CN104839021A - 一种纳塔栎组织培养方法 - Google Patents

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王树凤
孙海菁
施翔
陈益泰
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Abstract

一种纳塔栎组织培养方法，属于植物组织培养方法。其特征在于包括以下步骤：1）外植体的选取；2）外植体消毒；3）初代培养；4）不定芽增殖培养；5）壮苗培养；6）生根培养；7）炼苗和移栽。上述一种纳塔栎组织培养方法，能较好的保持母本的抗逆性和观赏性，大大缩短了育苗周期，4个月即可获得生根苗木，有效提高了纳塔栎繁殖系数；与种子繁殖相比，组织培养降低对进口种子的依赖性，能有效降低苗木成本，节省开支；与体细胞胚胎发生方法相比，大大降低了母本反生变异的风险，能更好的保持母本的优良特性。

Description

一种纳塔栎组织培养方法
技术领域
本发明属于植物组织培养方法，具体为一种纳塔栎组织培养方法。
背景技术
纳塔栎（Quercus nuttallii）系高大落叶乔木，树高20-28 m，直径30-90 cm。树冠广圆形。叶长10-20 cm，宽5-13 cm。具有5-7个深深的裂片。橡实硕大，长2-3 cm，卵形，带有厚而深的被鳞壳斗。纳塔栎在墨西哥湾沿海平原、密西西比河和红河流域排水不良的低地黏土上生长良好，是这类土地上少数几个具有重要经济价值的树种之一。
中国林业科学研究院亚热带林业研究所于2002-2014年间多次从美国路易斯阿娜州引进纳塔栎种源，在浙江富阳、平湖、绍兴、安吉，上海松江、青浦、宝山，江苏江都、东台等地试种，纳塔栎生长迅速，表现出明显的生长优势，年均树高和胸径生长量为1.2 m和1.5 cm以上。2003年在上海松江用1年生苗造林，2011年平均树高12 m，胸径15.3 cm，最大胸径23.2 cm。2008年开始结实，结实量较大，橡树果吸引了大批的鸟类和动物汇集，大大丰富了林地的生物多样性。
在开阔地栽种，纳塔栎枝叶浓密，主干和分枝粗壮，枝角较大。树干通直，树皮有光滑型和粗裂型2种类型；树冠均称，呈圆球形，秋季10-11月间叶片转红，成为长三角地带重要的彩叶树种。试验表明，与其它几种北美栎树及国产麻栎相比，纳塔栎耐涝性最强。因此，纳塔栎是优良的园林绿化树种。
纳塔栎在原产地每年会产生大量橡果，因此大多采用种子繁殖，目前国内纳塔栎苗木大多依赖进口种子繁殖，在进口种子过程中，由于机械损伤、温度等原因，使得很大一部分种子在萌发后得不到及时播种而丧失活力，导致出苗率低，苗木成本较高。而且，对于一些叶色变异的植株，无性繁殖是种质资源保存的重要途径。国内目前在纳塔栎无性繁殖方法方面，仅江苏省林业科学研究院开展了纳塔栎组织培养研究，其方法是基于纳塔栎体细胞胚胎发生途径而建立的试管苗再生体系（公开号CN103548679A），体细胞胚胎在形成过程中要经历外植体脱分化、再分化这一过程，在这个过程中，存在发生变异的可能性，不利于优良种质资源的保存。
发明内容
针对现有技术中存在的上述问题，本发明的目的在于设计提供一种纳塔栎组织培养方法的技术方案，该方法采用不定芽增殖途径，经过不定芽增殖、生根、成苗过程直接建立试管苗再生体系，该方法操作简易，繁殖系数高，不仅很大程度上缓解了国内纳塔栎苗木过度依赖种子繁殖的难题，节约了成本；同时，有效保存了特异的种质资源的母本遗传信心，为纳塔栎新品系的选育奠定基础。
所述的一种纳塔栎组织培养方法，其特征在于包括以下步骤：
1）外植体的选取：外植体取自野外植株或室内培养的幼苗；
2）外植体消毒：取带芽茎段作为外植体，外植体经自来水冲洗10-14小时后，再以70-75%的酒精消毒25-35秒，然后升汞浸泡3-5分钟，然后以无菌水冲洗3-5次，置于无菌玻璃瓶备用；
