CN104825581A

CN104825581A - 稠李提取物在制备抗肿瘤药物及保健品中的用途

Info

Publication number: CN104825581A
Application number: CN201510171507.8A
Authority: CN
Inventors: 李伟; 王梓; 毛欣欣; 张晶; 李慧萍; 李新殿; 王英平
Original assignee: Jilin Agricultural University
Current assignee: Jilin Agricultural University
Priority date: 2015-04-13
Filing date: 2015-04-13
Publication date: 2015-08-12

Abstract

本发明属于医药技术领域，主要公开了稠李提取物在制备抗肿瘤药物和保健品中的新用途。经实验研究表明：该稠李提取物对H22移植瘤小鼠具有明显抑瘤作用，能够显著提高肿瘤小鼠机体免疫力，延长小鼠的生存时间，诱导肿瘤细胞凋亡等。因此，可以使用该提取物制备抗肿瘤药物、保健品、食品添加剂或复方制剂等。其药物或保健品可以是现有的任何剂型，如片剂，胶囊剂，粉针剂，注射剂，丸剂，软胶囊，颗粒剂和贴剂等。

Description

稠李提取物在制备抗肿瘤药物及保健品中的用途

技术领域

本发明主要涉及稠李提取物在制备抗肿瘤药物及保健品中的应用，主要对稠李提取物的抗肿瘤活性及应用进行申请保护；属于中药提取物的新生物活性的医药技术领域。

背景技术

肿瘤是危害人类健康最严重的一类常见病、多发病，其发病率高，死亡率也高。目前大多数的肿瘤治疗方法仍然是传统的治疗方法，比如化疗放疗，手术和综合治疗，而中药尤其是药食两用的中药作为辅助治疗，可减轻放、化疗的不良反应，同时在远期疗效方面，可提高肿瘤患者的生存质量，减少复发、转移，从而提高生存率（郑京胜，等. 药食两用中药抗癌作用及其与归经的相关性研究，海峡药学，2015, 27, 106-108）。

稠李属植物在我国种类繁多，为多年生乔木，在我国广泛种植，因耐寒耐阴在东北地区成长密集。主要包括山桃稠李（Padus maackii），星毛稠李（Padus buergeriana），稠李（Padus racemosa），褐毛稠李（Padus brunnescens）以及紫叶稠李（Padus virginiana）等。因该属植物整体美观，在我国是一种重要的观赏物种。其中山桃稠李，稠李和紫叶稠李为蔷薇科李属植物，在东北分布较广。

研究表明：稠李属植物的叶子可以用于制作产品（稠李叶茶及其制备方法，专利，ZL. 200610010198.7），花因含有大量的苯甲醛可以做防腐用料（赵秋雁，稠李Prunus padus Linn.挥发油化学组成分析，《植物研究》，2003），此外，稠李含有的丰富黄酮类成分（何映霞，紫叶稠李叶片中黄酮的提取工艺优化《北方园艺》，2013年）和花色苷类成分（辛越，稠李属三种果实花色苷抗氧化活性研究，东北林业大学硕士论文，2013年）。上述文献报道了稠李的抗氧化和对HepG2的细胞毒活性（冷梅，紫叶稠李果实花色苷的抗氧化活性，食品科学，2013年；辛越，稠李属三种果实花色苷对HepG2细胞的增殖抑制作用比较，食品工业科技，2013年）。

本申请人已经对稠李提取物的制备方法进行专利公开“一种稠李提取物的制备方法及在降血脂药品及保健品中的应用”（CN：104367659A），本发明是在已公开的专利基础上而新发现该提取物的抗肿瘤活性，属于首次报道稠李提取物的抗肿瘤活性及在制备药物及保健品中的应用。总之，本发明创新性的提出了稠李提取物在制备抗肿瘤药物及保健品中的应用。

发明内容

本发明提供了稠李提取物在抗肿瘤药物或保健品及食品添加剂的应用。

根据发明人已经公开的 “一种稠李提取物的制备方法及在降血脂药品及保健品中的应用”（CN：104367659A）专利申请，稠李提取物的制备方法具有如下特征：稠李提取物通过如下步骤获得：干燥的稠李样品，粉碎过20目筛，经适当的溶剂和提取方法，得到提取液，减压浓缩至干；用水混悬至无沉淀，上大孔树脂吸附柱色谱，依次用水和70%以上的乙醇进行洗脱，收集醇洗脱部分，即得稠李提取物。

