业上尤其是植物活性成分提取技术领域具有良好的应用潜力和工业化前景。
应当理解，这些实施例的用途仅用于说明本发明而非意欲限制本发明的保护范围。此外，也应理解，在阅读了本发明的技术内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动、修改和/或变型，所有的这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种从紫金牛根中提取活性酸的方法，所述方法包括如下步骤：
S1：制备紫金牛根粉末；
S2：制备多组分复合提取液；
S3：粗品的制备；
S4：粗品精制；
S5：纯化分离。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤S1具体如下：
取质量含水量低于2％的干燥紫金牛根，用NaHCO3水溶液浸泡20-30小时，然后用去离子水洗涤2-3次，完全晾干后，粉碎、过100目筛，从而得到紫金牛根粉末。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步骤S2具体如下：
将丙酮、石油醚和2-甲基丁酸顺-3-己烯酯按照质量比2-3:1.5-2.5:1的比例混合，得到混合液；然后加入助提剂，室温下搅拌混合5-10分钟，即得多组分复合提取液。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述助提剂为1-丁基-3-甲基咪唑对甲基苯磺酸盐、1-丁基-3-甲基咪唑三氟乙酸盐或1-丁基-3-甲基咪唑二氰胺盐中的任意一种，优选为1-丁基-3-甲基咪唑二氰胺盐。
5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤S3具体如下：
将步骤S1的紫金牛根粉末加入到步骤S2的多组分复合提取液中，并升温至50-60℃，搅拌60-90分钟，过滤，得到滤液和滤渣；将滤渣重复进行该操作2-3次；合并所有的滤液，与等体积的去离子水混合，充分振荡，分离出有机层，减压浓缩，得到膏状物，即为粗品。
6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤S4具体如下：
将步骤S3得到的粗品加入到饱和NaHCO3水溶液中，振荡，使其充分溶解，然后抽滤，得到滤液和不溶物；将不溶物用温度为40-50℃的丙酮溶解，从而得到丙酮溶液；将上述滤液和丙酮溶液混合、充分振荡、静置，取 上层有机相，减压浓缩，得到浸膏。
7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤S5具体如下：
将步骤S4的浸膏溶解在乙酸乙酯中，然后倒入到色谱柱中，该色谱柱以体积百分比计，自上而下依次装填有30％中性硅胶、20％酸性硅胶和30％中性氧化铝；依次使用***、正己烷、质量百分比浓度为10％的正丁醇水溶液进行洗脱，收集正丁醇洗脱部分，减压浓缩，即得所述活性酸。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述浸膏与色谱柱填料的质量比为1:100-150。
9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于：所述酸性硅胶是按照如下步骤制得的：
I、将200目-300目的中性硅胶于500℃的马弗炉中焙烤3-5小时，焙烤结束后，降温至250-280℃并保温40-50分钟，最后冷却至室温，得到活化硅胶；
II、向活化硅胶中加入滴加加入质量百分比浓度为20-30％的硫酸水溶液，所述活化硅胶与硫酸水溶液中所含硫酸的质量比为1:0.02-0.06，然后充分振荡均匀，真空干燥完全，即得酸性硅胶。
10.根据权利要求7-9任一项所述的方法，其特征在于：洗脱所用的***、正己烷、质量百分比浓度为10％的正丁醇水溶液的体积分别为色谱柱填层体积的2-3倍、2-2.5倍和0.6-1.2倍。
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