3）初代培养：将消毒外植体剪成1-1.5 cm的带芽茎段接入培养基中培养20-30天，给予光照2500-3500 Lx，光周期14-18 hr/6-10 hr，温度25℃±2℃；所述的初代培养基由WPM培养基+6-苄基腺嘌呤0.8-1.2 mg/L组成；或者初代培养基由1/4MS培养基+6-苄基腺嘌呤0.8-1.2 mg/L组成；
4）不定芽增殖培养：将初代培养基中有生长迹象的带芽茎段接入增殖培养基中进行增殖培养，培养条件同步骤3），培养周期为40-50天；所述的增殖培养基由WPM 培养基+6-苄基腺嘌呤1.0-1.1mg/L+ 噻苯隆0.08-0.12 mg/L组成；或者增殖培养基由1/4MS培养基+6-苄基腺嘌呤1.0-1.1mg/L+ 噻苯隆0.08-0.12 mg/L组成；
5）壮苗培养：将增殖培养基中叶色浓绿，长度1-2 cm的不定芽逐个切下，接入WPM或1/4MS培养基中培养25-35天，培养条件同步骤3）；
 6）生根培养：将壮苗培养后健壮的芽切去基部褐色物质和愈伤组织接入生根培养基中进行生根培养，先暗培养4-6天，以提高根系发生速率，再光照培养3.5-4.5周后生根，培养条件同步骤3）；所述的生根培养基由WPM 培养基+生长调节物质4-吲哚-3-丁酸1.0-1.1 mg/L组成； 
7）炼苗和移栽：将有生根的纳塔栎幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗2-4天后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度20-25℃，湿度85%-95%，适当遮荫即可。
所述的一种纳塔栎组织培养方法，其特征在于步骤1）中：
野外植株：一般应在上半年取材，选取当年萌发的带芽茎段为外植体，野外采集的外植体，另加入1-2滴吐温80消毒；
室内培养：选取无虫眼、颗粒饱满的纳塔栎种子，在自来水中浸泡22-26小时，弃去漂浮的种子，然后以饱和漂白粉上清液浸泡25-35分钟进行表面消毒，消毒后的种子播种塑料容器中，容器中覆盖河沙，河沙厚度为4-6cm，将塑料容器置于光照培养箱中培养，温度25±1℃，光照强度11000-13000Lx，光/暗周期为14-18h/6-10h。
所述的一种纳塔栎组织培养方法，其特征在于所述的初代培养基、不定芽增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基中分别添加蔗糖15-25 g.L-1，琼脂4-7 g.L-1，以0.1M 氢氧化钠调节pH至5.5-5.9。
所述的一种纳塔栎组织培养方法，其特征在于步骤3）中：光照2800-3200 Lx，光周期15-16 hr/7-8 hr，温度25℃±2℃；所述的初代培养基由WPM培养基+6-苄基腺嘌呤1.0-1.1 mg/L组成；或者初代培养基由1/4MS培养基+6-苄基腺嘌呤1.0-1.1 mg/L组成。
所述的一种纳塔栎组织培养方法，其特征在于步骤3）所述的初代培养过程中需采取外植体防褐化措施，具体为在初代培养基中加添加初代培养基重量0.2-0.4%的活性炭，或多次反复转接，即外植体第一次接种后，培养2-3天，转接到相同培养基，这样转2-3次。
所述的一种纳塔栎组织培养方法，其特征在于步骤4）中：所述的增殖培养基由WPM 培养基+6-苄基腺嘌呤1.05mg/L + 噻苯隆0.1-0.11 mg/L组成；或者增殖培养基由1/4MS培养基+6-苄基腺嘌呤1.05mg/L+ 噻苯隆0.1-0.11mg/L组成。
所述的一种纳塔栎组织培养方法，其特征在于步骤6）中：所述的生根培养基由WPM 培养基+生长调节物质4-吲哚-3-丁酸1.05 mg/L组成。
所述的一种纳塔栎组织培养方法，其特征在于所述的WPM培养基由由大量元素、微量元素、铁盐、有机成分组成；