前述的稠李，选自山桃稠李（Padus maackii），稠李（Padus racemosa）或紫叶稠李（Padus virginiana）的任何一种；提取部位选自其果实，茎叶或花等任一部位，其优选果实。提取方法选自浸泡提取、回流提取、超声提取、逆流提取、超临界萃取等的任何一种；提取溶剂选自水，甲醇，乙醇任何一种及不同比例混合物；用于样品后续纯化处理的大孔吸附柱色谱，包括药学上能够接受的，可以用于分离的多种常规树脂，选自D101，NKA12或ADS等的任何一种。

前述的稠李提取物，主要包含黄酮，花色苷等抗氧化成分。

前述的稠李提取物，具有抗肿瘤作用，可以用于药物、保健品及食品添加剂中的应用。

当本发明用于上述用途时，其口服或胃肠外给药，均是安全的，在口服情况下，其可以以任何常规的形式给药，如片剂，胶囊剂，粉针剂，注射剂，丸剂，软胶囊，颗粒剂和贴剂等。

本发明制备具有抗肿瘤作用的稠李提取物可以与药用载体或食品载体混合，这里使用的固体或液体的赋形剂在本领域是众所周知的，下面举几个例子，散剂是内服的粉末剂，它的赋形剂有乳糖，淀粉，糊精，碳酸钙，合成或天然硫酸铝，氧化镁，硬脂酸镁，碳酸氢钠，干燥酵母等；溶液剂的赋形剂有水，甘油，1，2-丙二醇，单糖浆，乙醇，乙二醇，聚乙二醇，山梨糖醇等；软膏剂的赋形剂可以使用脂油，含水羊毛脂、凡士林、甘油、蜂蜡、木蜡、液体石蜡等组合成的疏水剂或亲水剂。

本发明可以通过下面的实验例进一步说明。

实验例稠李提取物对H22移植瘤小鼠的抑瘤作用

1.1 实验材料、试剂及仪器

前述的稠李提取物，来源为紫叶稠李（Padus virginiana）的果实。

ICR小鼠，雄性，体重22-25g，［SPF 级，动物合格证号:SCXK(吉)2011-0004］雄性,购自长春亿斯实验动物技术有限公司。

H₂₂肝癌细胞株（购自中国科学院上海细胞所）；注射用环磷酰胺（购于上海华联制药有限公司）；小鼠白细胞介素-2（IL-2）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）ELISA 试剂盒，美国R&D公司，国内分装；蛋白质测试盒（购于北京北化康泰临床试剂有限公司）；超净工作台（BEKMAN GS-15R），电子分析天平（Sartorious公司），酶标仪（Bio-Tek 公司）。

实验方法

1.2.1 H ₂₂ 皮下移植瘤模型制备

常规方法复苏H₂₂小鼠肝癌细胞，取0.2 mL 细胞悬液注射到雄性ICR小鼠腹腔内，连续传两代。于无菌条件下抽取H₂₂腹水瘤小鼠的腹水，用无菌生理盐水稀释后，1000 r/ min离心5 min，洗涤细胞2次，调整细胞密度为1×10⁷个/mL，取0.2 mL瘤细胞悬液接种到雄性ICR小鼠的右腋窝皮下。

动物分组及处理

ICR小鼠适应性饲养1周，接种后第2天，小鼠随机分成模型组，稠李提取物高、低剂量（400，200 mg/kg）组和环磷酰胺（CTX，30 mg/kg）阳性对照组，每组10只。采用灌胃方式给药，每日1次，模型组和空白对照组以等量的生理盐水灌胃。各组动物给药连续给药15 d，末次给药后禁食不禁水16 h后断颈处死，收集血液及组织。

小鼠 H ₂₂ 肝癌皮下移植瘤的抑瘤率、免疫器官指数以及血清相关指标的测定

分别称取小鼠体质量、瘤质量，计算抑瘤率。并称取肝脏、胸腺、脾脏质量，计算肝脏指数、胸腺指数和脾脏指数。眼球取血后颈椎脱臼处死，完整剥离瘤块，分离血清，采用酶标仪测定TNF-α和IL-2等指标。

抑瘤率＝（模型组瘤质量－药物组瘤质量）／模型组瘤质量

胸腺（脾脏、肝脏）指数＝胸腺（脾脏、肝脏）质量／体质量。

统计学分析

数据以X ±s 表示，组间均数比较采用单因素方差分析，以SPSS 16.0统计软件进行统计学处理，P<0.01或P<0.05具有统计学意义。

实验结果

1.3.1 对H22移植瘤小鼠肿瘤生长的影响

给药2周后，与模型组比较，稠李提取物低、高剂量两个剂量组（200和400mg/kg）小鼠肝癌H₂₂移植瘤的生长明显受到抑制，荷瘤小鼠瘤质量显著减轻（P＜0.05）；阳性药环磷酰胺CTX组，稠李提取物200mg/kg和400mg/kg两个给药组的抑瘤率为分别为57.14%，26.78%，和41.07%，结果见表1。