所述的大量元素为：（1）硝酸铵NH4NO3，400 mg·L-1，（2）硝酸钙Ca(NO3)2，556 mg·L-1, （3）氯化钙CaCl2·H2O，96mg·L-1, （4）硫酸镁MgSO4·7H2O，370 mg·L-1，（5）硫酸钾K2SO4，990 mg·L-1，（6）磷酸二氢钾KH2PO4，170 mg· L-1；
所述的微量元素为：（1）硼酸H3BO3，6.2 mg·L-1，（2）钼酸钠Na2MoO4·2H2O，0.25 mg·L-1，（3）硫酸锰MnSO4·4H2O，22.3 mg·L-1，（4）硫酸铜CuSO4·5H2O，0.25 mg·L-1, （5）硫酸锌ZnSO4·7H2O，8.6 mg·L-1；
所述的铁盐为：(1)乙二胺四乙酸二钠Na2·EDTA，37.3 mg·L-1，(2)硫酸亚铁FeSO4·7H2O，27.8 mg·L-1；
所述的有机成分为：（1）肌醇C6H12O62H2O，100 mg·L-1，（2）烟酸NC5H4·COOH，0.5 mg·L-1，（3）盐酸硫胺素C12H17ClOS·2HCl，1.6 mg·L-1。
所述的一种纳塔栎组织培养方法，其特征在于所述的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成分组成；
所述的大量元素为：（1）硝酸钾KNO3,1900 mg·L-1,(2)硝酸铵NH4NO3,1650 mg·L-1，(3)磷酸二氢钾KH2PO4,170 mg· L-1，(4)硫酸镁MgSO4·7H2O,370 mg·L-1，(5)氯化钙CaCl2·H2O,440 mg·L-1；
所述的微量元素为：（1）碘化钾KI,0.83 mg·L-1,(2)硼酸H3BO3,6.2 mg·L-1,(3)硫酸锰MnSO4·4H2O,22.3 mg·L-1,(4)硫酸锌ZnSO4·7H2O,8.6 mg·L-1 (5)钼酸钠Na2MoO4·2H2O,0.25 mg·L-1 (6)硫酸铜CuSO4·5H2O,0.025 mg·L-1,(7)氯化钴CoCl2·6H2O,0.025 mg·L-1；
所述的铁盐为：(1)乙二胺四乙酸二钠Na2·EDTA,37.3 mg·L-1,(2)硫酸亚铁FeSO4·7H2O,27.8 mg·L-1；
所述的有机成分为：(1)肌醇C6H12O62H2O,100 mg·L-1 (2)甘氨酸NH2CH2·COOH,2 mg·L-1,(3)盐酸硫胺素C12H17ClOS·2HCl,0.1 mg·L-1 (4)盐酸吡哆醇C8H11O3N·HCl,0.5 mg·L-1 (5)烟酸NC5H4·COOH,0.5 mg·L-1。
所述的一种纳塔栎组织培养方法，其特征在于所用1/4MS培养基为大量元素是MS基本培养基的1/4，其余成分微量元素、铁盐、有机成分同MS基本培养基。
上述一种纳塔栎组织培养方法，能较好的保持母本的抗逆性和观赏性，大大缩短了育苗周期，4个月即可获得生根苗木，有效提高了纳塔栎繁殖系数；与种子繁殖相比，组织培养降低对进口种子的依赖性，能有效降低苗木成本，节省开支；与体胚发生组织培养方法相比，采用不定芽增殖并直接生根成苗的方法，大大降低了母本发生变异的风险，能更好的保持母本的抗逆性和观赏性；本发明提供的组织培养方法大大缩短了育苗周期，有效提高了纳塔栎繁殖系数，为纳塔栎苗木的产业化提供一种新的方法。
本发明中涉及的百分含量除另有说明的外，均为重量百分含量。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1：
纳塔栎组织培养方法包括以下步骤：
1）外植体的选取：外植体采自中国林科院亚林所抗逆生理生态实验室内培养的植株；
2）外植体消毒：取带芽茎段作为外植体，外植体经自来水冲洗12小时后，再以75%的酒精消毒30秒，然后升汞浸泡4分钟，然后以无菌水冲洗4次，置于无菌玻璃瓶备用；若是大田采集的外植体，则加入1-2滴吐温80，以加强消毒剂的渗透；
3）初代培养：将消毒外植体剪成1cm的带芽茎段接入培养基中培养30天，给予光照3000 Lx，光周期16 hr/8hr，温度25℃±2℃；所述的初代培养基由WPM培养基+6-苄基腺嘌呤1.1 mg/L组成；或者初代培养基由1/4MS培养基+6-苄基腺嘌呤1.1mg/L组成；由于纳塔栎外植体含较多酚类物质，因此在初代培养过程中需采取防褐化措施，具体措施包括：向培养基中添加0.2-0.4%或0.4-0.6%的活性炭，或多次反复转接，即外植体第一次接种后，培养3天，转接到相同培养基，这样转3次，可以有效防止褐化发生；
4）不定芽增殖培养：将初代培养基中有生长迹象的带芽茎段接入增殖培养基中进行增殖培养，培养条件同步骤3），培养周期为50天；所述的增殖培养基由WPM 培养基+6-苄基腺嘌呤1.0mg/L+ 噻苯隆0.1 mg/L组成；或者增殖培养基由1/4MS培养基+6-苄基腺嘌呤1.0mg/L+ 噻苯隆0.1 mg/L组成；
5）壮苗培养：将增殖培养基中叶色浓绿，长度1-2 cm的不定芽逐个切下，接入WPM或1/4MS培养基中培养25-35天，培养条件同步骤3）；
6）生根培养：将壮苗培养后健壮的芽切去基部褐色物质和愈伤组织接入生根培养基中进行生根培养，先暗培养5天，以提高根系发生速率，再光照培养4周后生根，培养条件同步骤3）；所述的生根培养基由WPM培养基+生长调节物质4-吲哚-3-丁酸1.0 mg/L组成；
7）炼苗和移栽：将有生根的纳塔栎幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗2-4天后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度20-25℃，湿度85%-95%，适当遮荫即可。
实施例2：
步骤2）中：外植体经自来水冲洗10小时后，再以70%的酒精消毒25秒，然后升汞浸泡3分钟，然后以无菌水冲洗3次，置于无菌玻璃瓶备用；步骤3）中：将消毒外植体剪成1.5 cm的带芽茎段接入培养基中培养20天，给予光照2500 Lx，光周期14 hr/6 hr，所述的初代培养基由WPM培养基+6-苄基腺嘌呤0.8 mg/L组成；或者初代培养基由1/4MS培养基+6-苄基腺嘌呤0.8 mg/L组成；步骤4）中：培养周期为40天；所述的增殖培养基由WPM 培养基+6-苄基腺嘌呤1.1mg/L+ 噻苯隆0.08 mg/L组成；或者增殖培养基由1/4MS培养基+6-苄基腺嘌呤1.1mg/L+ 噻苯隆0.08 mg/L组成；步骤6）中：先暗培养4天，以提高根系发生速率，再光照培养3.5周后生根，所述的生根培养基由WPM 培养基+生长调节物质4-吲哚-3-丁酸1.1 mg/L组成； 其它同实施例1。
实施例3：
步骤2）中：外植体经自来水冲洗14小时后，再以75%的酒精消毒35秒，然后升汞浸泡5分钟，然后以无菌水冲洗5次，置于无菌玻璃瓶备用；步骤3）中：将消毒外植体剪成1.5 cm的带芽茎段接入培养基中培养30天，给予光照3500 Lx，光周期18 hr/10 hr，所述的初代培养基由WPM培养基+6-苄基腺嘌呤1.2 mg/L组成；或者初代培养基由1/4MS培养基+6-苄基腺嘌呤1.2 mg/L组成；步骤4）中：培养周期为50天；所述的增殖培养基由WPM 培养基+6-苄基腺嘌呤1.1mg/L+ 噻苯隆0.12 mg/L组成；或者增殖培养基由1/4MS培养基+6-苄基腺嘌呤1.1mg/L+ 噻苯隆0.12 mg/L组成；步骤 6）中：先暗培养6天，以提高根系发生速率，再光照培养4.5周后生根，所述的生根培养基由WPM 培养基+生长调节物质4-吲哚-3-丁酸1.1 mg/L组成；其它同实施例1。