表1 稠李提取物对肝癌H₂₂移植瘤小鼠肿瘤生长的影响（）

注: 给药组及阳性药vs模型组，“*”表示差异显著(P<0.05)

1.3.2 对H22移植瘤小鼠免疫器官指数的影响

免疫器官指数是衡量抗肿瘤药物安全性的重要考量依据。结果表明：给药2周后，环磷酰胺表现出具有一定的免疫抑制作用，与模型组比较，其胸腺指数及脾指数均成不同程度的下降（P<0.05）；与CTX比较，200mg/kg和400mg/kg的稠李提取物给予2周后，可以明显升高胸腺和脾指数，胸腺指数和脾指数接近模型组，表明稠李提取物安全，不会对动物机体造成损伤。

表2 稠李提取物对肝癌H22移植瘤小鼠免疫器官指数的影响

“*”CTX组与模型组比较，“#”给药组与CTX组相比较，差异显著P<0.05。

对H22移植瘤小鼠细胞因子的影响

IL-2是重要的淋巴因子之一，在调节免疫反应中起重要作用。IL-2水平在某种程度上反映细胞免疫能力，因此，IL-2降低是肿瘤患者细胞免疫功能受损的一重要标志。结果表明：与模型组比较，环磷酰胺CTX组小鼠血清中的IL-2 水平显著降低（P＜0.05），表明CTX对肿瘤小鼠的免疫功能造成了一定的破坏；而稠李提取物两个剂量给药组均能显著提升肿瘤鼠血清中IL-2水平。TNF-α具有直接杀伤肿瘤细胞的作用，能激活T细胞和刺激B细胞产生抗体，刺激单核细胞产生细胞因子，促进白细胞杀死微生物及杀灭肿瘤细胞等功能，被认为是与肿瘤恶化有关的细胞因子。给药2周后，稠李提取物两个剂量给药组均能显著升高肿瘤小鼠体内的TNF-α水平，表明稠李提取物可以通过诱导相关细胞因子诱导肿瘤细胞凋亡，具体结果见表3。

表3 稠李提取物对肝癌H22移植瘤小鼠TNF-α和IL-2水平的影响（mmol/L）（，n =8）

组别	剂量mg/kg	IL-2/ pg·mL^-1	TNF-α/ pg·mL^-1
				模型组	----	19.78±4.15	22.23±3.26
CTX	----	11.45±3.12*	9.81±1.23*
				稠李提取物	200	27.82±6.93^#	28.21±5.99^#
	400	32.16±6.46^#	35.52±6.27^#

“*”CTX组与模型组比较，“#”给药组与模型组相比较，差异显著P<0.05。

移植瘤小鼠肿瘤组织形态学观察

通过对肿瘤小鼠肿瘤组织HE和Hoechst染色观察，模型组小鼠肿瘤组织内部细胞排列紧密，细胞形态完整，可见明显的细胞核，表明肿瘤细胞生长旺盛；而稠李提取物2个剂量组的肿瘤组织内部细胞排列疏松，且不规则，部分细胞核消失，表明给药组能够明显抑制肿瘤细胞生长，并促进细胞凋亡和坏死（图略）。

实施例药物及保健品制备的实施例

制备药剂的实施例一

胶囊剂的制备 稠李提取物200g，药用淀粉适量，两者充分混匀，装胶囊，制成1000粒胶囊，每粒重0.25g，每粒含稠李提取物200mg。口服，每次4粒，每日三次。

制备药剂的实施例二

片剂的制备 稠李提取物200g，药用淀粉适量，两者充分混匀，用乙醇做粘合剂制湿颗粒，干燥，过120目筛整粒，装胶囊，每粒200 mg，每次口服1-2粒，每日2次。

制备药剂的实施例三

滴丸剂的制备 聚乙二醇₄₀₀₀ 300g，在水浴上熔化，加入稠李提取物原料200g，搅拌均匀，倾入保温管中，调节恒温装置，使药液在80-90℃下滴入冷却过的液体石蜡中（温度±4℃），滴完后，将药丸倾入滤纸上吸干石蜡油，再加入少量滑石粉，混匀，得稠李提取物滴丸1000粒。口服，一次4粒，每日三次，饭后服用。

本发明除了上述实施方式之外，其它等同技术方案也应当在其保护范围之内，在此不再一一叙述。

Claims

1.稠李提取物在制备抗肿瘤药物及保健品中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的抗肿瘤是指抑制移植瘤小鼠的肿瘤增长及诱导凋亡。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于移植瘤为H₂₂肝腹水瘤。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述药物或保健品可以是片剂，胶囊剂，粉针剂，注射剂，丸剂，软胶囊，颗粒剂和贴剂等多种剂型。