本实例建立的再生体系，不定芽增殖率达95%以上，成苗率70%以上，与其他方法比较，如：从成年纳塔栎母株采穗，采用当年生半木质化枝条进行夏插，成苗率只有10-20%；而采用种子育苗，成苗率也只有40-60%。因此，本方法大大提高了纳塔栎的繁殖系数。从育苗周期来看，从外植体到成苗，只需120天，比扦插繁殖法和种子育苗法需要的周期大大缩短。而获得一株纳塔栎苗，采用种子育苗法，成本需7元，扦插繁殖法也需要3.5元，而采用组织培养法，只需0.56元，大大降低了生产成本。

Claims (10)

1. 一种纳塔栎组织培养方法，其特征在于包括以下步骤：
1）外植体的选取：外植体取自野外植株或室内培养的幼苗；
2）外植体消毒：取带芽茎段作为外植体，外植体经自来水冲洗10-14小时后，再以70-75%的酒精消毒25-35秒，然后升汞浸泡3-5分钟，然后以无菌水冲洗3-5次，置于无菌玻璃瓶备用；
3）初代培养：将消毒外植体剪成1-1.5 cm的带芽茎段接入培养基中培养20-30天，给予光照2500-3500 Lx，光周期14-18 hr/6-10 hr，温度25℃±2℃；所述的初代培养基由WPM培养基+6-苄基腺嘌呤0.8-1.2 mg/L组成；或者初代培养基由1/4MS培养基+6-苄基腺嘌呤0.8-1.2 mg/L组成；
4）不定芽增殖培养：将初代培养基中有生长迹象的带芽茎段接入增殖培养基中进行增殖培养，培养条件同步骤3），培养周期为40-50天；所述的增殖培养基由WPM 培养基+6-苄基腺嘌呤1.0-1.1mg/L+ 噻苯隆0.08-0.12 mg/L组成；或者增殖培养基由1/4MS培养基+6-苄基腺嘌呤1.0-1.1mg/L+ 噻苯隆0.08-0.12 mg/L组成；
5）壮苗培养：将增殖培养基中叶色浓绿，长度1-2 cm的不定芽逐个切下，接入WPM或1/4MS培养基中培养25-35天，培养条件同步骤3）；
 6）生根培养：将壮苗培养后健壮的芽切去基部褐色物质和愈伤组织接入生根培养基中进行生根培养，先暗培养4-6天，以提高根系发生速率，再光照培养3.5-4.5周后生根，培养条件同步骤3）；所述的生根培养基由WPM 培养基+生长调节物质4-吲哚-3-丁酸1.0-1.1 mg/L组成； 
7）炼苗和移栽：将有生根的纳塔栎幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗2-4天后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度20-25℃，湿度85%-95%，适当遮荫即可。
2. 如权利要求1所述的一种纳塔栎组织培养方法，其特征在于步骤1）中：
野外植株：一般应在上半年取材，选取当年萌发的带芽茎段为外植体，野外采集的外植体，另加入1-2滴吐温80消毒；
室内培养：选取无虫眼、颗粒饱满的纳塔栎种子，在自来水中浸泡22-26小时，弃去漂浮的种子，然后以饱和漂白粉上清液浸泡25-35分钟进行表面消毒，消毒后的种子播种塑料容器中，容器中覆盖河沙，河沙厚度为4-6cm，将塑料容器置于光照培养箱中培养，温度25±1℃，光照强度11000- 13000Lx，光/暗周期为14-18h/6-10h。
3. 如权利要求1所述的一种纳塔栎组织培养方法，其特征在于所述的初代培养基、不定芽增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基中分别添加蔗糖15-25 g.L-1，琼脂4-7 g.L-1，以0.1M 氢氧化钠调节pH至5.5-5.9。
4. 如权利要求1所述的一种纳塔栎组织培养方法，其特征在于步骤3）中：光照2800-3200 Lx，光周期15-16 hr/7-8 hr，温度25℃±2℃；所述的初代培养基由WPM培养基+6-苄基腺嘌呤1.0-1.1 mg/L组成；或者初代培养基由1/4MS培养基+6-苄基腺嘌呤1.0-1.1 mg/L组成。
5. 如权利要求1所述的一种纳塔栎组织培养方法，其特征在于步骤3）所述的初代培养过程中需采取外植体防褐化措施，具体为在初代培养基中加添加初代培养基重量0.2-0.4%的活性炭，或多次反复转接，即外植体第一次接种后，培养2-3天，转接到相同培养基，这样转2-3次。
6. 如权利要求1所述的一种纳塔栎组织培养方法，其特征在于步骤4）中：所述的增殖培养基由WPM 培养基+6-苄基腺嘌呤1.05mg/L + 噻苯隆0.1-0.11 mg/L组成；或者增殖培养基由1/4MS培养基+6-苄基腺嘌呤1.05mg/L+噻苯隆0.1-0.11mg/L组成。
7. 如权利要求1所述的一种纳塔栎组织培养方法，其特征在于步骤6）中：所述的生根培养基由WPM 培养基+生长调节物质4-吲哚-3-丁酸1.05 mg/L组成。
8. 如权利要求1所述的一种纳塔栎组织培养方法，其特征在于所述的WPM培养基由由大量元素、微量元素、铁盐、有机成分组成；
所述的大量元素为：（1）硝酸铵NH4NO3，400 mg·L-1，（2）硝酸钙Ca(NO3)2，556 mg·L-1, （3）氯化钙CaCl2·H2O，96mg·L-1, （4）硫酸镁MgSO4·7H2O，370 mg·L-1，（5）硫酸钾K2SO4，990 mg·L-1，（6）磷酸二氢钾KH2PO4，170 mg· L-1；
所述的微量元素为：（1）硼酸H3BO3，6.2 mg·L-1，（2）钼酸钠Na2MoO4·2H2O，0.25 mg·L-1，（3）硫酸锰MnSO4·4H2O，22.3 mg·L-1，（4）硫酸铜CuSO4·5H2O，0.25 mg·L-1, （5）硫酸锌ZnSO4·7H2O，8.6 mg·L-1；
所述的铁盐为：(1)乙二胺四乙酸二钠Na2·EDTA，37.3 mg·L-1，(2)硫酸亚铁FeSO4·7H2O，27.8 mg·L-1；
所述的有机成分为：（1）肌醇C6H12O62H2O，100 mg·L-1，（2）烟酸NC5H4·COOH，0.5 mg·L-1，（3）盐酸硫胺素C12H17ClOS·2HCl，1.6 mg·L-1。
9. 如权利要求1所述的一种纳塔栎组织培养方法，其特征在于所述的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成分组成；
所述的大量元素为：（1）硝酸钾KNO3,1900 mg·L-1,(2)硝酸铵NH4NO3,1650 mg·L-1，(3)磷酸二氢钾KH2PO4,170 mg· L-1，(4)硫酸镁MgSO4·7H2O,370 mg·L-1，(5)氯化钙CaCl2·H2O,440 mg·L-1；
所述的微量元素为：（1）碘化钾KI,0.83 mg·L-1,(2)硼酸H3BO3,6.2 mg·L-1,(3)硫酸锰MnSO4·4H2O,22.3 mg·L-1,(4)硫酸锌ZnSO4·7H2O,8.6 mg·L-1 (5)钼酸钠Na2MoO4·2H2O,0.25 mg·L-1 (6)硫酸铜CuSO4·5H2O,0.025 mg·L-1,(7)氯化钴CoCl2·6H2O,0.025 mg·L-1；
所述的铁盐为：(1)乙二胺四乙酸二钠Na2·EDTA,37.3 mg·L-1,(2)硫酸亚铁FeSO4·7H2O,27.8 mg·L-1；
所述的有机成分为：(1)肌醇C6H12O62H2O,100 mg·L-1 (2)甘氨酸NH2CH2·COOH,2 mg·L-1,(3)盐酸硫胺素C12H17ClOS·2HCl,0.1 mg·L-1 (4)盐酸吡哆醇C8H11O3N·HCl,0.5 mg·L-1 (5)烟酸NC5H4·COOH,0.5 mg·L-1。
10. 如权利要求1所述的一种纳塔栎组织培养方法，其特征在于所用1/4MS培养基为大量元素是MS基本培养基的1/4，其余成分微量元素、铁盐、有机成分同MS基本培养基。
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